專利名稱：一種能改善胰島素抵抗的提取物及其制備方法、應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物制藥及分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種明日葉與銀杏葉本草混合物提取物及其在改善胰島素抵抗的應(yīng)用與藥物制劑。
背景技術(shù)：
糖尿病(diabetes)作為一種常見的內(nèi)分泌代謝性疾病，是繼心血管疾病及癌癥之后危害人類健康的第三大疾患。胰島素抵抗(Insulin Resistance, IR)是指胰島素作用的靶器官對胰島素作用的敏感性下降，即正常劑量的胰島素產(chǎn)生低于正常生物學(xué)效應(yīng)的一種狀態(tài)，目前認為，IR不僅是2型糖尿病的發(fā)病基礎(chǔ)，更是貫穿多種代謝相關(guān)疾病的主線，是連接它們的紐帶，為這些疾病的共同病理生理基礎(chǔ)。中醫(yī)藥對IR的研究雖起步較晚，但近年來的研究漸趨活躍，并逐漸成為中醫(yī)藥防治糖尿病科研的熱點。
經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)了胃腸內(nèi)分泌細胞分泌的肽類物質(zhì)對胰島素的分泌調(diào)節(jié)作用。這些肽類物質(zhì)統(tǒng)稱為腸促胰島素，包括腸抑胃肽(GIP)和胰高血糖素樣肽-l(GLP-l)。GLP- I主要由末端空腸、回腸和結(jié)腸的L細胞合成和分泌，GIP由十二指腸和空腸上段的腸內(nèi)分泌K細胞分泌。近年來，已有研究表明糖尿病時可以影響胃腸道和彌漫性神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)中的細胞數(shù)量、神經(jīng)內(nèi)分泌物質(zhì)含量。給予正常大鼠高脂飲食，可引起GIP分泌過多，進而刺激十二指腸內(nèi)分泌細胞向K細胞分化，并與胰島素抵抗有關(guān)。臨床研究發(fā)現(xiàn)，2型糖尿病患者的GLP-I分泌顯著減少，GIP的促胰島素分泌作用消失，促胰素效應(yīng)受損，對糖尿病病程起到重要作用。與血糖正常者相比，糖尿病患者十二指腸部位GIP-IR細胞、GIP/GLP-1共表達細胞數(shù)量均明顯增加。這些研究充分說明，腸促胰素分泌細胞的組織學(xué)和功能改變在糖尿病病程中發(fā)揮了重要作用。因此，設(shè)法改變腸促胰素分泌細胞的組織學(xué)分布和功能水平在制備改善胰島素抵抗的藥物中具有廣闊的前景。大量流行病學(xué)資料顯示，胰島素抵抗在糖尿病及心血管疾病發(fā)病之前多年就可存在，常常與肥胖、高血壓、高脂血癥相伴隨。但多數(shù)藥物(胰島素、磺脲類、格列酮類)治療后導(dǎo)致體重進一步增加。此外，二甲雙胍可以引起血液中乳酸堆積；噻唑烷二酮類副作用以水腫與體液潴留多見，可能加重充血性心衰；艾塞那肽作為一種新型的合成腸降血糖素類似物，可激動GLP-I受體，產(chǎn)生降血糖和抗糖尿病作用；有資料表明，本藥在非糖尿病受試者及2型糖尿病患者中均是一種強效促胰島素分泌藥；但其作為人工合成肽，具有一定免疫原性和低血糖風(fēng)險。糖尿病及胰島素抵抗作為一種慢性疾病，中醫(yī)藥在這方面有著極大的優(yōu)勢與潛力。植物中提取的化合物在生物活性方面具有結(jié)構(gòu)明確，毒性小，作用持久、顯著等特點。黃酮類化合物普遍分布于植物界中，有著廣泛的生物活性。明日葉(angelica keiskei)中文別名為八丈芹、海峰人參和長壽菜，是芹科當(dāng)歸屬植物，因其生命力頑強，今日摘葉明日可發(fā)新芽，故名明日葉；其主要成分為查耳酮和香豆素類化合物，在抗腫瘤、抗氧化、降血壓、降血糖等方面作用顯著。銀杏葉(ginkgo leaves)又名白果葉，本世紀60年代西德即開始相關(guān)研究；其中含有多種藥效成分，包括黃酮類化合物、銀杏內(nèi)酯、前花青素多酚等，具有降低血液膽固醇、防治腦梗塞、治療支氣管哮喘、抗自由基過氧化等廣泛藥理作用。明日葉與銀杏均為藥食兩用植物，作為食品或營養(yǎng)補充劑長期使用，表明其與化學(xué)藥物相比具有較高的安全性，適合長期服用。