專利名稱：包含沉默信息調(diào)節(jié)因子1表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)的敗血癥或者敗血性休克的預(yù)防或者治療用組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種包含沉默信息調(diào)節(jié)因子I (SIRT1, silent mating typeinformation regulation 2 homo log)表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)的敗血癥或者敗血性休克的預(yù)防或者治療用組合物。
背景技術(shù)：
細(xì)菌感染及其他強有力的刺激引發(fā)可引起全身炎癥或者全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS, Systemic Inflammatory Response Syndrome)的免疫反應(yīng)。嚴(yán)重的全身炎癥反應(yīng)綜合征引發(fā)伴隨多種重度的發(fā)熱、低毒血癥(hypotoxemia)、呼吸過速(trachypnea)、心搏過速、內(nèi)皮炎癥、心功能不全、過度愈合、精神狀態(tài)異常、血管虛脫及最終的器官損傷，例如，急性呼吸困難綜合征、凝固障礙、心功能不全、腎功能不全、休克和/或昏厥的多器官功能障礙綜合征(MODS, multiple organ failure syndrome)。敗血癥定義為與全身炎癥反應(yīng)一同確認(rèn)或者懷疑感染的狀況。重癥敗血癥(severe sepsis)定義為敗血癥伴隨著器官功能障礙(organ dysfunction:低血壓、低氧癥、泌尿癥、代謝性酸中毒、血小板減少癥及意識障礙)的情況。敗血性休克(septicshock)定義為對重癥敗血癥實施輸液療法或者投用升壓劑也不能使血壓正常的情況。敗血癥可能會發(fā)展到重癥敗血癥及最終可能會發(fā)展到敗血性休克的臨床階段。臨床敗血癥廣義上是指由于微生物性作用劑的浸潤與感染的臨床癥狀相關(guān)的狀態(tài)。敗血癥的臨床癥狀有
(I)體溫> 38°C或者< 36°C ；⑵心跳數(shù)>每分鐘90次；(3)呼吸數(shù)>每分鐘20次或者PaCO2 < 32mmHg ； (4)白血球數(shù)> 12000/cu mm, < 4000/cu mm或者> 10%非成熟(帶)形態(tài)；(5)器官功能障礙、過度愈合或者高血壓等，但并不局限于此。

如果發(fā)生感染，則使感染部位的巨噬細(xì)胞活化，而分泌TNF- α及IL_1，從而增加向組織的血漿蛋白質(zhì)的釋放量，并導(dǎo)致增加向組織的噬細(xì)胞和淋巴球的移動及增加對于血管壁的血小板的附著。通過這種方式,局部血管會閉塞且病原體集中于感染部位。尤其是，敗血癥會引起全身性感染且伴隨由TNF-α引發(fā)的嚴(yán)重的血管閉塞。并且，TNF-α的全身性釋放會導(dǎo)致因血管擴(kuò)張及血管的滲透性增加引起的血漿體積的損失而引起休克。在敗血性休克中，TNF-α更加促發(fā)傳播性血管內(nèi)凝固(血液凝固)，而導(dǎo)致在小血管中的血塊生成及血液凝固蛋白質(zhì)的大量消耗。由于喪失患者的血液凝固能力，例如，腎臟、肝、心臟及肺等重要的器官因正常的灌注出現(xiàn)障礙而受到損傷。報告指出重癥敗血癥和敗血性休克的死亡率分別達(dá)到25% 30%、40% 70%。在多種情況的敗血癥中，雖然以大腸菌(E.coli)為病原體，但也能由例如，克雷伯氏菌屬(Klebsiella)-腸桿菌屬(Enterobacter)-沙雷氏菌屬(Serratia)組及如假單胞菌屬(Pseudomonas)的其他革蘭氏陰性細(xì)菌引發(fā)這種狀態(tài)。葡萄球菌屬(Staphylococcus)等的革蘭氏陽性微生物、全身性病菌及真菌感染也在一部分情況中引發(fā)敗血癥。
