專(zhuān)利名稱(chēng)：兒茶素類(lèi)物質(zhì)聯(lián)合后與抗菌藥物的聯(lián)合的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物應(yīng)用領(lǐng)域，尤其涉及兒茶素和表沒(méi)食子兒茶素或者表兒茶素沒(méi)食子酸酯中任意兩者或三種聯(lián)合后再與抗生素的聯(lián)合在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
自1961年發(fā)現(xiàn)了第一株耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Methicillin-resistantSt aphylococcus aureus, MRSA)后，20世紀(jì)80年代至今MRSA已成為全球醫(yī)院感染的重要病原菌。MRSA對(duì)包括對(duì)青霉素、頭孢菌素和頭霉素類(lèi)等內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素、氨基糖苷類(lèi)、喹諾酮類(lèi)甚至糖肽類(lèi)抗菌藥物都存在不同程度的耐藥。因此，尋找克服耐藥機(jī)制的辦法、發(fā)現(xiàn)新的作用靶位及開(kāi)發(fā)新的抗生素迫在眉睫。MRSA的耐藥性主要與其產(chǎn)生一種親和力低的特殊青霉素結(jié)合蛋白2a(PBP2a)有關(guān)，在抗菌濃度的抗生素存在情況下能替代其他幾種被抗生素抑制的PBP發(fā)揮生理功能， 以維持細(xì)菌的正常生長(zhǎng)，從而表現(xiàn)出對(duì)多種抗生素的耐藥性。因此，目前國(guó)外許多制藥企業(yè)均將PBPh作為新的抗菌藥物開(kāi)發(fā)的靶點(diǎn)。兒茶素類(lèi)物質(zhì)是廣泛存在于茶等天然植物中具有廣泛生物學(xué)活性的一類(lèi)物質(zhì)，主要包括兒茶素(C)、表兒茶素(EC)、沒(méi)食子兒茶素(GC)、表沒(méi)食子兒茶素(EGC)、表兒茶素沒(méi)食子酸酯(ECG)、沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(GCG)、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)。研究表明兒茶素類(lèi)物質(zhì)具有抗腫瘤、抗基因突變、抗菌、消炎、抗動(dòng)脈粥樣硬化等多種生物學(xué)功能。大量的研究表明，來(lái)源于茶中的兒茶素在高濃度情況下具有一定的抑菌效果。兒茶素能抑制葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶，減少葡聚糖的生成量，干擾菌體需糖黏連，對(duì)傷寒桿菌、副傷寒桿菌、黃色溶血性葡萄球菌、金黃色鏈球菌和痢疾等多種病原細(xì)菌具有明顯的抑制作用。申請(qǐng)人:在前期研究中，以PBPh為靶點(diǎn)，采用生物傳感器技術(shù)從一百多種具有抗感染與抗炎作用的中藥中篩選得到具有抗菌增敏活性的物質(zhì)；并從山楂組分中純化出一個(gè)具有顯著抗菌增敏作用的組分，對(duì)其進(jìn)行成分分析后發(fā)現(xiàn)其由三個(gè)物質(zhì)組成，分別為兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素、表兒茶素沒(méi)食子酸酯。曾經(jīng)有文獻(xiàn)報(bào)道，使用一種兒茶素類(lèi)物質(zhì)與抗生素聯(lián)合應(yīng)用可用于MRSA治療，但是其效果均不好，限制了兒茶素類(lèi)物質(zhì)在抗菌增敏應(yīng)用方面的推廣。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素和兒茶素酸酯中任意兩者或三種聯(lián)合后再與抗生素的聯(lián)合在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。將兒茶素類(lèi)物質(zhì)聯(lián)合再與抗生素的聯(lián)合應(yīng)用到抗MRSA領(lǐng)域，可以提供藥物的抗菌增敏作用，不僅拓寬兒茶素類(lèi)物質(zhì)的用途， 拓寬其應(yīng)用方案，而且可以減輕現(xiàn)有抗菌藥物的濫用而導(dǎo)致耐甲氧西林金黃色葡萄球菌產(chǎn)生耐藥的現(xiàn)象。本發(fā)明的技術(shù)方案是
兒茶素類(lèi)物質(zhì)中的中任意兩種或三種聯(lián)合后再與抗生素的聯(lián)合在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。兒茶素與表沒(méi)食子兒茶素的質(zhì)量比為2 1 8 1，兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為1 1 8 1，兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為 1 1 1 8 1 1。所述兒茶素類(lèi)物質(zhì)為兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素和表兒茶素沒(méi)食子酸酯。所述抗生素為青霉素類(lèi)、頭孢菌素類(lèi)中的任意一種。所述青霉素抗生素為青霉素G、氨芐西林、苯唑西林、舒氨西林。所述頭孢菌素類(lèi)抗生素包括頭孢呋辛、頭孢匹胺?；谏鲜瞿康?，本發(fā)明使用的技術(shù)方案是將兒茶素類(lèi)物質(zhì)中的兩種與抗MRSA藥物中的一種進(jìn)行聯(lián)合應(yīng)用，該應(yīng)用不是做為疾病的治療方法的應(yīng)用，而是在配備治療疾病 (抗MRSA)的藥物中的應(yīng)用，其中兒茶素和表沒(méi)食子兒茶素的質(zhì)量比為2 1 8 1，兒茶素和表兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為1 1 8 1，兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為1 1 1 8 1 1。