專利名稱：：針對(duì)ErbB3的胞外結(jié)構(gòu)域的抗體及其用途的制作方法針對(duì)ErbB3的胞外結(jié)構(gòu)域的抗體及其用途
背景技術(shù)：
：多肽生長因子受體的ErbB/HER亞族包括表皮生長因子(EGF)受體(EGFR、ErbBl/HER1)、neu致癌基因產(chǎn)物(ErbB2/HER2)及最近確認(rèn)的ErbB3/HER3和ErbB4/HER4受體蛋白質(zhì)(參見，例如Hynes等人(1994)Biochim.Biophys.Acta.Rev.Cancer1198,165-184)。據(jù)推測(cè)，這些受體中的各種都由胞外結(jié)構(gòu)域(細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域)、跨膜結(jié)構(gòu)域、胞質(zhì)蛋白酪氨酸激酶(PTK)結(jié)構(gòu)域和C末端磷酸化結(jié)構(gòu)域組成(參見，例如Kim等人，(1998)Biochem.J.334，189-195)。ErbB受體的胞外結(jié)構(gòu)域的特征還在于被分為四個(gè)結(jié)構(gòu)域(1-1V)。ErbB胞外結(jié)構(gòu)域的I和III結(jié)構(gòu)域參與配體結(jié)合(參見，例如Hynes等人(2005)NatureRev.Cancer5,341-354)這些受體的配體包括神經(jīng)調(diào)節(jié)素(HRG)和P細(xì)胞素(BTC)。體外實(shí)驗(yàn)表明，與其它ErbB/HER家族成員相比，ErbB3受體(ErbB3)蛋白質(zhì)的蛋白酪氨酸激酶活性顯著降低，且這種降低部分地由于在ErbB3的預(yù)計(jì)細(xì)胞內(nèi)催化結(jié)構(gòu)域中發(fā)生的非保守氨基酸置換(參見，例如Guy等人(1994)Proc.Natl.AcadSc1.USA.91,8132-8136；Sierke等人(1997)Biochem.J.322,757-763)。但是，ErbB3蛋白質(zhì)表現(xiàn)出在多種細(xì)胞環(huán)境中被磷酸化。例如，在過量表達(dá)該蛋白質(zhì)的人乳腺癌細(xì)胞系的亞群中，ErbB3在酪氨酸殘基上被組成型磷酸化(參見，例如Kraus等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sc1.USA.90，2900-2904;和Kim等人，同上；還參見Schaefer等人(2006)Neoplasia8(7)613-22和Schaefer等人CancerRes(2004)64(10):3395-405)。盡管人們一直在研究ErbB3在癌癥中的作用(參見，例如Horst等人(2005)115，519-527；Xue等人(2006)CancerRes.66，1418-1426)，但是在很大程度上ErbB3作為臨床干預(yù)的靶點(diǎn)仍未受到重視。目前的免疫治療主要集中于抑制ErbB2的作用，且特別是ErbB2/ErbB3復(fù)合物的異二聚化(參見，例如Sliwkowski等人(1994)J.Biol.Chem.269(20)14661-14665(1994))。因此，本發(fā)明的目的在于提供有效抑制ErbB3信號(hào)傳導(dǎo)的改進(jìn)的免疫治療并可用于治療和診斷多種癌癥。
發(fā)明內(nèi)容在某些方面，本發(fā)明提供了一類與ErbB3受體相結(jié)合并抑制各種ErbB3功能的新型抗體(例如，單克隆抗體)。例如，此處所描述的抗體能夠與ErbB3結(jié)合并抑制EGF樣配體介導(dǎo)的受體磷酸化。如此處所描述的，EGF樣配體包括EGF、TGF-a、^細(xì)胞素(betacellulin)、肝素結(jié)合性表皮生長因子、biregulin和雙神經(jīng)調(diào)節(jié)素,其與EGFR結(jié)合并誘導(dǎo)EGFR和ErbB3的二聚化。這種二聚化隨之引起ErbB3的磷酸化，并通過該受體激活信號(hào)傳導(dǎo)。因此，本發(fā)明的抗體可用于治療和診斷與ErbB3介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)的多種癌癥。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了與ErbB3相結(jié)合并抑制EGF樣配體介導(dǎo)的ErbB3磷酸化的抗體(包括其抗原結(jié)合部分)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體及其片段進(jìn)一步具有下述一種或多種特性(i)抑制ErbB3配體介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo),包括通過ErbB3配體(例如神經(jīng)調(diào)節(jié)素、表皮調(diào)節(jié)素、epigen和biregulin)與ErbB3的結(jié)合介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)；(ii)抑制表達(dá)ErbB3的細(xì)胞的增殖；(iii)降低細(xì)胞表面上的ErbB3水平(例如通過誘導(dǎo)ErbB3的內(nèi)在化)的能力；(iv)抑制表達(dá)ErbB3的細(xì)胞的VEGF(血管內(nèi)皮生長因子)分泌；(v)抑制表達(dá)ErbB3的細(xì)胞的遷移；(vi)抑制表達(dá)ErbB3的細(xì)胞的球狀體生長；和(vii)與位于胞外結(jié)構(gòu)域(細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域)結(jié)構(gòu)域I(對(duì)應(yīng)于成熟ErbB3(SEQIDNO:73)的氨基酸殘基I至約190)上的表位相結(jié)合，例如與包含或跨過SEQIDNO73的殘基1-183的任何部分的表位相結(jié)合，更具體地與包含或跨過SEQIDNO:73的殘基93-104或92-129的表位相結(jié)合，甚至更具體地與包含SEQIDNO:73的殘基92、93、99、101、102、104和129或SEQIDNO73的殘基93、101、102和104的表位相結(jié)合。在優(yōu)選實(shí)施方案中，抗體與包含或跨過SEQIDNO73的殘基93-104或92-129的表位相結(jié)合，甚至更優(yōu)選地與包含或跨過SEQID勵(lì)73的殘基92、93、99、101、102、104和129或SEQIDNO:73殘基93、101、102和104的表位相結(jié)合，其中附帶條件為抗體不是(i)此處公開的Ab#6;(ii)包含分別如SEQIDNO:1和2所示的V1^P'序列的抗體;或(iii)包含分別如SEQIDNO:7、8和9所示的VHCDR1、CDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO10、11和12所示的VlCDR1、CDR2和CDR3序列的抗體。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，抗體與包含或跨過SEQIDNO:73的殘基93-104或92-129的表位相結(jié)合，甚至更具體地與包含SEQIDNO:73的殘基92、93、99、101、102、104和129或SEQIDNO:73的殘基93、101、102和104的表位相結(jié)合，其中附帶條件為抗體不是⑴此處公開的Ab#6；(ii)包含分別如SEQIDNO:1和2所示的Vh和Vl序列的抗體；(iii)包含分別如SEQIDNO:7、8和9所示的VfDRlXDR2和⑶R3序列以及分別如SEQIDNO10,11和12所示的VlCDR1、CDR2和CDR3序列的抗體；(iv)此處公開的Ab#3；(v)包含分別如SEQIDNO3和4所示的Vh和Vl序列的抗體；(vi)包含分別如SEQIDNO:13、14和15所示的VhCDRl、CDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO:16、17和18所示的VlCDRl、CDR2和CDR3序列的抗體；(vii)此處公開的Ab#17；(viii)包含分別如SEQIDNO35和36所示的Vh和Vl序列的抗體；(ix)包含分別如SEQIDNO:39、40和41所示的VhCDRl、CDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO:42、43和44所示的VlCDRUCDR2和CDR3序列的抗體；(X)此處公開的Ab#19；(xi)包含分別如SEQIDNO37和38所示的Vh和Vl序列的抗體；(xii)包含分別如SEQIDNO45,46和47所示的VhCDR1、CDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO48,49和50所示的VLCDR1、CDR2和CDR3序列的抗體。通過表面等離子共振分析或細(xì)胞結(jié)合分析進(jìn)行測(cè)量此處公開的優(yōu)選的抗體及其抗原結(jié)合部分的Kd為50nM或更低。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明的特定的抗體及其抗原結(jié)合部分包含重鏈可變區(qū)(Vh)，該重鏈可變區(qū)包含與SEQIDNOUSEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:35或SEQIDNO:37所示的重鏈可變區(qū)氨基酸序列至少80%(例如85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)相同的氨基酸序列。本發(fā)明其它特定的抗體及其抗原結(jié)合部分包含輕鏈可變區(qū)(\),該輕鏈可變區(qū)包含與SEQIDN0:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:36或SEQIDNO:38所示的輕鏈可變區(qū)氨基酸序列至少80%(例如85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)相同的氨基酸序列?？贵w還可以包含上述重鏈和輕鏈可變區(qū)兩者。抗體或其抗原結(jié)合部分的重鏈和輕鏈可變區(qū)通常包含一個(gè)或多個(gè)互補(bǔ)性決定區(qū)(OTR)。它們包含一個(gè)或多個(gè)⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)域。因此，本公開的其它特定的抗體及其抗原結(jié)合部分包含一個(gè)或多個(gè)選自包含SEQIDNO:7的重鏈可變區(qū)⑶R1、包含SEQIDNO8的重鏈可變區(qū)CDR2、包含SEQIDNO9的重鏈可變區(qū)CDR3、包含SEQIDNO10的輕鏈可變區(qū)⑶R1、包含SEQIDNO11的輕鏈可變區(qū)⑶R2、包含SEQIDNO12的輕鏈可變區(qū)⑶R3及其組合的⑶R序列。本公開的再其它的特定抗體及其抗原結(jié)合部分包含一個(gè)或多個(gè)選自包含SEQIDNO13的重鏈可變區(qū)CDR1、包含SEQIDNO14的重鏈可變區(qū)CDR2、包含SEQIDNO15的·重鏈可變區(qū)⑶R3、包含SEQIDNO16的輕鏈可變區(qū)⑶R1、包含SEQIDNO17的輕鏈可變區(qū)⑶R2、包含SEQIDNO18的輕鏈可變區(qū)⑶R3及其組合的⑶R序列。本公開的再其它的特定抗體及其抗原結(jié)合部分包含一個(gè)或多個(gè)選自包含SEQIDNO19的重鏈可變區(qū)CDR1、包含SEQIDNO20的重鏈可變區(qū)CDR2、包含SEQIDNO21的重鏈可變區(qū)CDR3、包含SEQIDNO22的輕鏈可變區(qū)CDR1、包含SEQIDNO23的輕鏈可變區(qū)⑶R2、包含SEQIDNO24的輕鏈可變區(qū)⑶R3及其組合的⑶R序列。本公開的再其它的特定抗體及其抗原結(jié)合部分包含一個(gè)或多個(gè)選自包含SEQIDNO39的重鏈可變區(qū)CDR1、包含SEQIDNO40的重鏈可變區(qū)CDR2、包含SEQIDNO41的重鏈可變區(qū)CDR3、包含SEQIDNO42的輕鏈可變區(qū)CDR1、包含SEQIDNO43的輕鏈可變區(qū)⑶R2、包含SEQIDNO44的輕鏈可變區(qū)CDR3及其組合的⑶R序列。本公開的再其它的特定抗體及其抗原結(jié)合部分包含一個(gè)或多個(gè)選自包含SEQIDNO45的重鏈可變區(qū)CDR1、包含SEQIDNO46的重鏈可變區(qū)CDR2、包含SEQIDNO47的重鏈可變區(qū)CDR3、包含SEQIDNO48的輕鏈可變區(qū)CDR1、包含SEQIDNO49的輕鏈可變區(qū)⑶R2、包含SEQIDNO50的輕鏈可變區(qū)⑶R3及其組合的⑶R序列?？贵w及其抗原結(jié)合部分還可以包含一個(gè)或多個(gè)與上述任何⑶R或⑶R的組合至少80%(例如85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)相同的CDR。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體及其抗體部分完全來自人體(即包括人⑶R和框架序列)。本公開的特定的人抗體包括具有源自人VH3種系基因的重鏈可變區(qū)和/或源自人VL2種系基因的輕鏈可變區(qū)的抗體。本發(fā)明還包括與此處所描述的任何抗體或其部分所結(jié)合的表位相同或重疊的表位(例如位于ErbB3的胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域I的表位)結(jié)合的抗體及其抗原結(jié)合部分，例如所述表位包含或跨過成熟ErbB3ErbB3(SEQIDNO:73)的氨基酸序列的任何殘基1-183的表位，更優(yōu)選地包含或跨過SEQIDNO73的殘基93-104或92-129的表位，甚至更優(yōu)選地包含SEQIDNO:73的殘基92、93、99、101、102、104和129或SEQIDNO:73的殘基93、101、102和104的表位)。本發(fā)明還包括與此處所描述的抗體具有相同表位結(jié)合活性的抗體(例如具有與Ab#6相同的序列或包含SEQIDNO73的殘基93-104的結(jié)合抗原的抗體)。本發(fā)明還包含與人ErbB3的胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合的抗體及其抗原結(jié)合部分，且其包含包含⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的重鏈可變區(qū)；及包含⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的輕鏈可變區(qū)，其中重鏈可變區(qū)CDRUCDR2和CDR3序列包含分別如SEQIDNO60或75(CDRl)、61(⑶R2)和62(⑶R3)所示的共有重鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3序列，和輕鏈可變區(qū)CDR1、CDR2和CDR3序列包含分別如SEQIDNO:66或77(CDRl)、67(⑶R2)和68或79(⑶R3)所示的共有輕鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3序列，其中附帶條件為抗體不是(i)此處公開的Ab#6；(ii)包含分別如SEQIDNO:1和2所示的Vh和\序列的抗體；或(iii)包含分別如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRl、CDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO10,11和12所示的VlCDR1、CDR2和CDR3序列的抗體。