專利名稱：以穿心蓮內(nèi)酯為有效成分的抗疲勞劑及口服組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及以穿心蓮內(nèi)酯為有效成分的抗疲勞劑。更具體地說，本發(fā)明涉及以穿
心蓮內(nèi)酯為有效成分、用于預(yù)防或治療與疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)的醫(yī)藥組合物或飲食物。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及以穿心蓮內(nèi)酯及a-硫辛酸為有效成分的新型口服組合物、以及用于預(yù) 防或治療與疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)的抗疲勞劑。
背景技術(shù)：
疲勞一般以疲勞感、倦怠感為主要癥狀，是伴隨其他的睡眠障礙、干勁降低等多種 癥狀的狀態(tài)，是現(xiàn)代社會中生存的大多數(shù)人日常生活所面對的現(xiàn)象。疲勞感、倦怠感是提示 身體異常的重要警示信號之一，即使在健康時(shí)，也可在進(jìn)行劇烈運(yùn)動、長時(shí)間勞動時(shí)或在過 度的精神壓力狀況下等自我感覺到。這種生理學(xué)上的疲勞通常通過使身體休息即可恢復(fù)到 原本的正常狀態(tài)，不會長久持續(xù)。但是由于現(xiàn)代人大多是處于長時(shí)間的勞動、過度的精神壓 力狀況下且難以得到充分的休息，所以常常發(fā)生疲勞感、倦怠感難于恢復(fù)的現(xiàn)象。在此14 年間苦于慢性疲勞的人數(shù)增加，疲勞已發(fā)生了質(zhì)的變化，這在文獻(xiàn)中也已有報(bào)道(非專利 文獻(xiàn)1) 另外，在現(xiàn)代日本，由于長時(shí)間的過于集中的過度勞動而造成的突然死亡被定義 為"過勞死"，且已成為巨大的社會問題。盡管認(rèn)識到過勞死的問題是醫(yī)學(xué)、經(jīng)濟(jì)、社會上的 非常重要的問題，然而其發(fā)病機(jī)理還幾乎不清楚，但認(rèn)為精神疲勞、肉體疲勞的積累是其重 大原因。 最近，慢性疲勞綜合征(Chronic Fatigue Syndrome ;CFS)的疾病作為疑難病之一 已成為談?wù)摰脑掝}。是指在1988年美國疾病對策中心(CDC)提出的疾病中，至今為止健康 生活的人在發(fā)生原因不明的劇烈的全身疲勞感的同時(shí)，還產(chǎn)生低燒、頭痛、淋巴結(jié)腫大、肌 肉痛、關(guān)節(jié)痛、思考力降低、集中力降低、睡眠障礙等的精神的癥狀、肉體的癥狀，這種狀態(tài) 長期持續(xù)而不能進(jìn)行健全的社會生活的疾病。日本終于從1991年左右，厚生省的專門研究 班才開始進(jìn)入實(shí)態(tài)調(diào)查的階段，其原因尚不明曉，其診斷標(biāo)準(zhǔn)也未充分確立。在過勞死已成 為社會問題的今日，雖希望能查明慢性疲勞綜合征早期的原因，但現(xiàn)狀如上所述，其診斷標(biāo) 準(zhǔn)仍未確立。 此外，疲勞有由精神原因引起的，也有由肉體原因引起的，但這些大多是密切相連 的，一般很難區(qū)分。肉體疲勞持續(xù)時(shí)，在全身的倦怠感、乏力感等之后還會逐漸感到精神上 的疲勞，同時(shí)會帶來集中力降低、喪失干勁、誘發(fā)睡意等。也有時(shí)因肉體、精神疲勞而誘發(fā)內(nèi) 臟功能降低、即所謂的內(nèi)臟疲勞。睡眠障礙與疲勞之間的關(guān)聯(lián)也受到重視，因徹夜不眠而帶 來不快感的同時(shí)還引發(fā)疲勞，也給日常生活帶來不良影響的事例非常多。
在這種背景下，以減輕疲勞、從疲勞恢復(fù)到正常狀態(tài)為目的，提出了所述的"抗疲 勞物質(zhì)"。例如，報(bào)道了某種氨基酸組合物的增強(qiáng)體力作用(專利文獻(xiàn)1)、左旋肉堿及組氨 酸相關(guān)二肽的增強(qiáng)體力作用(專利文獻(xiàn)2)、山楂提取物的提高耐力、強(qiáng)化肌肉組織、促進(jìn)肌 肉疲勞恢復(fù)的作用(專利文獻(xiàn)3)等。此外，專利文獻(xiàn)4中，公開了以補(bǔ)充因運(yùn)動等造成的體力消耗、疲勞時(shí)等的營養(yǎng)為目的，含有胰島素分泌亢進(jìn)氨基酸及具有抗氧化作用的食品 材料(含有抗壞血酸)的營養(yǎng)補(bǔ)充組合物。有抗壞血酸對于治療慢性疲勞綜合征的對癥療 法有效的報(bào)道(非專利文獻(xiàn)2)。另外，專利文獻(xiàn)5中記載了在慢性疲勞綜合征的患者中血 清中的脂酰肉堿減少，在脂酰肉堿代謝異常的治療中乙酰左旋肉堿的給藥有效(專利文獻(xiàn) 5)。 另外，關(guān)于穿心蓮內(nèi)酯，據(jù)說通過每天攝取200mg作為含有穿心蓮內(nèi)酯而已知的 植物穿心蓮，具有在寒冷期預(yù)防感冒的效果，通過每天攝取1200mg以上即可緩和感冒的諸 癥狀。而且還有如下報(bào)道穿心蓮內(nèi)酯及其衍生物可作為抗癌劑、抗病毒藥、抗瘧疾藥、抗細(xì) 菌藥、保肝藥、免疫調(diào)節(jié)藥等使用(專利文獻(xiàn)6)，穿心蓮內(nèi)酯調(diào)節(jié)血小板活性化因子乙酰水 解酶的功能的作用(專利文獻(xiàn)7)，穿心蓮內(nèi)酯提高因氧化應(yīng)激而引起的肝臟谷胱甘肽活性 降低的作用(非專利文獻(xiàn)3)，但對于疲勞負(fù)荷的作用、抗疲勞作用還全然沒有報(bào)道。
專利文獻(xiàn)1日本特開平9-124473號公報(bào)
專利文獻(xiàn)2日本特開2001-046021號公報(bào)
專利文獻(xiàn)3日本特開平8-47381號公報(bào)
專利文獻(xiàn)4日本特開平6-327435號公報(bào)
專利文獻(xiàn)5日本特開平8-26987號公報(bào)
專利文獻(xiàn)6日本特表2003-522166號公報(bào)
專利文獻(xiàn)7日本特開2007-176934號公報(bào) 非專利文獻(xiàn)1疲勞的科學(xué)、井上正康、倉恒弘彥、渡邊恭良編、講談社、222-228頁、 2001 非專利文獻(xiàn)2 In Vivo (1996) Nov-Dec ;10(6) :585-96 非專利文獻(xiàn)3 Biochemical Pharmacology (1993) Vol. 46， No. 1， pp. 182—185

發(fā)明內(nèi)容