泌尿生殖器官、胃腸器官及氣道是導(dǎo)致敗血癥的最通常的感染部位。作為其他敗血癥-相關(guān)感染部位有創(chuàng)傷、燒傷及骨盆感染部位以及靜脈內(nèi)導(dǎo)尿管感染部位等。敗血癥最頻繁出現(xiàn)于患有對血流侵入敏感的基底疾病或者癥狀的住院患者或者燒傷、外傷或手術(shù)患者身上。作為使對血流侵入敏感的因子的整體上弱化的免疫系統(tǒng)，例如，增加對于新生兒及年長者中存在的免疫系統(tǒng)及感染的局部敏感性的癥狀或者疾病，例如包括，弱化的循環(huán)性疾病、糖尿病、尿毒癥及艾滋病(AIDS)。結(jié)果，對于由IL-1基因的許多對立基因的存在而可能產(chǎn)生的弱化的免疫反應(yīng)具有傾向的對象而言，敗血癥發(fā)病危險也更高(美國專利第6251598號)。敗血癥理解為是作為感染致病菌與寄主的免疫、炎癥及凝固系統(tǒng)之間的復(fù)雜的相互作用的結(jié)果而產(chǎn)生。寄主的反應(yīng)程度和感染致病菌的特性均對敗血癥的預(yù)后具有嚴(yán)重的影響。在敗血癥中觀察的器官障礙是在對寄主的感染致病菌反應(yīng)不適當(dāng)?shù)那闆r下產(chǎn)生，如果對于寄主的感染致病菌的反應(yīng)過于增幅，則可能會引發(fā)寄主本身的器官損傷?；谶@種概念，對于作為對寄主的炎癥反應(yīng)起到主導(dǎo)作用的傳染性細(xì)胞因子(proinflammatorycytokines)的TNF-a、IL-1 β、IL_6等的拮抗物質(zhì)試圖作為敗血癥的治療劑，但是大部分都失敗了，現(xiàn)在試圖機械通風(fēng)治療、活性蛋白質(zhì)C(activated protein C)投用,糖皮質(zhì)激素治療等，但還是指出多種限制。因此，為了預(yù)防或治療雖顯現(xiàn)高死亡率，但仍舊未能開發(fā)明顯的治療劑的敗血癥及敗血性休克，要求對于新的治療劑的必要性。沉默信息調(diào)節(jié)因子I (SIRT1, silent mating type information regulation 2homo I og ；sirtuinl)作為NAD+依賴性脫乙酰酶,公知為對許多蛋白質(zhì)的賴氨酸殘基進(jìn)行脫乙酰化來調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的功能的酶(Ageing Res, Vol.1 313頁-326頁，(2002))，與具有NAD+依賴性classIII組蛋白脫乙?；钚缘慕湍傅腟ir2最類似。尤其是，切斷粘在核因子(Nuclear factor) _kB、p53等的轉(zhuǎn)印因子的乙?；鶃碚{(diào)節(jié)它們的功能(CancerRes, Vol.64 7513 頁-7525 頁，(2004) ；Cell, Vol.107,149 頁-159 頁，(2001) ；TrendsEndocrinolMetab, Vol.17，186頁-191頁，(2006))。并且，沉默信息調(diào)節(jié)因子I干預(yù)與抑制基因的表達(dá)相關(guān)的染色質(zhì)再形成、DNA損傷反應(yīng)、伴隨飲食限制的壽命延長等(Chen etal.,Science 310，16 41，2005)。即，沉默信息調(diào)節(jié)因子I如酵母的Sir2通過組蛋白脫乙?；瘉碓傩纬扇旧|(zhì)并抑制基因的表達(dá)，除組蛋白以外，也引發(fā)與細(xì)胞生長、應(yīng)力反應(yīng)、內(nèi)分泌調(diào)節(jié)等相關(guān)的多種轉(zhuǎn)印因子的脫乙?；?。并且，根據(jù)最近的研究，報告一種增加上述沉默信息調(diào)節(jié)因子I的脫乙?；幕钚詠磉m用于糖尿、肥胖、神經(jīng)退行性疾病或者老化相關(guān)疾病等的技術(shù)。如上所述，對于增加沉默信息調(diào)節(jié)因子I的脫乙?；钚钥梢赃m用于多種疾病的藥理效果做出報告，但直到現(xiàn)在對于能夠預(yù)防或者治療敗血癥或者敗血性休克的藥理效果的研究仍舊處于全無的狀態(tài)。因此，確切需要開發(fā)能夠預(yù)防或者治療敗血癥及敗血性休克的新的治療劑。

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題
本發(fā)明者在為了開發(fā)新的敗血癥或者敗血性休克的治療劑進(jìn)行研究的過程中，沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)可減少傳染性細(xì)胞因子，增加抗炎癥性細(xì)胞因子，從而確認(rèn)到能夠顯著降低因敗血癥而引起的死亡率并完成了本發(fā)明。因此，本發(fā)明的目的在于，提供包含沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)的敗血癥或者敗血性休克的預(yù)防或者治療用組合物。解決問題的手段