在優(yōu)選實(shí)施方案中，分離的抗體或其抗原結(jié)合部分與包含SEQIDN0:73的殘基92-129或93-104的人ErbB3的胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域I內(nèi)的表位結(jié)合。甚至更優(yōu)選地,分離的抗體或其抗原結(jié)合部分與包含SEQIDNO73的殘基92-129或93-104的人ErbB3的胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域I內(nèi)的表位結(jié)合且抑制表達(dá)ErbB3的癌細(xì)胞的增殖。優(yōu)選地，癌細(xì)胞是MALME-3M黑素瘤細(xì)胞、AdrR(ADRr)卵巢腺癌細(xì)胞或ACHN腎癌細(xì)胞且相對(duì)于對(duì)照(匹配的未經(jīng)處理的細(xì)胞)增殖降低了至少10%。在與人ErbB3的胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域I結(jié)合的分離的抗體或其抗原結(jié)合部分的另一實(shí)施方案中，當(dāng)選自SEQIDN0:73的殘基93(天冬酰胺)、殘基99(苯丙氨酸)、殘基101(甲硫氨酸)、殘基102(亮氨酸)和殘基104(酪氨酸)的人ErbB3的胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域I的任何一個(gè)氨基酸殘基被丙氨酸置換，或SEQIDNO:73的殘基92(酪氨酸)或129(酪氨酸)被苯丙氨酸置換以產(chǎn)生具有單個(gè)氨基酸置換的成熟ErbB3時(shí)，相較于抗體或其抗原結(jié)合部分與包含SEQIDNO:73(或其對(duì)應(yīng)片段)的未改變的氨基酸序列的人ErbB3的結(jié)合，抗體或其抗原結(jié)合部分與成熟ErbB3(或其片段)的結(jié)合顯著下降。優(yōu)選地，結(jié)合的顯著下降是結(jié)合的Kd值至少10倍的變化。本發(fā)明還包括與人ErbB3的胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域I結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合部分，且其包含包含⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的重鏈可變區(qū)；及包含⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的輕鏈可變區(qū)，其中重鏈可變區(qū)互補(bǔ)位包含分別如SEQIDNO63或76(CDRl)、64(CDR2)和65(CDR3)所示的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列，和輕鏈可變區(qū)互補(bǔ)位包含分別如SEQIDNO:69或78(CDR1)、70(CDR2)和71或80(⑶R3)所示的⑶RlXDR2和⑶R3序列，其中附帶條件為抗體不是(i)此處公開的Ab#6；(ii)包含分別如SEQIDNO:1和2所示的Vh和Vl序列的抗體;或(iii)包含分別如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRl、CDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO:10、11和12所示的\⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的抗體。本發(fā)明還包括與人ErbB3的胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域I特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述抗體或其抗原結(jié)合部分包含包含SEQIDNO:7或其保守氨基酸置換的重鏈可變區(qū)⑶Rl；包含SEQIDNO8或其保守氨基酸置換的重鏈可變區(qū)⑶R2；包含SEQIDNO9或其保守氨基酸置換的重鏈可變區(qū)⑶R3；包含SEQIDNO10或其保守氨基酸置換的輕鏈可變區(qū)⑶Rl；包含SEQIDNO11或其保守氨基酸置換的輕鏈可變區(qū)⑶R2;及包含SEQIDNO12或其保守氨基酸置換的輕鏈可變區(qū)⑶R3，其中抗體或其抗原結(jié)合部分與ErbB3的結(jié)合顯示出通過表面等離子共振分析或細(xì)胞結(jié)合分析所測(cè)量的50nM或更高的Kd。本發(fā)明的抗體包括抗體以及其它具有抗體樣性質(zhì)的蛋白質(zhì)支架(scaffold)的所有已知形式。例如，抗體可以是人抗體、人源化抗體、雙特異性抗體、嵌合抗體或具有抗體樣性質(zhì)的蛋白質(zhì)支架，例如，纖連蛋白或錨蛋白重復(fù)序列?？贵w還可以是FatuFab'2、ScFv、SMIP、親和體(affibody)、納米抗體(nanobody)或域抗體(domainantibody)。抗體還可以具有下述任何的同種型IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAl、IgA2、IgAsec、IgD和IgE。在又另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了包含此處所描述的抗體或抗原結(jié)合部分的組合、并與可接受的載體和/或輔料一起配制的組合物。在特定的實(shí)施方案中，組合物包含兩種或更多種與ErbB3上不同的表位結(jié)合的抗體或與不結(jié)合ErbB3的抗癌抗體組合的此處所描述的抗體。在再另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了編碼此處所描述的抗體及其抗原結(jié)合部分的分離的核酸。在特定的實(shí)施方案中，該核酸編碼重鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO25,SEQIDNO27,SEQIDNO:29、SEQIDNO:35或SEQIDN0:37至少80%(例如85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)相同或在高嚴(yán)格條件下與SEQIDNO:25、SEQIDNO:27、SEQIDNO29,SEQIDNO:35或SEQIDNO:37雜交的核苷酸序列；或編碼輕鏈可變區(qū)，其包含與SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO36或SEQIDNO38至少80%(例如85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)相同或在高嚴(yán)格條件下與SEQIDNO26,SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDN0:36或SEQIDNO:38雜交的核苷酸序列；或這些重鏈和輕鏈可變區(qū)的組合。本發(fā)明進(jìn)一步提供了表達(dá)和/或產(chǎn)生此處所描述的抗體及抗原結(jié)合部分的非人類轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物、雜交瘤和轉(zhuǎn)基因植物。本發(fā)明還提供了包含一種或多種此處所描述的分離的抗體或其抗原結(jié)合部分及任選的用于治療或診斷與ErbB3依賴性信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)的疾病(例如癌癥)的說明的試劑盒。此處公開的抗體及其抗原結(jié)合部分可被用于廣泛的治療和診斷應(yīng)用中，特別是用于癌癥應(yīng)用中。因此，本發(fā)明的另一方面提供了通過施用足以抑制EGF樣介導(dǎo)的ErbB3磷酸化的量的一種或多種此處所描述的抗體或其抗原結(jié)合部分來抑制受試者中EGF樣配體介導(dǎo)的ErbB3磷酸化的方法。本發(fā)明進(jìn)一步提供了通過施用足以治療癌癥的量的一種或多種此處所描述的抗體或其抗原結(jié)合部分來治療受試者中多種癌癥的方法，癌癥包括但不局限于黑素瘤、乳腺癌、卵巢癌、腎癌、胃腸癌/結(jié)腸癌、肺癌、透明細(xì)胞肉瘤和前列腺癌。在一個(gè)實(shí)施方案中，癌癥包括包含KRAS突變的細(xì)胞。示例性的KRAS突變是人KRAS基因的密碼子12和密碼子13中的任一個(gè)或兩者。通常各自編碼甘氨酸的密碼子12和密碼子13的突變(包括將野生型甘氨酸12或甘氨酸13變?yōu)楦拾彼?、精氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸或纈氨酸)為促進(jìn)腫瘤生成的活化KRAS突變，如在人KRAS基因的密碼子15、20、61和146中的突變。在另一實(shí)施方案中，癌癥包括包含PI3K(磷脂酰肌醇3-激酶)突變的細(xì)胞。示例性的PI3K突變?yōu)槿薖IK3CA基因中外顯子9或外顯子20中的任一個(gè)或兩者中的活化突變。抗體或其抗原結(jié)合部分可以單獨(dú)施用，也可以與其它治療劑(例如抗癌劑，比如其它抗體、化學(xué)治療劑和/或輻射)聯(lián)合施用。媒介物在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合部分與第二試劑組合施用，第二試劑選自蛋白質(zhì)合成抑制劑、生長抑素類似物、免疫治療劑和酶抑制劑。在其它實(shí)施方案中，第二試劑選自靶向IGFlR的小分子、靶向EGFR的小分子、靶向ErbB2的小分子、靶向cMET的小分子、抗代謝物、烷化劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、微管靶向劑、激酶抑制劑、激素療法、糖皮質(zhì)激素、芳香酶抑制劑、mTOR抑制劑、化學(xué)治療劑、蛋白激酶B抑制劑、磷脂酰肌醇3-激酶、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑和MEK抑制劑。組合療法中用作第二試劑的示例性抗體包括抗-Her2抗體,例如曲妥珠單抗和抗-EGFR抗體,例如帕尼單抗(panitumumab)或西妥昔單抗(cetuximab)。組合療法中用作第二試劑的某些優(yōu)選的抗癌劑包括埃羅替尼、拉帕替尼、紫杉醇和順鉬。在又其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于診斷和預(yù)測(cè)ErbB3相關(guān)疾病(例如癌癥)的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，這是通過將本公開的抗體或抗原結(jié)合部分與來自受試者的細(xì)胞相接觸(例如體外或體內(nèi))、并測(cè)量與細(xì)胞上ErbB3結(jié)合的水平實(shí)現(xiàn)的，其中異常高的ErbB3結(jié)合水平顯示受試者患有與ErbB3相關(guān)的癌癥。本發(fā)明的其它特征和優(yōu)勢(shì)將會(huì)在下述的具體說明和權(quán)利要求書中體現(xiàn)出來。附圖簡述圖1A和IB為柱狀圖，描述了使用山羊抗人Alexa647第二抗體(GAHu-Alexa674)的各種抗ErbB3候選抗體與MALME-3M黑素瘤細(xì)胞上表達(dá)的ErbB3的結(jié)合。在這些實(shí)驗(yàn)中表示為“AM”的抗體以Fab片段的形式使用且“GAHu-Alexa674”表示單獨(dú)用作對(duì)照的熒光染料偶聯(lián)的第二抗體，而“未染色”表示在不存在第二抗體的情況下的對(duì)照。圖2A-2D為曲線圖，描述了抗體與ErbB3的結(jié)合，如各種抗ErbB3候選抗體的Kd值所示。圖2A和2B為曲線圖，分別描述了使用表面等離子共振(SPR)技術(shù)測(cè)量和式KD=kd/ka得到的Ab#6和Ab#3的Kd值。圖2C和2D為曲線圖，分別描述了通過細(xì)胞結(jié)合分析使用MALME-3M黑素瘤細(xì)胞測(cè)量和式Y(jié)=Bmax*X/KD+X得到的Ab#6和Ab#3的Kd值。圖3為曲線圖，描述了使用ELISA得到的抗ErbB3抗體(Ab#6)與ErbB3的結(jié)合特異性。EGFR細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域、牛血清白蛋白(BSA)和TGFa用作對(duì)照。圖4為曲線圖，描述了使用ELISA測(cè)量得到的抗ErbB3抗體(Ab#6)在體外降低MALME-3M黑素瘤細(xì)胞中的總ErbB3水平的能力。圖5A和5B為曲線圖，描述了使用FACS分析測(cè)量得到的抗ErbB3抗體(Ab#6)下調(diào)MALME-3M細(xì)胞上的ErbB3受體的能力，如以下實(shí)施例5所述。圖5A顯示了使用抗體的IgGl同種型的結(jié)果。圖5B顯示了使用抗體的IgG2同種型的結(jié)果。圖6A-6D為曲線圖，描述了使用FACS分析測(cè)量得到的抗體介導(dǎo)的ErbB3下調(diào)(Ab#6)的時(shí)間過程。圖7顯示了藥效學(xué)研究的結(jié)果。柱狀圖描述了注射后24小時(shí)的結(jié)果，顯示針對(duì)體內(nèi)異種移植物中MALME3M黑素瘤細(xì)胞中的總ErbB3水平的抗ErbB3抗體?？梢钥闯?，數(shù)據(jù)顯示Ab#6下調(diào)ErbB3的能力。圖8為柱狀圖，描述了抗ErbB3抗體(Ab#6)在體內(nèi)下調(diào)AdrR異種移植物中的ErbB3的能力。顯示了AdrR異種移植物中的總ErbB3水平。圖9為曲線圖，描述了抗ErbB3抗體(Ab#6)在CellTiter-Glo分析中抑制MALME-3M細(xì)胞增殖的能力。圖10為曲線圖，描述了抗ErbB3抗體(Ab#6)抑制AdrR細(xì)胞的細(xì)胞增殖的能力。圖11為曲線圖，描述了抗ErbB3抗體(Ab#6)抑制ACHN細(xì)胞增殖的能力。圖12為柱狀圖，描述了抗ErbB3抗體(Ab#6)在體內(nèi)抑制AdrR異種移植物中ErbB3磷酸化的能力。圖13A-13C為曲線圖，描述了抗ErbB3抗體(Ab#6)抑制AdrR細(xì)胞中@細(xì)胞素、神經(jīng)調(diào)節(jié)素和TGFa介導(dǎo)的ErbB3磷酸化的能力。圖14A-14B為曲線圖，描述了抗ErbB3抗體(Ab#6IgG2同種型)抑制卵巢腫瘤細(xì)胞系OVCAR5和OVCAR8中ErbB3磷酸化的能力。圖15A-15C為曲線圖，描述了3細(xì)胞素(BTC)結(jié)合ErbBl的能力。