包含益生菌的口服營養(yǎng)補充物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及營養(yǎng)領域。特別地，本發(fā)明涉及口服補充物領域。本發(fā)明的一個實施方案涉及口服補充物領域，所述口服補充物包含益生菌和/或有生物活性的非復制型益生菌，例如熱處理的益生菌。
【專利說明】包含益生菌的口服營養(yǎng)補充物
[0001]本發(fā)明涉及營養(yǎng)領域。特別地，本發(fā)明涉及口服補充物領域。本發(fā)明的一個實施方案涉及口服補充物領域，所述口服補充物包含益生菌和/或有生物活性的非復制型益生菌，例如熱處理的益生菌。
[0002]能量通過營養(yǎng)提供給人體。還通過營養(yǎng)提供人體需要以生長、行動和保持活力的結構單元。
[0003]營養(yǎng)主要為身體提供蛋白質、碳水化合物和脂質，盡管蛋白質、碳水化合物和脂質均可以用來產(chǎn)生能量，然而，全部大分子營養(yǎng)物的恰當平衡對于最佳支持人體和確保良好健康是必需的。
[0004]例如，由于蛋白質可以為身體提供肌肉活性的支持；脂肪是身體的良好能量貯備并且碳水化合物提供通常容易使用的能量，故需要營養(yǎng)物的恰當平衡以維持健康或從營養(yǎng)不良中恢復。
[0005]盡管通常最好通過平衡的飲食習慣提供平衡的營養(yǎng)，然而生活中存在需要口服營養(yǎng)補充物的情況。
[0006]營養(yǎng)不良對人群構成重大的風險，尤其但不限于對于年老人群，因為必需營養(yǎng)物供應不充分將造成進一步的健康問題。
[0007]例如，從疾病和手術恢復的人、患有糖尿病的人或因缺乏食欲而存在營養(yǎng)不良風險的人可能需要營養(yǎng)補充物以確?；蛑匦纶A得良好的健康狀態(tài)。
[0008]在任何情況下，營養(yǎng)支持必須適應個體的需要，原因在于營養(yǎng)需要隨人的年齡和健康狀況變化。
[0009]已經(jīng)設計了滿足人的特殊營養(yǎng)需要的幾種營養(yǎng)補充物并且目前在售。一般而言，此類補充物旨在以小體積提供增加量的能量和/或旨在提供大量的容易消化的蛋白質。
[0010]所述補充物可以針對特定類型的營養(yǎng)支持。例如，補充物可以為個體提供用于增加能量的額外熱量。雖然這些補充物提供某種量的營養(yǎng)支持，然而最感興趣的是對具體的營養(yǎng)要求提供具有增加的營養(yǎng)價值的組合物。
[0011]經(jīng)常地，口服營養(yǎng)補充物意圖針對健康狀況受損的人和/或針對正常消化和吸收食物存在問題的人。
[0012]希望能夠以減低炎癥程度的天然組合物和/或以允許腸道更好發(fā)揮作用的手段為此類患者提供營養(yǎng)支持，還為其提供免疫系統(tǒng)的支持。
[0013]目前，通過提供允許輕易吸收的加工的大分子營養(yǎng)物并通過抗炎食品成分或藥物解決這些需要。
[0014]本領域仍需要允許根據(jù)身體的特殊需要為其提供專門化營養(yǎng)，同時減少炎癥、增強免疫系統(tǒng)和/或改善消化的營養(yǎng)補充物。如果通過使用現(xiàn)有工業(yè)加工法，利用施用安全而無副作用并且容易摻入營養(yǎng)補充物的天然成分實現(xiàn)這一點，這將是優(yōu)選的。
[0015]本發(fā)明人已經(jīng)解決這種需要。因此本發(fā)明的目的是改善現(xiàn)有技術并提供滿足上述需要的口服營養(yǎng)補充物。
[0016]本發(fā)明人驚異于他們能夠通過獨立權利要求的主題實現(xiàn)該目的。從屬權利要求進一步發(fā)展本發(fā)明的構思。
[0017]因此，本發(fā)明人提出來提供包含益生菌的特定口服營養(yǎng)補充物。
[0018]發(fā)現(xiàn)益生菌能夠在液體口服營養(yǎng)補充物的環(huán)境下提供它們的健康益處。
[0019]由于液體口服營養(yǎng)補充物的貨架壽命通常超過包含益生菌的酸乳飲品的貨架壽命，故益生菌通常不添加至此類營養(yǎng)補充物，原因是在延長的貨架壽命期間確保益生菌活力的不確定性。
[0020]本發(fā)明人現(xiàn)在能夠顯示甚至非復制型益生菌可以提供益生菌的健康益處并且甚至可以具有改善的益處。
[0021]因而，本發(fā)明的一個實施方案是口服營養(yǎng)補充物，其具有0.8-1.5kcal/ml范圍內的熱量密度、390-660m0sm/kg水范圍內的重量摩爾滲透壓濃度，并且包含占該組合物的熱量約16-25%的蛋白質源、該組合物的熱量約34-68%的碳水化合物源、該組合物的熱量約15-44%的脂質源和益生微生物。
[0022]本發(fā)明的口服營養(yǎng)補充物優(yōu)選地是液體口服營養(yǎng)補充物。
[0023]在一個實施方案中，此類液體口服營養(yǎng)補充物可以作為腸營養(yǎng)(enteralnutrition)經(jīng)管飼法(tube feeding)施用。
[0024]例如，該營養(yǎng)補充物可以具有0.8-1.0kcal/ml范圍內的熱量密度、620-630m0sm/kg水范圍內的重量摩爾滲透 壓濃度，并且包含占該組合物的熱量約16-18%的蛋白質源、該組合物的熱量約66-68%的碳水化合物源和該組合物的熱量約15-17%的脂質源。
[0025]這種口服營養(yǎng)補充物可以施用至患有發(fā)育不正常、經(jīng)口養(yǎng)分攝入不足、乳糖不耐受、食欲降低、厭食相關性疾病和/或營養(yǎng)不良的患者。它也可以施用至腫瘤患者或施用至從手術、例如口腔手術恢復的患者。
[0026]例如，該營養(yǎng)補充物可以具有1.0-1.lkcal/ml范圍內的熱量密度、390-410m0sm/kg水范圍內的重量摩爾滲透壓濃度，并且包含占該組合物的熱量約21-23%的蛋白質源、該組合物的熱量約34-36%的碳水化合物源和該組合物的熱量約42-44%的脂質源。
[0027]這種組合物可以施用至患有糖尿病、高血糖癥或葡萄糖不耐受或存在發(fā)生此類病癥風險的人。該組合物可以含有設計旨在輔助控制血糖水平的纖維摻合物。這種纖維摻合物可以包含果低聚糖(Fructooligosaccharides)、大豆纖維和部分水解的瓜爾膠。
[0028]該組合物也可以施用至患有食欲降低和/或口攝取量不充足的患者。
