專利名稱：：含rgdv阿糖胞苷偶聯(lián)物藥質(zhì)體制備及作為抗腫瘤劑的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及抗腫瘤靶向阿糖胞苷系列偶聯(lián)物及其藥質(zhì)體的構(gòu)建方法，本發(fā)明還涉及抗腫瘤靶向阿糖胞苷偶聯(lián)物藥質(zhì)體的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：阿糖胞苷(CytosineArabinoside，Ara-C)是典型的嘧啶核苷類拮抗劑，是臨床上常用的抗白血病藥物，已有四十余年歷史，已成為治療急性非淋巴細胞性白血病(ANLL)的最主要藥物之一。靜脈給藥后，Ara-C迅速在系統(tǒng)池中脫氨基成為Ara-U，同時，Ara-C也被快速轉(zhuǎn)運到細胞中，代謝成為有抗腫瘤活性的Ara-CTP。Ara-C在細胞內(nèi)脫氨基的程度相對較低。由于其在系統(tǒng)池中的迅速脫氨基和半衰期短，通常采用持續(xù)靜脈給藥或頻繁大劑量給藥。對阿糖胞苷的修飾主要集中在NM立，保護氨基被脫除。首先，從阿糖胞苷結(jié)構(gòu)中可知其裸露的氨基和阿糖上的眾多羥基使它具有很強的極性。為了改變其水溶性強的特點，可以將其與脂溶性強的脂肪酸相連。再者，本發(fā)明認為連接脂肪酸與阿糖胞苷的橋鏈可以進行進一步的研究。整合素最早由Richard于1987年提出，指細胞與細胞或細胞與細胞外基質(zhì)相關(guān)聯(lián)的細胞膜表面的一族細胞黏附分子。整合素分子都是由a，|3兩條鏈經(jīng)非共價鍵連接而成的異源二聚體蛋白。目前已知至少有25種a亞單位和ll種|3亞單位，二者相互連接組成約20多種不同的整合素分子。許多惡性腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移均與整合素表達異?；蚍肿咏Y(jié)構(gòu)改變相關(guān)。同時，精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸三肽序列(Arg-Gly-Asp，RGD)是整合素特異識別序列片段，RGD三肽及修飾物通過與整合素特異結(jié)合，具有阻止腫瘤細胞定位增殖、抗腫瘤新生血管生成作用。本發(fā)明選擇在阿糖胞苷的N4位連接一個含有RGDV四個氨基酸序列肽段，把藥物主動的靶向到腫瘤部位。并連接上不同長度的脂肪酸，增加其脂溶性，使其具有適當?shù)挠退峙湎禂?shù)，再通過加入少許的輔助材料，便可以將其制備成藥質(zhì)體，進一步增加其靶向性。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的之一是提供阿糖胞苷系列偶聯(lián)物及其制備方法；本發(fā)明的目的之二是提供一種抗腫瘤靶向阿糖胞苷系列偶聯(lián)物藥質(zhì)體及其制備方法；本發(fā)明的目的之三是將上述的抗腫瘤靶向阿糖胞苷系列偶聯(lián)物及其藥質(zhì)體在惡性腫瘤治療中的用途。本發(fā)明上述目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的本發(fā)明的阿糖胞苷系列偶聯(lián)物其分子式為CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp-Val-Ara-C;或CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp(-Val-Ara-C)-OH。其中n二7，9，11，13或15，Arg-Gly-Asp-Val為精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-纈氨酸四肽序列，Ara-C為阿糖胞苷。本發(fā)明的阿糖胞苷系列偶聯(lián)物，其制備方法，步驟如下首先合成CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp-OH和HC1H-Val-Ara-C，兩者縮合得到CnH2n+lcO-Arg-Gly-Asp-Val-Ara-C;禾口CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp(-Val-Ara-C)-OH的混合物，進一步分離得到純的單一化合物。詳細步驟如下1)將Boc-Arg(N02)-OH與H-Gly-OBzl縮合，得到Boc-Arg(N02)-Gly-OBzl;2)將Boc-Arg(N02)-Gly-OBzl脫除Boc-，得到H-Arg(N02)-Gly-OBzl;3)CnH2n+1COOH與H-Arg(N02)-Gly-OBzl縮合，得到CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-OBzl;4)將CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-OBzl脫除-OBzl，得到CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-OH;5)將CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-OH與H-Asp(OBzl)2縮合，得到CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)2;6)將CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)2脫除-N02、-OBzl，得到CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp-OH;7)將Boc-Val-OH與Ara-C縮合，得到Boc-Val-Ara-C;8)將Boc-V-Ara-C脫除Boc-，得到H-Val-Ara-C;9)將CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp-OH與HC1H-Val-Ara-C縮合，得到CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp-Val-Ara-C，禾PCnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp(Val-Ara-C)-OH(n=7，9，11，13，15)的混合物，通過高壓液相制備色譜進行分離純化，以乙腈和水為流動相，梯度洗脫，紫外檢測，不同保留時間接收上述兩種組分可得到純的單一化合物。優(yōu)選的步驟如下1)以無水DMF和無水THF作溶劑，冰浴，在DCC、HOBt和NMM存在下將Boc-Arg(N02)-OH與H-Gly-OBzl縮合，得到Boc-Arg(N02)-Gly-OBzl;2)將Boc-Arg(N02)-Gly-OBzl在4NHCl-EtoAc溶液中脫除Boc-，得到H-Arg(N02)-Gly-OBzl;3)以無水DMF和無水THF作溶劑，冰浴，在DCC、HOBt和NMM存在下將脂肪酸與H-Arg(N02)-Gly-OBzl縮合，得到CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-OBzl;4)將CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-OBzl在2麗aOH中脫除-OBzl，冰浴，得到CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-OH;5)以無水DMF和無水THF作溶劑，冰浴，在DCC、HOBt和NMM存在下將CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-OH與H-Asp(OBzl)2縮合，得到CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBZl)2;6)將CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)2在乙醇溶液中，用Pd\C作催化劑，通AH2，脫除-N02、-OBzl，得到CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp-OH;7)以無水DMF作溶劑，在EDC、HOBt和NMM存在下將Boc-Val-OH與Ara-C縮合，得到Boc-Val-Ara-C;8)將Boc-V-Ara-C在4NHCl-EtoAc溶液中脫除Boc-，得到H-Val-Ara-C;9)以無水DMF作溶齊U，在EDC、HOBt禾PNMM存在下將CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp-OH與HC1H-Val-Ara-C縮合，得到CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp-Val-Ara-C禾PCnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp(Val-Ara-C)-OH(n=7，9，11，13，15)的混合物，CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp-Val-Ara-C和CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp(Val-Ara-C)-OH通過高壓液相制備色譜進行分離純化，以乙腈和水為流動相，梯度洗脫，紫外檢測，不同保留時間接收上述兩種組分可得到純的單一化合物。