專利名稱：Peg-pcl-peg的新用途及裝載抗原的混合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物制品領(lǐng)域，涉及PEG-PCL-PEG共聚物作為免疫佐劑以制備蛋白多 肽疫苗的用途。
背景技術(shù)：
免疫佐劑(immunoadjuvant)又稱非特異性免疫增生劑。本身不具抗原性，但同抗 原一起或預(yù)先注射到機(jī)體內(nèi)能增強(qiáng)免疫原性(見抗原)或改變免疫反應(yīng)類型。種類很多， 目前尚無(wú)統(tǒng)一的分類方法，常用的佐劑可分為4類無(wú)機(jī)佐劑，如氫氧化鋁，明礬等；有機(jī)佐 劑，微生物及其產(chǎn)物如分枝桿菌(結(jié)核桿菌、卡介苗)、短小桿菌、百日咳桿菌、內(nèi)毒素、細(xì)菌 提取物(胞壁酰二肽)等；合成佐劑，如人工合成的雙鏈多聚核苷酸(雙鏈多聚腺苷酸、尿 苷酸)、左旋咪唑、異丙肌苷等；油劑，如弗氏佐劑、花生油乳化佐劑、礦物油、植物油等。弗 氏佐劑目前在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中最常用，又可分為弗氏不完全佐劑和完全佐劑兩種。免疫佐劑的 生物作用包括(1)抗原物質(zhì)混合佐劑注入機(jī)體后，改變了抗原的物理性狀，可使抗原物質(zhì) 緩慢地釋放，延長(zhǎng)了抗原的作用時(shí)間；(2)佐劑吸附了抗原后，增加了抗原的表面積，使抗 原易于被巨噬細(xì)胞吞噬；(3)佐劑能刺激吞噬細(xì)胞對(duì)抗原的處理；(4)佐劑可促進(jìn)淋巴細(xì)胞 之間的接觸，增強(qiáng)輔助T細(xì)胞的作用；(5)可刺激致敏淋巴細(xì)胞的分裂和漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體， 故免疫佐劑的作用可使無(wú)免疫原性物質(zhì)變成有效的免疫原；(6)可提高機(jī)體初次和再次免 疫應(yīng)答的抗體滴變；(7)改變抗體的產(chǎn)生類型以及產(chǎn)生遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，并使其增強(qiáng)。近年來(lái)，脂質(zhì)體在免疫佐劑領(lǐng)域中開始得到應(yīng)用。作為免疫佐劑，脂質(zhì)體有著安全 性好；毒副作用小；提高抗原穩(wěn)定性，延長(zhǎng)疫苗使用期；能降低被包裹抗原的毒性，增強(qiáng)受 體耐受高劑量病原微生物或其毒素攻擊的能力等優(yōu)點(diǎn)。但是不同的疫苗是否都能使用脂質(zhì) 體作為免疫佐劑目前沒有定論，不同疫苗所需要的脂質(zhì)體免疫佐劑的配方還需要反復(fù)地尋 找和篩選；并且脂質(zhì)體作為佐劑成本高、包封率低、制備復(fù)雜、批間差異大，在實(shí)際應(yīng)用中有 較大的困難。本領(lǐng)域目前需要開發(fā)新的、優(yōu)秀的免疫佐劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是為免疫佐劑的使用提供新的選擇。本發(fā)明解決技術(shù) 問(wèn)題的技術(shù)方案是提供PEG-PCL-PEG三嵌段共聚物作為免疫佐劑的新用途。其中，上述用途中的PEG-PCL-PEG共聚物，其分子量為1500 10000，其中PEG鏈 段的分子量與PCL鏈段的分子量的比值為0. 4 2. 6。其中，上述用途中的PEG-PCL-PEG共聚物分子量為2000 8000，其中PEG鏈段的 分子量與PCL鏈段的分子量的比值為0. 5 2。其中，上述用途中的PEG-PCL-PEG 共聚物為 E55(1-C22(1Q-E55(1、E75Q-C3_-E75。、 E750-C2500-E750、E750-C750-E750 或 E2_-C4000-E2000 ；其中 E 表示 PEG，C 表示 PCL，下標(biāo)分別表示相 應(yīng)鏈段的分子量。本發(fā)明所解決的第二個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供了一種PEG-PCL-PEG三嵌段共聚物作為免疫佐劑裝載目標(biāo)抗原制成的復(fù)合物。