不僅為了運(yùn)動員等以特殊生活方式生活的人，還為了使普通生活中的人能在日常 中過上健全的生活，而且即使在動物中，為了賽馬等的比賽用動物以至于家畜、動物園等的 設(shè)施中飼養(yǎng)的動物、包括寵物在內(nèi)的動物，也希望有具有抗疲勞作用的組合物。特別是需要 不僅對肉體疲勞有效，還對精神疲勞、內(nèi)臟疲勞及這些綜合的疲勞有效的組合物。但是，以 往的抗疲勞物質(zhì)主要以因運(yùn)動產(chǎn)生的肌肉疲勞為對象，且含有咖啡因、乙醇，所以，多伴有 興奮、失眠等。而且認(rèn)為自我感覺疲勞的多數(shù)人都訴說在經(jīng)過一夜休息之后仍不能恢復(fù)疲 勞，如置之不理，則有可能陷入疲勞過度的狀態(tài)、慢性疲勞綜合征等疾病的疲勞狀態(tài)。但是， 因?yàn)樵诓还茉趺凑f還能過著日常生活的情況下，多由于忙于每天的繁雜生活，珍惜去病院 的時(shí)間而置之不理，所以，希望有日常生活中可持續(xù)攝取的組合物。 本發(fā)明的目的在于，提供對人、動物等安全、可在日常持續(xù)攝取、具有抗疲勞作用、 對與疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)的預(yù)防或治療有效的組合物。 本發(fā)明者為解決上述課題而對各種食品成分進(jìn)行銳意探討的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)穿心蓮內(nèi) 酯具有抗疲勞作用，具體地說，具有精神疲勞、內(nèi)臟疲勞的負(fù)荷減輕作用、促進(jìn)恢復(fù)作用，肉 體疲勞的預(yù)防作用、負(fù)荷減輕作用、促進(jìn)恢復(fù)作用及伴隨這些作用的提高耐力、增強(qiáng)體力等 的作用，且在疲勞負(fù)荷前、疲勞負(fù)荷中、疲勞負(fù)荷后的任何時(shí)期給藥均可發(fā)揮抗疲勞作用，進(jìn)而還發(fā)現(xiàn)通過組合穿心蓮內(nèi)酯和a-硫辛酸，可使此抗疲勞作用與穿心蓮內(nèi)酯單獨(dú)或 a-硫辛酸單獨(dú)使用所得到的抗疲勞作用相比得到增強(qiáng)，從而完成了本發(fā)明。 即本發(fā)明提供以穿心蓮內(nèi)酯為有效成分的抗疲勞劑。 本發(fā)明還提供所述的抗疲勞劑，其為用于預(yù)防或治療與疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)的 醫(yī)藥組合物或飲食物。 本發(fā)明還提供所述的抗疲勞劑，其中，與所述疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)選自慢性疲 勞綜合征、過勞死、疲勞過度、肉體疲勞(例如肌肉疲勞)、精神疲勞(例如睡眠不足所引起 的疲勞)及內(nèi)臟(內(nèi)臟、特別是肝臟及/或脾臟)疲勞，優(yōu)選這些中的2個(gè)以上的組合。
本發(fā)明還提供所述的抗疲勞劑，其中，包括人在內(nèi)的動物每天的攝取量中含有 0. 01 500mg/kg體重(優(yōu)選0. 1 50mg/kg體重、更優(yōu)選0. 1 10mg/kg體重、特別優(yōu)選 0. 25 10mg/kg體重)的穿心蓮內(nèi)酯。 本發(fā)明還提供所述的抗疲勞劑，其中，人(成人)每天的攝取量中含有O. l 100mg(優(yōu)選0. 1 50mg、更優(yōu)選0. 1 10mg、特別優(yōu)選0. 25 10mg)的穿心蓮內(nèi)酯。
l天的攝取可分單次或多次(例如2或3次)進(jìn)行。即本發(fā)明還提供所述的抗疲勞 劑，其中，人(成人)每次的攝取量中含有0. 03 50mg (優(yōu)選0. 05 25mg、更優(yōu)選0. 03 5mg、特別優(yōu)選0. 13 5mg)的穿心蓮內(nèi)酯。 本發(fā)明還提供如下口服組合物，其含有作為抗疲勞有效成分的穿心蓮內(nèi)酯和 a-硫辛酸，與單獨(dú)將穿心蓮內(nèi)酯或a-硫辛酸作為有效成分時(shí)相比發(fā)揮優(yōu)異的抗疲勞作 用。本發(fā)明的口服組合物可作為抗疲勞劑使用。 而且本發(fā)明還提供所述的抗疲勞劑，其中，與所述疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)為與精
神疲勞或睡眠不足所引起的疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)。 而且本發(fā)明還提供所述的抗疲勞劑，其用于口服。 而且本發(fā)明還涉及穿心蓮內(nèi)酯或穿心蓮內(nèi)酯和a -硫辛酸的使用，其用于制造預(yù) 防或治療與疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)的醫(yī)藥組合物或飲食物。 而且本發(fā)明還涉及與疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)的預(yù)防或治療方法，其包含將穿心蓮 內(nèi)酯或穿心蓮內(nèi)酯和a-硫辛酸進(jìn)行給藥。 而且本發(fā)明還提供具有抗疲勞作用的醫(yī)藥組合物或飲食物，其含有作為有效成分 的穿心蓮內(nèi)酯或穿心蓮內(nèi)酯和a-硫辛酸。 而且本發(fā)明還提供用于預(yù)防或治療與疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)的醫(yī)藥組合物或飲 食物，其特征在于，含有所述的抗疲勞劑。 而且本發(fā)明還提供所述的抗疲勞劑，其為膠囊劑或營養(yǎng)強(qiáng)化劑或飲料的形態(tài)。 而且本發(fā)明還涉及減輕精神疲勞、肉體疲勞及/或內(nèi)臟疲勞的負(fù)荷的方法，其包
含將穿心蓮內(nèi)酯或穿心蓮內(nèi)酯和a-硫辛酸在疲勞負(fù)荷中至少給藥1次。 而且本發(fā)明還涉及促進(jìn)精神疲勞及/或肉體疲勞(特別是肉體疲勞)恢復(fù)的方
法，其包含將穿心蓮內(nèi)酯或穿心蓮內(nèi)酯和a-硫辛酸在疲勞負(fù)荷后至少給藥1次。 而且本發(fā)明還涉及預(yù)防或減輕肉體疲勞(肌肉疲勞)的負(fù)荷的方法，其包含將穿
心蓮內(nèi)酯或穿心蓮內(nèi)酯和a-硫辛酸在疲勞負(fù)荷前至少給藥1次。 本發(fā)明的抗疲勞劑、具體地說用于預(yù)防或治療與疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)的醫(yī)藥組 合物或飲食物具有優(yōu)異的抗疲勞作用，且因?qū)θ恕游锏冉o藥時(shí)，少量即可獲得效果、安全，所以可在日常持續(xù)攝取。本發(fā)明的抗疲勞劑不需選擇給藥時(shí)間，通過在感到疲勞時(shí)服用可 盡早恢復(fù)疲勞，在預(yù)先服用后進(jìn)行勞動、運(yùn)動時(shí)可預(yù)防疲勞。通過在進(jìn)行運(yùn)動之前或過程中 攝取，可期待提高耐力，也可期待在上述效果中有速效性。進(jìn)而通過日常攝取，可預(yù)防與肉 體疲勞、精神疲勞、內(nèi)臟疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)。而且本抗疲勞劑可預(yù)防因疲勞而引起的皺 紋、皮膚粗糙。 本發(fā)明中，作為有效成分，通過將穿心蓮內(nèi)酯與a-硫辛酸共用的方式，可使上述 的抗疲勞效果與單獨(dú)使用穿心蓮內(nèi)酯或a-硫辛酸而得到的效果相比協(xié)同提高。在此，抗 疲勞效果的協(xié)同提高是指可得到分別單獨(dú)使用時(shí)所看不出的效果(協(xié)同效果)。例如，在本 說明書的實(shí)施例5中，將通常飼養(yǎng)組的游泳時(shí)間減去浸水飼養(yǎng)對象組的游泳時(shí)間后的時(shí)間 作為100%時(shí)，各藥劑給藥組的游泳時(shí)間的增加率在穿心蓮內(nèi)酯單獨(dú)給藥組中增加5%，且 在a-硫辛酸單獨(dú)給藥組中增加13%，而在將穿心蓮內(nèi)酯和a-硫辛酸進(jìn)行組合給藥的組 中增加51%，所以，可以說通過2成分的并用得到了協(xié)同效果的提高。


圖l為表示實(shí)施例l中穿心蓮內(nèi)酯的給藥(圖1(A) :0. 5，2.0，8.0mg/kg體重/天、 圖1 (B) :0. 25mg/kg體重/天、圖1 (C) :200mg/kg體重/天)與浸水飼養(yǎng)后的重物負(fù)荷強(qiáng)制 游泳試驗(yàn)中的游泳時(shí)間之間的關(guān)系圖。 圖2為表示實(shí)施例2中穿心蓮內(nèi)酯的給藥與浸水飼養(yǎng)后血清中GOT量(A)、血清中 GPT量(B)及肝臟TBARS量(C)之間的關(guān)系圖。 圖3為表示實(shí)施例3中穿心蓮內(nèi)酯的給藥與強(qiáng)制運(yùn)動后的自發(fā)運(yùn)動量(0 2小 時(shí)的測定值探索行為(A)、2 14小時(shí)的測定值暗期自發(fā)運(yùn)動(B))之間的關(guān)系圖。