阿糖胞苷系列偶聯(lián)物的合成路線如下Boe-Va，-OH-Ara'C-一Boc-Va卜Ara-C隨:DC/HOBt/.DMF/N關(guān)關(guān),油浴EAH-Va,-Ara-CGly-OBzlBoe-Arg(N02)-OH-_—-.....—Boc-Arg(N02)-Gly-OBzlDCC/HOBt/THF/DMF/NMM/冰浴HC|CH3(CH2>nCOOHH-Arg(NQ2)-Gly-OBzl———-------+EADCC/HOBt/丁HF/DMF/NMM/冰浴CH3OH/2NNaOHCH3(CH2)nGO-Arg《N02)-G,y-OBzl-^_^H-Asf《OBzl》-OBzlCH3(CH2)nCO-Arg(N02)-Gly-OH-腳PdIGCH3《CH2》nCO-Arg《N02)-Gly-Asp《OBz,)-OBz,—H2H-Val-Ara-CCH3(CH2)nCO，Arg-Gly-Asp-OH-^DCC/HOBt/THF/DMF/N關(guān)關(guān)/常溫CH3《CH2》nCO-Arfl-Gly-Asfj-Val-Ara-Cn=S，810,12,14CH3《CH2，nCO-Arfl-Gly-Asp《Val-Ara-C》-OH本發(fā)明的阿糖胞苷系列偶聯(lián)物，可以作為藥物活性成分，制備成藥物制劑組合物，優(yōu)選的，本發(fā)明的藥物制劑組合物是脂質(zhì)體組合物(藥質(zhì)體)，其制備是將上述阿糖胞苷系列偶聯(lián)物與天然卵磷脂按照薄膜分散法進行制備，既可得到阿糖胞苷偶聯(lián)物藥質(zhì)體；其中，在該靶向藥質(zhì)體中，優(yōu)選的，各組分按照以下質(zhì)量百分比組成天然卵磷脂5-95%，阿糖胞苷偶聯(lián)物5-95%。—種制備抗腫瘤靶向阿糖胞苷偶聯(lián)物藥質(zhì)體的方法，優(yōu)選的，將阿糖胞苷系列偶聯(lián)物與天然卵磷脂用適當?shù)娜軇?如氯仿、二氯乙烷、甲醇等)溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，加入注射用生理鹽水，超聲分散，得具乳光的藥質(zhì)體膠體溶液。經(jīng)檢測，所制備的阿糖胞苷系列偶聯(lián)物藥質(zhì)體膠體溶液中，分散顆粒的粒徑為150-500nm，Zeta電位為-15mV至-30mV。圖1藥質(zhì)體與混懸劑抑瘤率柱狀圖具體實施例方式為了進一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本發(fā)明進行具體描述，不應(yīng)當理解為對本發(fā)明的限制。實例l.Boc-Val-Ara-C的制備將6.5g(30mmmol)Boc-Val-OH，5.76g(40mmol)l-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(HC1'EDC)，2.7g(3mmol)HOBt溶于50ml無水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，室溫下反應(yīng)1小時，將5.6g(20mmo1)阿糖胞苷鹽酸鹽加入反應(yīng)液，于45。C油浴中反應(yīng)24小時。吹干無水DMF，用過量乙醚洗殘留物，蒸干乙醚，乙酸乙酯溶解，用5XNaHC03洗、飽和NaCl洗。濃縮乙酸乙酯層，無水他2804干燥。柱層析分離(展開劑氯仿甲醇=25:1)。得4.42g(90X)標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z)443.2[M+H]+，884.8[2M+H]+;Mp.130.8133.2°C;《=656(cl'MeOH:CHC13=1:1)。實例2.HC1H-Val-Ara-C的制備將4.42g(10mmol)Boc-Val-Ara-C溶解在適量4mol/l氯化氫-乙酸乙酯溶液中，室溫攪拌2小時，TLC(氯仿/甲醇)顯示原料點消失，減壓濃縮除去乙酸乙酯，殘留物反復(fù)加少量乙醚進行減壓濃縮以除去氯化氫氣。最后加少量乙醚將殘留物研磨得3.98g(90%)標題化合物，為白色固體，直接用于下一步反應(yīng)。ESI-MS(m/z)343.l[M+H]+，685.1[2M+H]+;Mp.188.0191.3°C;[《=他,6(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例3.Boc-Arg(N02)-Gly-OBzl的制備將13.4g(42mmol)Boc-Arg(N02)-OH，5.4g(40mmol)N-羥基苯并三氮唑(HOBt)溶于適量無水DMF中。冰浴下再滴入10.7g(46mmo1)二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)的無水DMF溶液，冰浴下攪拌20分鐘，得到反應(yīng)液(I)。冰浴下把8.1g(40mmol)TosOH'Gly-OBzl懸浮于適量無水DMF中，然后加入數(shù)滴N-甲基嗎啉(NMM)，調(diào)pH至7-8，得到反應(yīng)液(II)。冰浴下把反應(yīng)液(I)滴加入反應(yīng)液(Ii;)中，先冰浴下攪拌lh，再室溫攪拌12h，TLC(氯仿/甲醇，10:l)顯示Boc-Gly-OH消失，停止反應(yīng)。濾除二環(huán)己基脲(DCU)，濾液吹去DMF。殘留物用適量乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用5XNaHC03水溶液、飽和NaCl水溶液、5XKHS04水溶液和飽和NaCl水溶液各洗三遍。乙酸乙酯層用無水Na^04干燥、過濾、濾液減壓濃縮至干，得到16.3g(87.4%)粗產(chǎn)品，為無色固體。ESI-MS(m/z)467.1[M+H]+。實例4.HC1H-Arg(N02)-Gly-OBzl的制備將4.66g(10mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl溶解在適量4mol/l氯化氫-乙酸乙酯溶液中，室溫攪拌2小時，TLC(氯仿/甲醇)顯示原料點消失，減壓濃縮除去乙酸乙酯，殘留物反復(fù)加少量乙醚進行減壓濃縮以除去氯化氫氣。最后加少量乙醚將殘留物研磨得4.43g(95%)粗產(chǎn)品，為無色固體，直接用于下一步反應(yīng)。ESI-MS(m/z)367.1[M+H]+，733.1[2M+H]+。實例5.C7H15CO-Arg(N02)-Gly-OBzl的制備將1.71g(11.9mmol)C7H15COOH，1.46g(10.8mmol)N-羥基苯并三氮唑(HOBt)溶于適量無水DMF中。冰浴下再滴入2.89g(14.0mmol)二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)的無水DMF溶液，冰浴下攪拌20分鐘，得到反應(yīng)液(1)。冰浴下把4.35g(10.8mmo1)HC1'H-Arg(NO》-Gly-OBzl懸浮于適量無水DMF中，然后加入數(shù)滴N-甲基嗎啉(NMM)，調(diào)pH至7-8，得到反應(yīng)液(11)。冰浴下把反應(yīng)液(I)滴加入反應(yīng)液(II)中，先冰浴下攪拌lh，再室溫攪拌24h，TLC(氯仿/甲醇，10:l)顯示Boc-Gly-OH消失，停止反應(yīng)。濾除二環(huán)己基脲(DCU)，濾液吹去DMF。殘留物用適量乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用5%NaHC03水溶液、飽和NaCl水溶液、5%KHS04水溶液和飽和NaCl水溶液各洗三遍。乙酸乙酯層用無水Na^04干燥、過濾、濾液減壓濃縮至干，得到4.51g(85X)粗產(chǎn)品，為無色固體。