如圖所示，3細(xì)胞素與ErbBl陰性MALME-3M細(xì)胞不結(jié)合(圖15A)，而分別在IOnM(圖15B)和200nM(圖15C)的濃度下與ErbBl陽性AdrR細(xì)胞結(jié)合。曲線圖還描述了西妥昔單抗對(duì)該結(jié)合的抑制。圖16A-16D為曲線圖，描述了抗ErbB3抗體(Ab#6IgG2同種型)抑制MALME-3M細(xì)胞(圖16A和16B)及0VCAR8細(xì)胞(16C和16D)中神經(jīng)調(diào)節(jié)素介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)的能力。圖16A描述了Ab#6抑制MALME-3M細(xì)胞中神經(jīng)調(diào)節(jié)素介導(dǎo)的ErbB3磷酸化的能力(IC5tl=1.5e-8)。圖16B描述了Ab#6抑制MALME-3M細(xì)胞中AKT磷酸化的能力(IC50=1.le_8)。圖16C描述了Ab#6抑制0VCAR8細(xì)胞中神經(jīng)調(diào)節(jié)素介導(dǎo)的ErbB3磷酸化的能力(IC5tl=2.4e-8)。圖16B描述了Ab#6抑制0VCAR8細(xì)胞中AKT磷酸化的能力(IC50=6.7e_8)。圖17A-D為曲線圖，描述了通過異種移植物的研究得到的抗ErbB3抗體(Ab#6)抑制(圖17A)卵巢(AdrR細(xì)胞)、(圖17B)前列腺(Dul45細(xì)胞)、(圖17C)卵巢(0VCAR8細(xì)胞)和(圖17D)胰腺(Colo-357細(xì)胞)腫瘤生長的能力。圖18A和18B為曲線圖，描述了使用FACS分析測(cè)量得到的Ab#6(圖18A)和Ab#3的Fab(圖18B)抑制神經(jīng)調(diào)節(jié)素與MALME-3M細(xì)胞上的ErbB3結(jié)合的能力。圖19A描述了表皮調(diào)節(jié)素與AdrR細(xì)胞的結(jié)合，且圖19B描述了Ab#6而不是ERBITUX(西妥昔單抗)抑制表皮調(diào)節(jié)素與AdrR細(xì)胞結(jié)合的能力。圖20為曲線圖，描述了肝素結(jié)合性表皮生長因子(HB-EGF)與AdrR細(xì)胞結(jié)合的能力。圖21A-21C顯示了抗體(Ab#6,Ab#3,Ab#14、Ab#17和Ab#19)的重鏈和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列。圖22A-22B顯示了抗體(Ab#6、Ab#3和Ab#14)的重鏈和輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列。圖23顯示了抗體(Ab#6、Ab#17和Ab#19)輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列,其回復(fù)為相應(yīng)的種系氨基酸序列。實(shí)現(xiàn)這種回復(fù)的氨基酸殘基的改變處(與圖21比較)添加了下劃線。圖24A和圖24B為曲線圖，顯示了Ab#6抑制腫瘤細(xì)胞VEGF分泌的能力(參見實(shí)施例11)。圖24C顯示了Ab#6抑制VEGF分泌與抑制腫瘤細(xì)胞中pErbB3之間的關(guān)聯(lián)。圖25為曲線圖，顯示了Ab#6對(duì)細(xì)胞遷移的作用(參見實(shí)施例12)。對(duì)照OyM=單獨(dú)的RPMI培養(yǎng)基，對(duì)照8iiM=RPMI培養(yǎng)基+8uMAb#6,FBSOmM=RPMI培養(yǎng)基+10%FBS,FBS8uM=RPMI培養(yǎng)基+10%FBS+8uMAb#6。圖26A-圖26C為曲線圖，顯示了(圖26A)AdrR細(xì)胞中球狀體生長的抑制、(圖26B)AdrR中HRG誘導(dǎo)的球狀體生長的抑制，和(圖26C)Dul45細(xì)胞中HRG誘導(dǎo)的球狀體生長的抑制。圖27A和圖27B為曲線圖，顯示了Ab#6對(duì)HRG(圖27A)和BTC(圖27B)與AdrR細(xì)胞的結(jié)合的作用。圖28為曲線圖，顯示了Ab#6對(duì)AdrR細(xì)胞中HGF(肝細(xì)胞生長因子)誘導(dǎo)的ErbB3磷酸化的作用。確定HGF的IC5tl為2.439e-10。圖29A和圖29B顯示了Ab#6對(duì)(圖29A)pErbBl和pErbB3的磷酸化以及(圖29B)HRG誘導(dǎo)的ErbB2/3復(fù)合體形成的作用。圖30為曲線圖，顯示了單獨(dú)的Ab#6、單獨(dú)的埃羅替尼或Ab#6和埃羅替尼對(duì)裸鼠中ACHN移植瘤生長的作用。數(shù)據(jù)顯示300Ug劑量Ab#6(單獨(dú)施用時(shí)亞適量)和埃羅替尼的組合在27天后在統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著程度上協(xié)同地抑制腫瘤生長。圖31為曲線圖，顯示了單獨(dú)的Ab#6、單獨(dú)的紫杉醇或Ab#6和紫杉醇對(duì)裸鼠中DU145移植瘤生長的作用。數(shù)據(jù)顯示27天后300ug劑量Ab#6(單獨(dú)施用時(shí)亞適量)和紫杉醇的組合在統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著程度上協(xié)同地抑制腫瘤生長。圖32A為曲線圖，顯示了Ab#6單獨(dú)治療對(duì)KRAS突變A549肺癌細(xì)胞的多細(xì)胞腫瘤球狀體生長的作用。用0、0.001、0.01、0.1或lilMAb#6處理細(xì)胞7天。X軸上的“_4”對(duì)應(yīng)于“0”劑量。結(jié)果顯示Ab#6劑量反應(yīng)對(duì)KRAS突變腫瘤球狀體生長的作用。圖32B是在治療的第I天和第7天一組未經(jīng)IiiMAb#6治療或經(jīng)IiiMAb#6治療的代表性A549球狀體的照片。圖32C是曲線圖，顯示了Ab#6單獨(dú)治療對(duì)裸鼠中KRAS突變A549皮下異種移植瘤生長的作用。在第22天停止給予Ab#6(600iig,每3天I次)劑量。圖33A是曲線圖，顯示了Ab#6單獨(dú)治療、埃羅替尼單獨(dú)治療或用Ab#6與埃羅替尼組合治療對(duì)裸鼠中KRAS突變A549皮下異種移植瘤生長的作用。圖33B是曲線圖，顯示了Ab#6單獨(dú)治療、紫杉醇單獨(dú)治療或用Ab#6與紫杉醇組合治療對(duì)裸鼠中KRAS突變A549皮下異種移植瘤生長的作用。圖34A-34E顯示了Ab#6和對(duì)照抗ErbB3抗體(SGPl)與表達(dá)野生型ErbB3的CHO細(xì)胞(圖34A)或表達(dá)具有以下點(diǎn)突變D93A(圖34B)、MlOlA(圖34C)、L102A(圖34D)或Y104A(圖34E)之一的ErbB3的CHO細(xì)胞結(jié)合的FACS分析的結(jié)果。圖35A為曲線圖，顯示了Ab#6單獨(dú)治療對(duì)小鼠中PI3K突變SK0V3移植瘤生長的作用。圖35B為曲線圖，顯示了Ab#6單獨(dú)治療或與順鉬(⑶DP)組合治療對(duì)小鼠中PI3K突變SK0V3移植瘤生長的作用。圖36呈現(xiàn)了來自互補(bǔ)位映射實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)。顯示了相較于Ab#6的相同突變體與蛋白A的結(jié)合，單個(gè)氨基酸突變(關(guān)于指定的突變的特征，參見實(shí)施例20、表2)對(duì)Ab#6突變體與ErbB3結(jié)合的作用。平分曲線圖的對(duì)角線表示對(duì)ErbB3和蛋白A結(jié)合的作用的1:1對(duì)應(yīng)。通過將對(duì)角線向I軸下移了0.33和0.66來定位創(chuàng)建另外的平行線以便于將突變分組成三個(gè)類別(對(duì)結(jié)合作用大、對(duì)結(jié)合作用小及對(duì)結(jié)合無作用)。該圖顯示了對(duì)標(biāo)準(zhǔn)化為野生型Ab#6的突變的結(jié)合的作用。Y軸上的值是野生型Ab#6與ErbB3的結(jié)合與Ab#6突變體與ErbB3結(jié)合的比率。<I的比率意味著與野生型Ab#6相比突變體喪失了與ErbB3的結(jié)合，而>I意味著突變體比野生型Ab#6顯示出與ErbB3更強(qiáng)的結(jié)合。圖37A和圖37B為以下序列的示意圖Ab#6野生型重鏈可變區(qū)(VH)OTR1XDR2和CDR3序列(分別為SEQIDNO:7、8和9)，共有VhCDR1、CDR2和CDR3序列(分別為圖37A的SEQIDNO:60、61和62，及分別為圖37B的SEQIDNO:75、61和62)，VhCDRl、CDR2和CDR3互補(bǔ)位序列(分別為圖37A的SEQIDNO:63、64和65及圖37B的SEQIDNO:76、64、65)，Ab#6野生型輕鏈可變區(qū)(Vl)CDRUCDR2和CDR3序列(分別為SEQIDNO:10、11和12)，共有VlCDR1、CDR2和CDR3序列(分別為圖37A的SEQIDNO:66、67和68及圖37B的SEQIDNO77,67和79)以及VlCDR1、CDR2和CDR3互補(bǔ)位序列(分別為圖37A的SEQIDNO:69、70和71及圖37B的SEQIDNO:78、70和80)。在這些圖中，使用標(biāo)準(zhǔn)單字母氨基酸縮寫并且通過破折號(hào)分隔表示氨基酸的單字母來表示序列中的連續(xù)殘基，而通過一個(gè)或多個(gè)破折號(hào)分隔的兩個(gè)或更多個(gè)鄰近的表示氨基酸的單字母的任何組表示，這樣分隔的分組的鄰近氨基酸中的任一個(gè)可被置換為序列中該位置處的其它氨基酸中的任一個(gè)。例如，標(biāo)記法“(Xaa)7-W-T/A/G/S-L-(Xaa)/’表示如下從氨基端到羧基端連接的序列7個(gè)非特異性氨基酸，接著是色氨酸，接著是(蘇氨酸或丙氨酸或甘氨酸或絲氨酸)，接著是亮氨酸，接著是7個(gè)非特異性氨基酸。此處使用的“非特異性氨基酸”表示任何氨基酸可在命名為Xaa的每個(gè)位置處、甚至在若干這種位置處獨(dú)立地出現(xiàn)。Xaa或命名為Xaa#(例如“(Xaa)/’)的任何組的重復(fù)不表示這些序列中一個(gè)位置處非特異性氨基酸的指定組與任何其它位置處非特異性氨基酸的指定組之間的任何對(duì)應(yīng)。因此在序列“(Xaa),-W-T/A/G/S-L-(Xaa)7"的開頭和結(jié)尾處的(Xaa)7的重復(fù)不表示每個(gè)(Xaa)7的序列之間的任何對(duì)應(yīng)而是每個(gè)含有7個(gè)非特異性氨基酸。圖38A-D顯示了Ab#6(如所示，沿著X軸濃度降低)對(duì)AdrR細(xì)胞中配體誘導(dǎo)的ErbB3磷酸化(pErbB3水平；如所示，沿著Y軸濃度升高)的作用。在圖38A中，配體是HRG，在圖38B中，配體是BTC，在圖38C中，配體是HGF，且在圖38D中，配體是EGF。圖39為FACS曲線圖，顯示了Ab#6與ErbB3的胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域I結(jié)合。具體實(shí)施方案為了使本發(fā)明更容易理解，首先對(duì)一些術(shù)語進(jìn)行了定義。其它定義在通篇詳細(xì)描述中給出。1.定義術(shù)語1吐83”、“冊(cè)13”、1吐83受體”和“HER3受體”在此處可互換使用，是指人ErbB3蛋白質(zhì)，如美國專利No.5480968和Plowman等人,Proc.Natl.AcadSc1.USA,874905-4909(1990)中所述;還參見Kani等人，Biochemistry44:15842-857(2005)，Cho和Leahy,Science297:1330-1333(2002)。SEQIDNO:73中顯示了全長、成熟人ErbB3蛋白序列(無前導(dǎo)序列)。此序列對(duì)應(yīng)于圖4和美國專利No.5，480,968的SEQIDNO:4中顯示的序列，所述序列減去由成熟蛋白裂解的19個(gè)氨基酸的前導(dǎo)序列。此處所使用的術(shù)語“EGF樣配體”是指表皮生長因子受體(EGFR)的配體，包括表皮生長因子(EGF)和密切相關(guān)的蛋白質(zhì)，例如轉(zhuǎn)化生長因子-a(TGFa),^細(xì)胞素(BTC)Jf素結(jié)合性表皮生長因子(HB-EGF)、biregulin(BIR)和雙神經(jīng)調(diào)節(jié)素(AR)，它們與細(xì)胞表面的EGRF結(jié)合并刺激受體的內(nèi)在蛋白質(zhì)-酪氨酸激酶活性。通常，EGF樣配體誘導(dǎo)形成EGFR與ErbB3的蛋白質(zhì)復(fù)合體(例如參見Kim等人，(1998)BiochemJ.，334:189-195)，因此導(dǎo)致復(fù)合體中酪氨酸殘基的磷酸化。此處公開的優(yōu)選抗體及其抗原結(jié)合部分抑制EGF樣配體介導(dǎo)的ErbB3磷酸化，并在某些實(shí)施方案中，顯示出一種或多種下述附加性質(zhì)(i)抑制神經(jīng)調(diào)節(jié)素、表皮調(diào)節(jié)素、epigen和biregulin中的一種或多種介導(dǎo)的通過ErbB3的信號(hào)傳導(dǎo)；(ii)抑制表達(dá)ErbB3的細(xì)胞的增殖；(iii)降低細(xì)胞表面ErbB3水平的能力；(iv)抑制表達(dá)ErbB3的細(xì)胞的VEGF分泌；(V)抑制表達(dá)ErbB3的細(xì)胞的遷移；(vi)抑制表達(dá)ErbB3的細(xì)胞的球狀體生長；和/或(vii)與位于ErbB3的胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域I上的表位特異性結(jié)合，例如與包含或跨過成熟ErbB3(SEQIDNO:73)氨基酸序列的殘基1_183的表位結(jié)合，更優(yōu)選地與包含或跨過或含有或含或包括SEQIDNO73的殘基92-129或93-104的表位結(jié)合，甚至更優(yōu)選地與包含或跨過或含有或含或包括SEQIDNO:73的殘基92、93、101、102和104和129或殘基93、101、102和104的表位結(jié)合。一種這樣的抗體Ab#6作為MM-121目前正在進(jìn)行I期臨床試驗(yàn)。此處所使用的術(shù)語“抑制”是指生物活性的任何統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的降低，包括活性的完全阻斷。例如，“抑制”可以指生物活性降低大約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%。因此，此處所使用的短語“EGF樣配體介導(dǎo)的ErbB3磷酸化的抑制”是指相對(duì)于未處理(對(duì)照)細(xì)胞中的磷酸化而言，抗體或抗原結(jié)合部分統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著地降低EGF樣配體誘導(dǎo)的ErbB3磷酸化的能力。表達(dá)ErbB3的細(xì)胞可以為天然發(fā)生的細(xì)胞或細(xì)胞系，或者可以通過向宿主細(xì)胞引入編碼ErbB3的核苷酸進(jìn)行重組制造。