專利名稱：用于治療炎性疾病和病癥的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本公開內(nèi)容一般涉及治療疾病的方法并且更具體地涉及炎性疾病和病癥的治療。
背景技術(shù)：
炎癥的起始從炎性響應(yīng)開始并且導(dǎo)致嗜中性粒細胞、粒細胞、單核細胞、巨噬細胞以及其他免疫細胞的活化。這可導(dǎo)致涉及炎性細胞因子和介質(zhì)(例如白介素、TNFa和前列腺素)的局部或系統(tǒng)炎性級聯(lián)。這一復(fù)雜的炎性介導(dǎo)的級聯(lián)觸發(fā)整體范圍的響應(yīng)，例如細胞趨化和內(nèi)皮損傷并且導(dǎo)致從天然和獲得性免疫系統(tǒng)補充另外的細胞。皮膚作為機體內(nèi)和環(huán)境之間重要的界限而起作用，防止與可能有害的病原體接觸。在抗原/病原體侵入的例子中，炎性響應(yīng)常常被誘導(dǎo)以除去抗原。這一響應(yīng)導(dǎo)致主要由T細胞、多形核細胞和巨噬細胞組成的真皮滲入。炎性響應(yīng)不是必然與外界刺激相關(guān)或者可以由無害的環(huán)境物質(zhì)導(dǎo)致(如果發(fā)生過敏)。在這兩種情況中，沒有適當(dāng)控制的致炎性細胞因子的過表達導(dǎo)致通常為局部或系統(tǒng)炎癥的標志的炎癥，以及各種炎性疾病和病癥。炎癥與各種病癥例如濕疹和皮膚炎相關(guān)，包括例如特應(yīng)性皮炎，脂溢性皮炎，出汗障礙性濕疫，錢幣狀濕疫，瘀滯性皮炎，過敏性皮炎，銀屑病，瘙癢癥，多發(fā)性硬化癥，皮膚炎癥，瘢痕性類天皰瘡，硬皮病，化膿性汗腺炎，中毒性表皮壞死松解癥，痤瘡，骨炎，移植物抗宿主病(GVHD)，壞疽性膿皮癥(pyrodermagangrenosum)和白塞氏綜合征。并不意外地，致炎性細胞因子的過量產(chǎn)生與許多炎性和自身免疫性疾病有關(guān)聯(lián)。例如，促進Thl7細胞的存活和增殖的細胞因子(例如TNFa和白介素(IL)_23)的分泌與銀屑病高度相關(guān)，而IL-6除了其作為致炎性細胞因子的一般作用外還是\Thl7發(fā)育所需要的。其他細胞因子像IL-12和IP-10是引發(fā)劑并且參與銀屑病和其他自身免疫性疾病的代表性的Thl通路。白介素5 (IL-5)，增加嗜酸性粒細胞的產(chǎn)生的一種細胞因子，在哮喘中過表達，導(dǎo)致哮喘支氣管粘膜中嗜酸性 粒細胞的累積(過敏性炎癥的標志)。白介素4 (IL-4)和白介素13(IL-13)是在炎性腸病和哮喘中存在的平滑肌過度收縮的已知的介質(zhì)。另外，如下文進一步討論的，炎性細胞因子已經(jīng)顯示，以實例的方式，與銀屑病、多發(fā)性硬化癥、關(guān)節(jié)炎、局部缺血、感染性休克和器官移植排斥有關(guān)。相似地，粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)是粒細胞和巨噬細胞系群落的成熟的調(diào)節(jié)劑并且已經(jīng)作為關(guān)鍵因子與許多炎性和自身免疫性疾病相關(guān)。例如抑制GM-CSF分泌的抗體已經(jīng)顯示可改善自身免疫性疾病。因此，如本文中所討論的，減少致炎性細胞因子分泌和調(diào)節(jié)免疫調(diào)節(jié)劑的治療的開發(fā)通常在緩和局部和系統(tǒng)炎癥以及許多炎性和/或自身免疫性疾病上是有益的。種種證據(jù)指明PKC的同工型的調(diào)節(jié)劑在獲得這些結(jié)果上是有用的。若干項體內(nèi)研究，通過皮膚相關(guān)細胞(例如角質(zhì)化細胞、樹狀突細胞和T輔助細胞)作為參與銀屑病和其他自身免疫性炎性疾病的發(fā)病機制的炎性響應(yīng)的發(fā)展中的關(guān)鍵參與者，已經(jīng)顯示T輔助(Th) 17細胞的參與以及細胞因子例如白介素和TNFd的分泌。如本文所用的，體內(nèi)(“在生物體內(nèi)”的拉丁文)是使用與部分的或死亡的生物體或者體外(“在玻璃制品內(nèi)”例如在試管或有蓋培養(yǎng)皿中)受控的環(huán)境相對的整體的、活的生物體的實驗。促進Thl7細胞存活和增殖的細胞因子(例如TNFa和白介素(IL)_23)的分泌同樣作為這些疾病的關(guān)鍵的主要細胞因子調(diào)節(jié)劑起作用(Fitch等人(2007)Curr RheumatolRep.9:461-7)。反過來真皮中的Thl7細胞減少IL-17A和IL-22的分泌。IL-22，特別地，導(dǎo)致角質(zhì)化細胞過度增殖并且增加銀屑病中的炎性響應(yīng)(Fitch等人(2007)Curr RheumatolR印9: 461-7)。蛋白激酶C(PKC)家族代表催化磷酸從ATP向蛋白的絲氨酸和蘇氨酸殘基的共價轉(zhuǎn)移的一組磷脂依賴性酶。該家族目前被認為由屬于3個不同的類別(其以它們經(jīng)由鈣離子的活化和其他因素為基礎(chǔ))的至少12個單獨的同工型組成。PKC家族由至少十個成員組成，通常分為三個亞組:傳統(tǒng)的、新型的和非典型的PKC(圖1)。特殊的輔助因子需求、組織分布和細胞區(qū)室化表明每個同工型的不同的功能和特定信號傳遞的調(diào)諧。因此，特定刺激可通過由它們的因子調(diào)節(jié)的同工型特定PKC信號導(dǎo)致不同的響應(yīng)，例如:在特定的生物學(xué)背景下的表達、定位和/或磷酸化狀態(tài)。PKC同工型由各種細胞外信號活化，并且反過來調(diào)節(jié)細胞蛋白包括受體、酶、細胞骨架蛋白和轉(zhuǎn)錄因子的活性。因此，PKC家族在細胞信號處理(包括細胞增殖、分化、存活和死亡的調(diào)節(jié))中起到中樞作用。皮膚中高度富含的PKCa是表皮中主要的常規(guī)的Ca2+響應(yīng)的PKC同工型并且最初僅cPKC在體內(nèi)和體外的角質(zhì)化細胞中被檢測到(Dlugosz等人(1992)Bi0medPharmacother46:304 ;Wang 等人(1993) J Cancer Res Clin 0ncolll9:279_287)。因此，PKCa已經(jīng)被提出作為Ca2+誘導(dǎo)的分化中的關(guān)鍵參與者(Denning等人(1995)Cell GrowthDiffer6:149-157 ;Dlugosz 等人(1992) Biomed Pharmacother46:304)。在表皮中存在和主要限制于基底上層(Denning 等人(2004) Int J Biochem Cell Biol36: 1141-1146) ,PKC α參與細胞周期的停止并主要與角蛋白細胞骨架和橋粒的細胞-細胞間連接有關(guān)(Jansen等人(2001)Int J Cancer 93:635_643 ；Tibudan 等人(2002)J Invest Dermatol.119:1282-1289)。因此，當(dāng)暴露于傳統(tǒng)PKC活化劑TPA (12_0_十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯)時，棘突的標記被抑制，PKCa被認為很大程度上導(dǎo)致了作為TPA活化的結(jié)果的從棘突至粒狀分化的轉(zhuǎn)化(Dlugosz 和 Yuspa(1993) J Cell Bioll20:217_225 ;Lee 等人(1998) J InvestDermatollll:762_766 ；Matsui 等人(1992) J Invest Dermatol99:565_571 ；Punnonen 等人(1993) J Invest Dermatol 101:719-726)。事實上，通過反義寡核苷酸阻滯PKC α活性或其合成似乎消除了粒狀標記并且使棘突標記像Kl和KlO復(fù)原。同樣，顯性負相PKC α的實現(xiàn)似乎復(fù)原(晚期)棘突標記外皮蛋白(Deucher等人(2002)J Biol Chem 277:17032-17040)。因此，皮膚癌中的不完全的分化(Tennenbaum等人(1993)Cancer Res3:4803-4810 ；Tomakidi 等人(2003) J Pathol200:298-307)與升高的 PKCa 活性有關(guān)，同樣在體外腫瘤細胞中觀察到(Dlugosz等人(1992)Biomed Pharmacother 46:304 ;Yang等人(2003) J Cell Physiol.195:249_259)。然而，正常人類角質(zhì)化細胞中PKC α的過表達未顯示改變它們的分化模式(Deucher 等人(2002) J Biol Chem277:17032-17040)。