ESI-MS(m/z)515.3[M+Na]+，1007.5[2M+Na]+;Mp.145.018.0°C;Ml0S=15,02(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例6.C9H19CO-Arg(N02)-Gly-OBzl的制備將2.05g(11.9mmol)C9H19COOH，1.46g(10.8mmol)N-羥基苯并三氮唑(HOBt)溶于適量無水DMF中。冰浴下再滴入2.89g(14.0mmol)二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)的無水DMF溶液，冰浴下攪拌20分鐘，得到反應(yīng)液(1)。冰浴下把4.35g(10.8mmo1)HC1'H-Arg(NO》-Gly-OBzl懸浮于適量無水DMF中，然后加入數(shù)滴N-甲基嗎啉(NMM)，調(diào)pH至7-8，得到反應(yīng)液(11)。冰浴下把反應(yīng)液(I)滴加入反應(yīng)液(II)中，先冰浴下攪拌lh，再室溫攪拌24h，TLC(氯仿/甲醇，10:l)顯示Boc-Gly-OH消失，停止反應(yīng)。濾除二環(huán)己基脲(DCU)，濾液吹去DMF。殘留物用適量乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用5%NaHC03水溶液、飽和NaCl水溶液、5%KHS04水溶液和飽和NaCl水溶液各洗三遍。乙酸乙酯層用無水Na^04干燥、過濾、濾液減壓濃縮至干，得到4.49g(88X)粗產(chǎn)品，為無色固體。ESI-MS(m/z)543.3[M+Na]+，1063.9[2M+Na]+;Mp.146.3147.3。C;〖《=17.67(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例7.CnH23CO-Arg(N02)-Gly-OBzl的制備將2.38g(11.9mmol)CnH23COOH，1.46g(10.8mmol)N-羥基苯并三氮唑(HOBt)溶于適量無水DMF中。冰浴下再滴入2.89g(14.0mmol)二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)的無水DMF溶液，冰浴下攪拌20分鐘，得到反應(yīng)液(1)。冰浴下把4.35g(10.8mmo1)HC1'H-Arg(NO》-Gly-OBzl懸浮于適量無水DMF中，然后加入數(shù)滴N-甲基嗎啉(NMM)，調(diào)pH至7-8，得到反應(yīng)液(11)。冰浴下把反應(yīng)液(I)滴加入反應(yīng)液(II)中，先冰浴下攪拌lh，再室溫攪拌24h，TLC(氯仿/甲醇，10:l)顯示Boc-Gly-OH消失，停止反應(yīng)。濾除二環(huán)己基脲(DCU)，濾液吹去DMF。殘留物用適量乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用5%NaHC03水溶液、飽和NaCl水溶液、5%KHS04水溶液和飽和NaCl水溶液各洗三用無水Na^04干燥、過濾、濾液減壓濃縮至干，得到4.91g(91X)粗產(chǎn)品，為無色固體。ESI-MS(m/z)571.3[M+Na]+，1120.0[2M+Na]+;Mp.146.3147.3。C;oC=l4.48(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例8.C13H27CO-Arg(N02)-Gly-OBzl的制備將2.71g(11.9mmol)C13H27COOH，1.46g(10.8mmol)N-羥基苯并三氮唑(HOBt)溶于適量無水DMF中。冰浴下再滴入2.89g(14.0mmol)二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)的無水DMF溶液，冰浴下攪拌20分鐘，得到反應(yīng)液(1)。冰浴下把4.35g(10.8mmo1)HC1'H-Arg(NO》-Gly-OBzl懸浮于適量無水DMF中，然后加入數(shù)滴N-甲基嗎啉(NMM)，調(diào)pH至7-8，得到反應(yīng)液(11)。冰浴下把反應(yīng)液(I)滴加入反應(yīng)液(II)中，先冰浴下攪拌lh，再室溫攪拌24h，TLC(氯仿/甲醇，10:l)顯示Boc-Gly-OH消失，停止反應(yīng)。濾除二環(huán)己基脲(DCU)，濾液吹去DMF。殘留物用適量乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用5%NaHC03水溶液、飽和NaCl水溶液、5%KHS04水溶液和飽和NaCl水溶液各洗三遍。乙酸乙酯層用無水Na^04干燥、過濾、濾液減壓濃縮至干，得到5.48g(94X)粗產(chǎn)品，為無色固體。ESI-MS(m/z)599.3[M+Na]+，1176.0[2M+Na]+;Mp.151.0152.1°C;問^^19,76(d，MeOH:CHC13=1:1)。實例9.C15H31CO-Arg(N02)-Gly-OBzl的制備將3.05g(11.9mmol)C15H31COOH，1.46g(10.8mmol)N-羥基苯并三氮唑(HOBt)溶于適量無水DMF中。冰浴下再滴入2.89g(14.0mmol)二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)的無水DMF溶液，冰浴下攪拌20分鐘，得到反應(yīng)液(1)。冰浴下把4.35g(10.8mmo1)HC1'H-Arg(NO》-Gly-OBzl懸浮于適量無水DMF中，然后加入數(shù)滴N-甲基嗎啉(NMM)，調(diào)pH至7-8，得到反應(yīng)液(11)。冰浴下把反應(yīng)液(I)滴加入反應(yīng)液(II)中，先冰浴下攪拌lh，再室溫攪拌24h，TLC(氯仿/甲醇，10:l)顯示Boc-Gly-OH消失，停止反應(yīng)。濾除二環(huán)己基脲(DCU)，濾液吹去DMF。殘留物用適量乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用5%NaHC03水溶液、飽和NaCl水溶液、5%KHS04水溶液和飽和NaCl水溶液各洗三遍。乙酸乙酯層用無水Na^04干燥、過濾、濾液減壓濃縮至干，得到5.87g(90X)粗產(chǎn)品，為無色固體。ESI-MS(m/z)627.4[M+Na]+，1232.0[2M+Na]+;Mp.152.7154.2。C;3,01(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例10.C7H15CO-Arg(NO2)-Gly-OH的制備將2.46g(5mmol)C7H15CO-Arg(N02)-Gly-OBzl溶于10ml甲醇。冰浴下將得到的溶液用NaOH(2N)水溶液調(diào)pH至12并攪拌2h，TLC(氯仿/甲醇，10:1)顯示C8H16CO-Arg(N02)-Gly-OBzl消失。反應(yīng)混合物用飽和KHS04水溶液調(diào)pH至7，減壓濃縮除甲醇。殘留物用飽和KHS04水溶液調(diào)pH至2，過濾不溶物。得到1.81g(90.0%)粗產(chǎn)品，為無色固體。ESI-MS(m/z)401.2[M-H]-，803.4[2M-H]—;Mp.108.5111.3°C;《=14,3(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例ll.C9H19CO-Arg(N02)-Gly-OH的制備將2.60g(5mmol)C9H19CO-Arg(NO2)-Gly-OBzl溶于10ml甲醇。冰浴下將得到的溶液用NaOH(2N)水溶液調(diào)pH至12并攪拌2h，TLC(氯仿/甲醇，10:1)顯示C8H16CO-Arg(N02)-Gly-OBzl消失。反應(yīng)混合物用飽和KHS04水溶液調(diào)pH至7，減壓濃縮除甲醇。殘留物用飽和KHS04水溶液調(diào)pH至2，過濾不溶物。得到1.98§(92.0%)粗產(chǎn)品，為無色固體。ESI-MS(m/z)453.2[M+Na]+，883.4[2M+Na]+;Mp.159.4160.7°C;==.4,36(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例12.CnH23CO-Arg(N02)-Gly-OH的制備將2.74g(5mmol)CnH23CO-Arg(N02)-Gly-OBzl溶于10ml甲醇。冰浴下將得到的溶液用NaOH(2N)水溶液調(diào)pH至12并攪拌2h，TLC(氯仿/甲醇，10:1)顯示C8H16CO-Arg(N02)-Gly-OBzl消失。反應(yīng)混合物用飽和KHS04水溶液調(diào)pH至7，減壓濃縮除甲醇。殘留物用飽和KHS04水溶液調(diào)pH至2，過濾不溶物。得到1.94§(84.6%)粗產(chǎn)品，為無色固體。