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合部分抑制EGF樣配體介導(dǎo)的ErbB3磷酸化至少為10%、或至少為20%、或至少為30%、或至少為40%、或至少為50%、或至少為60%、或至少為70%、或至少為80%、或至少為90%或約100%，這是通過例如Kim等人，(1998)BiochemJ.，334:189-195以及下文的實(shí)施例中描述的蛋白質(zhì)印跡法及隨后使用抗磷酸酪氨酸抗體進(jìn)行探測(cè)而確定的。此處所使用的短語“神經(jīng)調(diào)節(jié)素、表皮調(diào)節(jié)素、epigen和biregulin介導(dǎo)的通過ErbB3的信號(hào)傳導(dǎo)的抑制”是指相對(duì)于不存在抗體(對(duì)照)的信號(hào)傳導(dǎo)而言，抗體或其抗原結(jié)合部分統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著地降低由ErbB3配體(例如神經(jīng)調(diào)節(jié)素、表皮調(diào)節(jié)素、epigen和biregulin)介導(dǎo)的通過ErbB3的信號(hào)傳導(dǎo)的能力。此處的ErbB3_配體也稱作“神經(jīng)調(diào)節(jié)素樣配體”。這意味著在抗體或其抗原結(jié)合部分存在的情況下，相對(duì)于對(duì)照(沒有抗體)而言，在表達(dá)ErbB3的細(xì)胞中由神經(jīng)調(diào)節(jié)素、表皮調(diào)節(jié)素、epigen和biregulin中的一種或多種介導(dǎo)的信號(hào)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著地降低?？梢酝ㄟ^分析ErbB3底物和/或存在于涉及ErbB3的細(xì)胞級(jí)聯(lián)(cascade)中的蛋白質(zhì)的水平或活性來測(cè)量ErbB3_配體介導(dǎo)的信號(hào)。在一個(gè)實(shí)施方案中，相對(duì)于不存在抗體或其抗原結(jié)合部分時(shí)(對(duì)照)的水平或活性而言，抗體或其抗原結(jié)合部分降低ErbB3底物和/或在涉及ErbB3的細(xì)胞級(jí)聯(lián)中的蛋白質(zhì)的水平或活性至少為10%、或至少為20%、或至少為30%、或至少為40%、或至少為50%、或至少為60%、或至少為70%、或至少為80%、或至少為90%或100%。這樣的ErbB3-配體介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)可以使用本領(lǐng)域公認(rèn)的技術(shù)進(jìn)行測(cè)量，這些技術(shù)使用用于這些蛋白質(zhì)的激酶分析(參見，例如Horst等人，同上;Sudo等人(2000)MethodsEnzymol,322:388-92;和Morgan等人(1990)Eur.J.Biochem.，191:761-767)測(cè)量ErbB3的底物(例如SHC或PI3K)或在涉及ErbB3的細(xì)胞級(jí)聯(lián)中的蛋白質(zhì)(例如AKT途徑-AKT是指一組絲氨酸/蘇氨酸激酶，也稱為蛋白激酶B或PKB)的水平或活性。在特定的實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合部分通過抑制ErbB3_配體(例如神經(jīng)調(diào)節(jié)素、表皮調(diào)節(jié)素、epigen或biregulin中的一種或多種)與ErbB3的結(jié)合抑制ErbB3-配體(例如神經(jīng)調(diào)節(jié)素、表皮調(diào)節(jié)素、epigen或biregulin)介導(dǎo)的通過ErbB3的信號(hào)傳導(dǎo)。一些配體(例如biregulin,—種人工嵌合配體Barbacci等人，JBiolChem1995270(16)9585-9)既作為EGF樣配體(即與EGFR/ErbBl結(jié)合)也作為ErbB3樣配體(即與ErbB3結(jié)合)起作用。此處所使用的短語“神經(jīng)調(diào)節(jié)素、表皮調(diào)節(jié)素、epigen和biregulin與ErbB3結(jié)合的抑制”是指相對(duì)于不存在抗體(對(duì)照)的結(jié)合而言，抗體或抗原結(jié)合部分統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著地降低ErbB3配體(例如神經(jīng)調(diào)節(jié)素、表皮調(diào)節(jié)素、epigen或biregulin中的一種或多種)與ErbB3結(jié)合的能力。這意味著在不存在抗體或其抗原結(jié)合部分的情況下，相對(duì)于對(duì)照(沒有抗體)而言，與ErbB3結(jié)合的ErbB3-配體(例如神經(jīng)調(diào)節(jié)素、表皮調(diào)節(jié)素、印igen或biregulin)的量統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著地降低。在存在本公開的抗體或其抗原結(jié)合部分的情況下，相對(duì)于不存在抗體或其抗原結(jié)合部分(對(duì)照)時(shí)的量而言，與ErbB3相結(jié)合的ErbB3配體的量可以降低至少10%、或至少20%、或至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%、或至少90%或100%。ErbB3-配體結(jié)合的降低可以使用本領(lǐng)域公認(rèn)的技術(shù)進(jìn)行測(cè)量，這些技術(shù)測(cè)量存在或不存在(對(duì)照)抗體或其抗原結(jié)合部分的情況下標(biāo)記的ErbB3-配體(例如放射性標(biāo)記的神經(jīng)調(diào)節(jié)素、表皮調(diào)節(jié)素、epigen或biregulin)與表達(dá)ErbB3的細(xì)胞結(jié)合的水平。此處所使用的短語“抑制表達(dá)ErbB3的細(xì)胞的增殖”是指相對(duì)于不存在抗體時(shí)的增殖而言，抗體或其抗原結(jié)合部分統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著地降低表達(dá)ErbB3的細(xì)胞的增殖的能力。在一個(gè)實(shí)施方案中，相對(duì)于不存在抗體或其抗原結(jié)合部分時(shí)(對(duì)照)所測(cè)量到的增殖而言，當(dāng)細(xì)胞與本公開的抗體或其抗原結(jié)合部分接觸時(shí)，表達(dá)ErbB3的細(xì)胞(例如癌細(xì)胞)的增殖可以降低至少10%、或至少20%、或至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%、或至少90%或100%。細(xì)胞增殖可以使用本領(lǐng)域公認(rèn)的技術(shù)進(jìn)行分析，這些技術(shù)測(cè)量細(xì)胞分裂的速率、細(xì)胞群體中發(fā)生細(xì)胞分裂的比例和/或在細(xì)胞群體中由于終末分化或細(xì)胞死亡而造成的細(xì)胞損失率(例如使用CellTiter-Glo分析或胸苷摻入法)。此處所使用的短語“降低細(xì)胞表面ErbB3水平的能力”是指相對(duì)于未處理(對(duì)照)細(xì)胞而言，抗體或其抗原結(jié)合部分統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著地降低在與抗體接觸的細(xì)胞的表面上發(fā)現(xiàn)的ErbB3量的能力。例如，細(xì)胞表面ErbB3水平的降低有可能是由于ErbB3內(nèi)在化的增加(或ErbB3內(nèi)吞作用的提高)。在一個(gè)實(shí)施方案中，相對(duì)于不存在抗體或其抗原結(jié)合部分時(shí)(對(duì)照)的細(xì)胞表面表達(dá)或內(nèi)在化而言，抗體或其抗原結(jié)合部分降低細(xì)胞表面ErbB3的表達(dá)至少10%、或至少20%、或至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%、或至少90%或100%，和/或增加ErbB3受體的內(nèi)在化至少10%、或至少20%、或至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%、或至少90%或100%。在存在或不存在抗體或其抗原結(jié)合部分時(shí)細(xì)胞表面的ErbB3水平和/或ErbB3受體的內(nèi)在化可以使用本領(lǐng)域公認(rèn)的技術(shù)(例如Horst等人(同上)和此處的實(shí)施例中描述的技術(shù))很容易地進(jìn)行測(cè)量。此處所使用的短語“表達(dá)ErbB3的細(xì)胞的VEGF分泌的抑制”是指相對(duì)于不存在抗體時(shí)的VEGF分泌而言，抗體或其抗原結(jié)合部分統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著地降低表達(dá)ErbB3的細(xì)胞的VEGF分泌的能力。在一個(gè)實(shí)施方案中，相對(duì)于在不存在抗體或其抗原結(jié)合部分時(shí)(對(duì)照)測(cè)量得到的VEGF分泌而言，當(dāng)表達(dá)ErbB3的細(xì)胞(例如癌細(xì)胞)與本公開的抗體或其抗原結(jié)合部分接觸時(shí)細(xì)胞的VEGF分泌可以降低至少10%、或至少20%、或至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%、或至少90%或100%。VEGF分泌可以使用本領(lǐng)域公認(rèn)的技術(shù)(例如此處所描述的那些技術(shù))進(jìn)行分析。此處所使用的短語“表達(dá)ErbB3的細(xì)胞的遷移的抑制”是指相對(duì)于不存在抗體時(shí)的細(xì)胞遷移而言，抗體或其抗原結(jié)合部分統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著地降低表達(dá)ErbB3的細(xì)胞的遷移的能力。在一個(gè)實(shí)施方案中，相對(duì)于不存在抗體或其抗原結(jié)合部分時(shí)(對(duì)照)所測(cè)量得到的細(xì)胞遷移而言，當(dāng)表達(dá)ErbB3的細(xì)胞(例如癌細(xì)胞)與本公開的抗體或其抗原結(jié)合部分接觸時(shí)細(xì)胞的遷移可以降低至少10%、或至少20%、或至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%、或至少90%或100%。細(xì)胞遷移可以使用本領(lǐng)域公認(rèn)的技術(shù)(例如此處所描述的技術(shù))進(jìn)行分析。此處所使用的短語“表達(dá)ErbB3的細(xì)胞的球狀體(spheroid)生長的抑制”是指相對(duì)于不存在抗體時(shí)的細(xì)胞遷移而言，抗體或其抗原結(jié)合部分統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著地降低表達(dá)ErbB3的細(xì)胞的遷移的能力。在一個(gè)實(shí)施方案中，相對(duì)于不存在抗體或其抗原結(jié)合部分時(shí)(對(duì)照)所測(cè)量得到的細(xì)胞遷移，當(dāng)表達(dá)ErbB3的細(xì)胞(例如癌細(xì)胞)與本公開的抗體或其抗原結(jié)合部分相接觸時(shí)細(xì)胞的遷移可以降低至少10%、或至少20%、或至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%、或至少90%或100%。細(xì)胞遷移可以使用本領(lǐng)域公認(rèn)的技術(shù)(例如此處所描述的技術(shù))進(jìn)行分析。此處可互換使用的術(shù)語“抗體”或“免疫球蛋白”包括完整的抗體及其任何抗原結(jié)合片段(即“抗原結(jié)合部分”)或單鏈?！暗湫偷目贵w”包含由二硫鍵相互連接的至少兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈。各重鏈由重鏈可變區(qū)(此處簡稱為Vh)和重鏈恒定區(qū)組成。重鏈恒定區(qū)由三個(gè)結(jié)構(gòu)域CH1、CH2和CH3組成。各輕鏈由輕鏈可變區(qū)(此處簡稱為\)和輕鏈恒定區(qū)組成。輕鏈恒定區(qū)由一個(gè)結(jié)構(gòu)域CL組成。V1^P'區(qū)可以進(jìn)一步細(xì)分為高變區(qū)(稱為互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR))，夾雜著更加保守區(qū)域的區(qū)域(稱為框架區(qū)(FR))。各Vh和'由三個(gè)CDR和四個(gè)FR構(gòu)成，其從氨基端至羧基端的排列順序?yàn)镕R1、CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈和輕鏈的可變區(qū)包含與抗原相互作用的結(jié)合域?？贵w的恒定區(qū)可以介導(dǎo)免疫球蛋白與宿主組織或因子(包括各種免疫系統(tǒng)細(xì)胞(例如，效應(yīng)細(xì)胞)和經(jīng)典補(bǔ)體系統(tǒng)的第一成分(Clq))的結(jié)合。本公開的示例性的抗體包括抗體#1、3、6和14及其抗原結(jié)合部分。此處所使用的術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”(或簡稱為“抗體部分”)是指保持與抗原(例如ErbB3)特異性結(jié)合的能力的一個(gè)或多個(gè)抗體片段。已經(jīng)顯示抗體的抗原結(jié)合功能可以由全長抗體的片段完成。術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”涵蓋的結(jié)合片段的例子包括⑴Fab片段，一種由\、Vh、CL和CHl結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的單價(jià)片段；(ii)F(ab’)2片段，一種包含在鉸鏈區(qū)由二硫橋連接的兩個(gè)Fab片段的二價(jià)片段；(iii)由V1^PCHl結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的Fd片段；(iv)由抗體單臂的\和Vh結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的Fv片段；(V)包含Vh和\結(jié)構(gòu)域的dAb；(vi)由Vh結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的dAb片段(Ward等人(1989)Nature341,544-546)；(vii)由Vh或Vl結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的dAb;和(viii)分離的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)或(ix)兩個(gè)或更多個(gè)分離的CDR的組合，其任選地由合成的連接體接合。此外，盡管Fv片段的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域('和Vh)由獨(dú)立的基因編碼，它們可使用重組方法通過合成的連接體接合，該合成連接體使它們能夠成為單個(gè)蛋白鏈，其中'和VHg配對(duì)以形成單價(jià)分子(也被稱為單鏈Fv(ScFv);參見，例如Bird等人(1988)Science242，423-426;和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85，5879-5883。這樣的單鏈抗體還意圖包含在術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”之內(nèi)。使用本
