專(zhuān)利名稱(chēng)：：防治外寄生物的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用來(lái)防治外寄生物的方法和組合物。具體而言，本發(fā)明涉及抑制外寄生物卵孵化的方法和組合物。本發(fā)明還提供治療和預(yù)防外寄生物感染的方法和組合物。本發(fā)明還涉及識(shí)別能抑制外寄生物卵孵化的化合物的方法。
背景技術(shù)：
：外寄生物，包括某些昆蟲(chóng)在很多種動(dòng)物和植物中引起顯著的害蟲(chóng)問(wèn)題。特別是，夕卜寄生物通常會(huì)騷擾、叮咬人和家畜并引起感染。其中特別關(guān)注的是這些寄生物的存在以及對(duì)人、家庭寵物或陪伴動(dòng)物如狗和貓，以及其它馴養(yǎng)動(dòng)物如馬的影響。已知有各種用來(lái)防治或滅除叮咬和吸血害蟲(chóng)(外寄生物)，如跳蚤、壁虱、蒼蠅、虱子和螨類(lèi)的組合物和應(yīng)用方法。在過(guò)去的數(shù)年里，已經(jīng)提出許多種氣霧劑和室內(nèi)噴灑劑、液體、肥皂、洗發(fā)香波、可濕潤(rùn)的粉、顆粒、餌料和粉劑，用來(lái)防治這類(lèi)外寄生物。對(duì)外寄生物常規(guī)的防治措施依賴(lài)于使用化學(xué)殺蟲(chóng)劑，例如，氯化烴類(lèi)(DDT、硫丹等)以及合成除蟲(chóng)菊酯(氯氰菊酯、溴氰菊酯)。與使用化學(xué)殺蟲(chóng)劑相關(guān)的問(wèn)題包括目標(biāo)外寄生物形成的耐受性，化學(xué)品在環(huán)境以及植物和動(dòng)物組織中的持久性以及對(duì)寄主和非目標(biāo)生物體的傷害性。殺外寄生物劑(ecto驅(qū)蟲(chóng)劑)的其它類(lèi)型包括殺蟲(chóng)劑，如昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑(IGR)，已知能干擾殼多糖合成和殺蟲(chóng)細(xì)菌毒素(如蘇金桿菌(Bt)毒素)。更有用的殺蟲(chóng)劑是殺蟲(chóng)活性高且環(huán)境持久性低的那些，如有機(jī)磷酸酯和合成的擬除蟲(chóng)菊酯。然而，與這些殺蟲(chóng)劑相關(guān)的一個(gè)突出問(wèn)題是造成目標(biāo)昆蟲(chóng)的耐受性。例如，在EP0191236和美國(guó)專(zhuān)利5，288，483描述了用來(lái)防治虱子的殺蟲(chóng)劑。使用這些制劑的一個(gè)突出的缺點(diǎn)是虱子會(huì)產(chǎn)生抗性。需要進(jìn)一步的防治時(shí)要將它們暴露于更強(qiáng)的制劑中并增加了成本。此外，臨床醫(yī)生和家長(zhǎng)也要不情愿地用這些證實(shí)對(duì)人有毒性的制劑來(lái)治療孩子。而且，這些化合物中許多都具有難聞的氣味或其它不良的性能，令患者難以忍受，導(dǎo)致個(gè)體的再感染以及感染蔓延到其它人。此外，對(duì)這些制劑的苛刻條件，使得它們不適合用作預(yù)防劑。有頭虱感染時(shí)，家庭治療法如施用玉米油、橄欖油、桉樹(shù)油、印度楝樹(shù)油、椰子油、蛋黃醬或凡士林油足夠時(shí)間(如過(guò)夜)以殺滅頭虱實(shí)際上并不完全有效。這些防治頭虱的方法的另一個(gè)缺點(diǎn)是還需要一個(gè)獨(dú)立處理步驟來(lái)除去頭發(fā)中的蟲(chóng)卵。通常用專(zhuān)門(mén)的細(xì)齒梳子來(lái)除去蟲(chóng)卵。只用梳子來(lái)處理頭虱的缺點(diǎn)是，頭虱用它們的爪子固定在頭發(fā)絲上或通過(guò)爬行逃離被梳的區(qū)域。這種需要每天梳理的耗費(fèi)勞力方法很痛苦，并且因?yàn)轭^虱是活動(dòng)的、可見(jiàn)和爬行的而令人不快。全世界仍然明確需要改進(jìn)的防治虱子的方法。特別是，報(bào)道了針對(duì)防治虱子的產(chǎn)品的缺陷。認(rèn)為虱子對(duì)目前使用的許多化學(xué)品包括氯菊酯、除蟲(chóng)菊酯和馬拉硫磷形成的耐受性是防治失敗的一個(gè)主要因素。此外，還認(rèn)為，含不最適宜活性劑的不適當(dāng)配劑要對(duì)耐受性形成負(fù)一定責(zé)任。最近，對(duì)防治頭虱的草藥產(chǎn)品市場(chǎng)明顯增長(zhǎng)，但是，對(duì)所進(jìn)行的試驗(yàn)幾乎沒(méi)有公開(kāi)的證據(jù)，來(lái)有效評(píng)價(jià)這些產(chǎn)品。而且，雖然有許多產(chǎn)品聲稱(chēng)擁有殺卵活性，但是本領(lǐng)域?qū)Υ说淖C據(jù)遠(yuǎn)不能令人信服，推薦的普通產(chǎn)品是，在最初防治后的二次防治應(yīng)在7-14天之間進(jìn)行，以殺滅新出現(xiàn)的卵。最近人們的注意力集中在昆蟲(chóng)蛋白酶上，蛋白酶能提供防治外寄生物的可能的方法。蛋白酶在生物體中發(fā)揮各種功能，包括調(diào)節(jié)和破壞蛋白質(zhì)和肽類(lèi)，因此有助于消化。它們還涉及胚胎形成期間的組織重整，蛻皮和蛹化。蛋白酶是各種可變的酶，包括有助消化的蛋白酶，它們?cè)跀?shù)量已經(jīng)種類(lèi)之間的催化性能明顯不同。例如，一直認(rèn)為絲氨酸蛋白酶涉及蛻皮的關(guān)鍵生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑領(lǐng)域(SamuelsR.I.和PatersonC.J.,ComparativeBiochemistryandPhysiology,1995,IlOB:661_669)。已經(jīng)提出蛋白酶抑制劑是另一種有用的化學(xué)防治方法，特別是外寄生物已對(duì)這些化學(xué)殺蟲(chóng)劑具有耐受性時(shí)。特別是，絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶抑制劑已顯示能減少幼蟲(chóng)生長(zhǎng)和/或各種昆蟲(chóng)存活(Dymock等人，NewZealandJournalofZoology,1992,19123-131)。用腸線(xiàn)的主要消化酶的抑制劑已達(dá)到抑制生長(zhǎng)，并且一直以外寄生物幼蟲(chóng)或成熟的寄生生物為目標(biāo)。然而，對(duì)各種類(lèi)型蛋白酶抑制劑的活性和功能的了解很少。殺外寄生物劑的存在的共同問(wèn)題是它們對(duì)外寄生物卵不起作用，因此施用驅(qū)蟲(chóng)劑給寄主時(shí)，為達(dá)到效果，經(jīng)常需要重復(fù)防治或延長(zhǎng)暴露于驅(qū)蟲(chóng)劑時(shí)間。這不僅不方便，而且會(huì)增加對(duì)環(huán)境以及寄主的危險(xiǎn)。因此，仍然需要提供能有效抑制外寄生物卵孵化，來(lái)達(dá)到有效防治外寄生物的方法和組合物。發(fā)明概述本發(fā)明一個(gè)方面，提供一種抑制外寄生物卵孵化的方法，該方法包括將外寄生物卵暴露于至少一種金屬螯合劑中，所述金屬螯合劑是一種包含至少兩個(gè)能同時(shí)與一個(gè)金屬離子配位的雜原子的化合物，兩個(gè)雜原子中至少一個(gè)選自氮、硫、氧和磷，所述化合物包含至少一個(gè)被至少一個(gè)雜原子取代和/或被含至少一個(gè)雜原子的取代基取代的碳環(huán)，所述金屬螯合劑或者是包含至少一個(gè)含至少一個(gè)雜原子的雜環(huán)的化合物，所述雜環(huán)任選被至少一個(gè)雜原子取代和/或被含至少一個(gè)雜原子的取代基取代。本發(fā)明另一方面，提供一種抑制外寄生物卵孵化的方法，該方法包括將外寄生物卵暴露于有效量的金屬蛋白酶抑制劑。本申請(qǐng)人已識(shí)別出作為抑制外寄生物卵孵化的有效制劑的金屬螯合劑和金屬蛋白酶抑制劑。金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑用來(lái)抑制外寄生物卵孵化具有防止外寄生物的繁殖周期，從而防治外寄生物感染是優(yōu)點(diǎn)。另一方面，提供一種治療或預(yù)防在寄主的外寄生物感染的方法，該方法包括施用有效量的至少一種螯合劑，所述金屬螯合劑是一種包含至少兩個(gè)能同時(shí)與一個(gè)金屬離子配位的雜原子的化合物，兩個(gè)雜原子中至少一個(gè)選自氮、硫、氧和磷，所述化合物包含至少一個(gè)被至少一個(gè)雜原子取代和/或被含至少一個(gè)雜原子的取代基取代的碳環(huán)，或者是包含至少一個(gè)含至少一個(gè)雜原子的雜環(huán)的化合物，所述雜環(huán)任選被至少一個(gè)雜原子取代和/或被含至少一個(gè)雜原子的取代基取代。本發(fā)明另一方面，提供治療或預(yù)防寄主的外寄生物感染的方法，該方法包括給予對(duì)象有效量的至少一種金屬蛋白酶抑制劑。本發(fā)明又一方面，提供一種抑制虱卵孵化的方法，該方法包括將虱卵暴露于有效量的至少一種化學(xué)式(Ia)的化合物，或其藥學(xué)上、獸醫(yī)或農(nóng)業(yè)上可接受的鹽中<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>式中，X選自共價(jià)鍵、-C(R5)2-、-Z-或-C(R5)2-Z-C(R5)2-^lPRu獨(dú)立地選自氫、Cp6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、羥基、Cp6烷氧基、硫羥基、C1-C6烷硫基、CO2HXO2Ch6烷基、SO3H,SO3Ck烷基、NH2、NHCV6烷基或N(C1^6烷基)2；R2、R2，、R3、R3，、R4和R4，獨(dú)立地選自氫、C^6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、羥基、C1^6烷氧基、硫羥基、C1^6烷硫基(alkylthiol)、CO2H,CO2CV6烷基、SO3H,SO3C1^6烷基、NH2,NHCV6烷基或N(C1^6烷基)2，或-CH2CHNH(CO2H)；或R2和R3或R3和R4和/或R2，和R3，或R3，和R4，與它們連接的碳原子一起形成五或六元碳環(huán)或雜環(huán)；各R5獨(dú)立地選自氫、Cp6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、羥基、CV6烷氧基、硫羥基、CV6烷硫基、CO2H,CO2C^6烷基、SO3H,SO3Ck烷基、NH2,NHCV6烷基或N((^6烷基)2；和Z選自共價(jià)鍵、-NH-、-0-、-S-、-C(0)-和-C(S)-。本發(fā)明又一方面，提供一種抑制外寄生物卵孵化的組合物，該組合物包含有效量的至少一種金屬螯合劑以及合適的稀釋劑、賦形劑或載體，所述金屬螯合劑是一種包含至少兩個(gè)能同時(shí)與一個(gè)金屬離子配位的雜原子的化合物，兩個(gè)雜原子中至少一個(gè)選自氮、硫、氧和磷，所述化合物包含至少一個(gè)被至少一個(gè)雜原子取代和/或被含至少一個(gè)雜原子的取代基取代的碳環(huán)，或者是包含至少一個(gè)含至少一個(gè)雜原子的雜環(huán)的化合物，所述雜環(huán)任選被至少一個(gè)雜原子取代和/或被含至少一個(gè)雜原子的取代基取代。本發(fā)明的另一方面，提供一種抑制外寄生物卵孵化的組合物，該組合物包含有效量的至少一種金屬蛋白酶抑制劑以及合適的稀釋劑、賦形劑或載體。本發(fā)明另一方面，提供一種識(shí)別抑制外寄生物卵孵化的化合物的方法，該方法包括評(píng)價(jià)化合物對(duì)外寄生物卵中存在的金屬蛋白酶的抑制能力。本發(fā)明又一方面，提供采用上述方法識(shí)別的金屬螯合劑和/或金屬蛋白酶抑制劑。附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明圖1所示為用考馬斯藍(lán)染色凝膠和脫色后，由頭發(fā)和頭虱卵各樣品獲得的洗滌物的蛋白酶活性的明膠底物SDS-PAGE分析。通道1顯示由孵化12小時(shí)內(nèi)未孵化的頭虱卵獲得的洗滌物中檢測(cè)到的蛋白酶活性。蛋白酶活性在SDS凝膠的高分子量區(qū)。通道2顯示從頭發(fā)的洗滌物中檢測(cè)到的蛋白酶活性，表明存在許多高活性和穩(wěn)定的很可能是母系起源的蛋白酶。通道3顯示頭發(fā)樣品，該樣品用次氯酸鈉溶液洗滌1分鐘，隨后用水洗滌多次，試圖除去這些污染蛋白酶。這種處理能除去母系蛋白酶，導(dǎo)致只在頭發(fā)樣品中沒(méi)有檢測(cè)到蛋白酶種類(lèi)。通道4顯示孵化12小時(shí)的卵用次氯酸鈉(如上所述)處理，在這種卵的洗滌物中檢測(cè)到的蛋白酶活性。這種處理除去了在未洗滌樣品(與通道1相比)中觀(guān)察到的蛋白酶活性。通道5顯示來(lái)自用次氯酸鈉預(yù)處理后孵化的頭虱卵的卵洗滌物中存在一種或兩種高分子量蛋白酶。這些蛋白酶特別預(yù)卵孵化時(shí)的頭虱卵相關(guān)。圖2所示為用次氯酸鹽處理后，由頭虱卵獲得的卵殼洗滌物的抑制劑考馬斯藍(lán)染色處理后的明膠SDS-PAGE凝膠。很明顯有三個(gè)帶在約25-30kDa(相等的)。