本發(fā)明提供包含沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)的敗血癥或者敗血性休克的預(yù)防或者治療用藥學(xué)組合物。并且，本發(fā)明提供包含沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)的敗血癥或者敗血性休克的預(yù)防或者改善用食品組合物。發(fā)明的效果
根據(jù)本發(fā)明，沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)可減少傳染性細(xì)胞因子，增加抗炎癥性細(xì)胞因子，從而能夠顯著降低因敗血癥或者敗血性休克而引起的死亡率，而可以有用地使用于敗血癥或者敗血性休克的預(yù)防或者治療上。


圖1是表示在小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞處理㈧脂多糖(LPS)及干擾素β，并共同處理⑶干擾素β封閉抗體(a-1NFβ , IFN-β blocking antibody)和脂多糖之后，以蛋白質(zhì)印跡分析沉默信息調(diào)節(jié)因子I蛋白質(zhì)的表達(dá)的結(jié)果圖。圖2是表示在小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞利用腺病毒-沉默信息調(diào)節(jié)因子I及干擾素β來誘導(dǎo)沉默信息調(diào)節(jié)因子I的過度表達(dá)，并以酶聯(lián)免疫吸附劑測定(ELISA)分析處理脂多糖之后分泌的炎癥及抗炎癥細(xì)胞因子的量的結(jié)果圖(*，P < 0.05 ;**，P < 0.01 (t檢驗))。
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圖3是表示在小鼠身上預(yù)處理腺病毒-沉默信息調(diào)節(jié)因子I或者干擾素β之后投用脂多糖后的小鼠的生存率圖。圖4是表示給小鼠注射腺病毒顯性負(fù)性沉默信息調(diào)節(jié)因子I (Adenovirus-Dominant-negative SIRT1)及干擾素β之后處理脂多糖后的小鼠的生存率圖。圖5是表示在小鼠身上處理腺病毒-沉默信息調(diào)節(jié)因子I或者干擾素β后通過盲腸結(jié)扎及穿孔(cecal ligation and Puncture,以下CLP)手術(shù)引發(fā)敗血癥后的小鼠的生
存率圖。優(yōu)選的實施方式
本發(fā)明提供包含沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)的敗血癥或者敗血性休克的預(yù)防或者治療用組合物。上述組合物包含藥學(xué)組合物及食品組合物。以下，對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。本發(fā)明的沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)可減少傳染性細(xì)胞因子，增加抗炎癥性細(xì)胞因子，從而顯著降低因敗血癥或者敗血性休克而引起的死亡率。因此，本發(fā)明的沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)可有用地使用于敗血癥或者敗血性休克的預(yù)防或者治療上。上述沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)可以包含選自包含干擾素β、環(huán)鳥苷一磷酸(cGMP, cyclic guanosine monophosphate)、脂連激素、丙酮酸酯及2_脫氧葡糖的組中的一種以上的物質(zhì)，但是并不局限于此。上述干擾素β包含干擾素的兩個同種型的干擾素β ladFN-β la)或者干擾素i3 1b(IFN_i3 1b)。干擾素β Ia從包含人類干擾素β基因的中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CH0，Chinese hamster ovary)生產(chǎn)，由166個氨基酸殘基形成，大小為25kD的糖基化的(glycosylated)蛋白質(zhì)。