專(zhuān)利名稱(chēng)：兒茶素類(lèi)物質(zhì)聯(lián)合后與抗菌藥物的聯(lián)合的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物應(yīng)用領(lǐng)域，尤其涉及兒茶素和表沒(méi)食子兒茶素或者表兒茶素沒(méi)食 子酸酯中任意兩者或三種聯(lián)合后再與抗生素的聯(lián)合在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
自1961年發(fā)現(xiàn)了第一株耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Methicillin-resistantSt aphylococcus aureus, MRSA)后，20世紀(jì)80年代至今MRSA已成為全球醫(yī)院感染的重要病 原菌。MRSA對(duì)包括對(duì)青霉素、頭孢菌素和頭霉素類(lèi)等內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素、氨基糖苷類(lèi)、喹 諾酮類(lèi)甚至糖肽類(lèi)抗菌藥物都存在不同程度的耐藥。因此，尋找克服耐藥機(jī)制的辦法、發(fā)現(xiàn) 新的作用靶位及開(kāi)發(fā)新的抗生素迫在眉睫。MRSA的耐藥性主要與其產(chǎn)生一種親和力低的特殊青霉素結(jié)合蛋白2a(PBP2a)有 關(guān)，在抗菌濃度的抗生素存在情況下能替代其他幾種被抗生素抑制的PBP發(fā)揮生理功能， 以維持細(xì)菌的正常生長(zhǎng)，從而表現(xiàn)出對(duì)多種抗生素的耐藥性。因此，目前國(guó)外許多制藥企業(yè) 均將PBP2a作為新的抗菌藥物開(kāi)發(fā)的靶點(diǎn)。兒茶素類(lèi)物質(zhì)是廣泛存在于茶等天然植物中具有廣泛生物學(xué)活性的一類(lèi)物質(zhì)，主 要包括兒茶素(C)、表兒茶素(EC)、沒(méi)食子兒茶素(GC)、表沒(méi)食子兒茶素(EGC)、表兒茶素沒(méi) 食子酸酯(ECG)、沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(GCG)、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)。研 究表明兒茶素類(lèi)物質(zhì)具有抗腫瘤、抗基因突變、抗菌、消炎、抗動(dòng)脈粥樣硬化等多種生物學(xué) 功能。大量的研究表明，來(lái)源于茶中的兒茶素在高濃度情況下具有一定的抑菌效果。兒 茶素能抑制葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶，減少葡聚糖的生成量，干擾菌體需糖黏連，對(duì)傷寒桿菌、副傷 寒桿菌、黃色溶血性葡萄球菌、金黃色鏈球菌和痢疾等多種病原細(xì)菌具有明顯的抑制作用。申請(qǐng)人:在前期研究中，以PBP2a為靶點(diǎn)，采用生物傳感器技術(shù)從一百多種具有抗 感染與抗炎作用的中藥中篩選得到具有抗菌增敏活性的物質(zhì)；并從山楂組分中純化出一個(gè) 具有顯著抗菌增敏作用的組分，對(duì)其進(jìn)行成分分析后發(fā)現(xiàn)其由三個(gè)物質(zhì)組成，分別為兒茶 素、表沒(méi)食子兒茶素、表兒茶素沒(méi)食子酸酯。曾經(jīng)有文獻(xiàn)報(bào)道，使用一種兒茶素類(lèi)物質(zhì)與抗 生素聯(lián)合應(yīng)用可用于MRSA治療，但是其效果均不好，限制了兒茶素類(lèi)物質(zhì)在抗菌增敏應(yīng)用 方面的推廣。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素和兒茶素酸酯中任意兩者或三 種聯(lián)合后再與抗生素的聯(lián)合在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。將兒茶素類(lèi)物質(zhì)聯(lián)合再與抗生素的 聯(lián)合應(yīng)用到抗MRSA領(lǐng)域，可以提供藥物的抗菌增敏作用，不僅拓寬兒茶素類(lèi)物質(zhì)的用途， 拓寬其應(yīng)用方案，而且可以減輕現(xiàn)有抗菌藥物的濫用而導(dǎo)致耐甲氧西林金黃色葡萄球菌產(chǎn) 生耐藥的現(xiàn)象。本發(fā)明的技術(shù)方案是
兒茶素類(lèi)物質(zhì)中的中任意兩種或三種聯(lián)合后再與抗生素的聯(lián)合在制備抗菌藥物 中的應(yīng)用。兒茶素與表沒(méi)食子兒茶素的質(zhì)量比為2 1 1 2，兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸 酯的質(zhì)量比為2 1 8 1，兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為 4 1 1 8 1 1。所述兒茶素類(lèi)物質(zhì)為兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素和表兒茶素沒(méi)食子酸酯。所述抗生素為青霉素類(lèi)、頭孢菌素類(lèi)中的任意一種。所述青霉素抗生素為青霉素G、氨芐西林、苯唑西林、舒氨西林。所述頭孢菌素類(lèi)抗生素包括頭孢呋辛、頭孢匹胺。
