專利名稱：牡荊素鼠李糖苷在制備擴(kuò)血管藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及牡荊素鼠李糖苷的應(yīng)用，更具體涉及牡荊素鼠李糖苷在制備擴(kuò)血管藥物中的應(yīng)用及其在制備治療心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：
牡荊素鼠李糖苷(rhamnosylvitexin，RHV)是從薔薇科山楂屬植物山里紅(Crataegus pinnatifida Bge.Var Major N.E.Br)或山楂(Crataeguspinnatifida Bge.)的干燥葉中提取的主要活性成分之一。目前臨床應(yīng)用的山楂葉提取物制劑較多，如益心酮片等。對于山楂葉總黃酮的研究也較多，但對其中各單一成分的研究較少，這對于解釋清楚山楂葉提取物的藥理作用還是感到比較缺憾。
眾所周知，山楂葉總黃酮對心血管疾病有較好的治療作用，作為其中含量最大的成分牡荊素鼠李糖苷在其中的貢獻(xiàn)有多大，又是通過什么樣的機(jī)制在起作用的，都需要作進(jìn)一步的研究。
朱曉新等.牡荊素鼠李糖苷對血管內(nèi)皮細(xì)胞血管活性物質(zhì)的影響.中國實驗方劑學(xué)雜志.2006，12(1)為觀察牡荊素鼠李糖苷對缺氧再給氧損傷內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生血管活性物質(zhì)的影響.采用臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)的方法，以缺氧再給氧造成內(nèi)皮細(xì)胞損傷，分別以放射免疫、Griess法測定細(xì)胞培養(yǎng)上清中6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)、血栓素B2(TXB2)、內(nèi)皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)含量.結(jié)果不同濃度的牡荊素鼠李糖苷均可使血管舒張因子NO、6-Keto-PGF1α產(chǎn)量明顯增加；縮血管因子ET-1、TXB2明顯減少.結(jié)論認(rèn)為牡荊素鼠李糖甙對缺氧再給氧損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的血管活性物質(zhì)具有一定的調(diào)節(jié)作用.該文從一個側(cè)面揭示了牡荊素鼠李糖甙對血管作用機(jī)制之一，但失之未見牡荊素鼠李糖甙對血管的直接作用研究。
王建農(nóng)等.調(diào)變山楂葉有效組分比例對犬血流動力學(xué)的影響.中國新藥雜志.2004，13(7)探討改變山楂葉心血管活性有效部位中2類主要有效組分原花青素和總黃酮的比例對實驗犬心臟血流動力學(xué)的影響。結(jié)果表明牡荊素鼠李糖苷與牡荊素葡萄糖苷為2∶1、總黃酮與原花青素含量為3∶1時顯著增加心排血量和每搏輸出量并且顯著降低總外周阻力。結(jié)論改變山楂葉中原花青素和總黃酮的比例對實驗犬血流動力學(xué)有顯著影響。該文反應(yīng)了山楂葉總黃酮與原花青素對血管的總體作用，其中各成分對血管的作用未見研究。
馬國.山楂葉總黃酮吸收機(jī)理與吸收調(diào)控研究.(博士論文)四川大學(xué).2007；許英愛.山楂葉總黃酮的腸吸收機(jī)理與藥動學(xué)及其緩釋微丸的研究.(博士論文)第二軍醫(yī)大學(xué).2007。兩位博士同時進(jìn)行了山楂葉總黃酮吸收機(jī)理的研究，從腸道吸收的角度探討了山楂葉總黃酮的藥動學(xué)機(jī)制，未見對牡荊素鼠李糖苷對血管的作用機(jī)制和對心腦血管的作用做進(jìn)一步探討。
文獻(xiàn)檢索未見單獨采用牡荊素鼠李糖苷在制備治療心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
檢索涉及牡荊素鼠李糖苷的中國專利，有公開專利4件，其中山楂葉總黃酮或山楂葉制劑的2件，從山楂葉中提取有效部位的專利2件。
