專利名稱：紫景天總黃酮及其提取方法和藥物用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
紫景天為景天科植物紫景天Hylotekphium purpureum(L· )Holub的全草入 藥。別名紫八寶《中國長白山藥用植物彩色圖志》，主產(chǎn)于長白山區(qū)，民間用于治療口腔潰 瘍。本品含多種黃酮、山柰酚、山柰酚-7-葡萄糖甙、槲皮素_3，7-鼠李糖葡萄糖甙、槲皮 素-3-β-D-葡萄吡喃糖甙、山柰酚-3，7-鼠李糖葡萄甙、槲皮素_3’ -葡萄糖甙，根和地上 部分含熊果甙。全草含有蒽甙類、鞣質(zhì)、蘋果酸鈣和維生素C。全草浸膏能夠減輕或消除再 生障礙性貧血引起的蛋白代謝障礙，增加血清中白蛋白、球蛋白、纖維蛋白及總蛋白含量。 據(jù)國外報(bào)道，用本植物汁液洗傷口，化膿性潰瘍，黃癬，瘰疬，瘭疽等，有消炎及促進(jìn)傷口愈 合作用，本品還可做為感冒、風(fēng)濕及痛風(fēng)等病的鎮(zhèn)痛藥。曾有報(bào)道“紫景天膜劑治療復(fù)發(fā)性 口瘡”、“紫景天潰瘍膜的藥理研究”。中醫(yī)認(rèn)為紫景天有清熱解毒、收斂止血、消腫生肌功效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究亦表明，紫 景天有抗炎、鎮(zhèn)痛和調(diào)節(jié)免疫功能的作用，還能消除或減輕蛋白代謝障礙。由此可見，采用紫景天做為藥用資源，開發(fā)研制治療口腔病的新型藥物，解決廣大 口腔疾病患者的痛苦，滿足目前市場的需求，將具有重要的現(xiàn)實(shí)意義，并將產(chǎn)生良好的社會 效益和巨大的經(jīng)濟(jì)效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種紫景天總黃酮及其提取方法和藥物用途。紫景天總黃酮提取方法，包括下列步驟紫景天鮮莖葉搗碎軋炸取汁，取軋炸汁用石油醚脫脂后，用正丁醇1 3倍，提取 2 4次，合并正丁醇液，回收正丁醇，濃縮蒸干、干燥后得總黃酮。本發(fā)明紫景天總黃酮在制備治療或預(yù)防復(fù)發(fā)性口瘡、口腔潰瘍和牙周炎的藥物中 的應(yīng)用。功能主治清熱解毒，收斂止血，消腫生肌。用于治療或預(yù)防復(fù)發(fā)性口瘡、口腔潰 瘍、牙周炎及相關(guān)口腔疾病。當(dāng)本發(fā)明用于制備治療或預(yù)防復(fù)發(fā)性口瘡、口腔潰瘍和牙周炎的藥物時(shí)，其口服 或胃腸外給藥，均是安全的?？梢詥畏街瞥伤巹粗瞥赡?、凝膠劑、原位凝膠劑、緩釋劑、 漱口劑、噴霧劑、氣霧劑、經(jīng)皮給藥制劑。在口服情況下，其可以任何常規(guī)形式給藥，如凝膠 劑、散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、溶液劑、懸浮液、糖漿、口腔含片、舌下含片等；當(dāng)該藥 物腸胃外給藥時(shí)，可采取任何常規(guī)形式，例如靜脈內(nèi)注射劑、軟膏劑、栓劑、和吸入劑等。本發(fā)明制備治療或預(yù)防復(fù)發(fā)性口瘡、口腔潰瘍和牙周炎的藥物是由有效成分單體 或有效成分與固體或液體的賦形劑一起構(gòu)成的，這里使用的固體或液體的賦形劑在本領(lǐng)域 是眾所周知的，下面舉幾個(gè)具體例子，散劑是內(nèi)服的粉末劑，它的賦形劑有乳糖、淀粉、漿糊精、碳酸鈣、合成或天然硫酸鋁、氧化鎂、硬脂酸鎂，碳酸氫鈉、干燥酵母等；溶液劑的賦形劑 有水、甘油、1，2_丙二醇、單糖漿、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇等；軟膏劑的賦形劑可 以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂臘、木臘、液體石臘、樹脂、高級臘等組合成的疏 水劑或親水劑。