專利名稱：烏骨雞血調(diào)節(jié)免疫的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于調(diào)節(jié)免疫活性的用途。
背景技術(shù)：
由于醫(yī)療科技的進(jìn)步，延長(zhǎng)人類壽命，使得“人口高齡化”是近年來(lái)發(fā)達(dá)國(guó)家普遍所面臨到的問(wèn)題，目前臺(tái)灣已邁進(jìn)發(fā)達(dá)國(guó)家之林，人口高齡化的現(xiàn)象與所產(chǎn)生的問(wèn)題也逐漸浮現(xiàn)。隨著衰老的發(fā)生，人體內(nèi)與免疫相關(guān)的器官包括制造淋巴細(xì)胞的骨髓、胸腺、脾臟以及淋巴結(jié)等的功能也會(huì)逐步下降，增加疾病感染及死亡的風(fēng)險(xiǎn)。除了衰老外，目前研究也顯示現(xiàn)代人因?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)失調(diào)、壓力或污染等因素加重免疫系統(tǒng)的負(fù)荷，在環(huán)境的刺激下易引起細(xì)胞激素的不正常分泌而導(dǎo)致慢性發(fā)炎，進(jìn)而提高如中風(fēng)、心肌梗塞、癌癥、阿茲海默癥、 慢性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自體免疫疾病等文明病的發(fā)生。以現(xiàn)代營(yíng)養(yǎng)學(xué)的角度來(lái)說(shuō)，許多中藥材都具有抗氧化、抗衰老的潛在功效，例如在許多研究中都顯示靈芝中三萜類及多醣體等特殊成份對(duì)于改善肝纖維化、改善過(guò)敏小鼠癥狀、增加小鼠學(xué)習(xí)記憶能力、抗肝癌、抗血癌等有顯著的成效。其它如黃耆、人參、冬蟲(chóng)夏草、 刺五加及何首烏等中藥，亦有相關(guān)研究顯示其具有免疫調(diào)節(jié)活性。但是中藥材中的有效成份通常需要經(jīng)過(guò)繁復(fù)的程序萃取，價(jià)格昂貴，而且偽劣中藥材原料遍布市面，質(zhì)量令人堪
^^ ο因此，本發(fā)明的目標(biāo)即在尋找質(zhì)量容易控管、制備方便又具有高免疫調(diào)節(jié)活性的保健食品或藥品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)烏骨雞血粉具有增加巨噬細(xì)胞活性及促進(jìn)免疫細(xì)胞增殖的反應(yīng)具有令人意外的提升效果。因此，本發(fā)明一方面為提供一種烏骨雞血粉用于調(diào)節(jié)免疫活性的用途，其中烏骨雞血粉以包含下列步驟的方法制得(1)收集烏骨雞血；(2)將收集的烏骨雞血予以干燥制成粉狀而得。本發(fā)明另一方面為提供烏骨雞血粉用于促進(jìn)細(xì)胞激素產(chǎn)生的用途。本發(fā)明的再另一方面為提供烏骨雞血粉用于提高脾臟免疫細(xì)胞增生能力的用途。本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)具體實(shí)施例將會(huì)在下文做描述。本發(fā)明其它特征及優(yōu)點(diǎn)也將可在以下實(shí)施例及權(quán)利要求中分別顯見(jiàn)。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供一種烏骨雞血粉用于調(diào)節(jié)免疫活性的用途，其中烏骨雞血粉以包含下列步驟的方法制得(1)收集烏骨雞血；
(2)將收集的烏骨雞血予以干燥制成粉狀而得。本發(fā)明中，烏骨雞血的干燥方式可使用已知的任何可用于移除或降低水含量的技術(shù)，例如冷凍干燥或熱風(fēng)干燥。根據(jù)本發(fā)明，將烏骨雞血粉中的水含量控制于約5 %以下。根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)施例，如使用熱風(fēng)干燥時(shí)，熱風(fēng)入風(fēng)溫度約100°C以上，出風(fēng)溫度約70°C 約150°C，所需時(shí)間約10秒以內(nèi)，不需添加賦型劑。根據(jù)本發(fā)明的另一實(shí)施例，使用冷凍干燥直接將收集的烏骨雞血制成粉末，凍干條件為約-10°C或以下，壓力為約0. OltorrJt 凍時(shí)間為約12小時(shí)以上?