圖4為表示實(shí)施例4中穿心蓮內(nèi)酯的給藥與強(qiáng)制運(yùn)動后血液中肌酸激酶活性之間 的關(guān)系圖。 圖5為表示實(shí)施例5中穿心蓮內(nèi)酯及/或a -硫辛酸的給藥與浸水飼養(yǎng)后的重物 負(fù)荷強(qiáng)制游泳試驗(yàn)中的游泳時(shí)間之間的關(guān)系圖。
具體實(shí)施例方式(穿心蓮內(nèi)酯) 本發(fā)明的抗疲勞劑、醫(yī)藥組合物或飲食物(以下有時(shí)簡稱為"本發(fā)明的組合物") 中作為有效成分含有的穿心蓮內(nèi)酯 (3-[2-十氫-6-羥基-5-(羥基-甲基)_5， 8a_ 二甲基_2_亞甲基萘酚]亞乙基) 二氫_4-氫呋喃-2(3H)-酮) (3_ [2_decahydro_6_hydroxy_5_ (hydroxyl-methyl) _5， 83-dimethyl-2-methylenen即hthyl] ethylidene) dihydro_4_hydrofu:ran_2 (3H) -one)
是下式(I)中所示的已知化合物。
[式(I)]
6<formula>formula see original document page 7</formula> 本說明書中，"含有作為有效成分的穿心蓮內(nèi)酯"是指只要發(fā)揮所需的效果，即可 將上述穿心蓮內(nèi)酯、穿心蓮內(nèi)酯衍生物、其立體異構(gòu)體、多型體(以下，也有時(shí)稱為"穿心蓮 內(nèi)酯類")單獨(dú)或2種以上混合含有。 穿心蓮內(nèi)酯可通過從例如爵床科植物穿心蓮( 一見喜、欖核蓮、Androgr即his paniculate)中提取、精制或購入市售品而容易地獲得。作為用于獲得穿心蓮內(nèi)酯的具體 的提取、精制方法，可例舉粉碎干燥后的穿心蓮，用甲醇、己烷等依次提取而得到提取物，將 其進(jìn)一步用柱色譜法等精制的方法。此外，作為市售品的具體例子，可例舉由和光純藥、 Aldrich公司、Sigma公司、Calbiochem公司提供的"穿心蓮內(nèi)酯"。 作為本發(fā)明中使用的穿心蓮內(nèi)酯類，可使用上述的提取、精制品、合成品及市售品 中的任一種，也可使用含有穿心蓮內(nèi)酯類的植物的提取物等。例如，已知在上述的穿心蓮 中，葉中含有穿心蓮內(nèi)酯、脫氧穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、高穿心蓮內(nèi)酯、穿心蓮?fù)?、穿?蓮?fù)⒋┬纳忕薮嫉?，根中含有穿心蓮?nèi)酯、穿心蓮黃酮等，全株中含有14-脫氧-11-氧代 穿心蓮內(nèi)酯、14-脫氧-ll，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯(中藥大辭典第三巻1985年12月10日 初版第1次印刷發(fā)行)。 本發(fā)明的組合物中所含有的穿心蓮內(nèi)酯類可使用藥學(xué)中允許的鹽的形式，也可使
用在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為穿心蓮內(nèi)酯的形態(tài)(前藥)。作為形成其鹽的酸，例如可例舉鹽酸、溴氫酸、
硫酸、硝酸、磷酸、硼酸等的無機(jī)酸；甲酸、乙酸、丙酸、三氟乙酸、草酸、琥珀酸、馬來酸、富馬
酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、水楊酸、沒食子酸、天冬氨酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、苯磺
酸、對甲苯磺酸等的有機(jī)酸，可使用其一種或二種以上。
( a -硫辛酸) 可在本發(fā)明的組合物中作為有效成分含有的a-硫辛酸(硫辛酸、l，2-二硫戊 環(huán)_3-戊酸)可作為醫(yī)藥或飲食物服用或食用，只要是與穿心蓮內(nèi)酯組合時(shí)發(fā)揮抗疲勞作 用增強(qiáng)效果，對其來源及制造方法無任何限定。且可使用右旋體、左旋體及外消旋體中的任 一種，也可使用可方便地獲得的市售的外消旋體等。 a-硫辛酸是可在體內(nèi)生物合成的物質(zhì)，在身體中幾乎所有的細(xì)胞中存在，在能量
代謝中，作為催化丙酮酸、a-酮戊二酸等的氧化脫羧反應(yīng)的輔酶起著重要的作用。且已知 其具有抗氧化能力，對維生素C、維生素E、CoQ10、谷胱甘肽等的內(nèi)源性抗氧化劑的再生起作用。 本發(fā)明的組合物中含有的a-硫辛酸可使用藥學(xué)上允許的鹽的形式，也可以使用在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為a-硫辛酸的形態(tài)(前藥)。此外，也可作為各種衍生物使用。作為此種a _硫辛酸的鹽，除鈉鹽、鉀鹽等的堿金屬鹽以外，還可例舉胺鹽、銨鹽等。另外，作為a-硫辛酸的衍生物，可例舉烷基或鏈烯基酯(alkenyl esters)類、酰胺類、作為還原體的二氫硫辛酸或其烷基或鏈烯基酯及酰胺等。本發(fā)明中，可選擇使用上述的一種或二種以上。
本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)了攝取上述的穿心蓮內(nèi)酯時(shí)可獲得顯著的抗疲勞作用，且其抗疲勞作用通過進(jìn)一步與規(guī)定量的a-硫辛酸組合攝取而被協(xié)同增強(qiáng)。具有抗疲勞作用的組合物對與疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)的預(yù)防或治療有用。 本發(fā)明中，"疲勞"是指連續(xù)施加肉體及/或精神負(fù)荷時(shí)所表現(xiàn)的短時(shí)間的肉體、精神及/或內(nèi)臟的執(zhí)行能力的降低現(xiàn)象，此執(zhí)行能力的降低是肉體、精神及/或內(nèi)臟的工作能力的質(zhì)或量的降低。伴隨肉體疲勞的精神疲勞(例如全身的倦怠感、乏力感、集中力降低、喪失干勁、誘發(fā)睡意等)、伴隨精神疲勞的內(nèi)臟疲勞等這些復(fù)合產(chǎn)生的上述執(zhí)行能力的降低現(xiàn)象也包含在上述疲勞中。 本發(fā)明所提供的"抗疲勞劑"是具有"抗疲勞作用"的組合物。本說明書中，"抗疲勞作用"是指預(yù)防、減輕、恢復(fù)上述疲勞的作用，具體地說，包含使運(yùn)動、起作用的部位(起作用的部位是指為行使功能而工作的包括腦、內(nèi)臟在內(nèi)的身體的部位)的工作持續(xù)時(shí)間延長(防止持續(xù)時(shí)間的縮短)，抑制相同運(yùn)動量、作用量下疲勞物質(zhì)的改變(提高耐力、增強(qiáng)體力、減輕疲勞)，改善盡管運(yùn)動、起作用的部位還不疲勞但腦、神經(jīng)、內(nèi)臟等已處于疲勞感知狀態(tài)，以及促進(jìn)運(yùn)動、起作用的部位的疲勞狀態(tài)向通常狀態(tài)的恢復(fù)。在此，耐力也包含肉體的耐力、精神的耐力及內(nèi)臟的耐力中的任一種，指可持續(xù)進(jìn)行某種固定的運(yùn)動狀態(tài)的能力。利用抗疲勞作用，例如可達(dá)到"可持續(xù)進(jìn)行長時(shí)間游泳"、"即使長時(shí)間工作也不累"、"每天的生活中不留下疲勞"等。 