功能主治清熱解毒，收斂止血，消腫生肌。用于治療或預(yù)防復(fù)發(fā)性口瘡、口腔潰 瘍、牙周炎及相關(guān)口腔疾病。本發(fā)明的積極效果在于本發(fā)明對已知的紫景天發(fā)掘了新的醫(yī)療用途；其具有資 源豐富、價(jià)廉易得、療效好、安全無毒、制備工藝簡單、質(zhì)量可控、適合工業(yè)化大生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)， 具有良好的藥用開發(fā)前景。并可做成膜劑、凝膠劑、原位凝膠劑、緩釋劑、漱口劑、噴霧劑、氣 霧劑、經(jīng)皮給藥等制劑。由此可見，采用紫景天做為藥用資源，開發(fā)研制治療口腔病的新型 藥物，解決廣大口腔疾病患者的痛苦，滿足目前市場的需求，將具有重要的現(xiàn)實(shí)意義，并將 產(chǎn)生良好的社會效益和巨大的經(jīng)濟(jì)效益。用法用量口腔用藥或外用5 IOg生藥/d ； 口服10 20g生藥/d。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1紫景天鮮莖葉搗碎軋炸取汁，取軋炸汁用石油醚脫脂后，用正丁醇1倍，提取2次， 合并正丁醇液，回收正丁醇，濃縮蒸干、干燥后得總黃酮。實(shí)施例2紫景天鮮莖葉搗碎軋炸取汁，取軋炸汁用石油醚脫脂后，用正丁醇2倍，提取3次， 合并正丁醇液，回收正丁醇，濃縮蒸干、干燥后得總黃酮。實(shí)施例3紫景天鮮莖葉搗碎軋炸取汁，取軋炸汁用石油醚脫脂后，用正丁醇3倍，提取4次， 合并正丁醇液，回收正丁醇，濃縮蒸干、干燥后得總黃酮。本發(fā)明紫景天還可分別采取下列方法制得紫景天干燥藥材，加水煎煮，煎煮液用石油醚脫脂后，用正丁醇1 3倍，提取2 4次，合并正丁醇液，回收正丁醇，濃縮蒸干、干燥后得總黃酮。紫景天干燥藥材，用60% 80%乙醇1 3倍，回流提取2 4次，乙醇液回收乙 醇，濃縮至無醇味，水液用石油醚脫脂后，用正丁醇1 3倍，提取2 4次，合并正丁醇液， 回收正丁醇濃縮蒸干、干燥后得總黃酮。實(shí)驗(yàn)例紫景天總黃酮的藥效學(xué)研究采用絲線結(jié)扎加感染牙齦卟啉單胞菌復(fù)合法制備“大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎模型”，觀察 藥物對牙周炎大鼠的影響；同時(shí)采用鼠耳腫脹法、足趾腫脹法、熱板法、醋酸扭體法及玻片 法觀察該藥抗炎、鎮(zhèn)痛和止血作用；并進(jìn)行了體外抑菌實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明本品可明顯減少實(shí)驗(yàn) 性牙周炎大鼠牙齦指數(shù)、齦溝出血指數(shù)，增加血液中S0D、GSH，降低MDA含量，減輕牙周組織 病理改變；可明顯抑制二甲苯所致小鼠耳腫脹及大鼠角叉菜膠性足腫脹，顯著延長小鼠熱 疼痛反應(yīng)時(shí)間，減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，并可縮短小鼠斷尾出血時(shí)間及凝血時(shí)間； 對牙齦卟啉單胞菌、放線共生放線桿菌、產(chǎn)黑色素?cái)M桿菌均有較好的抑菌效果。試驗(yàn)?zāi)康陌凑罩兴幮滤幯芯恐改弦?，根?jù)中醫(yī)藥理論和該藥的功能主治，運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)方法，選用或建立與中醫(yī)“證”或“病”相符或相近似的動(dòng)物模型和實(shí)驗(yàn)方法，研究 紫景天總黃酮的主要藥理作用，對該藥的有效性作出科學(xué)的評價(jià)，為其臨床應(yīng)用提供科學(xué) 依據(jù)。