[0029]例如，該營養(yǎng)補充物可以具有0.9-1.lkcal/ml范圍內的熱量密度、640-660m0sm/kg水范圍內的重量摩爾滲透壓濃度，并且包含占該組合物的熱量約23-25%的蛋白質源、該組合物的熱量約54-56%的碳水化合物源和該組合物的熱量約20-22%的脂質源。
[0030]這種組合物意圖例如針對具有高蛋白質要求的患者。
[0031]這種口服營養(yǎng)補充物可以施用至患有發(fā)育不正常、經(jīng)口養(yǎng)分攝入不足、乳糖不耐受、谷蛋白不耐受、食欲降低、容積不耐受(volume intolerance)、厭食相關性疾病和/或營養(yǎng)不良的患者。它也可以施用至腫瘤患者或施用至從手術、例如口腔手術恢復的患者。
[0032]也可以針對患者的需要調節(jié)脂肪酸組成?？梢允褂每寡字舅?。例如，本發(fā)明的口服營養(yǎng)補充物可以包含具有2.3:1至5:1范圍內的n6: n3脂肪酸比的脂質源。
[0033]本發(fā)明的口服營養(yǎng)補充物可以包含約82-88%的自由水。自由水對于滿足最低流體要求是必需的。一般而言，營養(yǎng)物攝取不充分的患者經(jīng)常也飲水不足。[0034]本發(fā)明的口服營養(yǎng)補充物可以包含選自乳蛋白濃縮物、來自乳的酪蛋白酸鈉和酪蛋白酸鈣、L-精氨酸或其組合中的蛋白質源。也可以針對患者的需要調節(jié)蛋白質源。一般而言，本發(fā)明的營養(yǎng)補充物可以具有75: I至130: I范圍內的NPC: N比。通過計算每日供應的氮克數(shù)(Ig N = 6.25g蛋白質)并且通過非蛋白質總千卡路里除以氮克數(shù)，計算非蛋白質千卡路里對氮比(NPC: N)。
[0035]一般而言，將具有80: I范圍內NPC: N比的營養(yǎng)補充物用于最嚴重應激的患者，將具有100: I范圍內NPC: N比的營養(yǎng)補充物用于嚴重應激的患者，并且將具有150: I范圍內NPC: N比的營養(yǎng)補充物用于未應激的患者。
[0036]該口服營養(yǎng)補充物可以部分地或僅包含非復制型益生微生物。 [0037]本發(fā)明人出人意料地看到，例如，就免疫增強作用而言和/或就抗炎作用而言，非復制型益生微生物甚至可以比復制型益生微生物更有效。
[0038]這是出人意料的，因為益生菌經(jīng)常被定義為“當足量施用時賦予宿主健康益處的活微生物”(FA0/WH0指南)。絕大多數(shù)的公開的文獻涉及活的益生菌。此外，幾項研究調查了由不復制型細菌遞送的健康益處，并且這些研究中的大部分表明益生菌的滅活(例如通過熱處理)導致所聲稱的健康益處喪失(Rachmilewitz, D.等人，2004, Gastroenterology 126:520-528 ；Castagliuolo 等人，2005, FEMS Tmmuno1.Med.Microbiol.43:197-204 ；Gill, H.S.和 K.J.Rutherfurd,2001, Br.J.Nutr.86:285-289 ；Kaila，M.等人，1995，Arch.Dis.Child 72:51-53.)。一些研究顯示死的益生菌可以保留一些健康作用(Rachmilewitz, D.等人，2004, Gastroenterology 126:520-528 ;Gill,
H.S.和 K.J.Rutherfurd，2001，Br.J.Nutr.86:285-289)，但是顯然，本領域迄今認為活的益生菌表現(xiàn)得更好。
[0039]本發(fā)明的口服營養(yǎng)補充物可以以任意的有效量(例如以對應于約IO6至IO12Cfu/g干重的量)包含益生微生物。
[0040]所述益生微生物可以是非復制型益生微生物。
[0041]“非復制型”益生微生物包括已經(jīng)熱處理過的益生細菌。這包括滅活的、死的、無活力和/或作為片段如DNA、代謝物、細胞質復合物和/或細胞壁物質存在的微生物。
[0042]“非復制型”意指不能通過常規(guī)平板方法檢測到活細胞和/或菌落形成單位。此類常規(guī)平板方法在微生物學書籍:James Monroe Jay, Martin J.Loessner, DavidA.Golden.2005.Modern food microbiology.第七版，Springer Science, New York,N.Y.第790頁中概述。一般而言，可以如下顯示活細胞的不存在:在不同濃度的細菌制備物(‘非復制型’樣品)并且在適宜條件(有氧和/或厭氧氣氛持續(xù)至少24小時)下培養(yǎng)后，瓊脂平板上無可見到的菌落或液體生長培養(yǎng)基中濁度不增加。
[0043]為本發(fā)明的目的，將益生菌定義為“有益影響宿主健康或福利的微生物細胞制品或微生物細胞組分”(Salminen S, Ouwehand A.Benno Y.等人,“益生菌:應當如何定義它們(Probiotics:how should they be defined)，，Trends Food Sc1.Technol.1999:10107-10)。
[0044]使用非復制型益生微生物的可能性提供了幾種優(yōu)勢。在免疫嚴重受損的患者中，活益生菌的使用可能在異常情況下因發(fā)生菌血癥的潛在風險而受限?？梢院翢o問題地使用非復制型益生菌。[0045]另外，非復制型益生微生物的提供允許熱重構(hot reconstitution),同時保留健康益處。
[0046]本發(fā)明的組合物以足夠至少部分地產(chǎn)生健康益處的量包含益生微生物和/或非復制型益生微生物。將足夠實現(xiàn)這一點的量定義為“治療有效量”。有效用于此目的的量將取決于本領域技術人員已知的多種因素，如此患者的重量和總體健康狀況，并且取決于食物基質的作用。
[0047]在預防性應用中，將本發(fā)明的組合物以這樣的量施用至易患某病癥或具有該病癥風險的消費者，所述的量足夠至少部分地降低發(fā)生該病癥的風險。將這種量定義為“預防有效量”。再次地，精確的量取決于多種因素，如此患者的健康狀況和重量，并且取決于食物基質的作用。
[0048]本領域技術人員將能夠適宜地調節(jié)治療有效量和/或預防有效量。
[0049]本發(fā)明的組合物以治療有效量和/或以預防有效量含有益生微生物和/或非復制型益生微生物。
[0050]一般而言，治療有效量和/或預防有效量處于每日劑量約0.005mg-1000mg益生微生物和/或非復制型益生微生物的范圍內。
