生產(chǎn)干燥提取物的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生產(chǎn)植物干燥提取物的方法和含有該提取物的藥物制劑，特別是植物藥物，其含有至少一種植物(藥物)的乙醇/水提取物，其中所述植物選自：酸模藥草（Rumicis?herba）；馬鞭草（Verbena?officinalis）；西洋接骨木（Sambucus?nigra）；黃花九輪草（Primula?veris）和黃龍膽（Gentiana?lutea）以及它們的混合物。本發(fā)明還涉及用于治療鼻和咽喉區(qū)域和/或鼻竇的炎癥和/或感染性疾病的藥物，以及它們的應(yīng)用。
【專利說明】生產(chǎn)干燥提取物的方法
[0001]本發(fā)明涉及生產(chǎn)植物干燥提取物的方法和含有該提取物的藥物制劑，特別是植物藥物，其含有至少一種植物(藥物)的乙醇/水提取物，其中所述植物選自:酸模(Rumexacetosa L.)、小酸模(Rumex acetosella L.)、純?nèi)~酸模(Rumex obtusifolius L.)、巴天酸模(Rumex patientia L.)和皺葉酸模(Rumex crispus L.)(下文統(tǒng)稱為“酸模藥草(Rumicis herba)”)；馬鞭草(Verbena officinalis);西洋接骨木(Sambucus nigra);黃花九輪草(Primula veris)和黃龍膽(Gentiana Iutea),以及它們的混合物。本發(fā)明還涉及用于治療鼻咽區(qū)和/或鼻旁竇的炎癥和/或感染性疾病的藥物，以及涉及營養(yǎng)補(bǔ)充劑，并且還涉及它們的應(yīng)用。
[0002]上述藥用植物已知是上呼吸道感染、特別是旁竇炎時的分泌物分解劑(Sekretolytika)。其中每種單個藥物都對組合物的獨(dú)特功效起作用:
[0003]通常將黃龍膽的根(龍膽根)用于藥物。在成分中特別發(fā)現(xiàn)了各種具有黏液溶解效果的裂環(huán)烯醚萜苷類。
[0004]通常將所述酸模種類(在下文中稱作“酸模藥草(Rumicis herba)”(酸模藥草，Sorrel herb))的葉和莖用于藥物。本申請中發(fā)現(xiàn)黃酮類和各種鞣劑為具有抗炎作用的成分，其還積極地支持身體自身的防御。
[0005]總稱“酸模藥草(Sorrel herb)”將被理解為指以下種的混合物:
[0006]酸模，同義詞:Lapathumacetosa SC0P,同義詞:Lapathumpratense LAM,同義詞:Acetosa pratensis MI LLER ；
[0007]小酸模，同義詞:Rumexinfestus SALISB ；
[0008]純?nèi)~酸模，同義詞Lapathumobtusifolium M0ENCH,同義詞Lapathum obtusantumMONTAD,同義詞 Rumex actus WALLR,同義詞 Rumex silvestris WALLR ；
[0009]巴天酸模，同義詞Rumex olympicus B0ISS,同義詞 Lapathum hortense MOENCH ；
[0010]皺葉酸模；
[0011]直根酸模(Rumexthyrsiflorus FINGERH.),同義詞 Acetosa thyrsif1raFINGERH,同義詞 Rumex acetosa subsp.auriculatus WALLR0
[0012]優(yōu)選將馬鞭草(馬鞭藥草)的葉和莖用于藥物，其含有環(huán)烯醚萜苷類、苯乙醇苷類(Phenylethanoidglykoside)和黃酮類作為主要成分,從而獲得黏液溶解和抗病毒效果。