實(shí)驗(yàn)材料藥物紫景天總黃酮6、3、1.5g生藥/ml，由吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院制劑室提供，批 號20071220。陽性對照藥復(fù)方牙痛酊，貴州同濟(jì)堂制藥有限公司生產(chǎn)，批號20070509。 三七片，沈陽中藥制藥有限公司，生產(chǎn)，批號20071219。實(shí)驗(yàn)菌株國際標(biāo)準(zhǔn)株放線共生放線桿菌ATCCM523。臨床分離株放線共生放線 桿菌16株，牙齦卜啉菌13株，變形鏈球菌沈株，產(chǎn)黑色素?cái)M桿菌11株。由吉林大學(xué)微生 物研究室提供。試劑SOD試劑盒，南京建成生物工程制品研究所，批號20080223。MDA試劑盒，南 京建成生物工程制品研究所，批號20080213。GSH試劑盒，南京建成生物工程制品研究所， 批號20080213。二甲苯，中國人民解放軍第九零六六工廠，批號960525。冰醋酸，北京化 工廠生產(chǎn)，批號20041008。儀器磨牙機(jī)，吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院口腔科提供。GJ-8402型熱板測痛儀。動(dòng)物昆明種小白鼠，體重19 21g或25 ^g，雌雄均用；Wistar大鼠，體 重180 280g，雌雄各半，均由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。合格證號 2003-0001。實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果一、對大鼠“實(shí)驗(yàn)性牙周炎”的治療作用參照文獻(xiàn)方法并加以改進(jìn)制備“實(shí)驗(yàn)性牙周炎”模型，取Wistar大鼠50只，雌雄均 用。取出8只為正常對照組，剩余動(dòng)物以3%水合氯醛10ml/kg腹腔注射麻醉，剝離上頌牙 齦，將4號無菌絲線先加入到0. 5個(gè)麥?zhǔn)蠁挝谎例l卟啉單胞菌的菌液中2h，使絲線上帶有足 夠的細(xì)菌，雙股穿過大鼠第一和第二磨牙間隙，在頰側(cè)打結(jié)3次，再繞過第一磨牙，于腭側(cè) 第一磨牙和第二磨牙間結(jié)扎并打結(jié)3次，以使結(jié)頭足夠大，能夠持續(xù)刺激牙齦。并分別將結(jié) 頭埋入兩側(cè)牙齦下，在實(shí)驗(yàn)的第3、5和7天3次將0. 5個(gè)麥?zhǔn)蠁挝谎例l卟啉單胞菌的2 μ L 鹽水注射到頰腭側(cè)埋有絲線結(jié)頭的齦下，每日用30%蔗糖水喂養(yǎng)。從第3周開始觀察牙齦 紅腫、糜爛、溢膿、探診出血等癥狀，并按國際通用標(biāo)準(zhǔn)評價(jià)牙齦指數(shù)記錄牙齦指數(shù)(判定 標(biāo)準(zhǔn)分為4級，0為牙齦健康；1為牙齦輕度炎癥，牙齦的色有輕度改變并輕度水腫，探診不 出血；2為牙齦中度炎癥，牙齦紅色，水腫光亮，探詆出血；3為壓印嚴(yán)重炎癥，牙齦明顯紅腫 或有潰瘍，并有自動(dòng)出血傾向)及齦溝出血指數(shù)(判定標(biāo)準(zhǔn)共記6級，0為齦緣和齦乳頭外 觀健康，輕探齦溝后不出血；1為齦緣和齦乳頭呈輕度炎癥，輕探齦溝后不出血；2為牙齦呈 輕度炎癥，有顏色改變，探診后點(diǎn)狀出血；3為牙齦呈中度炎癥，有顏色改變和輕度水腫，探 診后出血，血在齦溝內(nèi)擴(kuò)延；4為牙齦呈中度炎癥，探診后出血，血溢出齦溝；5為牙齦有色 的改變，明顯腫脹，有時(shí)有潰瘍，探診后出血或自動(dòng)出血)。第4周隨機(jī)取動(dòng)物兩只，處死，取 上頌?zāi)パ兰捌溲乐芙M織進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，以確認(rèn)模型成立。