專利名稱：：用于治療子宮內(nèi)膜異位的藥物的制作方法用于治療子宮內(nèi)膜異位的藥物本發(fā)明涉及用于治療子宮內(nèi)膜異位的藥物。子宮內(nèi)膜異位是良性、慢性、婦科疾病。其可以定義為在子宮腔外出現(xiàn)子宮內(nèi)膜組織，包括腺上皮和基質(zhì)。其是良性婦科病癥，在女性患者亞群中，可能發(fā)展為侵襲性的疾病。子宮內(nèi)膜異位與多種令人痛苦的癥狀包括痛經(jīng)、性交困難、骨盆痛和降低的生育力有關(guān)。已知血管發(fā)生(其中由預(yù)先-存在的血管形成新血管的過程)可能在子宮內(nèi)膜異位的發(fā)展中是重要的，且血管滲透因子/血管內(nèi)皮生長因子(VP/VEGF)在血管生成，和在生理學(xué)和病理學(xué)血管發(fā)生中起作用。利用使用移植到無免疫應(yīng)答裸鼠中的人子宮內(nèi)膜組織的研究評估了抗生血管療法治療子宮內(nèi)膜異位的潛在效力。在移植子宮內(nèi)膜外植體后三周，施用4種不同的抗-血管形成藥劑(Nap等，2004)。全部4種抑制劑能夠減小構(gòu)建的外植體的尺寸，且終止新血管的形成。然而，已知的抗-血管形成藥劑是高度毒性的，且相當(dāng)難于引入到人臨床設(shè)置中。現(xiàn)在，意外地發(fā)現(xiàn)，包括多巴胺激動劑的組合物可以用于治療子宮內(nèi)膜異位。本發(fā)明因此提供多巴胺激動劑在制備用于治療和/或預(yù)防子宮內(nèi)膜異位的藥物中的用途。本發(fā)明還提供多巴胺激動劑在治療和/或預(yù)防子宮內(nèi)膜異位中的用途。在本文中，術(shù)語"子宮內(nèi)膜異位的治療"包括用于減少(去除)子宮腔外存在的子宮內(nèi)膜組織的量的治療(例如減少或去除子宮內(nèi)膜異位病灶)和/或用于減少和/或改善一種或多種與子宮內(nèi)膜異位有關(guān)的癥狀的治療(例如，用于改善和/或減少痛經(jīng)癥狀的治療，用于改善和/或減少性交困難癥狀的治療，和/或用于改善和/或減少骨盆痛癥狀的治療)。術(shù)語"子宮內(nèi)膜異位的治療"包括用于減少子宮腔外存在的子宮內(nèi)膜組織情形的數(shù)量，和/或用于減少子宮腔外存在的子宮內(nèi)膜組織情形尺寸的治療(例如減少子宮內(nèi)膜異位病灶的數(shù)量和/或尺寸)。術(shù)語"子宮內(nèi)膜異位的治療"包括用于減少子宮內(nèi)膜腺體數(shù)量的治療。術(shù)語"子宮內(nèi)膜異位的治4療"包括導(dǎo)致下列各種中的一種或多種的治療活性子宮內(nèi)膜異位病灶百分比顯著減少，子宮內(nèi)膜異位病灶中萎縮或退化組織的細(xì)胞和組織表現(xiàn)特征的顯著缺乏，和子宮內(nèi)膜異位病灶中的新血管數(shù)量的顯著減少。術(shù)語"子宮內(nèi)膜異位的治療"包括用于減少下列各項(xiàng)中一種或多種上子宮內(nèi)膜異位病灶的數(shù)量和/或尺寸的治療卵巢、子宮陷凹、子宮骶骨韌帶、子宮后部表面、寬韌帶、剩下的盆腔腹膜、腸、泌尿道(包括例如膀胱，和/或輸尿管)。術(shù)語子宮內(nèi)膜異位包括，例如，腹膜子宮內(nèi)膜異位、卵巢子宮內(nèi)膜異位和深處子宮內(nèi)膜異位。在本文中，術(shù)語多巴胺激動劑意指如多巴胺一樣起作用的化合物，例如，與多巴胺受體相互作用(例如特異性結(jié)合)從而模擬多巴胺作用的藥物。其不包括這樣的化合物，所述化合物排他地是"多巴胺能物質(zhì)"即排他地，通過不同作用機(jī)制增加多巴胺水平的化合物。術(shù)語多巴胺激動劑不包括US6359130中公開的橋連茚并吡咯并咔唑。以前發(fā)現(xiàn)多巴胺激動劑有效用于治療或預(yù)防卵巢過度刺激綜合征(OHSS)(WO2006117608)。這是其中毛細(xì)血管顯著增加其血管滲透性的病癥。發(fā)現(xiàn)多巴胺激動劑能夠逆轉(zhuǎn)該作用。然而，此處沒有公開子宮內(nèi)膜異位的病癥和抗-生血管療法用于治療子宮內(nèi)膜異位的潛在效力。本發(fā)明范圍內(nèi)的多巴胺激動劑包括，但不僅限于，金剛垸胺、溴隱亭、卡麥角林、喹高利特、利舒脲、培高利特、羅匹尼羅和普拉克索。用于本發(fā)明的優(yōu)選多巴胺激動劑是卡麥角林。用于本發(fā)明的優(yōu)選多巴胺激動劑是喹高利特。