干擾素β Ib是由從大腸菌生產(chǎn)的165個氨基酸殘基形成的蛋白質(zhì)，缺少糖，缺少第一氨基酸甲硫氨酸(methionine)殘基,第17半胱氨酸(cysteine)殘基置換為絲氨酸(serine)。眾所周知，上述干擾素β Ia及干擾素β Ib可作為多發(fā)性硬化癥治療劑而使用，但并未對利用其的敗血癥或者敗血性休克的預(yù)防或者治療劑進(jìn)行公開。上述“敗血癥或者敗血性休克的預(yù)防或者治療”是指，減少、改善或者除去與敗血癥相關(guān)的臨床癥狀及多器官功能障礙綜合征的狀態(tài)，例如，減少、改善或者除去多種程度的發(fā)熱、低毒素血癥、聲撕、數(shù)脈、內(nèi)皮炎、心肌梗塞、高度錯亂、變化性精神狀態(tài)、血管虛脫及器官損傷、急性呼吸困難綜合征、凝固障礙、心功能不全、腎功能不全、休克和(或)昏厥狀態(tài)。本發(fā)明的組合物可以與沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)一同含有一種以上具有預(yù)防或者治療敗血癥或者敗血性休克效果的公知的有效成分。本發(fā)明的 藥學(xué)組合物為了便于投用而除了上述記載的有效成分以外追加包含藥學(xué)上許可的I一種以上載體制備而得。例如，作為載體、賦形劑及稀釋劑可以選自包含乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藻糖醇、麥芽糖醇、淀粉、阿拉伯橡膠、藻酸鹽、凝膠、磷酸鈣、硅酸鈣、纖維素、甲基纖維素、微晶質(zhì)纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂、礦物油的組中。在對本發(fā)明的藥學(xué)組合物進(jìn)行制劑化的情況下，可以使用通常使用的填充劑、增容劑、結(jié)合劑、濕潤劑、崩解劑、表面活性劑等的稀釋劑或者賦形劑來制備。在用于口服給藥的固體制劑包含片劑、丸劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑等，這種固體制劑是在上述有效成分中混合一種以上的賦形劑，例如，混合淀粉、碳酸鈣、蔗糖或者乳糖、凝膠等來制備。并且，除了單純的賦形劑以外，也可以使用如硬脂酸鎂、滑石的潤滑劑。用于口服給藥的液狀制劑有懸浮劑、耐溶液劑、乳劑、糖漿劑等，但除了作為經(jīng)常使用的單純的稀釋劑的水、液體石蠟以外，可以包含多種賦形劑，例如，濕潤劑、甜味劑、芳香劑、保存劑等。用于非口服給藥的制劑包含滅菌的水溶液、非水性溶劑、懸浮劑、乳劑、冷凍干燥制劑及栓劑。作為非水性溶劑、懸浮劑可以使用丙二醇、聚乙二醇、如橄欖油的植物油、如油酸乙酯的可注射的酯等。作為栓劑的基質(zhì)可以使用魏拓鎖(witepsol)、聚乙二醇(Macrogol)、吐溫(tween) 61、可可脂、月桂精酯、甘油明膠等。本發(fā)明的藥學(xué)組合物根據(jù)所需要的方法能夠以多種途徑投用，例如，可以借助向口服、直腸、靜脈、肌肉、皮下、子宮內(nèi)硬膜或者腦血管內(nèi)注射來投用。本發(fā)明的藥學(xué)組合物的有效投用量根據(jù)患者的狀態(tài)及體重、疾病的程度、藥物形態(tài)、投用途徑及期間而不同，但可以被本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員適當(dāng)?shù)剡x擇。上述沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)的一日投用量優(yōu)選為5000 IU/kg 50000 IU/kg，可以一天投用一次，也可以分幾次投用，上述投用方法并不限定本發(fā)明的范圍。并且，本發(fā)明的藥學(xué)組合物可以與抗炎癥劑、解熱鎮(zhèn)痛劑、血液凝固抑制劑、抗生齊 、抗菌劑及抗過敏劑等一起制劑化或者合并而使用。本發(fā)明的食品組合物還可以包含食品學(xué)上許可的載體。作為一實施例，在食品組合物為飲料的情況下，作為必需成分，除了含有沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)以外，在液體成分上沒有特別的限制，作為追加成分可以含有如普通的飲料，多種香味劑或者天然碳水化合物等。