技術(shù)領(lǐng)域：
技術(shù)人員已知的常規(guī)方法來獲得這些抗體片段，并且以篩選完整抗體的相同方式來對(duì)片段的效用進(jìn)行篩選?？梢酝ㄟ^重組DNA技術(shù)或完整免疫球蛋白的酶或化學(xué)切割來產(chǎn)生抗原結(jié)合部分。此處所使用的術(shù)語“單克隆抗體”是指從基本同源的抗體群獲得的抗體或制備成基本同源的抗體群，即組成該抗體群的各個(gè)抗體除了少量存在的可能的天然發(fā)生的突變以外都是相同的。單克隆抗體是高度特異性的，針對(duì)單個(gè)抗原位點(diǎn)。此外，與通常包括針對(duì)不同決定簇(表位)的不同抗體的常規(guī)(多克隆)抗體制劑相反，各單克隆抗體通常針對(duì)抗原上的單一決定簇?？梢允褂萌魏伪绢I(lǐng)域公認(rèn)的技術(shù)和那些在此描述的技術(shù)(例如，如Kohler等人(1975)Nature,256:495中描述的雜交瘤方法、如Lonberg等人(1994)Nature368(6474):856-859中描述的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、重組DNA方法(參見，例如U.S.Pat.No.4，816，567)制備單克隆抗體或者使用例如Clackson等人，Nature，352:624-628(1991)和Marks等人J.Mol.Biol，222:581-597(1991)中描述的技術(shù)利用噬菌體抗體庫制備單克隆抗體。單克隆抗體包括嵌合抗體、人抗體和人源化抗體，且可以是天然發(fā)生的或重組產(chǎn)生的。術(shù)語“重組抗體”是指通過重組方式制備、表達(dá)、創(chuàng)建或分離的抗體，例如(a)從免疫球蛋白基因(例如人免疫球蛋白基因)的轉(zhuǎn)基因或轉(zhuǎn)染色體的動(dòng)物(例如小鼠)中或從由該動(dòng)物制備的雜交瘤中分離的抗體、(b)從進(jìn)行轉(zhuǎn)化以表達(dá)所述抗體的宿主細(xì)胞(例如從轉(zhuǎn)染瘤)分離的抗體、(C)使用噬菌體展示從重組、組合抗體庫(例如包含人抗體序列)分離的抗體，和⑷使用涉及將免疫球蛋白基因序列(例如人免疫球蛋白基因)與其它DNA序列進(jìn)行剪接的任何其它方式制備、表達(dá)、創(chuàng)建或分離的抗體。這樣的重組抗體可以具有源自人種系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)。但是，在特定實(shí)施方案中，可以對(duì)這樣的重組人抗體進(jìn)行體外誘變，并因此重組抗體的％和'區(qū)的氨基酸序列是可能并非天然存在于體內(nèi)的人抗體種系集合(repertoire)中的序列，盡管它們?cè)醋匀朔N系Vh和'序列并與其相關(guān)。術(shù)語“嵌合免疫球蛋白”或“嵌合抗體”是指其可變區(qū)源自第一物種而其恒定區(qū)源自第二物種的免疫球蛋白或抗體。可以例如通過基因工程由屬于不同物種的免疫球蛋白基因片段構(gòu)建嵌合免疫球蛋白或抗體。此處所使用的術(shù)語“人抗體”意圖包括具有可變區(qū)的抗體，其中框架和CDR區(qū)均源自人種系的免疫球蛋白序列，例如如Kabat等人(參見Kabat等人(1991)SequencesofproteinsofImmunologicalInterest，F(xiàn)ifthEdition,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-3242)所描述的。此外，如果抗體包含恒定區(qū)，該恒定區(qū)也源自人種系免疫球蛋白序列。人抗體可以包含非由人種系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基(例如通過體外隨機(jī)或位點(diǎn)特異性誘變或通過體內(nèi)體細(xì)胞突變引入的突變)。但是，此處所使用的術(shù)語“人抗體”并不意圖包括其中源自另一哺乳動(dòng)物物種(例如小鼠)的CDR序列嫁接到人框架序列上的抗體。人抗體可以包含至少一個(gè)或多個(gè)由氨基酸殘基(例如非由人種系免疫球蛋白序列編碼的活性增強(qiáng)氨基酸殘基)置換的氨基酸。通常，人抗體可以包含最多達(dá)20個(gè)由不屬于人種系免疫球蛋白序列的部分的氨基酸殘基置換的位置。在特定的實(shí)施方案中，這些置換在CDR區(qū)域中，如下面所詳細(xì)描述的。術(shù)語“人源化免疫球蛋白”或“人源化抗體”是指包含至少一個(gè)人源化免疫球蛋白或抗體鏈(即至少一條人源化輕鏈或重鏈)的免疫球蛋白或抗體。術(shù)語“人源化免疫球蛋白鏈”或“人源化抗體鏈”(即“人源化免疫球蛋白輕鏈”或“人源化免疫球蛋白重鏈”)是指具有包含基本上來自人免疫球蛋白或抗體的可變框架區(qū)和基本上源自非人免疫球蛋白或抗體的互補(bǔ)性決定區(qū)(⑶幻(例如，至少一個(gè)⑶R、優(yōu)選兩個(gè)⑶R，更優(yōu)選三個(gè)⑶幻)和進(jìn)一步包含恒定區(qū)(例如在輕鏈的情況下，包含至少一個(gè)恒定區(qū)或其部分，和在重鏈的情況下，優(yōu)選包含三個(gè)恒定區(qū))的可變區(qū)的免疫球蛋白或抗體鏈(即，分別為輕或重鏈)。術(shù)語“人源化可變區(qū)”(例如，“人源化輕鏈可變區(qū)”或“人源化重鏈可變區(qū)”)是指包括基本源自人免疫球蛋白或抗體的可變框架區(qū)和基本源自非人免疫球蛋白或抗體的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)的可變區(qū)?！半p特異性”或“雙功能性抗體”是具有兩種不同的重/輕鏈對(duì)和兩種不同的結(jié)合位點(diǎn)的人工雜交抗體?？梢酝ㄟ^多種方法(包括雜交瘤的融合或Fab’片段的連接)來制備雙特異性抗體。參見，例如Songsivilai&Lachmann,(1990)Clin.Exp.1mmunol.79,315-321；Kostelny等人(1992)J.1mmunol.148，1547-1553。在特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明的雙特異性抗體包含ErbB3和IGF1-R(即胰島素樣生長因子1-受體)的結(jié)合位點(diǎn)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的雙特異性抗體包含ErbB3和C-MET的結(jié)合位點(diǎn)。在其它實(shí)施方案中，雙特異性抗體包含ErbB3的結(jié)合位點(diǎn)及ErbB2、ERbB3、ErbB4、EGFR、LewisY、MUC-l、EpCAM、CA125、前列腺特異性膜抗原、PDGFR-a、PDGFR-B,C-KIT或任何FGF受體的結(jié)合位點(diǎn)。此處所使用的“異種抗體”相對(duì)于產(chǎn)生這種抗體的轉(zhuǎn)基因非人生物體或植物進(jìn)行定義。此處所使用的“分離的抗體”是指基本上不含具有不同的抗原特異性的其它抗體的抗體(例如，特異性地與ErbB3相結(jié)合的分離的抗體基本上不含與ErbB3以外的其它抗原特異性地結(jié)合的抗體)。此外，分離的抗體通?；旧喜缓渌募?xì)胞物質(zhì)和/或蛋白質(zhì)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，具有不同的ErbB3結(jié)合特異性的“分離的”抗體的組合是在良好定義的組合物中進(jìn)行組合。此處所使用的“同種型”是指由重鏈恒定區(qū)基因編碼的抗體類(例如IgM或IgGl)。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合部分是選自IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAl、IgA2、IgAsec、IgD或IgE抗體同種型的同種型。在某些實(shí)施方案中，抗體為IgGl同種型。在其它實(shí)施方案中，抗體為IgG2同種型。此處所使用的“同種型轉(zhuǎn)換”是指抗體的類型或同種型從一個(gè)Ig類變?yōu)槠渌麵g類中的一個(gè)的現(xiàn)象。此處所使用的“非轉(zhuǎn)換同種型”是指當(dāng)未發(fā)生同種型轉(zhuǎn)換時(shí)產(chǎn)生的重鏈同種型類型；編碼非轉(zhuǎn)換同種型的CH基因通常為緊挨著功能性重排的VDJ基因下游的第一個(gè)CH基因。同種型轉(zhuǎn)換被分為典型的或非典型的同種型轉(zhuǎn)換。典型的同種型轉(zhuǎn)換通過編碼抗體的基因中涉及至少一個(gè)轉(zhuǎn)換序列區(qū)的重組事件而發(fā)生。非典型的同種型轉(zhuǎn)換可以通過例如人Ou和人Eu同源重組(S-相關(guān)缺失)發(fā)生。替代的非典型轉(zhuǎn)換機(jī)制(例如，特別是轉(zhuǎn)基因間的和/或染色體間的重組)可以發(fā)生并完成同種型轉(zhuǎn)換。此處所使用的術(shù)語“轉(zhuǎn)換序列”是指負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)換重組的那些DNA序列。“轉(zhuǎn)換供體”序列(典型地為U轉(zhuǎn)換區(qū))為在轉(zhuǎn)換重組過程中被刪除的構(gòu)建體(construct)區(qū)的5‘端(即上游)。“轉(zhuǎn)換受體”區(qū)是在將刪除的構(gòu)建區(qū)和置換恒定區(qū)(例如，Y、e等)之間。由于沒有總是發(fā)生重組的特定位點(diǎn)，因此最終的基因序列通常不能從構(gòu)建體進(jìn)行預(yù)測(cè)。“抗原”為抗體或其抗原結(jié)合部分結(jié)合的實(shí)體(例如，蛋白質(zhì)的實(shí)體或肽)。在此處公開的各種不同的實(shí)施方案中，抗原為ErbB3或ErbB3樣分子。在本發(fā)明的特定的實(shí)施方案中，抗原為人ErbB3。術(shù)語“表位”或“抗原決定簇”是指抗原上被免疫球蛋白或抗體特異性結(jié)合的位點(diǎn)。表位可以由相鄰氨基酸形成或通過蛋白質(zhì)的三級(jí)折疊而并置的不相鄰氨基酸形成。由相鄰的氨基酸形成的表位在接觸變性溶劑時(shí)通常仍會(huì)保留，而由三級(jí)折疊形成的表位通常在經(jīng)變性溶劑處理時(shí)會(huì)喪失。表位通常包括處于獨(dú)特的空間構(gòu)型的至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個(gè)氨基酸。確定表位空間構(gòu)型的方法包括本領(lǐng)域的技術(shù)和此處所描述的技術(shù)，例如，X射線晶體學(xué)和二維核磁共振。參見,例如EpitopesMappingProtocolsinMethodsinMolecularBiology,Vol.66,G.E.Morris,Ed.(1996)。本發(fā)明還包括結(jié)合與針對(duì)本公開的氨基酸序列的抗體具有相同或重疊的表位的抗體(即競爭結(jié)合ErbB3的抗體)或結(jié)合與此處所描述的抗體所結(jié)合的表位重疊的表位(即位于ErbB3的胞外結(jié)構(gòu)域,優(yōu)選地位于ErbB3的胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域I)的抗體。可以使用常規(guī)技術(shù)(例如免疫分析，比如表明一種抗體阻斷另一種抗體與靶抗原結(jié)合的能力，即競爭結(jié)合分析)來確認(rèn)識(shí)別相同的表位的抗體。競爭結(jié)合在其中所測(cè)試的免疫球蛋白抑制基準(zhǔn)抗體對(duì)共同抗原(例如ErbB3)的特異性結(jié)合的分析中確定。已知存在許多種競爭結(jié)合分析，例如固相直接或間接放射免疫分析(RIA)、固相直接或間接酶免疫分析(EIA)、夾心競爭分析(參見Stahli等人，(1983)MethodsinEnzymology9:242)、固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(參見Kirkland等人(1986)J.1mmunol.137:3614)、固相直接標(biāo)記分析、固相直接標(biāo)記夾心分析(參見Harlow和Lane,(1988)AntibodiesALaboratoryManual,ColdSpringHarborPress)、使用1-125標(biāo)記物的固相直接標(biāo)記RIA(參見Morel等人(1988)Mol.1mmunol.25(1):7)、固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Cheung等人(1990)Virology176:546)和直接標(biāo)記RIA(Moldenhauer等人,(1990)Scand.J.Tmmuno1.3277)。通常，這樣的分析涉及使用與攜帶未標(biāo)記的測(cè)試免疫球蛋白和標(biāo)記的基準(zhǔn)免疫球蛋白中的任一種的固相表面或細(xì)胞相結(jié)合的純化抗原(例如ErbB3)。通過確定在存在測(cè)試免疫球蛋白的情況下與固相表面或細(xì)胞相結(jié)合的標(biāo)記物的量來測(cè)量競爭抑制。通常測(cè)試免疫球蛋白過量存在。通常，當(dāng)競爭抗體過量存在時(shí)，其會(huì)抑制基準(zhǔn)抗體與共同抗原的特異性結(jié)合至少50-55%、55-60%、60-65%、65-70%、70-75%或更多。術(shù)語“互補(bǔ)位”是指抗體的一部分或氨基酸殘基，所述抗體似乎直接參與識(shí)別和接觸與抗體特異性結(jié)合的抗原上的表位?；パa(bǔ)位通常包含一些但不是所有的重鏈和輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)中的氨基酸殘基?；パa(bǔ)位可包含所有Vh和'CDR或僅一些CDR(例如，某些CDR可不參與結(jié)合抗原)中的氨基酸殘基。例如可通過抗體(具體地CDR)中氨基酸殘基的掃描誘變(例如丙氨酸掃描誘變)來定義特定抗原的互補(bǔ)位，認(rèn)為所述互補(bǔ)位表面暴露(例如，通過晶體學(xué)建模確定)且可能參與抗原結(jié)合。然后評(píng)估突變體與抗原的結(jié)合可確定是否突變的氨基酸位置參與抗原結(jié)合且因而形成抗體的互補(bǔ)位的一部分。在實(shí)施例20中進(jìn)一步詳細(xì)描述了確定抗體互補(bǔ)位的方法。