專利名稱：從乳清中制備口服免疫球蛋白的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種口服免疫球旦白制劑的制備方法及其應(yīng)用，尤其涉及一種從牛奶的乳清中制備具有生物活性免疫球旦白制劑的制備方法及其應(yīng)用。
發(fā)明技術(shù)背景乳清是指牛奶去除酪旦白后的液體，通常是制備奶酪過程中的副產(chǎn)品，目前用牛奶中的酪旦白制備磷酸多肽時(shí)，乳清也是其副產(chǎn)品。據(jù)國外資料統(tǒng)計(jì)，每年約有8500萬噸乳清作為生產(chǎn)奶酪的副產(chǎn)品，其中有3400萬噸不能得到有效利用而被廢棄。
現(xiàn)代研究證明，乳清內(nèi)含用含量較低，但仍具有生物活性的免疫球旦白，這種具有生物活性的免疫球旦白能有效對(duì)抗各種常見的細(xì)菌，如大腸桿菌、腸道沙門氏桿菌等，以口服形式施用較高純度的這種免疫球旦白制劑，能夠幫助對(duì)抗胃腸道多種微生物感染，尤其對(duì)非母乳喂養(yǎng)的嬰兒、體質(zhì)虛弱的老年人、免疫功能低下的各類人群，用于預(yù)防和治療消化道感染有很好的臨床療效。
如上所述，乳清是來源豐富、價(jià)格低廉的天然原料，其中又含有生物活性免疫球旦白，如能有效地加以利用，不僅避免原料浪費(fèi)，又能幫助所需要的人群，是一個(gè)很好的資源。
目前已有工廠用乳清作為原料加工成乳清粉，主要應(yīng)用在食品工業(yè)，用于提高食品的質(zhì)量，增加食品香味等，但由于加工過程中反復(fù)高溫，已經(jīng)破壞了大多數(shù)免疫球旦白的生物活性。
目前已經(jīng)有多項(xiàng)從牛初乳中制備免疫球旦白，或者從免疫接種的牛奶中制備免疫球旦白的技術(shù)，美國專利(5106618)介紹了從免疫乳牛的牛奶中制備免疫球旦白，治療胃腸道感染等的方法。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，從來源豐富的乳清中制備具有生物活性的免疫球旦白，以幫助人體對(duì)抗各種微生物侵襲。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案，其特征是，以乳清為原料，通過單次或多次超微濾膜分離、過濾、濃縮等程序，分離過濾乳清中其他成份，制備高純度免疫球旦白制劑，在制備工藝中嚴(yán)格控制溫度，防止免疫球旦白生物活性成份的喪失，保持其高生物活性特征，制備多種形式制劑，幫助人體對(duì)抗微生物侵害。
在乳清原料中主要含有小分子量的乳糖、微量元素、乳清旦白和部份多肽，以及較大分子量的免疫球旦白，可能還會(huì)有部份未去除干凈的酪旦白。乳清旦白分子量通常小于60,000，酪旦白分子量小于50,000～60,000，其余乳糖及微量元素的分子量均小于上述旦白質(zhì)，而免疫球旦白的分子量大于150,000。
乳清中含有各種營養(yǎng)物質(zhì)，包括多種維生素，如維生素A、D、E、C、B1、B2、B6、B12和尼克酸，多種微量元素如鈣、鐵、磷、鋅、鎂，多種氨基酸如賴氨酸、牛磺酸等，多種生長因子如神經(jīng)生長因子、表皮生長因子、類胰島素生長因子等，還含有多種活性肽和酶如免疫調(diào)節(jié)肽、腦肽、溶菌酶、黃嘌呤氧化酶等，而乳鐵旦白、糖旦白、乳清旦白都具有一定營養(yǎng)作用。
通過多種不同分子量超微濾膜的聯(lián)合應(yīng)用，可以有效地從乳清中提取高純度的各種物質(zhì)，尤其能提取高純度的、有生物活性的免疫球旦白。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，制備高純度的免疫球旦白可以采用下列方法收集乳清，進(jìn)行巴氏消毒(140°F15秒)，乳清直接用分子量為10,000D的超微濾膜進(jìn)行濃縮，先去除乳清小分子物質(zhì)及水，收集濃縮物，再次用分子量為100,000D的超微濾膜濃縮，濃縮物直接冷凍干燥成粉或噴霧干燥制粉，其溫度控制在140°F以下。