本說明書中，"與疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)"是指上述的與疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)，包括與肉體疲勞、精神疲勞及內(nèi)臟疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)，例如可例舉由慢性疲勞綜合征、疲勞過度、肌肉疲勞、睡眠不足引起的疲勞，由精神壓力引起的疲勞、肝臟疲勞等的這些2個(gè)以上的組合。在此，慢性疲勞綜合征是指給日常生活帶來障礙的長期的全身疲勞感、倦怠感、低燒、淋巴結(jié)腫大、肌肉痛、關(guān)節(jié)痛、精神神經(jīng)癥狀等基本的癥狀，在美國疾病對策中心(CDC)的慢性疲勞綜合征(CFS)的診斷標(biāo)準(zhǔn)中認(rèn)為伴隨以下等的肉體癥狀、精神癥狀為病理性慢性疲勞的特征低燒以至于惡寒；咽喉疼痛；脖子或腋下的淋巴結(jié)腫大；不明原因的乏力感；肌肉疼痛或不快感；只輕微活動就在其后24小時(shí)以上持續(xù)感到全身倦怠感；頭痛；關(guān)節(jié)疼痛；精神神經(jīng)癥狀(畏光、一過性黑朦、健忘、剌激感受性、錯亂、思考力降低、集中力降低、抑郁)；睡眠障礙(失眠、嗜睡)等。因此，這些癥狀也包含在本發(fā)明中的"與疲勞有關(guān)的狀態(tài)或疾病"中。 本說明書中，預(yù)防或治療與疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)是指防治該疾病或狀態(tài)的惡
化，改善、緩和該疾病或狀態(tài)，使其向正常狀態(tài)轉(zhuǎn)移以及預(yù)防該疾病或狀態(tài)。 被測物質(zhì)對于疲勞的效果可采用與被測物質(zhì)的給藥相結(jié)合，測定耐力、詢問診斷
感覺上的疲勞恢復(fù)等本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的各種方法來確認(rèn)，但本發(fā)明者通過如下試驗(yàn)確
認(rèn)了本發(fā)明的組合物對疲勞的效果。
第一，如后述的實(shí)施例1中詳細(xì)敘述的浸水睡眠剝奪試驗(yàn)中游泳時(shí)間的測定。使用如浸水飼養(yǎng)下不能取得充分的睡眠、休息的姿勢，在肉體上精神上均得不到休息的環(huán)境下飼養(yǎng)的小鼠，使其在負(fù)重狀態(tài)下游泳，通過測定其游到鼻子沒入水中io秒以上為止的時(shí)間(重物負(fù)荷強(qiáng)制游泳試驗(yàn))，以確認(rèn)其疲勞度。 有報(bào)道指出動物對于各種輕微疲勞的負(fù)荷會顯示相當(dāng)高的適應(yīng)性，在連日的輕微復(fù)合疲勞的負(fù)荷下會成為抗疲勞性動物，建立疲勞模型動物非常難，但在浸水飼養(yǎng)下的大鼠中可見局限在額葉等的腦部位上的葡萄糖消耗的降低、腦的單胺水平的變化(腦21 (2004) Vol. 7， No. 1，卯.41-45)、腦、肝臟中的與疲勞有關(guān)的基因的變化等，確立了疲勞模型(Journal o預(yù)eurochemistry (2005)95， 1156-1166) (Biochemical andBiophysicalResearch Communications (2007) 353， 1068-1073)。而且在調(diào)查使此浸水飼養(yǎng)大鼠恢復(fù)到通常飼養(yǎng)的過程時(shí)，可確認(rèn)隨著浸水飼養(yǎng)大鼠的休息時(shí)間(通常飼養(yǎng)時(shí)間)的延長，重物負(fù)荷強(qiáng)制游泳試驗(yàn)下的游泳時(shí)間成比例地延長，也可確認(rèn)與此對應(yīng)的腦分區(qū)單胺量的變化。 即此動物模型是肉體及精神的疲勞模型、以及以下說明的內(nèi)臟疲勞模型，所以，如通過進(jìn)行被測物質(zhì)給藥而使游泳時(shí)間延長，即可確認(rèn)對肉體及/或精神疲勞的抗疲勞作用。認(rèn)為此種抗疲勞作用也與疲勞負(fù)荷的減輕、在疲勞狀態(tài)下的身體活力的維持(增強(qiáng)體力)、提高耐力等有關(guān)。 第二，如后述的實(shí)施例2中詳細(xì)記載的肝臟疲勞的測定。如在浸水飼養(yǎng)下的不能取得充分的睡眠、休息的姿勢的環(huán)境中飼養(yǎng)的上述模型中可確認(rèn)全身性疲勞癥狀。在此模型的肝臟中，與通常飼養(yǎng)組相比血液中的GOT及GPT量增加。已知肝細(xì)胞受損時(shí)，肝臟細(xì)胞中存在的酶GOT (谷草轉(zhuǎn)氨酶(glutamic oxalacetic transaminase)) 、 GPT (谷丙轉(zhuǎn)氨酶(glutamicpyruvic transaminase))從血液中逸出。因此，通過測定血液中的G0T、 GPT，可知肝臟的損傷度。且可知此模型中的肝臟的過氧化脂質(zhì)增加(通過TBARS:硫代巴比妥酸反應(yīng)物(Thiobarbituric acid reactive substances)量測定)。由于長時(shí)間的全身性疲勞狀態(tài)，推斷因肝臟功能的異常、氧化還原體系平衡的失調(diào)等引起的過氧化脂質(zhì)產(chǎn)生積累，認(rèn)為支持了本模型為內(nèi)臟疲勞模型的結(jié)論。 S卩，因此動物模型也為內(nèi)臟疲勞模型，所以，如果通過進(jìn)行被測物質(zhì)給藥、例如所述的G0T、 GPT、 TBARS等，可確認(rèn)內(nèi)臟疲勞標(biāo)記物的變化恢復(fù)到了正常值、抑制了內(nèi)臟標(biāo)記物的改變，即可確認(rèn)對內(nèi)臟疲勞有抗疲勞作用。此種抗疲勞作用使全部內(nèi)臟的活動正常而調(diào)節(jié)代謝，并由此也可參與肉體的、精神的疲勞的負(fù)荷減輕、維持活力、提高耐力等。
第三，如后述實(shí)施例3中詳細(xì)記載的強(qiáng)制運(yùn)動試驗(yàn)中自發(fā)運(yùn)動量的測定。使用大鼠使其通過動物跑步機(jī)進(jìn)行強(qiáng)制運(yùn)動，然后進(jìn)行被測物質(zhì)給藥，測定動物的自發(fā)運(yùn)動量。由于該動物模型是運(yùn)動疲勞(肉體疲勞)模型，所以，如果通過進(jìn)行被測物質(zhì)給藥使自發(fā)運(yùn)動量增加，即可確認(rèn)對肉體疲勞有抗疲勞作用。此種抗疲勞作用也與提高耐力、提高運(yùn)動執(zhí)行能力有關(guān)。 第四，如后述實(shí)施例4中詳細(xì)記載的疲勞物質(zhì)量的測定。即確認(rèn)被測物質(zhì)給藥對施加了肉體的或精神的負(fù)荷時(shí)疲勞物質(zhì)量的影響。因所負(fù)荷的疲勞的種類、強(qiáng)度、持續(xù)時(shí)間等不同，疲勞物質(zhì)會發(fā)生變化，所以不能明確地作為指標(biāo)來確定，但作為候補(bǔ)物質(zhì)之一，可例舉血液中的肌酸激酶。肌酸激酶是催化將高 磷酸基從肌酸磷酸轉(zhuǎn)移到ADP的反應(yīng)的酶，在生物體內(nèi)能量體系中，在進(jìn)行瞬時(shí)爆發(fā)的短時(shí)間運(yùn)動時(shí)的骨格肌肉的收縮運(yùn)動等大量消耗能量時(shí)，認(rèn)為其擔(dān)負(fù)消耗肌酸磷酸供給ATP的生理功能。且已知其在生物體內(nèi)的各組織中具有、特別是在肌肉中大量含有，在肌肉疲勞時(shí)會因?yàn)槲锢淼募盎瘜W(xué)的(例如活性氧)負(fù)荷使肌肉細(xì)胞受損，而使肌酸激酶從肌肉細(xì)胞中向血液中逸出。因此可以說通過測定血液中肌酸激酶的活性，可知肌肉的損傷度。即通過進(jìn)行被測物質(zhì)給藥可確認(rèn)血液中肌酸激酶活性上升的抑制時(shí)，即可確認(rèn)對肉體疲勞、特別是肌肉疲勞有抗疲勞作用。