PKCa 對遷移過程中β I整聯(lián)蛋白的細胞運輸和膜補充的影響(Ng等人(1999) EMBO J 18 =3909-3923)可很好地促進傷口表皮細胞再生和腫瘤細胞入侵。轉(zhuǎn)基因小鼠中PKCa的過表達已經(jīng)顯示減少顯著的炎性響應(yīng)，增加嗜中性粒細胞浸潤相關(guān)的表皮加厚和浮腫，微型多發(fā)性膿腫，和炎性細胞因子和趨化因子(例如TNFa、MIP-2、C0X-2或巨噬細胞炎性蛋白(MIP))的顯著增加。這些結(jié)果將PKC α牽涉到表皮炎性響應(yīng)中(Wang 和 Smart (1999) J Cell Sci 112:3497-3506)。用 TPA(—種 PKCa 活化劑)處理似乎導(dǎo)致表皮增生、內(nèi)表皮的炎癥和大量細胞凋亡(Cataisson等人(2003) J Immunol171:2703-2713 Jansen 等人(2001) Int J Cancer93:635_643)。此外，近來 PKC 同工酶選擇性敲除和轉(zhuǎn)基因小鼠中的體內(nèi)研究顯示在免疫系統(tǒng)中各個PKC具有突出不同的功能。這些基因分析，與生化研究一起，似乎表明PKC調(diào)節(jié)的信號通路在免疫響應(yīng)的許多方面中起到重要的作用。例如，PKC家族的成員在T細胞信號通路中顯得至關(guān)重要。特別地，PKCa，同種型似乎決定體內(nèi)效應(yīng)子中淋巴細胞特有的性質(zhì)。PKCa還被討論參與巨噬細胞活化并且似乎顯示參與肥大細胞信號傳導(dǎo)(Cataisson等人(2005) J Immunol 174:1686-1692)。因此，PKC同種型是獲得性免疫中得有效的藥物靶。炎性疾病的一個實例是銀屑病。有關(guān)于導(dǎo)致銀屑病發(fā)展的基本病理的兩種主要的假設(shè)。第一種認為銀屑病主要是皮膚細胞的過度生長和再生的病癥。第二種假設(shè)認為銀屑病是免疫介導(dǎo)的病癥，其中皮膚細胞的過度再生對由免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的因子來說是繼發(fā)的。因此，銀屑病的大多數(shù)藥物靶向疾·病的一種要素，皮膚細胞的過度增殖狀態(tài)，或銀屑病斑塊中存在的皮膚炎性響應(yīng)。近來的數(shù)據(jù)支持兩條通路都通過皮膚細胞和免疫環(huán)境(包圍環(huán)境、周圍、位置和/或背景)之間的交互作用成為疾病的病理基礎(chǔ)的觀點。傳統(tǒng)基因組連鎖分析已經(jīng)確認了與發(fā)育銀屑病的趨勢有關(guān)的不同染色體上的名為銀屑病敏感性I至9(PS0RS I至PSORS 9)基因座的九個基因座(基因座(loci))。在這些基因座中，若干個基因被表征并且發(fā)現(xiàn)編碼在表皮細胞中表達的蛋白，例如角膜連鎖蛋白，其在表皮的粒狀和角質(zhì)化層中表達并且在銀屑病中被上調(diào)。在其他的方面，其他銀屑病關(guān)聯(lián)基因編碼參與免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)的蛋白，其中表征的例如表達白介素-12B的染色體5q上的IL12B(Frank等人(2009)NEngl J Med361:496-509)。炎性疾病的另一個實例是多發(fā)性硬化癥(MS)。MS是CNS的慢性并不可預(yù)知的炎性疾病，其可影響腦和脊髓(其通常影響青壯年)(Hafler等人(2005) Immunol Rev204:208-31)。其目前被認為是青壯年的最常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，并且通常在20和40的年齡之間發(fā)作，具有與男性相比以幾乎兩倍的可能性在女性中出現(xiàn)的趨勢。在MS中，髓鞘，環(huán)繞并且保護神經(jīng)細胞的材料，和/或其用于生產(chǎn)的能力被損害，這被稱為“脫髓鞘”。這一損害具有減緩或阻塞腦和身體之間的信息的影響，導(dǎo)致隨MS觀察到的癥狀。腦和/或脊髓中彌散的區(qū)域中的脫髓鞘和瘢痕化或其他損傷被認為是所述疾病的特征(Beeton 等人(2007) Journal of Visualized Experiments 594-604)。這些損傷似乎在CNS中改變了神經(jīng)傳導(dǎo)并且誘導(dǎo)隨脫髓鞘的斑塊的位置而變化的致殘性神經(jīng)功能缺損(Beeton 等人(2007) Journal of Visualized Experiments 594-604)。其臨床征兆和癥狀是可變的并且取決于其影響的CNS的部分，并且可包括運動、感覺、自律和認知障礙(Noseworthy 等人(2000) N Engl J Med 343:938_52)。MS的一些常見的癥狀包括:1)不可抗拒的疲倦感；2)平衡-行走和協(xié)調(diào)困難；3)視覺問題-復(fù)視和失明；4)手和腳的麻木和麻刺感；5)疼痛-輕微和嚴重兩種；肌力損失；
6)肌肉僵硬和痙攣；7)情緒不穩(wěn)-抑郁和焦躁；8)記憶障礙和精神不易集中；語言障礙(The National MS Society Web Site)。進行性殘疾是大多數(shù)患有MS的患者的命運，尤其是當(dāng)包括了 25年的遠景時。一半的MS患者在疾病發(fā)作15年內(nèi)需要拐杖行走。MS是中青年成人中神經(jīng)功能障礙的主要原因，并且直到最近十年，還沒有已知有益的治療。MS因為非特異性的臨床表現(xiàn)而難以診斷，其導(dǎo)致高度結(jié)構(gòu)化的診斷標準的開發(fā)，包括若干技術(shù)進步，其由MRI掃描、誘發(fā)電位和腦脊液(CSF)研究組成。診斷標準通常依賴于在不同時間發(fā)生的中樞白質(zhì)中的散在病灶(scattered lesions)并且沒有被其他病因?qū)W例如傳染、血管病癥或自身免疫性病癥解釋的一般原則。MS被廣泛認為是一種自身免疫性疾病，由此，未知的一種或多種試劑觸發(fā)T細胞介導(dǎo)的炎性發(fā)作，導(dǎo)致CNS(中樞神經(jīng)系統(tǒng))組織的脫髓鞘(Weiner等人(2004) ArchNeurol 61:1613_1615)。自身免疫性反應(yīng)靶向髓磷脂的證據(jù)有力但是不是決定性的。有例如在淋巴細胞或髓磷脂吞噬不存在的情況下早期多發(fā)性硬化損傷中伴隨小神經(jīng)膠質(zhì)細胞活化的原發(fā)少突膠質(zhì)細胞凋亡的描述(Manuel等人(2006) Brain)。MS被典型地報道為具有四種疾病模式:復(fù)發(fā)-緩解型MS(RRMS)、原發(fā)進展型MS (PPMS)、進展復(fù)發(fā)型多發(fā)性硬化癥(PRMS)和繼發(fā)進展型MS(SPMS)。估計50%患有RRMS的患者將在10年內(nèi)發(fā)展SPMS，而高達90%的RRMS患者將最終發(fā)展SPMS。疾病的每種模式可表表現(xiàn)為輕微、中等或嚴重?；加蠷RMS的人表現(xiàn)出確定的惡化的神經(jīng)機能的發(fā)作。這些發(fā)作之后是部分或完全的恢復(fù)期(緩和)，期間不發(fā)生疾病發(fā)展，(約85%的人最初診斷患有RRMS)。PPMS由從開始緩慢惡化的神經(jīng)機能表征，沒有明顯的復(fù)發(fā)或緩解(約10%的人被診斷為PPMS)。在SPMS中，在RRMS的初始期之后，許多人發(fā)展繼發(fā)進展型疾病過程，其中疾病更加穩(wěn)定地惡化(約50%的 患有RRMS的人在10年內(nèi)發(fā)展這一形式的疾病)。在PRMS中，人們從開始經(jīng)歷穩(wěn)定惡化的疾病癥狀，但過程中伴有惡化的神經(jīng)機能的清楚的發(fā)作，同時疾病似乎進行而沒有緩解(5% ) (The National MS Society web site)。盡管試圖減少疾病活性和疾病進展的若干種治療是可獲得的但是目前沒有對于MS的治愈。四類六種藥物在美國被批準用于治療MS。FDA批準的疾病治療包括下列:干擾素類、IIFN- β -1a( REBIF 和 AVONEX )和 IIFN- β -1b ( BETASERON )、乙酸格拉默(COPAXONE )( —種多肽)、那他珠單抗(TYSABRI )和米托蒽醌(NOVANTRONE )(—種細胞毒素劑)。其他藥物已經(jīng)被使用，具有不同程度的成功，包括糖皮質(zhì)激素、甲氨喋呤、環(huán)磷酰胺、硫唑嘌呤、靜脈注射用(IV)免疫球蛋白?，F(xiàn)有的批準的治療的好處是在MS中相對緩和復(fù)發(fā)速度和防止殘疾。