專(zhuān)利名稱(chēng)：蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)在治療直腸癌藥品中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及ー種蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)在治療直腸癌藥品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
直腸癌是由直腸組織細(xì)胞發(fā)生惡變而形成，其發(fā)病與社會(huì)環(huán)境、飲食習(xí)慣、遺傳因素有關(guān)，是消化道常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。CN1850183 (200610041831. 9)公開(kāi)了ー種治療直腸癌的化療藥物，由5-氟尿嘧
啶、液體石蠟、凡士林、羊毛脂、司盤(pán)、吐溫、中藥液組成。ZL200610104558.X公開(kāi)了ー種治療直腸癌的中藥組合物，由人參、當(dāng)歸、靈芝、松·
香、川芎、苦參、牛黃、穿山甲等16種中草藥組成。CN101584824 (200810100694. O)公開(kāi)了ー種治療直腸癌的中藥，由八月札、木香、紅藤、白花蛇舌草、苦參、紫丹參、烏梅、風(fēng)尾草、半枝蓮等16種中草藥組成。ZL201010140829. 3公開(kāi)了ー種治療直腸癌的中藥組合物及其制備方法，由茯苓、山豆根、天花粉、黃苓、苦參、紫草、金銀花、半邊蓮、莪術(shù)、元胡等25種中草藥組成。CN1568681公開(kāi)了采用中藥培育蟾蜍蛆蟲(chóng)的方法，能夠批量エ業(yè)化生產(chǎn)蟾蜍蛆蟲(chóng)。原則上前述的幾種中藥制劑都可以用于治療直腸癌藥品的制備，但是，由于前述的幾個(gè)藥方中藥物繁多，每種中草藥由于種植地域、氣候、品種、采收時(shí)間、炮制及加工方法的差異，在エ業(yè)化生產(chǎn)中難于保證產(chǎn)品的一致性和質(zhì)量控制。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有治療直腸癌藥品存在的問(wèn)題，本發(fā)明將蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)與適宜的藥劑輔料結(jié)合使用，提供一種蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)在治療直腸癌藥品中的新用途。本發(fā)明的治療直腸癌藥品按照下述步驟制備
一、提取蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)
(1)將IOOOg干燥蟾蜍蛆蟲(chóng)放入常溫膨化裝置，充入I IOkg氮?dú)?、O.I O. 5kg氨氣，加壓至O. 2 I. OMpa,時(shí)間10 30min，然后瞬間釋放裝置內(nèi)氣體，蟾蜍蛆蟲(chóng)被膨化粉碎；
(2)膨化粉碎物料加入到膨脹溶劑體系提取裝置中，充入200 2000gニ氧化碳、100 500gこ醇和100 200g ニ甲基甲酰胺,加壓至I 8Mpa,溫度10 25°C,時(shí)間10 60min,然后釋放壓カ至常壓，收集混合液；
(3)混合液用分離機(jī)以1500 5000r/min分離,收集液相；
(4)收集液相用膜孔徑O.5 50 μ m微濾機(jī)過(guò)濾，得過(guò)濾液；
(5)將過(guò)濾液注入到saphacryls-lOOHR的凝膠過(guò)濾柱中在pH=3 12條件下過(guò)濾；
(6)濾液溶解于由氯仿-こ醇-甲醇-水按照4:3:3:2的體積比組成的溶劑體系中，泵入超聲駐波液相制備色譜中，超聲駐波功率O. 2 5. 0KW、頻率500 1000kHz、流速50 500mL/min、紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)280nm，分離純化出蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)；(7)純化蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)用真空冷凍干燥機(jī)在真空度200 800Kpa、溫度-50 30°C、時(shí)間6 24h的條件下,干燥至含水分5 8%的凍干蛋白質(zhì)成品；