可認(rèn)為通過此種抗疲勞作用，可減輕肌肉損傷，由此而使體力增強(qiáng)、肌肉力增強(qiáng)。 此外，在任一個(gè)試驗(yàn)中，均可通過適當(dāng)設(shè)定給藥時(shí)期和疲勞負(fù)荷時(shí)期而從各種角度確認(rèn)被測物質(zhì)的抗疲勞作用。即(i)可確認(rèn)在疲勞負(fù)荷中進(jìn)行被測物質(zhì)給藥時(shí)，被測物質(zhì)是否減輕疲勞負(fù)荷；(ii)可確認(rèn)在疲勞負(fù)荷后進(jìn)行被測物質(zhì)給藥時(shí)，被測物質(zhì)是否促進(jìn)疲勞恢復(fù)；(iii)可確認(rèn)在進(jìn)行被測物質(zhì)給藥后施加疲勞負(fù)荷時(shí)，被測物質(zhì)是否預(yù)防、減輕疲勞。 攝取穿心蓮內(nèi)酯時(shí)，在上述的試驗(yàn)即浸水睡眠剝奪試驗(yàn)、內(nèi)臟疲勞的測定、強(qiáng)制運(yùn)動試驗(yàn)、疲勞物質(zhì)量的測定的任一個(gè)中均可確認(rèn)抗疲勞作用。進(jìn)而組合攝取穿心蓮內(nèi)酯和規(guī)定量的a-硫辛酸時(shí)，可確認(rèn)在浸水睡眠剝奪試驗(yàn)中能協(xié)同提高抗疲勞作用。此結(jié)論當(dāng)然可說明穿心蓮內(nèi)酯及穿心蓮內(nèi)酯和a-硫辛酸的組合具有抗疲勞作用、即預(yù)防疲勞的作用、減輕疲勞的作用及恢復(fù)疲勞的作用，還說明例如對慢性疲勞綜合征的預(yù)防、治療等、對與疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)的預(yù)防或治療也有用。 如后述實(shí)施例中可知，本發(fā)明的組合物在疲勞負(fù)荷中攝取時(shí)可減輕疲勞的負(fù)荷，通過在疲勞后攝取可促進(jìn)疲勞恢復(fù)，在疲勞負(fù)荷前攝取時(shí)可預(yù)防、減輕疲勞的負(fù)荷。因此，本發(fā)明的組合物的給藥時(shí)期可根據(jù)欲得到的效果適當(dāng)確定，可在每次需要發(fā)揮效果時(shí)攝取，也可在日常生活中攝取以發(fā)揮效果。當(dāng)然在體育運(yùn)動等肌肉運(yùn)動過程中感到肉體疲勞時(shí)、在計(jì)算操作等的連續(xù)作業(yè)中感到精神疲勞時(shí)服用，可期待能促進(jìn)疲勞恢復(fù)，在預(yù)先服用之后再進(jìn)行勞動、體育運(yùn)動等時(shí)也可預(yù)防疲勞。此外，通過在體育運(yùn)動之前或體育運(yùn)動過程中攝取，可期待提高耐力。而且通過日常攝取，也可預(yù)防疲勞及伴隨疲勞的疾病。
考慮到含有穿心蓮內(nèi)酯的穿心蓮自古以來就口服攝取、安全性高，所以使小鼠每天內(nèi)服O. 5g/kg、持續(xù)10天內(nèi)服穿心蓮，可確認(rèn)在成長、食欲、排便、精神狀態(tài)、紅血球及白血球的數(shù)量、血紅蛋白及白血球的分類數(shù)值的任一項(xiàng)中均未見異常。但也有在2只小鼠的腹腔內(nèi)注射穿心蓮的煎劑(0. 5g/只)或水提取物(生藥lg/只)時(shí)24時(shí)間以內(nèi)即死亡的報(bào)道(中藥大辭典初版第三巻)。本發(fā)明者確認(rèn)了即使對小鼠進(jìn)行1000mg/kg體重的穿心蓮內(nèi)酯給藥也未見異常。因此，本發(fā)明的組合物中的穿心蓮內(nèi)酯是安全性高的有效成分，所以，只要是起到了所需作用又未呈現(xiàn)毒性的量，其配合量均無特別限制，可根據(jù)對象、病態(tài)、其進(jìn)行狀況、對呈味的影響(稍具有苦味)及其他的條件適當(dāng)選擇。 本發(fā)明者使用小鼠、大鼠的疲勞動物模型進(jìn)行探討的結(jié)果，在預(yù)先服用穿心蓮內(nèi)酯、或在疲勞負(fù)荷中服用以期預(yù)防、減輕精神的、肉體的及內(nèi)臟疲勞時(shí)，通過服用0. 25 200mg/kg體重的量即可發(fā)揮所需的抗疲勞作用。而對于已發(fā)生的肉體疲勞，為促進(jìn)疲勞恢復(fù)而服用穿心蓮內(nèi)酯時(shí)，服用0. 5 8mg/kg體重的量即可發(fā)揮抗疲勞作用。因此，本發(fā)明的組合物中的穿心蓮內(nèi)酯的含量即包括人在內(nèi)的動物每天的攝取量相對于攝取對象的體重為0. 01 500mg/kg體重、優(yōu)選0. 1 50mg/kg體重、更優(yōu)選0. 1 10mg/kg體重、特別優(yōu)選0.25 10mg/kg體重。特別是以人(成人)為對象、以獲得抗疲勞作用為目的而口服穿心蓮內(nèi)酯時(shí)， 一般可使每天的攝取量為0. 1 100mg、優(yōu)選0. 1 50mg、更優(yōu)選0. 1 10mg、特別優(yōu)選0. 25 10mg來進(jìn)行給藥。 且將穿心蓮內(nèi)酯作為其衍生物或這些的鹽等配合時(shí)，可通過換算為對應(yīng)的穿心蓮內(nèi)酯量并參照上述的量來確定其配合量。 a-硫辛酸是體內(nèi)存在的物質(zhì)，作為醫(yī)藥品適用于對硫辛酸的需要增大時(shí)的補(bǔ)充
(劇烈的肉體疲勞時(shí))、亞急性壞死性腦脊髓病、中毒性(由鏈霉素、卡那霉素所致)及噪音
性(職業(yè)性)的迷路性聾，認(rèn)為其安全性高，只要是可起到所需的作用又不呈現(xiàn)毒性的量，
其配合量可根據(jù)對象、病態(tài)、其進(jìn)行狀況、對呈味的影響、其他的條件適當(dāng)選擇。 本發(fā)明者使用小鼠的疲勞動物模型進(jìn)行探討的結(jié)果，在疲勞負(fù)荷中將a -硫辛酸
單獨(dú)、或與穿心蓮內(nèi)酯組合服用，以期預(yù)防及/或減輕精神的及肉體的疲勞時(shí)，通過服用
50mg/kg體重的量，可發(fā)揮單獨(dú)的抗疲勞效果及與穿心蓮內(nèi)酯(0. 25mg/kg體重)的協(xié)同的
抗疲勞效果。 由上可知，本發(fā)明的組合物中的a-硫辛酸含量相對于攝取對象的體重，其每天的攝取量希望按1 200mg/kg體重、優(yōu)選1 100mg/kg體重來給藥。特別是以人(成人)為對象以獲得抗疲勞作用為目的口服a-硫辛酸時(shí)， 一般每天的攝取量可按照10 400mg、優(yōu)選10 200mg、更優(yōu)選10 100mg的程度給藥。 即本發(fā)明的組合物在包括人在內(nèi)的動物每天的攝取量中含有O. 01 500mg/kg體重、優(yōu)選0. 1 50mg/kg體重、更優(yōu)選0. 1 10mg/kg體重、特別優(yōu)選0. 25 10mg/kg體重的穿心蓮內(nèi)酯，而且在各種情況下，含有1 200mg/kg體重、優(yōu)選1 100mg/kg體重的a-硫辛酸?；蛉?成人)每天的攝取量中含有O. 1 100mg、優(yōu)選0. 1 50mg、更優(yōu)選0. 1 10mg、特別優(yōu)選0. 25 10mg的穿心蓮內(nèi)酯，而且在各種情況下，含有10 400mg、優(yōu)選10 200mg、更優(yōu)選10 100mg的a -硫辛酸。 1天的攝取可分單次或多次(例如2或3次)進(jìn)行。即本發(fā)明的組合物在人(成人)每次的攝取量中含有0. 03 50mg、優(yōu)選0. 05 25mg、更優(yōu)選0. 03 5mg、特別優(yōu)選0. 13 5mg的穿心蓮內(nèi)酯，且在各種情況下，含有3 200mg、優(yōu)選3 100mg、更優(yōu)選3 50mg的a-硫辛酸。 且將a _硫辛酸以其衍生物、其鹽等配合時(shí)，可通過換算為對應(yīng)的a -硫辛酸量并參照上述的量來確定其配合量。 本發(fā)明的抗疲勞劑不僅對人，對役用家畜、獵犬、賽馬、寵物動物及其他的動物均有效。 穿心蓮內(nèi)酯對pH、水分、氧化、光、熱等的穩(wěn)定性非常高。因此，穿心蓮內(nèi)酯可直接