[0013]通常將西洋接骨木的葉(接骨木花、西洋接骨木葉)用于藥物，其成分含有各種黃酮醇苷類，并且含有接骨木苷(一種生氰糖苷)作為主要成分，其具有黏液溶解和抗病毒作用(Grabovac, A.和 Ullmer, A.，Osterreichische Apotheker-Verlagsgesellschaftm.b.H., 2003)。
[0014]黃花九輪草的花和萼片(報春花花朵)被用于藥物。成分包括三萜皂苷類和酚苷類如報春花根苷。它們具有黏液溶解作用并抵抗病毒。該成分在治療呼吸道疾病時作為溫和的分泌物分解劑和祛痰劑起作用。
[0015]所述藥用植物的組合被已知為注冊商標(biāo)名為仙露貝(Sinupret'?)的分泌物分解劑，并且其已上市約75年。仙露貝?中使用的藥用植物被有目的地選擇、測試和加工。由
此獲得的藥物的恒定品質(zhì)由制造商BIONORICA公司通過優(yōu)化的應(yīng)用和收獲策略以及嚴(yán)格的質(zhì)量控制實現(xiàn)。
[0016]仙露貝@所基于的組合物優(yōu)選對于咽喉、鼻和耳區(qū)域的炎癥和感染有效，并特別適于治療急性和慢性旁竇炎和/或鼻旁竇炎。
[0017]急性和慢性竇炎都是經(jīng)常發(fā)生的。在四分之三的情形中，竇炎是由于擴(kuò)散到鼻旁竇的感冒而產(chǎn)生的，其伴有粘膜炎癥。呼吸道從具有若干旁竇的主鼻腔到達(dá)肺泡。鼻旁竇包括額竇、篩竇、蝶竇和上頜竇。所有所述骨腔都在內(nèi)部襯有粘膜并通過狹窄的開口(Ostien)伸向主鼻腔。
[0018]呼吸道表面覆蓋有保護(hù)黏液，而與吸入的空氣一起侵入的塵土顆粒和病原體，如病毒、細(xì)菌或真菌附著于所述黏液上。黏液含有抗體，其攻擊侵入的物質(zhì)并使它們無害。由此可將異物從身體清除出去，黏液通常借助于纖毛上皮的纖毛向咽喉的方向排出，在那里其可被吞咽。為了抵御感染誘發(fā)的呼吸道疾病，粘膜必須具有不受阻礙的保護(hù)和清潔機(jī)制。為了排出載有病原體的黏液，纖毛的不被阻礙的功能是必不可少的，所述纖毛由于波形運(yùn)動而進(jìn)一步轉(zhuǎn)運(yùn)黏液。隨著上呼吸道的感染和炎癥過程，粘膜的保護(hù)和清潔機(jī)制在功能上受到限制。
[0019]例如，病毒如鼻病毒、腺病毒或冠狀病毒引起粘膜的炎癥反應(yīng)，由此粘膜變得腫脹并增加所產(chǎn)生的黏液。由此起初產(chǎn)生水性、然后是粘性的黏液流。在鼻粘膜的炎癥過程中，旁竇口可腫脹并阻礙甚或阻止黏液的排出。這導(dǎo)致與粘性黏液相關(guān)聯(lián)的旁竇中的堵塞，其導(dǎo)致纖毛的功能損傷或功能喪失。這最終引起粘膜的清潔機(jī)制損傷。
[0020]這樣的微環(huán)境促進(jìn)普遍存在的微生物的迅速增殖。長時間內(nèi)，這些不利條件，如腫脹的粘膜和被粘性黏液粘著的纖毛，可導(dǎo)致慢性竇炎，引起對粘膜和纖毛上皮的永久性損傷。與呼吸道有關(guān)的病原體( 其也被特別地理解為包括留在黏液中的HNO相關(guān)病菌)例如為金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、釀膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、變異鏈球菌或流感嗜血菌。
[0021]在上呼吸道由于粘稠的黏液而黏連時，所使用的組合物的成分(黃龍膽:酸模藥草:馬鞭草:西洋接骨木:黃花九輪草=1:3:3:3:3)引起新鮮的稀薄黏液的形成，從而實
現(xiàn)上述黏液溶解和轉(zhuǎn)運(yùn)過程以及炎癥癥狀的減少并開始鼻粘膜的愈合過程。仙露貝_?以
溫和的方式引起呼吸道自我清潔能力的重建并同時開發(fā)強(qiáng)的抗微生物效果。仙露貝_?的
特征是其良好的相容性，由BIONORICA開發(fā)的組合物和計量很少在患者中引起副作用，并且不已知其與其他藥物相互作用。
[0022]大體上描述了植物干燥提取物并且已知植物干燥提取物來自水/乙醇提取物。
[0023]植物干燥提取物可例如根據(jù)EP0753306的技術(shù)教導(dǎo)被大量生產(chǎn)。
