專利名稱：：環(huán)孢a聚合物膠束組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種用于口服的環(huán)孢A聚合物膠束組合物，該組合物也可用于注射給藥。
背景技術(shù)：
：隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，器官移植也取得了飛快的發(fā)展，然而器官移植會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫抑制反應(yīng)，這就促進(jìn)了免疫抑制劑的發(fā)展?；A(chǔ)研究的不斷深入，對(duì)器官移植臨床發(fā)展起了積極的推動(dòng)作用。人類基因組計(jì)劃研究結(jié)果，將會(huì)對(duì)免疫應(yīng)答的了解提供更完整的信息，并提供干預(yù)的機(jī)會(huì)和方法。蛋白組計(jì)劃的發(fā)展從分子生物學(xué)角度使臨床移植水平得到提高，有可能對(duì)免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)提供更全面的理解。通過對(duì)細(xì)胞因子和其他基因的多態(tài)性研究，有可能確定高或低免疫反應(yīng)者的基因型，為合理應(yīng)用免疫抑制劑提供依據(jù)。環(huán)孢霉素A(CyCl0Sp0rineA,CyA)是含11個(gè)氨基酸的親脂性環(huán)狀多肽，分子量為1203D，是一種強(qiáng)效免疫抑制藥，主要用于器官移植或組織移植后排異反應(yīng)的防治和自身免疫性疾病的治療。由于環(huán)孢素A分子量較大，難溶于水，容易被腸道黏膜和肝臟P4503A4酶系降解，而且CyA是小腸黏膜P-glycoprotein的底物，上述因素致使CyA口服生物利用度較低(10%-60%),口服吸收不規(guī)則。Sandoz公司研制的CyA微乳制劑新山地明(SandimmuneNeoral)口服后遇胃腸道消化液可以自乳化形成粒徑30nm左右的微乳，能夠顯著增加CyA的口服吸收(平均生物利用度較山地明高29%)，降低患者間的個(gè)體差異，減小胃腸道生理因素CyA口服吸收的影響。但其處方中含有較高劑量的表面活性劑CremophorRH40，有報(bào)道稱CremophorRH40具有腎臟毒性，并容易弓I起過敏反應(yīng)。張強(qiáng)等(張強(qiáng)，葉國(guó)慶等.環(huán)孢素A硬脂酸納米球的實(shí)驗(yàn)研究.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1999，34(4)308-312)應(yīng)用熔化-勻化法，采用了硬脂酸、卵磷脂、泊洛沙姆制備了環(huán)孢素A硬脂酸納米粒，粒徑為316.lnm，包封率為88.36%，載藥量為8.98%，以市售新山地明為對(duì)照，大鼠口服的相對(duì)生物利用度為79.77%。但該納米粒的粒徑大，粒徑分布不均勻，制備工藝復(fù)雜，相對(duì)生物利用度較低。戴俊東等(戴俊東，王學(xué)清，等.環(huán)孢素ApH敏感性納米粒的制備與大鼠口服藥代動(dòng)力學(xué).藥學(xué)學(xué)報(bào)，2004，39(12)1023-1027)應(yīng)用改良的乳化-溶劑擴(kuò)散技術(shù)制備了CyAPH敏感性納米粒，制備過程中采用了PluronicF68、Eudragit、無水乙醇為材料。所制備的納米粒粒徑為IOOnm左右，包封率>90%，載藥量約為20%，以市售新山地明為對(duì)照，四種不同Eudragit載體材料所制備的納米粒大鼠灌胃給藥后，均與新山地明生物等效。但此文獻(xiàn)所采用的制備工藝復(fù)雜，而且較高濃度的Eudragit具有細(xì)胞毒性。王學(xué)清等(王學(xué)清，戴俊東，等.環(huán)孢素A-羥丙甲纖維素酚酞酯納米粒的大鼠相對(duì)生物利用度.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2004，39(6)463-466)應(yīng)用溶劑擴(kuò)散法制備了環(huán)孢A羥丙甲纖維素酚酞(HPMCP)納米粒，粒徑為50nm，包封率為97%，以市售新山地明為對(duì)照，大鼠口服的相對(duì)生物利用度為82.3%，119.6%。但該納米粒為高度分散的熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，在貯存過程中易發(fā)生粒子的聚集和沉降。王學(xué)清等(王學(xué)清，張濤，等.