此時，作為天然碳水化合物的例子，可以舉出單糖，例如葡萄糖、果糖、雙糖，例如麥芽糖、蔗糖、多聚糖，例如糊精、環(huán)糊精等的普通糖及木糖醇、山梨糖醇、赤藻糖醇等的糖醇。并且，作為上述香味劑，可以使用天然香味劑，例如祝馬丁、甜菊提取物、萊苞迪甙Α、甘草甜素和合成香味劑，例如糖精、阿斯巴甜等。除了上述飲料以外，本發(fā)明的食品組合物可以含有多種營養(yǎng)素、維生素、礦物、合成調(diào)味劑及天然 調(diào)味劑等的調(diào)味劑、著色劑、增進(jìn)劑、果膠酸及其鹽、海藻酸及其鹽、有機酸、保護(hù)性膠體增粘劑、PH調(diào)節(jié)齊IJ、穩(wěn)定劑、防腐齊IJ、甘油、乙醇、用于碳酸飲料的碳酸劑等。上述食品組合物可提供為各種食品類、糖果、巧克力、口香糖、茶、維生素復(fù)合劑、各種健康輔助食品類等，可以提供為粉末、顆粒、片劑、丸劑、膠囊或者飲料的形態(tài)。含在上述食品組合物的沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)的有效用量能夠以上述藥學(xué)組合物的有效用量為準(zhǔn)使用，但是在以健康及衛(wèi)生為目的或者以調(diào)節(jié)健康為目的而長期攝取的情況下，可以是上述范圍以下。
具體實施例方式下面，借助實施例及制劑例，對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。但，以下實施例及制劑例僅例示本發(fā)明，本發(fā)明的內(nèi)容并不限定于以下實施例及制劑例。實施例1.在小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞處理脂多糖及干擾素β后測定沉默信息調(diào)節(jié)因子I的表達(dá)量
在包含巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF，10ng/ml)的培養(yǎng)液中，使C57BL/6小鼠的股骨和脛骨骨髓細(xì)胞分化5日 7日之后，作為小鼠巨噬細(xì)胞而使用。在巨噬細(xì)胞按不同濃度處理脂多糖(Ong/ml、100ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml)和干擾素 β (O units/ml、IOOunits/ml、200units/ml、500units/ml),通過蛋白質(zhì)印跡來比較了沉默信息調(diào)節(jié)因子I的表達(dá)量。并且，測定了將脂多糖與干擾素β封閉抗體(IFN-β blocking antibody) 一同處理時的沉默信息調(diào)節(jié)因子I蛋白質(zhì)的表達(dá)量。結(jié)果見圖1。如圖1所示，在小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞處理100ng/ml的脂多糖時，沉默信息調(diào)節(jié)因子I蛋白質(zhì)的表達(dá)增加至最高，在處理500ng/ml及1000ng/ml的情況下，反而減少了沉默信息調(diào)節(jié)因子I蛋白質(zhì)的表達(dá)。并且，在按不同濃度處理干擾素β的情況下，進(jìn)行100units/ml處理時，沉默信息調(diào)節(jié)因子I的表達(dá)的增加最為顯著(A)。并且，通過脂多糖得到增加的沉默信息調(diào)節(jié)因子I的表達(dá)隨著一同處理干擾素β封閉抗體而重新被減少。據(jù)此可知，通過脂多糖得到增加的沉默信息調(diào)節(jié)因子I的分泌將通過干擾素β來實現(xiàn)，據(jù)此，干擾素β誘導(dǎo)沉默信息調(diào)節(jié)因子I的表達(dá)(B)。實施例2.腺病毒-沉默信息調(diào)節(jié)因子I及干擾素β對基于脂多糖的傳染癥及抗炎癥細(xì)胞因子的分泌量產(chǎn)生的影響
以10000感染復(fù)數(shù)(Μ0Ι，multiplicity of infection)，24小時將腺病毒-沉默信息調(diào)節(jié)因子I感染于巨噬細(xì)胞之后，24小時處理100ng/ml的脂多糖。并且，24小時一同處理100units/ml的干擾素β和100ng/ml的脂多糖之后,通過酶聯(lián)免疫吸附劑測定(ELISA)方法測定了細(xì)胞培養(yǎng)基的傳染癥及抗炎癥細(xì)胞因子的量。執(zhí)行了三次實驗，以平均土標(biāo)準(zhǔn)偏