所謂的"部分多巴胺激動劑"(例如，特麥角脲)也可以按照本發(fā)明使用。然而，使用多巴胺激動劑是優(yōu)選的。優(yōu)選地，使用單一多巴胺激動劑。多巴胺激動劑可以以25微克/日-80mg/日，優(yōu)選50微克/日-5mg/日，更優(yōu)選300微克/日-lmg/日的劑量(例如，對人患者的口服劑量)施用，如對本領(lǐng)域中的那些技術(shù)人員明顯地，該范圍內(nèi)的合適劑量取決于待使用的多巴胺激動劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，多巴胺激動劑是卡麥角林。優(yōu)選地，卡麥角林以0.01-12.5mg/周，優(yōu)選0.1-10mg/周，更優(yōu)選0.5mg-5mg/周的劑量，更優(yōu)選以3.5mg/周-4mg/周的劑量(例如，對人患者的口服劑量)施用。多巴胺激動劑可以作為，例如，單次日劑量(例如，0.1mg/日-5mg/日，0.2mg/日-lmg/日，例如0.5mg/日)施用，或者可以將日劑量分成2或更多個在24小時時期內(nèi)的不同時間施用的亞-劑量。多巴胺激動劑(卡麥角林)可以作為處于以上水平的日劑量，或作為相等劑量，例如每周，每周2次，或每2日施用。在一種方案中，多巴胺激動劑(例如，卡麥角林)以3.5-12.5mg/周(例如4mg/周，7mg/周，10mg/周)的總劑量施用。在另一個實(shí)施方案中，多巴胺激動劑是喹高利特。優(yōu)選地，喹高利特以25-1000微克/日，優(yōu)選25-500微克/日，更優(yōu)選25-300微克/日的劑量(例如，對人患者的口服劑量)施用。多巴胺激動劑可以作為，例如，單次日劑量施用，或者可以將日劑量分成2或更多個在24小時時期內(nèi)的不同時間施用的亞-劑量。多巴胺激動劑(喹高利特)可以作為處于以上水平的日劑量，或作為相等劑量，例如每周，每周2次，或每2日施用。在另一個實(shí)施方案中，多巴胺激動劑是溴隱亭。優(yōu)選地，溴隱亭以10-80微克/日，優(yōu)選10-40mg/日的劑量(例如，對人患者的口服劑量)施用。在一個實(shí)施方案中，多巴胺激動劑作為子宮內(nèi)膜異位的唯一醫(yī)學(xué)治療使用。換言之，多巴胺激動劑可以在缺乏其他醫(yī)藥或手術(shù)治療的條件下[例如，在缺乏達(dá)那唑的條件下]使用。在另一個實(shí)施方案中，施用多巴胺激動劑可以與子宮內(nèi)膜異位的其他醫(yī)藥或手術(shù)治療[例如，NSAID禾口/或激素治療(達(dá)那唑、OCs、醋酸甲羥孕酮、其他孕酮、GnRH激動劑和拮抗劑、芳香酶抑制劑)]組合。在另一個實(shí)施方案中，手術(shù)治療或醫(yī)藥治療可以在使用多巴胺激動劑治療之前、過程中或之后使用。這些實(shí)施方案在實(shí)施例中更詳細(xì)討論，如下。還發(fā)現(xiàn)對有此需要的患者施用多巴胺激動劑可以提供重要的臨床益處，諸如，例如活性子宮內(nèi)膜異位病灶百分比的顯著減少，子宮內(nèi)膜異位病灶中蔞縮或退化組織的細(xì)胞和組織表現(xiàn)特征的顯著缺乏，和子宮內(nèi)膜異位病灶中的新血管數(shù)量的顯著減少。由于安全和適當(dāng)記錄的臨床使用記錄，基于多巴胺激動劑的藥物還具有高劑量耐受的優(yōu)點(diǎn)。此外，發(fā)現(xiàn)多巴胺激動劑(例如，卡麥角林)可以在具有治療有益作6用，和低副作用風(fēng)險(xiǎn)的條件下長時期(例如，l-3周(例如1-21天，例如1-14天)，l天-3個月，l天-6個月，l天-12個月，或l天-2年，或更長)施用。施用可以是以例如每日或每周劑量連續(xù)的，或可以由一個或多個，例如，數(shù)(例如1-3)周或數(shù)(例如1-3)月的中斷期斷開。只要疼痛(或其他癥狀)持續(xù)，就可以施用多巴胺激動劑。多巴胺激動劑(例如，卡麥角林，喹高利特)可以施用于懷孕的受試者。治療或預(yù)防子宮內(nèi)膜異位可能與子宮內(nèi)膜腺體量的減少有關(guān)。在本發(fā)明的實(shí)例中，作為發(fā)展子宮內(nèi)膜異位的一個因素，血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)受到多巴胺激動劑的靶向。