因此，將其開發(fā)成為改善胰島素抵抗、降壓降脂、治療糖尿病的藥物，具有較好的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是針對現(xiàn)有改善胰島素抵抗藥物多副作用的問題，提供了一種明日葉與銀杏葉本草混合物提取物及其在改善胰島素抵抗的應(yīng)用與藥物制劑，具體為應(yīng)用提取物影響腸促胰素分泌細胞的組織學(xué)分布和功能水平，研究其在制備改善胰島素抵抗藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明選擇富含不同黃酮類化合物的明日葉與銀杏葉，以不同比例混合，進行提取，獲得含有不同比例的黃酮混合物；應(yīng)用糖尿病小鼠，篩選出協(xié)同降糖作用最強的提取物；應(yīng)用胰島素抵抗大鼠，觀察黃酮混合物改變腸促胰素分泌細胞的組織學(xué)分布和功能水 平，從而改善胰島素抵抗，為改善胰島素抵抗藥物研究提供了新的效果顯著的藥物。一種能改善胰島素抵抗的提取物及其制備方法、應(yīng)用是采取以下技術(shù)方案實現(xiàn)一種能改善胰島素抵抗的提取物，其特征在于采用明日葉與銀杏葉藥材原料提取而成，其中明日葉與銀杏葉質(zhì)量配比為1:0.廣10。所述的明日葉與銀杏葉質(zhì)量配比為I :廣10。作為本發(fā)明的進一步改進，上述提取物按照如下方法制備而成按質(zhì)量配比稱取明日葉與銀杏葉，將明日葉與銀杏葉進行混合，加入60%乙醇，料液比為1:15，于室溫下浸泡24小時；回流法提取，提取條件如下溫度65°C，提取2次，每次4小時；減壓抽濾；合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)水分，濃縮制成浸膏。一種能改善胰島素抵抗的提取物的制備方法，其特征在于按質(zhì)量配比稱取明日葉與銀杏葉，將明日葉與銀杏葉進行混合，加入60%乙醇，料液比為1:15，于室溫下浸泡24小時；回流法提取，提取條件如下溫度65°C，提取2次，每次4小時；減壓抽濾；合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)水分，濃縮制成浸膏。所述的一種能改善胰島素抵抗的提取物在制備用于改善胰島素抵抗的藥物中的應(yīng)用。所述的能改善胰島素抵抗的提取物應(yīng)用，其特征在于所述改善胰島素抵抗的藥物為抗腫瘤、抗氧化、降血壓、降血糖的藥物，或降低血液膽固醇、防治腦梗塞、治療支氣管哮喘、抗自由基過氧化的藥物。有益效果本發(fā)明所提供的明日葉與銀杏葉本草混合物提取物能夠改善胰島素抵抗；經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，該提取物作用的靶位點為腸促胰素分泌細胞，通過在體影響腸促胰素分泌細胞的組織學(xué)分布和功能水平，從而達到改善胰島素抵抗的目的。提取物可制備成一種改善胰島素抵抗的藥物尤其是口服藥物。胰島素抵抗的治療以西藥為主，研究熱點為腸促胰素。我們將具有降糖作用的兩種中草藥進行組合，發(fā)現(xiàn)其改善胰島素抵抗的新用途及新作用機制。


以下將結(jié)合附圖對本發(fā)明作進一步說明圖I表示大鼠肝臟病理切片圖(200 X)圖2表示提取物對胰島素抵抗大鼠血中GLP-UGIP水平的影響(X土SD，N=8)
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例進一步說明本發(fā)明的技術(shù)解決方案，不是對本技術(shù)方案的限制。 本發(fā)明中的生物材料來源如下明日葉及銀杏葉分別購于青島及南京先聲藥店。實施例I 一種能改善胰島素抵抗的提取物的制備按質(zhì)量配比稱取明日葉100 g、銀杏葉10g，將明日葉與銀杏葉進行混合，加入60%乙醇(料液比為1:15)，于室溫下浸泡24小時；回流法提取(溫度65°C，提取2次，每次4小時)；減壓抽濾；合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)水分，濃縮制成浸膏。實施例2 —種能改善胰島素抵抗的提取物的制備按質(zhì)量配比稱取明日葉50 g、銀杏葉50g，將明日葉與銀杏葉進行混合，加入60%乙醇(料液比為1:15)，于室溫下浸泡24小時；回流法提取(溫度65°C，提取2次，每次4小時)；減壓抽濾；合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)水分，濃縮制成浸膏。實施例3 —種能改善胰島素抵抗的提取物的制備按質(zhì)量配比稱取明日葉10g、銀杏100g，將明日葉與銀杏葉進行混合，加入60%乙醇(料液比為1:15)，于室溫下浸泡24小時；回流法提取(溫度65°C，提取2次，每次4小時)；減壓抽濾；合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)水分，濃縮制成浸膏。