通道1，ESW正對(duì)照，沒(méi)有抑制劑處理，通道2，用IOmM1,0-菲咯啉處理后的ESW，通道3，用5mMPMSF處理后的ESW，以及通道4，用10μMΕ-64處理后的ESW。在37°C孵化3小時(shí)。注意到用用1，10-菲咯啉(通道2相等區(qū))處理后蛋白酶活性明顯降低。使用天冬氨酸抑制劑胃酶抑素(數(shù)據(jù)未示出)時(shí)，未觀(guān)察到ESW的蛋白酶活性下降。圖3顯示1，10-菲咯啉對(duì)頭虱卵孵化的作用。頭虱卵處理5天后，隨時(shí)間觀(guān)察到的孵化。圖4顯示苯丁亮氨酸(Bestatin)對(duì)頭虱卵孵化的作用。頭虱卵處理5天后，隨時(shí)間觀(guān)察到的孵化。優(yōu)選實(shí)施方式的詳細(xì)描述本文中，術(shù)語(yǔ)“金屬螯合劑”指包含至少兩個(gè)能同時(shí)與一個(gè)金屬離子配位的雜原子的化合物，兩個(gè)雜原子中至少一個(gè)選自氮、硫、氧或磷，所述化合物包含至少一個(gè)被至少一個(gè)雜原子取代和/或被含至少一個(gè)雜原子的取代基取代的碳環(huán)，或者包含至少一個(gè)含至少一個(gè)雜原子的雜環(huán)的化合物，所述雜環(huán)任選被至少一個(gè)雜原子取代和/或被含至少一個(gè)雜原子的取代基取代。較好地，金屬螯合劑包含一個(gè)芳環(huán)或雜芳環(huán)。更好地，金屬螯合劑包含至少一個(gè)氮雜原子。較好地，金屬螯合劑是非嵌入的本文中，術(shù)語(yǔ)“金屬蛋白酶抑制劑”指能抑制與外寄生物卵孵化相關(guān)的金屬蛋白酶活性的分子、化合物、蛋白質(zhì)或制劑。所述抑制可以是對(duì)金屬蛋白酶表示抑制或?qū)饘俚鞍酌该富钚缘囊种?。?yōu)選的金屬蛋白酶抑制劑是金屬螯合劑。優(yōu)選的金屬螯合劑和金屬蛋白酶抑制劑選自聯(lián)芳基化合物、肽和氨基酸衍生物、四環(huán)抗菌素和硫脲類(lèi)化合物。優(yōu)選的聯(lián)芳基化合物包括聯(lián)吡啶基化合物和1，10-菲咯啉化合物。一個(gè)實(shí)施方式中，金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑是化學(xué)式(I)的化合物，或其藥學(xué)上、獸醫(yī)或農(nóng)業(yè)上可接受的鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>式中X選自共價(jià)鍵、-C(R5)2-、-Z-或-C(R5)2-Z-C(R5)2-;R1和R1’獨(dú)立地選自氫、Cp6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、羥基、Cp6烷氧基、硫羥基、C1-C6烷硫基、CO2H,CO2CV6烷基、SO3H,SO3Ch6烷基、NH2,NHC1^6烷基或N(C1^6烷基)2，或R1和R1，-起是-C(R5)2_、-C(R5)2-C(R5)2_、-CR5=CR5-,C(0)、C(S)或NH；R2、R2，、R3、R3，、R4和R4，獨(dú)立地選自氫、C^6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、羥基、C1^6烷氧基、硫羥基、C1^6烷硫基、CO2H,CO2C^6烷基、SO3H,SO3Ck烷基、NH2,NHCV6烷基或N((^6烷基)2，或-CH2CHNH(CO2H)；或R2和R3或R3和R4和/或R2，和R3，或R3，和R4，與它們連接的碳原子一起形成五或六元碳環(huán)或雜環(huán)；各R5獨(dú)立地選自氧、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、羥基、C1^6烷氧基、硫羥基、C1^6烷硫基、CO2H,CO2CV6烷基、SO3H,SO3CV6烷基、NH2,NHC1^6烷基或N((^6烷基)2；禾口Z選自共價(jià)鍵、-NH-、-0-、-S-、-C(0)-和-C(S)-。優(yōu)選的化學(xué)式(I)的化合物具有至少一個(gè)下面的特征R1和R1’獨(dú)立地選自烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、羥基、Cp6烷氧基、硫羥基、C1-C6烷硫基、CO2H,CO2CV6烷基、SO3H,SO3CV6烷基、NH2、NHC1^6烷基或N((^6烷基)2，更優(yōu)選是氫或C1-C3烷基，最優(yōu)選氫或甲基；R2和R2’獨(dú)立地是氫或烷基，更優(yōu)選氫；R3、R3，、R4和R4，獨(dú)立地選自氫、C^6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C1^6烷氧基、C1^6烷硫基或CO2CV6烷基，優(yōu)選氫或CV3烷基，更優(yōu)選氫或甲基；各R5獨(dú)立地選自氫、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、Cp6烷氧基、Cp6烷硫基或CO2CV6烷基，優(yōu)選氫或Ci_3烷基，更優(yōu)選氫或甲基；X是共價(jià)鍵、-CH2-Z-CH2-或Z，優(yōu)選共價(jià)鍵；Z是-NH-、-0-或-S-，優(yōu)選-NH-?；瘜W(xué)式(I)的優(yōu)選化合物包括2，2’-聯(lián)吡啶、6，6，-二甲基_2，2’-聯(lián)吡啶和5，5’-二甲基_2，2’-聯(lián)吡啶，或其藥學(xué)上、獸醫(yī)或農(nóng)業(yè)上可接受的鹽。另一個(gè)實(shí)施方式中，金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑是化學(xué)式(II)的化合物，或其藥學(xué)上、獸醫(yī)或農(nóng)業(yè)上可接受的鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>式中x，選自共價(jià)鍵、-C(R13)2-、Z，或C(R13)2-Z，-C(R13)2-；U選自N或C(R13);W選自-NH-、-S-或-0-；Z，選自共價(jià)鍵、-朋-、-0-、-5-、-((0)-或-((5)-;Rltl選自氫、Cp6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、羥基、Cp6烷氧基、硫羥基、C1^6烷硫基、CO2H、CO2Ch烷基、SO3H、SO3C1^6烷基、NH2、NH(C1^6烷基)、N(C1^6烷基)2或-(CH2)nR14；R11選自(CH2)m芳基或(CH2)m雜芳基，其中芳基或雜芳基各自任選被Cp6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、羥基、CV6烷氧基、硫羥基、Cp6烷硫基、CO2H,CO2Ch6烷基、SO3H,SO3C1^6烷基、NH2,MKCV6烷基)、N((V6烷基)2或鹵素中的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代；各R12獨(dú)立地選自氫、Cp6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、羥基、CV6烷氧基、硫羥基、CV6烷硫基、CO2H,CO2Ch烷基、SO3H,SO3C1^烷基、NH2,NH(C1^6烷基)、N(C1^6烷基)2或-(CH2)nR；R10和R12與它們連接的碳原子一起形成五或六元碳環(huán)或雜環(huán)；各R13獨(dú)立地選自氫、Cp6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、羥基、CV6烷氧基、硫羥基、CV6烷硫基、CO2H,CO2Ch烷基、SO3H,SO3C1^烷基、NH2,NH(C1^6烷基)、N(C1^6烷基)2或-(CH2)nK；R14選自NH2、OH、SH或CO2H；M是0或1-4的整數(shù)；η是1-4的整數(shù)。優(yōu)選的化學(xué)式(II)的化合物具有至少一個(gè)下面的特征X是共價(jià)鍵或-CH2-Z-CH2-,^N;W是NH或S；Ζ，是NH;Rltl是氫、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基或(CH2)nR14,優(yōu)選氫、C^烷基或(CH2)nR14；R11是苯基、被C"烷基或鹵素取代的苯基、噻盼、吡唳、吡啶基甲基、咪唑或被一個(gè)或兩個(gè)Cu烷基取代的咪唑；R12是氫、Cp6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基或(CH2)nR14,優(yōu)選氫、CV3烷基或(CH2)nR14；或R10和R12與它們連接的碳原子一起形成稠合苯環(huán)；R13是氫或Ch烷基，優(yōu)選氫或甲基；R14是NH2或CO2H；m是0或1；η是1或2。在另一個(gè)實(shí)施方式中，金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑選自化學(xué)式(III)的化合物，或其藥學(xué)上、獸醫(yī)或農(nóng)業(yè)上可接受的鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>式中Ar是苯基、萘基或吲哚基，它們?nèi)芜x被Cp6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、羥基、C^6烷氧基、硫羥基、C1^6燒硫基、CO2H,CO2CV6烷基、SO3H,SO3Ch6烷基、NH2、NH(C1^6烷基)、N(C1^6烷基)2中的一個(gè)或多個(gè)取代；R21選自NH2、NHR25或-CH2SR25；R22選自氫、羥基或Cp6烷氧基；R23選自氫、CV6烷基、C2_6烯基或C2_6炔基；R24選自O(shè)H、OR26、NH2,NHCV6烷基或N(C1^6烷基)2；R25選自氫、C(O)CV6烷基，其中的烷基任選被-SH或-OH取代；R26選自Cp6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基或芐基；P是0或1。優(yōu)選的化學(xué)式(III)化合物具有至少一個(gè)下面的特征Ar是苯基或萘基；R21是NH2、任選被SH取代的-NHC(0)C1^6烷基、-CH2SC(0)C1^6烷基或CH2SH；R22是氫或羥基；R23是氫或C^烷基，優(yōu)選氫或甲基；R24是OH、NH2或0芐基；P是或1?；瘜W(xué)式(III)的優(yōu)選化合物包括苯丁亮氨酸和Thiorophan，或其藥學(xué)上、獸醫(yī)或農(nóng)業(yè)上可接受的鹽。又一個(gè)實(shí)施方式中，金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑是化學(xué)式(IV)的化合物，或其藥學(xué)上、獸醫(yī)或農(nóng)業(yè)上可接受的鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>式中，Ar是苯基、萘基或吲哚基，它們?nèi)芜x被CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、羥基、CV6烷氧基、硫羥基、C1^6烷硫基、CO2H,CO2CV6烷基、SO3H,SO3Ch6烷基、NH2,NH(C1^6烷基)、N(C1^6烷基)2中一個(gè)或多個(gè)取代；R31選自C02H、CO2Ch6烷基、⑶2C2-6烯基、C02C2_6炔基、CONH2,CONH((^6烷基)或CON((V6烷基)2；R32選自氫、C1^6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、羥基、CV6烷氧基、硫羥基、C1^6烷硫基、C02H、CO2Ch6烷基、S03H、SO3Ch烷基、NH2、NH(C1^6烷基)、N(C1^6烷基)2、CH2CH2CO2H,CH2CH2CONH2、CH2CH2OH,CH2CH2SH；R33選自(V6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、羥基、Cp6烷氧基、硫羥基、Cp6烷硫基、C02H、CO2C1^6烷基、S03H、SO3Ch6烷基、NH2、NH(C1^6烷基)、Ν((^_6烷基)2、CH2CO2H,CH2CO2C1^6烷基、CH2CONH2、CH2OH或CH2SH。優(yōu)選的化學(xué)式(IV)的化合物具有至少一個(gè)下面的特征Ar是苯基或吲哚基，R31是CO2H或CONH2,R32是C1-J5烷基、CH2CH2C02H、CH2CH2CONH2、CH2CH2OH或CH2CH2SH,R33是CH2CO2H,CH2CONH2、CH2OH或CH2SH0在另一個(gè)實(shí)施方式中，金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑是化學(xué)式(V)的化合物，或其藥學(xué)上、獸醫(yī)或農(nóng)業(yè)上可接受的鹽OSR41r43XTην(v)式中，R41和R42獨(dú)立地選自氫、Cp6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基或R41和R42與它們連接的氮一起形成五或六元雜環(huán)，該環(huán)任選被Cp6烷基、c2_6烯基或c2_6炔基中一個(gè)或多個(gè)取代；R43選自氫、Cp6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、羥基、Cp6烷氧基、硫羥基、C1^6烷硫基、CO2H,CO2Ch6烷基、S03H、SO3Ch6烷基、NH2,NHCV6烷基或Ν((^_6烷基)2。