差顯不O結(jié)果見圖2。如圖2所示，通過脂多糖處理得到增加的傳染性細(xì)胞因子的量，通過腺病毒-沉默信息調(diào)節(jié)因子I和干擾素β的預(yù)處理，IL-6分別減少40%、54%，TNF-α分別減少22%、29%。并且，確認(rèn)到作為通過脂多糖處理得到增加的另一種傳染性細(xì)胞因子的MCP-1，因腺病毒-沉默信息調(diào)節(jié)因子I和干擾素β而稍微被減少。相反，作為抗炎癥性細(xì)胞因子的IL-1O的量分別增加了 2.8倍、4.7倍。因此，可以知道，作為用于促進(jìn)沉默信息調(diào)節(jié)因子I的表達(dá)的細(xì)胞因子的干擾素β的處理可以抑制脂多糖引起的過度的炎癥反應(yīng)。實施例3.在小鼠身上預(yù)處理沉默信息調(diào)節(jié)因子I或者干擾素β之后，投用脂多糖后分析小鼠的生存率
將作為對照基因載體的腺病毒-LacZ或者作為沉默信息調(diào)節(jié)因子I基因載體的腺病毒-沉默信息調(diào)節(jié)因子I分別按3Χ108滴度(pfu, plaque forming unit)注射到小鼠尾巴靜脈，在48小時后處理15mg/kg 20mg/kg的脂多糖后，觀察10天小鼠的生存率。并且，按每20g的小鼠體重，向小鼠的尾巴靜脈注射IOOOunits的干擾素β或者同量的鹽水，在30分鐘后處理了 15mg/kg 20mg/kg的脂多糖。處理脂多糖后觀察10天小鼠的生存率。

結(jié)果見圖3。如圖3所示，給由腺病毒-沉默信息調(diào)節(jié)因子I來預(yù)處理的小鼠注射脂多糖的情況下，小鼠的10日后生存率為66%，可知，相比作為對照組的投用腺病毒-LacZ的小鼠的生存率20%顯著高。并且，向小鼠投用干擾素β之后投用脂多糖的小鼠的10日后生存率為70%，可知，相比作為對照組的投用鹽水的小鼠的生存率30%顯著高。這種結(jié)果通過卡普蘭-邁耶(Kaplan-Meier)生存統(tǒng)計分析也顯現(xiàn)出顯著性的差異(ρ〈0.05)。因此，作為用于誘導(dǎo)沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)的物質(zhì)的干擾素β抑制因脂多糖而引起的過度的炎癥反應(yīng)，由此可知，顯著降低因脂多糖處理而引起的小鼠的死亡率。實施例4.處理腺病毒顯性負(fù)性沉默信息調(diào)節(jié)因子I的情況下，分析小鼠的生存率 將作為阻止內(nèi)源性沉默信息調(diào)節(jié)因子I的功能的基因載體的腺病毒顯性負(fù)性沉默信
息調(diào)節(jié)因子I (誘導(dǎo)將第355組氨酸轉(zhuǎn)換為絡(luò)氨酸的突變蛋白質(zhì)的腺病毒)按3Χ IO8滴度(pfu)注射到小鼠的尾巴靜脈，經(jīng)過48小時后，按每20g的小鼠體重向小鼠的尾巴靜脈注射IOOOunits的干擾素β。經(jīng)過30分鐘之后，處理15mg/kg 20mg/kg的脂多糖之后觀察10天小鼠的生存率。結(jié)果見圖4。如圖4所示，在小鼠身上預(yù)處理48小時腺病毒顯性負(fù)性沉默信息調(diào)節(jié)因子1，并投用干擾素β之后投用脂多糖的情況下，經(jīng)過10日后顯示出50%的生存率。這是與作為對照組的投用鹽水的小鼠的生存率50%類似的結(jié)果，據(jù)此，可知作為誘導(dǎo)沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)的物質(zhì)的干擾素β顯著降低脂多糖引起的小鼠的死亡率。實施例5.在小鼠敗血癥模型中分析根據(jù)沉默信息調(diào)節(jié)因子I及干擾素β處理的生存率
為了在通過盲腸結(jié)扎及穿孔(cecal ligation and Puncture,以下CLP)手術(shù)而被誘導(dǎo)的小鼠敗血癥模型中確認(rèn)隨著投用沉默信息調(diào)節(jié)因子I及干擾素β而發(fā)生的生存率變化，而執(zhí)行了如下的實驗。在小鼠的尾巴靜脈按3 X IO8滴度(pfu)注射腺病毒-LacZ或者腺病毒-沉默信息調(diào)節(jié)因子I。其后，經(jīng)過24小時后，向小鼠腹腔注射麻醉劑使小鼠麻醉后，通過盲腸結(jié)扎及穿孔(CLP)引發(fā)敗血癥。