同種型VEGF，2,和VEGF股似乎主要參與血管發(fā)生過程(Watkins,RH，等，美國生理學(xué)雜志(AmJPhysiol)1999,巻276,第858-67頁)。確定了2種針對VEGF的特異性內(nèi)皮細(xì)胞膜受體，艮卩VEGF受體-1(VEGFR-1，F(xiàn)lt-l)和VEGFR-2(Flk-〗/KDR)。VEGFR-2似乎主要參與調(diào)節(jié)血管發(fā)生(angiogenesis)和血管生成(vasculogenesis)。作為發(fā)展子宮內(nèi)膜異位的一個因素，VEGFR-2(KDR)可以因此被多巴胺激動劑靶向。作為發(fā)展子宮內(nèi)膜異位的一個因素，Notch-4可以受到多巴胺激動劑的靶向。作為發(fā)展子宮內(nèi)膜異位的一個因素，VEGF,VEGFR-2和Notch-4可以被多巴胺激動劑靶向。多巴胺激動劑作用的其他機(jī)制屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)。多巴胺激動劑作為藥用制劑施用。制劑可以按照本發(fā)明在藥用組合物中施用，所述藥用組合物可以任選地包括藥用鹽、緩沖劑、防腐劑和賦形劑。包括多巴胺激動劑作為活性劑的藥物制劑是本領(lǐng)域中公知的，且可商購。例如，卡麥角林可以以注冊商標(biāo)Cabaser和Sogilen/Dostinex獲得。所述可商購的多巴胺激動劑制劑治療子宮內(nèi)膜異位的用途符合本發(fā)明。選擇的施用模式應(yīng)該取決于受治療的病癥的緊急性和嚴(yán)重性，和需要的劑量。在無不能接受的副作用的條件下產(chǎn)生理想治療效果的任何施用模式與實(shí)施本發(fā)明有關(guān)。所述施用模式可以包括口服、直腸、局部、透皮、舌下、肌內(nèi)、腸胃外、靜脈內(nèi)、腔內(nèi)、陰道、和手術(shù)過程中使用的粘性基質(zhì)。配制用于按照本發(fā)明使用的組合物的多種方法記述在藥物賦形劑手冊7(HandbookofPharmaceuticalExcipients)，第三版，美國藥物協(xié)會(AmericanPharmaceuticalAssociation,USA)禾Q英國藥物出版社(PharmaceuticalPressUK)(2000)，和制藥學(xué)-劑量形式設(shè)計(jì)科學(xué)(Pharmaceutics-TheScienceofDosageFormDesign),ChurchillLivingston(1988)中。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，施用是口服的。適合于口服施用的組合物包括膠囊劑、扁囊劑、片劑、糖槳劑、酏劑或錠劑。按照本發(fā)明，在另一方面，提供治療或預(yù)防子宮內(nèi)膜異位的方法，其包括對有此需要的患者施用多巴胺激動劑的步驟。優(yōu)選地，多巴胺激動劑以包括一種或多種多巴胺激動劑作為活性成分的藥物制劑的形式施用。多巴胺激動劑可以以25微克/日-80mg/日，優(yōu)選50微克/日-5mg/日，更優(yōu)選300微克/日-lmg/日的劑量(例如，對人患者的口服劑量)施用，如對本領(lǐng)域中的那些技術(shù)人員明顯地，該范圍內(nèi)的合適劑量取決于待使用的多巴胺激動劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，多巴胺激動劑是卡麥角林。優(yōu)選地，卡麥角林以0.01-12.5mg/周，優(yōu)選0.1-10mg/周，更優(yōu)選0.5mg-5mg/周的劑量，更優(yōu)選以3.5mg/周-4mg/周的劑量(例如，對人患者的口服劑量)施用。多巴胺激動劑可以作為，例如，單次日劑量(或例如，0.1mg/日-5mg/日，0.2mg/日-lmg/日，例如0.5mg/日)施用，或者可以將日劑量分成2或更多個在24小時時期內(nèi)的不同時間施用的亞-劑量。多巴胺激動劑(卡麥角林)可以作為處于以上水平的日劑量，或作為相等劑量，例如每周，每周2次，或每2日施用。在一種方案中，多巴胺激動劑(例如，卡麥角林)以3.5-12.5mg/周(例如4mg/周，7mg/周，10mg/周)的總劑量施用。在另一個實(shí)施方案中，多巴胺激動劑是喹高利特。