其中，上述復(fù)合物中的PEG-PCL-PEG共聚物，其分子量為1500 10000，其中PEG 鏈段的分子量與PCL鏈段的分子量的比值為0. 4 2. 6。其中，上述復(fù)合物中的PEG-PCL-PEG共聚物分子量為2000 8000，其中PEG鏈段 的分子量與PCL鏈段的分子量的比值為0. 5 2. 25。優(yōu)選的，上述PEG-PCL-PEG共聚物中 PCL的相對(duì)分子質(zhì)量與PEG的相對(duì)分子質(zhì)量的比值優(yōu)選為1.75 2. 25。更優(yōu)選的，上述嵌 段共聚物中PCL的相對(duì)分子質(zhì)量與PEG的相對(duì)分子質(zhì)量的比值為2。其中，上述復(fù)合物中的PEG-PCL-PEG 共聚物為 E55。-C22。。-E55。、E75。-C3_-E75。、 E750-C2500-E750、E750-C750-E750 或 E2_-C4000-E2000 ；其中 E 表示 PEG，C 表示 PCL，下標(biāo)分別表示相 應(yīng)鏈段的分子量。其中，上述復(fù)合物為水凝膠，其中的PEG-PCL-PEG共聚物濃度為15wt% 40wt%; 較優(yōu)為20wt% 30wt% ；更優(yōu)選濃度為25wt%。其中，上述復(fù)合物中的目標(biāo)抗原為腫瘤生長(zhǎng)因子類多肽。其中，上述復(fù)合物中的目標(biāo)抗原為堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)或其具備抗 原性的短肽(tbFGF)。bFGF短肽為缺失部分氨基酸殘基但是仍具有同樣活性的bFGF短肽 (tbFGF)。進(jìn)一步的，上述復(fù)合物還含有多糖成分。其中，上述復(fù)合物中的多糖為甘露聚糖。其中，上述復(fù)合物中的bFGF蛋白或短肽 與多糖的重量比例為1 0.2 5，優(yōu)選比例為1 2。其中，上述復(fù)合物中PEG-PCL-PEG的用量則根據(jù)實(shí)際使用的抗原劑量和注射時(shí)的 復(fù)合物或者疫苗體積確定，以使液態(tài)復(fù)合物或液態(tài)疫苗中的PEG-PCL-PEG濃度為15wt% 40wt%為宜，較優(yōu)為15wt% 35wt%，最優(yōu)為25wt%。根據(jù)本發(fā)明，在實(shí)際使用中，本發(fā)明復(fù)合物(疫苗)可將目標(biāo)抗原(如bFGF或短 肽).PEG-PCL-PEG共聚物、多糖溶解于水或生理鹽水中后，再冷凍干燥成粉末形成。將此復(fù) 合物裝載于瓶中進(jìn)行保藏，運(yùn)輸和銷售。在使用前使用時(shí)再將水或生理鹽水注射入瓶中，配制成均勻溶液，然后進(jìn)行皮下 注射。皮下注射后一段時(shí)間內(nèi)形成凝膠，凝膠緩慢降解，釋放其裝載的抗原成分。同時(shí)，本發(fā)明復(fù)合物(或疫苗)可含有兩分離的組分，A組分是PEG-PCL-PEG共 聚物、多糖等溶解于水或生理鹽水中后，再冷凍干燥所得到的粉末；B組分是目標(biāo)抗原(如 bFGF的凍干粉末)。A組分可裝于A瓶中；B組分可裝于B瓶中。使用時(shí)，可將水或生理鹽水分別注射入A瓶和/或B瓶中，形成均勻溶液，水或 生理鹽水的加入量為以使PEG-PCL-PEG濃度為15wt% 40wt%為宜，較優(yōu)為15wt% 35wt%，最優(yōu)為25wt%。再將B瓶和A瓶的均勻混合形成混合溶液，然后將該混合溶液進(jìn) 行皮下注射。皮下注射后一段時(shí)間將形成凝膠，凝膠緩慢降解，釋放其裝載的抗原及多糖成 分。當(dāng)然，PEG-PCL-PEG共聚物與抗原成分的相對(duì)用量主要是滿足能夠在形成凝膠后 有較好的包封率，而這是可以在一個(gè)較大的范圍內(nèi)波動(dòng)的。如使用lOOul復(fù)合物溶液進(jìn)行 疫苗注射，則其中可有15 35mg PEG-PCL-PEG共聚物，優(yōu)選25mg ；抗原成分(bFGF或其缺 失部分氨基酸殘基但是仍具備與受體結(jié)合活性的bFGF短肽)15 25 y g，優(yōu)選20 u g。如果添加多糖成分，則其與抗原成分的重量比為1 0.2-5，優(yōu)選比例為1 2。