ニ、混合按照配比混合，加工成各種劑型的治療直腸癌藥品。蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)是從蟾蜍蛆蟲(chóng)中提取分離純化的生物活性蛋白質(zhì)，分子結(jié)構(gòu)清晰，藥用效價(jià)比較高，特異性強(qiáng)，毒性反應(yīng)相對(duì)較弱，在體內(nèi)不易產(chǎn)生蓄積，與體內(nèi)受體的親和性具有分子的認(rèn)知性，而且?guī)缀鯖](méi)有異化生物代謝毒性。本發(fā)明針對(duì)直腸癌特殊癥狀而設(shè)計(jì)，提取純化的一種蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)含量達(dá)96. 5 98. 1%，再用此純度的蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)制備成各種劑型的藥品，該藥品成分明確，一致性好，質(zhì)量可控，對(duì)直腸癌病癥療效好并且使用方便。


圖I為膨脹溶劑體系提取裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施例方式具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式按照下述方法制備治療直腸癌的藥物
(1)將IOOOg干燥蟾蜍蛆蟲(chóng)放入常溫膨化裝置(ZL200520108339.X)，充入I IOkg氮?dú)?、O. I O. 5kg氨氣，加壓至O. 2 I. OMpa,時(shí)間10 30min,然后瞬間釋放裝置內(nèi)氣體，蟾蜍蛆蟲(chóng)被膨化粉碎；
(2)膨化粉碎物料加入到膨脹溶劑體系提取裝置中，充入200 2000gニ氧化碳、100 500gこ醇和100 200g ニ甲基甲酰胺,加壓至I 8Mpa,溫度10 25°C,時(shí)間10 60min,然后釋放壓カ至常壓，收集混合液；
(3)混合液用分離機(jī)以1500 5000r/min分離,收集液相；
(4)收集液相用膜孔徑O.5 50 μ m微濾機(jī)過(guò)濾，得過(guò)濾液；
(5)將過(guò)濾液注入到saphacryls-lOOHR的凝膠過(guò)濾柱中在pH=3 12條件下過(guò)濾；
(6)濾液溶解于由氯仿-こ醇-甲醇-水按照4:3:3:2的體積比組成的溶劑體系中，泵入超聲駐波液相制備色譜(ZL200920274485. 8)中，超聲駐波功率O. 2 5. 0KW、頻率500 1000kHz、流速50 500mL/min、紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)280nm,分離純化出蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)；
(7)純化蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)用真空冷凍干燥機(jī)在真空度200 800Kpa、溫度-50 30°C、時(shí)間6 24h的條件下,干燥至含水分5 8%的凍干蛋白質(zhì)成品；
(8)取上述凍干蛋白質(zhì)10 15g、卵磷脂0.I I. 5g、液體石臘20 50g,攪拌均勻，研勻成糊狀，另取烏桕脂100 200g于水浴上加熱至45 55°C熔化后冷卻至35 38°C，倒入已研勻成糊狀的蛋白質(zhì)與卵磷脂及液體石蠟混合物中迅速研均勻，趁熱澆注于栓劑模具中，冷凝到10 20°C，從栓劑模具中取出成型蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)栓劑，包裝成品。如圖I所示，本實(shí)施方式中所述膨脹溶劑體系提取裝置由球形膨脹溶劑體系提取器I、原料罐2、固液分離器3、氣固分離器4、成品罐5、外源ニ氧化碳瓶6、ニ氧化碳儲(chǔ)罐7、ニ氧化碳循環(huán)壓カ泵8和溶劑罐9組成，球形膨脹溶劑體系提取器I通過(guò)管線分別與原料罐2、固液分離器3、ニ氧化碳循環(huán)壓カ泵8及溶劑罐9相連接，固液分離器3與氣固分離器4相連接，氣固分離器4通過(guò)管線分別與成品罐5及ニ氧化碳儲(chǔ)罐7相連接，ニ氧化碳儲(chǔ)罐7通過(guò)管線分別與外源ニ氧化碳瓶6及ニ氧化碳循環(huán)壓カ泵8連接。
具體實(shí)施方式
ニ 本實(shí)施方式按照下述方法制備治療直腸癌的藥物
(1)將IOOOg鮮蟾蜍蛆蟲(chóng)用打漿機(jī)在500 1000r/min打漿10 30min，成為漿狀物；
(2)漿狀物中加入含O.01 O. 5%碳酸鈉水溶液5 20L，攪拌均勻，在常溫下放置30 120min ；
(3)用離心機(jī)在1500 5000r/min條件下離心10 30min，收集液相；
(4)用膜孔徑O.2 5. O μ m微濾機(jī)過(guò)濾上述液相，收集過(guò)濾液；
(5)將濾液注入到saphacryls-lOOHR凝膠過(guò)濾柱中在pH=3 12過(guò)濾得過(guò)濾液；
(6)過(guò)濾液溶解于由氯仿-こ醇-甲醇-水按照4::3:32的體積比組成的溶劑體系中，泵入超聲駐波液相制備色譜中，超聲駐波功率O. 2 5. OKff,頻率500 IOOOkHz，流量 50 500mL/min,紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)280nm,連續(xù)純化分離蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)；