優(yōu)選地，喹高利特以25-1000微克/日，優(yōu)選25-500微克/日，更優(yōu)選25-300微克/日的劑量(例如，對人患者的口服劑量)施用。多巴胺激動劑可以作為，例如，單次日劑量施用，或者可以將日劑量分成2或更多個在24小時時期內(nèi)的不同時間施用的亞-劑量。多巴胺激動劑(喹高利特)可以作為處于以上水平的日劑量，或作為相等劑量，例如每周，每周2次，或每2日施用。在另一個實(shí)施方案中，多巴胺激動劑是溴隱亭。優(yōu)選地，溴隱亭以10-80mg/日，優(yōu)選10-40mg/日的劑量(例如，對人患者的口服劑量)施用。施用多巴胺激動劑可以與子宮內(nèi)膜異位的其他醫(yī)藥或手術(shù)治療[例如，NSAIDs禾卩/或激素治療(達(dá)那唑、OCs、醋酸甲羥孕酮、其他孕酮、GnRH激動劑和拮抗劑、芳香酶抑制劑)]組合。在另一個實(shí)施方案中，手術(shù)治療或醫(yī)藥治療可以在使用多巴胺激動劑治療之前、過程中或之后使用。申請人發(fā)現(xiàn)多巴胺激動劑(例如，卡麥角林)可以在具有治療有益作用，和低副作用風(fēng)險(xiǎn)的條件下長時期(例如，l-3周(例如1-21天，例如1-14天)，l天-3個月，1天-6個月，l天-12個月，或l天-2年，或更長)施用。施用可以是以例如每日或每周劑量連續(xù)的，或可以由一個或多個，例如，數(shù)(例如1-3)周或數(shù)(例如1-3)月的中斷期斷開。只要疼痛(或其他癥狀)持續(xù)，就可以施用多巴胺激動劑?；颊呖梢允菓言械?。治療或預(yù)防子宮內(nèi)膜異位可能與子宮內(nèi)膜腺體量的減少有關(guān)。現(xiàn)將參考實(shí)施例和附圖舉例說明本發(fā)明，其中圖l顯示在下述動物研究后，對照組，和用低劑量(0.05mg/kg/日)和高劑量(0.1mg/kg/日)卡麥角林處理的組活性的病灶百分比；圖la顯示三個確定的組中的腺體/基質(zhì)比[低和高卡麥角林("Cb2")劑量具有比對照更多的基質(zhì)和更少的腺體(*<0.05)]。圖2顯示對照和低和高劑量組的血管(mm3);圖3顯示對照、低和高劑量組動物中"成熟"和"新形成的"血管的百分比；圖4顯示對照和低和高劑量組的增殖指數(shù)；圖5顯示對照、低和高劑量組的VEGF,VEGFR-2(KDR)，Notch-4，Ang1和Wnt-l的相對表達(dá)；圖6a顯示三個確定的組(對照、低和高劑量組)中動物子宮內(nèi)膜植入物中多巴胺受體2(Dp-r2)和VEGF的存在；和圖6b顯示子宮內(nèi)膜異位病灶(左柱)和子宮內(nèi)膜(右柱)中VEGF,VEGFR-2(KDR)和D2R的相對表達(dá)。實(shí)施例1通過插入人子宮內(nèi)膜片段，在裸鼠中發(fā)展實(shí)驗(yàn)動物子宮內(nèi)膜異位模型。雌性小鼠(HsdAthimicNude-nu，HarlanlbericaSL,巴塞羅納，西班牙)分別飼養(yǎng)在處于層流過濾凈化罩中的高壓滅菌的籠子和襯墊上。動物室保持在26'C，12-h光照，12-h黑暗循環(huán)中，且用高壓滅菌的實(shí)驗(yàn)室嚙齒動物飲食(chow)和酸化的水隨意喂飼小鼠。所有的操作均在層流過濾凈化罩中進(jìn)行。在侵入程序前，使用ip注射的氯胺酮/美托咪定(75yg/g氯胺酮和1"g/g美托咪定)的混合物(Ketolai^,Parke-Davis,Espafia,Domtoi^,輝瑞,西班牙)麻醉小鼠，并且在侵入程序后使用ip注射的阿替美唑(Antisedan,SmithKlineBeecham，西班牙)lpg/g逆轉(zhuǎn)麻醉效果，均使用無菌儀器。在5周齡時，將含有18mg17p-雌二醇(美國創(chuàng)新研究(InnovativeResearchofAmerica),薩拉索塔(Sarasota),FL)的無菌60-d釋放膠囊sc置于每只動物的頸中。按照制造商的信息，膠囊提供血清濃度150-250pmol/升的激素的連續(xù)釋放，其在動情周期過程中的小鼠生理水平范圍內(nèi)。這種穩(wěn)定的雌激素生理水平促進(jìn)移植的人子宮內(nèi)膜的生長，并避免與不同動情周期階段相關(guān)的小鼠間差異。插入雌激素顆粒后4天，對下腹部中線處腹膜腔進(jìn)行開口，從而插入來自卵子提取供體的新鮮人子宮內(nèi)膜。