上述技術(shù)方 案中使用的其缺失部分氨基酸殘基但是仍具備與其活性的bFGF短肽可為N’-KRLYCKNGGFF LRIHPDGRVDGVREKSDPHIKLQLQAEERGVV SIKGVCANRYLAMKEDGRLLASKCVTDECFFFERLESNNYNTY-C，。本發(fā)明所解決的第三個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供了由上述的復(fù)合物添加藥學(xué)上所接受的 輔助性成分制備而成疫苗。本發(fā)明還提供了制備上述的復(fù)合物的方法，其方法在于包括以下步驟將PECE共 聚物溶解于水或生理鹽水中，冷卻至4°C形成溶液；將所需量的抗原(如堿性成纖維細(xì)胞生 長(zhǎng)因子)和多糖(如甘露聚糖)加入至PECE溶液中形成均勻溶液。當(dāng)上述復(fù)合物中含有多糖時(shí)，制備方法為將PECE共聚物溶解于水或生理鹽水 中，冷卻至4°C形成溶液；將所需量的抗原(如堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子)加入至PECE溶 液中形成均勻溶液。本發(fā)明上述復(fù)合物及其制備方法中使用的堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)可以 是其全長(zhǎng)蛋白，也可以是其缺失部分氨基酸殘基但是仍具備與堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子同 樣的受體結(jié)合活性的bFGF短肽(tbFGF)。根據(jù)本發(fā)明的再一個(gè)方面，本發(fā)明裝載有bFGF的PEG-PCL-PEG三嵌段共聚物復(fù)合 物或裝載有bFGF和多糖的PEG-PCL-PEG三嵌段共聚物復(fù)合物可以作為腫瘤的抗血管生成 治療性疫苗和治療血管生成相關(guān)疾病的疫苗，也可再添加藥學(xué)上可以接受的輔助性成分制 備成上述疫苗。本發(fā)明的有益效果為本發(fā)明利用PEG-PCL-PEG三嵌段共聚物溶液作為免疫佐劑 裝載目標(biāo)抗原形成復(fù)合物，同時(shí)復(fù)合物中還可以加入多糖成分。本發(fā)明復(fù)合物具有安全性 好、包封率接近100%、批間差異小、成本低、制備簡(jiǎn)單、使用方便，能在體內(nèi)形成凝膠緩慢釋 放等優(yōu)點(diǎn)。并且實(shí)驗(yàn)證明使用PECE佐劑可以達(dá)到作為免疫佐劑研發(fā)標(biāo)準(zhǔn)的弗氏佐劑的水 平，具有很好的免疫效果，為免疫佐劑的使用提供了新的選擇。


圖1、裝載有 bFGF (200 u g/ml)的 PECE 水凝膠(25wt % )的 SEM 照片。圖2、bFGF從bFGF-PECE水凝膠中釋放出來(lái)的釋放曲線。A :bFGF載藥量對(duì)其釋放 行為的影響；B :SDS-PAGE實(shí)驗(yàn)表明bFGF從BFGF-PECE水凝膠中釋放出來(lái)后其結(jié)構(gòu)完整，泳 道1 標(biāo)記物；泳道2 標(biāo)準(zhǔn)的bFGF ；泳道3 24小時(shí)；泳道4 72小時(shí)；泳道5 168小時(shí)；泳 道6 336小時(shí)。圖3、皮下免疫NS (生理鹽水)、空白PECE水凝膠、純的bFGF、載有bFGF的PECE水 凝膠復(fù)合物的各組在免疫后第四周的抗體滴度比較。老鼠是在第0周免疫一次，并在第四 周收集血清。生理鹽水組的IgG滴度被設(shè)為1。圖4、由單獨(dú)bFGF以及載有bFGF的PECE水凝膠復(fù)合物所產(chǎn)生的IgG抗體滴度隨 著時(shí)間的變化曲線。圖5、免疫tbFGF各組小鼠肺重比較。圖6、免疫tbFGF各組小鼠肺轉(zhuǎn)移灶的比較。圖7、本發(fā)明PEG-PCL-PEG共聚物的合成反應(yīng)示意圖，其中的X、Y均為正整數(shù)。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附圖通過(guò)對(duì)具體實(shí)施方式