優(yōu)選的化學(xué)式(V)的化合物具有至少一個(gè)下面的特征R41和R42獨(dú)立地選自而_6烷基或與它們連接的氮一起形成哌啶、哌嗪、N-甲基哌嗪或嗎啉基；R43是氫、CV6烷基、C2_6烯基或C2_6炔基。在又一個(gè)實(shí)施方式中，金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑是選自四環(huán)素、強(qiáng)力霉素或二甲胺四環(huán)素，或其藥學(xué)上、獸醫(yī)或農(nóng)業(yè)上可接受的鹽的四環(huán)抗生素。在又一個(gè)實(shí)施方式中，金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑選自1-[(2S)_3-巰基-2-甲基-1-氧代丙基]-L_脯氨酸(Captopril)或Ν_(α-吡喃鼠李糖氧基(rhamnopyranosyloxy)-羥基氧膦基)_L_亮氨酰-L-色氨酸(磷阿米酮(phosphoramidon))，或其藥學(xué)上、獸醫(yī)或農(nóng)業(yè)上可接受的鹽。本文中，術(shù)語(yǔ)“烷基”指直鏈或支鏈飽和烴基，具有特定數(shù)量的碳原子。例如，在"C1-C6烷基”中C1-C6包括具有以直鏈或支鏈排列的1、2、3、4、5或6個(gè)碳原子的基團(tuán)。合適烷基的例子包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、4-甲基丁基、正己基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、5-甲基戊基、2-乙基丁基和3-乙基丁基。本文中，術(shù)語(yǔ)“烯基”指碳原子間有一個(gè)或多個(gè)雙鍵的鏈或支鏈烴基，具有特定數(shù)量的碳原子。例如，在"C2-C6烯基”中C2-C6包括具有以直鏈或支鏈排列的2、3、4、5或6個(gè)碳原子的基團(tuán)。合適烯基的例子包括但不限于乙烯基、丙烯基、異丙烯基、丁烯基、戊烯基和己烯基。本文中，術(shù)語(yǔ)“炔基”指碳原子間有一個(gè)或多個(gè)三鍵的鏈或支鏈烴基，具有特定數(shù)量的碳原子。例如，"C2-C6炔基”中C2-C6包括具有以直鏈或支鏈排列的2、3、4、5或6個(gè)碳原子的基團(tuán)。合適烯基的例子包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基和己炔基。本文中，術(shù)語(yǔ)“鹵素”指氟、氯、溴和碘。本文中術(shù)語(yǔ)“烷氧基”表示通過(guò)氧橋連接的如上所述的烷基。合適烷氧基的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和正己氧基。本文中術(shù)語(yǔ)“烷硫基”表示通過(guò)硫橋連接的如上所述的烷基。合適烷硫基的例子包括但不限于甲硫基、乙硫基、丙硫基、異丙硫基、丁硫基、異丁硫基、叔丁硫基、戊硫基和己硫基。本文中術(shù)語(yǔ)“碳環(huán)”指3-10元環(huán)或稠環(huán)體系，其中形成環(huán)的所有原子是碳原子。C3,碳環(huán)可以是飽和、不飽和或芳族的。合適碳環(huán)的例子包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)己烯基、苯基、萘基和四氫萘基。本文中所有“雜環(huán)”指3-10元環(huán)或稠環(huán)體系，其中至少一個(gè)成環(huán)的原子是雜原子。較好地，雜原子選自氮、氧、硫和磷。C3_1(l雜環(huán)可以是飽和、不飽和或芳族的。合適雜環(huán)的例子包括但不限于苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋咱基(benzofurazanyl)、苯并吡唑基、苯并三唑基，苯并苯硫基、苯并噁唑基、咔唑基、咔啉基、曾啉基、呋喃基、咪唑基、二氫吲哚基、吲哚基、中氮茚基(indolazinyl)，吲唑基、異苯并呋喃基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異噁唑基、萘并吡啶基(naphthpyridinyl)、噁二唑基、噁唑基、噁唑啉、異噁唑啉、氧雜環(huán)丁基(oxetany1)、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、吡二唑基、吡啶并吡啶基(pyridopyridinyl)、吡二唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四氫吡喃基、四唑基、四氫吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、氮雜環(huán)丁烷基、氮雜環(huán)丙烷基、1，4-二噁烷基、六氫吖庚因基(hexahydroaz印inyl)、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、嗎啉基、硫代嗎啉基、二氫苯并咪唑基、二氫苯并呋喃基、二氫苯并苯硫基、二氫苯并噁唑基、二氫呋喃基、二氫咪唑基、二氫吲哚基、二氫異噁唑基、二氫異噻唑基、二氫噁二唑基，二氫噁唑基，二氫吡嗪基、二氫吡唑基，二氫吡啶基、二氫嘧啶基、二氫吡咯基、二氫喹啉基、二氫四唑基、二氫噻二唑基、二氫噻唑基、二氫噻吩基、二氫三唑基、二氫氮雜環(huán)丁烷基、亞甲基二氧代苯甲?；⑺臍溥秽退臍溧绶曰?，及其N(xiāo)-氧化物。通過(guò)碳原子或雜原子連接雜環(huán)取代基。本文中，術(shù)語(yǔ)“芳基”意指任何穩(wěn)定的單環(huán)或雙環(huán)碳環(huán)，每個(gè)環(huán)上至多有6個(gè)原子，其中至少一個(gè)環(huán)是芳族的。這樣的芳基的例子包括但不限于苯基、萘基和四氫萘基。本文中術(shù)語(yǔ)“雜芳基”表示穩(wěn)定的單環(huán)或雙環(huán)碳環(huán)，每個(gè)環(huán)上至多有6個(gè)原子，其中至少一個(gè)環(huán)是芳族，并且至少一個(gè)環(huán)含有1-4個(gè)選自0、N和S的雜原子。在此定義范圍之內(nèi)的雜芳基包括但不限于吖啶基、咔唑基、曾啉基、喹喔啉基、吡唑基(pyrrazoIy1)、吲哚基、苯并三唑基、呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、喹啉基、異喹啉基、噁唑基、異噁唑基、噴哚基、吡嗪基、吡二唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、四氫喹啉。本發(fā)明化合物可以藥學(xué)上、獸醫(yī)的或農(nóng)業(yè)上可接受的鹽形式。合適的藥學(xué)上可接受的鹽包括但不限于藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)酸，如鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸、硼酸、磺酸、和氫溴酸的鹽，或藥學(xué)上可接受的有機(jī)酸，如乙酸、丙酸、丁酸、酒石酸、馬來(lái)酸、羥基馬來(lái)酸、富馬酸、馬來(lái)酸、檸檬酸、乳酸、粘酸、葡糖酸、苯甲酸、琥珀酸、草酸、苯基乙酸、甲磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、水楊酸、磺胺酸、天冬氨酸、谷氨酸、乙二胺四乙酸、硬脂酸、棕櫚酸、油酸、月桂酸、泛酸、丹寧酸、抗壞血酸和戊酸的鹽。堿鹽包括但不限于與藥學(xué)上可接受的陽(yáng)離子，如鈉、鉀、鋰、鈣、，鎂、銨和烷基銨形成的那些。堿性含氮基團(tuán)可以用如下試劑季銨化，例如低級(jí)鹵代烷基，如氯代、溴代和碘代甲烷、乙烷、丙烷和丁烷；硫酸二烷基酯，如硫酸二甲酯和硫酸二乙酯等。還應(yīng)認(rèn)可本發(fā)明的許多化合物具有不對(duì)稱(chēng)中心，因此存在一種以上的立體異構(gòu)體形式。本發(fā)明還涉及基本上純的一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱(chēng)中心的異構(gòu)體形式，如約大于90%，如約95%含97%，含大于99%，以及包含其外消旋混合物的化合物。這些異構(gòu)體可以采用不對(duì)稱(chēng)合成例如用手性中間體，或通過(guò)手性拆分來(lái)制備。對(duì)本發(fā)明有用的許多金屬螯合劑和金屬蛋白酶抑制劑可以從專(zhuān)業(yè)化學(xué)公司購(gòu)得。不能購(gòu)得那些化合物可以用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的反應(yīng)，由可商購(gòu)的原料來(lái)合成。例如，取代的2，2-聯(lián)吡啶和1，10-菲咯啉可以由適當(dāng)鹵代的2，2-聯(lián)吡啶或1，10-菲咯啉獲得。例如，2，2’-聯(lián)吡啶-6，6’-二羧酸可以由6，6’-二溴_2，2’-聯(lián)吡啶，通過(guò)用丁基鋰的鹵素-金屬交換，用干冰處理并酸化獲得[Buhleier等人，Chem.Ber.,1978，111200-204]。聯(lián)吡啶的單取代，例如在6位用CH2CHNH2(CO2H)取代可通過(guò)用N-溴琥珀酰亞胺處理6-甲基_2，2’-聯(lián)吡啶，隨后用N-保護(hù)的-氨基乙酸酯進(jìn)行烷基化來(lái)達(dá)到。然后，通過(guò)酸水解除去保護(hù)基團(tuán)(ImperialiB.和FisherS.L.，J.Org.Chem，1992，57757-759)。2，2’-聯(lián)吡啶可以在C6和C4位進(jìn)行親核取代反應(yīng)，引入取代基。當(dāng)用鹵代聯(lián)吡啶作為原料時(shí)對(duì)該反應(yīng)更有利。例如用6-單或二鹵代的2，2’-聯(lián)吡啶作為原料與氨反應(yīng)，能在C6和/或C6’引入胺。聯(lián)吡啶-磺酸可以由2，2’_聯(lián)吡啶，與發(fā)煙硫酸(三氧化硫在濃硫酸的溶液)或硫酸汞(II)/濃硫酸在30(TC加熱制備。不對(duì)稱(chēng)取代的聯(lián)吡啶可以由對(duì)稱(chēng)的聯(lián)吡啶獲得，例如，6’-甲基_2，2’-聯(lián)吡啶-6-羧酸可由6，6’-二甲基_2，2’-聯(lián)吡啶用二氧化硒氧化，隨后用硝酸銀處理獲得(Al-Saya等人，EuropeanJ:0rg.Clzenz.，2004，173-182)。通式(III)和(IV)的化合物可以由可商購(gòu)的氨基酸，例如苯基丙氨酸和色氨酸，采用已知的與氨基酸羧酸或胺基的偶合反應(yīng)制備(JonesJ.,AminoAcidandPeptideSynthesis,OxfordChemistryPress，1992)。如本領(lǐng)域己知以及Jones，1992，Supra或GreenΤ.W.禾口WutzP.,ProtectingGroupsinOrganicSynthesis,Johnffiley&Son,3rdEd.，1999中所示，需要合適的保護(hù)和脫保護(hù)步驟。通式(V)的硫脲類(lèi)可以通過(guò)合適苯甲酰胺與丁基鋰，隨后與硫光氣反應(yīng)制備。得到的產(chǎn)物然后可以與合適的胺或氨基酸反應(yīng)，如過(guò)程1所示。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>本說(shuō)明書(shū)中，術(shù)語(yǔ)“外寄生物”用來(lái)包括外部感染寄主并通過(guò)產(chǎn)卵繁殖的任何寄生動(dòng)物種類(lèi)。本發(fā)明優(yōu)選的外寄生物包括選自鱗翅目、半翅目、直翅目、嚙蟲(chóng)目、膜翅目、等翅目、鞘翅目、網(wǎng)翅目、纓尾目、同翅目、雙翅目、虱目、食毛目、蚤目和蛛形目的一個(gè)目的物種。