環(huán)孢素A聚乳酸納米粒膠體的制備與大鼠生物利用度的測(cè)定.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2004，39(1)68-71)和黎洪珊等(5黎洪珊，趙京玲.環(huán)孢菌素A聚乳酸納米粒膠體的制備和大鼠的口服吸收.中國(guó)藥學(xué)雜志，1999，34(8):532-536)分別應(yīng)用溶劑_非溶劑法制備了環(huán)孢A聚乳酸納米粒，以市售新山地明為對(duì)照，大鼠口服的相對(duì)生物利用度分別為101.6%和112.39%。但該納米粒的制備工藝復(fù)雜，為高度分散的熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，在貯存過程中易發(fā)生粒子的聚集和沉降，而且粒徑很不均勻，會(huì)造成吸收不穩(wěn)定。CN1239432A公開了包含環(huán)孢菌素和陰離子型表面活性劑的固體藥物組合物，采用固體混合技術(shù)制備了包含環(huán)孢菌素和陰離子性表面活性劑的固體藥物組合物，達(dá)到了與新山地明生物等效的效果。但表面活性劑月桂醇硫酸鈉的用量高達(dá)環(huán)孢A的80%，毒性和對(duì)胃腸道的刺激性大。CN1418703A公開了供口服的納米粒給藥系統(tǒng)，采用溶劑-非溶劑法制備了環(huán)孢素A的口服腸溶性納米粒，以市售新山地明為對(duì)照，相對(duì)生物利用度為82.4%,119.6%。但處方和工藝復(fù)雜，不適于工業(yè)化生產(chǎn)。CN1128671A公開了含環(huán)孢菌素的軟膠囊組合物，制備了含有環(huán)孢素A的微乳濃縮液的軟膠囊，與市售新山地明生物等效，解決了新山地明中乙醇易揮發(fā)的問題。但處方復(fù)雜并含有大量的表面活性劑，對(duì)胃腸道具有刺激性。因此，仍需要研制出一種處方和制備工藝簡(jiǎn)單、適于工業(yè)化生產(chǎn)、穩(wěn)定性好、安全性好、生物利用度高的適于口服和注射的環(huán)孢A組合物。嵌段共聚物膠束具有良好的生物相容性，可以通過獨(dú)立的聚合物單元進(jìn)行分子間絡(luò)合，在一定條件下可重新解離為獨(dú)立的嵌段鏈，而且目前研究中采用的共聚物，大多具有生物相容性和生物可降解性，便于從機(jī)體內(nèi)清除；通過內(nèi)核的疏水區(qū)域增溶水難溶性藥物而使其溶解度增加；處于膠束內(nèi)核中的藥物由于被很好地隔離起來，所以不會(huì)與體內(nèi)的生物環(huán)境相互作用，從而延緩了藥物的降解，并減少了不良副反應(yīng)發(fā)生的機(jī)會(huì)；作為口服藥物的載體，可以減少藥物在胃腸道被代謝，增加藥物的吸收；膠束粒徑可以小至幾十納米，可以增加藥物在小腸上皮的黏附延長(zhǎng)藥物的作用時(shí)間，改善吸收；兩親性的高分子聚合物具有非常低的臨界膠束濃度，在體內(nèi)十分穩(wěn)定。
發(fā)明內(nèi)容一方面，本發(fā)明提供一種環(huán)孢A的聚合物膠束組合物。另一方面，本發(fā)明提供環(huán)孢A的聚合物膠束組合物用于口服給藥的用途，也可用于注射給藥。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，其提供一種用于口服和注射的環(huán)孢A的聚合物膠束組合物，其包含環(huán)孢A和兩親性的嵌段共聚物構(gòu)成的膠束。本發(fā)明還涉及制備聚合物膠束組合物的方法，該方法選自透析法、薄膜分散法、乳化法、溶劑揮發(fā)法、凍干法、共溶劑揮發(fā)法、注入法等。膠束的平均粒徑在200nm以下。本發(fā)明組合物可根據(jù)任何常規(guī)方法配制成各種制劑，例如口服液、片劑、膠囊劑、注射劑等。本發(fā)明組合物可用于制備防治器官移植或組織移植后排異反應(yīng)和治療自身免疫性疾病等相關(guān)疾病的藥物。本發(fā)明組合物用于制備治療上述疾病的藥物可通過口服和注射途徑給藥。優(yōu)選口服給藥。本發(fā)明組合物包括作為活性成分的環(huán)孢A，還包括由兩親性嵌段共聚物構(gòu)成的膠束。本發(fā)明的組合物使環(huán)孢A的口服生物利用度大大提高，并使環(huán)孢A注射后在血中的循環(huán)時(shí)間延長(zhǎng)。本發(fā)明組合物中的環(huán)孢A的代表性例子是環(huán)孢A和其變異體。本發(fā)明組合物中的環(huán)孢A至少是其中的一種，本發(fā)明組合物中環(huán)孢A與嵌段共聚物的重量比為1100-11，優(yōu)選110-14。兩親性嵌段共聚物是構(gòu)成本發(fā)明組合物中膠束的主要成分。