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，制備高純度的免疫球旦白也可以采用另一方法，收集乳清，進(jìn)行巴氏消毒(140°F15秒)，乳清直接用120,000D分子量的超微濾膜過濾，收集濃縮物進(jìn)行冷凍干燥或噴霧干燥(溫度低于140°F)制備干粉。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，可以在制備高純度免疫球旦白的同時(shí)，制備乳清中上述其他營養(yǎng)成份的濃縮物，其方法是，收集的乳清，經(jīng)140°F巴氏消毒15秒后，迅速冷卻至室溫，泵入分子量為1,000D～6,000D超微濾膜的過濾設(shè)備進(jìn)行濃縮，去除乳清中水份，濃縮物再送至分子量為100,000D的超微濾膜的過濾設(shè)備進(jìn)行過濾分離，上清液直接進(jìn)行噴霧干燥，制備的干粉含有乳清旦白、乳糖、多肽、多糖、維生素、微量元素等營養(yǎng)成份。超濾濃縮物內(nèi)含有高純度免疫球旦白，采用冷凍干燥或噴霧干燥方式制粉。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，為了保持免疫球旦白的生物活性，所有的工藝均需嚴(yán)格控制溫度，牛奶原料和乳清原料進(jìn)行巴氏消毒時(shí)，溫度不能超過140°F，時(shí)間不能超過15秒，在整個(gè)制備過程中，都要注意控制溫度，在噴霧干燥時(shí)，溫度也不能超過140°F。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，本發(fā)明制備的免疫球旦白干粉中，免疫球旦白含量約為8％，其中免疫球旦白G(IgG)是主要成份，具有生物活性，可以采用多種已知的方法進(jìn)行測(cè)定，抗體凝集試驗(yàn)是一種簡單有效的方法。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，本發(fā)明制備的免疫球旦白可以制備成多種形式制劑使用，可以直接應(yīng)用干粉制劑，或加溶液配制成口服液應(yīng)用，或者與其他藥物輔料混合制備成片劑、膠囊劑、散劑、沖劑、顆粒劑、油劑、乳劑等服用，還可以作為食品添加劑制備成食品使用，如牛奶、奶粉、速溶咖啡、速溶茶、餅干、糕點(diǎn)、冰琪淋等，還可以制備成口香糖、含片形式，以對(duì)抗口腔中微生物，或制備成氣霧劑以對(duì)抗咽喉或呼吸道微生物，還可以制備成水溶性溶液與超聲霧化裝置共同應(yīng)用以對(duì)抗上呼吸道微生物。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，本發(fā)明制備的免疫球旦白制劑，適用于嬰幼兒，尤其適用于未采用母乳喂養(yǎng)的嬰兒預(yù)防和治療胃腸道微生物感染；適用于體質(zhì)虛弱、抵抗力低下、免疫功能低下的人群用來預(yù)防和治療胃腸道微生物感染、呼吸道微生物感染、口腔、咽喉部微生物感染；適用于免疫功能低下或免疫功能缺乏的患者用來預(yù)防和治療各類微生物感染，尤其是愛滋病病人的胃腸道感染；還適用于長期服用腎上腺皮質(zhì)激素類藥物的病人所發(fā)生的各類空腔器官感染。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，本發(fā)明方法制備的免疫球旦白制劑用于預(yù)防和治療各類微生物感染的劑量是0.1～20g/天，較好的范圍是1～10g/天，最好是2～5g/天，取決于感染類型和患者狀態(tài)，長期服用無毒付作用，可以與任何其他藥物或營養(yǎng)成分共同使用。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，采用本方法從乳清中制備其他營養(yǎng)物質(zhì)內(nèi)含有豐富的乳糖、乳清旦白、乳鐵旦白、維生素、微量元素和部份多肽等成份，可以用作食品添加劑、調(diào)味劑、或營養(yǎng)補(bǔ)充劑單獨(dú)使用，或與其他成份聯(lián)合應(yīng)用。