[0051]就數(shù)字量而言，“短時高溫”處理的非復制型微生物可以在該組合物中以與IO4和IO12等價cfu/g的干組合物之間相對應的量存在。明顯地，非復制型微生物不形成菌落，因而，該術語應理解從IO4和1012cfu/g復制型細菌中獲得非復制型微生物的量。這包括滅活的、無活力的或死的或作為片段如DNA或者細胞壁物質或細胞質復合物存在的微生物。換而言之，組合物含有的微生物的量就這個量的微生物的菌落形成能力(cfu)而言進行表述，如同全部微生物是活的 那樣，而無論它們實際上是否不復制，如是滅活的或死的、片段化的或這些狀態(tài)中任意者或全部的混合體。
[0052]優(yōu)選地，非復制型微生物以等同于IO4至109cfu/g干組合物之間的量、甚至更優(yōu)選地以等同于IO5至109cfu/g干組合物之間的量存在。
[0053]可以通過本領域已知的任意方法使得益生菌不復制。
[0054]現(xiàn)在可用的使益生菌株不復制的技術通常是熱處理、Y-輻射、UV線或使用化學試劑(福爾馬林、多聚甲醛)。
[0055]將優(yōu)選使用在食品工業(yè)中工業(yè)條件下相對容易應用的技術來使益生菌不復制。
[0056]如今市場上含有益生菌的大部分產(chǎn)品在其生產(chǎn)期間經(jīng)熱處理。因此，將便利的是，能夠隨同產(chǎn)生的產(chǎn)品一起或至少以相似方式熱處理益生菌，同時益生菌保留或改善其對消費者而言的有益特征或甚至獲得新的有益特征。
[0057]然而，通過熱處理滅活益生微生物通常在文獻中與至少部分喪失益生活性有關。
[0058]本發(fā)明人現(xiàn)在已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)，使得益生微生物不復制，例如通過熱處理，沒有導致益生性健康益處喪失，而相反，可以增強現(xiàn)有的健康益處并且甚至產(chǎn)生新的健康益處。
[0059]因而，本發(fā)明的一個實施方案是口服營養(yǎng)補充物，其中通過熱處理使得非復制型益生微生物不復制。
[0060]這種熱處理可以在至少71.5°C實施至少I秒。
[0061]可以使用長時熱處理或短時熱處理。[0062]如今在工業(yè)規(guī)模，通常優(yōu)選短時熱處理，如UHT樣熱處理。這個類型的熱處理降低細菌載量，并且減少加工時間，因而減少養(yǎng)分的破壞。
[0063]本發(fā)明人首次展示，在高溫短時熱處理的益生微生物顯示出抗炎免疫譜，無論其初始特征是什么。具體地，通過這種熱處理，發(fā)展了新的抗炎譜(ant1-1nflammatoryprofile)或增強現(xiàn)有的抗炎譜。
[0064]因此，現(xiàn)在可以通過使用與可工業(yè)應用的常見熱處理相對應的具體參數(shù)產(chǎn)生具有抗炎免疫譜的非復制型益生微生物，即便活的對應菌株不是抗炎菌株。
[0065]因而，例如，熱處理可以是在約71.5_150°C高溫處理約1-120秒。該高溫處理可以是高溫/短時(HTST)處理或超高溫(UHT)處理。
[0066]益生微生物可以經(jīng)歷在約71.5_150°C持續(xù)約1-120秒短時的高溫處理。
[0067]更優(yōu)選地，益生微生物可以經(jīng)歷在約90-140°C (例如90-120°C )持續(xù)約1_30秒短時的高溫處理。
[0068]這種高溫處理使得微生物至少部分地不復制。
[0069]該高溫處理可以在常壓實施，但是也可以在高壓下實施。常見的壓力范圍是從I至50巴，優(yōu)選地從1-10巴，至更優(yōu)選從2至5巴。顯然，當熱施加時，如果益生菌在呈液態(tài)或固態(tài)的培養(yǎng)基中進行熱處理，則這是優(yōu)選。待施加的理想壓力因此將取決于其中提供所述微生物的組合物的性質并且取決于所用的溫度。
[0070]高溫處理可以在約71.5_150°C、優(yōu)選地約90_120°C、甚至更優(yōu)選約120_140°C的溫度范圍內實施。
[0071]高溫處理可以實施持續(xù)約1-120秒、優(yōu)選地約1-30秒、甚至更優(yōu)選約5-15秒的短時。
[0072]這個給定的時間框指益生微生物經(jīng)歷給定溫度的時間。注意，取決于其中提供所述微生物的組合物的性質和量并且取決于所用加熱裝置的架構，熱施加的時間可以不同。
[0073]然而一般而言，通過高溫短時(HTST)處理法、瞬間巴氏殺菌法或超高溫(UHT)處理法處理本發(fā)明的組合物和/或所述微生物。
[0074]UHT處理法是涉及通過在超過135°C (275 °F )的溫度將某組合物加熱持續(xù)短時約
1-10秒來至少部分滅菌該組合物的超高溫加工或超高熱處理法(二者均縮寫為UHT)，其中所述的溫度是殺死乳內細菌孢子所需要的溫度。例如，以這種方式使用超過135°C的溫度加工乳，導致細菌載量在能進行連續(xù)流操作的必需持續(xù)時間(至2-5秒)內降低。
[0075]存在兩種主要類型的UHT系統(tǒng):直接系統(tǒng)和間接系統(tǒng)。在直接系統(tǒng)中，通過蒸汽注射或蒸汽浸入法處理產(chǎn)品，而在間接系統(tǒng)中，使用板式換熱器、管式換熱器或刮面式換熱器對產(chǎn)品熱處理?？梢栽诋a(chǎn)品制備過程中的任意步驟或多個步驟使用UHT系統(tǒng)的組合。
[0076]HTST處理法定義如下(高溫/短時):設計旨在實現(xiàn)乳中活微生物數(shù)目下降5個對數(shù)或殺死乳中99.9999%活微生物的巴氏殺菌法。認為這足以摧毀幾乎全部酵母、霉菌和常見的腐敗細菌并且還確保充分摧毀常見的致病性耐熱生物。在HTST法中，將乳加熱至71.70C (161 0F )持續(xù) 15-20 秒。
[0077]瞬間巴氏殺菌是對易腐飲料如果汁和菜汁、啤酒和乳產(chǎn)品進行熱巴氏殺菌的方法。該方法在灌裝至容器之前進行，目的是殺死腐敗微生物，以使產(chǎn)品更安全并延長它們的貨架壽命。液體以受控的連續(xù)流運動，同時經(jīng)歷71.5°C (160 T )至74°C (165 T )的溫度約15至30秒。
[0078]為本發(fā)明的目的，例如，術語“短時高溫處理”應當包括高溫短時(HTST)處理、UHT處理和瞬間巴氏殺菌。
[0079]由于這種熱處理提供具有改善抗炎譜的非復制型益生菌，故本發(fā)明的口服營養(yǎng)補充物可以用于炎性病癥的預防或治療中。