即，切開小鼠的腹腔的正中央部之后，向外部露出盲腸，用真絲縫合線(silk suture)結(jié)扎回盲瓣(ileocecal valve)的末端,并利用針在盲腸貫通兩個孔后流出規(guī)定量的糞便(fecal material) 0將包含糞便的盲腸重新放進(jìn)腹腔內(nèi)進(jìn)行縫合后，通過皮下注射注入生理鹽水。經(jīng)過2小時盲腸結(jié)扎及穿孔(CLP)手術(shù)之后，按每20g的小鼠體重，向小鼠的尾巴靜脈注射IOOOunits的干擾素或者同量的鹽水。結(jié)果見圖5。如圖5所示，由腺病毒-沉默信息調(diào)節(jié)因子I預(yù)處理的小鼠身上誘導(dǎo)敗血癥，并經(jīng)過10日之后小鼠的生存率為60%。由此可知，這相比作為對照組的由腺病毒-LacZ預(yù)處理的敗血癥誘導(dǎo)小鼠的生存率0%，是顯著高的生存率。并且，就向敗血癥誘導(dǎo)小鼠投用干擾素β的實驗組而言，小鼠的生存率為76%，相反，作為對照組的鹽水處理的小鼠的生存率為0%。上述結(jié)果通過卡普蘭-邁耶(Kaplan-Meier)生存統(tǒng)計分析也顯現(xiàn)出顯著性的差異(P < 0.05)。因此，誘導(dǎo)沉默信息調(diào)節(jié)因子I的表達(dá)的干擾素β顯著降低因敗血癥而引起的小鼠的死亡率，從而可以有用地使用于敗血癥或者敗血性休克的有效的預(yù)防或者治療。 以下，例示用于本發(fā)明的組合物的制劑例。

制劑例1:藥學(xué)制劑
1.散劑的制備
沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)2g 乳糖Ig
混合上述成分，并填充于氣密布來制備了散劑。2.片劑的制備
沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)IOOmg 玉米淀粉IOOmg 乳糖IOOmg 硬脂酸鎂2mg
混合上述成分之后，根據(jù)通常的片劑的制備方法進(jìn)行壓制來制備了片劑。3.膠囊劑的制備
沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)IOOmg 玉米淀粉IOOmg 乳糖IOOmg 硬脂酸鎂2mg
混合上述成分之后，根據(jù)通常的膠囊劑的制備方法填充于凝膠膠囊來制備了膠囊劑。制劑例2:食品的制備如下制備了包含本發(fā)明的沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)的食品。1.烹飪用調(diào)料的制備
利用20重量％ 95重量％的沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)制備了健康增進(jìn)用烹飪用調(diào)料。2.番茄醬及調(diào)味汁的制備
將0.2重量％ 1.0重量％的沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)添加在番茄醬或者調(diào)味汁中，由此制備了健康增進(jìn)用番茄醬或者調(diào)味汁。3.面粉食品的制備
將0.5重量％ 5.0重量％的沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)添加在面粉中，并利用該混合物來制備面包、蛋糕、曲奇、薄脆餅干及面類，由此制備了健康增進(jìn)用食品。4.湯及肉 汁(gravies)的制備
將0.1重量％ 5.0重量的沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)添加在湯及肉汁中，由此制備了健康增進(jìn)用肉加工產(chǎn)品、面類的湯及肉汁。5.碎牛肉(ground beef)的制備
將10重量％的沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)添加在碎牛肉中，由此制備了健康增進(jìn)用碎牛肉。6.乳制品(dairy products)的制備
將5重量％ 10重量％的沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)添加在牛奶中，并利用上述牛奶制備了如黃油及冰淇淋的多種乳制品。制劑例3:飲料的制備
1.碳酸飲料的制備