REBIF (干擾素β la)是由生物技術(shù)工藝(其產(chǎn)生與人體中存在的相同的干擾素β)制造的藥物。REBIF 據(jù)報道每周皮下給藥三次(來自FDA批準的REBIF 的處方信息)。AVONEX (干擾素β la)是由生物技術(shù)工藝(其產(chǎn)生與人體中存在的相同的干擾素β)制造的藥物。AVONEX 據(jù)報道每周肌肉注射一次(來自FDA批準的AVONEX 的處方信息)。BETASERON (干擾素β lb)是由生物技術(shù)工藝(其補充與人體中存在的相同的干擾素β)制造的藥物。BETASERON .據(jù)報道每隔一天皮下注射(來自FDA批準的BETASERON 的處方信息)。COPAXONE (乙酸格拉默)是模擬髓磷脂堿蛋白的合成蛋白。盡管機制沒有完全了解，但這一藥物似乎通過作為髓磷脂誘餌起作用來阻止髓磷脂損害T細胞。COPAXONE .據(jù)報道每天皮下注射一次(來自FDA批準的COPAXONE 的處方信息)。TYSABRI (那他珠單抗)是實驗室生產(chǎn)的單克隆抗體。它被設(shè)計以阻礙來自血液的可能有害的免疫細胞從血流，穿過“血腦屏障”進入腦和脊髓的運動。TYSABRI 據(jù)報道每四周通過靜脈輸液給藥一次(來自FDA批準的TYSABRI 釣處方信息)。NOVANTRONE (米托蒽醌)屬于稱為抗腫瘤劑的普通組藥物。它已經(jīng)被用于治療某些形式的癌癥。它據(jù)報道通過抑制T細胞、B細胞和巨噬細胞(它們被推定會導(dǎo)致攻擊髓鞘)的活性在MS治療中起作用。(來自FDA批準的NOVANTRONE 的處方信息)。現(xiàn)有的對于組合 炎性疾病的治療通常不能提供靶向發(fā)病機制的多個要素的多要素方法。例如，對于自身免疫性疾病的許多治療包括靶向疾病的單一要素，通過阻止細胞增殖或通過抑制免疫響應(yīng)以阻止炎癥。因此，有對于提供通過靶向并調(diào)節(jié)PCK同工型活性來靶向炎性疾病發(fā)病機制的多個要素的有效治療的強烈需要。能夠選擇性抑制或活化特定PKC同工型的特異性靶向的治療是必需的，并且將提供靶向炎性疾病發(fā)病機制的多個要素的治療方法，同時保持低水平的副作用，例如當(dāng)局部施用時。因此，如本文所討論的，減少致炎性細胞因子的分泌和/或通過PKC同工型調(diào)節(jié)劑控制免疫調(diào)節(jié)劑的治療的開發(fā)將在緩和一般局部和系統(tǒng)的炎癥以及許多炎性和/或自身免疫性疾病上是有益的。

發(fā)明內(nèi)容
本公開內(nèi)容涉及治療通過向受治療者施用PKC的調(diào)節(jié)劑例如PKC ε或PKC η的抑制劑或PKC δ的活化劑來治療炎性疾病和病癥。因此，在一個方面中，本公開內(nèi)容提供治療受治療者體內(nèi)炎性疾病或病癥的方法。所述方法包括向受治療者施用PKC的抑制劑，由此治療受治療者體內(nèi)的炎性疾病或病癥。在示例性的實施方案中，所述抑制劑是選擇性地抑制PKC α、PKC ε或PKC η的多肽，例如SEQ ID NO:1-29 的多肽。在另一個方面中，本公開內(nèi)容提供治療受治療者體內(nèi)炎性疾病或病癥的方法。所述方法包括向受治療者使用PKCS的活化劑，由此治療受治療者體內(nèi)的炎性疾病或病癥。在不同的實施方案中，所述活化劑是選擇性地活化PKCS的多肽，例如SEQ ID Ν0:30-37的多肽。在另一個方面中，本公開內(nèi)容提供治療受治療者體內(nèi)瘙瘁癥的方法。所述方法包括向受治療者施用PKC的抑制劑，由此治療受治療者體內(nèi)的瘦庫癥。在不冋的實施方案中，所述抑制劑是PKC α、PKC ε或PKC η的抑制劑。在示例性的實施方案中，所述抑制劑是選擇性地抑制PKC α、PKC ε或PKC η的多肽，例如SEQ ID NO: 1-29的多肽。在另一個方面中，本公開內(nèi)容提供治療受治療者體內(nèi)瘙瘁癥的方法。所述方法包括向受治療者施用PKCS的活化劑，由此治療受治療者體內(nèi)的瘙瘁癥。在不同的實施方案中，所述活化劑是選擇性地活化PKCS的多肽，例如SEQ ID N0:30-37的多肽。在另一個方面中，本公開內(nèi)容提供治療受治療者體內(nèi)多發(fā)性硬化癥的方法。所述方法包括向受治療者施用PKC α、PKC η、PKC ε或PKC ε的抑制劑，由此治療受治療者體內(nèi)的多發(fā)性硬化癥。在示例性的實施方案中，所述抑制劑是選擇性地抑制PKCa或PKC η的多肽，例如SEQ ID NO:1-13和26-29的多肽。在不同的方面中，本公開內(nèi)容提供用于進行本公開內(nèi)容的方法的套件。在一個實施方案中，所述套件包括PKC的抑制劑，例如PKC a、PKC ε或PKC η的抑制劑或PKC δ的活化劑，以及施用所述抑制劑或活化劑的說明書。在另一個方面中，本公開內(nèi)容提供SEQ ID NO:3的分離的多肽或者其生理上可接受的鹽，其中所述多肽是N-豆蘧酰化的。示例性的實施方案中，所述多肽是SEQ ID Ν0:12。本公開內(nèi)容還提供了包含SEQ ID NO:3的多肽或其生理學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物，其中所述多肽是N-豆蘧?；?。在另一個方面中，本公開內(nèi)容提供包括SEQ ID NO:4的氨基酸序列的分離的多肽或其生理學(xué)上可接受的鹽。在示例性的實施方案中，所述分離的多肽是SEQ ID Ν0:10或SEQ ID NO:13 的多肽。本公開內(nèi)容還提供了包括分離的多肽(其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列)或其生理學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物。在另一個方面中，本公開內(nèi)容提供選自SEQ ID NO:30_33的分離的多肽或其生理學(xué)上可接受的鹽。在示例性的實 施方案中，所述分離的多肽是SEQ ID Ν0:34-37的多肽。本公開內(nèi)容還提供了包括分離的多肽(其包含SEQ ID NO:30_33的氨基酸序列)或其生理學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物。


圖1是描述同工型的PKC家族的不同成員的圖像表示。圖2是描述調(diào)節(jié)表征銀屑病的角質(zhì)化細胞結(jié)構(gòu)完整性的PKC α的抑制的一系列圖像表示。皮膚組織被石蠟包埋并且用蘇木精和曙紅(H&E) —般組織學(xué)染料或用于各種皮膚層的不同標記(包括用于基底層的角蛋白14(K14)、用于棘層的角蛋白I (Kl)，用于角質(zhì)化細胞遷移的角蛋白6 (K6)和用于角質(zhì)化細胞增殖的PCNA)染色。結(jié)果證實PKC α抑制之后皮膚性質(zhì)的正?；?左列是野生型(WT)，右列是PKC α敲除)。圖3是用IMQ治療后將在不同的敲除的小鼠中的起鱗的嚴重度與對照相比較的直方圖。圖4是顯示用MQ治療后與對照相比較敲除小鼠中起鱗的一系列圖像表示。圖5是顯示絲聚蛋白(Fil)、兜甲蛋白(Lor)和角蛋白I(Kl)的表達的一系列圖像表不。圖6A-B是體外和體內(nèi)評估角質(zhì)化細胞增殖的一系列圖像和圖解表不。圖6A是顯示PCNA表達的圖像表示。圖6B是將用H0/02/10處理的PCNA陽性細胞的百分比與對照比較的直方圖。圖7是顯示絲聚蛋白(Fil)、兜甲蛋白(Lor)、角蛋白I (Kl)、PCNA和角蛋白14 (K14)的表達的一系列圖像表不。
圖8是顯示不同肽PKCa抑制劑的角質(zhì)化細胞中蛋白表達數(shù)據(jù)的概述的圖解表
/Jn ο圖9是將用H0/02/10處理的皮膚樣品的破裂壓力與對照比較的直方圖。圖10是比較對受傷后4和9天后B57BL/6J小鼠體內(nèi)H0/02/10對皮膚傷口的抗炎效果的直方圖。圖11是比較用H0/02/10處理的脾細胞中的細胞因子分泌的直方圖。圖12是顯示在皮膚的血管中的基底角質(zhì)化細胞和上皮細胞中ICAM表達的一系列圖像表示。圖13是顯示在皮膚的血管中的基底角質(zhì)化細胞和上皮細胞中ICAM表達的一系列圖像表示。·圖14是比較在傷口邊緣顯示陽性ICAM-1染色的小鼠的百分比的直方圖。圖15是比較Iba-1陽性染色細胞的每個域中細胞數(shù)目的直方圖。圖16A-B是顯不角質(zhì)化細胞中MAC-2表達的一系列圖像和圖解表不。圖16A是顯示MAC-2表達的一系列染色。圖16B是將MAC-2陽性染色細胞的每個域中細胞數(shù)目與對照比較的直方圖，每mLl、10和100微克P KCa抑制劑(從左邊)。圖17A-D是比較在用H0/02/10處理的LPS活化的角質(zhì)化細胞中的細胞因子分泌的一系列直方圖。圖17A比較IL-6、IL-1 α，和GM-CSF的分泌。圖17B比較G-CSF的分泌。圖17C比較MIP-2的分泌。圖17D比較KC的分泌。圖18A-C是比較在用H0/02/10處理的LPS活化的巨噬細胞中的細胞因子分泌的一系列直方圖。圖18A比較G-CSF、KC和MIP-2的分泌。圖18B比較ILl a (直方圖對的左邊)和TNF α (直方圖對的右邊)的分泌。圖18C比較ILlii (直方圖對的左邊)和IL12 (直方圖對的右邊)的分泌。圖19是比較用肽PKC α抑制劑處理的LPS活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的