ESI-MS(m/z)481.3[M+Na]+，939.4[2M+Na]+;Mp.164.3166.6°C;〖《f:=—9'2l(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例13.C13H27CO-Arg(N02)-Gly-OH的制備將2.88g(5mmol)C13H27CO-Arg(N02)-Gly-OBzl溶于10ml甲醇。冰浴下將得到的溶液用NaOH(2N)水溶液調(diào)pH至12并攪拌2h，TLC(氯仿/甲醇，10:1)顯示C8H16CO-Arg(N02)-Gly-OBzl消失。反應(yīng)混合物用飽和KHS04水溶液調(diào)pH至7，減壓濃縮除甲醇。殘留物用飽和KHS04水溶液調(diào)pH至2，過濾不溶物。得到1.94g(89%)粗產(chǎn)品，為無色固體。ESI-MS(m/z)509.2[M+Na]+，995.8[2M+Na]+;Mp.164.1165.8°C;6,55(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例14.C15H31CO-Arg(N02)-Gly-OH的制備將3.02g(5mmol)C15H31CO-Arg(NO2)-Gly-OBzl溶于10ml甲醇。冰浴下將得到的溶液用NaOH(2N)水溶液調(diào)pH至12并攪拌2h，TLC(氯仿/甲醇，10:1)顯示C8H16CO-Arg(N02)-Gly-OBzl消失。反應(yīng)混合物用飽和KHS04水溶液調(diào)pH至7，減壓濃縮除甲醇。殘留物用飽和KHS04水溶液調(diào)pH至2，過濾不溶物。得到2.24g(87X)粗產(chǎn)品，為無色固體。ESI-MS(m/z)537.3[M+Na]+，1051.7[2M+Na]+;Mp.163.7165.8°C;M:=_9,17(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例15.C7H15CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)2的制備將2.11g(5.25mmol)C7H15CO-Arg(N02)-Gly-OH，0.675g(5mmol)N-羥基苯并三氮唑(HOBt)溶于適量無水DMF中。冰浴下再滴入1.34g(6.5mmo1)二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)的無水DMF溶液，冰浴下攪拌20分鐘，得到反應(yīng)液(1)。冰浴下把2.43g(5mmo1)HClH-Asp(OBzl)2懸浮于適量無水DMF中，然后加入數(shù)滴N-甲基嗎啉(NMM)，調(diào)pH至7-8，得到反應(yīng)液(II)。冰浴下把反應(yīng)液(I)滴加入反應(yīng)液(II)中，先冰浴下攪拌lh，再室溫攪拌24h，TLC(氯仿/甲醇，10:1)顯示HCl'H-Asp(OBzl)2消失，停止反應(yīng)。濾除二環(huán)己基脲(DCU)，濾液吹去DMF。殘留物用適量乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用5%NaHC03水溶液、飽和NaCl水溶液、5%KHS04水溶液和飽和NaCl水溶液各洗三遍。乙酸乙酯層用無水Na^04干燥、柱層析分離(展開劑氯仿甲醇=30:1)。得到2.09g(93X)無色固體。ESI-MS(m/z)698.3[M+H]+，720.3[M+Na]+;Mp.81.683.8°C;《=_0.47(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例16.C9H19CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)2的制備將2.26g(5.25mmol)C9H19CO-Arg(N02)-Gly-OH，0.675g(5mmol)N-羥基苯并三氮唑(HOBt)溶于適量無水DMF中。冰浴下再滴入1.34g(6.5mmo1)二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)的無水DMF溶液，冰浴下攪拌20分鐘，得到反應(yīng)液(1)。冰浴下把2.43g(5mmo1)HClH-Asp(OBzl)2懸浮于適量無水DMF中，然后加入數(shù)滴N-甲基嗎啉(NMM)，調(diào)pH至7-8，得到反應(yīng)液(II)。冰浴下把反應(yīng)液(I)滴加入反應(yīng)液(II)中，先冰浴下攪拌lh，再室溫攪拌24h，TLC(氯仿/甲醇，10:1)顯示HCl'H-Asp(OBzl)2消失，停止反應(yīng)。濾除二環(huán)己基脲(DCU)，濾液吹去DMF。殘留物用適量乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用5%NaHC03水溶液、飽和NaCl水溶液、5%KHS04水溶液和飽和NaCl水溶液各洗三遍。乙酸乙酯層用無水Na^04干燥、柱層析分離(展開劑氯仿甲醇=30:1)。得到2.39g(95X)無色固體。ESI-MS(m/z)726.4[M+H]+，748.5[M+Na]+;Mp.90.491.9°C;《=■5.83(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例17.CnH23CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)2的制備將2.40g(5.25mmol)CuH23CO-Arg(NO2)-Gly-OH，0.675g(5mmol)N-羥基苯并三氮唑(HOBt)溶于適量無水DMF中。冰浴下再滴入1.34g(6.5mmo1)二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)的無水DMF溶液，冰浴下攪拌20分鐘，得到反應(yīng)液(I)。冰浴下把2.43g(5mmo1)HClH-Asp(OBzl)2懸浮于適量無水DMF中，然后加入數(shù)滴N-甲基嗎啉(NMM)，調(diào)pH至7-8，得到反應(yīng)液(II)。冰浴下把反應(yīng)液(I)滴加入反應(yīng)液(II)中，先冰浴下攪拌lh，再室溫攪拌24h，TLC(氯仿/甲醇，10:1)顯示HCl'H-Asp(OBzl)2消失，停止反應(yīng)。濾除二環(huán)己基脲(DCU)，濾液吹去DMF。殘留物用適量乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用5%NaHC03水溶液、飽和NaCl水溶液、5%KHS04水溶液和飽和NaCl水溶液各洗三遍。乙酸乙酯層用無水Na^04干燥、柱層析分離(展開劑氯仿甲醇=30:1)。得到2.44g(91X)無色固體。ESI-MS(m/z)754.4[M+H]+，776.4[M+Na]+;Mp.60.263.0°C;{《=—0,5"cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例18.C13H27CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)2的制備將2.55g(5.25mmol)C13H27CO-Arg(N02)-Gly-OH，0.675g(5mmol)N-羥基苯并三氮唑(HOBt)溶于適量無水DMF中。冰浴下再滴入1.34g(6.5mmo1)二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)的無水DMF溶液，冰浴下攪拌20分鐘，得到反應(yīng)液(I)。冰浴下把2.43g(5mmo1)HClH-Asp(OBzl)2懸浮于適量無水DMF中，然后加入數(shù)滴N-甲基嗎啉(NMM)，調(diào)pH至7-8，得到反應(yīng)液(II)。冰浴下把反應(yīng)液(I)滴加入反應(yīng)液(II)中，先冰浴下攪拌lh，再室溫攪拌24h，TLC(氯仿/甲醇，10:1)顯示HCl'H-Asp(OBzl)2消失，停止反應(yīng)。濾除二環(huán)己基脲(DCU)，濾液吹去DMF。殘留物用適量乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用5%NaHC03水溶液、飽和NaCl水溶液、5%KHS04水溶液和飽和NaCl水溶液各洗三遍。乙酸乙酯層用無水Na^04干燥、柱層析分離(展開劑氯仿甲醇=30:1)。得到2.73g(92X)無色固體。