可在本發(fā)明中使用的兩親性嵌段共聚物包含選自下述的親水鏈段聚乙二醇(PEG)、聚氧乙烯(ΡΕ0)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯醇(PVA)、聚醚(如Pluronic，Poloxamer)等。優(yōu)選聚乙二醇。聚乙二醇為聚乙二醇或聚乙二醇單甲醚，具有1000-20000Da的分子量，優(yōu)選2000Da_6000Da。在本發(fā)明中使用的兩親性嵌段共聚物包含選自下述的疏水鏈段聚氧丙烯、磷脂、磷脂衍生物、聚酯、聚氨基酸等，如聚賴氨酸、聚門冬氨酸、聚(N-麥芽糖酰-L-賴氨酸)、聚精氨酸、聚乳酸(PLA)、聚(N-硬脂酸芐酯-L-賴氨酸)、聚油酸乙烯酯、聚乙交酯、聚己內(nèi)酯、聚乙交酯丙交酯(PLGA)等。另外也有不可降解的聚苯乙烯、聚異丙基丙烯酰胺(PIPAA)等疏水鏈段。優(yōu)選聚酯。優(yōu)選PLA和PLGA，更優(yōu)選PLA。兩親性嵌段共聚物是二嵌段共聚物和三嵌段共聚物和/或它們的混合物。另外，本發(fā)明的組合物還包括任選的藥學(xué)上可接受的添加劑。為了達(dá)到本發(fā)明的目的，本發(fā)明進(jìn)行了經(jīng)大鼠口服本發(fā)明組合物的藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。參考附圖1和2，通過本發(fā)明的以下描述，本發(fā)明的上述及其它目的和特征將是顯而易見的。附圖1顯示了本發(fā)明實(shí)施例1的粒徑分布。附圖2顯示了本發(fā)明實(shí)施例1和市售新山地明軟膠囊口服給藥的藥時(shí)曲線。如上所述，本發(fā)明的組合物使環(huán)孢A經(jīng)口服給藥的生物利用度顯著提高，并略高于市售新山地明軟膠囊。以下實(shí)施例用于進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明，但絕對(duì)不是對(duì)本發(fā)明范圍的限制。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:口服液的制備將25.OOmg的PEG5000-PLA2500與5.OOmg的環(huán)孢素A充分溶解于適量的甲醇中，旋轉(zhuǎn)蒸干甲醇后，加入水進(jìn)行水化，經(jīng)0.45μm的微孔濾膜過濾得膠束組合物。然后將其灌裝在西林瓶中，加蓋，密封，輻射滅菌即得。實(shí)施例2片劑的制備將20.OOmg的PEG5000-PLA5000與5.OOmg的環(huán)孢素A充分溶解于適量的DMSO中，然后轉(zhuǎn)移至截留分子量為3500的透析袋中，在IL蒸餾水中透析24h，每隔4h更換一次新鮮蒸餾水。透析完成后將透析袋中的溶液取出，在3000rpm下離心30min，取上清液，經(jīng)0.45μm的微孔濾膜過濾得膠束組合物。在所得的膠束組合物中加入適量的PEG4000，混合均勻，凍干。然后將凍干粉過80目篩，與微晶纖維素混勻，加入淀粉漿制成軟材，用14目篩制粒后，置于40°C干燥后過12目篩整粒，加入干淀粉以及硬脂酸鎂混勻后壓片即得環(huán)孢A片劑。實(shí)施例3硬膠囊的制備將18.OOmg的PEG5000-PLA2500與5.OOmg的環(huán)孢素A充分溶解于適量的甲醇中，旋轉(zhuǎn)蒸干甲醇后，加入水進(jìn)行水化，經(jīng)0.45μm的微孔濾膜過濾得膠束組合物。在所得的膠束組合物中加入適量的PEG4000，混合均勻，凍干。然后將凍干粉填充在膠囊中，得到一粒膠囊。實(shí)施例4凍干粉針的制備將10.OOmg的PEG5000-PLA15000與5.OOmg的環(huán)孢素A充分溶解于適量的DMSO中，然后轉(zhuǎn)移至截留分子量為3500的透析袋中，在IL蒸餾水中透析24h，每隔4h更換一次新鮮蒸餾水。透析完成后將透析袋中的溶液取出，在3000rpm下離心30min，取上清液，經(jīng)0.45μm的微孔濾膜過濾得膠束組合物。在所得的膠束組合物中加入適量的PEG4000，混合均勻，凍干，密封，輻射滅菌即得。試驗(yàn)例1口服給藥的藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)為了考察包含在本發(fā)明組合物中的環(huán)孢A口服的藥代動(dòng)力學(xué)特征，如下對(duì)實(shí)施例1中的本發(fā)明制劑、市售軟膠囊分別進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究。用高效液相色譜法測(cè)定血中環(huán)孢A的含量。將10只體重約為200g的SD大鼠隨機(jī)等分為兩組。試驗(yàn)前12小時(shí)禁食，可自由飲水。