直方圖。圖20是比較用肽PKC α抑制劑處理的LPS活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的
直方圖。圖21A-B是比較用肽PKC α抑制劑處理的TNFa活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖21A比較ILIA的分泌。圖21B比較IL-6的分泌。圖22A-B是比較用肽PKC α抑制劑處理的TNFa活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖22A比較G-CSF的分泌。圖22B比較GM-CSF的分泌。圖23A-B是比較用肽PKC α抑制劑處理的TNF α活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖23A比較MIP-2的分泌。圖23B比較IP-10的分泌。圖24A-B是比較用肽PKCa抑制劑處理的IL-17A活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖24A比較IL-1A的分泌。圖24B比較IL-6的分泌。圖25A-B是比較用肽PKCa抑制劑處理的IL-17A活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖25A比較TNFa的分泌。圖25B比較IP-10的分泌。圖26A-B是比較用肽PKCa抑制劑處理的IL-17A活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖26A比較G-CSF的分泌。圖26B比較GM-CSF的分泌。圖27A-B是比較用肽PKCa抑制劑處理的IL-17A活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖27A比較KC的分泌。圖27B比較MIP-2的分泌。圖28是顯示用H0/02/10處理之后炎性階段期間T細胞向真皮和表皮的滲入的下調(diào)的一系列圖像和圖解表示。圖28A是使用抗⑶3抗體的一系列染色。圖28B是對⑶3陽性染色細胞的每個域中的細胞的數(shù)目比較的直方圖。圖29是顯示使用肽PKC α抑制劑MPDY-1的處理對不同細胞類型的效果的概述的圖解表示。圖30是顯示Η0/02/10對銀屑病相關(guān)通路的整體效果的概要的圖解表示。圖31Α-Β是顯示用Η0/02/10處理之后炎性階段期間嗜中性粒細胞向真皮和表皮的滲入的下調(diào)的一系列圖像和圖解表示。圖31Α是使用嗜中性粒細胞特異性抗體的染色。圖31Β是比較嗜中性粒細胞特定陽性染色細胞的每個域中的細胞的數(shù)目的直方圖。圖32是用Ser 176/180抗體染色的SDS PAGE的圖像表示。圖33是顯示隨處理的時間過程的EAE得分的圖解表示。圖34是顯示隨處理的時間過程的EAE得分的圖解表示。圖35是顯示隨處理的時間過程的EAE得分的圖解表示。圖36是顯示隨處理的時間過程的EAE得分的圖解表示。圖37是顯示隨處理的時間過程的EAE得分的圖解表示。

圖38是用于點刺試驗?zāi)Ｐ鸵栽u估MPDY-1對瘙瘁癥的效果的組胺的作用機制的圖像表示。圖39是顯示用組胺注射并且用或不用MPDY-1處理的受治療者的前臂的圖像表
/Jn ο圖40是顯示用組胺注射并且用或不用MPDY-1處理的受治療者的前臂的圖像表
/Jn ο圖41是顯示用組胺注射并且用或不用MPDY-1處理的受治療者的前臂的圖像表
/Jn ο圖42是顯示用組胺注射并且用或不用MPDY-1處理的受治療者的前臂的圖像表
/Jn ο圖43是在PKC α抑制劑MPDY-1和PKC δ活化劑DAP-1 (SEQ ID NO:34)的體外免疫測試中收集的數(shù)據(jù)的表(未顯示所有數(shù)據(jù))。圖44是在用TNF α和抑制劑處理的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的PKC δ活化劑DAP-1 (SEQ ID NO:34)的結(jié)果的列表概述。圖45是顯示比較用LPS或TNFa和不同PKC ε抑制劑處理的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖46是顯示比較用LPS或TNFa和不同PKC ε抑制劑處理的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖47是顯示比較用LPS或TNFa和不同PKC ε抑制劑處理的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖48是顯示比較用LPS或TNFa和不同PKC ε抑制劑處理的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖49是在用LPS或TNF α和抑制劑處理的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的各種PKCe抑制劑的結(jié)果的列表概述。圖 50 是比較用包括 MPDY-1 (SEQ ID NO:6) ,AffOT-1 (SEQ ID N0.7)、AIP_2(SEQ IDNO:8) ,AIP-1 (SEQ ID NO:9) PPDY(SEQ ID NO:10)的肽PKCa 抑制劑處理的 LPS 活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖 51 是比較用包括 MPDY-1 (SEQ ID NO:6)、AWOT-1 (SEQ ID N0.7)、AIP_2 (SEQ IDNO:8) ,AIP-1 (SEQ ID NO:9) PPDY(SEQ ID NO:10)的肽PKCa 抑制劑處理的 LPS 活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖 52 是比較用包括 MPDY-1 (SEQ ID NO:6) ,AffOT-1 (SEQ ID N0.7)、AIP_2(SEQ IDNO:8) ,AIP-1 (SEQ ID NO:9) PPDY(SEQ ID NO:10)的肽PKCa 抑制劑處理的 LPS 活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖 53 是比較用包括 MPDY-1 (SEQ ID NO:6) ,AffOT-1 (SEQ ID N0.7)、AIP_2(SEQ IDNO:8) ,AIP-1 (SEQ ID NO:9) PPDY(SEQ ID NO:10)的肽PKCa 抑制劑處理的 LPS 活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖 54 是比較用包括 MPDY-1 (SEQ ID NO:6)、AWOT-1 (SEQ ID N0.7)、AIP_2 (SEQ IDNO:8) ,AIP-1 (SEQ ID NO:9) PPDY(SEQ ID NO:10)的肽PKCa 抑制劑處理的 LPS 活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖 55 是比較用包括 MPDY-1 (SEQ ID NO:6) ,AffOT-1 (SEQ ID N0.7)、AIP_2(SEQ IDNO:8) ,AIP-1 (SEQ ID NO:9) PPDY (SEQ ID NO:10)的肽 PKCa 抑制劑處理的 TNF α 活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。