第5周開始按表1所示劑 量牙齦涂擦給藥，每日2次，次間隔他，連續(xù)涂藥14天，正常對照組和模型組均給予基質(zhì)。 于給藥后第15天，以3%水合氯醛10ml/kg腹腔注射麻醉，觀察并記錄藥后牙齦指數(shù)及齦溝 出血指數(shù)，然后腹主動(dòng)脈取血，測量血清中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH)、丙二醛含量(MDA)，同時(shí)取上頌?zāi)パ兰捌溲乐芙M織，進(jìn)行X射線攝片及病理組織學(xué)檢 查。結(jié)果見表1 表3。1、紫景天總黃酮治療給藥對實(shí)驗(yàn)性牙周炎大鼠牙齦指數(shù)、齦溝出血指數(shù)的影響表1.紫景天總黃酮治療給藥對實(shí)驗(yàn)性牙周炎大鼠牙齦指數(shù)、齦溝出血指數(shù)的影 響(n = 8，X ±S)
劑量牙齦指數(shù)齦溝出血指數(shù)
組別
(g生藥/ml)給藥前給藥后給藥前給藥后
正常對照組一0000模型對照組一2.50±0.762. 88±0. 353.63±1.063.50±1.07牙痛酊0. 5m 12.75 ±0.461. 25±0. 71*林3.63±1.192.25±0.89*紫景天總黃酮6. 02.50 + 0.760. 88 + 0.83***3.75±1.041.75±1.04氺氺紫景天總黃酮3.02.63±0·521. 38±0· 74*林3.63±1.302.13±1·13*紫景天總黃酮1. 52.50 ±0.531. 75 土 0. 46林*3.88 + 1.252.25 + 1.16*注與模型對照組比較*P < 0. 05 ；**P < 0. 01 ；***P < 0. 001。由表1結(jié)果可見，紫景天總黃酮6、3、1. 5g生藥/ml和牙痛酊均可明顯降低牙齦指 數(shù)及齦溝出血指數(shù)，明顯減輕牙周炎損傷程度，對大鼠“實(shí)驗(yàn)性牙周炎”有明顯的治療作用。 紫景天總黃酮對實(shí)驗(yàn)性牙周炎保護(hù)作用略強(qiáng)于牙痛酊。2、紫景天總黃酮治療給藥對實(shí)驗(yàn)性牙周炎大鼠血清中S0D、GSH、MDA的影響表2.紫景天總黃酮治療給藥對實(shí)驗(yàn)性牙周炎大鼠血清中S0D、GSH、MDA的影響(η =8，1士S)
組別劑量 (g生藥/ml)超氧化物歧化酶 SOD (U)谷胱甘肽過氧化物酶 GSH (U)丙二醛 MDA (mraol/L)正常對照組_230士42. 3***658土37. 9***4. 34 ±0. 69***模型對照組—131 土 32. 8554±35. 59. 15 土 1. 10牙痛酊0. 5m 1193±42. 4**605±22. 7林6. 60 + 0. 85林*紫景天總黃酮6.0217±52. 1**615±44. 3林6. 15±1. 09*林紫景天總黃酮3.0173 ±34. 0*596士30. 0*7. 61 ±1. 04*紫景天總黃酮1. 5169±33. 1*597 ±36. 4*7. 48±1.29*注與模型對照組比較*Ρ < 0. 05 ；**Ρ < 0. 01 ；***Ρ < 0. 001。由表2結(jié)果可見，模型組血清中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶比對照組 明顯降低，丙二醛含量明顯升高，紫景天總黃酮6、3、1.5g生藥/ml和牙痛酊均可明顯升高大鼠血清中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶，降低丙二醛含量。表明紫景天總黃酮及 牙痛酊均可明顯減輕對大鼠“實(shí)驗(yàn)性牙周炎”的損傷程度，對實(shí)驗(yàn)性牙周炎具有顯著的治療 作用。