；蚩蓪豕请u血于室溫凝固后再進(jìn)行冷凍干燥。本發(fā)明的一具體實(shí)施例中，以三階段處理，包括第一階段雞血處理-收集雞血后，在約-10°C或以下直接進(jìn)行冷凍，或先行凝固后再在約-io°c或以下進(jìn)行冷凍以備后續(xù)處理；第二階段干燥制程-以約-20°C或以下，壓力為約0. Oltorr或以下，處理約M小時(shí)以上冷凍干燥；或?qū)豕请u血加溫至約70°C或以上，以流體進(jìn)行熱風(fēng)干燥，熱風(fēng)入風(fēng)溫度約120°C以上，出風(fēng)溫度約85°C 110°C，所需時(shí)間約5秒以內(nèi)，水含量控制于約5%以下；第三階段烏骨雞血粉末處理-收集干燥后所得的粉末加以粉碎過(guò)篩。本發(fā)明的烏骨雞血粉較佳以口服給予，且可制備為任何口服形式的食品或藥品。 根據(jù)本發(fā)明，可將烏骨雞血粉制備成膠囊形式，并保存于低溫中。在一實(shí)例中，烏骨雞血粉持續(xù)口服給予小鼠六周后，觀察其體重及脾臟重量。結(jié)果顯示給予烏骨雞血粉的組別皆無(wú)顯著性的改變，表示烏骨雞血粉對(duì)于活體沒(méi)有毒性。本文所述的“免疫活性”指非特異性免疫，或可稱為“先天性免疫”，因其不需辨認(rèn)抗原即可廣泛的殺死或排除大多數(shù)有害的細(xì)菌或病毒，可視為免疫系統(tǒng)的第一道防線，主要的方式包括吞噬作用、補(bǔ)體中和、干擾素或發(fā)炎作用等。自然殺手細(xì)胞和巨噬細(xì)胞皆屬于非特異性免疫系統(tǒng)的一部分，主要的功能即在于吞噬體內(nèi)的異物，避免感染發(fā)生。因此， 若能提升自然殺手細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的活性，代表非特異性免疫的功能相對(duì)地亦被提升。根據(jù)一實(shí)例，為測(cè)試本發(fā)明的烏骨雞血粉是否具有提升非特異性免疫的功能，將烏骨雞血粉以三種不同劑量模式口服投予小鼠連續(xù)六周后，搜集脾臟細(xì)胞后以YAC-I細(xì)胞株為標(biāo)的細(xì)胞，依一定比例(6.25 1,12.5 1、25 1)混合作用一段時(shí)間，測(cè)試自然殺手細(xì)胞毒殺標(biāo)的細(xì)胞能力。結(jié)果顯示，烏骨雞血粉在較低的作用/標(biāo)的細(xì)胞比例(E/T比例) 下能殺死較多的標(biāo)的細(xì)胞，表示自然殺手細(xì)胞的活性被顯著性地提升。在另一實(shí)例中，搜集腹腔巨噬細(xì)胞懸浮液，觀察其吞吃經(jīng)FITC標(biāo)定的大腸桿菌的比例(吞吃比例(％))。結(jié)果發(fā)現(xiàn)給予烏骨雞血粉的組別的腹腔巨噬細(xì)胞具有較高的吞吃比例，顯示腹腔巨噬細(xì)胞的活性亦被提升。綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，證實(shí)烏骨雞血粉具有加強(qiáng)非特異性免疫的功效，能夠提升免疫細(xì)胞吞吃外來(lái)物質(zhì)的能力。除了提升非特異性免疫力外，本發(fā)明意外地發(fā)現(xiàn)烏骨雞血粉亦具有刺激細(xì)胞激素 (cytokine)產(chǎn)生的功效，特別是TNF-α。在一實(shí)例中，取自口服投予烏骨雞血粉六周的小鼠的脾臟細(xì)胞，經(jīng)定量后分別加入到M孔平底細(xì)胞培養(yǎng)盤中，再加入細(xì)胞裂殖素(Con Α)及脂多醣(LPQ共同培養(yǎng)以刺激脾臟中的免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞激素。針對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行酶免疫吸附分析后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞激素IL-2， IL-4及TNF- α的含量皆有增加，證實(shí)烏骨雞血粉能刺激免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞激素。脾臟中包含有大量成熟或分化中的淋巴細(xì)胞，是人體重要的免疫器官，在受到外來(lái)細(xì)菌或病毒的感染時(shí)，脾臟中的淋巴細(xì)胞會(huì)大量增生以啟動(dòng)免疫反應(yīng)。