[0080]不特別地限制可以由本發(fā)明的組合物治療或預防的炎性病癥。例如，這些炎性病癥可以選自由急性炎癥如膿毒病；灼傷；和慢性炎癥，例如炎性腸病，例如，節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結腸炎、隱窩炎(pouchitis);壞死性小腸結腸炎；皮膚炎癥，如UV或化學品誘導的皮膚炎癥、濕疹、反應性皮膚；腸激惹綜合征；眼部炎癥；變態(tài)反應、哮喘及其組合組成的組。
[0081]如果使用長時熱處理使益生微生物不復制，這種熱處理可以是在約70_150°C的溫度范圍實施約3分鐘-2小時，優(yōu)選地在80-140°C的范圍實施約5分鐘-40分鐘。
[0082]盡管現(xiàn)有技術一般教導就顯現(xiàn)其益生特征而言，因長時熱處理而變得不復制的細菌通常比活細胞更低效，然而，本發(fā)明人能夠顯示，熱處理的益生菌與它們的活對應物相比在刺激免疫系統(tǒng)方面是優(yōu)越的。
[0083]本發(fā)明也涉及包含益生微生物的口服營養(yǎng)補充物，其中通過在至少約70°C持續(xù)至少約3分鐘的熱處理使得所述益生微生物不復制。
[0084]通過體外免疫譜法證實非復制型益生菌的免疫增強作用。所用的體外模型使用來自人外周血單核細胞(PBMC)的細胞因子譜并且在本領域被充分接受作為檢驗免疫調節(jié)復合物的標準模型(Schultz 等人,2003, Journal of Dairy Research 70,165-173 ；Taylor等人，2006, Clinical and Experimental Allergy, 36,1227-1235 ;Kekkonen 等人，2008，World Journal of Gastroenterology,14,1192-1203) ?
[0085]體外PBMC測定法已經(jīng)由幾位作者/幾個研究小組使用來例如根據(jù)益生菌的免疫譜，即根據(jù)它們的抗炎或促炎特征對其分類(Kekkonen等人,2008, World Journal ofGastroenterology, 14,1192-1203)。例如，已經(jīng)顯示這種測定法允許預測益生候選物在小腸結腸炎小鼠模型中的抗炎作用(Foligne, B.等人,2007, World J.Gastroenterol.13:236-243)。另外，常規(guī)地使用該測定法作為臨床試驗中的讀出并且證明它導致與臨床結果相符的結果(Schultz 等人，2003, Journal of Dairy Research 70,165-173 ;Taylor 等人，2006, Clinical and Experimental Allergy,36,1227-1235)。
[0086]變態(tài)反應性疾病具有在過去數(shù)十年期間穩(wěn)定上升，并且它們目前被WHO視為流行病。在一般情況下，認為變態(tài)反應因免疫系統(tǒng)的Thl和Th2應答之間不平衡，從而引起強烈偏向Th2介質產(chǎn)生所致。因此，可以通過恢復免疫系統(tǒng)的Thl和Th2群之間的適宜平衡來減輕、下調或預防變態(tài)反應。這暗示降低Th2應答或增強(至少短暫)Thl應答的必要性。后者是免疫增強應答的特征，經(jīng)常例如伴以較高水平的IFNy、TNF-a和IL-12。(Kekkonen等人，2008, World Journal of Gastroenterology, 14,1192-1203 ；Viljanen M.等人，2005，Allergy,60,494-500)。
[0087]本發(fā)明的口服營養(yǎng)補充物因而允許治療或預防與受損的免疫防御有關的病癥。
[0088]因而，不特別地限制可以由本發(fā)明的組合物治療或預防的與受損免疫防御關聯(lián)的炎性病癥。[0089]例如，這些病癥可以選自由感染、尤其細菌性、病毒性、真菌性和/或寄生蟲感染；吞噬細胞缺損癥；低至重度免疫抑制水平，如受應激或免疫抑制藥物、化療法或放療法誘導的那些免疫抑制水平；具有較低免疫活力的免疫系統(tǒng)的天然狀態(tài)如新生兒的那些天然狀態(tài)；變態(tài)反應；及其組合組成的組。
[0090]本發(fā)明中所述的口服營養(yǎng)補充物還允許增強患者對疫苗、尤其對口服疫苗的應答。
[0091]任何量的非復制型微生物會是有效的。然而，如果至少90%、優(yōu)選地至少95%、更優(yōu)選地至少98%、最優(yōu)選地至少99%、理想地至少99.9%、最理想地全部益生菌是不復制的，這通常是優(yōu)選的。
[0092]在本發(fā)明的一個實施方案中，全部微生物均是不復制的。
[0093]因此，在本發(fā)明的口服營養(yǎng)補充物中，至少90 %、優(yōu)選地至少95 %、更優(yōu)選地至少98%、最優(yōu)選地至少99%、理想地至少99.9%、最理想地全部的益生菌可以是不復制的。
[0094]全部益生微生物可以為本發(fā)明的目的使用。
[0095]例如，益生微生物可選自雙歧桿菌屬(bifidobacteria)、乳桿菌屬(Iactobacilli)、丙酸桿菌屬(propionibacteria)，或其組合，例如長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)、乳雙歧桿菌(Bifidobacterium lactis)、動物雙歧桿菌(Bifidobacterium animalis)、短雙歧 桿菌(Bifidobacterium breve)、嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacterium infantis)、青春雙歧桿菌(Bifidobacterium adolescentis)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、干釀乳桿菌(Lactobacillus casei)、類干釀乳桿菌(Lactobacillus paracasei)、唾液乳桿菌(Lactobacillus salivarius)、路氏乳桿菌(Lactobacillus reuteri)、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)、約漢遜氏乳桿菌(Lactobacillus johnsonii)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、雙乙酸乳酸乳球菌(Lactococcus diacetylactis)、乳脂乳球菌(Lactococcus cremoris)、保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus)、瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)、德氏乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii)、大腸桿菌(Escherichia coli)和 / 或它們的混合物。