當(dāng)兒茶素和表沒(méi)食子兒茶素的質(zhì)量比為2 1，兒茶素和表兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為2 1，當(dāng)兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為111能夠以最小的藥物量取得最優(yōu)的抗菌增敏效果。 上三種成分可以制備成組合物，也可以是三種單獨(dú)的藥劑。上述成分能夠產(chǎn)生協(xié)同抗MRSA 效力，能夠降低抗MRSA藥物的最低抑菌濃度(MIC)。上述兒茶素類(lèi)物質(zhì)的聯(lián)合包括兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯的聯(lián)合、兒茶素與表沒(méi)食子兒茶素的聯(lián)合，兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯的聯(lián)合；上述抗生素為內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素抗生素，如青霉素類(lèi)、頭孢菌素類(lèi)。在一較佳實(shí)施例中，上述抗菌藥物為青霉素G、氨芐西林、苯唑西林、頭孢呋辛、頭孢匹胺、舒氨西林，優(yōu)選為苯唑西林和氨芐西林。兒茶素單獨(dú)使用可抑制部分革蘭陰性菌和革蘭陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)，與抗菌藥物聯(lián)合應(yīng)用后可明顯增強(qiáng)抗菌藥物的抗菌效力，但這種抗菌增敏在MRSA上卻沒(méi)有很好的效果。通過(guò)實(shí)驗(yàn)，申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)當(dāng)聯(lián)用兒茶素和表兒茶素沒(méi)食子酸酯，或聯(lián)用兒茶素和表沒(méi)食子兒茶素， 或聯(lián)用兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯后再與抗生素聯(lián)用，可明顯減少抗 MRSA藥物的使用劑量；同時(shí)實(shí)驗(yàn)還表明兒茶素聯(lián)用表兒茶素沒(méi)食子酸酯，或兒茶素聯(lián)用表沒(méi)食子兒茶素，或兒茶素聯(lián)用表沒(méi)食子兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯后再與抗生素聯(lián)用可明顯降低MRSA菌攻擊導(dǎo)致的小鼠死亡率，顯著抑制小鼠血中細(xì)菌的含量。因此，本發(fā)明拓寬了兒茶素、表兒茶素沒(méi)食子酸酯、表沒(méi)食子兒茶素的新用途，提高了抗菌藥物的抗菌效力，減輕了抗菌藥物濫用和由抗菌藥物濫用導(dǎo)致的耐藥現(xiàn)象。申請(qǐng)人:在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)當(dāng)兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素、表兒茶素沒(méi)食子酸酯中的任意兩種或三種組合在一起時(shí)，對(duì)內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素對(duì)MRSA的抗菌效果具有明顯的增敏效應(yīng)，但將其分開(kāi)后抗菌增敏效應(yīng)則基本消失。通過(guò)實(shí)驗(yàn)我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，單純一種兒茶素類(lèi)物質(zhì)與抗生素聯(lián)合并不能取得良好的抗菌增敏作用，但是當(dāng)其中的任意兩種或三種兒茶素類(lèi)物質(zhì)與抗生素聯(lián)合后則具有很強(qiáng)的抗菌增敏作用，上述研究成果在本專(zhuān)利申請(qǐng)以前未見(jiàn)任何報(bào)道。由于MRSA對(duì)許多抗菌藥物都存在不同程度的耐藥，因此，本發(fā)明所述的采用任意
4兩種或三種兒茶素類(lèi)物質(zhì)聯(lián)合再與抗生素聯(lián)合，可以增強(qiáng)抗菌藥物對(duì)MRSA的抗菌活性。本發(fā)明所述的兒茶素類(lèi)物質(zhì)聯(lián)合后與抗菌藥物的聯(lián)合具有很強(qiáng)的抗菌增敏作用，使得采用天然的具有抗菌增敏活性的藥物來(lái)增強(qiáng)抗菌藥物對(duì)MRSA的抗菌活性更具有非常重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。


圖1為C聯(lián)合ECG協(xié)同氨芐西林(AMP)、苯唑西林(OXA)對(duì)甲氧西林耐藥的金黃色葡萄球菌WH0-2的聯(lián)合抑菌曲線。圖2為C聯(lián)合EGC協(xié)同氨芐西林(AMP)、苯唑西林(OXA)對(duì)甲氧西林耐藥的金黃色葡萄球菌WH0-2的聯(lián)合抑菌曲線。圖3為C、EGC、ECG三者聯(lián)合協(xié)同氨芐西林(AMP)、苯唑西林(OXA)對(duì)甲氧西林耐藥的金黃色葡萄球菌WH0-2的聯(lián)合抑菌曲線。圖4為C聯(lián)合ECG與OXA協(xié)同使用時(shí)對(duì)MRSA WH0-2攻擊小鼠的保護(hù)作用圖5為C聯(lián)合EGC與OXA協(xié)同使用時(shí)對(duì)MRSA WH0-2攻擊小鼠的保護(hù)作用圖6為C聯(lián)合ECG、EGC與OXA協(xié)同使用時(shí)對(duì)MRSA WH0-2攻擊小鼠的保護(hù)作用圖7為C聯(lián)合EGC與OXA協(xié)同使用時(shí)對(duì)MRSA WH0-2攻擊小鼠血中細(xì)菌數(shù)量的影響圖8為C聯(lián)合ECG與OXA協(xié)同使用時(shí)對(duì)MRSA WH0-2攻擊小鼠血中細(xì)菌數(shù)量的影響圖9為C、ECG、EGC與OXA協(xié)同使用時(shí)對(duì)MRSA WH0-2攻擊小鼠血中細(xì)菌數(shù)量的影響