本發(fā)明的有益效果是，從低廉價(jià)格得到的原材料中制備出有生物活性的免疫球旦白，能幫助人體對(duì)抗各種微生物感染，從而創(chuàng)造了較高的附加價(jià)值。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明實(shí)例1從乳清中制備免疫球旦白收集制備奶酪的付產(chǎn)品乳清20升，直接用真空泵輸入裝有分子量為10,000D超微濾膜的交錯(cuò)切面流體超濾裝置(TFF)，輸入壓為3Bar，輸出壓為2Bar，棄去上清液，收集的濃縮液直接輸送至裝有分子量為100,000D超微濾膜的上述同樣設(shè)備，收集濃縮物直接進(jìn)行冷凍干燥，得到高純度免疫球旦白干粉。
實(shí)施例2從乳清中制備免疫球旦白收集乳清，進(jìn)行巴氏消毒(溫度為140°F、持續(xù)15秒)，乳清直接被泵入交錯(cuò)切面流體超濾裝置(TFF)(美國Pall公司產(chǎn)品)，選擇超微濾膜的分子量為120,000D，濃縮至原容積的20％，收集濃縮物直接以140°F的溫度噴霧干燥，得到高純度的免疫球旦白干粉。
實(shí)施例3
同時(shí)制備免疫球旦白和其他營養(yǎng)成份收集乳清，進(jìn)行巴氏消毒(140°F，15秒)，乳清泵入雙層交錯(cuò)切面流體超濾裝置，第一層過濾超微濾膜分子量為1,000D，進(jìn)行濃縮至原體積30％，濃縮物再送到第二層超微濾膜分子量為100,000D，超濾上清液直接進(jìn)行噴霧干燥，獲得乳糖和乳清旦白，并包含多種維生素、微量元素和多肽的干粉，而超濾濃縮物直接進(jìn)行冷凍干燥，制備高純度的免疫球旦白干粉。
實(shí)施例4測(cè)定免疫球旦白的生物活性用大腸桿菌制備抗原，用該抗原與實(shí)施例1中制備的免疫球旦白進(jìn)行粘集反應(yīng)，測(cè)試反應(yīng)中免疫球旦白與抗原特異性結(jié)合，抗體滴度達(dá)3400，證明免疫球旦白具有生物活性。
實(shí)施例5隨機(jī)選擇免疫力低下的腹瀉病人8名，服用實(shí)施例1制備的免疫球旦白，每人每天服用劑量5g，第二天起7名病人腹瀉次數(shù)明顯減少，第四天起腹瀉停止，無其他任何付反應(yīng)。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明涉及一種口服免疫球旦白制劑的制備方法及其應(yīng)用，尤其涉及一種從牛奶的乳清中制備具有生物活性免疫球旦白制劑的制備方法及其應(yīng)用，其特征是，以乳清為原料，通過單次或多次超微濾膜分離、過濾、濃縮等程序，分離過濾乳清中其他成份，制備高純度免疫球旦白制劑，在制備工藝中嚴(yán)格控制溫度，防止免疫球旦白生物活性成份的喪失，保持其高生物活性特征，制備多種形式制劑，幫助人體對(duì)抗微生物侵害。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術(shù)特征是，制備高純度的免疫球旦白可以采用下列方法收集乳清，進(jìn)行巴氏消毒(140°F15秒)，乳清直接用分子量為10,000D的超微濾膜進(jìn)行濃縮，先去除乳清小分子物質(zhì)及水，收集濃縮物，再次用分子量為100,000D的超微濾膜濃縮，濃縮物直接冷凍干燥成粉或噴霧干燥制粉，其溫度控制在140°F以下。
3.按照權(quán)利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術(shù)特征是，制備高純度的免疫球旦白也可以采用另一方法，收集乳清，進(jìn)行巴氏消毒(140°F15秒)，乳清直接用120,000D分子量的超微濾膜過濾，收集濃縮物進(jìn)行冷凍干燥或噴霧干燥(溫度低于140°F)制備干粉。
4.按照權(quán)利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術(shù)特征是，可以在制備高純度免疫球旦白的同時(shí)，制備乳清中上述其他營養(yǎng)成份的濃縮物，其方法是，收集的乳清，經(jīng)140°F巴氏消毒15秒后，迅速冷卻至室溫，泵入分子量為1,000D～6,000D超微濾膜的過濾設(shè)備進(jìn)行濃縮，去除乳清中水份，濃縮物再送至分子量為100,000D的超微濾膜的過濾設(shè)備進(jìn)行過濾分離，上清液直接進(jìn)行噴霧干燥，制備的干粉含有乳清旦白、乳糖、多肽、多糖、維生素、微量元素等營養(yǎng)成份，超濾濃縮物內(nèi)含有高純度免疫球旦白，采用冷凍干燥或噴霧干燥方式制粉。