ESI-MS(m/z)782.3[M+H]+，804.5[M+Na]+;Mp.58.061.2°C;[《=—0'27(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例19.C15H31CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)2的制備將2.70g(5.25mmol)C15H31CO-Arg(NO2)-Gly-OH，0.675g(5mmol)N-羥基苯并三氮唑(HOBt)溶于適量無水DMF中。冰浴下再滴入1.34g(6.5mmo1)二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)的無水DMF溶液，冰浴下攪拌20分鐘，得到反應(yīng)液(I)。冰浴下把2.43g(5mmo1)HClH-Asp(OBzl)2懸浮于適量無水DMF中，然后加入數(shù)滴N-甲基嗎啉(NMM)，調(diào)pH至7-8，得到反應(yīng)液(II)。冰浴下把反應(yīng)液(I)滴加入反應(yīng)液(II)中，先冰浴下攪拌lh，再室溫攪拌24h，TLC(氯仿/甲醇，10:1)顯示HCl'H-Asp(OBzl》消失，停止反應(yīng)。濾除二環(huán)己基脲(DCU)，濾液吹去DMF。殘留物用適量乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用5%NaHC03水溶液、飽和NaCl水溶液、5%KHS04水溶液和飽和NaCl水溶液各洗三遍。乙酸乙酯層用無水Na^04干燥、柱層析分離(展開劑氯仿甲醇=30:1)。得到2.42g(92X)無色固體。ESI-MS(m/z)810.5[M+H]+，832.5[M+Na]+;Mp.56.269.3°C;《=_4.10(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例20.C7H15CO-Arg-Gly-Asp-OH的制備將0.70g(lmmol)C7H15CO-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)2置于100ml茄形瓶中、用乙醇溶解、加0.14gPd/C(20X)、通H2(0.02Mba)，室溫攪拌至原料點消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干，殘留物反復(fù)用石油醚研磨，得0.33g(90X)標題化合物，為無色固體粉末。ESI-MS(m/z)473.2[M+H]+;Mp.123.5125.3°C;《=s31(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例21.C9H21CO-Arg-Gly-Asp-OH的制備將0..73g(lmmol)Q。H2。CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBz1)2置于100ml茄形瓶中、用甲醇溶解、加0.14gPd/C(20X)、通H2(0.02Mba)，室溫攪拌至原料點消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干，殘留物反復(fù)用石油醚研磨，得0.40g(95X)標題化合物，為無色固體粉末。ESI-MS(m/z)501.2[M+H]+;Mp.117.3120.0°C;M:=g,3l(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例22.CnH23CO-Arg-Gly-Asp-OH的制備將0.76g(lmmol)CnH23CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBz1)2置于100ml茄形瓶中、用甲醇溶解、加0.14gPd/C(20X)、通H2(0.02Mba)，室溫攪拌至原料點消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干，殘留物反復(fù)用石油醚研磨，得0.41g(97X)標題化合物，為無色固體粉末。ESI-MS(m/z)529.3[M+H]+;Mp.114.1116.2°C;M:=io.9(cl，MeOH:CHC13=i:i)。實例23.C13H27CO-Arg-Gly-Asp-OH的制備將0.79g(lmmol)C13H27CO-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)2置于100ml茄形瓶中、用甲醇溶解、加0.14gPd/C(20X)、通H2(0.02Mba)，室溫攪拌至原料點消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干，殘留物反復(fù)用石油醚研磨，得0.38g(95X)標題化合物，為無色固體粉末。ESI-MS(m/z)557.3[M+H]+;Mp.105.5107.3°C;a^:3.1(cl，MeOH:CHC13=i:i)。實例24.C15H31CO-Arg-Gly-Asp-OH的制備將0.82g(lmmol)C15H31CO-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)2置于100ml茄形瓶中、用甲醇溶解、加0.14gPd/C(20X)、通H2(0.02Mba)，室溫攪拌至原料點消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干，殘留物反復(fù)用石油醚研磨，得0.38g(96X)標題化合物，為無色固體粉末。ESI-MS(m/z)585.4[M+H]+;Mp.130.2133.7°C;M:=3,g(cl，MeOH:CHC13=i:i)。實例25.C7H15CO-Arg-Gly-Asp-Val-Ara-C(C8-l)的制備將1.42g(3mmol)C7H15CO-Arg-Gly-Asp-OH，0.87g(4.5mmol)l-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(HC1EDC)，0.41g(3mmol)HOBt溶于50ml無水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，室溫下反應(yīng)1小時，將1.48g(3.9mmol)HClH-Val-Ara-C加入反應(yīng)液，于45t:油浴中反應(yīng)24小時。吹干無水DMF。用甲醇溶解殘留物，并用制備型液相儀將Qrl和CV2進行分離。分離以乙腈和水為流動相，梯度洗脫，紫外檢測，不同保留時間接收上述兩種組分可得到純的單一化合物。得到261mg(92X)C8-1。ESI-MS(m/z)797.9[M+H]+820.4[M+Na]+;Mp.169.8171.3°C;《=45.5(cl'MeOH:CHC13=1:1)。實例26.C7H15CO-Arg-Gly-Asp(-Val-Ara-C)-OH(C8-2)的制備用制備型液相儀純化Q-1和C8-2的混和物時，可同時得到119mg(93%)C8-2。ESI-MS(m/z)797.7[M+H]+820.1[M+Na]+;Mp.162.1163.0°C;W:=54.3(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例27.QHi9CO-Arg-Gly-Asp-Val-Ara-C(Ci。-l)的制備將1.5g(3mmol)C9H19CO-Arg-Gly-Asp-OH，0.87g(4.5mmol)l-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(HC1EDC)，0.41g(3mmol)HOBt溶于50ml無水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，室溫下反應(yīng)1小時，將1.48g(3.9mmol)HClH-Val-Ara-C加入反應(yīng)液，于45t:油浴中反應(yīng)24小時。吹干無水DMF。用甲醇溶解殘留物，并用制備型液相儀將d。-l和Q。-2進行分離。分離以乙腈和水為流動相，梯度洗脫，紫外檢測，不同保留時間接收上述兩種組分可得到純的單一化合物。得到248mg(97%)d。-l。ESI-MS(m/z)825.7[M+H]+847.7[M+Na]+;Mp.166.7169.3°C;W==52.9(cl'MeOH:CHC13=1:1)。實例28.C9H19CO-Arg-Gly-Asp(-Val-Ara-C)-OH(C10-2)的制備用制備型液相儀純化d。-l和d。-2的混和物時，可同時得到124mg(97%)C10-2。ESI-MS(m/z)825.8[M+H]+847.8[M+Na]+;Mp.164.2167.0°C;[《=41.5(cl'MeOH:CHC13=1:1)。