(7)純化蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)用真空冷凍干燥機(jī)在真空度50 500Kpa，溫度-30 30°C，時(shí)間6 24h條件下干燥至含水分5 8%成品；
(8)將IOOg卵磷脂和30 80g膽固醇混合后加入到500 IOOOmlこ醚中成I液，10 50g蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)加入到3 10mmol/L磷酸鹽緩沖溶液中攪拌溶解制成II液，將I液與II液混合后用超聲波在功率0. I 0. 5KW，頻率300 500KHz，常溫下超聲振蕩10 30min,然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中加熱50 80°C,真空度100 500Kpa,轉(zhuǎn)速30 120r/min蒸發(fā)至呈現(xiàn)凝膠狀，取下蒸發(fā)燒瓶放在旋轉(zhuǎn)振蕩器上以30 200r/min振蕩使凝膠轉(zhuǎn)相后，再將蒸發(fā)燒瓶放入水浴中加熱60 80°C，去凈こ醚，再將物料放入超速離心機(jī)內(nèi)在15000 50000r/min超速離心30 60min,分離除去未包覆的蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì),沉淀物用I 2L去離子水洗滌2 3次，離心機(jī)在150 750r/min脫去水，即得蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)脂質(zhì)體,收集包裝即得。直腸癌疾病分期
O期癌局限于粘膜層，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；
I期腫瘤局限于固有肌層以?xún)?nèi)，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；
II期腫瘤侵潤(rùn)超過(guò)固有肌層，但無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；
III期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；
IV期遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(肝、肺等)或腹膜轉(zhuǎn)移。治療方法
患者需嚴(yán)格限制飲酒。按體重70kg計(jì)，每天肛門(mén)栓劑給藥，每天3支，毎次I支，或脂質(zhì)體局部注射，每天2劑，每劑250 300 μ g，2周ー個(gè)療程。治療結(jié)果分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)
一、近期療效(4周末與治療前比較)
1、完全緩解病灶完全消失，無(wú)新的病灶出現(xiàn)；
2、部分緩解病灶縮小的治療前的50%或更小，無(wú)新的病灶出現(xiàn)，多灶性病變時(shí)沒(méi)有一個(gè)病灶增大；
3、穩(wěn)定期①輕度緩解病灶縮小面積20%或增大面積25%，自覺(jué)癥狀改善，體力基本狀況上升基本穩(wěn)定病灶縮小不到25%或増大面積不超過(guò)25%以上，自覺(jué)癥狀改善，體力基本狀況上升；
4、擴(kuò)展單個(gè)面積或多個(gè)病灶總面積比治療前増大25%以上，或出現(xiàn)新的病變，臨床癥狀加重，體力基本狀況下降。ニ、中期治療(5周 I年)
1、完全緩解，無(wú)瘤生存；
2、部分緩解①癌體回復(fù)到治療前的面積50%以上或出現(xiàn)新的病灶癌體無(wú)增大或縮小，癥狀改善或消失體力基本狀況上升；
3、轉(zhuǎn)移及擴(kuò)展病原灶擴(kuò)大發(fā)展，出現(xiàn)新的轉(zhuǎn)移灶，臨床癥狀加重，體力狀況下降。三、遠(yuǎn)期療效(I年 5年)
1、無(wú)瘤生存；
2、帶瘤生存；
3、死亡。治療結(jié)果見(jiàn)表I 表I
權(quán)利要求