[0096]本發(fā)明的口服營養(yǎng)補充物可以，例如，包含選自由長雙歧桿菌NCC3001、長雙歧桿菌NCC 2705、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC2818、約漢遜氏乳桿菌LaU類干酪乳桿菌NCC 2461、鼠李糖乳桿菌NCC 4007、路氏乳桿菌DSM17983、路氏乳桿菌ATCC55730、嗜熱鏈球菌NCC 2019、嗜熱鏈球菌NCC 2059、干酪乳桿菌NCC 4006、嗜酸乳桿菌NCC 3009、干酪乳桿菌ACA-DC 6002 (NCC 1825)、大腸桿菌Nissle、保加利亞乳桿菌NCC 15、乳酸乳球菌NCC 2287或其組合組成的組中的益生微生物。
[0097]全部這些菌株是在布達佩斯條約下保藏和/或是市售的。
[0098]以下菌株已經(jīng)在布達佩斯條約下保藏:
[0099]
長雙歧桿菌 NCC 3001: ATCC BAA-999
[0100]長雙歧桿菌NCC2705: CNCM 1-2618短雙歧桿菌 NCC2950: CNCM 1-3865 乳雙歧桿菌 NCC2818:CNCM 1-3446 類干酪乳桿菌NCC2461:CNCM 1-2116 鼠李糖乳桿菌 NCC4007:CGMCC1.3724 嗜熱鏈球菌 NCC2019:CNCM 1-1422 嗜熱鏈球菌 NCC2059: CNCM 1-4153 乳酸乳球菌 NCC2287: CNCM 1-4154 干酪乳桿菌 NCC4006: CNCM 1-1518 干酪乳桿菌 NCC1825:ACA-DC6002 嗜酸乳桿菌 NCC3009:ATCC700396
保加利亞乳桿菌NCC15:CNCM 1-1198(于1992年4月2日保藏于法國巴黎15區(qū)杜博士路的法國微生物保藏中心)
約漢遜氏乳桿菌Lal CNCM 1-1225 路氏乳桿菌 DSM17938 DSM17938 路氏乳桿菌 ATCC55730 ATCC55730 大腸桿菌 Nisslel917: DSM6601
[0101]本領域技術人員將理解他們可以自由地組合本文中所述發(fā)明的全部特征，而不脫離所公開的本發(fā)明的范圍。
[0102]本發(fā)明的其他優(yōu)勢和特點從以下實施例和附圖中顯而易見。
[0103]圖1A和B顯示以"短時高溫"處理的益生菌的抗炎免疫譜的增強。
[0104]圖2顯示變得抗炎的非抗炎益生菌株，即以"短時高溫"處理后顯示明顯的體外抗炎免疫譜的非抗炎益生菌株。
[0105]圖3A和B顯示市售產(chǎn)品中使用的益生菌株，其以"短時高溫"處理后顯示增強的或新的體外抗炎免疫譜。
[0106]圖4A和B顯示在高溫熱處理時顯示增強的或新的體外抗炎免疫譜的乳品起子菌株(即Lcl起子菌株)。
[0107]圖5顯示以HTST處理法處理后顯示體外抗炎免疫譜的非抗炎益生菌株。
[0108]圖6:對用活形式和熱處理形式(140°C持續(xù)15秒)下的益生菌株和乳品起子菌株產(chǎn)生PBMC數(shù)據(jù)(IL-12p40、IFN-y、TNF-a、IL-10)的主要組分分析。每個點代表由其NCC編號或名稱標識的一種活的或熱處理的菌株。
[0109]圖7顯示活菌株和熱處理菌株(85°C，20分鐘)的IL-12p40/IL_10比?？傮w而言，與本發(fā)明的"短時高溫"處理(圖1、2、3、4和5)相反，在85°C持續(xù)20分鐘的熱處理導致IL-12p40/IL-10 比的增加。
[0110]圖8顯示來自用熱處理細菌刺激的人PBMC的體外細胞因子分泌的增強。
[0111]圖9顯示以鹽水攻擊的OVA致敏小鼠(陰性對照)、以OVA攻擊的OVA致敏小鼠(陽性對照)和以OVA攻擊并用熱處理的或活的短雙歧桿菌NCC2950治療的OVA致敏小鼠中觀察到的腹瀉強度百分數(shù)。結果顯示為腹瀉強度百分數(shù)(從4個獨立實驗計算的均數(shù)土SEM)，而100%腹瀉強度對應于(致敏和被過敏原攻擊的)陽性對照組中出現(xiàn)的癥狀。
[0112]實施例1:[0113]方法學
[0114]細菌制備物:
[0115]由活益生菌對宿主免疫系統(tǒng)遞送的健康益處通常視為具有菌株特異性。在體外誘導高水平IL-10和/或誘導低水平促炎細胞因子(PBMC測定法)的益生菌已經(jīng)顯示在體內是強力抗炎菌株(Foligne, B.等人，2007, World J.Gastroenterol.13:236-243)。
[0116]使用幾種益生菌株來研究熱處理的益生菌的抗炎特征。這些菌株是長雙歧桿菌NCC 3001、長雙歧桿菌NCC 2705、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC 2818、類干酪乳桿菌NCC 2461、鼠李糖乳桿菌NCC 4007、干酪乳桿菌NCC 4006、嗜酸乳桿菌NCC 3009、干酪乳桿菌ACA-DC 6002 (NCC 1825)和大腸桿菌Nissle。也試驗了包括商業(yè)上用來產(chǎn)生Nestl6Lcl發(fā)酵產(chǎn)品的一些菌株在內的幾種起子培養(yǎng)菌株:嗜熱鏈球菌NCC 2019、嗜熱鏈球菌NCC 2059、保加利亞乳桿菌NCC 15和乳酸乳球菌NCC 2287。
[0117]在5至15L生物反應器中為每種菌株優(yōu)化的條件下培養(yǎng)細菌細胞。全部常見的細菌生長培養(yǎng)基是可用的。此類培養(yǎng)基是本領域技術人員已知的。當調節(jié)pH至5.5時，連續(xù)地添加30%堿溶液(NaOH或Ca(OH)2)。當充分時，通過用CO2頂空充氣維持厭氧條件。大腸桿菌在標準的有氧條件下培養(yǎng)。
