專利名稱：一種hiv免疫原及其制備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種引起廣譜中和抗體的HIV免疫原及其制備的疫苗，特別涉及一種具有廣譜保護(hù)作用的新型HIV疫苗。
背景技術(shù)：
艾滋病是全球所面臨的最重大挑戰(zhàn)之一，嚴(yán)重危害社會(huì)進(jìn)步與經(jīng)濟(jì)增長，已造成 6000多萬人被感染，其中3000萬人已經(jīng)死亡，目前存活的感染者約為3320萬，其中90%以上的病例發(fā)生在發(fā)展中國家。迄今為止，在各國政府與國際組織強(qiáng)有力的支持下，世界上先后開展了 100多個(gè)臨床試驗(yàn)，但尚未有一個(gè)成功上市的艾滋病疫苗。艾滋病疫苗研制困難的一個(gè)主要原因是由于艾滋病病毒的特殊性，即HIV-I具有高度的變異性。以往的疫苗所選擇的抗原表位主要是自然感染中的優(yōu)勢(shì)抗原表位，而這些抗原表位是HIV-I中變異頻率最高的位點(diǎn)。因此， 以這些抗原構(gòu)建的疫苗誘導(dǎo)出的抗體具有延遲性，無法中和已經(jīng)發(fā)生突變的HIV-I。因此，在艾滋病疫苗研究中所存在的一個(gè)重要問題是如何通過保守免疫原設(shè)計(jì)來誘導(dǎo)具有廣譜保護(hù)作用的新疫苗。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有技術(shù)中由于HIV變異頻率高而導(dǎo)致的抗體無法中和已經(jīng)突變的HIV 的問題，本發(fā)明提供了一種HIV免疫原，包括一種分枝肽序列，所述分枝肽序列中至少一個(gè)分枝包括HIV的4E10和/或2F5和/或Z13抗原表位序列。4E10、2F5和Z13抗原表位序列分別為目前分離得到的廣泛中和抗體4E10抗體、2F5抗體和Z13抗體所識(shí)別的抗原表位序列，識(shí)別高度保守的HIV-lgp41近膜端外部區(qū)(membrane proximal external region, MPER)。不論HIV病毒如何變異，其gp41近膜端外部區(qū)MPER基本保持保守，所以針對(duì)該區(qū)域設(shè)計(jì)的免疫原產(chǎn)生的抗體能夠避免由于病毒的變異導(dǎo)致的無法中和的問題。其中4E10 能以較低的濃度中和HIV-I原始病毒株在內(nèi)22株病毒株的全部亞型病毒，2F5可中和大約 67%左右的病毒。同時(shí)本發(fā)明的免疫原由于具有分枝肽結(jié)構(gòu)，包含多個(gè)分枝，分子量較大， 能夠增強(qiáng)該免疫原的免疫原性，而不需要另外的載體蛋白。本發(fā)明中，優(yōu)選4E10表位序列。 更優(yōu)選所述分枝肽有3至4個(gè)分枝均包括4E10表位序列。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明所述HIV免疫原的上述分枝肽序列可進(jìn)一步包括Th細(xì)胞表位序列。所述Th細(xì)胞表位序列包括PADRE。通過B、T細(xì)胞雙信號(hào)識(shí)別，有助于增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的免疫應(yīng)答，并能產(chǎn)生廣譜的保護(hù)作用。在一個(gè)實(shí)施方式中，上述HIV免疫原的分枝肽序列也可進(jìn)一步包括破傷風(fēng)毒素 830-843序列和/或口蹄疫病毒200-213序列，以增強(qiáng)其免疫原性。上述HIV免疫原，其中所述分枝肽至少部分分枝被選自乙酰基、酰胺基、烷基羰基和鏈烯基羰基組成的組中的至少一種修飾基團(tuán)修飾。優(yōu)選乙酰基和/或酰胺基。所述烷基羰基可用通式CH3(CH2)nCO-表示，其中η可為1-16中的任意整數(shù)，優(yōu)選10、12、14和16。所述鏈烯基羰基可用通式R(CH2)mCO-表示，其中R為烯基、二烯基或三烯基，例如，CH3(CH2) m’ CH = CH-, CH3CH2CH = CHCH2CH = CH_、CH3CH2CH = CHCH2CH = CHCH2CH = CH ；m 和 m，可為 1-10中的任意整數(shù)，優(yōu)選7。