紫景天總黃酮作用略強(qiáng)于牙痛酊。3、外觀行為觀察及病理組織學(xué)檢查(1)外觀行為正常對照組體重逐漸增加，毛澤光亮，飲食飲水正常，神態(tài)、活動(dòng)正 常；模型組動(dòng)物造模后逐漸出現(xiàn)皮毛疏松不順，食欲不振，體重下降；經(jīng)過14天給藥，給藥 組可見動(dòng)物神態(tài)、活動(dòng)逐漸恢復(fù)，食欲增加，體重亦有所增加。(2)病理組織學(xué)檢查肉眼觀察正常對照組動(dòng)物牙齦呈粉紅色，齦緣菲薄且緊貼牙面；模型組動(dòng)物牙 齦腫脹暗紅，牙周袋逐漸形成、加深，牙齦觸之易出血，兩周后牙周袋進(jìn)一步加深，牙周袋有 食物殘?jiān)?，牙齦組織糜爛，溢膿。第4周處死兩只動(dòng)物，取牙及牙周組織進(jìn)行病理組織學(xué)檢 查，確認(rèn)“牙周炎模型”復(fù)制成功。第五周開始給藥，模型組動(dòng)物組牙齦組織出血、糜爛、溢 膿等癥狀進(jìn)一步加深；給藥組動(dòng)物牙齦顏色變淺，出血減少，牙周袋變淺。病理組織學(xué)檢查正常大鼠牙周軟組織、牙周膜附著正常，牙槽骨骨小梁排列緊 密，未見骨吸收破壞。模型組大鼠牙周軟組織有大量炎細(xì)胞浸潤；上皮部分向根方向增生， 形成深牙周袋；牙槽骨出現(xiàn)骨吸收陷窩，骨吸收破壞明顯，模型組大鼠出現(xiàn)中重度牙周炎癥 狀。與模型組相比，陽性藥牙周組織有炎細(xì)胞浸潤，但有所減輕。紫景天總黃酮中小劑量組 病理變化與陽性藥相似；高劑量組軟組織炎細(xì)胞浸潤明顯減輕，牙周袋變淺或消失，牙槽骨 破壞處于靜止?fàn)顟B(tài)，牙槽骨周圍有大量的成骨細(xì)胞增生，顯示牙周組織正處于修復(fù)階段。同時(shí)對牙周組織炎癥情況進(jìn)行分級評分0 無炎癥反應(yīng)；1 牙周膜血管輕度充 血、出血，炎癥細(xì)胞輕度浸潤，破骨細(xì)胞偶見或無；2 牙周膜血管明顯擴(kuò)張充血、出血，炎癥 細(xì)胞中度浸潤，膜增寬或部分消失，可見少量破骨細(xì)胞，牙槽骨輕度吸收；3 牙周膜炎癥細(xì) 胞重度浸潤，有膿腫形成，破骨細(xì)胞大量浸潤，牙骨質(zhì)及牙槽骨吸收明顯。表3.紫景天總黃酮治療給藥對大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎炎癥分級病理評分的影響(n = 8，叉士S)
權(quán)利要求
1.一種紫景天總黃酮，其特征在于它是由下列方法制得的紫景天鮮莖葉搗碎軋炸取汁，取軋炸汁用石油醚脫脂后，用正丁醇1 3倍，提取2 4次，合并正丁醇液，回收正丁醇，濃縮蒸干、干燥后得總黃酮。
2.如權(quán)利要求1所述的紫景天總黃酮的制備方法。
3.紫景天總黃酮在制備治療或預(yù)防復(fù)發(fā)性口瘡、口腔潰瘍和牙周炎的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種紫景天總黃酮及其提取方法和藥物用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。紫景天鮮莖葉搗碎軋炸取汁，取軋炸汁用石油醚脫脂后，用正丁醇1～3倍，提取2～4次，合并正丁醇液，回收正丁醇，濃縮蒸干、干燥后得總黃酮。紫景天總黃酮在制備治療或預(yù)防復(fù)發(fā)性口瘡、口腔潰瘍和牙周炎的藥物中的應(yīng)用。具有清熱解毒，收斂止血，消腫生肌的功能。用于治療或預(yù)防復(fù)發(fā)性口瘡、口腔潰瘍、牙周炎及相關(guān)口腔疾病。
文檔編號A61P1/02GK102068482SQ20101062189
公開日2011年5月25日 申請日期2010年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月31日
發(fā)明者李偉, 牛志多, 王偉 申請人:李偉