[0118]將細菌細胞通過離心(5000x g，4°C )收集并且重懸于足夠體積的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中，旨在達到約109-101(lCfu/ml終濃度。將部分的制備物以15%甘油冷凍在-80°C。另外部分的細胞通過 以下方式作熱處理:
[0119]-超高溫:140°C持續(xù)15秒；通過間接蒸汽注射。
[0120]-高溫短時(HTST):74°C、90°C和120°C持續(xù)15秒，通過間接蒸汽注射
[0121]-水浴中長時間低溫(85°C，20分鐘)
[0122]熱處理后，將樣品保持在_80°C冷凍直至使用。
[0123]細菌制備物的體外免疫譜:
[0124]評估了活的和熱處理的細菌制備物的免疫譜(即體外誘導特定細胞因子從人血細胞分泌的能力)。人外周血單核細胞(PBMC)從血液濾器分離。在通過細胞密度梯度分開后，將單核細胞收集并且用Hank平衡鹽溶液洗滌兩次。細胞隨后重懸于補充有10%胎牛血清(Bioconcept,巴黎,法國)、1% L-谷氨酰胺(Sigma)、I %青霉素/鏈霉素(Sigma)和
0.1%慶大霉素(Sigma)的 Iscove 改良 Dulbecco 培養(yǎng)基(MDM5Sigma)中。PBMC(7xl05 個細胞/孔)隨后與活的和熱處理的細菌(等同于7xl06cfU/孔)在48孔平板培養(yǎng)36小時。檢驗活細菌和熱處理細菌對PBMC的影響，其中所述的PBMC來自分配至2個分別實驗中的8位個體。在36小時孵育后，將培養(yǎng)平板冷凍并且保存在-20°C直至細胞因子測量。對活細菌及其熱處理的對應物平行地(即在相同的實驗中對相同批次的PBMC)實施細胞因子譜分析。
[0125]通過ELISA(R&D DuoSet 人 IL-10，BD OptEIA 人 IL12p40，BD OptEIA 人 TNF a，BDOptEIA人IFN- y )，按照制造商的說明書測定36小時孵育后細胞因子(IFN- y、IL_12p40、TNF-a和IL-10)在細胞培養(yǎng)上清液中的水平。IFN-Y、IL_12p40和TNF-a是促炎細胞因子，而IL-10是強力抗炎介質。結果表述為4位獨立供體的均值(pg/ml)+/-SEM并且是各自用4位供體進行的2個獨立實驗的代表。對每種菌株，將IL-12p40/IL-10比率算作體內抗炎作用的預測值(Foligne, B.等人,2007, World J.Gastroenterol.13:236-243)。[0126] 通過ELISA對每種菌株測定(見上文)的細胞因子數(shù)字值(pg/ml)轉移入BioNumerics v5.10 軟件(Applied Maths, Sint-Martens-Latem,比利時)。對這組數(shù)據(jù)開展主要組分分析法(PCA，量度技術)。此分析包括從數(shù)值減去平均值和數(shù)值除以方差。
[0127]結果
[0128]通過超高溫(UHT)/高溫短時(HTST)樣處理法產(chǎn)生的抗炎譜
[0129]處于研究下的益生菌株經(jīng)歷一系列熱處理(超高溫(UHT)、高溫短時(HTST)和85°C持續(xù)20分鐘)，并且將它們的免疫譜與體外活細胞的免疫譜比較。與人PBMC —起培養(yǎng)時，活微生物(益生菌和/或乳品起子培養(yǎng)物)誘導不同水平的細胞因子產(chǎn)生(圖1、2、3、4和5)。對這些微生物的熱處理以溫度依賴性方式改變了由PBMC產(chǎn)生的細胞因子的水平?！岸虝r高溫”處理(120°C或140°C持續(xù)15秒)產(chǎn)生具有抗炎免疫譜的非復制型細菌(圖1、
2、3和4)。實際上，UHT樣處理的菌株(140°C，15秒)誘導較少的促炎細胞因子(TNF-a、IFN- y、IL-12p40)，同時維持或誘導額外的IL-1O產(chǎn)生(與活的對應物相比)。與活細胞相t匕，得到的IL-12p40/IL-10比對于任何UHT樣處理的菌株是較低的(圖1、2、3和4)。這個觀察結果也對經(jīng)HTST樣處理(即經(jīng)歷120°C持續(xù)15秒(圖1、2、3和4)或74°C和90°C持續(xù)15秒(圖5))的細菌有效。熱處理(UHT樣或HTST樣處理)對益生菌株(圖1、2、3和5)和乳品起子培養(yǎng)物(圖4)的體外免疫譜產(chǎn)生相似的影響。針對用活的和熱處理(140°C，15秒)的益生菌株及乳品起子菌株產(chǎn)生的PBMC數(shù)據(jù)的主要組分分析揭示，活菌株均沿X軸展開，這說明菌株顯示非常不同的體外免疫譜，從促炎細胞因子的低級(左側)至高級(右偵D誘導物。熱處理的菌株群集在該圖的左側，從而表明熱處理的菌株誘導的促炎細胞因子少得多(圖6)。相反，在85°C熱處理20分鐘的細菌比活細胞誘導更多的促炎細胞因子和更少的IL-10，從而產(chǎn)生較高的IL-12p40/IL-10比(圖7)。
[0130]通過UHT樣和HTST樣處理法增強或產(chǎn)生抗炎譜
[0131]UHT和HTST處理的菌株顯示抗炎譜，無論它們各自的初始免疫譜(活細胞)是什么。已知在體內抗炎并且顯示體外抗炎譜的益生菌株(長雙歧桿菌NCC 3001、長雙歧桿菌NCC 2705、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC 2818)在“短時高溫”處理后顯示增強的體外抗炎譜。如圖1中所示，UHT樣處理的雙歧桿菌菌株的IL-12p40/IL-10比低于來自活對應物的IL-12p40/IL-10比，因而顯示UHT樣處理的樣品的改善抗炎譜。更令人震驚地，還證實非抗炎性活菌株因UHT樣和HTST樣處理產(chǎn)生抗炎譜。活的鼠李糖乳桿菌NCC 4007和類干酪乳桿菌NCC 2461均顯示高的體外IL-12p40/IL-10比(圖2和5)。這兩種活菌株顯示對小鼠中TNBS誘導的結腸炎無保護性。由鼠李糖乳桿菌NCC 4007和類干酪乳桿菌NCC2461誘導的IL-12p40/IL-10比在“短時高溫”處理(UHT或HTST)后大幅度下降，達到與用雙歧桿菌菌株獲得的那些水平一樣低的水平。這些低IL-12p40/IL-10比歸因于低水平的IL-12p40產(chǎn)生，連同IL-10分泌無變化(鼠李糖乳桿菌NCC 4007)或大幅度誘導IL-10分泌(類干酪乳桿菌NCC2461)(圖2)。