基于上述目的，本發(fā)明使用的技術(shù)方案是將兒茶素類(lèi)物質(zhì)中的兩種與抗MRSA藥 物中的一種進(jìn)行聯(lián)合應(yīng)用，該應(yīng)用不是做為疾病的治療方法的應(yīng)用，而是在配備治療疾病 (抗MRSA)的藥物中的應(yīng)用，其中兒茶素和表沒(méi)食子兒茶素的質(zhì)量比為2 1 1 2，兒 茶素和表兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為2 1 8 1，兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素與表兒茶 素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為4 1 1 8 1 1。當(dāng)兒茶素和表沒(méi)食子兒茶素的質(zhì)量比 為1 2，兒茶素和表兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為2 1，當(dāng)兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素與表 兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為411能夠以最小的藥物量取得最優(yōu)的抗菌增敏效果。 上三種成分可以制備成組合物，也可以是三種單獨(dú)的藥劑。上述成分能夠產(chǎn)生協(xié)同抗MRSA 效力，能夠降低抗MRSA藥物的最低抑菌濃度(MIC)。上述兒茶素類(lèi)物質(zhì)的聯(lián)合包括包括兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯的聯(lián)合、兒茶素 與表沒(méi)食子兒茶素的聯(lián)合，兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯的聯(lián)合；上述抗 生素為內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素抗生素，如青霉素類(lèi)、頭孢菌素類(lèi)。在一較佳實(shí)施例中，上述抗 菌藥物為青霉素G、氨芐西林、苯唑西林、頭孢呋辛、頭孢匹胺、舒氨西林，優(yōu)選為苯唑西林和 氨芐西林。兒茶素單獨(dú)使用可抑制部分革蘭陰性菌和革蘭陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)，與抗菌藥物聯(lián)合應(yīng) 用后可明顯增強(qiáng)抗菌藥物的抗菌效力，但這種抗菌增敏在MRSA上卻沒(méi)有很好的效果。通過(guò) 實(shí)驗(yàn)。申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)當(dāng)聯(lián)用兒茶素和表兒茶素沒(méi)食子酸酯，聯(lián)用兒茶素和表沒(méi)食子兒茶素，聯(lián) 用兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯后再與抗生素聯(lián)用，可明顯減少抗MRSA 藥物的使用劑量；同時(shí)實(shí)驗(yàn)還表明兒茶素和表兒茶素沒(méi)食子酸酯，聯(lián)用兒茶素聯(lián)合表沒(méi)食 子兒茶素，聯(lián)用兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯后再與抗生素聯(lián)用可明顯 降低MRSA菌攻擊導(dǎo)致的小鼠死亡率，顯著抑制小鼠血中細(xì)菌的含量。因此，本發(fā)明拓寬了兒茶素、表兒茶素沒(méi)食子酸酯、表沒(méi)食子兒茶素的新用途，提 高了抗菌藥物的抗菌效力，減輕了抗菌藥物濫用和導(dǎo)致的耐藥現(xiàn)象。申請(qǐng)人:在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)當(dāng)這三個(gè)組分組合在一起時(shí)對(duì)β -內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素對(duì)MRSA 的抗菌效果具有明顯的增敏效應(yīng)，但將這三個(gè)組分分開(kāi)后抗菌增敏效應(yīng)則基本消失。通過(guò) 實(shí)驗(yàn)我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，單純一種兒茶素類(lèi)物質(zhì)與抗生素聯(lián)合并不能取得良好的抗菌增敏作 用，但是當(dāng)兩種或三種兒茶素類(lèi)物質(zhì)與抗生素聯(lián)合后則具有很強(qiáng)的抗菌增敏作用，上述研 究成果則未見(jiàn)如何研究報(bào)告。鑒于MRSA對(duì)許多抗菌藥物都存在不同程度的耐藥、兩種或三種兒茶素類(lèi)物質(zhì)與 抗生素聯(lián)合具有很強(qiáng)的抗菌增敏作用，因此采用天然的具有抗菌增敏活性的藥物來(lái)增強(qiáng)抗菌藥物對(duì)MRSA的抗菌活性具有非常重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。


圖1表示C聯(lián)合ECG協(xié)同氨芐西林(AMP)、苯唑西林(OXA)對(duì)甲氧西林耐藥的金黃 色葡萄球菌WH0-2的聯(lián)合抑菌曲線。圖2表示C聯(lián)合EGC協(xié)同氨芐西林(AMP)、苯唑西林(OXA)對(duì)甲氧西林耐藥的金黃 色葡萄球菌WH0-2的聯(lián)合抑菌曲線。圖3表示C、EGC、ECG三者聯(lián)合協(xié)同氨芐西林(AMP)、苯唑西林(OXA)對(duì)甲氧西林 耐藥的金黃色葡萄球菌WH0-2的聯(lián)合抑菌曲線。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但所述實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不 是限制本發(fā)明。當(dāng)兒茶素和表沒(méi)食子兒茶素的質(zhì)量比為2 1 1 2，兒茶素和表兒茶素沒(méi)食子 酸酯的質(zhì)量比為2 1 8 1，兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比 為4 1 1 8 1 1。尤其當(dāng)兒茶素和表沒(méi)食子兒茶素的質(zhì)量比為1 2，兒茶素和 表兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為2 1，當(dāng)兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯 的質(zhì)量比為411時(shí)能夠以最小的藥物量取得最優(yōu)的抗菌增敏效果。