圖 56 是比較用包括 MPDY-1 (SEQ ID NO:6) ,AffOT-1 (SEQ ID N0.7)、AIP_2(SEQ IDNO:8) ,AIP-1 (SEQ ID NO:9) PPDY (SEQ ID NO:10)的肽 PKCa 抑制劑處理的 TNF α 活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖 57 是比較用包括 MPDY-1 (SEQ ID NO:6) ,AffOT-1 (SEQ ID N0.7)、AIP_2(SEQ IDNO:8) ,AIP-1 (SEQ ID NO:9) PPDY (SEQ ID NO:10)的肽 PKCa 抑制劑處理的 TNF α 活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖 58 是比較用包括 MPDY-1 (SEQ ID NO:6) ,AffOT-1 (SEQ ID N0.7)、AIP_2(SEQ IDNO:8) ,AIP-1 (SEQ ID NO:9) PPDY(SEQ ID NO:10)的肽PKCa 抑制劑處理的 LPS 活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖59是比較用肽PKC α抑制劑MPDY-1 (SEQ ID NO:6)處理的LPS活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖60是比較用肽PKC α抑制劑MPDY-1 (SEQ ID NO:6)處理的LPS活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖61是比較用肽PKC α抑制劑MPDY-1 (SEQ ID NO:6)處理的LPS活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖62是比較用肽PKC α抑制劑AW0T-1 (SEQ ID NO:7)處理的LPS活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖63 是比較用肽 PKC α 抑制劑 MPDY-1 (SEQ ID NO:6) ,AffOT-1 (SEQ ID NO:7)和AIP-2 (SEQ ID NO:8)處理的LPS活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖64 是比較用肽 PKC α 抑制劑 MPDY-1 (SEQ ID NO:6) ,AffOT-1 (SEQ ID NO:7)和AIP-2 (SEQ ID NO:8)處理的LPS活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖65 是比較用肽 PKC α 抑制劑 MPDY-1 (SEQ ID NO:6) ,AffOT-1 (SEQ ID NO:7)和AIP-2 (SEQ ID NO:8)處理的IL-17A活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖66 是比較用肽 PKC α 抑制劑 MPDY-1 (SEQ ID NO:6) ,AffOT-1 (SEQ ID NO:7)和AIP-2 (SEQ ID NO:8)處理的TNFa活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖67 是比較用肽 PKC α 抑制劑 MPDY-1 (SEQ ID NO:6) ,AffOT-1 (SEQ ID NO:7)和AIP-2 (SEQ ID NO:8)處理的TNFa活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖68 是比較用肽 PKCa 抑制劑 MPDY-1 (SEQ ID NO:6) ,AffOT-1 (SEQ ID NO:7)和AIP-2 (SEQ ID NO:8)處理的TNFa活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖69 是比較用肽 PKCa 抑制劑 MPDY-1 (SEQ ID NO:6)、AWOT-1 (SEQ ID NO:7)和AIP-2 (SEQ ID NO:8)處理的TNFa活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖70 是比較用肽 PKCa 抑制劑 MPDY-1 (SEQ ID NO:6)、AWOT-1 (SEQ ID NO:7)和AIP-2 (SEQ ID NO:8)處理的TNFa活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖71 是比較用肽 PKC α 抑制劑 MPDY-1 (SEQ ID NO:6)、AWOT-1 (SEQ ID NO:7)和AIP-2 (SEQ ID NO:8)處理的IL-17A活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖72 是比較用肽 PKCa 抑制劑 MPDY-1 (SEQ ID NO:6)、AWOT-1 (SEQ ID NO:7)和AIP-2 (SEQ ID NO:8)處理的IL-17A活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖73 是比較用肽 PKCa 抑制劑 MPDY-1 (SEQ ID NO:6)、AWOT-1 (SEQ ID NO:7)和AIP-2 (SEQ ID NO:8)處理的IL-17A活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖74 是比較用肽 PKCa 抑制劑 MPDY-1 (SEQ ID NO:6)、AWOT-1 (SEQ ID NO:7)和AIP-2 (SEQ ID NO:8)處理的IL-17A活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖75 是比較用肽 PKCa 抑制劑 MPDY-1 (SEQ ID NO:6)、AWOT-1 (SEQ ID NO:7)和AIP-2 (SEQ ID NO:8)處理的IL-17A活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖76 是比較用肽 PKCa 抑制劑 MPDY-1 (SEQ ID NO:6)、AWOT-1 (SEQ ID NO:7)和AIP-2 (SEQ ID NO:8)處理的IL-17A活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖77 是比較用肽 PKCa 抑制劑 MPDY-1 (SEQ ID NO:6)、AWOT-1 (SEQ ID NO:7)和AIP-2 (SEQ ID NO:8)處理的IL-17A活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖78 是比較用肽 PKC α 抑制劑 MPDY-1 (SEQ ID NO:6) ,AffOT-1 (SEQ ID NO:7)和AIP-2 (SEQ ID NO:8)處理的IL-17A活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖79 是比較用肽 PKCa 抑制劑 MPDY-1 (SEQ ID NO:6)和 PDY-1 (SEQ ID NO:13)處理的LPS活化的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的直方圖。圖80是用LPS、TNFa或IL-17A和抑制劑處理的角質(zhì)化細胞中細胞因子分泌的不同的PKCa抑制劑的結(jié)果的列表概述。
具體實施例方式本公開內(nèi)容是以PKC同工型的調(diào)節(jié)劑可作為對炎性疾病和病癥的有效治療施用的原始發(fā)現(xiàn)為基礎(chǔ)的。PKC同工型參與皮膚細胞以及免疫系統(tǒng)的許多組件的主要細胞過程使得它成為治療炎性病理的可能的靶。本文顯示的數(shù)據(jù)，證實PKC家族同工型調(diào)節(jié)與炎癥和炎性疾病有關(guān)的皮膚和免疫細胞中的活化過程。