適合采用本發(fā)明方法進(jìn)行防治的外寄生物包括(a)鱗翅目(1印idopterans)，例如，棉褐帶卷蛾(Adoxophyesorgana)，小地老虎(Agrotisypsilon)、黃地老虎(Agrotissegetum)、木棉蟲(chóng)(Alabamaargillacea),黎豆夜蛾(Anticarsiagemmatalis)、蘋(píng)果巢蛾(Argyresthiaconjugella)，漢馬夜蛾(Autographagamma),Cacoeciamurinana,Capuareticulana,(Choristoneurafumiferana),玉f蟲(chóng)冥(ChiIopartellus),西方云杉卩十_(Choristoneuraoccidentalis)，二化蟲(chóng)冥(Cirphisunipuncta)，稻縱卷卩十蟲(chóng)冥(Cnaphalocrocismedinalis)，大菜螟(Crocidolomiabinotalis)、蘋(píng)果小卷蛾、松毛蟲(chóng)(Dendrolimuspini)，瓜野螟(Diaphanianitidalis),MJft^K(Diatraeagrandiosella)(Eariasinsulana)>/J"·ΞΕ(Elasmopalpuslignosellus)>Eupoeciliaambiguella,f立月夫iiill^(Feltiasubterrallea),^/Jn^^^(Grapholitha(Grapholithamolesta)、棉鈴實(shí)夜蛾(Heliothisarmigera)、綠棉鈴蟲(chóng)(Heliothisvirescens),谷實(shí)夜蛾(Heliothiszea),菜心里予螟(Hellulaundalis)、Hiberniadefoliaria,美國(guó)白蛾(Hyphantriacunea)、衛(wèi)茅巢蛾(Hyponomeutamalinellus)、番爺蠹蛾(Keiferialycopersicella),(Lambdinafiscellaria),^；^!(Laphygmaexigua)>JiE潛蛾(Leucopterascitella)、Lithocolletisblancardella,鮮食葡萄小卷蛾(Lobesiabotrana),網(wǎng)客頁(yè)里予_(Loxostegesticticalis)、___(Lymantriadispar)、|^__(Lymantriamonacha)>M(Lyonetiaclerkella)>jfl^^^l(ManducaSexta),黃褐天幕毛蟲(chóng)(Malacosomaneustria)、甘藍(lán)夜蛾(Mamestrabrassicae)、稻毛腔夜蛾(Mocisrepanda)，Operophtherabrumata，黃杉毒蛾(Orgyiapseudotsugata)、玉米螟(Ostrinianubilalis)，蘋(píng)褐卷蛾(Pandemisheparana)，冬夜蛾(Panolisflammea)，棉紅鈴蟲(chóng)(Pectinophoragossypiella)，馬鈴薯蠹蛾(Phthorimaeaoperculella)，柑橘潛葉蛾(Phyllocnistiscitrella)，大菜粉蝶(Pierisbrassicae)，苜蓿綠夜蛾(Plathypenascabra)，荷蘭石竹小卷蛾(Platynotastultena)，抗溴氰菊酯小菜蛾(Plutellaxylostella)，桔花巢蛾(Prayscitri)，油橄欖巢蛾(Praysoleae)，Prodeniasunia,黃條米占蟲(chóng)(Prodeniaornithogalli)，大豆夜娥(Pseudoplusiaincludens)，美松梢小卷蛾(Rhyacioniafrustrana)，Scrobipalpulaabsoluta，大螟(Sesamiainferens)，葡萄(Sparganothispi11eriana)，胃;t也(Spodopterafrugiperda)，棉貪夜蛾(Spodopteralittoralis)，斜紋夜蛾(Spodopteralitura)，棉大卷葉螟(Sylleptaderogate)，蘋(píng)透翅蛾(Synanthedonmyopaeformis)，松帶蛾(Thaumatopoeapityocampa)，綠色橡木飛蛾(Tortrixvirickna)，粉紋夜蛾(Trichoplusiani)，象三化螟(Tryporyzaincertulas),(ZeirapheraCanadensis)；(b)半翅目，例如，蚜屬(Aphis)，小粉虱屬(Bemisia)，疣芽屬(Phorodon)，Aeneolanzia,Enapoasca,Parkinsiella,Pyrilla,腎圓盾擠屬(Aonidiella)，球菌(Coccus)，粉蚧屬(Pseudococcus)，角盲椿屬(Helopeltis)，綠盲蝽(Lygus)，姬赤星椿象(Dysdercus)，尖長(zhǎng)春屬(xycarenus)，綠椿屬(Nezara)，粉虱屬(Aleyrodes)，傳播媒介錐蝽(Triatoma)，木虱(Psylla)，瘤蚜屬(Myzus)，修尾蚜屬(Megoura)，根瘤蚜屬(Phylloxera)螻蛄(Gryllotalpagryllotalpa)，飛蟲(chóng)皇(Locustamigratoria)，羽扇豆堿對(duì)雙帶蚱蜢(Melanoplusbivittatus)，紅足黑蝗(Melanoplusfemur-rubrum)，墨西哥黑蟲(chóng)皇(Melanoplusmexicanus)，血漂蟲(chóng)皇(Melanoplussanguinipes)，石棲漂蟲(chóng)皇(Melanoplusspretus)，土蟲(chóng)皇(Nomadacrisseptemfasciata)，美洲沙漠蟲(chóng)皇(Schistocercaamericana)，Schistocercaperegrina,Stauronotusmaroccanus，莫蟲(chóng)皇蟲(chóng)(Schistocercagregaria),鈕灰蝶屬(Adelges)，褐飛風(fēng)屬(Nilaparvata)，黑尾葉蟬(N^hotettix)或Cimwxspp.(c)直翅目，例$n，歐洲螻蛄(Gryllotalpagryllotalpa),飛蟲(chóng)皇(Locustamigratoria)，雙帶蚱蟲(chóng)孟(Melanoplusbivittatus),赤腿蚱蟲(chóng)孟(Me1anopIusfemur-rubrum)，墨西哥蚱蟲(chóng)孟(Melanoplusmexicanus)，遷徒蚱蟲(chóng)孟(Melanoplussanguinipes)，落肌山蚱蟲(chóng)孟(Melanoplusspretus),紅翅蟲(chóng)皇(Nomadacrisseptemfasciata)，美洲蚱蟲(chóng)孟(SchistocercaAmericana)，荒地蚱蟲(chóng)孟(Schistocercaperegrine)，Stauronotusmaroccanus，荒地炸蟲(chóng)孟(Schistocercagregaria)；(d)嚙蟲(chóng)目，例如，Peripsocusspp.；(e)膜翅目，例如，蕪菁葉蜂(Athaliarosae)，南非人用切葉蟻(Attac印halotes)，切葉蟻(Attasexdens)，得州切葉蟻(Attatexana)，李實(shí)葉蜂(Hoplocamapaminuta)，蘋(píng)實(shí)葉蜂(Hoplocampatestudinea)，阿根庭蟲(chóng)義(Iridomyrmeshumilis)，多霜蟲(chóng)工臭蟲(chóng)義(Iridomyrmexpurpureus)，小黃家蟲(chóng)義(Monomoriumpharaonis)，熱帶火蟲(chóng)義(Solenopsisgeminate)，紅入侵火蟲(chóng)義(Solenopsisinvicta)，漂火蟲(chóng)義(Solenopsisrichteri)，白足狡臭蟲(chóng)義(Technomyrmexalbipes)；(f)白蟻科(等翅目)，例如，Calotermesflavicollis，乳白蟻屬(Coptotermesspp)，Leucotermesflavipes，Macrotermessubhyalinus，象白蟲(chóng)義(Nasutitermesspp)如Nasutitermeswalkeri，漂翅土白蟲(chóng)義(Odontotermesformosanus)，南歐網(wǎng)紋白蟲(chóng)義(Reticulitermeslucifugus)，Termesnatalensis；(g)鞘翅目，例如，墨西哥棉鈴象(Anthonomusgrrndis)，蘋(píng)果象甲(Anthonomuspomorum)，豆長(zhǎng)吻象甲(Apionvorax)，舌甘菜隱食甲(Atomarialinearis)，松縱坑切梢小蠹(Blastophaguspiniperda)，舌甘菜大龜甲(Cassidanebulosa)，豆葉甲(Cerotomatrifurcate)，甘蘭莢象甲(Ceuthorhynchusassimilis)，Ceuthorhynchusnapi,舌甘菜^甲(Chaetocnematibialis),煙草金針蟲(chóng)(Conoderusvespertinus)，天門(mén)冬葉甲(Criocerisasparagi)，云杉紅翅小蠹(Dendroctonusrefipennis),i角O十甲(Diabroticalongicornis),Diabrotica12-punctata,玉f幼芽根葉甲(Diabroticavirgifera)，墨西哥豆瓢蟲(chóng)(Epilachnavarivestis)，煙草跳甲(Epitrixhirtipennis)，棉籽灰象甲(Eutinobothrusbrasiliensis)，松樹(shù)皮象(Hylobiusabietis)，士矣及苜猜象甲(Hyperabrunnipennis)，苜猜葉象甲(Hyperapostica)，歐洲種松小蠹(Ipstypographic)，煙草負(fù)泥蟲(chóng)(Lemabilineata)，稻負(fù)泥蟲(chóng)(Lemamelanopus)，馬鈴薯甲蟲(chóng)(Leptinotarsadecemlineata)，舌甘菜金針蟲(chóng)(Limoniuscalifornicus)，禾§象甲(Lissorhoptrusoryzophilus)，Melanotuscommunis,^f^ψ^(Meligethesaeneus)，$g龜gL(Melolonthahippocastani)，M方五月鰓金龜(Melolonthamelolontha)，稻負(fù)泥蟲(chóng)(ulemaoryzae)，葡萄黑象甲(Ortiorrhynchussulcatus)，草毒豐艮象甲(Otiorrhynchusovatus)，辣豐艮猿卩十蟲(chóng)(Phaedoncochlearae)，庭院麗金龜(Phylloperthahorticola)，六月鰓角金龜屬(Phyllophagasp.),Phyllotretachrysoc印hala，蕪菁淡足跳甲(Phyllotretanemorum)，曲條跳甲(Phyllotretastriolata)，日本HI3金龜(Popilliajaponica,Psylliodesnapi),Scolytusintricatus，l|艮甲(Sitonalineatus)；(h)網(wǎng)翅目，例如，來(lái)自地鱉科(Polyphagidae)，折翅蠊科(Bladberidae)，蜚爐禾斗(Blattidae)，Epilampridae,Chaetecsidae,Metallycidae,Mantoididae,Amorphoscelidae，Eremiaphilidae，Hymenopodidae，蟲(chóng)堂螂禾斗(Mantidae)禾口Empusidae；(i)纓翅目，例如，煙草褐薊馬(Frankliniellafusca)，苜蓿薊馬(Frankliniellaoccidentalis)，東方花薊馬(Frankliniellatritici)，小麥皮薊馬(Haplothripstritici)，溫室薊馬(Heliothripshaemorrhoidalis)，桔實(shí)薊馬(Scirtothripscitri)，稻薊馬(Thripsoryzae)，棕櫚薊馬(Thripspalmi)，煙薊馬(Thripstabaci)；(j)同翅目，例如，Acyrthosiphononobrychis,豆無(wú)網(wǎng)長(zhǎng)管蚜(Acyrthosiphonpisum)，^Pfif(Adelgeslaricis),$R0^(Aonidiellaaurantii)，Aphidulanasturtii，舌甘菜蟲(chóng)牙(Aphisfabae)，棉蟲(chóng)牙(Aphisgossypii)，蘋(píng)果(Aphispomi),Jp^cN(Aulacorthumsolani),Wfjv^(Bemisiatabaci),^iMfe·蟲(chóng)牙(Brachycauduscardui),(Brevicorynebrassicae)，玉f卩十單(Dalbulusmaidis)，高力口索漏杉椎球蟲(chóng)牙(Dreyfusianordmannianae)，云杉椎球蟲(chóng)牙(Dreyfusiapiceae),^ΜΜ(Dysaphisradicola),/J^iPf(Empoascafabae),ψ^^蟲(chóng)牙(Eriosomalanigerum),&飛Ml(Laodelphaxstriatella),胃iiW蟲(chóng)牙(Macrosiphumavenae),ixiW(Macrosiphumeuphorbiae),la^ixiW(Macrosiphonrosae),巢菜修尾蟲(chóng)牙(Megouraviciae)，麥無(wú)網(wǎng)蟲(chóng)牙(Metopolophiumdirhodum)，紫堇瘤蟲(chóng)牙(Myzuspersicae),李瘤蟲(chóng)牙(Myzuscerasi),黑尾葉蝶(Nephotettixcincticeps),褐飛風(fēng)(Nilaparvatalugens)，甘飛風(fēng)(Perkinsiellasaccharicida)，忽布撫蟲(chóng)牙(Phorodonhumuli)，蘋(píng)木虱(Psyllamali)，梨木風(fēng)(Psyllapiri)，梨黃木虱(Psyllapyricola)，玉米蟲(chóng)牙(Rhopalosiphummaidis)，麥二叉蟲(chóng)牙(Schizaphisgraminum)，禾谷網(wǎng)蟲(chóng)牙(Sitobionavenae),[=IW^iIIl(Sogatellafurcifera),tn(Toxopteracitricida),(Trialeurodesabutilonea),ilmli^lll(Trialeurodesvaporariorum),蚜(Viteusvitifolii)；(k)雙翅目，例如，墨西哥實(shí)蠅(Anastr印haludens)，地中海實(shí)蠅(Ceratitiscapitata)，高梁;((Contariniasorghicola)，托莫洪連紋果實(shí)也黽(Dacuscucurbitae)，H$M(Dacusoleae)，^^Bf^^(Dasineurabrassicae)，^jft種蠅(Deliacoarctata)，甘藍(lán)地種蠅(Deliaradicum)，麥葉毛眼水蠅(Hydrelliagriseola),種蠅(myiaplatura),蔬菜斑潛岐(Liriomyzasativae),三葉草斑潛岐(Liriomyzatrifolii),LuciliaSp.,麥?zhǔn)葆?Mayetioladestructor),妮屬(Muscasp.)，亞洲稻癭蚊(Orseoliaoryzae)，瑞典麥桿蠅(Oscinellafrit)，天仙子泉蠅(Pegomyahyoscyami)，Phorbiaantiqua,蘿卜iiil禾中M(Phorbiabrassicae)，Phorbiacoarctata，櫻桃實(shí)妮(Rhagoletiscerasi)，蘋(píng)果實(shí)妮(Rhagoletispomonella)；(l)fromtheorder風(fēng)目，例如，Pthiruspubis,頭風(fēng)(Pediculushumanuscapitus),{φMl(Pediculushumanushumanus)；(m)食毛目，例如，來(lái)自genera羽虱(Bovicola)，畜虱(Damalania)，嚼虱(Trichodectus)禾口短角習(xí)風(fēng)(Menopon)；(η)蚤目，例如，頭蚤(Ctenoc^phalides)或人蚤屬(Pulexspp.)。(ο)蛛形目，例如，硬蜱屬(Ixodesholocyclus),牛蜱屬(Boophilusrnicroplus)，血紅扇頭_(Rhipicephalussanguineus),(Sarcoptesscabiei)禾口^t^M(Dermatophagoidesspp)。能較好通過(guò)本發(fā)明防止孵化的外寄生物卵包括選自虱子、跳蚤、壁虱、蒼蠅和其它刺入或吸血外寄生物的卵。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，外寄生物卵是虱卵，更優(yōu)選是頭虱卵。虱(Lice)是以動(dòng)物皮膚和血液為食的寄生物，它們將其消化液和排泄物沉積到皮膚。這些物質(zhì)以及在皮膚本身上的穿刺傷口引起皮膚刺激，并由于產(chǎn)生的擦傷而病變，并可能由神經(jīng)節(jié)炎癥引起一系列感染。虱子也是某些疾病的病媒，如疹病或流行性斑疹傷寒和回歸熱。成年雌性虱子的壽命約為1個(gè)月，并能每天產(chǎn)10個(gè)卵。傳染人的虱子包括陰虱(Pthiruspubis)物種和由兩種次物種(subspecies)頭虱和衣虱組成的人虱(Busvine，Antenna,1993，17=196-201)ο上述虱的次物種密切相關(guān)，已知已成功雜種繁殖(Busvine，CutaneousInfestationsandInsectBites,1985,163-174)。頭虱(Pediculushzrnanzcsvar.capitis)是一種特定的寄主-外寄生物，它們專(zhuān)門(mén)在人的頭上生存，并通過(guò)從頭皮吸取血液為食。在進(jìn)食血液后，成熟的成年雌性虱子會(huì)在24小時(shí)內(nèi)在靠近頭皮處最多產(chǎn)10個(gè)卵。這些卵通過(guò)膠體牢固地固定在發(fā)干上。根據(jù)卵所處的溫度和濕度，7-10天后，卵孵化，新產(chǎn)的稚蟲(chóng)開(kāi)始進(jìn)食。稚蟲(chóng)通過(guò)三次蛻皮(第一齡期，第二齡期，第三齡期)生長(zhǎng)，每一次蛻皮需要3-5天完成。最好一次蛻皮后，成年雄性或雌性在以后的2天內(nèi)盡快交配。在進(jìn)食期間，會(huì)產(chǎn)卵并持續(xù)這一周期。從卵到卵的整個(gè)生命周期約需20-30天完成，取決于溫度和濕度條件。卵孵化后，卵殼仍固定在發(fā)干上，并隨頭發(fā)長(zhǎng)長(zhǎng)而逐漸從發(fā)干上脫落。孵化后的卵(幼蟲(chóng))由于其折射特性在人造光下呈白色而相當(dāng)容易發(fā)現(xiàn)，與之相反，未孵化的卵為淡棕色，而混入大多數(shù)頭發(fā)顏色中，因而難以發(fā)覺(jué)。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物通過(guò)抑制虱卵孵化來(lái)治愈虱子的目標(biāo)。本申請(qǐng)人已識(shí)別出能作為抑制外寄生物虱卵孵化的有效制劑的金屬螯合劑和金屬蛋白酶抑制劑。用金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑來(lái)抑制外寄生物虱卵孵化的優(yōu)點(diǎn)是能防止外寄生物的繁殖周期，從而防治外寄生物感染。本文中術(shù)語(yǔ)“金屬蛋白酶”指涉及外寄生物卵孵化的蛋白酶，所述蛋白酶具有能用作催化劑的活性金屬離子。較好地，金屬蛋白酶含有能參與催化反應(yīng)，通過(guò)極化水分子來(lái)攻擊底物-肽連接的鋅離子。更好地，金屬蛋白酶對(duì)能阻斷其活性的金屬螯合劑敏感。金屬蛋白酶較好的涉及通過(guò)作用于卵的蓋(operculum)誘發(fā)卵孵化，來(lái)實(shí)施卵孵化。涉及外寄生物卵孵化的合適金屬蛋白酶包括內(nèi)蛋白酶(在肽鏈內(nèi)分裂的酶)和外蛋白酶(從肽末端分裂氨基酸的酶)。外蛋白酶也可以分類(lèi)為羧基蛋白酶(從C末端分類(lèi)氨基酸)或氨基肽酶(N末端分類(lèi)氨基酸)。為具備活性，金屬-羧基蛋白酶需要二價(jià)陽(yáng)離子(通常Zn2+)，而氨基肽酶一般依據(jù)金屬離子(Zn2+或Mg2+)來(lái)分類(lèi)。它們以游離形式和膜束縛形式存在，并且在高(8-10)pH下具有活性。檢測(cè)愈卵孵化相關(guān)的金屬蛋白酶的方法涉及收集孵化卵時(shí)在形成胚胎周?chē)牧黧w或在卵孵化后快速?zèng)_洗空卵殼，并采用明膠底物SDS-PAGE分析來(lái)分析樣品存在的蛋白酶。顯示樣品存在溶解蛋白活性時(shí)，則可以在金屬蛋白酶抑制劑，例如1，10-菲咯啉存在下孵化，然后再分析處理過(guò)的樣品，以確定從已經(jīng)孵化的卵提取的蛋白酶是否有活性。從孵化后卵獲得的金屬蛋白酶顯示具有抑制活性時(shí)，則可以將未孵化的卵暴露于同樣的抑制劑中，評(píng)價(jià)能否抑制卵發(fā)生孵化。涉及卵孵化的金屬蛋白酶的鑒別還可以通過(guò)鑒定金屬蛋白酶的基因編碼，沉默該基因并顯示該卵不能通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法孵化來(lái)鑒別。本文中詞語(yǔ)“抑制外寄生物卵孵化”指防止外寄生物卵孵化。本發(fā)明中，與未處理的外寄生物卵相比，將外寄生物卵暴露于能防止卵孵化的金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑中。卵孵化的特征是卵的孵育襟翼(hatchflap)或蓋打開(kāi)，之后稚蟲(chóng)很快突露。在虱子情況，首先露出頭，隨后連接腿的胸部。最后，腹部突露，稚蟲(chóng)從卵中爬出。卵孵化排除了卵殼損壞或意外破碎。較好地，金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑是在產(chǎn)卵和孵化之間任何時(shí)間施用于卵時(shí)能抑制卵孵化的化合物。外寄生物卵較好地，但不限于存在于寄主生物體，如動(dòng)物的皮膚、毛發(fā)、皮毛或羊毛或人的頭發(fā)中。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，外寄生物卵可存在于寄主動(dòng)物包括人，寄主植物包括糧食作物、果樹(shù)、棉花、油籽作物、觀(guān)賞植物、花卉、蔓生作物、根類(lèi)作物、牧草和蔬菜，或其它繁殖地，例如但不限于，房屋和建筑物，家畜和畜牧動(dòng)物的圍欄，地毯、毯子、簾子和家具。根據(jù)本發(fā)明，通過(guò)任何合適的手段將外寄生物卵暴露于金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解這些手段可以不同，取決于是否將抑制劑施用于寄主，如植物或動(dòng)物或其它各種繁殖地，并取決于目標(biāo)外寄生物的特性和種類(lèi)。將存在于動(dòng)物的外寄生物卵暴露于金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑的合適手段包括但不限于，直接局部施用，如通過(guò)浸泡或噴涂，植入，緩釋制劑或器件。本發(fā)明應(yīng)用于人時(shí)，適合于局部施用的制劑包括但不限于噴劑、氣霧劑、洗劑、起泡劑、乳膏和洗液，適合于內(nèi)部施用的制劑包括但不限于片、膠囊和液體制劑。某些情況下，腸胃外給藥是用于人或動(dòng)物的最合適的防治手段。將金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑應(yīng)用于植物時(shí)，合適的手段包括但不限于噴劑、粉劑、顆粒或氣霧劑。本發(fā)明方法還包括同時(shí)或相繼使用兩種或多種金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑，或同時(shí)或相繼結(jié)合其它已知防治外寄生物的制劑使用一種或多種金屬螯合劑和/或金屬蛋白酶的方法。在本發(fā)明另一方面，方法和組合物還包括能控制孵化、稚蟲(chóng)或成年外寄生物的殺外寄生物劑。例如，能同時(shí)或分開(kāi)與本發(fā)明金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑結(jié)合使用的合適殺外寄生物劑包括有機(jī)磷酸鹽如馬拉硫磷、合成除蟲(chóng)菊酯(氯氰菊酯、溴氰菊酯)昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)素、包括幼稚素模擬物、殼多糖合成抑制劑和三嗪衍生物、殺蟲(chóng)細(xì)菌毒素、氯化烴類(lèi)(DDT，硫丹)或在EP0191236、US5，288，483和US6，727，228所述的殺蟲(chóng)劑。其它有用的殺蟲(chóng)劑包括聚二甲基硅氧烷共聚醇，如US6，663，876和US6，607，716所述低毒性的那些。這樣組合的的優(yōu)點(diǎn)是只需要一次施用就能控制外寄生物的整個(gè)生命周期。金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑可施用于寄主的毛發(fā)和皮膚，較好在被外寄生物感染的區(qū)域。外寄生物感染較好是由于選自虱子、跳蚤、壁虱、蒼蠅和其它穿刺或吸血外寄生物，以及它們的組合造成的。最好，外寄生物感染是被虱子引起的。金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑可以藥膏、水性組合物包括溶液和懸浮液、乳膏、洗液、氣霧噴劑或粉化粉末形式局部施用。術(shù)語(yǔ)“有效量”指足以提供治療和防止寄主的外寄生物感染的至少一種金屬螯合劑或至少一種金屬蛋白酶抑制劑的濃度。本發(fā)明方法中使用的金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑的有效量可依據(jù)寄主以及外寄生物感染的種類(lèi)和程度變化。金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑較好地施用到陷于頭虱感染的人的發(fā)干，并在被治療的人上停留一段時(shí)間以防止虱卵孵化。較好地，這段時(shí)間為5-15分鐘。