專利名稱:一種用于治療HBV的siRNA的制作方法
技術領域:
本發(fā)明涉及一種用于治療HBV的siRNA,屬基因工程領域。
背景技術:
目前,全世界約有4. 2億HBV攜帶者,HBV感染是嚴重影響人類健康的疾病之一。 慢性HBV感染與肝纖維化、肝癌的發(fā)生密切相關。但是,大部分的慢性HBV患者并沒有在常規(guī)的治療方式下獲得預期的結果。盡管干擾素能夠抑制HBV的復制,但是HBV能夠通過抑制干擾素的分泌和功能,從而對抗機體的抗病毒機制,而最終導致機體處于免疫耐受狀態(tài)。比如,在慢性感染的病人的外周血和肝浸潤細胞中,調(diào)節(jié)性T細胞的比例有明顯增加。另外, HBsAg, HBeAg以及其他的病毒因子能夠直接抑制TLR介導的固有免疫應答。HBV聚合酶能夠阻斷RIG-I和TLR3介導的IFN-β分泌。目前,RNAi技術已經(jīng)廣泛應用于抗HBV研究。無論是細胞水平,還是HBV動物模型,siRNA分子均取得明顯的抗HBV效果。RNAi干擾藥物必將成為今后研究的重點。能否設計一種分子,既能特異性的沉默HBV相關基因,同時能夠誘導IFN的產(chǎn)生, 從而能夠改善HBV導致的免疫耐受狀態(tài)。HBx特異的3p-siRNA的出現(xiàn),使得這樣的假想成為可能,為HBV的治療提供了很好的指導意義。
發(fā)明內(nèi)容
針對上述現(xiàn)有技術,針對HBV治療現(xiàn)狀的不足,本發(fā)明提供了一種用于治療HBV的 SiRNA0本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的一種用于治療HBV的siRNA,其序列如SEQ ID NO. 1所示SEQ ID NO. 1 :G⑶CUUACAUAAGAGGACU?;蛉鏢EQ ID NO. 2 所示SEQ ID NO. 2 :GGAC⑶CCUUUGUUUACGU?;蛉鏢EQ ID NO. 3 所示SEQ ID NO. 3 CCGACCUUGAGGCAUACUU。本發(fā)明的用于治療HBV的siRNA,是通過以下方法制備得到的LsiRNA 的設計(1)首先分析所研究的HBV亞型為ayw型,其序列如SEQ ID N0. 4所示。(2)針對HBV χ基因的序列,設計針對HBV χ基因的特異性沉默RNA,用siRNA設計軟件,設定相關參數(shù)包括siRNA的長度為19個堿基序列;GC比例在35-50之間。將潛在的序列利用BLAST進行基因數(shù)據(jù)庫的比較,排除和其他編碼序列同源的序列。(3)化學合成siRNA由廣州銳博公司直接合成,其靶點和3p_siRNA相同,序列見表 1,以及序列表 SEQ ID NO. I-SEQ ID NO. 3。表1化學合成siRNA序列
權利要求
1. 一種用于治療HBV的siRNA,其特征在于其序列如SEQ ID NO. 2所示=SEQ ID NO. 2 GGAC⑶CCUUUGUUUAC⑶。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于治療HBV的siRNA,其序列如SEQ ID NO.2所示??扇斯ず铣桑部赏ㄟ^體內(nèi)轉(zhuǎn)錄合成。將本發(fā)明的siRNA轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細胞24h和48h后,發(fā)現(xiàn)均能夠下調(diào)HBx基因的表達,細胞內(nèi)以及上清中HBsAg和HBeAg的含量也明顯下降,并且3p-siRNA的作用效果比化學合成的更加顯著??梢宰鳛榭笻BV的藥物應用。
文檔編號A61P31/20GK102533767SQ20121002261
公開日2012年7月4日 申請日期2010年9月16日 優(yōu)先權日2010年9月16日
發(fā)明者張建, 張彩, 田志剛, 韓秋菊 申請人:山東大學