[0024]然而，存在提供新的仙露貝?植物干燥提取物的大的需求，該提取物具有植物組合的有利改善的效果。
[0025]德國藥典(DAB) 2010建立了針對藥物質(zhì)量的成分的最少含量，從而必須為了恒定和改善的質(zhì)量而作出更多努力。特別是提取和干燥方法構(gòu)成了植物藥物的足夠質(zhì)量的瓶頸。[0026]基于該現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的因此是提供生產(chǎn)植物干燥提取物的改善的方法以及改善的植物干燥提取物，所述方法包含至少一個乙醇/水提取步驟，其中植物選自:酸模、小酸模、鈍葉酸模、巴天酸模和皺葉酸模(在下文和權(quán)利要求中被統(tǒng)稱為“酸模藥草”);馬鞭草；西洋接骨木；黃花九輪草；和/或黃龍膽，以及它們的混合物。
[0027]令人驚訝地,可通過雙重(zweifachen)提取獲得改善的植物干燥提取物,其中在第一步驟中進(jìn)行水/乙醇提取，并且在第二步驟中進(jìn)行水提取。
[0028]令人驚訝地，在各總提取物中，可通過根據(jù)本發(fā)明的方法使有利活性成分在現(xiàn)有活性成分混合物中的含量在干燥之后被富集，從而實現(xiàn)獲得的植物干燥提取物的改善的藥理學(xué)功效。
[0029]因此，本發(fā)明涉及生產(chǎn)植物干燥提取物的方法，以下列步驟進(jìn)行:
[0030]a.)醇/水提取酸模藥草、馬鞭草、西洋接骨木、黃花九輪草和黃龍膽，
[0031]b.)分離上清液，
[0032]c.)對來自a.)的余留物進(jìn)行第二次水提取，
[0033]d.)分離上清液，
[0034]e.)合并從b.)和d.)獲得的上清液，
[0035]f.)干燥 上清液并獲得植物干燥提取物。
[0036]根據(jù)該方法的改善在于實現(xiàn)了與常規(guī)的簡單水-乙醇提取物相比更快的功效(參見實施例)。這是令人驚訝的，因為改變提取的溶劑最多能夠預(yù)期線性的外推(例如，在只進(jìn)行水/乙醇提取或只進(jìn)行水提取的情形中)。
[0037]特別地，根據(jù)本發(fā)明的方法允許改善的劑量，從而用相同的劑量可實現(xiàn)提高的療效。
[0038]因此，本發(fā)明還涉及植物干燥提取物，其根據(jù)本發(fā)明的方法獲得或可獲得(在下文中為根據(jù)本發(fā)明的(植物)燥提取物，仙露貝干燥提取物(TE))。
[0039]在根據(jù)本發(fā)明方法的其它優(yōu)選實施方案中，黃龍膽:酸模藥草:馬鞭草:西洋接骨木:黃花九輪草的比率是1:3:3:3:3，各自下+/-0.3至0.5 (例如，1:3.2:2.9:2.5:3.2:3)。
[0040]另外，優(yōu)選以批量提供所有植物(藥物)的植物全體，其中植物(藥物)的比率如上文所述。另外，優(yōu)選所提供的植物(藥物)是經(jīng)清洗和切割的。
[0041]在根據(jù)本發(fā)明的方法的其它優(yōu)選實施方案中，步驟a.)中的水/醇提取劑具有40:60 (v/v)至60:40 (v/v),特別是41:59 (v/v)或50:50 (v/v)的水/醇含量。乙醇是優(yōu)選的，然而也包括甲醇和丙醇或其混合物。另外，優(yōu)選使用96%乙醇。
[0042]本發(fā)明還提供的是，步驟a.)和c.)中的提取在20至40°C下進(jìn)行，其中步驟a.)和c.)中的提取進(jìn)行2至8h。
[0043]在本發(fā)明的意義內(nèi)，“分離上清液”可在根據(jù)本發(fā)明的提取之后通過排流、傾析、過濾、篩選或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的分離方法連續(xù)或間斷地進(jìn)行。