1.一種蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)在治療直腸癌藥品中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)在治療直腸癌藥品中的應(yīng)用，其特征在于所述治療直腸癌藥品是由蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)10 15g、卵磷脂O. I I. 5g、液體石蠟20 50g、烏桕脂100 200g制成的栓劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)在治療直腸癌藥品中的應(yīng)用，其特征在于所述蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)按照下述方法獲得 (1)將IOOOg干燥蟾蜍蛆蟲(chóng)放入常溫膨化裝置，充入I IOkg氮?dú)?、O.I O. 5kg氨氣，加壓至O. 2 I. OMpa,時(shí)間10 30min，然后瞬間釋放裝置內(nèi)氣體，蟾蜍蛆蟲(chóng)被膨化粉碎； (2)膨化粉碎物料加入到膨脹溶劑體系提取裝置中，充入200 2000gニ氧化碳、100 500gこ醇和100 200g ニ甲基甲酰胺,加壓至I 8Mpa,溫度10 25°C,時(shí)間10 60min,然后釋放壓カ至常壓，收集混合液； (3)混合液用分離機(jī)以1500 5000r/min分離,收集液相； (4)收集液相用膜孔徑O.5 50 μ m微濾機(jī)過(guò)濾，得過(guò)濾液； (5)將過(guò)濾液注入到saphacryls-lOOHR的凝膠過(guò)濾柱中在pH=3 12條件下過(guò)濾； (6)濾液溶解于溶劑體系中，泵入超聲駐波液相制備色譜中，超聲駐波功率O.2 5.0KW、頻率500 1000kHz、流速50 500mL/min、紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)280nm，分離純化出蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)； (7)純化蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)用真空冷凍干燥機(jī)在真空度200 800Kpa、溫度-50 30°C、時(shí)間6 24h的條件下,干燥至含水分5 8%的凍干蛋白質(zhì)成品。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)在治療直腸癌藥品中的應(yīng)用，其特征在于所述溶劑體系由氯仿-こ醇-甲醇-水按照4:3:3:2的體積比組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)在治療直腸癌藥品中的應(yīng)用，其特征在于所述治療直腸癌藥品是由IOOg卵磷脂、30 80g膽固醇、10 50g蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)制成的脂質(zhì)體。
6.根據(jù)權(quán)利要求I或5所述的蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)在治療直腸癌藥品中的應(yīng)用，其特征在于所述蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)按照下述方法獲得 (1)將IOOOg鮮蟾蜍蛆蟲(chóng)用打漿機(jī)在500 1000r/min打漿10 30min，成為漿狀物； (2)漿狀物中加入質(zhì)量濃度為0.01 0. 5%碳酸鈉水溶液5 20L，攪拌均勻，在常溫下放置30 120min ； (3)用離心機(jī)在1500 5000r/min條件下離心10 30min,收集液相； (4)用膜孔徑0.2 5. O μ m微濾機(jī)過(guò)濾上述液相，收集過(guò)濾液； (5)將濾液注入到saphacryls-lOOHR凝膠過(guò)濾柱中在pH=3 12過(guò)濾得過(guò)濾液； (6)過(guò)濾液溶解于溶劑體系中，泵入超聲駐波液相制備色譜中，超聲駐波功率0.2 5.OKff,頻率500 1000kHz，流量50 500mL/min，紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)280nm，連續(xù)純化分離蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)； (7)純化蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)用真空冷凍干燥機(jī)在真空度50 500Kpa，溫度-30 30°C，時(shí)間6 24h條件下干燥至含水分5 8%成品。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)在治療直腸癌藥品中的應(yīng)用，其特征在于所述溶劑體系由氯仿-こ醇-甲醇-水按照4::3:3 2的體積比組成。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)在治療直腸癌藥品中的應(yīng)用，其特征在于所述治療直腸癌藥品按照下述方法制備 一、提取蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì) (1)將IOOOg干燥蟾蜍蛆蟲(chóng)放入常溫膨化裝置，充入I IOkg氮?dú)?