應(yīng)當(dāng)理解的是這一公開內(nèi)容不限于所描述的特定的組合物、方法和實驗條件，像這樣的方法和條件可以變化。還應(yīng)當(dāng)理解的是本文所用的術(shù)語僅是為了描述特定實施方案的目的而并非旨在限制，本公開內(nèi)容的范圍將僅限于所附的權(quán)利要求。參照附圖和所附的描述可更好的理解根據(jù)本公開內(nèi)容的方法的原理和操作。如本說明書和所附的權(quán)利要求中所使用的，除非上下文明確指出，單數(shù)形式的名詞和“該”包括復(fù)數(shù)引用。因此，例如，對“該方法”的引用包括一種或多種方法和/或當(dāng)閱讀本公開內(nèi)容等時對于本領(lǐng)域中的那些技術(shù)人員來說顯而易見的本文描述的類型的步驟。除非另外說明，本文所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本公開內(nèi)容所屬的領(lǐng)域中一名技術(shù)人員通常理解的相同的含義。盡管與本文描述的那些相似或等同的任何方法和材料可被用于本公開內(nèi)容的實行或測試，但現(xiàn)在描述一些優(yōu)選的方法和材料。如本文所用的，術(shù)語“受治療者”是指哺乳動物受治療者。就此而論，預(yù)想哺乳動物的目中的任何動物的治療。這些動物包括但不限于馬、貓、犬、兔、小鼠、山羊、綿羊、非人類靈長類和人類。因此本公開內(nèi)容的方法預(yù)期在獸醫(yī)學(xué)應(yīng)用以及人類用途中使用。本文中受治療者的“治療”是指治療性治療和預(yù)防性(prophylactic)或預(yù)防性(preventative)措施兩者。需要治療的那些包括已經(jīng)患有炎性疾病或病癥的那些以及其中炎性疾病或病癥有待被預(yù)防的那些。因此，受治療者可以已經(jīng)被診斷患有炎性疾病或病癥或可以對炎性疾病或病癥易感染或敏感。如本文所用的，“炎性疾病或病癥”預(yù)期包括具有與PKC家族同工型調(diào)節(jié)有關(guān)的病因?qū)W的任何疾病和病癥。這些疾病包括但不限于瘙瘁，皮膚炎癥，銀屑病，多發(fā)性硬化癥，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，骨關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，橋本甲狀腺炎，重癥肌無力，糖尿病I或II型，哮喘，炎性肺損傷，炎性肝損傷，炎性腎小球損傷，特應(yīng)性皮炎，變應(yīng)性接觸性皮炎，刺激性接觸性皮炎，脂溢性皮炎，干燥綜合征，角結(jié)膜炎，葡萄膜炎，炎性腸病，克羅恩病，潰瘍性結(jié)腸炎，關(guān)節(jié)、皮膚或肌肉的炎性疾病，急性或慢性特發(fā)性炎性關(guān)節(jié)炎，肌炎，脫髓鞘疾病，慢性阻塞性肺疾病，間質(zhì)性肺疾病，間質(zhì)性腎炎和慢性活動性肝炎。炎性疾病或病癥的“癥狀”是受治療者經(jīng)歷的并且指示炎性疾病或病癥的的任何病態(tài)的現(xiàn)象或在結(jié)構(gòu)、功能或感覺上從正常的偏離。表達“有效的量”是指對預(yù)防、緩解或治療炎性疾病或病癥有效的PKC同工型的抑制劑或活化劑(例如SEQ ID N0:l-37的多肽)的量。這些有效的量通常將導(dǎo)致炎性疾病或病癥的征象、癥狀和/或其他指示的改善。例如，在皮膚炎癥中，有效的量導(dǎo)致腫脹和/或炎癥的減少和/或發(fā)紅的清除。對于瘦庫癥，有效的量可導(dǎo)致發(fā)紅和/或瘦庫的清除。對于MS，有效地量可導(dǎo)致減少復(fù)發(fā)率、預(yù)防殘疾、減少腦MRI損傷的數(shù)目和/或體積，改善25步定時行走、延長疾病進行的時間等等。如本文所用的，本文所用的術(shù)語“PKC同工型”涵蓋所有的PKC同工型，包括PKCa、PKC β、PKC δ、PKC ε、PKC η、PKCC ζ、PKC Y、PKC θ 和 PKC λ。短語“調(diào)節(jié)PKC同工型的表達和/或活性”涉及增加或減少PKC同工型的表達和/或活性。表達的增加導(dǎo)致PKC同工型的產(chǎn)生增加。本文中術(shù)語“活化劑”被用 于描述增加PKC同工型的表達和/或活性的分子。本文中術(shù)語“抑制劑”被用于描述抑制PKC同工型的表達和/或活性的分子。除了別的之外，磷?；D(zhuǎn)移區(qū)、假底物結(jié)構(gòu)域、佛波酯結(jié)合序列和磷酸化位點可以是用于調(diào)節(jié)同工酶特異性PKC活性的靶。PKC同工型的“假底物區(qū)”或自體抑制結(jié)構(gòu)域本文中被定義為實質(zhì)上不具有可磷酸化的殘基的激酶的底物的共有序列。假底物結(jié)構(gòu)域位于調(diào)節(jié)區(qū)，與底物識別基序十分相似，其封閉識別位點并且防止磷酸化。因此PKC同工型的抑制性肽(例如本公開內(nèi)容的多肽)通過用丙氨酸(A)替代絲氨酸(S)或蘇氨酸(T)的可磷酸化的殘基來獲得。PKCS是已知的具有能夠使同工型在C2結(jié)構(gòu)域、PKC δ的保守結(jié)構(gòu)域2上活化的另外的結(jié)合位點的僅有的PKC同工型。PKC是調(diào)節(jié)角質(zhì)化細胞增殖、遷移和分化的主要的信號通路。已知許多PKC同工型在皮膚組織中表達并且它們的表達/活性似乎在細胞增殖和/或細胞遷移和/或細胞分化中起作用。然而，特異性地調(diào)節(jié)它們的表達和活性以實行炎性疾病的治療是之前未知的并且在本公開內(nèi)容中被證實。總之，本文顯示的結(jié)果證實調(diào)節(jié)不同PKC同工型的表達和/或活性在炎癥和炎性疾病的治療中是有效的。因此，在一個方面中，本公開內(nèi)容提供治療受治療者體內(nèi)炎性疾病或病癥的方法。所述方法包括向受治療者施用PKC的抑制劑，由此治療受治療者體內(nèi)的炎性疾病或病癥。在示例性的實施方案中，所述抑制劑是選擇性地抑制PKC α、PKC ε或PKC η的多肽，例如SEQ ID NO:1-29 的多肽。如實施例中所公開的，PKC同工型抑制劑的施用已經(jīng)顯示在各種不同的皮膚細胞類型(不僅僅是皮膚細胞，即在其他 組織中存在并且有活性的巨噬細胞)中減少致炎性細胞因子、趨化因子和Thl細胞因子的分泌。此外，PKC同工型的施用減少活化的因子(例如角質(zhì)化細胞和內(nèi)皮細胞上的ICAM-1和巨噬細胞上的mac-2)的表達。此外，PKCa抑制劑已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在皮膚炎癥的治療中有效并且使銀屑病的炎性皮膚模型中的炎性癥狀減弱。如實施例中所進一步討論的，PCK同工型的抑制劑的作用的機制已經(jīng)被闡明，顯示它們作為對炎性疾病和病癥的有效治療的用途。例如，PCK同工型的肽抑制劑已經(jīng)顯示:1)通過減少終末分化使表皮分化標記表達正?；?；2)減弱不正常的過度增殖；3)調(diào)節(jié)皮膚結(jié)構(gòu)并增加皮膚強度；和/或4)如所概述的，通過在炎性過程的不同步驟中差別地影響不同細胞類型的補充和活化下調(diào)炎癥，例如，圖30中。同樣，如實施例中所公開的，PKCS的活化劑同樣已經(jīng)顯示減少各種不同皮膚細胞類型中致炎性細胞因子的分泌。因此，在另一個方面中，本公開內(nèi)容通過向受治療者施用PKCδ的活化劑，由此治療受治療者體內(nèi)炎性疾病或病癥，提供了治療受治療者體內(nèi)炎性疾病或病癥的方法。在不同的實施方案中，活化劑是選擇性地活化PKCS的多肽，例如SEQ IDNO: 30-37的多肽。此外，如實施例中所公開的，PKC α抑制劑和PKC η抑制劑的施用已經(jīng)發(fā)現(xiàn)減弱MS的癥狀。同樣地，在另一個方面中，本公開內(nèi)容提供治療受治療者體內(nèi)多發(fā)性硬化癥的方法。所述方法包括向受治療者施用PKCa或PKC η的抑制劑，由此治療受治療者體內(nèi)的多發(fā)性硬化癥。此外，PKC同工型抑制劑的施用已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在瘙癢癥的治療中有效。同樣地，在另一個方面中，本公開內(nèi)容提供治療受治療者體內(nèi)瘙瘁癥的方法。所述方法包括向受治療者施用PKC的抑制劑，由此治療受治療者體內(nèi)的瘙瘁癥。
實施例和附圖顯示表明PKC δ的活化劑抑制主要致炎性細胞因子(例如IL-1，IL-6和TNFa )分泌的能力的數(shù)據(jù)。多種PKC同工型抑制劑顯示相似的數(shù)據(jù)，包括PKC a，PKC ε和PKC η。如實施例中所示，包含本公開內(nèi)容的PKC抑制劑和活性劑的制劑，已經(jīng)顯示抑制主要致炎性細胞因子的分泌。就瘙癢癥而言，不受特定理論的限制，人們相信，減少致炎性劑的水平防止了附近血管中內(nèi)皮細胞的活化，并因此向銀屑病斑塊補充嗜中性粒細胞、巨噬細胞和T細胞。而且，THl和Thl7細胞顯示通過特定細胞因子的分泌而與銀屑病的發(fā)病機制有關(guān)聯(lián)，其似乎分別 增強炎癥或促使角質(zhì)化細胞過量增殖。上文提及的促炎性細胞因子對于這些Thl7細胞的發(fā)育(Mangan等人(2006)Nature 441:231-234 ；Bettelli等人(2006)Nature 441 =235-238)和Thl細胞活性來說是必需的。經(jīng)由PKC抑制劑和活化劑降低它們的分泌顯示它們在炎性病癥和銀屑病的有效治療中的用途。在不同的實施方案中，PKC同工型的抑制劑是PKC的假底物區(qū)的抑制劑并且是多肽，而PKC同工型的活化劑同樣是多肽。術(shù)語“多肽”、“肽”或“蛋白”在本文可交換使用，以指明一系列彼此通過相鄰殘基的α氨基和羧基基團之間的肽鍵連接的線性氨基酸殘基。在不同的實施方案中，可使用的肽PKC活化劑和抑制劑的實例包括但不限于如表I中所示的SEQ ID NO:1-5、14-19、26、27和30-33的肽或其生理學(xué)上可接受的鹽，以及顯示具有特定的修飾或末端的保護基團的表I的SEQ ID NO:6-13、20-25、28、29、34-37的肽。表1:PKC同工型抑制劑和活化劑肽