[0044]另外，優(yōu)選根據(jù)步驟f.)的干燥在真空下在30至60°C、特別是40至50°C下進(jìn)行，優(yōu)選在真空攪動干燥器中進(jìn)行。根據(jù)本發(fā)明的干燥提取物具有最多0.5%的殘留乙醇含量。
[0045]將闡述其它適合的根據(jù)本發(fā)明的干燥方法:
[0046]常規(guī)地生產(chǎn)植物干燥提取物，其中植物材料借助于溶劑或溶劑混合物被提取(例如，通過浸潰或滲濾)，并且在分離提取余留物之后，將所獲得的流體提取物或所獲得的酊劑濃縮至干燥。
[0047]根據(jù)本發(fā)明包括常規(guī)的干燥方法，并且包括流化床干燥或濃縮成稠的或濃縮的提取物和隨后真空帶式干燥或盤式干燥所述濃縮的提取物。
[0048]也可考慮通過流體提取物(或液體植物提取物)或酊劑生產(chǎn)根據(jù)本發(fā)明的植物干燥提取物的經(jīng)典方法；其中，在隨后的溶劑蒸餾之后，獲得所謂的濃縮的提取物(粘稠提取物)，常常向其中添加輔料和/或添加劑如乳糖、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、二氧化硅等。然后該濕的粘稠物質(zhì)在盤柜(Hordenschriinken)或干燥器中成為所欲的干燥提取物制劑。
[0049]在干燥提取物生產(chǎn)中經(jīng)常使用的方法是被稱作真空帶式干燥的方法。由此，經(jīng)過下吸式蒸發(fā)器預(yù)干燥之后的濃縮的提取物成為干燥提取物制劑。
[0050]通過流化床干燥器的干燥方法需要大約47°C至117°C的溫度。在該方法中干燥在正常壓力條件下進(jìn)行。
[0051]獲得根據(jù)本發(fā)明的植物干燥提取物的溫和干燥方法被描述于EP0753306中。根據(jù)所描述的方法，將在提取中獲得的來自植物材料的流體提取物根據(jù)本發(fā)明的方法引入真空干燥系統(tǒng)、優(yōu)選真空攪動干燥器中，其具有帶有自身驅(qū)動的、通過圓柱狀混合和干燥室延伸的多柄攪拌器，以及任選地被提供以蒸汽過濾器、回洗裝置、具有后冷卻器和收集容器的溶劑冷凝器、回流冷凝器(RUckkondensator)和處理、控制及調(diào)節(jié)裝置，和任選地提供以成粒噴嘴；并在裝備有在混合和干燥室的整個深度內(nèi)延伸且具有通過梳形定子旋轉(zhuǎn)的刀片的切碎機(jī)的干燥器中干燥，其供應(yīng)和返回溫度在120°C和5°C之間、內(nèi)室溫度在10°C和80°C之間、蒸汽溫度在15°C至55°C之間和壓力在0.5至1000mbar之間，并且攪拌器旋轉(zhuǎn)速度為O至lOrpm，以及切碎機(jī)旋轉(zhuǎn)速度為200至800rpm。根據(jù)EP0753306使用的真空干燥系統(tǒng)例如由以前的公司Firmen Inox Glatt AG或I`nox-Maurer AG以名稱“ IUT”或“ INOX”銷售。目前的制造商和配售商包括例如，De Dietrich Process Systems GmbH, Mainz,德國
(Rosemund ? )。
[0052]通過該真空干燥系統(tǒng)，以批量方法將要干燥的流體提取物從上方泵入混合和干燥室和然后經(jīng)受真空。
[0053]優(yōu)選的真空干燥系統(tǒng)包括以下特征，如例如在已知的IUT/IN0X裝置(參見上面)中起作用的:
[0054]a.)通過圓柱狀混合和干燥室延伸的多柄攪拌器，其具有自身驅(qū)動以及任選的蒸汽過濾器、回洗裝置、具有后冷卻器和收集容器的溶劑冷凝器、回流冷凝器、處理、控制和調(diào)節(jié)裝置，以及任選的成粒噴嘴。
[0055]b.)另外，可提供在干燥和混合室的整個深度內(nèi)延伸的切碎機(jī)，其具有獨(dú)立于攪拌器的驅(qū)動以及任選的用于增加切碎機(jī)效果的梳形定子。
[0056]c.)另外，可任選地提供一個或多個噴嘴以將液體植物提取物從儲蓄器引入干燥室，如在例如W02002073108中所描述的。