5.按照權(quán)利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術(shù)特征是，本發(fā)明制備的免疫球旦白干粉中，免疫球旦白含量約為8％，其中免疫球旦白G(IgG)是主要成份，具有生物活性，可以采用多種已知的方法進(jìn)行測(cè)定，抗體凝集試驗(yàn)是一種簡單有效的方法。
6.按照權(quán)利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術(shù)特征是，為了保持免疫球旦白的生物活性，所有的工藝均需嚴(yán)格控制溫度，牛奶原料和乳清原料進(jìn)行巴氏消毒時(shí)，溫度不能超過140°F，時(shí)間不能超過15秒，在整個(gè)制備過程中，都要注意控制溫度，在噴霧干燥時(shí)，溫度也不能超過140°F。
7.按照權(quán)利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術(shù)特征是，本發(fā)明制備的免疫球旦白可以制備成多種形式制劑使用，可以直接應(yīng)用干粉制劑，或加溶液配制成口服液應(yīng)用，或者與其他藥物輔料混合制備成片劑、膠囊劑、散劑、沖劑、顆粒劑、油劑、乳劑等服用，還可以作為食品添加劑制備成食品使用，如牛奶、奶粉、速溶咖啡、速溶茶、餅干、糕點(diǎn)、冰琪淋等，還可以制備成口香糖、含片形式，以對(duì)抗口腔中微生物，或制備成氣霧劑以對(duì)抗咽喉或呼吸道微生物，還可以制備成水溶性溶液與超聲霧化裝置共同應(yīng)用以對(duì)抗上呼吸道微生物。
8.按照權(quán)利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術(shù)特征是，本發(fā)明制備的免疫球旦白制劑，適用于嬰幼兒，尤其適用于未采用母乳喂養(yǎng)的嬰兒預(yù)防和治療胃腸道微生物感染；適用于體質(zhì)虛弱、抵抗力低下、免疫功能低下的人群用來預(yù)防和治療胃腸道微生物感染、呼吸道微生物感染、口腔、咽喉部微生物感染；適用于免疫功能低下或免疫功能缺乏的患者用來預(yù)防和治療各類微生物感染，尤其是愛滋病病人的胃腸道感染；還適用于長期服用腎上腺皮質(zhì)激素類藥物的病人所發(fā)生的各類空腔器官感染。
9.按照權(quán)利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術(shù)特征是，本發(fā)明方法制備的免疫球旦白制劑用于預(yù)防和治療各類微生物感染的劑量是0.1～20g/天，較好的范圍是1～10g/天，最好是2～5g/天，取決于感染類型和患者狀態(tài)，長期服用無毒付作用，可以與任何其他藥物或營養(yǎng)成分共同使用。
10.按照權(quán)利要求1所述的方法，本發(fā)明的技術(shù)特征是，采用本方法從乳清中制備其他營養(yǎng)物質(zhì)內(nèi)含有豐富的乳糖、乳清旦白、乳鐵旦白、維生素、微量元素和部份多肽等成份，可以用作食品添加劑、調(diào)味劑、或營養(yǎng)補(bǔ)充劑單獨(dú)使用，或與其他成份聯(lián)合應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種口服免疫球蛋白制劑的制備方法及其應(yīng)用，尤其涉及一種從牛奶的乳清中制備具有生物活性免疫球蛋白制劑的制備方法及其應(yīng)用，其特征是，以乳清為原料，通過單次或多次超微濾膜分離、過濾、濃縮等程序，分離過濾乳清中其他成分，制備高純度免疫球蛋白制劑，在制備工藝中嚴(yán)格控制溫度，防止免疫球蛋白生物活性成分的喪失，保持其高生物活性特征，制備多種形式制劑，幫助人體對(duì)抗微生物侵害。
文檔編號(hào)A61K39/395GK1557489SQ20041001584
公開日2004年12月29日 申請(qǐng)日期2004年1月15日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月15日
發(fā)明者高春平 申請(qǐng)人:高春平