這些片段通過膠水(Vetabond,3M動物保健產(chǎn)品(3MAnimalCareproducts),美國)粘在腹膜上。該流程容許模擬患有子宮內(nèi)膜異位的女性中發(fā)生的逆行月經(jīng)的病理情形。移植后3周，將動物分成3組。第一組是對照組，第二組是低劑量組，用0.05mg/kg/日口服卡麥角林處理，和高劑量組，用0.1mg/kg/日卡麥角林的口服劑量處理。處理后2周，處死動物，取樣子宮內(nèi)膜異位病灶，并進(jìn)行如下分析。結(jié)果顯示在圖l，la和2-6b中。多巴胺激動劑的抗-生血管作用通過免疫熒光法評估，共聚焦顯微鏡法中使用的抗體針對內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞(綴合的單克隆IgG2a-SMA-FITC，西格瑪(Sigma),StLouis，美國)中存在的馮維勒布蘭德因子(VonWillebrandfactor)(vWF單克隆IgGl，DAKO公司(DAKOCorp)，丹麥)產(chǎn)生。不是新形成的血管由賦予它們成熟性的平滑肌層圍繞。識別內(nèi)皮細(xì)胞使用vWF進(jìn)行，而成熟的血管通過a-SMA陽性染色識別。10因此，認(rèn)為vWF+/aSMA-血管是新的或不成熟的，而將vWF+/aSMA+血管分類為老的或成熟的血管。進(jìn)行形態(tài)測量學(xué)研究，從而測量植入物的面積和細(xì)胞密度。進(jìn)行了Ki-67(單克隆IgGlDAKO公司(DAKOCorp)，丹麥)抗體的免疫細(xì)胞化學(xué)，從而評估植入物的增殖活性。利用光學(xué)顯微鏡(OM)、透射電子顯微鏡(TEM)和組織化學(xué)染色檢測組織病理學(xué)和亞細(xì)胞學(xué)超微結(jié)構(gòu)變化。進(jìn)行光學(xué)顯微鏡法(OM)、透射電子顯微鏡法(TEM)和形態(tài)測量學(xué)，從而確定子宮內(nèi)膜腺體和基質(zhì)的存在，并研究亞細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化、植入物的面積和細(xì)胞密度。TaqMan實(shí)時PCR和2—^法用于分析下列各項(xiàng)的基因表達(dá)特征:促進(jìn)血管發(fā)生的三種不同的標(biāo)記(VEGF，VEGFR-2,Notch-4);血管生成素-l(Ang-1),即促進(jìn)存在的血管擴(kuò)大和對抗泄漏的抗血管發(fā)生標(biāo)記，和Wnt-l。證明實(shí)驗(yàn)植入物、人腹膜子宮內(nèi)膜異位病灶、和子宮內(nèi)膜中存在VEGF和多巴胺2型受體(Dp-r2)表達(dá)是利用TaqMan實(shí)時PCR和2-AAa法進(jìn)行的(圖6a，6b)。類似地，使用該方法證明人腹膜子宮內(nèi)膜異位病癥和子宮內(nèi)膜中存在VEGFR-2表達(dá)(圖6b)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析利用GmphPadInstatV3.0(GmphPad軟件，圣地亞哥，CA,美國)進(jìn)行。將該研究設(shè)計(jì)用于檢測處理和對照組中分析的不同標(biāo)記的差異。除非指定時，分類數(shù)據(jù)表示為數(shù)字和百分比，且數(shù)字?jǐn)?shù)據(jù)表示為平均值土平均值標(biāo)準(zhǔn)誤差(SEM)。顯著性定義為P0.05。對統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用方差的單向分析。毒性在該研究中，施用卡麥角林后，沒有小鼠死亡?？溄橇炙坪鯖]有改變小鼠的全面健康狀態(tài)，因?yàn)椴煌幚斫M中的小鼠體重沒有顯著區(qū)別(結(jié)果未顯示)。結(jié)果圖1顯示在上述動物研究后，對照組，和用低劑量(0.05mg/kg/日)和高劑量(0.1mg/kg/日)卡麥角林處理的組活性的病灶百分比。用低(58.6±9.7%)和高(60.4±8.4%)劑量處理的動物與對照相比(89.6±5.7%)具有活性病灶的顯著減少(p二0.0169)。用卡麥角林(低和高劑量組二者)處理的動物在與對照組相比時，具有顯著更少的活性病灶。