[0057]將以該方式獲得的植物干燥提取物被進(jìn)一步加工以成為藥物制劑。
[0058]具有抗菌效果的含有根據(jù)本發(fā)明的植物干燥提取物的試劑由此可有利地用于治療由呼吸道相關(guān)病原體引發(fā)的感染。黏液溶解和抗炎效果通過附加的抗菌效果得到了補(bǔ)充。由此，除了減少加載了病原體的粘性黏液的釋放外，還通過殺死細(xì)菌病原體和/或減少細(xì)菌病原體增殖而減少或甚至完全中斷了上呼吸道感染。
[0059]通過上文描述的發(fā)明，不使用合成的化學(xué)成分而以溫和的方式對患有例如竇炎和/或鼻竇炎和/或鼻旁竇的炎癥(特別是每種的急性形式)的患者進(jìn)行治療。
[0060]具有抗菌效果的本發(fā)明的(藥物)組合物對于抵抗與呼吸道相關(guān)的病原體特別有效，其中它特別針對下述顯示出抗菌效果:革蘭氏陽性球菌(如金黃色葡萄球菌、金黃色葡萄球菌(MRSA)、表皮葡萄球菌、釀膿鏈球菌、肺炎鏈球菌和變異鏈球菌);革蘭氏陰性桿菌(如流感嗜血菌)；以及腸桿菌科。還實現(xiàn)了抗病毒的效果。
[0061]抗菌劑的蓋倫制劑可選自:滴劑、果汁、糖漿、片劑、錠劑、膠囊、緩釋制劑、直腸或陰道栓劑、輸注劑、特別是咽喉噴霧劑和消毒溶液；軟膏、乳劑、粉劑、粉末、鼻噴霧劑、用于吸入的液體或固體配制物、敷布、填充物(特別是傷口和牙齦敷料)、填塞物(也用于牙齒)、沖洗液，特別是與生理和高滲濃度的鹽或鹽混合物相組合，優(yōu)選食鹽，特別是海鹽。當(dāng)然，所述制劑可含有藥學(xué)上常規(guī)的輔料。
[0062]本發(fā)明因此還涉及根據(jù)本發(fā)明的抗菌劑(其含有根據(jù)本發(fā)明的植物干燥提取物)用于治療由呼吸道相關(guān)病原體引發(fā)的感染的用途或應(yīng)用，且涉及用于藥物生產(chǎn)的用途，以及涉及藥物本身。
[0063]在其它實施方案中，本發(fā)明涉及下述藥物:其在竇炎和/或鼻竇炎和/或鼻旁竇的炎癥(特別是每種的急性形式)中使用或應(yīng)用，特別是用于治療和預(yù)防竇炎和/或鼻竇炎和/或鼻旁竇的炎癥，特別是每種的急性形式。
[0064]基于所測試的病原體的HNO相關(guān)性，根據(jù)本發(fā)明的試劑在可局部或表面地直接及立即攻擊細(xì)菌的任何情形中都非常合適。
[0065]根據(jù)本發(fā)明的試劑因`此可優(yōu)選(除了全身應(yīng)用外)在經(jīng)污染部位直接施用，例如以可至100%生物降解的消毒溶液的形式，或當(dāng)然也可用于人和動物中皮膚和粘膜的直接表面應(yīng)用。對此考慮各種應(yīng)用形式。特別合適的是在人類皮膚病學(xué)領(lǐng)域以及獸醫(yī)醫(yī)學(xué)中作為溶劑、乳液、軟膏和乳劑的劑型。在本申請中，根據(jù)本發(fā)明的試劑可被直接施用到患病的皮膚部分和/或以浸透的敷布、填充物或填塞物的形式使用。
[0066]當(dāng)然，根據(jù)本發(fā)明的試劑在整個呼吸道(特別是上呼吸道，本申請中優(yōu)選在咽喉、鼻和鼻旁竇粘膜的區(qū)域)的全部患病區(qū)域中的應(yīng)用是特別令人感興趣的。特別有意義的是鼻沖洗，特別是與鹽相結(jié)合，例如結(jié)合生理或高滲鹽溶液。根據(jù)本發(fā)明，還包括含有根據(jù)本發(fā)明的試劑的鼻噴霧劑。
[0067]新應(yīng)用可能性的廣泛范圍從咽感染時的扁桃體涂擦溶液和漱口液到粉末吸入配制物或霧化器吸入配制物。
[0068]其它的應(yīng)用和適應(yīng)癥范圍包括傷口和牙齦敷料，例如，以棉花填充物或棉紗填充物的形式，其被根據(jù)本發(fā)明的試劑浸透。
[0069]耳道感染時也可以考慮用含有根據(jù)本發(fā)明的試劑的溶液進(jìn)行耳沖洗。