在本發(fā)明的組合物中使用，也可根據(jù)目的不同，使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法制成飲食
品、調(diào)料、酒精飲料、功能食品、醫(yī)藥品等的各種形態(tài)。特別是本發(fā)明的組合物可制成口服用
醫(yī)藥品、食品(功能性食品、健康補(bǔ)充食品、營養(yǎng)功能食品、特殊用途食品、特定保健食品、
營養(yǎng)補(bǔ)助食品、健康食品、飲食療法用食品、綜合健康食品、營養(yǎng)強(qiáng)化劑等)。 作為其具體的形態(tài)可例舉固狀、半流體狀、流體狀等。作為固狀食品可例舉糖果、
水果糖、含片、口香糖、薄片狀、薄板狀、藥片、膠囊等的片劑、顆粒粉末等的形態(tài)的一般食品
及健康食品。作為半流體狀食品可例舉糊狀、凍狀、凝膠狀等，此外，作為流體狀食品可例舉
11果汁、清涼飲料、茶、飲料劑(例如，運(yùn)動飲料)、酒類等形態(tài)的一般食品及健康食品。
且本發(fā)明的組合物進(jìn)一步包含a-硫辛酸時(shí)，可使a-硫辛酸與穿心蓮內(nèi)酯在同樣的給藥單位中含有、或也可使這些有效成分在各給藥單位中含有。 本發(fā)明的組合物除上述穿心蓮內(nèi)酯類及a -硫辛酸以外，還可根據(jù)需要含有任意的添加劑、通常的醫(yī)藥組合物、飲食物中使用的任意的成分。作為這些添加劑及/或成分的例子，可例舉維生素E、維生素C等的維生素類、糖類、賦形劑、崩解劑、乳化劑、收縮劑(等張劑)、緩沖劑、助溶劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑、著色劑、香料、凝固劑、PH調(diào)節(jié)劑、增粘劑、提取物粉末、生藥、無機(jī)鹽等。 此外，在本發(fā)明的組合物中，可在包裝、容器或說明書上表示有效成分的種類、其具體的用途(例如用于提高耐力、用于增強(qiáng)體力、用于減輕疲勞、用于促進(jìn)疲勞恢復(fù)、用于緩和慢性疲勞、用于緩和內(nèi)臟疲勞、用于維持健康等)及/或其具體的使用方法(例如攝取量、攝取次數(shù)、攝取方法)。 如后述實(shí)施例中所述，可知本發(fā)明者確認(rèn)了穿心蓮內(nèi)酯及穿心蓮內(nèi)酯和a-硫辛酸的組合不僅對肉體疲勞有效，對精神疲勞、內(nèi)臟疲勞也有效。因此，通過將穿心蓮內(nèi)酯或穿心蓮內(nèi)酯和a -硫辛酸的組合例如通過與專利文獻(xiàn)1 5中記載的、以往的具有增強(qiáng)體力的作用、促進(jìn)疲勞恢復(fù)作用的組合物、與以疲勞時(shí)等的營養(yǎng)補(bǔ)充為目的的組合物同時(shí)或分別組合后口服攝取，可期待加成或協(xié)同發(fā)揮各種增強(qiáng)體力的作用、提高耐力的作用、抗疲勞作用。 作為可在本發(fā)明的組合物中含有的其他有效成分，可例舉例如維生素B1、維生素B2、維生素B6、維生素B12、煙酸、維生素C、維生素D、維生素E、泛酸等的維生素類；纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、色氨酸、丙氨酸、谷氨酸、精氨酸等的必需氨基酸類；鈣、鎂、鐵、鋅、銅等的礦物質(zhì)類；a _亞麻酸、EPA、 DHA、花生四烯酸、二十八醇、?；撬?、葡糖醛酸、茶氨酸、Y-氨基丁酸、CoQ10、左旋肉堿、多酚類、兒茶素類、黃嘌呤衍生物、肽類、蛋白質(zhì)類等，但不限于此。 本發(fā)明的組合物也可用于因疲勞而引起的皺紋、皮膚粗糙等的美容中。已知疲勞
的積累導(dǎo)致新陳代謝的降低，其結(jié)果會引起皺紋、皮膚粗糙等。 實(shí)施例 以下根據(jù)實(shí)施例說明本發(fā)明，但本發(fā)明不限于這些實(shí)施例。
實(shí)施例1浸水睡眠剝奪試驗(yàn)(游泳時(shí)間的測定) 使用將Tanaka等的方法(Neuroscience Let. 352， 159-162， 2003)中的一部分改變后的方法，分析穿心蓮內(nèi)酯對浸水睡眠剝奪疲勞的效果。即作為被測動物使用8周齡的雄性Balb/c小鼠，將小鼠分成5組(1組5 10只)，使平均體重均等。其中4組為浸水飼養(yǎng)組，通過將水溫23t:的自來水代替地墊(紙片)放入飼養(yǎng)箱并使水深為7mm進(jìn)行飼養(yǎng)，從而進(jìn)行小鼠浸水睡眠剝奪試驗(yàn)。在2天的浸水飼養(yǎng)中，將穿心蓮內(nèi)酯(Aldrich公司、純度98% ) 1天1次、以0. 5、2、8mg/kg體重的量強(qiáng)制經(jīng)口給藥(浸水飼養(yǎng)穿心蓮內(nèi)酯給藥組)。在2天的浸水飼養(yǎng)中，1天1次將蒸餾水強(qiáng)制經(jīng)口給藥的組作為對照組(浸水飼養(yǎng)對照組)。將剩余的l組作為通常飼養(yǎng)組，在鋪有通常的地墊(紙片)的飼養(yǎng)箱內(nèi)飼養(yǎng)，在2天的飼養(yǎng)中，l天l次將蒸餾水強(qiáng)制經(jīng)口給藥(通常飼養(yǎng)對照組)。2天后，在小鼠的尾部加上相當(dāng)于體重的8%的重物，強(qiáng)制使其在直徑18cm、水深30cm的水槽中游泳，測定小鼠游到?jīng)]入水中10秒以上為止的時(shí)間(游泳時(shí)間)(重物負(fù)荷強(qiáng)制水泳試驗(yàn))。 浸水飼養(yǎng)組的小鼠由于因浸水睡眠剝奪而引起的疲勞，所以與通常飼養(yǎng)組的小鼠相比游泳時(shí)間縮短。通過分析將穿心蓮內(nèi)酯給藥時(shí)浸水飼養(yǎng)組的小鼠的游泳時(shí)間的縮短所恢復(fù)的程度，從而判定穿心蓮內(nèi)酯對浸水睡眠剝奪疲勞的效果。結(jié)果如圖1(A)所示。圖中，*表示根據(jù)student t檢驗(yàn)的顯著性水平為0. 05%的顯著差異、**表示顯著性水平為0.01%的顯著差異。 由圖1(A)的結(jié)果可知，浸水飼養(yǎng)對照組的游泳時(shí)間與通常飼養(yǎng)對照組相比顯著縮短。另外，浸水飼養(yǎng)穿心蓮內(nèi)酯給藥組的游泳時(shí)間的縮短被抑制并呈劑量依賴關(guān)系。由此可認(rèn)為將穿心蓮內(nèi)酯在浸水睡眠剝奪負(fù)荷中給藥時(shí)，顯著減輕了由浸水睡眠剝奪負(fù)荷所引起的疲勞。 此外，除了使穿心蓮內(nèi)酯的量為1天1次、0. 25mg/kg體重以外，與上述同樣進(jìn)行試驗(yàn)，其結(jié)果表示于圖1(B)中。即使是0.25mg/kg體重的量也可確認(rèn)游泳時(shí)間的縮短得到了抑制。而且，除了使穿心蓮內(nèi)酯的量為1天1次、200mg/kg體重以外，與上述同樣進(jìn)行試驗(yàn)，其結(jié)果表示于圖1(C)中。即使是200mg/kg體重的量，也可確認(rèn)游泳時(shí)間的縮短得到了抑制，且未見對小鼠的毒性。