權(quán)利要求
1.種用于治療受治療者體內(nèi)炎性疾病或病癥的套件，所述套件包括: a)PKC a、PKC ε或PKC η的抑制劑；和 b)用于向所述受治療者施用所述PKC抑制劑的說明書。
2.據(jù)權(quán)利要求1所述的套件，其中所述抑制劑是多肽。
3.據(jù)權(quán)利要求2所述的套件，其中所述多肽長度上在5和20個氨基酸之間。
4.據(jù)權(quán)利要求3所述的套件，其中所述說明書指明所述多肽被腸道外施用、皮下施用、靜脈內(nèi)施用、局部施用、口服施用、經(jīng)粘膜施用、經(jīng)直腸施用、經(jīng)肺施用、經(jīng)鼻施用或經(jīng)耳施用。
5.據(jù)權(quán)利要求3所述的套件，其中所述說明書指明所述多肽被每天、每周、每兩周或每月施用。
6.據(jù)權(quán)利要求1所述的套件，其中所述炎性疾病或病癥選自由銀屑病，多發(fā)性硬化癥，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，骨關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，橋本甲狀腺炎，重癥肌無力，糖尿病I或II型，哮喘，炎性肺損傷，炎性肝損傷，炎性腎小球損傷，特應(yīng)性皮炎，變應(yīng)性接觸性皮炎，刺激性接觸性皮炎，脂溢性皮炎，干燥綜合征，角結(jié)膜炎，葡萄膜炎，炎性腸病，克羅恩病，潰瘍性結(jié)腸炎，關(guān)節(jié)、皮膚或肌肉的炎性疾病，急性或慢性特發(fā)性炎性關(guān)節(jié)炎，肌炎，脫髓鞘疾病，慢性阻塞性肺疾病，間質(zhì)性肺疾病，間質(zhì)性腎炎和慢性活動性肝炎組成的組。
7.KC α , PKC ε或PKC η抑制劑在用于治療炎性疾病或病癥的藥物的制造中的用途。
8.據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其中所述抑制劑是多肽。
9.據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其中所述多肽長度上在5和20個氨基酸之間。
10.據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中所述多肽被腸道外施用、皮下施用、靜脈內(nèi)施用、局部施用、口服施用、經(jīng)粘膜施用、經(jīng)直腸施用、經(jīng)肺施用、經(jīng)鼻施用或經(jīng)耳施用。
11.據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中所述多肽被以約0.1至約10000微克每千克，優(yōu)選地約0.1至約1000微克每千克以及更優(yōu)選地約1.0至約50微克每千克的劑量施用。
12.據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中所述多肽被每天、每周、每兩周或每月施用。
13.據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其中所述炎性疾病或病癥選自由銀屑病，多發(fā)性硬化癥，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，骨關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，橋本甲狀腺炎，重癥肌無力，糖尿病I或II型，哮喘，炎性肺損傷，炎性肝損傷，炎性腎小球損傷，特應(yīng)性皮炎，變應(yīng)性接觸性皮炎，刺激性接觸性皮炎，脂溢性皮炎，干燥綜合征，角結(jié)膜炎，葡萄膜炎，炎性腸病，克羅恩病，潰瘍性結(jié)腸炎，關(guān)節(jié)、皮膚或肌肉的炎性疾病，急性或慢性特發(fā)性炎性關(guān)節(jié)炎，肌炎，脫髓鞘疾病，慢性阻塞性肺疾病，間質(zhì)性肺疾病，間質(zhì)性腎炎和慢性活動性肝炎組成的組。
14.種用于治療受治療者體內(nèi)炎性疾病或病癥的套件,所述套件包括: a)PKCS的活化劑；和 b)用于向所述受治療者施用所述PKCS的活化劑的說明書。
15.據(jù)權(quán)利要求14所述的套件，其中所述說明書指明所述多肽被腸道外施用、皮下施用、靜脈內(nèi)施用、局部施用、口服施用、經(jīng)粘膜施用、經(jīng)直腸施用、經(jīng)肺施用、經(jīng)鼻施用或經(jīng)耳施用。
16.KC δ的活化劑在用于治療炎性疾病或病癥的藥物的制造中的用途。
17.據(jù)權(quán)利要求16所述的用途，其中所述多肽被腸道外施用、皮下施用、靜脈內(nèi)施用、局部施用、口服施用、經(jīng)粘膜施用、經(jīng)直腸施用、經(jīng)肺施用、經(jīng)鼻施用或經(jīng)耳施用。
18.據(jù)權(quán)利要求16所述的用途，其中所述多肽被以約0.1至約10000微克每千克，優(yōu)選地約0.1至約1000微克每千克以及更優(yōu)選地約1.0至約50微克每千克的劑量施用。
19.據(jù)權(quán) 利要求16所述的用途，其中所述炎性疾病或病癥選自由銀屑病，多發(fā)性硬化癥，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，骨關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，橋本甲狀腺炎，重癥肌無力，糖尿病I或II型，哮喘，炎性肺損傷，炎性肝損傷，炎性腎小球損傷，特應(yīng)性皮炎，變應(yīng)性接觸性皮炎，刺激性接觸性皮炎，脂溢性皮炎，干燥綜合征，角結(jié)膜炎，葡萄膜炎，炎性腸病，克羅恩病，潰瘍性結(jié)腸炎，關(guān)節(jié)、皮膚或肌肉的炎性疾病，急性或慢性特發(fā)性炎性關(guān)節(jié)炎，肌炎，脫髓鞘疾病，慢性阻塞性肺疾病，間質(zhì)性肺疾病，間質(zhì)性腎炎和慢性活動性肝炎組成的組。
20.種用于治療受治療者體內(nèi)瘙癢的套件，所述套件包括: a)PKC的抑制劑；和 b)用于向所述受治療者施用所述PKC抑制劑的說明書。
21.據(jù)權(quán)利要求20所述的套件，其中所述抑制劑是PKCa、PKCe或PKCη的抑制劑。
22.據(jù)權(quán)利要求21所述的套件，其中所述抑制劑是多肽。
23.據(jù)權(quán)利要求3或22所述的套件，其中所述多肽包含選自SEQID NO:1_5、14-19、26、27的氨基酸序列及其生理學(xué)上可接受的鹽，或者所述多肽選自SEQ ID NO:6_13、20、21、28 和 29。
24.據(jù)權(quán)利要求23所述的套件，其中所述多肽包括N端修飾、C端修飾或其組合，優(yōu)選地，所述多肽是N-?；?。并且更優(yōu)選地，所述多肽是N-豆蘧?；幕騈-棕櫚?；?。
25.據(jù)權(quán)利要求20所述的套件，其中所述說明書指明所述多肽被口服施用。
26.據(jù)權(quán)利要求3或20所述的套件，其中所述說明書指明所述多肽被以約0.1至約10000微克每千克的劑量施用。
27.KC抑制劑在用于治療瘙癢的藥物的制造中的用途。
28.據(jù)權(quán)利要求27所述的用途，其中所述抑制劑是PKCa、PKCe或PKCη的抑制劑。
29.據(jù)權(quán)利要求28所述的用途，其中所述抑制劑是多肽。
30.據(jù)權(quán)利要求9或29所述的用途，其中所述多肽包含選自SEQID NO:1_5、14-19、26、27的氨基酸序列及其生理學(xué)上可接受的鹽，或者所述多肽選自SEQ ID NO:6_13、20、21、28 和 29。