實例29.CnH23CO-Arg-Gly-Asp-Val-Ara-C(C12-l)的制備將1.58g(3mmol)CnH23CO-Arg-Gly-Asp-OH，0.87g(4.5mmol)l-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(HC1EDC)，0.41g(3mmol)HOBt溶于50ml無水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，室溫下反應(yīng)1小時，將1.48g(3.9mmol)HClH-Val-Ara-C加入反應(yīng)液，于45t:油浴中反應(yīng)24小時。吹干無水DMF。用甲醇溶解殘留物，并用制備型液相儀將C『1和C『2進行分離。分離以乙腈和水為流動相，梯度洗脫，紫外檢測，不同保留時間接收上述兩種組分可得到純的單一化合物。得到358mg(98%)C12-1。ESI-MS(m/z)854.0[M+H]+876.0[M+Na]+;Mp.164.5166.3°C;[《=63.89(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例30.CnH23CO-Arg-Gly-Asp(-Val-Ara-C)-OH(C12-2)的制備用制備型液相儀純化C『1和C12-2的混和物時，可同時得到179mg(92%)C12-2。ESI-MS(m/z)854.2[M+H]+876.2[M+Na]+;Mp.162.4163.8°C;=463(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例31.C13H27CO-Arg-Gly-Asp-Val-Ara-C(C14-l)的制備將1.66g(3mmol)C13H27CO-Arg-Gly-Asp-OH，0.87g(4.5mmol)l-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(HC1EDC)，0.41g(3mmol)HOBt溶于50ml無水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，室溫下反應(yīng)1小時，將1.48g(3.9mmol)HClH-Val-Ara-C加入反應(yīng)液，于45t:油浴中反應(yīng)24小時。吹干無水DMF。用甲醇溶解殘留物，并用制備型液相儀將C『1和C『2進行分離。分離以乙腈和水為流動相，梯度洗脫，紫外檢測，不同保留時間接收上述兩種組分可得到純的單一化合物。得到290mg(90%)C14-1。ESI-MS(m/z)881.6[M+H]+903.6[M+Na]+;Mp.162.8164.5°C;[《二76"(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例32.C13H27CO-Arg-Gly-Asp(-Val-Ara-C)-OH(C14-2)的制備用制備型液相儀純化C14-l和C14-2的混和物時，可同時得到106mg(94%)C14-2。ESI-MS(m/z)881.8[M+H]+904.0[M+Na]+;Mp.160.1161.7°C;《=54.3(cl'MeOH:CHC13=1:1)。實例33.C15H31CO-Arg-Gly-Asp-Val-Ara-C(C16-l)的制備將1.74g(3mmol)C15H31CO-Arg-Gly-Asp-OH，0.87g(4.5mmol)l-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(HCPEDC)，0.41g(3mmol)HOBt溶于50ml無水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，室溫下反應(yīng)1小時，將1.48g(3.9mmol)HClH-Val-Ara-C加入反應(yīng)液，于45t:油浴中反應(yīng)24小時。吹干無水DMF。用甲醇溶解殘留物，并用制備型液相儀將Qe-l和Qe-2進行分離。分離以乙腈和水為流動相，梯度洗脫，紫外檢測，不同保留時間接收上述兩種組分可得到純的單一化合物。得到109mg(91%)C16-lESI-MS(m/z)909.9[M+H]+931.2[M+Na]+;Mp.159.8162.0°C;[:=52.1(cl，MeOH:CHC13=1:1)。實例34.C15H31CO-Arg-Gly-Asp(-Val-Ara-C)-OH(C16-2)的制備用制備型液相儀純化C16-1和C16-2的混和物時，可同時得到82mg(97%)C16-2。ESI-MS(m/z)909.6[M+H]+931.2[M+Na]+;Mp.156.4158.8°C;[《=60.3(d'MeOH:CHC13=1:1)。實例35.阿糖胞苷偶聯(lián)物對黑色素瘤A375細胞生長的抑制作用藥物配制將各阿糖胞苷偶聯(lián)物溶于含4XDMSO的PBS磷酸鹽緩沖液。其中，C8-l、d。-l、C12-l、C14-l、C16-l、阿糖胞苷(Ara-C)制成5X10-4mol/l，lXl()-4mol/l，5Xl()-5mol/l，2X10-5mol/l，10-5mol/l，5X10-6mol/l六個濃度；C8-2、C10-2、C14-2制成7.1X10-4mol/1，2.8X10-4mol/l，1.4X10-4mol/l，7.1X10-5mol/l，2.8X10-5mol/l，1.4X10-5mol/l六個濃度；C12-2、C16-2制成8X10-4mol/l，3.2Xl()-4mol/l，1.6Xl()-4mol/l，8Xl()-5mol/l，3.2X10-5mol/l，1.6X10-5mol/l六個濃度。本組的陰性對照是含4%DMSO的PBS磷酸鹽緩沖液。實驗方法將A375細胞制成lX10Vml細胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔100iU，37°C5%CC^孵育箱中培養(yǎng)24h。實驗設(shè)不含腫瘤細胞組、陰性對照組、陽性對照組及各種藥物試驗組。加入上述藥物10iU，每個濃度重復(fù)3孔，培養(yǎng)48h，每孔加5mg/ml的MTT25iU，培養(yǎng)4h。將96孔板棄去上液，每孔加DMSO100y1，振蕩器振搖10min，自動酶標儀測定光密度OD值(測量波長570nm，參比波長630nm)。A375細胞存活率=[(抗癌藥物組OD值-不含細胞組OD值)/(細胞對照組OD值-不含細胞組OD值)]X100%并計算半數(shù)抑制濃度(IC5。)。結(jié)果見表l表1阿糖胞苷偶聯(lián)物與Ara-C對黑色素瘤細胞株A375作用的IC,—^"^化合物^^~^^^^^K、。(p肌肌》c8-1■^~"^^^^^^~^4丄T):"9.—Q-20.563±0,105C『10,357±0.04240.271±0,02680J95±0,137〔::i2-20.128±0,00376L268±0.528C|4-20S64±0,461Ci。-10.73±0,229Cif,-20.087UO.Cn27Ara扁C5.532±0.717在細胞水平上來看，在對阿糖胞苷進行結(jié)構(gòu)改造后，各阿糖胞苷系列偶聯(lián)物具有抑制腫瘤細胞生長的活性，并且優(yōu)于阿糖胞苷本身。實例36.C7H15CO-Arg-Gly-Asp-Val-Ara-C(C8-l)藥質(zhì)體的制備薄膜分散法制備，取磷脂(50%，m/m)及Q-l(50%，m/m)至圓底燒瓶中以氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，在瓶壁形成一層干燥透明的質(zhì)膜，加入注射用生理鹽水，3(TC超聲分散20min。得具乳光的脂質(zhì)體溶液，粒徑150500nm，Zeta-Potential-15-30mV。實例37.C7H15CO-Arg-Gly-Asp(-Val-Ara-C)-OH(C8-2)藥質(zhì)體的制備薄膜分散法制備，取磷脂(50%，m/m)及Q-2(50%，m/m)至圓底燒瓶中以氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，在瓶壁形成一層干燥透明的質(zhì)膜，加入注射用生理鹽水，3(TC超聲分散20min。得具乳光的脂質(zhì)體溶液，粒徑150500nm，Zeta-Potential-15-30mV。實例38.QHi9CO-Arg-Gly-Asp-Val-Ara-C(Ci。-l)藥質(zhì)體的制備薄膜分散法制備，取磷脂(50%，m/m)及d。-l(50X，m/m)至圓底燒瓶中以氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，在瓶壁形成一層干燥透明的質(zhì)膜，加入注射用生理鹽水，3(TC超聲分散20min。得具乳光的脂質(zhì)體溶液，粒徑150500nm，Zeta-Potential-15-30mV。實例39.QHi9CO-Arg-Gly-Asp(-Val-Ara-C)-OH(d。