換言之，使用卡麥角林的處理似乎減少該模型中活性子宮內(nèi)膜異位病灶的數(shù)量。OM和TEM研究顯示在對照組中，子宮內(nèi)膜異位病灶呈現(xiàn)高細(xì)胞基質(zhì)和完全再組織和結(jié)構(gòu)的組織學(xué)方面，如典型的人子宮內(nèi)膜異位病灶中可見的。然而，在處理的病灶中(高和低劑量卡麥角林)觀察到缺乏細(xì)胞性和組織性的松散基質(zhì)，這是萎縮或退化的組織的特征。圍繞腺體區(qū)域的人子宮內(nèi)膜基質(zhì)容易與肌肉-接合的鼠組織區(qū)分開。這些組織學(xué)結(jié)果通過形態(tài)測量學(xué)分析驗(yàn)證(圖la)。盡管各組間不存在細(xì)胞密度的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但是各組間存在腺體/基質(zhì)比的顯著(p^0.0093)差異，如圖la中所示，低和高卡麥角林劑量比對照具有更多的基質(zhì)和更少的腺體Cp0.05)。這說明卡麥角林處理可能與子宮內(nèi)膜腺體量的減少或縮減有關(guān)。圖2顯示對照、低和高劑量組的血管(mm3)，分為"成熟"血管和"新形成的"血管。對照組具有更多比例的新形成的血管(指示顯著的血管發(fā)生)，而低和高劑量組具有顯著更多比例的成熟血管，提示顯著減少的血管發(fā)生。這也通過組織學(xué)證明(結(jié)果未顯示)。這些結(jié)果說明在這種模型中，卡麥角林顯著減少新血管形成(血管發(fā)生)。圖3顯示對照和低和高劑量組中血管的百分比。對照組中總血管的約74%是新形成的血管，這說明顯著的血管發(fā)生。在另一方面，低和高劑量組中總數(shù)的約85-89%是成熟血管，這說明血管發(fā)生不顯著。這些結(jié)果說明在這種模型中，卡麥角林顯著減少新血管形成(血管發(fā)生)。圖4顯示增殖研究的結(jié)果。利用Ki-67抗體的免疫細(xì)胞化學(xué)研究(即利用針對Ki-67的抗體分析細(xì)胞增殖程度)用于利用本領(lǐng)域中己知的方法評估植入物的增殖活性。圖像計(jì)數(shù)軟件用于計(jì)數(shù)Ki-67陽性細(xì)胞，并且因此計(jì)算各組中的增殖指數(shù)。與對照組相比，在用卡麥角林(低和高劑量組二者)處理的動物中的病灶中觀察到增殖的顯著(PO.001)減少。病灶的血管發(fā)生狀態(tài)最初利用使用識別新0，+/0^^4八-)和老0，+/aSMA+)血管的抗體的免疫熒光法和共焦顯微鏡法(萊卡共聚焦軟件(LeicaConfocalSoftware))分析。使用針對內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞(ct-SMA)中存在的馮維勒布蘭德因子(vWF)產(chǎn)生的抗體的免疫熒光法可以用于測試抗生血管作用Cb2。不是新形成的血管由賦予它們成熟性的平滑肌層圍繞。識別內(nèi)皮細(xì)胞使用vWF進(jìn)行，而成熟的血管通過a-SMA陽性染色識別。因此，認(rèn)為vWF+/aSMA-血管是新的或不成熟的，而將vWF+/aSMA十血管分類為老的或成熟的血管。在對照組中，植入物呈現(xiàn)典型地在子宮內(nèi)膜異位病灶中可見的較高細(xì)胞基質(zhì)和完全再組織和結(jié)構(gòu)的組織學(xué)方面，而低和高劑量組中包括的小鼠中的植入物顯示具有松散細(xì)胞性和組織學(xué)的松散基質(zhì)，這是萎縮/退化組織的特征。形態(tài)測量學(xué)顯示各組間無細(xì)胞密度和基質(zhì)/腺體腺體區(qū)域的差別。TaqMan實(shí)時PCR和2—^1法用于分析下列各項(xiàng)的基因表達(dá)特征促進(jìn)血管發(fā)生的三種不同標(biāo)記(VEGF,VEGFR-2,Notch-4);血管生成素-1(Ang-1),即促進(jìn)存在的血管擴(kuò)大和對抗泄漏的抗血管發(fā)生標(biāo)記，和Wnt-l。持家18SrRNA用于標(biāo)準(zhǔn)化靶基因Ct值。相對于對照組Ct值(校準(zhǔn)因子)表示各組中的Ct值，從而通過2—AAet法計(jì)算相對表達(dá)。