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但所述實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不是限制本發(fā)明。當(dāng)兒茶素和表沒(méi)食子兒茶素的質(zhì)量比為2 1 8 1，兒茶素和表兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為1 1 8 1，兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為1 1 1 8 1 1。尤其當(dāng)兒茶素和表沒(méi)食子兒茶素的質(zhì)量比為2 1，兒茶素和表兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為2 1，當(dāng)兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為111時(shí)能夠以最小的藥物量取得最優(yōu)的抗菌增敏效果。實(shí)施例1本實(shí)施例在于研究?jī)翰杷仡?lèi)物質(zhì)與多種β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素對(duì)MRSAWH0-2的 MIC (最低抑菌濃度)和MBC (最低殺菌濃度)。采用微孔稀釋法，調(diào)整細(xì)菌濃度為105CFU/ml，接種于96孔無(wú)菌培養(yǎng)板內(nèi)。C、ECG、 EGC、青霉素鈉、氨芐西林等13種藥物分別以生理鹽水稀釋為5. 12mg/ml。加入各種藥物至含細(xì)菌培養(yǎng)孔內(nèi)，依次倍比稀釋?zhuān)? 11孔藥物的最終濃度依次為512、256、128、64、32、 16、8、4、2、1、0. 5ug/ml。置37°C培養(yǎng)箱孵育24h和48h，讀取陽(yáng)性和陰性對(duì)照孔，陰性對(duì)照孔清亮，陽(yáng)性對(duì)照孔混濁。藥物對(duì)細(xì)菌的MIC為24h后抑制細(xì)菌肉眼可見(jiàn)生長(zhǎng)的最低藥物濃度，藥物對(duì)細(xì)菌的MBC為4 后抑制細(xì)菌肉眼可見(jiàn)生長(zhǎng)的最低藥物濃度。此次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明C、ECG、EGC單獨(dú)使用不能完全抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，并觀察了不同藥物對(duì)該細(xì)菌的抑菌效力。 (見(jiàn)表1)。表1 13種抗生素和兒茶素類(lèi)物質(zhì)的單獨(dú)使用時(shí)對(duì)MRSA WH0-2的MIC及MBC
權(quán)利要求
1.一種兒茶素類(lèi)物質(zhì)中的中任意兩種或三種聯(lián)合后再與抗生素的聯(lián)合在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述兒茶素類(lèi)物質(zhì)為兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素和表兒茶素沒(méi)食子酸酯。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于兒茶素與表沒(méi)食子兒茶素的質(zhì)量比為 2 1 8 1，兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為1 1 8 1，兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為1 1 1 8 1 1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述抗生素為青霉素類(lèi)、頭孢菌素類(lèi)中的任意一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述青霉素類(lèi)抗生素包括青霉素G、氨芐西林、苯唑西林、舒氨西林。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述頭孢菌素類(lèi)抗生素包括頭孢呋辛、頭孢匹胺。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種兒茶素類(lèi)物質(zhì)中的中任意兩種或三種聯(lián)合后再與抗生素的聯(lián)合在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。將兒茶素類(lèi)物質(zhì)聯(lián)合再與抗生素的聯(lián)合應(yīng)用到抗MRSA領(lǐng)域，可以提供藥物的抗菌增敏作用，不僅拓寬兒茶素類(lèi)物質(zhì)的用途，拓寬其應(yīng)用方案，而且可以減輕現(xiàn)有抗菌藥物的濫用而導(dǎo)致耐甲氧西林金黃色葡萄球菌產(chǎn)生耐藥的現(xiàn)象。
文檔編號(hào)A61K31/431GK102205126SQ20111020161
公開(kāi)日2011年10月5日 申請(qǐng)日期2011年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月23日
發(fā)明者周紅, 李斌, 肖康康, 蔣為薇, 覃容欣, 鄭江 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)