稱重后按10mg/kg劑量，一組灌胃市售新山地明軟膠囊液，另一組灌胃實(shí)施例1的本發(fā)明制劑。分別于給藥后不同時(shí)間點(diǎn)眼眶靜脈叢取血0.5mL(取血容器事先肝素化)，加入50μ1環(huán)孢D內(nèi)標(biāo)溶液(60μg/ml)，然后加入Iml鹽酸溶液(180mmol/ml)渦旋Imin破壞血細(xì)胞，加入5ml重蒸無水乙醚后渦旋lOmin，在3000rpm下離心lOmin。吸取上層清液置于另一具塞玻璃試管中，加入ImlNaOH溶液(100mmol/ml)后渦旋5min，在3000rpm下離心IOmin0吸取上層清液至另一具塞玻璃試管中，40°C水浴下氮?dú)獯蹈梢颐?。加?20μ1流動(dòng)相(乙腈水=8020)復(fù)溶，然后加入Iml正己烷，渦旋2min，在3000rpm下離心lOmin，棄去上層正己烷，再重復(fù)上述操作一次。取20μ1進(jìn)樣。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血藥濃度。色譜條件如下DiamonsilTMC18色譜柱，250X4.6mm，5μm；流動(dòng)相乙腈水=8020；流速:lml/min；柱溫:70°C；檢測(cè)波長(zhǎng)2IOhm；進(jìn)樣量:20μ1。結(jié)果如圖2和表1。表1不同時(shí)間血中環(huán)孢A的濃度(ng/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>根據(jù)表1和圖2的結(jié)果，兩者t檢驗(yàn)在0.05水平上無顯著性差異，說明本發(fā)明制劑與市售軟膠囊生物等效。雖然已利用上述具體的實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，但應(yīng)認(rèn)識(shí)到，本領(lǐng)域的技術(shù)人員還可進(jìn)行各種的改進(jìn)和改變，而且它們也應(yīng)如權(quán)利要求書限定的本發(fā)明的范圍之內(nèi)。權(quán)利要求一種聚合物膠束組合物，其包含環(huán)孢A、嵌段共聚物及任選的其他可藥用輔料。2.如權(quán)利要求1所述的聚合物膠束組合物，其中環(huán)孢A與嵌段共聚物的重量比為1100-11。3.如權(quán)利要求2所述的聚合物膠束組合物，其中環(huán)孢A與嵌段共聚物的重量比為110-14。4.如權(quán)利要求1所述的聚合物膠束組合物，其中的環(huán)孢A選自環(huán)孢A和其變異體。5.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的聚合物膠束組合物，其中的嵌段共聚物包含選自下述的親水鏈段聚乙二醇、聚氧乙烯、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇和聚醚。6.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的聚合物膠束組合物，其中的嵌段共聚物包含選自下述的疏水鏈段聚氧丙烯、磷脂、磷脂衍生物、聚酯、聚氨基酸、聚苯乙烯和聚異丙基丙烯酰胺。7.如權(quán)利要求5所述的聚合物膠束組合物，其中的嵌段共聚物包含選自下述的疏水鏈段聚氧丙烯、磷脂、磷脂衍生物、聚酯、聚氨基酸、聚苯乙烯和聚異丙基丙烯酰胺。8.如權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的組合物用于制備防治器官移植或組織移植后排異反應(yīng)或治療自身免疫性疾病等相關(guān)疾病的藥物的用途。9.如權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于通過口服或注射給藥。10.如權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于通過口服給藥。全文摘要本發(fā)明涉及一種環(huán)孢A聚合物膠束組合物。該組合物包含環(huán)孢A，還含有兩親性嵌段共聚物構(gòu)成的聚合物膠束。本發(fā)明組合物制備方法簡(jiǎn)單，并可提高環(huán)孢A口服的生物利用度，延長(zhǎng)環(huán)孢A注射時(shí)在血液中的循環(huán)時(shí)間。該組合物可使環(huán)孢A用于口服給藥，并也可用于注射給藥。文檔編號(hào)A61P37/02GK101810560SQ200910078180公開日2010年8月25日申請(qǐng)日期2009年2月20日優(yōu)先權(quán)日2009年2月20日發(fā)明者劉艷,周艷霞,張燕惠,李馨儒申請(qǐng)人:北京大學(xué)