獲自肉瘤180腫瘤細(xì)胞(S-180)和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEQ的cDNA分別用作關(guān)于VEGF和VEGFR-2基因表達(dá)的陰性和陽性對照。使用脾作為關(guān)于Ang-l和Wnt-l的陽性對照，且使用肺作為Notch-4陽性對照。表1顯示前-生血管標(biāo)記(VEGF,VEGFR-2和Notch-4)的基因表達(dá)特征在用低和高卡麥角林("Cb2")劑量處理的植入物中，與對照相比，受到下調(diào)。認(rèn)為Ang-l和Wnt-l是抗-生血管標(biāo)記，它們的表達(dá)特征在用低和高Cb2劑量處理的小鼠植入物中，與對照相比，受到上調(diào)，這顯示卡麥角林處理與血管發(fā)生抑制有關(guān)。來自該表的相對表達(dá)數(shù)據(jù)通過繪圖顯示在圖5中。13表l:血管發(fā)生基因表達(dá)特征<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>數(shù)據(jù)顯示為平均值士SD研究多巴胺2型受體在進(jìn)行手術(shù)(腹腔鏡檢査)的女性中的人子宮內(nèi)膜組織和子宮內(nèi)膜異位植入物中的存在性。TaqMan實(shí)時PCR和2"^法用于確定多巴胺受體2("Dp-r2"，"D2R")和VEGF在獲自10名腹腔鏡檢查的女性的人子宮內(nèi)膜組織中，不僅在植入物中(圖6a)，而且在腹膜子宮內(nèi)膜異位病灶中(圖6b-其還包括關(guān)于VEGFR-2的數(shù)據(jù))的存在。關(guān)于Dp-r2的陽性和陰性對照分別是HUVEC和S-180cDNA細(xì)胞。在小鼠中，使用對照Ct值作為校準(zhǔn)因子，且在人腹膜病灶中，使用HUVECCt值作為校準(zhǔn)因子，從而通過2—^et法計(jì)算相對表達(dá)。圖6a顯示在三個確定的組中的動物的子宮內(nèi)膜植入物中存在VEGF和Dp-r2。當(dāng)用增加劑量的卡麥角林處理動物時，存在增加Dp-r2表達(dá)的趨勢。當(dāng)用增加劑量的卡麥角林處理動物時，存在減少VEGF表達(dá)的趨勢。圖6b顯示(左柱)不同類型子宮內(nèi)膜異位病灶中VEGF,VEGFR-2(KDR)和D2R("Dp-r2")的相對表達(dá)；紅色、白色和黑色。根據(jù)病灶的類型，在VEGF,VEGFR-2和Dp-r2表達(dá)中存在明顯的差異。圖6b還顯示(右柱)子宮內(nèi)膜中VEGF,VEGFR-2(KDR)和D2R("Dp-r2")的相對表達(dá)?；加凶訉m內(nèi)膜異位的受試者的子宮內(nèi)膜中VEGF禾口VEGFR-2的相對表達(dá)高于無子宮內(nèi)膜異位的那些，患有子宮內(nèi)膜異位的受試者的子宮內(nèi)膜中Dp-r2的相對表達(dá)低于無子宮內(nèi)膜異位的那些。這些結(jié)果顯示在表2中，如下。<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>結(jié)果說明多巴胺激動劑卡麥角林，以0.05和0.1mg/kg/日的劑量施用時，能夠(a)顯著減少活性子宮內(nèi)膜異位病灶數(shù)量；(b)導(dǎo)致子宮內(nèi)膜異位植入物中萎縮或退化組織中細(xì)胞性和組織性顯示特征的缺失；(c)顯著減少子宮內(nèi)膜異位植入物中新血管的數(shù)量；(d)顯著減少血管發(fā)生標(biāo)記的表達(dá)，和細(xì)胞增殖；和(e)增加組織退化和縮小子宮內(nèi)膜異位植入物。在人和嚙齒動物VEGF系統(tǒng)之間存在高度同源性，其說明上述嚙齒動物模型中顯示的活性適用于人類模型。該結(jié)果說明施用多巴胺激動劑對子宮內(nèi)膜異位具有顯著效果，其可能與對血管發(fā)生的作用有關(guān)。該結(jié)果可能與正位和異位子宮內(nèi)膜組織中存在多巴胺受體有關(guān)。實(shí)施例215用于口服的片劑制劑是0.5mg的卡麥角林(商購自Dostinex,輝瑞,西班牙)。其他實(shí)施例實(shí)施例A:在患有慢性骨盆痛后的患者進(jìn)行診斷腹腔鏡檢查，并診斷為患有III型子宮內(nèi)膜異位。在同一次腹腔鏡檢查時，患者進(jìn)行手術(shù)，諸如切除存在的病灶，并開始施用卡麥角林。