31.據(jù)權(quán)利要求30所述的用途，其中所述多肽包括N端修飾、C端修飾或其組合，優(yōu)選地，所述多肽是N-酰化的。并且更優(yōu)選地，所述多肽是N-豆蘧?；幕騈-棕櫚酰化的。
32.據(jù)權(quán)利要求29所述的用途，其中所述說明書指明所述多肽被口服施用。
33.據(jù)權(quán)利要29所述的套件，其中所述說明書指明所述多肽被以約0.1至約10000微克每千克的劑量施用。
34.種用于治療受治療者體內(nèi)瘙癢的套件，所述套件包括: a)PKCS的活化劑；和 b)用于向所述受治療者施用所述PKCS的活化劑的說明書。
35.據(jù)權(quán)利要求14或34所述的套件，其中所述抑制劑是多肽。
36.據(jù)權(quán)利要求35所述的套件，其中所述多肽包含選自SEQID NO:33_30的氨基酸序列及其生理學(xué)上可接受的鹽，或者所述多肽選自SEQ ID NO:34-37。
37.據(jù)權(quán)利要求36所述的套件，其中所述多肽包括N端修飾、C端修飾或其組合，優(yōu)選地，所述多肽是N?；?。并且更優(yōu)選地，所述多肽是N豆蘧?；幕騈棕櫚酰化的。
38.據(jù)權(quán)利要求35所述的套件，其中所述說明書指明所述多肽被口服施用。
39.據(jù)權(quán)利要求35所述的套件，其中所述說明書指明所述多肽被以約0.1至約10000微克每千克的劑量施用。
40.據(jù)權(quán)利要求35所述的套件，其中所述說明書指明所述多肽被每天、每周、每兩周或每月施用。
41.KC δ的活化劑在用于治療瘙癢的藥物的制造中的用途。
42.據(jù)權(quán)利要求16或41所述的用途，其中所述抑制劑是多肽。
43.據(jù)權(quán)利要求42所述的用途，其中所述多肽包含選自SEQID NO:33_30的氨基酸序列及其生理學(xué)上可接受的鹽，或者所述多肽選自SEQ ID ΝΟ:34-37。
44.據(jù)權(quán)利要求43所述的用途，其中所述多肽包括N端修飾、C端修飾或其組合，優(yōu)選地，所述多肽是N-酰化的。并且更優(yōu)選地，所述多肽是N-豆蘧?；幕騈-棕櫚酰化的。
45.據(jù)權(quán)利要求42所述的用途，其中所述多肽被口服施用。
46.據(jù)權(quán)利要42所述的用途，其中所述多肽被以約0.1至約10000微克每千克的劑量施用。
47.據(jù)權(quán)利要求42所述的用途，其中所述多肽被每天、每周、每兩周或每月施用。
48.種由SEQ ID NO:3組成的分離的多肽或者其生理上可接受的鹽，其中所述多肽是N-豆蘧酰化的。
49.據(jù)權(quán)利要求48所述的多肽，其中所述多肽是SEQID NO:12。
50.種藥物組合物，所述藥物組合包含: a)由SEQID NO:3組成的多肽或其生理學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物，其中所述多肽是N-豆蘧?；?；和 b)藥學(xué)上可接受的載體。
51.據(jù)權(quán)利要求50所述的藥物組合物，其中，所述多肽是SEQID NO:12。
52.SEQID NO:3組成的多肽或其生理學(xué)上可接受的鹽在用于治療炎性疾病或病癥的藥物的制造中的用途，其中所述多肽是N-豆蘧酰化的。
53.據(jù)權(quán)利要求52所述的用途，其中所述多肽是SEQID NO:12。
54.種包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的分離的多肽或者其生理上可接受的鹽。
55.據(jù)權(quán)利要求54所述的多肽，其中所述多肽是N-豆蘧?；?。
56.據(jù)權(quán)利要求54所述的多肽，其中所述多肽是SEQID N0:10或13。
57.種藥物組合物，所述藥物組合包含: a)包含SEQID NO:4的氨基酸序列的多肽或者其生理上可接受的鹽；和 b)藥學(xué)上可接受的載體。
58.據(jù)權(quán)利要求57所述的藥物組合物，其中所述多肽是N-豆蘧酰化的。
59.據(jù)權(quán)利要求57所述的藥物組合物，其中所述多肽是SEQID N0:10或13。
60.含SEQID NO:4的氨基酸序列的多肽或者其生理上可接受的鹽在用于治療炎性疾病或病癥的藥物的制造中的用途。
61.據(jù)權(quán)利要求60所述的用途，其中所述多肽是N-豆蘧?；摹?br> 62.據(jù)權(quán)利要求60所述的用途，其中所述多肽是SEQID N0:10或13。
63.種由選自SEQ ID NO:30-33的氨基酸序列組成的分離的多肽或者其生理上可接受的鹽。
64.據(jù)權(quán)利要求63所述的多肽，其中所述多肽是SEQID NO:34-37。
65.種藥物組合物，所述藥物組合包含: a)由選自SEQID NO:30-33的氨基酸序列組成的多肽或者其生理上可接受的鹽；和 b)藥學(xué)上可接受的載體。
66.據(jù)權(quán)利要求65所述的藥物組合物，其中，所述多肽是SEQID NO:34-37。
67.選自SEQID NO:30-33的氨基酸序列組成的多肽或者其生理上可接受的鹽在用于治療炎性疾病或病癥的藥物的制造中的用途。
68.據(jù)權(quán)利要求67所述的用途，其中所述多肽是SEQID NO:34-37。
69.種用于治療受治療者體內(nèi)多發(fā)性硬化癥的套件，所述套件包括: a)PKC a、PKC ε或PKC η的抑制劑；和 b)用于向所述受治療者施用所述抑制劑的說明書。
70.據(jù)權(quán)利要求69所述的套件，其中所述抑制劑是多肽。
71.據(jù)權(quán)利要求70所述的套件，其中所述多肽由選自SEQID NO:2,SEQID NO:26的氨基酸序列及其生理學(xué)上可接受的鹽組成，或者所述多肽選自SEQID NO:6或SEQ ID NO:28，其中所述多肽是N-豆蘧?；摹?br> 72.據(jù)權(quán)利要求70所述的套件，其中所述說明書指明所述多肽被靜脈內(nèi)、皮下或腹膜內(nèi)施用。
73.據(jù)權(quán)利要求70所述的套件，其中所述說明書指明所述多肽被以約0.001至約50微克每千克的劑量施用。
74.據(jù)權(quán)利要求70所述的套件，其中所述說明書指明所述多肽被每天、每周、每兩周或每月施用。
75.據(jù)權(quán)利要求70所述的套件，其中對所述受治療者的治療導(dǎo)致減少數(shù)目的對比增加的病灶。
76.據(jù)權(quán)利要求 70所述的套件，其中所述受治療者患有復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化癥或繼發(fā)進展型多發(fā)性硬化癥。
77.KCa ,PKCe或PKC η的抑制劑在用于治療多發(fā)性硬化癥的藥物的制造中的用途。
78.據(jù)權(quán)利要求77所述的用途，其中所述抑制劑是多肽。
79.據(jù)權(quán)利要求78所述的用途，其中所述多肽由選自SEQID NO:2、SEQ ID NO:26的氨基酸序列及其生理學(xué)上可接受的鹽組成，或者所述多肽選自SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:28，其中所述多肽是N-豆蘧?；?。
80.據(jù)權(quán)利要求78所述的用途，其中所述所述多肽被靜脈內(nèi)、皮下或腹膜內(nèi)施用。
81.據(jù)權(quán)利要求78所述的用途，其中所述所述多肽被以約0.001至約50微克每千克的劑量施用。
82.據(jù)權(quán)利要求78所述的用途，其中所述多肽被每天、每周、每兩周或每月施用。
83.據(jù)權(quán)利要求77所述的用途，其中對所述受治療者的治療導(dǎo)致減少數(shù)目的對比增加的病灶。
84.據(jù)權(quán)利要求77所述的用途，其中所述受治療者患有復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化癥或繼發(fā)進展型多 發(fā)性硬化癥。
全文摘要
本公開內(nèi)容提供使用PKC同工型調(diào)節(jié)劑治療炎性疾病和病癥的組合物和套件及其用途。
文檔編號A61P19/02GK103083669SQ201210311130
公開日2013年5月8日 申請日期2011年1月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月11日
發(fā)明者利奧拉·布賴曼-維克斯曼, 塔瑪·滕寧鮑姆, 尤瓦爾·薩吉夫, 馬里納·加爾茨貝因, 伊弗雷姆·布雷納, 摩西·本-哈莫, 利亞特·哈默 申請人:希爾洛有限公司