金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑宜以約0.OOOlmM至IM濃度，較好0.OlmM-lOOmM，更好0.lmM-30mM范圍施用。有效量取決于所用的金屬螯合劑或金屬蛋白酶。但是，一些聯(lián)吡啶化合物可以適當(dāng)在5mM-15mM，特別是以約IOmM施用。由于很多哺乳動(dòng)物的蛋白酶需要鋅用于它們的活性，可由金屬螯合劑和/或金屬蛋白酶抑制劑實(shí)施，因此必須確保金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑以安全和有效量施用，宜專(zhuān)門(mén)瞄準(zhǔn)外寄生物卵。采用本發(fā)明方法治療的寄主選自，但不限于人、羊、牛、馬、豬、家畜、狗和貓。本發(fā)明的治療或預(yù)防方法可應(yīng)用于植物或外寄生物的其它繁殖地。采用本發(fā)明方法防治的植物較好選自棉花、油籽作物、裝飾植物、花卉、果樹(shù)、糧食作物、蔓生作物、根類(lèi)作物、牧草和蔬菜。本發(fā)明組合物可配制為溶液和乳液。組合物可以存在合適的賦形劑，如乳化劑、表面活性劑、穩(wěn)定劑、染料、滲透增強(qiáng)劑和抗氧化劑。可加入組合物的合適載體包括水、鹽溶液、醇、聚乙二醇、明膠、乳糖、硬脂酸鎂和硅酸。組合物可以包括滅菌和未滅菌水溶液。組合物宜為溶液形式，金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑較好稀釋在可溶的滅菌緩沖鹽水或水溶液中。組合物還可以配制成在水性介質(zhì)、非水性介質(zhì)或混合介質(zhì)中的懸浮液。含水懸浮液還包含提高懸浮液粘度的物質(zhì)，并且還含有穩(wěn)定劑。溶液還可以含有緩沖劑、稀釋劑和其它合適的添加劑。組合物可以包含與金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑活性相容的其它輔助組分。本發(fā)明的組合物可以配制成泡沫體、乳液、微乳液、洗劑、mousses、乳膏和凝膠體使用。上述組合物的制劑為殺外寄生物劑領(lǐng)域的技術(shù)人員已知。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，組合物包含濃度為0.OOOlmM-lM，較好為0.ImM-lOOmM，更好為0.lmM-30mM的金屬螯合劑。含某些金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑，例如聯(lián)吡啶化合物的組合物，宜含有5-15mM，特別是約IOmM的化合物。本發(fā)明還提供一種識(shí)別抑制外寄生物卵孵化的化合物的方法，該方法包括評(píng)價(jià)化合物對(duì)外寄生物卵中存在的金屬蛋白酶抑制能力?？梢圆捎酶鞣N方法來(lái)測(cè)試化合物對(duì)金屬蛋白酶的作用，但是，評(píng)價(jià)方法總體上宜涉及比較存在與不存在測(cè)試化合物時(shí)的金屬蛋白酶的酶活性。一種檢測(cè)與卵孵化相關(guān)的金屬蛋白酶的方法涉及收集孵化卵時(shí)在形成胚胎周?chē)牧黧w或在卵孵化后快速?zèng)_洗空卵殼，并采用明膠底物SDS-PAGE分析來(lái)分析樣品存在的蛋白酶。顯示樣品存在溶解蛋白活性時(shí)，則可以在金屬蛋白酶抑制劑，例如1，10-菲咯啉存在下孵化，然后再分析處理過(guò)的樣品，以確定從已經(jīng)孵化的卵提取的蛋白酶是否有活性。從孵化后卵獲得的金屬蛋白酶顯示具有抑制活性時(shí)，則可以將未孵化的卵暴露于同樣的抑制劑中，評(píng)價(jià)能否抑制卵發(fā)生孵化。涉及卵孵化的金屬蛋白酶的鑒別還可以通過(guò)鑒定金屬蛋白酶的基因編碼，沉默該基因并顯示該卵不能通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法孵化來(lái)鑒別。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，該方法還包括在生物學(xué)的外寄生物卵孵化試驗(yàn)中測(cè)試所述化合物。合適的生物學(xué)外寄生物卵孵化試驗(yàn)宜包括將外寄生物卵的測(cè)試樣品暴露于包含測(cè)試化合物的溶液的同時(shí)，將外寄生物卵的對(duì)照樣品暴露于對(duì)照緩沖溶液。在對(duì)照樣品觀(guān)察到卵孵化，而在測(cè)試樣品中觀(guān)察到少量孵化時(shí)，認(rèn)為該化合物能有效抑制外寄生物卵孵化。在本發(fā)明優(yōu)選的卵孵化試驗(yàn)中，外寄生物卵選自虱子、跳蚤、壁虱、蒼蠅和其它穿刺或吸血外寄生物的卵。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，外寄生物卵樣品是虱子卵。較好地，所用卵樣品(對(duì)照樣品和測(cè)試樣品)都是產(chǎn)卵后不超過(guò)6-7天。更好地，所用卵樣品是產(chǎn)卵后不超過(guò)1天。對(duì)照緩沖溶液包括但不限于滅菌磷酸鹽緩沖的鹽水或水。測(cè)試的化合物較好是金屬螯合劑和/或金屬蛋白酶抑制劑。在生物學(xué)卵孵化試驗(yàn)中，觀(guān)察到當(dāng)卵的孵育襟翼或蓋打開(kāi)時(shí)卵孵化，之后稚蟲(chóng)很快開(kāi)始突露。在虱子情況，首先露出頭，隨后連接腿的胸部。最后，腹部突露，稚蟲(chóng)從卵中爬出。在頭虱情況，卵殼則仍粘著在發(fā)干上。本發(fā)明另一方面，提供至少一種金屬螯合劑在制備用于抑制外寄生物卵孵化或治療或預(yù)防外寄生物感染的組合物中的用途，其中，金屬螯合劑是一種包含至少兩個(gè)能同時(shí)與一個(gè)金屬離子配位的雜原子的化合物，兩個(gè)雜原子中至少一個(gè)選自氮、硫、氧和磷，所述化合物包含至少一個(gè)被至少一個(gè)雜原子取代和/或被含至少一個(gè)雜原子的取代基取代的碳環(huán)，或者包含至少一個(gè)含至少一個(gè)雜原子的雜環(huán)的化合物，所述雜環(huán)任選被至少一個(gè)雜原子取代和/或被含至少一個(gè)雜原子的取代基取代。本發(fā)明又一方面，提供至少一種金屬蛋白酶抑制劑在制備用于抑制外寄生物卵孵化或治療或預(yù)防外寄生物感染的組合物中的用途。本發(fā)明還包括包含至少一種本文所述的金屬螯合劑和/或至少一種金屬蛋白酶抑制劑的制劑，用來(lái)抑制外寄生物卵孵化或治療或預(yù)防外寄生物感染。本說(shuō)明書(shū)中詞語(yǔ)“包括”或變體“包含”應(yīng)被理解為意味著包括所指的一個(gè)整體或分步的元素，或成組的整體或分步的元素，但不排除任何其它一個(gè)整體或分步的元素，或成組的整體或分步的元素。由下面的非選擇性附圖和實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明。實(shí)施例實(shí)施例1-虱卵孵化機(jī)理的評(píng)價(jià)在解剖顯微鏡下評(píng)價(jià)虱卵孵化的機(jī)理。雌性衣虱在兔子上喂養(yǎng)半小時(shí)，之后轉(zhuǎn)移到有人頭發(fā)的陪替氏培養(yǎng)皿中。然后將該陪替氏培養(yǎng)皿放入32°C和42%相對(duì)濕度的孵化器中。5小時(shí)飼養(yǎng)期間，雌性虱子開(kāi)始產(chǎn)卵。每一個(gè)雌性虱子在一次孵化時(shí)產(chǎn)至多10個(gè)卵。卵在之后的7-9天發(fā)育。在孵化前的最好12小時(shí)內(nèi)觀(guān)察到以下變化。用取向?yàn)槠漕^靠近孵育襟翼或蓋的發(fā)育胚胎，清楚地檢測(cè)到在卵內(nèi)的發(fā)育胚胎的眼睛。觀(guān)察到胚胎在卵內(nèi)運(yùn)動(dòng)。孵化發(fā)生在蓋打開(kāi)時(shí)，之后胚胎很快突露。首先露出頭，隨后連接腿的胸部。最后，腹部突露，稚蟲(chóng)從卵中爬出，卵仍粘著在頭發(fā)上。在光學(xué)顯微鏡下，沒(méi)有明顯可視的與新突露的稚蟲(chóng)頭有關(guān)的結(jié)構(gòu)，這便于孵化(即，不存在卵齒狀物(eggtooth))。由這一觀(guān)察結(jié)果可認(rèn)為雖然稚蟲(chóng)在卵內(nèi)的物理運(yùn)動(dòng)可能對(duì)卵孵化有用，但也涉及其它特定的生物化學(xué)特征。實(shí)施例2-檢測(cè)虱卵提取物中的蛋白酶活性在孵化的12小時(shí)內(nèi)，從頭發(fā)上取下50個(gè)體虱卵(Pediculushunzcarauslaunzanus)，放至一個(gè)Imleppendorf管中。將20μL蒸溜/K力口至Ij未鮮化卵中，在32°C制備孵化30分鐘?；厥?(^1^并于-701儲(chǔ)存。按上述還收集許多其它樣品。并收集已取下未孵化卵的頭發(fā)樣品，按上述步驟孵化。此外，收集在產(chǎn)卵后7天(卵孵化的24小時(shí)內(nèi))的未孵化卵樣品和除去虱卵的頭發(fā)樣品。兩種樣品都用IOml的次氯酸鈉溶液洗滌1分鐘，隨后用25ml蒸餾水洗滌5X1分鐘，除去次氯酸鹽。然后，這些樣品按上述在20yL蒸餾水中孵化。此外，一組25個(gè)在孵化的24小時(shí)內(nèi)的虱卵用次氯酸鈉預(yù)處理，按上述洗滌，留下進(jìn)行孵化。在孵化后的1-2小時(shí)內(nèi)，空的卵殼按照上述在20yL蒸餾水中孵化，從孵化卵殼收集洗滌液并在_70°C儲(chǔ)存。然后，全部提取物樣品冷凍干燥過(guò)夜。冷凍干燥的樣品然后再懸浮于15μL未還原的SDS樣品緩沖液中，以10，OOOg離心2分鐘，然后將全部15μL懸浮液加在10%明膠底物SDS-PAGE凝膠上。該凝膠在4°C，IOmA下操作10分鐘，隨后在15mA/凝膠下再操作25分鐘。然后，它們?cè)?.5%Triton-X100溶液中孵化2X20分鐘，隨后在含ImMCaCl2,0.1M，pH8.0的Tris/HCl中孵化3小時(shí)。檢測(cè)為凝膠上透明區(qū)的活性，蛋白酶活性的結(jié)果分解凝膠中的明膠。這些研究的結(jié)果表明，蛋白水解活性存在于許多不同制備物，如使用底物SDS-PAGE所分析的。在孵化12小時(shí)內(nèi)，在未孵化虱卵獲得的洗滌物中檢測(cè)到蛋白酶活性(圖1，通道1)。這種活性在凝膠的高分子量區(qū)。在明膠底物SDS-PAGE上分析已經(jīng)除去虱卵的頭發(fā)樣品時(shí)檢測(cè)到顯著量的蛋白酶活性(圖1，通道2)。對(duì)這種活性的最可能的說(shuō)明是，它是在產(chǎn)量時(shí)產(chǎn)生的母性起源。用次氯酸鈉處理頭發(fā)樣品能完全除去污染的蛋白酶(圖1，通道3)。此外，對(duì)未孵化量的處理也能除去這種蛋白酶活性(圖1，通道4)。因此，決定在孵化前按上述用次氯酸鈉Na進(jìn)行處理，以除去這些母性蛋白酶。對(duì)新孵化后的卵殼(卵殼洗滌物)的分析表明存在兩種高分子量物質(zhì)(圖1，通道5)。注意到在這次收集中只用了25個(gè)虱卵，可能對(duì)低水平的蛋白酶活性有用。這些結(jié)果證實(shí)存在直接與新孵化的虱卵相關(guān)的蛋白酶活性?？傊?，用光學(xué)顯微鏡對(duì)虱子的孵化過(guò)程進(jìn)行研究。卵孵化呈現(xiàn)出與卵內(nèi)發(fā)育的稚蟲(chóng)的物理活性有關(guān)。但是，缺乏任何專(zhuān)門(mén)用來(lái)穿刺或松開(kāi)孵育襟翼或蓋的結(jié)構(gòu)，表明孵化過(guò)程還涉及生物化學(xué)構(gòu)成。雖然在卵孵化時(shí)在虱子中檢測(cè)到高活性蛋白酶，但是這些蛋白酶的主要來(lái)源表現(xiàn)出是母性起源。用次氯酸鈉對(duì)正進(jìn)行成功孵化的虱子，能達(dá)到在卵孵化前除去這種活性。隨后對(duì)新孵化的虱子的ESW分析表明，存在有限的蛋白酶物質(zhì)，它們可作為對(duì)抑制虱子的卵孵化的目標(biāo)作進(jìn)一步的研究。實(shí)施例3卵殼洗滌物中蛋白酶的特征為評(píng)價(jià)在卵殼洗滌物中虱子孵化蛋白酶作為用來(lái)抑制卵孵化的目標(biāo)的可能性，首先必須確定孵化蛋白酶的特性。用四種蛋白酶類(lèi)的抑制劑來(lái)分類(lèi)ESW中的蛋白酶。將10%SDS-PAGE明膠底物凝膠裝在來(lái)自100個(gè)虱卵的冷凍干燥的卵殼洗滌物中，該洗滌物已再懸浮于50μ1非還原樣品緩沖液，樣品以10μ1/通道運(yùn)行。凝膠以IOmA/凝膠在4°C運(yùn)行10分鐘，隨后以15mA/凝膠再運(yùn)行25分鐘。然后，將凝膠切成帶，每個(gè)帶在含特定抑制劑的2.5%Triton-X100溶液中孵化2X20分鐘。所用抑制劑是絲氨酸蛋白酶抑制劑PMSF(5mM)、金屬蛋白酶抑制劑1，10-菲咯啉(IOmM)、天冬氨酸蛋白酶胃酶抑素(5plM)和半胱氨酸抑制劑E-64(IOmM)。然后，凝膠帶在含不同蛋白酶抑制劑的含ImMCaC12，pH為8的0.IMTris/HCl中，37°C孵化3小時(shí)，之后用考馬斯藍(lán)染色并前面所述脫色。與圖1不同，通道5顯示約25-30kDa的蛋白水解活性的優(yōu)勢(shì)(參見(jiàn)圖2括弧)。