實(shí)施例2肝腫疲勞的測l定 使用將Tanaka等的方法(Neuroscience Let. 352， 159-162， 2003)中的一部分改變后的方法，分析穿心蓮內(nèi)酯對浸水睡眠剝奪疲勞的效果。即作為被測動物使用8周齡的雄性Balb/c小鼠，將小鼠分成3組(1組5 10只)，使平均體重均等。其中2組為浸水飼養(yǎng)組，通過將水溫23t:的自來水代替地墊(紙片)放入飼養(yǎng)箱并使水深為7mm進(jìn)行飼養(yǎng)，從而進(jìn)行小鼠浸水睡眠剝奪試驗(yàn)。在2天的浸水飼養(yǎng)中，將穿心蓮內(nèi)酯(Aldrich公司、純度98% ) 1天1次、以8mg/kg體重的量強(qiáng)制經(jīng)口給藥(浸水飼養(yǎng)穿心蓮內(nèi)酯給藥組)。在2天的浸水飼養(yǎng)中，1天1次將蒸餾水強(qiáng)制經(jīng)口給藥的組作為對照組(浸水飼養(yǎng)對照組)。將剩余的l組作為通常飼養(yǎng)組，在鋪有通常的地墊(紙片)的飼養(yǎng)箱內(nèi)飼養(yǎng)，在2天的飼養(yǎng)中，1天1次將蒸餾水強(qiáng)制經(jīng)口給藥(通常飼養(yǎng)對照組)。2天后，采集小鼠的血液及肝臟。從血液中分離血清，將血清中的GOT(谷草轉(zhuǎn)氨酶-glutamic oxalacetictransaminase)及GPT(谷丙轉(zhuǎn)氨酶(glutamic pyruvic transaminase))用小型生物化學(xué)自動分析裝置(株式會社日立制作所7070形)測定。且從肝臟中將過氧化脂質(zhì)用TBARS(硫代巴比妥酸反應(yīng)物(Thiobarbituric acidreactive substances))量測定。TBARS :每單位肝臟重量力口入4(w/v)倍量的1. 15% KC1溶液，使用Physcotron(日音醫(yī)理科器械制作所制)制備試樣勻槳，根據(jù)Ohkawa et al. Anal. Biochem. 95. 351-358， 1979的方法計(jì)算TBARS值。結(jié)果如圖2(A) (C)所示。圖中，*表示根據(jù)student t檢驗(yàn)的顯著性水平為0. 05%的顯著差異、**表示顯著性水平為0. 01%的顯著差異。 由圖2的結(jié)果可知，浸水飼養(yǎng)對照組的血清中GOT量(圖2 (A))、血清中GPT量(圖2(B))及肝臟TBARS量(圖2(C))與通常飼養(yǎng)對照組相比顯著增加。另一方面，浸水飼養(yǎng)穿心蓮內(nèi)酯給藥組抑制了這些標(biāo)記物的增加。由此可認(rèn)為將穿心蓮內(nèi)酯在浸水睡眠剝奪負(fù)荷中給藥時(shí)，顯著減輕了浸水睡眠剝奪負(fù)荷所引起的肝臟疲勞。
實(shí)施例3強(qiáng)制運(yùn)動試驗(yàn) 作為被測動物使用6周齡的雄性Sprague Dawley系大鼠。在試驗(yàn)開始前一天，將大鼠按各組8只分成5組。從試驗(yàn)當(dāng)天清晨起所有的動物均為絕食狀態(tài)。其中，4組作為運(yùn) 動負(fù)荷組，通過動物跑步機(jī)強(qiáng)制步行裝置(MK-680、室町機(jī)械制)施加運(yùn)動負(fù)荷(傳送帶速 度10m/分鐘、傾斜角5%斜坡、3小時(shí))。負(fù)荷運(yùn)動結(jié)束后，將穿心蓮內(nèi)酯(Aldrich公司、純 度98%)以0.5、2、8mg/kg體重的量強(qiáng)制經(jīng)口給藥(運(yùn)動負(fù)荷穿心蓮內(nèi)酯給藥組)。運(yùn)動 負(fù)荷結(jié)束后，將蒸餾水強(qiáng)制經(jīng)口給藥的組作為對照組(運(yùn)動負(fù)荷對照組)。剩余的1組不施 加運(yùn)動負(fù)荷而將蒸餾水強(qiáng)制經(jīng)口給藥(無運(yùn)動負(fù)荷對照組)。其后，將大鼠放入利用紅外 線傳感器的自發(fā)運(yùn)動測定裝置(Supermex、室町機(jī)械制)中，測定0 2小時(shí)(探索行為)、 2 14小時(shí)(暗期)的自發(fā)運(yùn)動量。 運(yùn)動負(fù)荷組的大鼠與無運(yùn)動負(fù)荷組的大鼠相比，探索行為(對于新型環(huán)境的探索 行為)及暗期(暗期活動期的自發(fā)行動)的自發(fā)運(yùn)動量減少。由此可認(rèn)為該大鼠模型為反 映運(yùn)動負(fù)荷疲勞狀態(tài)的模型。通過分析將穿心蓮內(nèi)酯給藥時(shí)，運(yùn)動負(fù)荷組大鼠的自發(fā)運(yùn)動 量的減少所恢復(fù)的程度，判定穿心蓮內(nèi)酯對運(yùn)動負(fù)荷疲勞的效果。結(jié)果如圖3所示。圖中， **表示根據(jù)studentt檢驗(yàn)的顯著性水平為0. 01%的顯著差異。圖3 (A)表示0 2小時(shí) (探索行為)的自發(fā)運(yùn)動量，圖3(B)表示2 14小時(shí)(暗期)的自發(fā)運(yùn)動量。因考慮到從 測定開始的2小時(shí)之間，與探索行為同時(shí)，給藥材料的興奮作用也對測定有影響，所以，與2 小時(shí)后 14小時(shí)后的測定區(qū)別進(jìn)行。 從圖3的結(jié)果可知，運(yùn)動負(fù)荷對照組的自發(fā)運(yùn)動量在任何期間均比無運(yùn)動負(fù)荷對 照組顯著減少。另外，運(yùn)動負(fù)荷穿心蓮內(nèi)酯給藥組在將穿心蓮內(nèi)酯以2mg/kg給藥時(shí)，可確 認(rèn)自發(fā)運(yùn)動量的增加。由此可認(rèn)為將穿心蓮內(nèi)酯在運(yùn)動負(fù)荷后給藥時(shí)，促進(jìn)因運(yùn)動負(fù)荷引 起的疲勞的恢復(fù)。 實(shí)施例4血液中疲勞物質(zhì)的測定 將生物體的肌肉疲勞以血液中肌酸激酶量的變化為指標(biāo)進(jìn)行探討。作為被測動物 使用6周齡的雄性Sprague Dawley系大鼠，將實(shí)施例3稍作改變作為強(qiáng)制運(yùn)動負(fù)荷動物。 在強(qiáng)制運(yùn)動負(fù)荷開始2天前，將大鼠按各組8只分成5組。對于其中的3組，將穿心蓮內(nèi)酯 (Aldrich公司、純度98X )按照O. 5、2、8mg/kg體重的量以1天2次、也包含強(qiáng)制運(yùn)動負(fù)荷 當(dāng)天共計(jì)5次在強(qiáng)制運(yùn)動負(fù)荷開始前強(qiáng)制經(jīng)口給藥(運(yùn)動負(fù)荷穿心蓮內(nèi)酯給藥組)。剩余 的2組作為對照組，同樣將蒸餾水強(qiáng)制經(jīng)口給藥。強(qiáng)制運(yùn)動負(fù)荷當(dāng)天，使全部動物從被測樣 品給藥后開始處于絕食狀態(tài)，對照組中的1組不施加運(yùn)動負(fù)荷，將蒸餾水強(qiáng)制經(jīng)口給藥(無 運(yùn)動負(fù)荷對照組)。對于其他的4組動物，通過動物跑步機(jī)強(qiáng)制步行裝置(MK-680、室町機(jī) 械制)施加運(yùn)動負(fù)荷(傳送帶速度從15m/分鐘開始以lm/分鐘漸增后，以25m/分鐘速度 20分鐘、傾斜角10%斜坡進(jìn)行)。探血在剛結(jié)束運(yùn)動負(fù)荷后從尾靜脈進(jìn)行，將血漿中的肌酸 激酶活性通過酶法用生物化學(xué)自動分析裝置(株式會公司日立制作所7070形)測定。
運(yùn)動負(fù)荷組的大鼠與無運(yùn)動負(fù)荷組的大鼠相比肌酸激酶活性上升。由此可認(rèn)為該 大鼠模型因運(yùn)動負(fù)荷而產(chǎn)生了肌肉疲勞。通過分析將穿心蓮內(nèi)酯給藥時(shí)，運(yùn)動負(fù)荷組大鼠 的肌酸激酶活性的上升被抑制的程度，即可判定穿心蓮內(nèi)酯給藥對肌肉疲勞的效果。結(jié)果 如圖4所示。 由圖4的結(jié)果可知，運(yùn)動負(fù)荷對照組的肌酸激酶活性與無運(yùn)動負(fù)荷對照組相比大 幅上升。另外，運(yùn)動負(fù)荷穿心蓮內(nèi)酯給藥組中，將穿心蓮內(nèi)酯以2mg/kg給藥時(shí)，可確認(rèn)肌酸 激酶活性的降低。由此可認(rèn)為將穿心蓮內(nèi)酯在運(yùn)動負(fù)荷前給藥時(shí)，抑制由運(yùn)動負(fù)荷所引起