[0070]本發(fā)明因此還涉及用于下列疾病的用途和應(yīng)用(特別是其治療和預(yù)防)的藥物:整個呼吸道，特別是上呼吸道，特別是在咽喉、鼻和鼻旁竇粘膜區(qū)域的疾病，呼吸系統(tǒng)疾病，特別是黏液粘稠病(囊性纖維化)。黏液粘稠病可特別有利地被治療，參見圖7A和7B。
[0071]其它的優(yōu)選實施方案涉及含有根據(jù)本發(fā)明的試劑的營養(yǎng)補(bǔ)充劑，特別是以飲食組合物的形式。合適的根據(jù)本發(fā)明的營養(yǎng)劑或食物(包括水)為例如在2002年I月28日的法令(EG)第178/2002號中不排他地限定的那些，如焙烤食品和飲料以及兒童營養(yǎng)制劑。根據(jù)本發(fā)明的營養(yǎng)補(bǔ)充劑可與合適的生理學(xué)上相容的載體混合。
[0072]根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑可以以劑量單位的形式生產(chǎn)。這意味著該制劑可以以單獨(dú)部分的形式(優(yōu)選膠囊和安瓿)提供，其中植物干燥提取物的活性成分含量相應(yīng)于部分或多個單一劑量。劑量單位可含有例如1、2、3或4個單一劑量或1/2、1/3或1/4的單一劑量。單一劑量優(yōu)選含有下述根據(jù)本發(fā)明的植物干燥提取物(活性成分)的量:其在一次應(yīng)用中施用且通常相應(yīng)于日劑量的全部、1/2、1/3或1/4。優(yōu)選的是每日三次的劑量，優(yōu)選以片劑的形式，特別是在早晨、中午和晚上，任選地在進(jìn)餐時間。
[0073]在其它優(yōu)選的實施方案中，可選擇鈣包被片劑的蓋倫制劑，如EP1392337中所公開的。
[0074]無毒的、惰性的藥學(xué)上適合的載體物質(zhì)將被理解為固體、半固體或液體稀釋劑、填充劑以及任何類型的制劑輔料，如a)填充劑和稀釋劑，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、糊精、麥芽糖糊精和硅酸、高度分散的二氧化硅，b)粘合劑，例如，羧甲基纖維素、纖維素粉、微晶纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮，c)保濕劑，例如，甘油，d)崩解劑，例如，瓊脂-瓊脂、碳酸鈣和碳酸鈉，e)溶解阻劑，例如，石蠟和f)吸收促進(jìn)劑，例如季胺化合物，g)濕潤劑，例如鯨臘醇、單硬脂酸甘油酯，h)吸附劑，例如高嶺土和膨潤土，和i)潤滑劑，例如滑石、硬脂酸鈣和硬脂酸鎂以及固體聚乙二醇，或a)至i)下所列物質(zhì)的混合物。
[0075]片劑、錠劑、膠囊、丸劑和顆?？梢猿Ｒ?guī)的、任選地含有不透明化試劑的包被和外殼被提供，例如(非排他地)羥丙甲纖維素、微晶纖維素、硬脂酸、二氧化鈦，而且還可被組合而使得活性成分只在(或優(yōu)選在)腸道的某個部分(任選地延緩)釋放，其中可使用例如聚合物物質(zhì)和蠟作為包埋物質(zhì)。
實施例:
[0076]這些實施例僅意 在闡釋本發(fā)明，而不將本發(fā)明限制于這些實施例。
[0077]在下文中，“干燥提取物(TE) ”指根據(jù)本發(fā)明生產(chǎn)的植物干燥提取物。
[0078]實施例1:
[0079]根據(jù)本發(fā)明的干燥提取物的抗病毒活性在許多體外試驗中被證實。
[0080]在這些試驗中，首先相對于已知的仙露貝? (醇/水)測試根據(jù)本發(fā)明的干燥提取物的一般細(xì)胞損傷(細(xì)胞毒性)作用。在將合適的細(xì)胞系(例如，HeLa, HEp-2)與不同的病毒一起溫育一小時的時期后，用不同的濃度處理受感染的細(xì)胞系，然后測量對病毒增殖的作用。
[0081]通過致細(xì)胞病變效應(yīng)的檢測(Adeno5病毒)、噬斑減少測定(FluA、HRV14、RSV)或病毒特異性酶聯(lián)免疫測定(ELISA ;Adeno5、RSV)進(jìn)行了抗病毒活性的體外定量確定。