-2)藥質(zhì)體的制備薄膜分散法制備，取磷脂(50%，m/m)及d。-2(50X，m/m)至圓底燒瓶中以氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，在瓶壁形成一層干燥透明的質(zhì)膜，加入注射用生理鹽水，3(TC超聲分散20min。得具乳光的脂質(zhì)體溶液，粒徑150500nm，Zeta-Potential-15-30mV。實例40.CnH23CO-Arg-Gly-Asp-Val-Ara-C(C『1)藥質(zhì)體的制備薄膜分散法制備，取磷脂(50%，m/m)及CVl(50X，m/m)至圓底燒瓶中以氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，在瓶壁形成一層干燥透明的質(zhì)膜，加入注射用生理鹽水，3(TC超聲分散20min。得具乳光的脂質(zhì)體溶液，粒徑150500nm，Zeta-Potential-15-30mV。實例41.CnH23CO-Arg-Gly-Asp(-Val-Ara-C)-OH(d2-2)藥質(zhì)體的制備薄膜分散法制備，取磷脂(50%，m/m)及CV2(50X，m/m)至圓底燒瓶中以氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，在瓶壁形成一層干燥透明的質(zhì)膜，加入注射用生理鹽水，3(TC超聲分散20min。得具乳光的脂質(zhì)體溶液，粒徑150500nm，Zeta-Potential-15-30mV。實例42.C13H27CO-Arg-Gly-Asp-Val-Ara-C(C14-l)藥質(zhì)體的制備薄膜分散法制備，取磷脂(50%，m/m)及CV1(50^，m/m)至圓底燒瓶中以氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，在瓶壁形成一層干燥透明的質(zhì)膜，加入注射用生理鹽水，3(TC超聲分散20min。得具乳光的脂質(zhì)體溶液，粒徑150500nm，Zeta-Potential-15-30mV。實例43.C13H27CO-Arg-Gly-Asp(-Val-Ara-C)-OH(C14-2)藥質(zhì)體的制備薄膜分散法制備，取磷脂(50%，m/m)及CV2(50^，m/m)至圓底燒瓶中以氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，在瓶壁形成一層干燥透明的質(zhì)膜，加入注射用生理鹽水，3(TC超聲分散20min。得具乳光的脂質(zhì)體溶液，粒徑150500nm，Zeta-Potential-15-30mV。實例44.C15H31CO-Arg-Gly-Asp-Val-Ara-C(C16-l)藥質(zhì)體的制備薄膜分散法制備，取磷脂(50%，m/m)及CVl(50X，m/m)至圓底燒瓶中以氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，在瓶壁形成一層干燥透明的質(zhì)膜，加入注射用生理鹽水，3(TC超聲分散20min。得具乳光的脂質(zhì)體溶液，粒徑150500nm，Zeta-Potential-15-30mV。實例45.C15H31CO-Arg-Gly-Asp(-Val-Ara-C)-OH(C16-2)藥質(zhì)體的制備薄膜分散法制備，取磷脂(50%，m/m)及CV2(50X，m/m)至圓底燒瓶中以氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，在瓶壁形成一層干燥透明的質(zhì)膜，加入注射用生理鹽水，3(TC超聲分散20min。得具乳光的脂質(zhì)體溶液，粒徑150500nm，Zeta-Potential-15-30mV。實例46.阿糖胞苷偶聯(lián)物藥質(zhì)體對S180腹水瘤小鼠的治療作用取腹腔接種S，腹水瘤第八天的昆明種小鼠一只，脫頸椎處死，用75%酒精消毒后置于超凈臺內(nèi)，用鑷子夾起腹部中線偏右的皮膚并用小剪刀剪一小口至可見乳白色腹水流出。將吸管由開口處輕輕插入腹腔吸出腹水。吸得的腹水加到裝有約3ml滅菌生理鹽水的15ml的離心管中，使體積增至約10ml。用吸管輕輕吹氣，使腹水與生理鹽水混勻。試管加蓋，1000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。棄去上清液后，加9ml滅菌生理鹽水，用吸管輕輕吹氣，使瘤細胞均勻浮起，試管加蓋，1000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，棄去上清液。試管底部有的乳白色的膠狀物。往試管底部的乳白色膠狀物中加9ml滅菌生理鹽水，用吸管輕輕吹氣，使瘤細胞均勻浮起。取100iU該懸浮液加至9.9ml滅菌生理鹽水中，混勻，得100倍稀釋液，混勻，加蓋，放入冰中待用。取100ii1上述瘤細胞稀釋液置入Eppendoff小管中，加100iU臺盼蘭染液，混勻。取少許該混勻液加至計數(shù)板的計數(shù)池內(nèi)，于顯微鏡下計算4個大格中被染上藍色的存活瘤細胞的個數(shù)。將原液中的存活瘤細胞稀釋成5.0X106個/ml，用于接種。用2%碘酒棉球和75%酒精棉球在小鼠右側(cè)腋下消毒，并注入0.2ml瘤細胞液，緩緩抽出針頭。按此方法給每批ICR種小鼠接種，隨機分組，放入動物室飼養(yǎng)。藥物配制本實驗設(shè)藥物混懸劑和藥質(zhì)體兩種劑型。藥質(zhì)體治療組為各阿糖胞苷偶聯(lián)物藥質(zhì)體，陽性對照組為含有等摩爾量阿糖胞苷的脂質(zhì)體，以及C『Val-Ara-C藥質(zhì)體，陰性對照組為空白脂質(zhì)體。藥質(zhì)體的制備將各藥物與磷脂質(zhì)量比為l:l的比例采用薄膜分散法以生理鹽水為分散體系配制成藥質(zhì)體溶液。混懸劑治療組為各化合物的CMC-Na混懸液，陽性對照為阿糖胞苷的CMC-Na溶液，陰性對照為CMC-Na溶液。藥物混懸液制備稱取藥物并研碎，加入兩滴吐溫80潤濕，用0.5%CMC-Na制成混懸液。各組藥物以3.58mmol/L等摩爾濃度配制。實驗方法將右側(cè)腋下接種有腹水瘤的小鼠隨機分組，每組8只，共25組。各組小鼠正常飼養(yǎng)，從接種后24小時開始給藥，每隔1天一次，共4次。每次尾靜脈注射上述藥物0.2ml。8天后將各組荷瘤小鼠處死，解剖，取瘤。并稱體重和瘤重，按抑瘤率=[(陰性對照組平均瘤重-治療組平均瘤重y陰性對照組平均瘤重]X100%計算抑瘤率。獲得的數(shù)據(jù)以(X±SDg)表示，組間用雙樣本等方差的t檢驗。取出處死的小鼠的腫瘤組織，用生理鹽水洗滌后用錫紙包好放入-S(TC冰箱中，取材、切片、HE染色，將制成的病理切片置顯微鏡下觀察，照相。結(jié)果見表2和表3表2.各藥質(zhì)體組對荷肉瘤S18。小鼠的治療作用藥質(zhì)體麵(X柳g)抑瘤率(％)Cg-RGDV-Ara-C-10.4651±0.2428*56,8(■rK(H)V-Ara(-20.4978±0.1406'53,8(.、,，〖".":>、■■.-Ara(-10.3741±0,2049，*65.3(.:.,-K(—;DV-Ara-(..-20.3836±0,1037*'*'&64.4(..V-R(..'r)V-八m-(:'-I0,3875±0,2040"—&64(:.,,R(.,DV-,.、t.a-(-'-20.4145處2154*'*'&61.5C!4-RGDV-Ara-C-10.3645逸1285*"66.1C14-RGDV-Ara-C-20—435&t0.2641"59.5C!6-RGDV-Ara-C-10.4103±0.2030'A&61,9r:"-R(;I)V-Ara-C-20.4鄰4iO,U87"54.5(';:V-Ara-('"O.S()24±0.308525.5Ara-C脂質(zhì)體O.S73±0.25932"空A脂質(zhì)體1.077±0.28580n=8，與空白脂質(zhì)體組瘤重比較，P<0.01;#)與阿糖胞苷藥質(zhì)體組比較，P<0.05;&)與C12-VAra-C藥質(zhì)體組比較，P<0.05表3.混懸劑對荷肉瘤S18。小鼠的治療作用n=8<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>結(jié)果表明在表1中，將各組瘤重進行統(tǒng)計學(xué)分析后可知，各阿糖胞苷偶聯(lián)物藥質(zhì)體均有較好的抗腫瘤活性；各阿糖胞苷偶聯(lián)物藥質(zhì)體與對照Ara-C藥質(zhì)體比較，其中C礦1、C1Q-2、C12-l、C12-2、C14-l、C14-2、C16-l、C16-2組有更好的抗腫瘤活性；各阿糖胞苷偶聯(lián)物藥質(zhì)體與對照C『V-Ara-C藥質(zhì)體比較，其中C1Q-1、Q。