的描述以詳細(xì)說(shuō)明但不限制本發(fā)明。實(shí)施例一 PEG-PCL-PEG共聚物的合成和驗(yàn)證1) PEG-PCL-PEG 共聚物的合成本發(fā)明PEG-PCL-PEG共聚物的合成反應(yīng)路線如圖7所示，其中的X、Y均為正整數(shù)。 根據(jù)該合成路線，在裝有攪拌器的三口燒瓶中加入一定量的聚乙二醇單甲醚(MPEG)和￡ -己 內(nèi)酯(￡ -CL)，以辛酸亞錫為催化劑，在130°C、氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下反應(yīng)6小時(shí)，降溫至80°C， 加入交聯(lián)劑異氟爾酮二異氰酸酯(IPDI)再繼續(xù)反應(yīng)6小時(shí)后得到產(chǎn)物，冷卻至室溫提純，烘 干。此外，適合的二異氰酸酯還包括甲苯二異氰酸酯、六亞甲基二異氰酸酯(HMDI)、L-lysine ethyl ester diisocyanateOJH，賴氨酸乙酯二異氰酸酯)、二苯基甲烷_4，4，- 二異氰酸酯 等。在進(jìn)行上述反應(yīng)時(shí)可以用上述二異氰酸酯替代IPDI進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)。根據(jù)上述方法，合成了 E550—C2200_E550、E750_C3000_E75o、E750—C2500—E750、E750—C750—E750、E20oO_C4000_E2000 等系歹ll 共
物(見表1)。表1合成的PEG-PCL-PEG共聚物 a根據(jù)投料比計(jì)算出來(lái)的理論值b根據(jù)核磁共振氫譜測(cè)試結(jié)果計(jì)算出來(lái)的數(shù)值；2、PEG-PCL-PEG 共聚物的驗(yàn)證(1)、本發(fā)明PEG-PCL-PEG共聚物的表征方法用傅里葉紅外光譜儀(FTIR) (200SXV，Nicolet)，采用KBr壓片法對(duì)合成的共聚物 進(jìn)行紅外光譜分析。t-NMR用核磁共振儀(Varian 400,Varian)測(cè)量，在400MHZ下，溶劑為 ⑶Cl3，以四甲基硅烷為內(nèi)標(biāo)。各種PEG-PCL-PEG三嵌段共聚物的分子量和PEG與PCL的嵌 段比例根據(jù)核磁共振氫譜檢測(cè)來(lái)確定。根據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果可以得出結(jié)論本實(shí)施例已經(jīng)成
？t) itfe^pTj^C 了 Sifef^^J E550—C2200_E550、￡750"C3000—E750、E750—C2500_E750、E75o—C750—E750、E2000_C4000_E20OO
的PEG-PCL-PEG三嵌段共聚物。實(shí)施例二以PEG-PCL-PEG共聚物(PECE)作為佐劑的疫苗的制備將PECE共聚物溶解于生理鹽水中，然后冷卻至4°C形成溶液。將所需量的bFGF 或tbFGF加入至PECE溶液中形成均勻溶液即得疫苗，其中PECE共聚物的濃度控制在 15wt% 40wt%為宜，較優(yōu)為15wt% 35wt%，25wt%左右最佳。實(shí)際使用時(shí)將該溶液行皮下注射，稍后會(huì)在皮下成為凝膠。本實(shí)施例制備的疫苗是在100 u LPEG-PCL-PEG-bFGF復(fù)合物中，含有20 y g的bFGF 或tbFGF、25mg的PECE共聚物，溶劑為生理鹽水，生理鹽水的用量為使體系PECE濃度為 25%。其使用后形成的凝膠的微觀結(jié)構(gòu)見圖1。本實(shí)例同時(shí)進(jìn)行了在pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液中的釋放實(shí)驗(yàn)。bFGF從 bFGF-PECE水凝膠復(fù)合物中釋放出來(lái)的釋放曲線見圖2。其中A:bFGF載藥量對(duì)其釋放行為 的影響；B :SDS-PAGE實(shí)驗(yàn)表明bFGF從bFGF-PECE (E55(1-C22(1c1-E55(1)水凝膠中釋放出來(lái)后其結(jié) 構(gòu)完整，泳道1 標(biāo)記物泳道2 標(biāo)準(zhǔn)的bFGF ；泳道3 24小時(shí)；泳道4 72小時(shí)；泳道5 168 小時(shí)；泳道6 336小時(shí)。結(jié)果表明其釋放行為較好，釋放出的bFGF結(jié)構(gòu)完整。