[0082]在致細(xì)胞病變效過的檢測中，用確定的病毒溶液感染匯合生長的病毒敏感細(xì)胞(M.0.1.，感染復(fù)數(shù))。溫育一小時之后，去除病毒接種物并清洗被感染的細(xì)胞層。然后加入生理物質(zhì)濃縮物。培養(yǎng)各試驗批次直 到在未處理的病毒對照中在顯微鏡下觀察到70-90%的致細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)，其使自身呈現(xiàn)為被破壞的細(xì)胞區(qū)域。將被破壞的細(xì)胞區(qū)域的面積定義為100%感染。相較而言對各試驗批次的細(xì)胞面積進(jìn)行評估，從而可將待分析的物質(zhì)的抑制效果顯示為抑制百分比(％抑制)。[0083]在噬斑減少測定中，用確定的病毒溶液感染匯合生長的病毒敏感細(xì)胞(M.0.1.，感染復(fù)數(shù))。溫育一小時之后，去除病毒接種物并清洗被感染的細(xì)胞層。然后加入生理物質(zhì)濃縮物和固體培養(yǎng)基成分(瓊脂糖或甲基纖維素)，并進(jìn)一步溫育。通過上覆的培養(yǎng)基中的固體成分對經(jīng)感染的面積劃界，從而產(chǎn)生一系列經(jīng)感染的細(xì)胞(“噬斑”)。培養(yǎng)各試驗批次直到在未處理的病毒對照中在顯微鏡下觀察到指定的噬斑數(shù)(M.0.1.)。通過固定和染色細(xì)胞層，可使病毒噬斑可見為深著色的細(xì)胞層中的亮環(huán)。借助于圖像處理系統(tǒng)來確定噬斑數(shù)。將未處理的對照的噬斑數(shù)定義為100%感染。相較而言對各試驗批次的噬斑數(shù)進(jìn)行評估從而試驗物質(zhì)的抑制效果可以抑制百分比(％抑制)被呈現(xiàn)。
[0084]在ELISA中分析病毒產(chǎn)生。具有抗特定病毒的抗體的測試條結(jié)合在經(jīng)感染的細(xì)胞系的細(xì)胞培養(yǎng)物上清液中發(fā)現(xiàn)的病毒。為了使反應(yīng)可見，引入用過氧化物酶標(biāo)記的病原體特異性檢測抗體。加入底物/色原體以及過氧化氫和四甲基聯(lián)苯胺之后，發(fā)生顏色反應(yīng)。通過光度計確定著色強(qiáng)度并且與病毒抗原的含量成比例。在用確定的病毒溶液感染匯合生長的病毒敏感細(xì)胞(M.0.1.，感染復(fù)數(shù))之后分析經(jīng)感染和處理的細(xì)胞的病毒產(chǎn)生。溫育一小時之后，去除病毒接種物并清洗經(jīng)感染的細(xì)胞層。然后加入生理物質(zhì)濃縮物。培養(yǎng)各試驗批次直到在未處理的病毒對照中在顯微鏡下觀察到70-90%的致細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)。新合成的病毒在該階段位于細(xì)胞培養(yǎng)物上清液中。將通過光度計確定的未處理的對照的消光值定義為100%感染。相較而言對各試驗批次的消光值進(jìn)行評估，從而測試物質(zhì)的抑制效果可呈現(xiàn)為抑制百分比(％抑制)。
[0085]在所有試驗中顯示出對病毒增殖的顯著抑制，即病毒負(fù)荷的減少(參見圖1)。
[0086]根據(jù)本發(fā)明的干燥提取物抑制人(FluA)和豬(pFluA)流感病毒(Grippeviren)的增殖。124.8 μ g仙露貝/ml (FluA)或43.4 μ g仙露貝/ml (pFluA)的濃度足以抑制(減少)病毒(負(fù)荷)50%。與仙露貝⑧醇/水相比，根據(jù)本發(fā)明的仙露貝干燥提取物顯示出對病毒株HRV14、Aden o5和RSV的更低的EC50，和因此相應(yīng)更大的功效(參見圖1和2)。
[0087]表O:抗病毒效果
【權(quán)利要求】