在優(yōu)選實(shí)施方案中，抗ErbB3抗體包含重鏈互補(bǔ)位，所述重鏈互補(bǔ)位包含分別如SEQIDNO63或76(CDRl)、64(CDR2)和65(CDR3)所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，其中附帶條件為抗體不是(i)此處公開的Ab#6；(ii)包含分別如SEQIDNO:1和2所示的Vl序列的抗體;或Qii)包含分別如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDR1、CDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO10,11和12所示的VlCDR1、CDR2和CDR3序列的抗體。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，抗ErbB3抗體包含輕鏈互補(bǔ)位，所述輕鏈互補(bǔ)位包含分別如SEQIDNO69或78(CDRl)、70(CDR2)和71或80(CDR3)所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，其中附帶條件為抗體不是⑴此處公開的Ab#6；(ii)包含分別如SEQIDNO:1和2所示的％和'序列的抗體;或(iii)包含分別如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDR1、CDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO:10、11和12所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的抗體。在另一實(shí)施方案中，抗ErbB3抗體包含重鏈互補(bǔ)位和輕鏈互補(bǔ)位，所述重鏈互補(bǔ)位包含分別如SEQIDNO63,64和65所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，所述輕鏈互補(bǔ)位包含分別如SEQIDNO69,70和71所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，其中附帶條件為抗體不是⑴此處公開的Ab#6；(ii)包含分別如SEQIDNO:1和2所示的Vh和'序列的抗體；或(iii)包含分別如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRUCDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO10,11和12所示的VlCDR1、CDR2和CDR3序列的抗體。在另一實(shí)施方案中，抗ErbB3抗體包含重鏈互補(bǔ)位和輕鏈互補(bǔ)位，所述重鏈互補(bǔ)位包含分別如SEQIDNO76,64和65所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，所述輕鏈互補(bǔ)位包含分別如SEQIDNO78,70和80所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，其中附帶條件為抗體不是⑴此處公開的Ab#6；(ii)包含分別如SEQIDNO:1和2所示的Vh和'序列的抗體；或(iii)包含分別如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRUCDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO10,11和12所示的VlCDRUCDR2和CDR3序列的抗體。此處關(guān)于互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)使用的術(shù)語“共有序列”是指基于對(duì)于CDR中的氨基酸殘基可適當(dāng)修飾而不會(huì)損害抗原結(jié)合的信息所定義的CDR的復(fù)合或通用的序列。因此，在CDR的“共有序列”中，某些氨基酸的位置被該位置的一種或多種可能的氨基酸殘基占用。例如，CDR中，如果發(fā)現(xiàn)抗原結(jié)合不受在特定位置出現(xiàn)酪氨酸或苯丙氨酸的影響，那么共有序列中的特定位置可以是酪氨酸或苯丙氨酸(T/F)。例如可通過抗體⑶R中氨基酸殘基的掃描誘變(丙氨酸掃描誘變)定義CDR的共有序列，接著通過評(píng)估突變體與抗原的結(jié)合來確定是否突變的氨基酸位置影響抗原結(jié)合。實(shí)施例20中進(jìn)一步詳細(xì)描述了確定抗體CDR共有序列的方法。在優(yōu)選實(shí)施方案中，抗ErbB3抗體包含重鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含分別如SEQIDNO60或75(CDRl)、61(CDR2)和62(CDR3)所示的共有重鏈CDRl、CDR2和CDR3序列，其中附帶條件為抗體不是⑴此處公開的Ab#6；(ii)包含分別如SEQIDNO:1和2所示的Vh和Vl序列的抗體；或(iii)包含分別如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRUCDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO:10、11和12所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的抗體。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，抗ErbB3抗體包含輕鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)包含分別如SEQIDNO66或77(CDRl)、67(CDR2)和68或79(CDR3)所示的共有輕鏈CDRl、CDR2和⑶R3序列，其中附帶條件為抗體不是(i)此處公開的Ab#6；(ii)包含分別如SEQIDNO:1和2所示的Vh和Vl序列的抗體;或(iii)包含分別如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRl、CDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO:10、11和12所示的VlCDRl、CDR2和CDR3序列的抗體。在另一實(shí)施方案中，抗ErbB3抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含分別如SEQIDNO:60、61和62所示的共有重鏈CDR1、CDR2和CDR3序列，所述輕鏈可變區(qū)包含分別如SEQIDNO66,67和68所示的共有輕鏈CDR1、CDR2和CDR3序列，其中附帶條件為抗體不是⑴此處公開的Ab#6；(ii)包含分別如SEQIDNO:1和2所示的Vh和Vl序列的抗體;或(iii)包含分別如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRl、CDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO10,11和12所示的VlCDR1、CDR2和CDR3序列的抗體。在另一實(shí)施方案中，抗ErbB3抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含分別如SEQIDNO:75、61和62所示的共有重鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3序列，所述輕鏈可變區(qū)包含分別如SEQIDNO77,67和79所示的共有輕鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3序列，其中附帶條件為抗體不是(i)此處公開的Ab#6；(ii)包含分別如SEQIDNO:1和2所示的Vh和Vl序列的抗體;或(iii)包含分別如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRl、CDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO10,11和12所示的VlCDR1、CDR2和CDR3序列的抗體。此處所使用的術(shù)語“特異性的結(jié)合”、“特異性結(jié)合”、“選擇性的結(jié)合”和“選擇性結(jié)合”是指抗體或其抗原結(jié)合部分對(duì)特定的抗原或表位表現(xiàn)出可感知的親和力，且通常不表現(xiàn)出與其它抗原或表位的顯著的交叉反應(yīng)性。“可感知的”或優(yōu)選的結(jié)合包括親和力為至少IO6UO7UO8UO9M-1或IOkT1的結(jié)合。大于IO7M'優(yōu)選為104的親和力為更優(yōu)選的。本發(fā)明的范圍還包括此處所列的這些值之間的值，優(yōu)選的結(jié)合親和力可以表示為親和力的范圍，例如IO6至IOkiM'優(yōu)選為IO7至IOkiM'更優(yōu)選為IO8至IOkiM'“不表現(xiàn)出顯著的交叉反應(yīng)性”的抗體為不會(huì)與不希望的實(shí)體(例如不希望的蛋白質(zhì)實(shí)體)可感知地結(jié)合的抗體。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，與ErbB3特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合部分可感知地與該ErbB3分子相結(jié)合,而不會(huì)顯著地與其它ErbB分子及非ErbB蛋白質(zhì)或肽反應(yīng)?？筛鶕?jù)任何本領(lǐng)域公認(rèn)的確定特異性或選擇性結(jié)合的方式來確定這樣的結(jié)合，包括，例如根據(jù)斯卡查德分析和/或競爭結(jié)合分析確定特異性或選擇性結(jié)合。此處所使用的術(shù)語“Kd”是指特定的抗體-抗原相互作用的解離平衡常數(shù)或抗體對(duì)于抗原的親和力，優(yōu)選地使用表面等離子共振分析(使用重組ErbB3作為分析物且抗體作為配體在BIAC0RE3000儀器(GEHealthcare)中測(cè)定)或細(xì)胞結(jié)合分析。以下實(shí)施例3中詳述了這兩種分析。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分與抗原(例如ErbB3)相結(jié)合的親和力(Kd)為50nM或更好(即，更小)(例如40nM或30nM或20nM或IOnM或更小)。在特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分與ErbB3相結(jié)合的親和力(Kd)為8nM或更好(例如7nM、6nM、5nM、4nM、2nM、l.5nM、l.4nM、l.3nM、lnM或更小)。在其它實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合部分與抗原(例如ErbB3)相結(jié)合的親和力(Kd)大約小于KT7M'例如大約小于10_8M，10_9M或KTkiM或甚至更??；并且，抗體或其抗原結(jié)合部分以至少為與非特異性的抗原(例如BSA、酪蛋白)(預(yù)先確定的抗原或其密切相關(guān)的抗原以外的抗原)結(jié)合的親和力的兩倍的親和力與預(yù)先確定的抗原相結(jié)合。此處所使用的術(shù)語是指抗體從抗體/抗原復(fù)合物解離的解離速率常數(shù)。此處所使用的術(shù)語“EC50”是指在體外或體內(nèi)分析中，誘導(dǎo)出最大響應(yīng)的50%響應(yīng)(即最大響應(yīng)與基線的中間值)的抗體或其抗原結(jié)合部分的濃度。如此處所使用的，“糖基化模式”定義為與蛋白質(zhì)(更具體地，與免疫球蛋白蛋白質(zhì))共價(jià)結(jié)合的糖單元模式。·此處所使用的用于某一物體的術(shù)語“天然發(fā)生的”是指某一物體可以在自然界中發(fā)現(xiàn)的事實(shí)。例如，存在于可以從自然界的來源中分離出來且沒有在實(shí)驗(yàn)室中經(jīng)過人類進(jìn)行有意改變的生物體(包括病毒)中的多肽或多核苷酸序列為天然發(fā)生的。此處所使用的術(shù)語“重排的”是指重鏈或輕鏈免疫球蛋白基因座的構(gòu)型，其中，在實(shí)質(zhì)上編碼完整的Vh或\結(jié)構(gòu)域的構(gòu)型中，V片段分別緊挨著D-J或J片段。重排的免疫球蛋白基因座可以通過與種系DNA相比較進(jìn)行識(shí)別；重排的基因座將具有至少一個(gè)重組的七聚體/九聚體同源元件。此處所使用的涉及V片段的術(shù)語“未重排的”或“種系構(gòu)型”是指其中V片段未經(jīng)重組以至于緊挨著D或J片段的構(gòu)型。此處所使用的術(shù)語“核酸分子”意圖包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是單鏈或雙鏈的，但是優(yōu)選為雙鏈DNA。此處所使用的涉及編碼與ErbB3相結(jié)合的抗體或抗體部分(例如VH、\、⑶R3)的核酸的術(shù)語“分離的核酸分子”是指其中編碼抗體或抗體部分的核苷酸序列不含編碼與ErbB3之外的抗原相結(jié)合的抗體的其它核苷酸序列的核酸分子，該其它序列在人基因組DNA中可能天然側(cè)鄰該核酸。此處所使用的術(shù)語“修飾的”或“修飾”是指在抗體或其抗原結(jié)合部分中改變一個(gè)或更多個(gè)氨基酸。改變可以通過在一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)添加、置換或刪除氨基酸實(shí)現(xiàn)?？梢酝ㄟ^已知的技術(shù)來實(shí)現(xiàn)改變，例如PCR誘變。例如，在一些實(shí)施方案中，使用本公開的方法識(shí)別的抗體或其抗原結(jié)合部分可以進(jìn)行修飾，從而改變抗體或其抗原結(jié)合部分對(duì)ErbB3的結(jié)合親和力。本發(fā)明在本發(fā)明的抗體或其片段的序列中還包含“保守氨基酸置換”，即不會(huì)損害該核苷酸序列編碼的抗體或包含該氨基酸序列的抗體對(duì)抗原(即ErbB3)的結(jié)合的核苷酸和氨基酸序列修飾。保守氨基酸置換包括一個(gè)類型的氨基酸被相同類型的氨基酸置換，其中所述類型由共同的氨基酸側(cè)鏈物理化學(xué)性質(zhì)以及自然界中發(fā)現(xiàn)的同源蛋白質(zhì)中的高置換頻率確定，例如通過標(biāo)準(zhǔn)Dayhoff頻率交換矩陣(frequencyexchangematrix)或BLOSUM矩陣確定的。氨基酸側(cè)鏈被分為六大類，并包括I類(Cys);11類(Ser,Thr，Pro,Ala,Gly);III類(Asn，Asp，Gln，Glu);IV類(His,Arg,Lys);丫類(Ile，Leu，Val，Met)和VI類(Phe，Tyr，Trp)。例如，Asp置換另一III類的殘基(例如AsruGln或Glu)為保守置換。因此，在抗ErbB3抗體中預(yù)計(jì)的非關(guān)鍵氨基酸殘基優(yōu)選使用同一類中的另一氨基酸殘基進(jìn)行取代。