洗滌ESW的制備物的隨后分析表明這種約25-30kDa的蛋白水解活性的三倍量能很好重現(xiàn)。抑制劑的研究結(jié)構(gòu)表明用1，10-菲咯啉處理后蛋白酶的活性明顯下降(通道2括號(hào)區(qū))。觀(guān)察當(dāng)用絲氨酸蛋白酶抑制劑PMS或半胱氨酸蛋白酶抑制劑E64時(shí)，ESW的蛋白酶活性沒(méi)有下降。此外，天冬氨酸抑制劑胃酶抑素未顯示蛋白酶活性的然后下降(數(shù)據(jù)未示出)。實(shí)施例4用來(lái)測(cè)定虱卵孵化的體外活體鑒定的發(fā)展為評(píng)價(jià)蛋白酶抑制劑對(duì)虱卵孵化的潛在作用，必須進(jìn)行可靠的體外活體鑒定。雄性和雌性衣虱按照前面所述在兔子上喂養(yǎng)。雌性和雄性成年虱子以31的比例轉(zhuǎn)移到一個(gè)透明陪替氏培養(yǎng)皿，該培養(yǎng)皿中有約3X3cm2的尼龍布，在32°C保留12小時(shí)。在此期間雌性虱子產(chǎn)卵并將卵固定在織物布上。然后除去所有虱子，讓卵在孵化5天。在第6天，將含有卵的布放入次氯酸鈉溶液中1分鐘，然后充分洗滌。卵通過(guò)最好的發(fā)育階段發(fā)展到孵出。在未處理的對(duì)照卵中，采用體外卵孵化評(píng)價(jià)，達(dá)到85-95%的可靠的平均孵化％。隨后發(fā)現(xiàn)對(duì)卵孵化評(píng)價(jià)，并不需用次氯酸鈉預(yù)處理虱卵。實(shí)施例5識(shí)別能抑制虱子孵化蛋白酶活性的化合物(a)采用虱卵_孵化活體鑒定測(cè)試蛋白酶抑制劑。已改進(jìn)用來(lái)測(cè)定虱卵孵化的活體鑒定，在研究的下一階段，采用這種活體鑒定作為測(cè)試不同蛋白酶抑制劑對(duì)卵孵化的作用。如上所述，將虱卵放在布上。5天后，除去布上虱卵，并將其浸在次氯酸鈉溶液中，之后用蒸餾水充分洗滌，并在棉紙上吸干。在解剖顯微鏡下對(duì)虱卵計(jì)數(shù)，將布切成一批有10-30卵的小塊，對(duì)每一次處理有3-5個(gè)重復(fù)品。將含有虱卵的布浸在蛋白酶抑制劑溶液中2-10分鐘，再放在棉紙上吸干1分鐘，然后轉(zhuǎn)移到一個(gè)透明陪替氏培養(yǎng)皿上，孵卵直到孵化。在接下來(lái)的1-2天，以規(guī)定時(shí)間間隔觀(guān)察卵證明卵孵化，這段時(shí)間對(duì)照卵孵化。通常將蛋白酶抑制劑溶液制備成儲(chǔ)備溶液，以適當(dāng)濃度新鮮加入。具體的儲(chǔ)備溶液如下制備1，10-菲咯啉(200mM甲醇溶液)和苯丁亮氨酸(5mg/ml甲醇溶液)。此外，在含對(duì)照卵的非抑制劑中加入等量溶劑，測(cè)試任何只有緩沖劑時(shí)的作用。計(jì)算孵化抑制百分?jǐn)?shù)為預(yù)未處理的對(duì)照相比，卵孵化減少的百分?jǐn)?shù)。未處理的對(duì)照指定為100%的孵化。其它的1，10-菲咯啉，一種金屬螯合劑和金屬蛋白酶抑制劑在IOmM時(shí)能顯著抑制虱子的卵孵化，與對(duì)照組相比在ImM時(shí)的抑制水平約為30%(參見(jiàn)圖3)。苯丁亮氨酸，一種金屬螯合劑和金屬蛋白酶抑制劑，更具體是氨基肽酶M和N在5mM時(shí)也能顯著抑制虱卵孵化(圖4)。這些結(jié)果提供了特定金屬螯合劑和金屬蛋白酶抑制劑對(duì)虱卵孵化作用的數(shù)據(jù)。但是，注意到在孵化24小時(shí)內(nèi)加入1，10-菲咯啉或苯丁亮氨酸時(shí)，觀(guān)察到不同的對(duì)卵孵化的抑制作用(數(shù)據(jù)未示出)。這種對(duì)孵化抑制作用的變化的原因可能是涉及虱子特定發(fā)育階段的許多因素。而且，這些研究表明，很難預(yù)測(cè)卵孵化的確切時(shí)間，因此在評(píng)價(jià)具體抑制劑對(duì)卵孵化作用時(shí)，可能較難選擇處理卵的簡(jiǎn)單時(shí)間點(diǎn)。因此，考慮到虱子發(fā)育中的這種變化性，改進(jìn)體外活體鑒定系統(tǒng)。(b)采用體外活體鑒定的時(shí)間過(guò)程實(shí)驗(yàn)。進(jìn)行一系列的時(shí)間過(guò)程實(shí)驗(yàn)，作為評(píng)價(jià)抑制劑對(duì)虱卵孵化作用的手段。如前面所述將卵放置在布上，然后以24小時(shí)的間隔，將抑制劑加入新的一組卵，直到放置到120小時(shí)。然后，卵在28°C再孵化8天，使卵孵化。這種評(píng)價(jià)抑制劑的方法更接近反映出虱卵在各發(fā)育階段的現(xiàn)場(chǎng)情況。這些研究的結(jié)果列于表1。證明不同濃度的1，10-菲咯啉在虱子孵化過(guò)程中的顯著抑制作用。還觀(guān)察到1，10-菲咯啉的抑制作用與濃度無(wú)關(guān)的程度。結(jié)果表明時(shí)間過(guò)程實(shí)驗(yàn)提供了一種評(píng)價(jià)抑制劑對(duì)虱卵孵化的抑制作用的更可靠的手段。加入苯丁亮氨酸產(chǎn)生顯著的抑制作用，不僅是在卵孵化前24小時(shí)施用時(shí)。表1，在產(chǎn)卵后，用不同濃度1，10-菲咯啉和5mM苯丁亮氨酸處理后，以24小時(shí)的間隔對(duì)卵孵化的抑制％<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>上面的研究結(jié)果表明虱子孵化酶是金屬類(lèi)蛋白酶，如由金屬螯合劑金屬蛋白酶抑制劑1，10-菲咯啉抑制其活性作用所判斷的。而且，特別在孵化期間以低濃度處理卵時(shí)，濃度依賴(lài)作用的明顯證據(jù)說(shuō)明，這種化合物能夠在全部測(cè)試的時(shí)間點(diǎn)顯著抑制虱卵孵化。1，10-菲咯啉提供其螯合金屬離子較好是鋅的能力顯示其作用，從而抑制與鋅相關(guān)的蛋白酶。對(duì)苯丁亮氨酸的數(shù)據(jù)還表明，在卵發(fā)育后階段將該化合物給予卵時(shí)，特別能抑制虱子卵的孵化。苯丁亮氨酸是一種環(huán)化合物，包含被含胺、羥基、酰胺和羧基的取代基取代的芳環(huán)。苯丁亮氨酸是一種微生物源的抗生素，可用來(lái)防治各種形式的毒瘤，包括非淋巴細(xì)胞的白血病，以及不同形式的固態(tài)腫瘤，包括肺、胃、膀胱、頭、頸和食管，苯丁抑制素名下使用的情況?？梢砸缘投拘越o予培養(yǎng)的細(xì)胞，接觸動(dòng)物和人。雖然苯丁亮氨酸常規(guī)以微摩爾濃度用作純化蛋白酶的抑制劑(ΙΟμΜ和130ρΜ)，所獲數(shù)據(jù)表明只到5mM才是有效。這一結(jié)果可能是由于多種因素包括苯丁亮氨酸穿透卵的能力及其對(duì)虱子孵化蛋白酶的特異性能造成的。實(shí)施例6篩選抑制虱卵孵化的蛋白酶抑制劑按實(shí)施例4所述，將虱子卵放在布料上。按照實(shí)施例5(部分(b))所述組織一系列的時(shí)間_過(guò)程試驗(yàn)。對(duì)相當(dāng)數(shù)量的市售蛋白酶抑制劑/金屬螯合劑進(jìn)行虱子孵化試驗(yàn)，以測(cè)定各蛋白酶抑制劑對(duì)虱卵孵化的作用(表2)。計(jì)算的孵化抑制百分?jǐn)?shù)為與未處理的對(duì)照組相比卵孵化減少的百分?jǐn)?shù)。設(shè)定未處理的對(duì)照組的孵化百分?jǐn)?shù)為100%。表2.用各種蛋白酶抑制劑處理后對(duì)虱卵孵化抑制百分?jǐn)?shù)。抑制百分?jǐn)?shù)指在該試驗(yàn)的時(shí)間_過(guò)程中達(dá)到的最大卵孵化。<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>*不同蛋白酶抑制劑對(duì)卵孵化的抑制百分?jǐn)?shù)相對(duì)于適當(dāng)?shù)膶?duì)照進(jìn)行計(jì)算，抑制百分?jǐn)?shù)代表所觀(guān)察到的最大卵孵化抑制。許多蛋白酶抑制劑顯示能顯著抑制虱卵孵化。測(cè)試顯示最有效的抑制劑包括金屬螯合劑和金屬蛋白酶抑制劑，如1，10-菲咯啉、2，2-聯(lián)吡啶和6,6'-二甲基-2,2'-聯(lián)吡啶、5，5’-二甲基-2，2’-聯(lián)吡啶(各自在IOmM時(shí)100%抑制)。苯丁亮氨酸(金屬蛋白酶抑制劑)也能顯著抑制卵孵化(5mM時(shí)為58%)。天然生成的基質(zhì)(matrix)的四環(huán)化合物(其中一個(gè)環(huán)是芳環(huán)，四環(huán)結(jié)構(gòu)可以被多個(gè)羥基、羰基、胺和酰胺取代)的金屬蛋白酶(MMP)抑制劑和金屬螯合劑包括四環(huán)素(5mg/ml時(shí)89%抑制)，強(qiáng)力霉素(5mg/ml，65%抑制)和二甲胺四環(huán)素(5mg/ml，55%抑制)。這些金屬螯合劑顯示對(duì)卵孵化的抑制活性，但是這些化合物的抑制效果量級(jí)上有較大差別，并且表現(xiàn)出與時(shí)間相關(guān)。氧肟酸鹽抑制劑的總體可用性由于降低抗生素在一般環(huán)境的使用而受到限制。這些結(jié)果表明MMP抑制劑也對(duì)虱卵孵化顯示抑制作用。測(cè)試的其它蛋白酶抑制劑包括IOOmMEDTAUOmMEGTA和5%三乙醇胺。結(jié)果表明這些抑制劑在所用濃度(結(jié)果未示出)并未顯示對(duì)卵孵化的作用。實(shí)施例7用1-10菲咯啉洗滌卵的后處理效果該試驗(yàn)用來(lái)測(cè)定洗滌卵是否能達(dá)到1，10-菲咯啉的抑制活性(表3)。還設(shè)定對(duì)照組(5%甲醇)。金屬孵化抑制％為與未處理對(duì)照組相比的卵孵化降低的百分?jǐn)?shù)。設(shè)定未處理對(duì)照組的抑制百分?jǐn)?shù)為100%。此試驗(yàn)的結(jié)果表明在水中洗滌卵后1，10-菲咯啉仍能有效抑制虱卵孵化。在后一階段，卵適當(dāng)孵化(5天)，其作用顯示與使用低濃度抑制劑時(shí)有類(lèi)似的濃度依賴(lài)性。還注意到用一定比例的用1，10-菲咯啉處理的卵的胚胎在正常發(fā)育下仍不能孵化。表3.在虱子產(chǎn)卵后以24小時(shí)間隔，用IOmM1_10菲咯啉處理，對(duì)卵孵化的抑制百分?jǐn)?shù)。虱子卵用抑制劑處理10分鐘并且不洗滌，或進(jìn)行處理并洗滌1分鐘，然后孵化。<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>實(shí)施例8用1-10菲咯啉抑制頭虱卵孵化該試驗(yàn)用來(lái)測(cè)定金屬螯合劑和金屬蛋白酶抑制劑1，10-菲咯啉是否能抑制頭虱卵(頭虱)孵化，與體虱不同。將每組1-2個(gè)成年雄性頭虱和6-8個(gè)成年雌性頭虱放在有棉布的24孔陪替氏培養(yǎng)皿的單個(gè)孔中，獲得卵。將陪替氏培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)移到32°C，70%RH的潮濕孵化器中12小時(shí)，使雌性虱子產(chǎn)卵。12小時(shí)后，從陪替氏培養(yǎng)皿孔中取出成年虱子，進(jìn)行一系列的時(shí)間_過(guò)程試驗(yàn)。一組卵(24小時(shí)蟲(chóng)齡)用200μ1IOmM1,10-菲咯啉處理10分鐘。還包括對(duì)照組卵(即未經(jīng)抑制劑處理)。從抑制劑中除下的卵在棉紙上吸干，處于321和70%冊(cè)下孵化。第二組卵(48吸收蟲(chóng)齡)如前所述進(jìn)行處理并且進(jìn)行孵化。在產(chǎn)卵后以24小時(shí)間隔重復(fù)這一過(guò)程，至多為120小時(shí)。這種測(cè)試抑制劑的方法更密切反映了虱子卵在頭的發(fā)育不同階段的現(xiàn)場(chǎng)并且觀(guān)察到對(duì)不同階段的寄生蟲(chóng)的抑制作用。上面的研究結(jié)果表明1，10-菲咯啉能顯著抑制頭虱的卵孵化(表4)。表4.在產(chǎn)卵后以24小時(shí)間隔，用IOmM1，10-菲咯啉處理，相對(duì)于對(duì)照組對(duì)卵孵化的抑制百分?jǐn)?shù)。<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>這些結(jié)果足以表明體虱是一種用來(lái)評(píng)價(jià)蛋白酶抑制劑對(duì)頭虱的卵孵化的抑制作用的有效方式。實(shí)施例9用金屬螯合劑抑制虱卵孵化用兩種可用作金屬蛋白酶抑制劑的金屬螯合劑進(jìn)行試驗(yàn)，來(lái)測(cè)定它們對(duì)虱卵孵化的作用。對(duì)這些化合物進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)虱子試驗(yàn)，測(cè)定它們的殺卵作用(參見(jiàn)用來(lái)測(cè)試抑制劑的方法的實(shí)施例5和6)。評(píng)價(jià)以下金屬螯合劑2，2’-聯(lián)吡啶和6，6’-二甲基-2，2’-聯(lián)吡啶。此研究的結(jié)果列于表5和6。表5.在產(chǎn)卵后以24小時(shí)間隔，用2，2’_聯(lián)吡啶處理后的卵孵化結(jié)果。