1.生產(chǎn)植物干燥提取物的方法，以下列步驟進(jìn)行: a.)醇/水提取酸模藥草(Rumicisherba)、馬鞭草(Verbena officinalis)、西洋接骨木(Sambucus nigra)、黃花九輪草(Primula veris)和黃龍膽(Gentiana Iutea), b.)分離上清液， c.)水性提取余留物， d.)分離上清液， e.)合并由b.)和d.)得到的上清液， f.)干燥所述上清液和獲得植物干燥提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟a.)中黃龍膽:酸模藥草:馬鞭草:西洋接骨木:黃花九輪草的比率是1:3:3:3:3，各自+/-0.3至0.5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，在步驟a.)中，水/醇提取劑是40:60(v/v)M 60:40 (v/v)，特別是 41:59 (v/v), 50:50 (v/v)。
4.根據(jù)在前權(quán)利要求中任一項所述的方法，其特征在于乙醇，特別是96%的乙醇被用作醇。
5.根據(jù)在前權(quán)利要求中任一項所述的方法，其特征在于a.)中的所述植物以批量被一起提供。
6.根據(jù)在前權(quán)利要求中任一項所述的方法，其特征在于步驟a.)和c.)中的所述提取在20至40°C下進(jìn)行。`
7.根據(jù)在前權(quán)利要求中任一項所述的方法，其特征在于步驟a.)和c.)中的所述提取在2至8h內(nèi)進(jìn)行。
8.根據(jù)在前權(quán)利要求中任一項所述的方法，其特征在于根據(jù)步驟f.)的所述干燥在真空下在30至60°C、特別是40至50°C下進(jìn)行。
9.根據(jù)在前權(quán)利要求中任一項所述的方法，其特征在于根據(jù)步驟f.)的所述干燥在真空攪動干燥器中進(jìn)行。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項獲得的植物干燥提取物。
11.含有根據(jù)權(quán)利要求10所述的植物干燥提取物的藥物制劑，任選地包括合適的載體物質(zhì)，特別是以錠劑、片劑、包衣片劑、粉末、膠囊或液體稀釋劑的形式，特別是滴劑、果汁或糖漿、軟膏、乳劑、粉劑、粉末、鼻噴霧劑、用于吸入的液體或固體配制物、敷布、傷口和牙齦敷料、填塞物、扁桃體涂擦溶液、漱口液或沖洗液。
12.含有根據(jù)權(quán)利要求10的植物干燥提取物或根據(jù)權(quán)利要求11的藥物制劑的藥物。
13.藥物，其含有根據(jù)權(quán)利要求10至12中任一項的植物干燥提取物，作為抗菌、抗病毒或抗炎劑使用或應(yīng)用。
14.藥物，其含有根據(jù)權(quán)利要求10至12中任一項的植物干燥提取物，其在下述時使用或應(yīng)用:竇炎和/或鼻竇炎和/或鼻旁竇的炎癥，特別是每種的急性形式；特別是用于治療和預(yù)防竇炎和/或鼻竇炎和/或鼻旁竇的炎癥，特別是每種情況的急性形式。
15.藥物，其含有根據(jù)權(quán)利要求10至12中任一項的植物干燥提取物，其對于下述的使用或應(yīng)用:整個呼吸道，特別是上呼吸道，特別是咽喉、鼻和鼻旁竇的粘膜區(qū)域的疾病，呼吸道疾病，特別是黏液粘稠病(囊性纖維化)，特別是用于治療和預(yù)防整個呼吸道，特別是上呼吸道，特別是在咽喉、鼻和鼻旁竇的粘膜區(qū)域的疾病，呼吸道疾病，特別是黏液粘稠病(囊性纖維化)。
16.含有根據(jù)權(quán)利要·求10的植物干燥提取物的營養(yǎng)補(bǔ)充劑。
【文檔編號】A61K36/185GK103826649SQ201280045205
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2012年8月20日 優(yōu)先權(quán)日:2011年8月19日
【發(fā)明者】M·波普 申請人:比諾里卡公司