14的肌肉疲勞。 輔你l 5將心糊麵/ g￡ a _齢鵬合齊斷兄T"白媳雄眠,錄I降微
根據(jù)實(shí)施例1中記載的方法，分析將穿心蓮內(nèi)酯及a _硫辛酸分別單獨(dú)、或組合向 小鼠給藥時(shí)對浸水睡眠剝奪疲勞的效果。作為被測動物，使用8周齡的雄性Balb/c小鼠， 將小鼠分為5組(1組5 6只)，使平均體重均等。其中，4組作為浸水飼養(yǎng)組，通過將水 溫23t:的自來水代替地墊(紙片)放入飼養(yǎng)箱并使水深為7mm進(jìn)行飼養(yǎng)，從而進(jìn)行小鼠浸 水睡眠剝奪試驗(yàn)。在2天的浸水飼養(yǎng)中，將穿心蓮內(nèi)酯(Aldrich公司、純度98% )及/或 a -硫辛酸1天1次、2天內(nèi)強(qiáng)制經(jīng)口給藥。將蒸餾水1天1次強(qiáng)制經(jīng)口給藥的組作為對照 組(浸水飼養(yǎng)對照組)。將剩余的l組作為通常飼養(yǎng)組，在鋪有通常的地墊(紙片)的飼養(yǎng) 箱內(nèi)飼養(yǎng)，在2天的飼養(yǎng)中，1天1次將蒸餾水強(qiáng)制經(jīng)口給藥(通常飼養(yǎng)對照組)。2天后， 使用與實(shí)施例1同樣的方法進(jìn)行重物負(fù)荷強(qiáng)制游泳試驗(yàn)。 實(shí)施例5 ; (5a)穿心蓮內(nèi)酯0. 25mg/kg體重、(5b) a 二硫辛酸50mg/kg體重、(5c) 穿心蓮內(nèi)酯0. 25mg/kg體重+ a -硫辛酸50mg/kg體重 實(shí)施例5的結(jié)果如圖5所示。浸水飼養(yǎng)對照組的游泳時(shí)間與通常飼養(yǎng)對照組相比 顯著縮短，另一方面，在浸水飼養(yǎng)穿心蓮內(nèi)酯0.25mg/kg體重的單獨(dú)給藥組(5a)、或a-硫 辛酸50mg/kg體重(5b)的單獨(dú)給藥組的各組中，游泳時(shí)間的縮短均得到抑制。而且，在穿 心蓮內(nèi)酯及a-硫辛酸的組合給藥組中，在穿心蓮內(nèi)酯(0. 25mg/kg體重)和a _硫辛酸 (50mg/kg體重)的組合(5c)中，游泳時(shí)間的縮短受到協(xié)同抑制。即將通常飼養(yǎng)對象組的游 泳時(shí)間減去浸水飼養(yǎng)對象組的游泳時(shí)間后的時(shí)間作為100%時(shí)，各藥劑給藥組的增加率在 穿心蓮內(nèi)酯單獨(dú)給藥組中增加5%，在a-硫辛酸單獨(dú)給藥組中增加13X，而在將穿心蓮內(nèi) 酯和a-硫辛酸組合給藥的組中協(xié)同增加51X。
實(shí)施例6處方例(制劑例1)膠囊劑(成人每天攝取1粒。) 分別量取下述成分(1) (3)，將總計(jì)200mg填充到膠囊中。(成分) (mg) (1)穿心蓮內(nèi)酯(Aldrich公司制、純度98X ) 50 (2)糊精 145 (3) 二氧化硅 5 將下述成分(1) (5)在成分(6)中溶解，每120mL分注于褐色瓶中后進(jìn)行高溫 蒸煮殺菌(12rC、15分鐘)，得到含有穿心蓮內(nèi)酯的飲料。(成分)(%)(1)穿心蓮內(nèi)酯(Aldrich公司制、純度98X )0. 25(2)乳清肽(DVM JAPAN公司制WE80B)1. 77(3)抗壞血酸鈉0. 12(4)蔗糖2. 65(5)檸檬酸0. 21(6)精制水95. 0(制劑例3)動物用飼料
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配合下述成分(1) (8)，得到含有穿心蓮內(nèi)酯的動物用詞料。
(成分)(重量％)(1)玉米10 50(2)高粱5 30(3)大麥0 20(4)大豆油餅0 40(5)麥麩0 20(6)礦物質(zhì)0 5(7)維生素0 3(8)穿心蓮內(nèi)酉l旨(Aldrich公司制、純度98% )0. 001 0. 0權(quán)利要求
一種抗疲勞劑，其特征在于，其以穿心蓮內(nèi)酯為有效成分。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1中所述的抗疲勞劑，其為用于預(yù)防或治療與疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài) 的醫(yī)藥組合物或飲食物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2中所述的抗疲勞劑，其中，與疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)選自慢性疲勞 綜合征、疲勞過度、肉體疲勞、精神疲勞及內(nèi)臟疲勞。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1 3中任一項(xiàng)所述的抗疲勞劑，其中，包含人在內(nèi)的動物每天的攝取 量中含有0. 01 500mg/kg體重的穿心蓮內(nèi)酯。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1 3中任一項(xiàng)所述的抗疲勞劑，其中，成人每天的攝取量中含有穿心 蓮內(nèi)酯0. 1 100mg。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1 5中任一項(xiàng)所述的抗疲勞劑，其中，進(jìn)一步含有a -硫辛酸。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6中所述的抗疲勞劑，其中，包含人在內(nèi)的動物每天的攝取量中含有 0. 01 500mg/kg體重的穿心蓮內(nèi)酯以及含有1 200mg/kg體重的a -硫辛酸。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6中所述的抗疲勞劑，其中，成人每天的攝取量中含有O. 1 100mg的 穿心蓮內(nèi)酯及10 400mg的a -硫辛酸。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1 8中任一項(xiàng)所述的抗疲勞劑，其用于單次攝取、多次攝取或日常攝取。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1 9中任一項(xiàng)所述的抗疲勞劑，其為動物用醫(yī)藥、動物用飼料或動 物用飲料的添加物、動物用飼料或動物用飲料。
11. 一種口服組合物，其特征在于，其含有穿心蓮內(nèi)酯及a-硫辛酸。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于提供對人、動物等安全、可在日常生活中持續(xù)攝取、具有抗疲勞作用、對與疲勞有關(guān)的疾病或狀態(tài)的預(yù)防或治療有效的組合物。具體地說，提供將穿心蓮內(nèi)酯根據(jù)需要與α-硫辛酸共同作為有效成分而含有的抗疲勞劑、以及含有穿心蓮內(nèi)酯及α-硫辛酸的新型口服組合物。本發(fā)明對用于慢性疲勞綜合征、疲勞過度、肉體疲勞、精神疲勞及內(nèi)臟疲勞的預(yù)防或治療上有用。
文檔編號A61P3/02GK101742999SQ20088001785
公開日2010年6月16日 申請日期2008年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月31日
發(fā)明者前田哲史, 齋藤佳世, 淺見純生, 立石法史 申請人:三得利控股株式會社