所列結(jié)果簡(jiǎn)稱(chēng)如下N(每次平行試驗(yàn)的卵數(shù))，H(成功孵化的卵數(shù))和Ph(部分孵化的卵數(shù))。<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>表6.在產(chǎn)卵后以24小時(shí)間隔，用6，6’-二甲基-2，2’-聯(lián)吡啶處理后的卵孵化結(jié)果。所列結(jié)果簡(jiǎn)稱(chēng)如下Ν(每次平行試驗(yàn)的卵數(shù))，H(成功孵化的卵數(shù))和Ph(部分孵化的卵數(shù))。<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>這些研究的結(jié)果表明6，6’-二甲基-2，2’-聯(lián)吡啶和2，2’-聯(lián)吡啶都顯示很強(qiáng)的殺卵活性，在測(cè)試的全部時(shí)間完全抑制了虱卵孵化。6，6’-二甲基_2，2’-聯(lián)吡啶和2，2’-聯(lián)吡啶都是非夾層的的金屬螯合劑和金屬蛋白酶抑制劑。實(shí)施例10用1，10-菲咯啉處理市售虱子產(chǎn)品的比較試驗(yàn)對(duì)三種主要的市售頭虱產(chǎn)品進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)虱卵孵化試驗(yàn)，評(píng)價(jià)這些產(chǎn)品的殺卵性能。這三種市售頭虱產(chǎn)品如下1.KP-24NelsonLaboratories，活性成分1%maldison(馬拉硫磷)；2.RIDBayer，活性成分，除蟲(chóng)菊酯；3.NIXPfizer，活性成分，氯菊酯。按照廠(chǎng)商的推薦測(cè)試這三種產(chǎn)品。按照廠(chǎng)商推薦用不同產(chǎn)品處理多組卵(24小時(shí)蟲(chóng)齡)適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(5-10分鐘)，隨后在32°C水中漂洗1-2分鐘。還加入一個(gè)正對(duì)照組(IOmM1，10-菲咯啉)和兩個(gè)負(fù)對(duì)照組(未處理和20%甲醇)。暴露于不同產(chǎn)品后，卵在32°C溫水中漂洗，之后在棉紙上吸干，處于32°C，70%RH下孵化。第二組卵(48小時(shí)蟲(chóng)齡)按照前述處理并進(jìn)行孵化。在產(chǎn)卵后以24小時(shí)間隔重復(fù)這一過(guò)程，至多為120小時(shí)。這種測(cè)試抑制劑的方法更密切反映了虱子卵在頭部的發(fā)育不同階段的現(xiàn)場(chǎng)并且觀(guān)察到對(duì)不同階段的寄生蟲(chóng)的抑制作用。研究結(jié)果列于表7。表7.在產(chǎn)卵后以24小時(shí)間隔，對(duì)三種市售頭虱產(chǎn)品、IOmM1，10-菲咯啉和對(duì)照組處理后的卵孵化結(jié)果。所列結(jié)果簡(jiǎn)稱(chēng)如下N(每次平行試驗(yàn)的卵數(shù))，H(成功孵化的卵數(shù))和Ph(部分孵化的卵數(shù))。<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>三種市售滅虱劑的測(cè)試結(jié)果表明，它們?cè)谑逊趸牟煌A段顯示不一致的殺卵活性孵化。而化合物1，10-菲咯啉顯示能有效抑制虱卵孵化。實(shí)施例11其它市售產(chǎn)品的評(píng)價(jià)兩種主要的市售頭虱產(chǎn)品進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)虱卵孵化試驗(yàn)。這兩種市售頭虱產(chǎn)品如下1.ProntoPlusShampooDelLaboratories，活性成分0.33%除蟲(chóng)菊酯；2.ProntoPlusMousseShampooDelLaboratories,活性成分，0.33%除蟲(chóng)菊酯。按照廠(chǎng)商的推薦測(cè)試這兩種產(chǎn)品。按照廠(chǎng)商推薦用不同產(chǎn)品處理多組卵(24小時(shí)蟲(chóng)齡)適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(5-10分鐘)，隨后在32°C水中漂洗1-2分鐘。還加入兩個(gè)負(fù)對(duì)照組(未處理和20%乙醇)。暴露于不同產(chǎn)品后，卵在32°C溫水中漂洗，之后在棉紙上吸干，在32°C，70%RH下孵化。第二組卵(48小時(shí)蟲(chóng)齡)按照前述處理并進(jìn)行孵化。在產(chǎn)卵后以24小時(shí)間隔重復(fù)這一過(guò)程，至多為120小時(shí)。這種測(cè)試抑制劑的方法更密切反映了虱子卵在頭部的發(fā)育不同階段的現(xiàn)場(chǎng)并且觀(guān)察到對(duì)不同階段的寄生蟲(chóng)的抑制作用。研究結(jié)果列于表8。表8.在產(chǎn)卵后以24小時(shí)間隔，對(duì)兩種市售頭虱產(chǎn)品和對(duì)照組處理后的卵孵化結(jié)果。所列結(jié)果簡(jiǎn)稱(chēng)如下N(每次平行試驗(yàn)的卵數(shù))，H(成功孵化的卵數(shù))和Ph(部分孵化的卵數(shù))。_<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>兩種市售滅虱劑的測(cè)試結(jié)果表明，它們?cè)谑逊趸牟煌A段的殺卵活性很差，且不一致。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，在不偏離廣義所述的本發(fā)明的精神和范圍下，可以對(duì)按具體實(shí)施方式所示的本發(fā)明進(jìn)行各種變動(dòng)和/或修改。因此，認(rèn)為在此的實(shí)施方式是說(shuō)明書(shū)性的不構(gòu)成限制。上面所述的所有出版物被全文參考結(jié)合于本文。本說(shuō)明書(shū)中包含的對(duì)文獻(xiàn)、作用、材料、設(shè)備、制品等的所有討論僅用于提供本發(fā)明的背景。但是并不認(rèn)為任何或所有這些物質(zhì)形成現(xiàn)有技術(shù)的一部分或是與本發(fā)明相關(guān)的領(lǐng)域的公知常識(shí)，就象它們?cè)诒旧暾?qǐng)的各權(quán)利要求的優(yōu)先權(quán)日之前在任何國(guó)家已存在那樣。參考文獻(xiàn)Al-Sayah,Μ.H.，McDonald,R.，Branda,N.R.，Euro.JOrg.Chem.，2004，173-182.Buhleier,Ε.，Weller,W.,Vogthe,F.，Chem.Ber.，1978，111，200—204。Busvine,J.R.,.Entomologyandevolution.Antenna.1993,17:196—201。Busvine，J.R,Biologyoftheparasites.CutaneousInfestationsandInsectBites(M.OrkinandH.I.Maibach,eds).1985,pp.163-174.NewYork:MarcelDekker0Dymock,J.J.，LaingW.Α.，ShawB.D.，GatehouseA.M.R，Cristellar.J.T.NewZealandJournalofZoology，1992，19:123-131。Green,T.W.禾口Wutz，P.,Protectinggroupsoforganicsynthesis,JohnWiley&Son，3rdEdition，1999。Imperiali，B.andFisher,S.L，J.Org.Chem.，1992，57，757—759。Jones，J.，Aminoacidsynthesisandpeptidesynthesis，OxfordChemistryPress，1992.SamuelsR.I.禾口PatersonJ.C.ComparativeBiochemistryandPhysiology.1995110B:661_669。權(quán)利要求一種抑制外寄生物卵孵化的方法，該方法包括將外寄生物卵暴露于至少一種金屬螯合劑中，所述金屬螯合劑是一種包含至少兩個(gè)能同時(shí)與一個(gè)金屬離子配位的雜原子的化合物，兩個(gè)雜原子中至少一個(gè)選自氮、硫、氧和磷，所述化合物包含至少一個(gè)被至少一個(gè)雜原子取代和/或被含至少一個(gè)雜原子的取代基取代的碳環(huán)，所述金屬螯合劑或者是包含至少一個(gè)含至少一個(gè)雜原子的雜環(huán)的化合物，所述雜環(huán)任選被至少一個(gè)雜原子取代和/或被含至少一個(gè)雜原子的取代基取代。2.一種抑制外寄生物卵孵化的方法，該方法包括將外寄生物卵暴露于有效量的金屬蛋白酶抑制劑中。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，碳環(huán)或雜環(huán)是芳環(huán)或雜芳環(huán)。4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，金屬螯合劑包含至少一種氮雜原子。5.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，金屬螯合劑或金屬蛋白酶抑制劑是一種化學(xué)式(I)的化合物，或其藥學(xué)上、獸醫(yī)或農(nóng)業(yè)上可接受的鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>式中，X選自共價(jià)鍵、-C(R5)2_、-Z-或-C(R5)2-Z"C(R5)2-；R1和R1’獨(dú)立地選自氫、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、羥基、C1^6烷氧基、硫醇、C1^6烷硫基、C02H、CO2Ch6烷基、S03H、SO3CV6烷基、NH2、NHCV6烷基或N((^6烷基)2，或R1和R1，一起是-C(R5)2_、-C(R5)2-C(R5)2_、-CR5=CR5-,C(0)、C(S)或NH；R2、R2，、R3、R3，、R4和R4，獨(dú)立地選自氫、C1^6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、羥基、C1^6烷氧基、硫醇、Cp6烷硫基、CO2^CO2Ch烷基、SO3^SO3Ch6烷基、NHyNHCV6烷基或N((^6烷基)2，或-CH2CHNH(CO2H)；或R2和R3或R3和R4和/或R2，和R3，或R3，和R4，與它們連接的碳原子一起形成五或六元碳環(huán)或雜環(huán)；各R5獨(dú)立地選自氫、C1^6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、羥基、CV6烷氧基、硫醇、C1^6烷硫基、C02H、CO2Ch6烷基、S03H、SO3Ch6烷基、NH2,NHCV6烷基或N((^6烷基)2；Z選自共價(jià)鍵、-NH-、-0-、-S-、-C(0)-和-C(S)-。6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，R1和R1’獨(dú)立地選自氫或CV3烷基。7.如權(quán)利要求5或6所述的方法，其特征在于，R2和R2’獨(dú)立地是氫或C"烷基。8.如權(quán)利要求5-7中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，R3、R3’、R4和R4’獨(dú)立地選自氫、Ci-6焼基、C2-Q烯基、炔基、烷氧基、烷硫基或CO2C1-6焼基。9.如權(quán)利要求5-8中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，各R5獨(dú)立地選自氫、Cp6烷基、c2_6烯基、c2_6炔基、CV6烷氧基、C1^6烷硫基或CO2CV6烷基。10.如權(quán)利要求5-10中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，X是共價(jià)鍵、-CH2-Z-CH2-或Z。全文摘要一種抑制外寄生物卵孵化的方法，該方法包括將外寄生物卵暴露于至少一種金屬螯合劑和/或金屬蛋白酶抑制劑中，所述金屬螯合劑是一種包含至少兩個(gè)能同時(shí)與一個(gè)金屬離子配位的雜原子的化合物，兩個(gè)雜原子中至少一個(gè)選自氮、硫、氧和磷，所述化合物包含至少一個(gè)被至少一個(gè)雜原子取代和/或被含至少一個(gè)雜原子的取代基取代的碳環(huán)，所述金屬螯合劑或者是包含至少一個(gè)含至少一個(gè)雜原子的雜環(huán)的化合物，所述雜環(huán)任選被至少一個(gè)雜原子取代和/或被含至少一個(gè)雜原子的取代基所取代。文檔編號(hào)A61K31/4015GK101810613SQ20101011017公開(kāi)日2010年8月25日申請(qǐng)日期2004年7月16日優(yōu)先權(quán)日2003年7月16日發(fā)明者V·M·鮑爾斯申請(qǐng)人:海區(qū)特克控股股份有限公司