識(shí)別不消除抗原結(jié)合的核苷酸和氨基酸保守置換的方法是本領(lǐng)域公知的(參見，例如Brummell等人Biochem.32:1180-1187(1993);Kobayashi等人ProteinEng.12(10)879-884(1999);和Burks等人Proc.Natl.Acad.Sc1.USA94:412-417(1997))。術(shù)語“非保守氨基酸置換”是指一類的氨基酸被另一類的氨基酸置換；例如，使用III類的殘基(例如Asp、Asn、Glu或Gln)來置換II類的殘基Ala?；蛘?，在另一個(gè)實(shí)施方案中，可以沿著整個(gè)或部分抗_ErbB3抗體編碼序列隨機(jī)引入突變(保守或非保守)，例如通過飽和誘變，且得到的修飾的抗_ErbB3抗體可以針對(duì)其結(jié)合活性進(jìn)行篩選?！肮灿行蛄小睘橄嚓P(guān)序列的族中最常見的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(參見，例如Winnaker,FromGenestoClones(Verlagsgesellschaft,ffeinheim,Germany1987)。在蛋白質(zhì)家族中，共有序列中的各位置都由家族中在該位置中最常見的氨基酸占據(jù)。如果兩個(gè)氨基酸出現(xiàn)的頻率相同，在該共有序列中可以包含其中的任一個(gè)。免疫球蛋白的“共有框架”是指共有免疫球蛋白序列中的框架區(qū)。同樣地，⑶R的共有序列可以通過本發(fā)明的ErbB3抗體的⑶R氨基酸序列的最優(yōu)比對(duì)得到，所述ErbB3抗體的CDR氨基酸序列公開于此處。對(duì)于核酸而言，術(shù)語“基本同源性”是指當(dāng)進(jìn)行優(yōu)化比對(duì)或?qū)Ρ葧r(shí)，兩個(gè)核酸或其指定序列有至少大約80%的核苷酸是相同的,通常至少大約90%至95%、更優(yōu)選為至少大約98%至99.5%的核苷酸是相同的，其具有適當(dāng)?shù)暮塑账岵迦牖蛉笔?。或者，片斷在選擇性雜交條件下與互補(bǔ)鏈雜交時(shí)存在基本同源性。兩個(gè)核苷酸序列之間的百分同一性是該序列共有的相同位置數(shù)的函數(shù)(即，％同源性=相同的位置#/總位置#xl00)，同時(shí)考慮在對(duì)兩個(gè)序列進(jìn)行最優(yōu)比對(duì)時(shí)需要引入的空位(gap)的數(shù)目和各空位的長度。序列的對(duì)比和兩個(gè)序列間百分同一性的確定可以使用下述非限定性的實(shí)施例所描述的數(shù)學(xué)算法來完成?？梢圆捎肎CG軟件的GAP程序，使用NWSgapdna.CMP矩陣和40、50、60、70或80的空位權(quán)重和1、2、3、4、5或6的長度權(quán)重,確定兩個(gè)核苷酸序列間的百分同一丨丨生。兩個(gè)核苷酸或氨基酸序列之間的百分同一性也可以使用已經(jīng)引入ALIGN程序(版本2.0)中的E.Meyers和W.Miller的算法(CABIOS,4:11-17(1989))、使用PAM120殘基權(quán)重表(weightresiduetable)、12的空位長度罰分和4的空位罰分來確定。此外,兩個(gè)氨基酸序列之間的百分同一性可以使用已經(jīng)引入到GCG軟件包的GAP程序中的Needleman和Wunsch算法(J.Mol.Biol.(48):444-453(1970))、使用Blossum62矩陣或PAM250矩陣及16、14、12、10、8、6或4的空位權(quán)重和1、2、3、4、5或6的長度權(quán)重來確定。本公開的核酸和蛋白質(zhì)序列還可以進(jìn)一步用作“探詢序列”對(duì)公眾數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，例如來識(shí)別相關(guān)序列。這樣的檢索可以使用Altschul等人(1990)J.Mol.Biol.215403-10的NBLAST和XBLAST程序(版本2.0)進(jìn)行。BLAST核苷酸檢索可以使用NBALST程序進(jìn)行(分?jǐn)?shù)=100，字長=12)以獲得與本發(fā)明的核酸分子同源的核苷酸序列。BLAST蛋白質(zhì)檢索可以使用XBLAST程序進(jìn)行(分?jǐn)?shù)=50，字長=3)以獲得與本發(fā)明的蛋白質(zhì)分子同源的氨基酸序列。為了獲得用于比較目的空位比對(duì)，可以使用如Altschul等人(1997)NucleicAcidsRes.25(17):3389-3402中描述的空位BLAST。當(dāng)使用BLAST和空位BLAST程序時(shí)，可以使用各程序(例如XBLAST和NBLAST)的默認(rèn)參數(shù)。核酸可以存在于完整細(xì)胞中、細(xì)胞溶解產(chǎn)物中或以部分純化或完全純化的形式存在。當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)(包括堿/SDS處理、CsCl顯帶、柱色譜法、瓊脂糖凝膠電泳和其它本領(lǐng)域公知的技術(shù))從其它細(xì)胞組分或其它污染物(例如其它細(xì)胞核酸或蛋白質(zhì))中純化出來時(shí)，核酸為“分離的”或“基本上純的”。參見，F(xiàn).Ausubel等人，ed.CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingandWileyInterscience,NewYork(1987)。盡管本公開的核酸組合物通常為天然序列(除了修飾的限制性位點(diǎn)等)，但來自cDNA、基因組或其混合物的本發(fā)明的核酸組合物可以按照標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)行突變來提供基因序列。對(duì)于編碼序列，這些突變可以按照需要來影響氨基酸序列。特別地，可以設(shè)想與天然的V、D、J、恒定序列、轉(zhuǎn)換序列和其它此處所描述的這類序列同源的或源自它們的DNA序列(其中“源自”表示一個(gè)序列與另一序列相同或由另一序列修飾得到)。術(shù)語“可操作地連接的”是指核酸序列與另一核酸序列具有功能性的關(guān)系。例如，如果前序列或分泌性前導(dǎo)體的DNA表達(dá)為參與多肽分泌的前蛋白，則該前序列或分泌性前導(dǎo)體的DNA可操作地與該多肽的DNA相連接；如果啟動(dòng)子或增強(qiáng)子影響編碼序列的轉(zhuǎn)錄，則該啟動(dòng)子或增強(qiáng)子可操作地與該編碼序列相連接；或者如果核糖體結(jié)合位點(diǎn)的位置促進(jìn)翻譯，則該核糖體結(jié)合位點(diǎn)可操作地與編碼序列相連接。通常，“可操作地連接”是指相連的DNA序列為相鄰的，且在分泌性前導(dǎo)體的情況中，相連的DNA序列是相鄰的并處于閱讀相(readingphase)中。但是，增強(qiáng)子并非一定是相鄰的。通過在方便的限制性位點(diǎn)的接合完成連接。如果不存在這樣的位點(diǎn)的話，可根據(jù)常規(guī)操作使用合成的寡核苷酸接頭或連接體。當(dāng)核酸和另一核酸序列具有功能性的關(guān)系時(shí)，該核酸是“可操作地連接的”。例如，如果啟動(dòng)子或增強(qiáng)子影響編碼序列的轉(zhuǎn)錄，該啟動(dòng)子或增強(qiáng)子可操作地與該編碼序列連接。當(dāng)涉及轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列時(shí)，可操作地連接是指連接的DNA序列是相鄰的，且在需要合并兩個(gè)蛋白質(zhì)編碼區(qū)時(shí)，連接的DNA序列是相鄰的并處于閱讀框中。對(duì)于轉(zhuǎn)換序列而言，可操作地連接是指該序列能夠?qū)崿F(xiàn)轉(zhuǎn)換重組。此處所使用的術(shù)語“載體”是指能夠轉(zhuǎn)運(yùn)與其連接的另一個(gè)核酸的核酸分子。載體的一種類型為“質(zhì)?！?，其是指附加的DNA片斷可接合到其中的環(huán)形雙鏈DNA環(huán)。另一種載體類型是病毒載體，其中附加的DNA片斷可以接合到病毒基因組中。特定的載體能夠在其進(jìn)入的宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行自主復(fù)制(例如具有細(xì)菌復(fù)制起點(diǎn)的細(xì)菌載體和游離型Gpisomal)哺乳動(dòng)物載體)。其它的載體(例如，非游離型哺乳動(dòng)物載體)可以在引入宿主細(xì)胞時(shí)整合到宿主細(xì)胞的基因組中，從而可以與宿主基因組一起進(jìn)行復(fù)制。此外，特定的載體能夠引導(dǎo)與它們可操作地連接的基因的表達(dá)。這樣的載體被此處稱為“重組表達(dá)載體”(或簡稱為“表達(dá)載體”)。一般而言，在重組DNA技術(shù)中應(yīng)用的表達(dá)載體通常是質(zhì)粒的形式。術(shù)語“質(zhì)?！焙汀拜d體”可互換使用。但是，本發(fā)明意圖包括這類其它形式的表達(dá)載體，例如病毒載體(例如，復(fù)制缺陷型反轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒)，它們都具有等同的功能。此處所使用的術(shù)語“重組宿主細(xì)胞”(或簡稱“宿主細(xì)胞”)是指引入重組表達(dá)載體的細(xì)胞。需要明白的是，這些術(shù)語并不僅指特定的所述細(xì)胞，還指這些細(xì)胞的后代。由于突變或環(huán)境影響導(dǎo)致在后代中可能會(huì)出現(xiàn)某些改變，因而事實(shí)上，這些后代可能與母細(xì)胞不相同，但是它們?nèi)匀话ㄔ诖颂幩褂玫男g(shù)語“宿主細(xì)胞”的范圍內(nèi)。此處所使用的術(shù)語“治療(treat)”、“治療(treating)”和“治療(treatment)是指此處所描述的治療性或預(yù)防性措施。“治療”方法包括對(duì)受試者(例如，患有與ErbB3依賴性信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)的疾病或障礙或傾向患有這樣的疾病或防礙的受試者)施用此處公開的抗體或其抗原結(jié)合部分，從而預(yù)防、治療、延遲該疾病或障礙或該疾病或障礙的復(fù)發(fā)、或降低其嚴(yán)重性，或減輕該疾病或障礙或該疾病或障礙的一種或多種癥狀，或者從而延長受試者的存活時(shí)間超過不接受這種治療時(shí)預(yù)期的時(shí)間。此處所使用的術(shù)語“與ErbB3依賴性信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)的疾病”或“與ErbB3依賴性信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)的障礙”包括如下疾病狀態(tài)和/或與疾病狀態(tài)相關(guān)的癥狀，其中發(fā)現(xiàn)ErbB3水平升高和/或涉及ErbB3的細(xì)胞級(jí)聯(lián)的激活。已經(jīng)知道當(dāng)發(fā)現(xiàn)ErbB3水平升高時(shí)，ErbB3與其它ErbB蛋白質(zhì)(例如EGFR和ErbB2)形成異二聚體。因此，術(shù)語“與ErbB3依賴性信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)的疾病”還包括其中發(fā)現(xiàn)EGFR/ErbB3和/或ErbB2/ErbB3異二聚體的水平升高的疾病狀態(tài)和/或與疾病狀態(tài)相關(guān)的癥狀。一般而言，“與ErbB3依賴性信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)的疾病”是指任何需要ErbB3參與的障礙、發(fā)作、發(fā)展或癥狀的持續(xù)。示例性的ErbB3介導(dǎo)的障礙包括，但不局限于例如癌癥。術(shù)語“癌癥”和“癌性”指的是或描述的是通常以失控的細(xì)胞生長為特征的哺乳動(dòng)物的生理狀況。癌癥的例子包括，但不局限于癌、淋巴瘤、胚細(xì)胞瘤、肉瘤和白血病。這樣的癌癥的更特定的例子包括扁平細(xì)胞癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、胃癌、胰腺癌、膠質(zhì)細(xì)胞腫瘤(例如成膠質(zhì)細(xì)胞瘤和神經(jīng)纖維瘤)、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細(xì)胞瘤、乳腺·癌、結(jié)腸癌、黑素瘤、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、唾液腺癌、腎臟癌、腎癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌和各種類型的頭部和頸部癌癥。在特定的實(shí)施方案中，使用此處公開的方法治療或診斷的癌癥選自黑素瘤、乳腺癌、卵巢癌、腎癌、胃腸/結(jié)腸癌、肺癌和前列腺癌。此處使用的術(shù)語“KRAS突變”是指在某些癌癥中在v-Ki_ras2Kirsten大鼠肉瘤病毒致癌基因人類同源物中的發(fā)現(xiàn)的突變。人KRAS基因mRNA序列的非限定性實(shí)例包括Genbank登記號(hào)NM_004985和NM_033360。據(jù)報(bào)道在73%胰腺腫瘤、35%結(jié)腸直腸腫瘤、16%卵巢腫瘤和17%肺腫瘤中發(fā)現(xiàn)KRAS突變。此處使用的術(shù)語“PI3K突變”是指在某些癌癥中在磷脂酰肌醇-3-激酶基因中發(fā)現(xiàn)的突變，通常導(dǎo)致癌細(xì)胞中PI3K的活化。據(jù)報(bào)道在12%結(jié)腸直腸腫瘤、15%頭頸部腫瘤和26%乳腺腫瘤中發(fā)現(xiàn)PI3K突變。此處所使用的術(shù)語“有效量”是指當(dāng)施用于受試者時(shí)，如此處所描述的結(jié)合ErbB3的抗體或其抗原結(jié)合部分足以發(fā)揮治療、預(yù)后或診斷與ErbB3依賴性信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)的疾病的作用的量。治療有效量根據(jù)接受治療的受試者和疾病、受試者的體重和年齡、疾病狀態(tài)的嚴(yán)重性、施用方式等的不同而變化，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以很容易確定治療有效量。根據(jù)本發(fā)明，施用劑量的范圍可以為大約Ing至大約lOOOOmg、大約5ng至大約9500mg、大約IOng至大約9000mg、大約20ng至大約8500mg、大約30ng至大約7500mg、大約40ng至大約7000mg、大約50ng至大約6500mg、大約IOOng至大約6000mg、大約200ng至大約5500mg、大約300ng至大約5000mg、大約400ng至大約4500mg、大約500ng至大約4000mg、大約IUg至大約3500mg、大約5iig至大約3000mg、大約10Ug至大約2600mg、大約20yg至大約2575mg、大約30iig至大約2550mg、大約40yg至大約2500mg、大約50yg至大約2475mg、大約100ug至大約2，450mg、大約200ug至大約2425mg、大約300ug至大約2000mg、大約400iig至大約1175mg、大約500iig至大約1，150mg、大約0.5mg至大約1125mg、大約Img至大約llOOmg、大約1.25mg至大約1075mg、大約1.5mg至大約1050mg、大約2.Omg至大約1025mg、大約2.5mg至大約lOOOrng、大約3.Omg至大約975mg、大約3.5mg至大約950mg、大約4.Omg至大約925mg、大約4.5mg至大約900mg、大約5mg至大約875mg、大約IOmg至大約850mg、大約20mg至大約825mg、大約30mg至大約800mg、大約40mg至大約775mg、大約50mg至大約750mg、大約IOOmg至大約725mg、大約200mg至大約700mg、大約300mg至大約675mg、大約400mg至大約650mg、大約500mg或大約525mg至大約625mg的抗體或其抗原結(jié)合部分?？