[0132]作為結果:
[0133]-可以通過UHT樣和HTST樣熱處理增強活微生物的抗炎譜(例如長雙歧桿菌NCC2705、長雙歧桿菌NCC 3001、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC 2818)。
[0134]-可以通過UHT樣和HTST樣熱處理從非抗炎性活微生物(例如鼠李糖乳桿菌NCC4007、類干酪乳桿菌NCC 2461、乳品起子嗜熱鏈球菌NCC 2019)產(chǎn)生抗炎譜。[0135]-也展示了從市售產(chǎn)品分離的菌株(包括益生性大腸桿菌菌株)的抗炎譜(圖3A和B)。
[0136]UHT/HTST樣處理對全部受檢益生菌和乳品起子(例如乳桿菌屬、雙歧桿菌屬和鏈球菌屬)的影響是相似的。
[0137]將UHT/HTST樣處理應用于顯示不同體外免疫譜的幾種乳桿菌屬、雙歧桿菌屬和鏈球菌屬的菌株。全部菌株在UHT/HTST樣處理后比其活的對應物誘導更少的促炎細胞因子(圖1，2，3，4，5和6)，表明UHT/HTST樣處理對得到的非復制細菌的免疫特征的影響可以推廣至全部益生菌，特別地至乳桿菌屬和雙歧桿菌屬和特定大腸桿菌菌株，并且推廣至全部乳品起子培養(yǎng)物，特別地至鏈球菌屬、乳球菌屬和乳桿菌屬。
[0138]實施例2:
[0139]方法學 [0140]細菌制備物:
[0141]使用5種益生菌株來研究非復制型益生菌的免疫增強特征:3種雙歧桿菌(長雙歧桿菌NCC3001、乳雙歧桿菌NCC2818、短雙歧桿菌NCC2950)和2種乳桿菌(類干酪乳桿菌NCC2461、鼠李糖乳桿菌NCC4007)。
[0142]細菌細胞以分批發(fā)酵法在37°C于MRS上培育16-18小時，同時不調控pH。將細菌細胞離心下來(5000x g，4°C )并且重懸于磷酸鹽緩沖鹽水中，隨后稀釋于鹽水中，以達到約10E10Cfu/ml的終濃度。將長雙歧桿菌NCC3001、乳雙歧桿菌NCC2818、類干酪乳桿菌NCC2461、鼠李糖乳桿菌NCC4007在85°C于水浴中熱處理20分鐘。短雙歧桿菌NCC2950在90°C于水浴中熱處理30分鐘。將熱處理的細菌懸液分裝并且保持冷凍在_80°C直至使用。將活細菌在PBS-甘油15%中貯存在_80°C直至使用。
[0143]細菌制備物的體外免疫譜:
[0144]評估了活的和熱處理的細菌制備物的免疫譜(即體外誘導特定細胞因子從人血細胞分泌的能力)。人外周血單核細胞(PBMC)從血液濾器分離。在通過細胞密度梯度分開后，將單核細胞收集并且用Hank平衡鹽溶液洗滌兩次。細胞隨后重懸于補充有10%胎牛血清(Bioconcept,巴黎,法國)、1% L-谷氨酰胺(Sigma)、I %青霉素/鏈霉素(Sigma)和 0.1 %慶大霉素(Sigma)的 Iscove 改良 Dulbecco 培養(yǎng)基(MDM，Sigma)中。PBMC (7xl05個細胞/孔)隨后與活的和熱處理的細菌(等同于7xl06cfU/孔)在48孔平板培養(yǎng)36小時。檢驗活細菌和熱處理細菌對PBMC的影響，其中所述的PBMC來自分配至2個獨立實驗中的8位個體。在36小時孵育后，將培養(yǎng)平板冷凍并且保存在-20°C直至細胞因子測量。對活細菌及其熱處理的對應物平行地(即在相同的實驗中對相同批次的PBMC)實施細胞因子譜分析。
[0145]通過ELISA (R&D DuoSet 人 IL-10，BD OptEIA 人 IL12p40，BD OptEIA 人 TNF，BDOptEIA人IFN- y )，按照制造商的說明書測定36小時孵育后細胞因子(IFN- y、IL_12p40、TNF-a和IL-10)在細胞培養(yǎng)上清液中的水平。IFN-Y、IL_12p40和TNF-a是促炎細胞因子，而IL-1O是強力抗炎介質。結果表述為4位獨立供體的均值(pg/ml)+/-SEM并且是各自用4位供體進行的2個獨立實驗的代表。
[0146]活的和熱處理的短雙歧桿菌NCC2950在預防變態(tài)反應性腹瀉中的體內作用。
[0147]使用變態(tài)反應性腹瀉小鼠模型來檢驗短雙歧桿菌NCC2950的Thl促進作用(Brandt E.B等人.JCI 2003 ；112(11):1666-1667)。致敏(間隔14日2次腹膜內注射卵清蛋白(OVA)和硫酸鋁鉀；第0和第14日)后，雄性Balb/c小鼠以口服方式用OVA攻擊6次(第27、29、32、34、36、39日)，導致臨時臨床癥狀(腹瀉)和免疫參數(shù)(總IgE血漿濃度、OVA特異性IgE、小鼠肥大細胞蛋白酶I即MMCP-1)的變化。通過管飼法在OVA致敏之前4日(第-3、-2、-1、0日和第11、12、13和14日)和攻擊期間(第23至39日)施用活短雙歧桿菌NCC2950或在90°C熱處理30分鐘的短雙歧桿菌NCC2950。使用約IO9菌落形成單位(Cfu)或等價cfu/小鼠的日細菌劑量。
[0148]益果
[0149]熱處理后‘促炎’細胞因子分泌的誘導
[0150]體外評估了熱處理的細菌菌株刺激人外周血單核細胞(PBMC)分泌細胞因子的能力。將基于熱處理細菌刺激PBMC時的4種細胞因子的免疫譜與相同體外測定法中由活細菌細胞誘導的4種細胞因子的免疫譜比較。[0151]將熱處理的制備物鋪板并且評估任何活計數(shù)的不存在。鋪板后，熱處理的細菌制備物不產(chǎn)生菌落。
[0152]與人PBMC—起培養(yǎng)時，活益生菌誘導不同且菌株依賴性水平的細胞因子產(chǎn)生(圖8)。與其活的對應物相比，對益生菌的熱處理改變了由PBMC產(chǎn)生的細胞因子的水平。熱處理的細菌比其活的對應物誘導更多的促炎細胞因子(TNF-a、IFN-Y、IL-12p40)。相反，與活細胞相比，熱處理的細菌誘導相似或更低的量的IL-10 (圖8)。這些數(shù)據(jù)顯示熱處理的細菌比其活的對應物更能夠刺激免疫系統(tǒng)并且因此更能夠增強削弱的免疫防御。換而言之，體外數(shù)據(jù)顯示細菌菌株在熱處理后增強的免疫增強作用。
[0153]為了展示熱處理的短雙歧桿菌NCC2950 (與活細胞相比)對免疫系統(tǒng)的增強作用，在變態(tài)反應性腹瀉動物模型中測試活的和熱處理的短雙歧桿菌NCC2950 (菌株A)。