本發(fā)明的烏骨雞血粉亦意外地發(fā)現(xiàn)其具有提高脾臟免疫細(xì)胞增生的功效，其中該脾臟免疫細(xì)胞包括T細(xì)胞及B細(xì)胞。在一實(shí)例中，取自口服投予烏骨雞血粉六周的小鼠的脾臟細(xì)胞，經(jīng)給予細(xì)胞裂殖素(ConA)及脂多醣(LPQ刺激并培養(yǎng)后，能明顯地觀察到脾臟細(xì)胞的數(shù)量有顯著性地提升，證明本發(fā)明的烏骨雞血粉能夠增加脾臟免疫細(xì)胞的數(shù)量，活體的免疫力可因此提升。本發(fā)明將由下列實(shí)施例做進(jìn)一步的說(shuō)明，但實(shí)際發(fā)明并不受限于該用于展示的實(shí)施例。實(shí)施例1 烏骨雞血粉制備(1)烏骨雞血處理烏骨雞為由凱馨實(shí)業(yè)股份有限公司自行繁殖并提供用于制備烏骨雞血粉。烏骨雞血的采血方式為將雞只電擊之后，割開(kāi)頸部動(dòng)脈后直接收集烏骨雞頸動(dòng)脈血。將收集的烏骨雞血直接放入-20°C冷凍庫(kù)中冷凍；或亦可放置于室溫下，至自然凝固成血塊后，放入-20°C冷凍庫(kù)中備用。(2)干燥制程冷凍的烏骨雞血接著以冷凍干燥方式制成粉末，凍干條件為_(kāi)20°C，壓力為 0. Oltorr，產(chǎn)量100公斤的處理時(shí)間設(shè)定為72小時(shí)，水含量控制于約5%以下；或以熱風(fēng)干燥方式制成粉末，熱風(fēng)入風(fēng)溫度約120°C以上，出風(fēng)溫度約85°C 110°C，所需時(shí)間約5秒以內(nèi)，水含量控制于約5%以下。(2)烏骨雞血粉末處理收集干燥后所得的粉末加以粉碎并過(guò)篩。以本實(shí)施例制備的烏骨雞血粉使用于下述動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中。
實(shí)施例2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及試驗(yàn)設(shè)計(jì)雄性BALB/c小鼠購(gòu)自樂(lè)斯科生物科技股份有限公司，馴化、檢疫1 2周，試驗(yàn)8 周齡小鼠，每組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物只數(shù)為10只。本品系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物已有豐富的基礎(chǔ)參考數(shù)據(jù)與數(shù)據(jù)， 可適用于特異性免疫功能評(píng)估試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物房中，室內(nèi)溫度21 25°C、濕度55 75%、照明時(shí)間12 小時(shí)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物馴化1 2周后經(jīng)由實(shí)驗(yàn)人員判斷確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康狀況良好后，稱重后以S型分組。5只為1個(gè)飼育籠飼養(yǎng)，以耳號(hào)區(qū)分實(shí)驗(yàn)動(dòng)物個(gè)體，貼上Cage卡標(biāo)示籠號(hào)、品系、周齡、動(dòng)物編號(hào)、試驗(yàn)編號(hào)、試驗(yàn)組別、入室日期及試驗(yàn)期間。在馴化、檢疫及試驗(yàn)期間每日進(jìn)行臨床癥狀觀察并記錄動(dòng)物是否有其它臨床癥狀或死亡。節(jié)假日亦照常進(jìn)行臨床癥狀觀察，以確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康狀況。試驗(yàn)期間實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自由攝取飼料及飲水并于每周定時(shí)測(cè)量實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重變化及更換飼料。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在試驗(yàn)開(kāi)始后經(jīng)胃管強(qiáng)迫投予試驗(yàn)物質(zhì)連續(xù)6周，每周第一天測(cè)量體重并調(diào)整當(dāng)周投予劑量。烏骨雞血粉依照建議劑量1、4及20mg/kg投予，每次每只小鼠所投予最大口服總體積不超過(guò)10ml/kg。試驗(yàn)組別分別如下負(fù)對(duì)照組滅菌水正對(duì)照組50mg/kg雙鶴極品靈芝(購(gòu)自雙鶴企業(yè)股份有限公司)低劑量組lmg/kg烏骨雞血粉中劑量組4mg/kg烏骨雞血粉高劑量組20mg/kg烏骨雞血粉