實(shí)施例1本實(shí)驗(yàn)例在于研究?jī)翰杷仡?lèi)物質(zhì)與多種β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素對(duì)不同細(xì)菌的 MIC (最低抑菌濃度)和MBC (最低殺菌濃度)。采用微孔稀釋法，調(diào)整細(xì)菌濃度為105CFU/ml，接種于96孔無(wú)菌培養(yǎng)板內(nèi)。C、ECG、 EGC、青霉素鈉、氨芐西林等15種藥物分別以生理鹽水稀釋為5. 12mg/ml。加入各種藥物至 含細(xì)菌培養(yǎng)孔內(nèi)，依次倍比稀釋?zhuān)? 11孔藥物的最終濃度依次為512、256、128、64、32、 16、8、4、2、1、0. 5ug/ml。置37°C培養(yǎng)箱孵育24h和48h，讀取陽(yáng)性和陰性對(duì)照孔，陰性對(duì)照孔 清亮，陽(yáng)性對(duì)照孔混濁。藥物對(duì)細(xì)菌的MIC為24h后抑制細(xì)菌肉眼可見(jiàn)生長(zhǎng)的最低藥物濃 度，藥物對(duì)細(xì)菌的MBC為48h后抑制細(xì)菌肉眼可見(jiàn)生長(zhǎng)的最低藥物濃度。此次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表 明C、ECG、EGC單獨(dú)使用不能完全抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，并觀察了不同藥物對(duì)該細(xì)菌的抑菌效力。 (見(jiàn)表1)。表1 15種抗生素和兒茶素類(lèi)物質(zhì)的單獨(dú)使用時(shí)對(duì)MRSA WH0-2的MIC及MBC
SI西林 ^ 頭孢呋ι辛·
Cj鈉 西林匹Jj女\[1\林
MlC >512 2565126416—————
FvlBC >512 128___5叢________32___8_____丄 6____
__________CECGC__EGC_ECG_GCG_EGCG
MIC 256>512 512 25664645Π
MBC 512>512 512 512_128_128_>512
實(shí)施例2本實(shí)驗(yàn)例在于研究C、ECG、EGC分別與OXA聯(lián)合應(yīng)用后對(duì)MRSA WH0-2MIC和MBC的 影響。采用棋盤(pán)式微孔稀釋法，調(diào)整細(xì)菌濃度為105CFU/ml，接種于96孔無(wú)菌培養(yǎng)板內(nèi)， 觀察配伍后的藥物對(duì)WH0-2的MIC和MBC。此次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明C、ECG、EGC分別與OXA聯(lián)合 應(yīng)用后也不能降低抗菌藥物的MIC和MBC，或僅有較低的增敏效應(yīng)(如OXA+C 64yg/ml, 0XA+ECG 16 μ g/ml, FICI 均為 0· 5)。(見(jiàn)表 2)。表2 C、ECG、EGC 分別與 OXA 協(xié)同后的 OXA MIC/MBC
權(quán)利要求
一種兒茶素類(lèi)物質(zhì)中的中任意兩種或三種聯(lián)合后再與抗生素的聯(lián)合在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述兒茶素類(lèi)物質(zhì)為兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素和兒茶素酸酯。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于兒茶素與表沒(méi)食子兒茶素的質(zhì)量比為 2 1 1 2，兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為2 1 8 1，兒茶素、表沒(méi)食 子兒茶素與表兒茶素沒(méi)食子酸酯的質(zhì)量比為4 1 1 8 1 1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述抗生素為青霉素類(lèi)、頭孢菌素類(lèi)中的任意一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述青霉素類(lèi)抗生素包括青霉素G、氨芐 西林、苯唑西林、舒氨西林。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述頭孢菌素類(lèi)抗生素包括頭孢呋辛、頭 孢匹胺。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種兒茶素類(lèi)物質(zhì)中的中任意兩種或三種聯(lián)合后再與抗生素的聯(lián)合在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。將兒茶素類(lèi)物質(zhì)聯(lián)合再與抗生素的聯(lián)合應(yīng)用到抗MRSA領(lǐng)域，可以提供藥物的抗菌增敏作用，不僅拓寬兒茶素類(lèi)物質(zhì)的用途，拓寬其應(yīng)用方案，而且可以減輕現(xiàn)有抗菌藥物的濫用而導(dǎo)致耐甲氧西林金黃色葡萄球菌產(chǎn)生耐藥的現(xiàn)象。
文檔編號(hào)A61K31/43GK101940574SQ201010234990
公開(kāi)日2011年1月12日 申請(qǐng)日期2010年7月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月23日
發(fā)明者周紅, 李斌, 肖康康, 蔣為薇, 覃容欣, 鄭江 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)