實(shí)施例三PEG-PCL-PEG抗原復(fù)合物動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)材料重組人bFGF購(gòu)自R&D公司，純度大于97 %。tbFGF為自行構(gòu)建載體表達(dá)制 備的，純度大于 99% (該多肽的序列為N，-KRLYCKNGGFFLRIHPDGRVDGVREKSDPHIKLQLQAEE RGVVSIKGVCANRYLAMKEDGRLLASKCVTDECFFFERLESNNYNTY-C，，具體序列及制備過(guò)程參見中國(guó) 專利申請(qǐng)200810304731. X，“成纖維生長(zhǎng)因子受體介導(dǎo)的血管靶向脂質(zhì)體載體及制備方法 和用途”)。甘露聚糖購(gòu)自SIGMA公司，產(chǎn)品編號(hào)M7504。本實(shí)例的試驗(yàn)組中，使用的動(dòng)物為6周大小的雌性BALB/c小鼠，每組6只，bFGF的 使用量均為20 u g。載有bFGF的PECE復(fù)合物組是在100 u L復(fù)合物中，含有20 y g的bFGF、 40 ug的甘露聚糖、25mg的PECE共聚物(E55(1-C22(1(1-E55C1)，溶劑為生理鹽水，生理鹽水的用量 為使體系PECE濃度為25%，其余各組的生理鹽水用量參照確定。處理方法是在第0周進(jìn)行單獨(dú)bFGF組和載有bFGF的PECE復(fù)合物組免疫后，每隔 兩周抽血用ELSA法檢查其抗體滴度。皮下免疫NS (生理鹽水)、空白PECE共聚物、單獨(dú)的bFGF、載有bFGF的PECE復(fù)合 物的各組的抗體滴度比較值見圖3。結(jié)果表明載有bFGF的PECE復(fù)合物組的抗體滴度遠(yuǎn)遠(yuǎn) 高于單獨(dú)的bFGF。由單獨(dú)bFGF以及載有bFGF的PECE水凝膠復(fù)合物所產(chǎn)生的IgG抗體滴度隨著時(shí) 間的變化曲線見圖4。結(jié)果表明載有bFGF的PECE復(fù)合物組各時(shí)間段的抗體滴度均遠(yuǎn)高于 單純的bTOF組。實(shí)施例四PEG-PCL-PEG抗原復(fù)合物抗腫瘤作用研究以下的試驗(yàn)組中，使用的動(dòng)物老鼠6周大小的雌性C57BL/6J小鼠，每組6只， tbFGF的使用量均為20 u g。載有tbFGF的PECE復(fù)合物組為在100 u L復(fù)合物中，含有20 y g 的tbFGF、40 u g的甘露聚糖、25mg的PECE共聚物(E55(1-C22(1(1-E55C1)，溶劑為生理鹽水，生理鹽 水的用量為使體系PECE濃度為25%，其余各組的生理鹽水用量參照確定。處理方法是在第0、2、4周進(jìn)行tbFGF復(fù)合有弗氏佐劑組(FA_tbFGF)和載有tbFGF 的PECE復(fù)合物組(Hy-tbFGF)免疫后，第5周尾靜脈接種3X 105LL/2結(jié)腸癌細(xì)胞。第18天 后處死小鼠，稱取肺重，計(jì)算肺結(jié)節(jié)數(shù)以說(shuō)明其轉(zhuǎn)移灶的情況。圖5顯示各組小鼠的肺重，F(xiàn)A-tbFGF組和Hy-tbFGF組的小鼠肺重明顯低于生理 鹽水組，差異具有顯著性(P < 0. 01)。圖6顯示各組小鼠的肺結(jié)節(jié)數(shù)，同樣，F(xiàn)A-tbFGF組和 Hy-tbFGF組的肺結(jié)節(jié)數(shù)遠(yuǎn)低于生理鹽水組，具有顯著性差異(P<0.01)。結(jié)果表明，使用 PECE佐劑的tbFGF可以達(dá)到使用弗氏佐劑(免疫佐劑金標(biāo)準(zhǔn))的tbFGF的抗腫瘤水平。
權(quán)利要求
PEG PCL PEG三嵌段共聚物作為免疫佐劑的用途。
2.PEG-PCL-PEG三嵌段共聚物作為免疫佐劑裝載目標(biāo)抗原制成的復(fù)合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的復(fù)合物，其特征在于所述PEG-PCL-PEG共聚物，其分子量為 1500 10000，其中PEG鏈段的分子量與PCL鏈段的分子量的比值為0. 4 2. 6。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的復(fù)合物，其特征在于所述PEG-PCL-PEG共聚物分子量為 2000 8000，其中PEG鏈段的分子量與PCL鏈段的分子量的比值為0. 5 2。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的復(fù)合物，其特征在于所述的PEG-PCL-PEG共聚物為 ^550—C22oo—E550^ E750_C3000_E750、E75O—C25OO—E75Q^ E750—C750—E750^ E20oo_C^qo"E20oo ；其中 E 表不 PEG，C 表示PCL，下標(biāo)分別表示相應(yīng)鏈段的分子量。