上述修飾基團(tuán)可與所述分枝肽的N末端α -氨基、C末端α-羧基或任一氨基酸的側(cè)鏈基團(tuán)共價(jià)連接。優(yōu)選N末端α-氨基。在所述分枝肽的末端或側(cè)鏈添加修飾基團(tuán)以保護(hù)所述分枝肽，防止過早被酶解而影響其免疫原性。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方式，所述HIV免疫原中所述分枝肽的核心骨架為賴氨酸構(gòu)成的多分枝核心骨架或利用二硫鍵構(gòu)成的多分枝核心骨架。所述分枝肽可包括3-8個(gè)分枝。下文中，將所述多分枝核心骨架用MAP表示，分枝數(shù)用過跟在MAP之后的數(shù)字表示，例如“MAP4”
權(quán)利要求
1.一種HIV免疫原，包括一種分枝肽序列，所述分枝肽序列中至少一個(gè)分枝包括HIV的 4E10和/或2F5和/或Z13抗原表位序列。
2.如權(quán)利要求1所述的HIV免疫原，其中所述分枝肽序列進(jìn)一步包括Th細(xì)胞表位序列、破傷風(fēng)毒素830-843序列和/或口蹄疫病毒200-213序列。
3.如權(quán)利要求1-2中任一項(xiàng)所述的HIV免疫原，其中所述分枝肽至少部分分枝被選自乙?；?、酰胺基、烷基羰基和鏈烯基羰基組成的組中的至少一種修飾基團(tuán)修飾。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的HIV免疫原，其中所述分枝肽的核心骨架為賴氨酸構(gòu)成的多分枝核心骨架或利用二硫鍵構(gòu)成的多分枝核心骨架。
5.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的HIV免疫原，其中所述分枝肽包括3-8個(gè)分枝。
6.如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的HIV免疫原，其中所述HIV的4E10和/或2F5和/ 或Z13抗原表位序列、Th細(xì)胞表位序列、以及破傷風(fēng)毒素830-843序列和/或口蹄疫病毒 200-213序列分別通過柔性序列與所述分枝肽的核心骨架連接。
7.如權(quán)利要求6所述的HIV免疫原，其中所述柔性序列包括甘氨酸組成的序列、賴氨酸組成的序列、6-氨基己?；M成的序列或它們的組合。
8.如權(quán)利要求7所述的HIV免疫原，其中所述核心骨架為三個(gè)賴氨酸組成的四分枝骨架，所述抗原表位序列為N末端乙?；蝓０坊?E10抗原表位序列，所述柔性序列為 KKKK-6-氨基己?；B在4E10抗原表位序列C末端，所述抗原表位序列通過6-氨基己?；c所述核心骨架相連。
9.一種HIV疫苗，包括如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的免疫原。
10.如權(quán)利要求9所述的HIV疫苗，進(jìn)一步包括佐劑，所述佐劑包括氫氧化鋁佐劑、短小棒狀桿菌、脂多糖、細(xì)胞因子或明礬，或?yàn)橛妥魟┗蛩妥魟?br> 全文摘要
本發(fā)明涉及一種引起廣譜中和抗體的HIV免疫原及其制備的疫苗。該免疫原包括包括一種分枝肽序列，該分枝肽序列中至少一個(gè)分枝包括HIV的4E10和/或2F5和/或Z13抗原表位序列。本發(fā)明的免疫原能夠激發(fā)針對(duì)HIV病毒的廣譜中和抗體，克服了現(xiàn)有技術(shù)中因?yàn)镠IV高變異性導(dǎo)致的現(xiàn)有疫苗誘發(fā)抗體的延遲性的問題。
文檔編號(hào)A61P31/18GK102532280SQ20101057806
公開日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2010年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月8日
發(fā)明者單亞明, 孔維, 張麗雙 申請(qǐng)人:吉林大學(xué)