統(tǒng)計(jì)方法本試驗(yàn)數(shù)據(jù)以實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值(Mean) 士標(biāo)準(zhǔn)差(Mandard deviations. D.) 來(lái)表示。采用SPSS計(jì)算機(jī)統(tǒng)計(jì)軟件包各試驗(yàn)組的數(shù)據(jù)先依單因子變異數(shù)分析(One-way analysis of variance, ANOVA)進(jìn)行定，再以Duncantest比較各組間是否具差異性。若P 值小于0. 05則表示兩試驗(yàn)組之間具有統(tǒng)計(jì)上顯著差異。實(shí)施例3 烏骨雞血粉對(duì)于體重和脾臟重量的影響在試驗(yàn)期間各試驗(yàn)組動(dòng)物的臨床觀察及犧牲后肉眼病變無(wú)特定的眼觀病變，且各組間的體重變化及犧牲后脾臟重量無(wú)顯著差異(表1及表幻，顯示烏骨雞血粉對(duì)于活體沒(méi)有毒性。表1體重變化
權(quán)利要求
1.一種烏骨雞血粉用于調(diào)節(jié)免疫活性的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，該烏骨雞血粉以包含下列步驟的方法制得(1)收集烏骨雞血；(2)將收集的烏骨雞血予以干燥制成粉狀而得。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，該收集的烏骨雞血先予以冷凍保存。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，該烏骨雞血粉以冷凍干燥或熱風(fēng)干燥制得。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，該烏骨雞血粉以口服給予。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，該調(diào)節(jié)免疫活性指調(diào)節(jié)非特異性免疫功能。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于，該調(diào)節(jié)非特異性免疫功能包括提升自然殺手細(xì)胞和吞噬細(xì)胞的活性。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，其可促進(jìn)產(chǎn)生細(xì)胞激素。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于，該細(xì)胞激素為11^-2、11^4或1順-(1。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，其可提高脾臟免疫細(xì)胞增生能力。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的用途，其特征在于，該免疫細(xì)胞為B細(xì)胞和T細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種烏骨雞血粉的用途，其可用于調(diào)節(jié)非特異性的免疫活性，其包括促進(jìn)細(xì)胞激素產(chǎn)生、促進(jìn)脾臟免疫細(xì)胞的增生，以及提升自然殺手細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的活性。
文檔編號(hào)A61P37/04GK102370660SQ20101026128
公開(kāi)日2012年3月14日 申請(qǐng)日期2010年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月24日
發(fā)明者劉姿锜, 曾麗芳, 鄧學(xué)凱, 魏敏倫 申請(qǐng)人:凱馨實(shí)業(yè)股份有限公司