-2、C12-l、C12-2、C14-l、Qe-l有更好的抗腫瘤活性。在表2中，將各組瘤重進行統(tǒng)計學(xué)分析后可知，將藥物制成混懸劑，其抗腫瘤活性與空白對照組、阿糖胞苷組和C『V-Ara-C組比較均沒有明顯差異。從圖1可知，各阿糖胞苷偶聯(lián)物藥質(zhì)體的抑瘤率要明顯高于各阿糖胞苷偶聯(lián)物混懸劑的抑瘤率。權(quán)利要求一種阿糖胞苷系列偶聯(lián)物，結(jié)構(gòu)如下CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp-Val-Ara-C；或CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp(-Val-Ara-C)-OH。其中n＝7，9，11，13或15，Arg-Gly-Asp-Val為精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-纈氨酸四肽序列，Ara-C為阿糖胞苷。2.含有權(quán)利要求1的偶聯(lián)物的藥物組合物。3.權(quán)利要求2的藥物組合物，是藥質(zhì)體，其特征在于由權(quán)利要求l所述的阿糖胞苷系列偶聯(lián)物和天然卵磷脂組成。4.按照權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于，阿糖胞苷系列偶聯(lián)物和天然卵磷脂質(zhì)量百分比為阿糖胞苷偶聯(lián)物5-95%，天然卵磷脂5-95%。5.按照權(quán)利要求2所述的藥物組合物，是包括注射劑在內(nèi)的各類藥物制劑。6.權(quán)利要求1所述的阿糖胞苷系列偶聯(lián)物在制備抗腫瘤靶向藥物中的應(yīng)用。7.權(quán)利要求1所述的阿糖胞苷系列偶聯(lián)物的制備方法，步驟如下以CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp-OH和HC1H-Val-Ara-C為原料，將兩者縮合得到CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp-Val-Ara-C;禾口CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp(-Val-Ara-C)-OH的混合物，進一步分離得到純的單一化合物，其中11=7，9，11，13或15，Arg-Gly-Asp-Val為精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-纈氨酸四肽序列，Ara-C為阿糖胞苷。8.權(quán)利要求7所述的制備方法，步驟如下1)將Boc-Arg(N02)-OH與H-Gly-OBzl縮合，得到Boc-Arg(N02)-Gly-OBzl;2)將Boc-Arg(N02)-Gly-OBzl脫除Boc-，得到H-Arg(N02)-Gly-OBzl;3)CnH2n+1COOH與H-Arg(N02)-Gly-OBzl縮合，得到CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-OBzl;4)將CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-OBzl脫除-OBzl，得到CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-OH;5)將CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-OH與H-Asp(OBzl)2縮合，得到CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)2;6)將CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)2脫除-N02、-OBzl，得到CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp-OH;7)將Boc-Val-OH與Ara-C縮合，得到Boc-Val-Ara-C;8)將Boc-V-Ara-C脫除Boc-，得到H-Val-Ara-C;9)將CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp-OH與HC1H-Val-Ara-C縮合，得到CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp-Val-Ara-C，禾PCnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp(Val-Ara-C)-OH(n=7，9，11，13，15)的混合物，通過高壓液相制備色譜進行分離純化，以乙腈和水為流動相，梯度洗脫，紫外檢測，不同保留時間接收上述兩種組分可得到純的單一化合物。9.權(quán)利要求7所述的制備方法，步驟如下1)以無水DMF和無水THF作溶劑，冰浴，在DCC、HOBt和NMM存在下將Boc-Arg(N02)-OH與H-Gly-OBzl縮合，得到Boc-Arg(N02)-Gly-OBzl;2)將Boc-Arg(N02)-Gly-OBzl在4NHCl-EtoAc溶液中脫除Boc-，得到H-Arg(N02)-Gly-OBzl;3)以無水DMF和無水THF作溶劑，冰浴，在DCC、HOBt和NMM存在下將脂肪酸與H-Arg(N02)-Gly-OBzl縮合，得到CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-OBzl;4)將CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-OBzl在2麗aOH中脫除-OBzl，冰浴，得到CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-OH;5)以無水DMF和無水THF作溶劑，冰浴，在DCC、HOBt和NMM存在下將CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-OH與H-Asp(OBzl)2縮合，得到CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBZl)2;6)將CnH2n+1CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)2在乙醇溶液中，用Pd\C作催化劑，通入H2，脫除-N02、-OBzl，得到CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp-OH;7)以無水DMF作溶劑，在EDC、HOBt和NMM存在下將Boc-Val-OH與Ara-C縮合，得到Boc-Val-Ara-C;8)將Boc-V-Ara-C在4NHCl-EtoAc溶液中脫除Boc-，得到H-Val-Ara-C;9)以無水DMF作溶劑，在EDC、HOBt和NMM存在下將CnH2^CO-Arg-Gly-Asp-OH與HC1H-Val-Ara-C縮合，得到CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp-Val-Ara-C和CnH2n+1CO-Arg-Gly-Asp(Val-Ara-C)-OH(n=7，9，11，13，15)的混合物，通過高壓液相制備色譜進行分離純化，以乙腈和水為流動相，梯度洗脫，紫外檢測，不同保留時間接收上述兩種組分可得到純的單一化合物。10.—種權(quán)利要求4所述藥物組合物的制備方法，包括將所述各組分用氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，加入磷酸鹽緩沖液，超聲分散，即得。全文摘要本發(fā)明公開了含RGDV阿糖胞苷偶聯(lián)物藥質(zhì)體制備及作為抗腫瘤劑的應(yīng)用，本發(fā)明將阿糖胞苷的N4位上連接了一個含有RGDV序列的四肽片段，同時，結(jié)合上不同長度的脂肪酸，合成一系列具有兩親性的阿糖胞苷偶聯(lián)物，并將其制成藥質(zhì)體，通過藥質(zhì)體良好的靶向作用以及RGDV作為整合素受體結(jié)合位點的雙重作用，更好將阿糖胞苷靶向到腫瘤部位，本發(fā)明以荷肉瘤S180小鼠為模型評價了阿糖胞苷系列偶聯(lián)物藥質(zhì)體制劑的抗腫瘤活性，結(jié)果顯示阿糖胞苷系列偶聯(lián)物藥質(zhì)體比各對照組具有更優(yōu)異的抗腫瘤活性。文檔編號A61K47/24GK101690823SQ200910210469公開日2010年4月7日申請日期2009年11月3日優(yōu)先權(quán)日2009年11月3日發(fā)明者崔國輝,崔純瑩,王飛申請人:首都醫(yī)科大學(xué)