、O.I O. 5kg氨氣，加壓至O. 2 I. OMpa,時(shí)間10 30min，然后瞬間釋放裝置內(nèi)氣體，蟾蜍蛆蟲(chóng)被膨化粉碎； (2)膨化粉碎物料加入到膨脹溶劑體系提取裝置中，充入200 2000gニ氧化碳、100 500gこ醇和100 200g ニ甲基甲酰胺,加壓至I 8Mpa,溫度10 25°C,時(shí)間10 60min,然后釋放壓カ至常壓，收集混合液； (3)混合液用分離機(jī)以1500 5000r/min分離,收集液相； (4)收集液相用膜孔徑O.5 50 μ m微濾機(jī)過(guò)濾，得過(guò)濾液； (5)將過(guò)濾液注入到saphacryls-lOOHR的凝膠過(guò)濾柱中在pH=3 12條件下過(guò)濾； (6)濾液溶解于由氯仿-こ醇-甲醇-水按照4:3:3:2的體積比組成的溶劑體系中，泵入超聲駐波液相制備色譜中，超聲駐波功率O. 2 5. 0KW、頻率500 1000kHz、流速50 500mL/min、紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)280nm，分離純化出蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)； (7)純化蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)用真空冷凍干燥機(jī)在真空度200 800Kpa、溫度-50 30°C、時(shí)間6 24h的條件下,干燥至含水分5 8%的凍干蛋白質(zhì)成品； ニ、混合按照權(quán)利要求I所述配比混合，加工成各種劑型的治療直腸癌藥品。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)在治療直腸癌藥品中的應(yīng)用，其特征在于所述蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)的提取方法為 (1)將IOOOg鮮蟾蜍蛆蟲(chóng)用打漿機(jī)在500 1000r/min打漿10 30min，成為漿狀物； (2)漿狀物中加入質(zhì)量濃度為0.01 0. 5%碳酸鈉水溶液5 20L，攪拌均勻，在常溫下放置30 120min ； (3)用離心機(jī)在1500 5000r/min條件下離心10 30min,收集液相； (4)用膜孔徑0.2 5. O μ m微濾機(jī)過(guò)濾上述液相，收集過(guò)濾液； (5)將濾液注入到saphacryls-lOOHR凝膠過(guò)濾柱中在pH=3 12過(guò)濾得過(guò)濾液； (6)過(guò)濾液溶解于由氯仿-こ醇-甲醇-水按照4::3:32的體積比組成的溶劑體系中，泵入超聲駐波液相制備色譜中，超聲駐波功率0. 2 5. 0KW，頻率500 1000kHz，流量50 500mL/min,紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)280nm,連續(xù)純化分離蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)； (7)純化蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)用真空冷凍干燥機(jī)在真空度50 500Kpa，溫度-30 30°C，時(shí)間6 24h條件下干燥至含水分5 8%成品。
全文摘要
蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)在治療直腸癌藥品中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。針對(duì)現(xiàn)有治療直腸癌藥品存在的問(wèn)題，本發(fā)明將蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)與適宜的藥劑輔料結(jié)合使用，提供一種蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)在治療直腸癌藥品中的新用途。本發(fā)明針對(duì)直腸癌特殊癥狀而設(shè)計(jì)，提取純化的一種蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)含量達(dá)96.5～98.1%，再用此純度的蟾蜍蛆蟲(chóng)蛋白質(zhì)制備成各種劑型的藥品，該藥品成分明確，一致性好，質(zhì)量可控，對(duì)直腸癌病癥療效好并且使用方便。
文檔編號(hào)A61K47/28GK102657847SQ201210179119
公開(kāi)日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2012年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月2日
發(fā)明者徐華民, 徐萌, 趙艷琨, 趙榮華 申請(qǐng)人:哈爾濱工業(yè)大學(xué)