混合沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)10% 15%、糖5% 10%、檸檬酸0.05% 0.3%、焦糖0.005% 0.02%、維生素C0.1% 1%的添加物，其中混合75% 80%的凈水而制備了糖漿。在85°C 98°C下，對上述糖汁進(jìn)行殺菌20秒鐘 180秒鐘，以1:4的比率，將上述糖漿與冷卻水混合之后，注入0.5% 0.82% 二氧化碳，由此制備了含有沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)的碳酸飲料。2.健康飲料的制備
均勻地調(diào)配沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)(固體成分2.5%,97.16%)、大棗提取液(65brix、2.67%)、瓜蒂復(fù)合提取物(固體成分70%,0.12%)、維生素C(0.02%)、泛酸鈣(0.02%)、甘草提取物(固體成分65%、0.01%)并進(jìn)行瞬間殺菌之后，包裝在玻璃瓶、塑料瓶等小包裝容器中，由此制備了健康飲料。3.蔬菜汁的制備
將0.5g的沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)加入到IOOOml的番茄汁或者胡蘿卜汁中，由此制備了健康增進(jìn)用蔬菜汁。4.果汁的制備
將0.1g的沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)加入到IOOOml的蘋果汁或者葡萄汁中，由此制備了健康增進(jìn)用果汁。
權(quán)利要求
1.一種敗血癥或者敗血性休克的預(yù)防或者治療用藥學(xué)組合物，其特征在于，包含沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)作為有效成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的敗血癥或者敗血性休克的預(yù)防或者治療用藥學(xué)組合物，其特征在于，上述沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)是選自包含干擾素β、環(huán)鳥苷一磷酸、脂連激素、丙酮酸酯及2-脫氧葡糖的組中的一種以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的敗血癥或者敗血性休克的預(yù)防或者治療用藥學(xué)組合物，其特征在于，上述干擾素β是干擾素β Ia或者干擾素β lb。
4.一種敗血癥或者敗血性休克的預(yù)防或者改善用食品組合物，其特征在于，包含沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)作為有效成分。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的敗血癥或者敗血性休克的預(yù)防或者改善用食品組合物，其特征在于，沉默信息調(diào)節(jié)因子I表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)是選自包含干擾素β、環(huán)鳥苷一磷酸、脂連激素、丙酮酸酯及2-脫氧葡糖的組中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的敗血癥或者敗血性休克的預(yù)防或者改善用食品組合物，其特征在于，上述干擾素β是干 擾素β Ia或者干擾素β lb。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種包含沉默信息調(diào)節(jié)因子1表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)的敗血癥或者敗血性休克的預(yù)防或者治療用組合物。本發(fā)明的沉默信息調(diào)節(jié)因子1表達(dá)誘導(dǎo)物質(zhì)減少傳染性細(xì)胞因子，增加抗炎癥性細(xì)胞因子，而能夠顯著降低敗血癥或者敗血性休克引起的死亡率，從而能夠有用地使用于敗血癥或者敗血性休克的預(yù)防或者治療。
文檔編號A61P9/00GK103228290SQ201280002536
公開日2013年7月31日 申請日期2012年2月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月18日
發(fā)明者韓明觀, 柳彩華, 宋恩暻, 李承玉 申請人:(株)斯坦帝爾