梢哉{(diào)整施用方案以提供最佳治療反應(yīng)。有效量也是抗體或其抗原結(jié)合部分的任何毒性或有害效應(yīng)(即副作用)最小和/或被有益效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過的量。在以下藥物組合物相關(guān)的部分中進(jìn)一步描述了附加的優(yōu)選劑量方案。術(shù)語“患者”包括接受預(yù)防或治療處理的人和其它哺乳動(dòng)物受試者。此處所使用的術(shù)語“受試者”或“患者”包括任何人或非人類動(dòng)物。例如，此處公開的方法和組合物可用于治療患有癌癥的受試者。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，受試者是人。術(shù)語“非人類動(dòng)物”包括所有脊椎動(dòng)物，例如哺乳動(dòng)物或非哺乳動(dòng)物，例如非人類靈長類、羊、狗、牛等。術(shù)語“樣品”是指來自患者或受試者的組織、體液或細(xì)胞。通常組織或細(xì)胞會(huì)從患者身上取出，但是也可能進(jìn)行體內(nèi)診斷。在實(shí)體腫瘤的情況下，組織樣品可以從通過手術(shù)取出的腫瘤取得并通過常規(guī)技術(shù)制備以進(jìn)行測(cè)試。在淋巴瘤和白血病的情況下，可以獲得淋巴細(xì)胞、白血病細(xì)胞或淋巴組織并適當(dāng)?shù)刂苽?。其它的患者樣?包括尿、眼淚、血清、腦脊髓液、糞便、痰、細(xì)胞提取液等)也可用于特定的腫瘤。術(shù)語“抗癌劑”和“抗腫瘤劑”是指用于治療惡性腫瘤(例如癌生長)的藥物。藥物治療可以單獨(dú)使用，也可以與其它治療(例如手術(shù)或放射治療)聯(lián)合使用。取決于所涉及的器官的性質(zhì)，可以在癌癥治療中使用幾類藥物。例如，乳腺癌通常受到雌激素的刺激，因此可以使用滅活性激素的藥物來治療。同樣地，前列腺癌可以使用滅活雄激素(雄性的性激素)的藥物治療。本發(fā)明的某些方法中使用的抗癌劑特別包括下述物質(zhì)抗癌劑注釋例子抗體與IGF-1R(胰島素樣生長因A12(完全人源化mAb)(a)抗ErbB3子I型受體)結(jié)合的抗體，19D12(完全人源化mAb)抗體以外的其在大多數(shù)人癌細(xì)胞表面CP751-87I(完全人源化mAb)其它抗體；上表達(dá)H7C10(人源化mAb)和aIR3(小氣)(b)與不同表scFV/FC(小鼠/人嵌合體)位結(jié)合的抗EM/164(-J、鼠)ErbB3抗體AMG479(完全人源化的mAb;Amgen)IMCA12(完全人源化的mAb;Imclone)NSC-742460(Dyax)MR-0646，F(xiàn)50035(PierreFabreMedicament,Merck)權(quán)利要求1.一種分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其與人ErbB3的胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域I結(jié)合且包含包含重鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的重鏈可變區(qū)；及包含輕鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的輕鏈可變區(qū)，其中所述重鏈CDRl序列包含SEQIDNO60或75，所述重鏈CDR2序列包含SEQIDNO:61，所述重鏈CDR3序列包含SEQIDNO:62，所述輕鏈CDRl序列包含SEQIDNO66或77，所述輕鏈CDR2序列包含SEQIDNO:67，所述輕鏈CDR3序列包含SEQIDNO68或79，其中附帶條件為所述抗體不是(i)此處公開的Ab#6；(ii)包含分別如SEQIDNO1和2所示的Vl序列的抗體；或(iii)包含分別如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRUCDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO:10、11和12所示的VlCDRl、CDR2和CDR3序列的抗體。2.一種分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其結(jié)合包含SEQIDN0:73的殘基92-104的人ErbB3的表位并且特征為抑制表達(dá)ErbB3的癌細(xì)胞的增殖，其中附帶條件為所述抗體不是(i)此處公開的Ab#6；(ii)包含分別如SEQIDNO:1和2所示的Vh和\序列的抗體;或(iii)包含分別如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRl、CDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO10,11和12所示的VlCDR1、CDR2和CDR3序列的抗體。3.一種分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其結(jié)合包含SEQIDNO:73的殘基92-104的人ErbB3的表位并且特征為抑制表達(dá)ErbB3的癌細(xì)胞的增殖，其中附帶條件為所述抗體不是⑴此處公開的Ab#6；(ii)包含分別如SEQIDNO:1和2所示的Vh和\序列的抗體;或(iii)包含分別如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRl、CDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO10,11和12所示的VlCDRl、CDR2和CDR3序列的抗體；(iv)此處公開的Ab#3;(v)包含分別如SEQIDNO:3和4所示的Vh和八序列的抗體；(vi)包含分別如SEQIDNO:13、14和15所示的VhCDR1、CDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO:16、17和18所示的VlCDRl、CDR2和CDR3序列的抗體；(vii)此處公開的Ab#17;(viii)包含分別如SEQIDNO35和36所示的Vh和Vl序列的抗體；(ix)包含分別如SEQIDNO:39、40和41所示的VhCDR1、CDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO:42、43和44所示的八CDR1、CDR2和CDR3序列的抗體；(X)此處公開的Ab#19；(xi)包含分別如SEQIDNO37和38所示的Vh和Vl序列的抗體；或(xii)包含分別如SEQIDNO:45、46和47所示的VhCDRUCDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO:48、49和50所示的\，CDR1、CDR2和CDR3序列的抗體。4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述表位進(jìn)一步包含SEQIDNO73的殘基129。5.根據(jù)權(quán)利要求2或3或4所述的分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述癌細(xì)胞是MALME-3M細(xì)胞、AdrR細(xì)胞或ACHN細(xì)胞并且相對(duì)于對(duì)照所述增殖減少了至少10%。6.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4所述的分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其中，當(dāng)選自SEQIDNO73的殘基93(天冬酰胺)、殘基101(甲硫氨酸)、殘基102(亮氨酸)和殘基104(酪氨酸)的人ErbB3的任何一個(gè)氨基酸殘基被丙氨酸置換以產(chǎn)生具有單個(gè)氨基酸置換的突變ErbB3時(shí)，相較于所述抗體或其抗原結(jié)合部分與包含所述SEQIDN0:73的氨基酸序列的人ErbB3的結(jié)合，所述抗體或其抗原結(jié)合部分與所述突變ErbB3的結(jié)合顯著下降。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述結(jié)合的顯著下降是結(jié)合的Kd值的至少10倍變化。8.一種分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其與人ErbB3的胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域I結(jié)合且包含包含重鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的重鏈可變區(qū)；及包含輕鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的輕鏈可變區(qū)，其中所述重鏈CDRl序列包含SEQIDNO63或76，所述重鏈CDR2序列包含SEQIDNO:64，所述重鏈CDR3序列包含SEQIDNO:65，所述輕鏈CDRl序列包含SEQIDNO69或78，所述輕鏈CDR2序列包含SEQIDNO:70，所述輕鏈CDR3序列包含SEQIDNO:71或80，其中附帶條件為所述抗體不是(i)此處公開的Ab#6；(ii)包含分別如SEQIDNO:1和2所示的Vl序列的抗體；或(iii)包含分別如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRUCDR2和CDR3序列以及分別如SEQIDNO:10、11和12所示的VlCDRl、CDR2和CDR3序列的抗體。9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是人抗體、人源化抗體、雙特異性抗體或嵌合抗體。10.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合部分，其為人抗體、人源化抗體、雙特異性抗體或嵌合抗體的部分。11.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合部分，其中所述抗體或抗原結(jié)合部分選自Fab、Fab'2、scFv、SMIP、親和體、avimer、納米體和域抗體。12.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是選自IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAUIgA2、IgAsec、IgD和IgE的同種型。13.—種組合物，其包含在藥學(xué)上可接受的載體中的根據(jù)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合部分。14.一種治療受試者的癌癥的方法，其包括給所述受試者施用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求13所述的組合物。15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述癌癥包括包含KRAS突變或PI3K突變的任一種或兩者的細(xì)胞。16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述受試者是人并且所述KRAS突變包括人KRAS基因的密碼子12或密碼子13的突變。17.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述受試者是人并且所述PI3K突變包括人PIK3CA基因的外顯子9或外顯子20內(nèi)的突變。18.一種治療受試者的癌癥的方法，其包括給所述受試者施用治療有效量的第一試劑與治療有效量的第二試劑的組合，所述第一試劑為根據(jù)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，所述第二試劑為抗癌劑而不是所述第一試劑。19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述第二試劑包含抗體或其抗原結(jié)合部分。20.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述第二試劑選自蛋白質(zhì)合成抑制劑、生長抑素類似物、免疫治療劑和酶抑制劑。21.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述第二試劑選自靶向IGFlR的小分子、靶向EGFR的小分子、靶向ErbB2的小分子、靶向cMET的小分子、抗代謝物、烷化劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制齊L1、微管祀向劑、激酶抑制劑、激素療法、糖皮質(zhì)激素、芳香酶抑制劑、mTOR抑制劑、化學(xué)治療劑、蛋白激酶B抑制劑、磷脂酰肌醇3-激酶、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑和MEK抑制劑。22.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述第二試劑為帕尼單抗、曲妥珠單抗或西妥昔單抗。23.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述第二試劑為紫杉醇。24.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述第二試劑為順鉬。25.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述第二試劑為埃羅替尼或拉帕替尼。全文摘要本發(fā)明提供了一類新型的結(jié)合ErbB3受體的胞外結(jié)構(gòu)域并抑制各種ErbB3功能的抗體及其抗原結(jié)合片段。例如，此處所述的抗體和抗原結(jié)合片段能夠結(jié)合命名為ErbB3的受體并抑制EGF樣配體介導(dǎo)的受體磷酸化。這些抗體及其抗原結(jié)合片段具有抑制表達(dá)ErbB3的癌細(xì)胞增殖的有用特征。文檔編號(hào)A61K39/395GK103002912SQ201080047718公開日2013年3月27日申請(qǐng)日期2010年8月23日優(yōu)先權(quán)日2009年8月21日發(fā)明者B·舍貝爾,U·尼爾森,M·菲爾德豪斯申請(qǐng)人:梅里麥克制藥股份有限公司