一種同時測定清火梔麥片中梔子苷、穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種同時測定清火梔麥片中梔子苷、穿心蓮 內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 清火梔麥片收載于中國藥典2010年版一部。由穿心蓮、梔子、麥冬組成，具有清 火、解毒、涼血、消腫之功效，用于咽喉腫痛、急性扁桃體炎、發(fā)熱、頭痛、牙痛、目赤、心火旺 盛、睡眠不佳等。中國藥典2010版中以梔子苷、穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯為指標成分 對清火梔麥片進行質(zhì)量控制，采用HPLC法，用甲醇-水和乙腈-水兩個體系，對穿心蓮內(nèi)酯 類成分和梔子苷分別進行測定，操作復雜。雖然有報道同時測定清火梔麥片中的三種有效 成分，但該方法需要具有三元或三元以上栗系統(tǒng)的高效液相色譜儀，不利于基層企業(yè)的推 廣。為解決上述問題，發(fā)明人提出本發(fā)明。
[0003] 本發(fā)明采用反相高效液相色譜法，以甲醇-水為流動相，梯度洗脫，各測定成分波 長的轉(zhuǎn)換按出峰時間順序進行程序設定，達到了同時測定3種活性成分的目的。方法快速 靈敏，專屬性強，操作簡便，穩(wěn)定且重現(xiàn)性好，可以用于清火梔麥片及其衍生制劑的質(zhì)量控 制。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)同時測定清火梔麥片中梔 子苷、穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量：
[0005] 1 ?對照品溶液的配制
[0006] 1. 1單一對照品溶液：取梔子苷對照品用甲醇配制成濃度為40±5yg?mL1的溶 液，取穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品用甲醇分別配制成濃度為80±5yg?mL1的溶 液即可。
[0007] 1. 2混合對照品溶液：取梔子苷、穿心蓮內(nèi)酯、脫氧穿心蓮內(nèi)心蓮內(nèi)酯對照品，用 甲醇溶解配制成含梔子苷40±5yg?mL\穿心蓮內(nèi)酯80±5yg?mL\脫水穿心蓮內(nèi)酯 80±5yg?mL1的混合溶液即可。
[0008] 2.供試樣液的配制
[0009] 取清火梔麥片內(nèi)容物粉約0. 5g精密稱重后，置50mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處 理30min，放冷，加甲醇至刻度，搖勾，濾過，取續(xù)10ml后續(xù)濾液，即得。
[0010] 3.色譜條件：色譜儀：具有二元或二元以上栗體的液相色譜儀，如VARIAN-LC210、 島津-LC20A、AGILENT-LC160,等；高效液相色譜儀配置的檢測器為紫外檢測器；色譜柱： C18反相色譜柱，如：AgilentC18(250X4.6mm，5iim)、WelchUltimateC18(4.6umX250mm， 5_)、&〇11^11(：18(250\4.6111111，5_)，流動相為甲醇-水，梯度洗脫，洗脫程序為 ：0~ 10min，35 :65,10. 01 ~25min:53 :47 ;25. 01 ~40min:65 :35,流速 1.OmL?minS檢測波 長：梔子苷：240nm(0~lOmin)，穿心蓮內(nèi)酯：230nm(10. 01~25min)，脫水穿心蓮內(nèi)酯： 250nm(25. 01~40min);柱溫：室溫；進樣量：10yL;所用的對照品均由中國食品藥品檢定 研究院提供，配制對照品溶液和HPLC層析試劑均為色譜純級別，其它試劑為分析純級別。
[0011] 本發(fā)明具有以下優(yōu)點：
[0012] 本發(fā)明建立的HPLC測定方法能同時測定清火梔麥片中梔子苷、穿心蓮內(nèi)酯和脫 水穿心蓮內(nèi)酯含量，該方法快速靈敏，專屬性強，操作簡便，穩(wěn)定且重現(xiàn)性好，為該制劑的質(zhì) 量控制提供了可靠的評價方法。另外本發(fā)明建立的HPLC測定方法，使用了較為簡單的甲 醇-水梯度洗脫檢測色譜技術(shù)，對色譜儀的要求有所降低（含二元或以上栗體的色譜儀即 可），非常利于推廣應用。
【附圖說明】
[0013] 圖1梔子苷、穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯單一對照液色譜圖
[0014] 圖2梔子苷、穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯混合對照液色譜圖
[0015] 圖3清火梔麥片供試液色譜圖
[0016] 圖4陰性樣液色譜圖
【具體實施方式】
[0017] 下面將結(jié)合實施例，進一步闡明本發(fā)明，所舉實例只用于解釋本發(fā)明，但不限定本 發(fā)明的范圍。
[0018] 利用HPLC法同時測定清火梔麥片中梔子苷、穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含 量按照以下步驟進行：
[0019] 1?儀器與材料
[0020] 1. 1儀器與試藥
[0021] VARIAN210型高效液相色譜儀（美國瓦里安公司），EL204萬分之一克電子天平 (梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；KQ-250DE超聲波清洗機（昆山市超聲儀器有限公 司）；DFT-200手提式高速萬能粉碎機（溫嶺市林大機械有限公司）。
[0022] 甲醇（色譜純，西隴化工股份有限公司），水為超純水；梔子苷對照品（批號 110749-200714)、穿心蓮內(nèi)酯對照品（批號110797-200307)、脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品（批號 110854-201007)均購自中國食品藥品檢定研究院，
[0023] 1.2供試樣品
[0024] 清火梔麥片內(nèi)容物10批次，由廣西藥用植物園藥用資源開發(fā)中心根據(jù)《中國藥 典》2010版清火梔麥片處方，利用新工藝試制，批號分別為201401、201402、201403、201404、 201405、201406、201407、201408、201409、201410。
[0025] 2?方法與結(jié)果
[0026] 2. 1對照品溶液的配制
[0027] 2. 1. 1對照品混合儲備液：精密稱取梔子苷對照品0. 0051g，穿心蓮內(nèi)酯對照品 0. 0112g，脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品0. 0900g，置于同一 50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至 刻度，搖勻，即得混合對照品混合儲備液（濃度分別為：梔子苷102yg?ml\穿心蓮內(nèi)酯 224yg?ml\脫水穿心蓮內(nèi)酯180yg?ml3。
[0028] 2. 1. 2對照品混合溶液：分別精密量取對照品混合儲備液4ml，置10ml量瓶中，加 甲醇至刻度，搖勻，即得梔子苷濃度為40. 8yg?ml\穿心蓮內(nèi)酯濃度為80. 8yg?ml\脫 水穿心蓮內(nèi)酯濃度為80yg?ml1的對照品混合液。
[0029] 2. 2供試樣液及陰性樣液的配制
[0030] 2. 2. 1供試品溶液的配制：取清火梔麥片內(nèi)容物粉約0. 5g精密稱重后置50mL量 瓶中，加甲醇適量，超聲處理30min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取10ml后的續(xù)濾液， 即得。
[0031] 2. 2. 2陰性樣液的配制：按清火梔麥片處方的比例，制備不含梔子和穿心蓮的陰 性樣品，研細，稱取適量，按"2. 2. 1"項下方法操作，即得。
[0032] 2. 3色譜條件
[0033] 液相色譜儀：VARIAN-LC210,檢測器：紫外檢測器，色譜柱：Agilent Cls(250X4.6mm，5ym)，流動相為甲醇-水，梯度洗脫，洗脫