實(shí)施例B:預(yù)先診斷為子宮內(nèi)膜異位的患者，其表現(xiàn)出骨盆痛和痛經(jīng)的癥狀。不手術(shù)，開始施用卡麥角林。實(shí)施例C:診斷為子宮內(nèi)膜異位的患者，對其進(jìn)行使用GnRH激動劑.(或達(dá)那唑或芳香酶抑制劑)的處理，并開始施用卡麥角林(在持續(xù)使用GnRH激動劑的條件下)一段時期。之后，不進(jìn)行治療3或6個月后，患者重新開始卡麥角林一段時期。權(quán)利要求1.多巴胺激動劑制備用于治療或預(yù)防子宮內(nèi)膜異位的藥物的用途。2.多巴胺激動劑，用于治療或預(yù)防子宮內(nèi)膜異位。3.按照權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的用途，其中所述多巴胺激動劑是金剛垸胺、溴隱亭、卡麥角林、喹高利特、利舒脲、培高利特、羅匹尼羅和普拉克索之一。4.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中所述多巴胺激動劑是以0.01-12.5mg/周的劑量施用的卡麥角林。5.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中所述多巴胺激動劑是以25-1000微克/日的劑量施用的喹高利特。6.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中所述多巴胺激動劑是以10-80mg/日的劑量施用的溴隱亭。7.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中施用所述多巴胺激動劑1天-2年的時期。8.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中所述多巴胺激動劑與用于子宮內(nèi)膜異位的其他手術(shù)或醫(yī)藥治療組合施用。9.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中所述多巴胺激動劑用于在懷孕的受試者中治療或預(yù)防子宮內(nèi)膜異位。10.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)被靶向。11.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中VEGFR-2被耙向。12.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中Notch-4被耙向。13.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中治療或預(yù)防子宮內(nèi)膜異位與減少子宮內(nèi)膜腺體的量有關(guān)。14.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中治療或預(yù)防子宮內(nèi)膜異位與減少(或去除)子宮腔外存在的子宮內(nèi)膜組織的量，和/或與減少和/或改善一種或多種與子宮內(nèi)膜異位有關(guān)的癥狀的治療有關(guān)。15.按照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中施用是口服的，和以如膠囊劑、扁囊劑、片劑、糖漿劑、酏劑或錠劑的組合物的形式進(jìn)行。16.治療或預(yù)防子宮內(nèi)膜異位的方法，所述方法包括對有此需要的患者施用多巴胺激動劑的步驟。17.按照權(quán)利要求16的方法，其中治療或預(yù)防子宮內(nèi)膜異位與減少(或去除)子宮腔外存在的子宮內(nèi)膜組織的量，和/或減少和/或改善一種或多種與子宮內(nèi)膜異位有關(guān)的癥狀的治療有關(guān)。全文摘要多巴胺激動劑制備用于治療或預(yù)防子宮內(nèi)膜異位的藥物的用途。文檔編號A61K31/473GK101641098SQ200880003828公開日2010年2月3日申請日期2008年2月1日優(yōu)先權(quán)日2007年2月1日發(fā)明者卡勒斯·西蒙-巴列斯,埃杜納·諾韋拉-梅斯特里,安東尼奧·佩利塞爾-馬丁內(nèi)斯申請人:輝凌國際制藥(瑞士)有限公司