[0154]與陽性對照組相比，腹瀉的強度在用熱處理的短雙歧桿菌NCC2950治療后顯著且一致地減低(41.1% ±4.8)，而腹瀉的強度在用活短雙歧桿菌NCC2950治療后僅降低20±28.3%。這些結果表明熱處理的短雙歧桿菌NCC2950比其活的對應物顯示出增強的抗變態(tài)反應性腹瀉保護作用(圖9)。
[0155]因此，顯示在熱處理后改善了益生菌增強免疫防御的能力。
[0156]實施例3-5:
[0157]例如，以下的液體口服營養(yǎng)補充物可以從以下成分制備。
[0158]水、糖、木薯糊精、果糖、玉米糖漿固體、乳蛋白濃縮物、酪蛋白酸鈉(乳)、植物油(卡諾拉油菜油、高油酸向日葵油、玉米油)、酪蛋白酸鈣、果低聚糖、大豆纖維、L-精氨酸、部分水解的瓜爾膠
[0159]
【權利要求】
1.口服營養(yǎng)補充物，其具有0.8-1.5kcal/ml范圍內的熱量密度、390-660m0sm/kg水范圍內的重量摩爾滲透壓濃度，并且包含占該組合物的熱量約16-25%的蛋白質源、該組合物的熱量約34-68%的碳水化合物源、該組合物的熱量約15-44%的脂質源和益生微生物。
2.根據(jù)權利要求1所述的口服營養(yǎng)補充物，其包含具有2.3: I至5: I范圍內的n6: n3脂肪酸比的脂質源。
3.根據(jù)前述權利要求之一的口服營養(yǎng)補充物，其包含約82-88%的自由水。
4.根據(jù)前述權利要求之一的口服營養(yǎng)補充物，其中蛋白質源選自乳蛋白濃縮物、來自乳的酪蛋白酸鈉和酪蛋白酸鈣、L-精氨酸或其組合并且具有75:1至130:1范圍內的NPC: N 比。
5.根據(jù)前述權利要求之一的口服營養(yǎng)補充物，其中益生微生物包含非復制型益生微生物。
6.根據(jù)前述權利要求之一的口服營養(yǎng)補充物，其以對應于約IO6至IO12Cfu的量包含益生微生物。
7.根據(jù)權利要求5-6任一項所述的口服營養(yǎng)補充物，其中通過熱處理、優(yōu)選地通過在至少71.5°C高溫處理至少I秒使得非復制型益生微生物不復制。
8.根據(jù)權利要求7所述的口服營養(yǎng)補充物，其中熱處理是在約71.5-150°C高溫處理約1-120秒，并且優(yōu)選地是高溫/短時(HTST)處理或超高溫(UHT)處理。
9.根據(jù)權利要求8所述的口服營養(yǎng)補充物，用于預防或治療炎性病癥。
10.根據(jù)權利要求7所述的口服營養(yǎng)補充物，其中熱處理是在約70-150°C的溫度范圍實施約3分鐘-2小時，優(yōu)選地在80-140°C的范圍實施約5分鐘-40分鐘。
11.根據(jù)權利要求10所述的口服營養(yǎng)補充物，用于預防或治療與受損的免疫防御有關的病癥。
12.根據(jù)前述權利要求之一的口服營養(yǎng)補充物，其中至少90%、優(yōu)選地至少95%、更優(yōu)選地至少98%、最優(yōu)選地至少99%、理想地至少99.9%、最理想地全部益生菌是不復制的。
13.根據(jù)前述權利要求之一的口服營養(yǎng)補充物，其中益生微生物選自雙歧桿菌屬(bifidobacteria)、乳桿菌屬(Iactobacilli)、丙酸桿菌屬(propionibacteria)，或它們的組合，例如長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)、乳雙歧桿菌(Bifidobacteriumlactis)、動物雙歧桿菌(Bifidobacterium animalis)、短雙歧桿菌(Bifidobacteriumbreve)、嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacterium infantis)、青春雙歧桿菌(Bifidobacteriumadolescentis)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)、類干釀乳桿菌(Lactobacillus paracasei)、唾液乳桿菌(Lactobacillussalivarius)、路氏乳桿菌(Lactobacillus reuteri)、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)、約漢遜氏乳桿菌(Lactobacillus johnsonii)、植物乳桿菌(Lactobacillusp I ant arum)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)、雙乙酸乳酸乳球菌(Lactococcus diacetylactis)、乳脂乳球菌(Lactococcuscremoris)、保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus)、瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)、德氏乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii)、大腸桿菌(Escherichia coli)和/或它們的混合物。
14.根據(jù)前述權利要求之一的口服營養(yǎng)補充物，其中益生微生物選自長雙歧桿菌NCC3001、長雙歧桿菌NCC 2705、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC 2818、約漢遜氏乳桿菌LaU類干酪乳桿菌NCC 2461、鼠李糖乳桿菌NCC 4007、路氏乳桿菌DSM17983、路氏乳桿菌ATCC55730、嗜熱鏈 球菌NCC 2019、嗜熱鏈球菌NCC 2059、干酪乳桿菌NCC 4006、嗜酸乳桿菌NCC 3009、干酪乳桿菌ACA-DC 6002 (NCC 1825)、大腸桿菌Nissle、保加利亞乳桿菌NCC15、乳酸乳球菌NCC 2287或它們的組合。
15.根據(jù)前述權利要求之一的口服營養(yǎng)補充物，其日劑量含有約0.005mg-1000mg非復制型微生物。
【文檔編號】A61P37/04GK103648510SQ201080031149
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2010年5月11日 優(yōu)先權日:2009年5月11日
【發(fā)明者】A·梅賽尼爾, S·努特恩, G·普里烏特 申請人:雀巢產(chǎn)品技術援助有限公司