6.根據(jù)權(quán)利要求2 5任一項(xiàng)所述的復(fù)合物，其特征在于所述PEG-PCL-PEG三嵌段 共聚物的用量為使其在形成的凝膠中的比例為15wt% 40wt%。
7.根據(jù)權(quán)利要求2 6任一項(xiàng)所述的復(fù)合物，其特征在于所述目標(biāo)抗原為腫瘤生長(zhǎng) 因子類多肽。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的復(fù)合物，其特征在于所述目標(biāo)抗原為堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng) 因子或其具備抗原性的短肽。
9.根據(jù)權(quán)利要求2 8任一項(xiàng)所述的復(fù)合物，其特征在于還含有多糖成分。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的復(fù)合物，其特征在于所述多糖為甘露聚糖。
11.權(quán)利要求9或10所述的復(fù)合物，其特征在于bFGF蛋白或短肽與多糖的重量比例為 1 0. 2-5。
12.根據(jù)權(quán)利要求9 11任一項(xiàng)所述的復(fù)合物，其特征在于是將目標(biāo)抗原、 PEG-PCL-PEG共聚物、多糖溶解于水或生理鹽水中后，再冷凍干燥形成的粉末。
13.疫苗，由權(quán)利要求2 12任一項(xiàng)所述的復(fù)合物添加藥學(xué)上所接受的輔助性成分制 備而成。
14.制備權(quán)利要求2 8任一項(xiàng)所述的復(fù)合物的方法，其特征在于包括以下步驟將 PECE共聚物溶解于水或生理鹽水中，冷卻至4°C形成溶液；將所需量的bFGF或短肽加入至 PECE溶液中形成均勻溶液。
15.制備權(quán)利要求10 11任一項(xiàng)所述的復(fù)合物的方法，其特征在于包括以下步驟將 PECE共聚物溶解于水或生理鹽水中，冷卻至4°C形成溶液；將所需量的bFGF或短肽和多糖 加入至PECE溶液中形成均勻溶液。
16.權(quán)利要求12所述復(fù)合物的使用方法，步驟為將所需量水或生理鹽水注射入復(fù)合物 粉末的包裝中，配制成均勻溶液，裝入注射器備用。
17.根據(jù)權(quán)利要求2 11任一項(xiàng)所述的復(fù)合物，其特征在于含有兩分離的組分，A組 分是PEG-PCL-PEG共聚物或PEG-PCL-PEG共聚物與多糖溶解于水或生理鹽水中后，再冷凍 干燥成的粉末，B組分是目標(biāo)抗原，A組分可裝于A包裝中；B組分裝于B包裝中。全文摘要
本發(fā)明屬于生物制劑領(lǐng)域，涉及PEG-PCL-PEG三嵌段共聚物作為免疫佐劑在制備蛋白多肽疫苗中的應(yīng)用。上述PEG-PCL-PEG共聚物，其分子量為1500～10000，其中PEG鏈段的分子量與PCL鏈段的分子量的比值為0.4～2.6。上述目標(biāo)抗原為腫瘤生長(zhǎng)因子類多肽，且上述復(fù)合物還可含有多糖成分。本發(fā)明復(fù)合物具有安全性好、包封率接近100％、批間差異小、成本低、制備簡(jiǎn)單、使用方便等優(yōu)點(diǎn)，具有好的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A61K39/39GK101890162SQ20101024162
公開日2010年11月24日 申請(qǐng)日期2010年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月31日
發(fā)明者楊莉, 趙霞, 錢志勇, 魏于全 申請(qǐng)人:四川大學(xué)