實施例4明日葉與銀杏葉混合物提取物對糖尿病小鼠作用的研究用實施例I中提取方法獲得明日葉與銀杏葉混合物提取物三份，其明日葉與銀杏葉的重量比分別為1:0. I (提取物1)、1:1 (提取物2)、1: 10 (提取物3)。雄性小鼠禁食不禁水12h后，80mg/kg尾靜脈注射四氧嘧啶，l_3h內(nèi)灌胃50%葡萄糖。72h后，毛細管眼后靜脈叢采血，用血糖儀檢測動物血糖，血糖3 11. lmmol/L為造模成功，造模成功小鼠隨機分為模型組(M)、鹽酸二甲雙胍組(Y)、提取物1(H1)、提取物2(H2)、提取物3 (H3)，另取十只正常小鼠作為正常對照組(C)。受試藥小鼠灌胃給藥28.5ml/kg，折合成相同的生藥劑量10g/kg，陽性對照組灌胃150mg/kg鹽酸二甲雙胍，正常對照組和模型組給予同量生理鹽水。每天一次，連續(xù)7天。末次給藥前禁食8h，測定給藥前空腹血糖(Oh)及末次給藥后0. 5h、lh、2h、4h的血糖值。實驗結(jié)果顯示，模型組與正常對照組相比較，血糖水平顯著升高，表明造模成功。與模型組比較，提取物在給藥7天后，末次給藥前(Oh)就能顯著性改變血糖水平，末次給藥后2h、4h能極其顯著的改變血糖水平，見表I。表I提取物對糖尿病小鼠血糖水平的影響(X土S，n=12)
權(quán)利要求
1.一種能改善胰島素抵抗的提取物，其特征在于采用明日葉與銀杏葉藥材原料提取而成，其中明日葉與銀杏葉質(zhì)量配比為1:0.廣10。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的能改善胰島素抵抗的提取物，其特征在于所述明日葉與銀杏葉的質(zhì)量配比為I :廣10。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的能改善胰島素抵抗的提取物，其特征在于所述明日葉與銀杏葉提取物主要成分為明日葉總黃酮和銀杏葉總黃酮。
4.如權(quán)利要求廣3中任一項所述的能改善胰島素抵抗的提取物，其特征在于按照如下方法制備而成按質(zhì)量配比稱取明日葉與銀杏葉，將明日葉與銀杏葉進行混合，加入60%乙醇，料液比為1:15，于室溫下浸泡24小時；回流法提取，提取條件如下溫度65°C，提取2次，每次4小時；減壓抽濾；合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)水分，濃縮制成浸膏。
5.權(quán)利要求廣3中任一項所述的能改善胰島素抵抗的提取物的制備方法，其特征在于按質(zhì)量配比稱取明日葉與銀杏葉，將明日葉與銀杏葉進行混合，加入60%乙醇，料液比為1:15，于室溫下浸泡24小時；回流法提取，提取條件如下溫度65°C，提取2次，每次4小時；減壓抽濾；合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)水分，濃縮制成浸膏。
6.權(quán)利要求f3中任一項所述的能改善胰島素抵抗的提取物在制備用于改善胰島素抵抗的藥物中的應(yīng)用。
7.如權(quán)利要求7所述的提取物的應(yīng)用，其特征在于所述改善胰島素抵抗的藥物為抗腫瘤、抗氧化、降血壓、降血糖的藥物，或降低血液膽固醇、防治冠心病、心絞痛、腦梗塞、治療支氣管哮喘、抗自由基過氧化的藥物。
全文摘要
本發(fā)明提供一種能改善胰島素抵抗的明日葉和銀杏葉本草混合物提取物，即采用重量比為1:0.1~10的明日葉與銀杏葉藥材原料提取而成，其主要成分為明日葉總黃酮和銀杏葉總黃酮；同時提供此種提取物的制備方法。通過應(yīng)用糖尿病小鼠和胰島素抵抗大鼠模型，發(fā)現(xiàn)此提取物具有顯著降糖作用，并能夠影響在體腸促胰素分泌細胞的組織學(xué)分布和功能水平，從而治療胰島素抵抗，可開發(fā)為改善和治療胰島素抵抗的藥物，故本發(fā)明同時提供此提取物在用于改善胰島素抵抗的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號A61K36/16GK102935099SQ20121051246
公開日2013年2月20日 申請日期2012年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月4日
發(fā)明者戴麗, 季暉, 譚佳妮, 唐建興, 李文雯, 陳同 申請人:中國藥科大學(xué)