檢索美國專利、歐洲專利、世界專利和日本專利，均未見有涉及牡荊素鼠李糖苷的公開專利。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供牡荊素鼠李糖苷在制備擴(kuò)血管藥物中的應(yīng)用和在制備治療心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
為觀察牡荊素鼠李糖苷直接對動脈的調(diào)節(jié)作用，本發(fā)明采用改進(jìn)的血管阻力與血管張力試驗測定方法，采用血管離體灌流技術(shù)，以排除活體實驗中各種神經(jīng)、體液因素對牡荊素鼠李糖苷擴(kuò)張動脈作用的影響。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)，牡荊素鼠李糖苷對離體動脈環(huán)具有濃度依賴性舒張作用，該作用通過內(nèi)皮依賴性和內(nèi)皮非依賴的方式產(chǎn)生，前者可能通過對血管內(nèi)皮細(xì)胞血管活性物質(zhì)的影響，拮抗α-腎上腺素受體激動劑，及阻斷血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的三磷酸肌醇敏感的鈣離子通道有關(guān)，并具有部分鈣拮抗劑的藥理作用特點。因此，發(fā)現(xiàn)牡荊素鼠李糖苷對血管內(nèi)皮細(xì)胞血管活性物質(zhì)及對無血管內(nèi)皮的血管的影響，具有直接擴(kuò)張動脈的新的藥理作用，提示牡荊素鼠李糖苷可單獨用于心腦血管疾病的治療藥物。
本發(fā)明所述的牡荊素鼠李糖苷可與藥效學(xué)允許的藥用賦形劑組合制備成制劑。
本發(fā)明所述的牡荊素鼠李糖苷與藥用賦形劑制備的制劑形式主要為注射制劑，包括水針，輸液和凍干粉針劑。
所述制劑的給藥形式選靜脈給藥。
根據(jù)我們研究發(fā)現(xiàn)，牡荊素鼠李糖苷能應(yīng)用于制備治療心腦血管疾病的藥物，其作用機(jī)制是其直接對血管的調(diào)節(jié)作用和對血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的血管活性物質(zhì)的調(diào)節(jié)作用。
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。

具體實施例方式 實施例1大鼠離體主動脈環(huán)的制備 1.實驗藥物 牡荊素鼠李糖苷由市場購得的純度≥98％的牡荊素鼠李糖苷。分子式C26H30O14，分子量566.5，mp210℃-212℃，淡黃色結(jié)晶。甲醇重結(jié)晶，經(jīng)HPLC測定純度為99.3％.用Krebs-Henseleit(K-H)液溶解(包含5μl/ml乙酸)，配制成10-2mol/L溶液，臨用前配成250mmol/L溶液。
2.實驗步驟 清潔級雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，體重240-260g。
迅速游離SD大鼠胸主動脈，置于4℃含95％O2和5％CO2混合氣體預(yù)飽和的K-H液中，剔除周圍結(jié)締組織，剪成3-4mm的血管環(huán)，期間注意保護(hù)血管環(huán)內(nèi)膜不受破壞。據(jù)實驗需要，采用棉簽?zāi)ゲ裂墉h(huán)內(nèi)表面的方法，將部分血管環(huán)制備成去除內(nèi)皮的模型。而后將血管環(huán)懸掛于預(yù)置10mL K-H液的浴槽內(nèi)，一端固定，一端通過張力換能器連接Medlab生物信號采集系統(tǒng)。在持續(xù)通95％O2和5％CO2的混合氣體的狀態(tài)下，調(diào)節(jié)其基礎(chǔ)張力至2.0g，并在37℃下穩(wěn)定60min，期間每15min換液1次。用KCI(60mmol·L-1)重復(fù)刺激3次，以誘發(fā)血管的最大收縮幅度。待血管環(huán)重新穩(wěn)定后，用苯氧腎上腺素(phenylephrine，PE)(1μmol·L-1)收縮血管環(huán)達(dá)峰值，加入乙酰膽堿(acetylcholine，Ach)(10μmol·L-1)檢驗血管內(nèi)皮完整性。若加Ach后使PE預(yù)收縮的血管環(huán)舒張80％以上，可認(rèn)為內(nèi)皮完整；反之，則認(rèn)為內(nèi)皮去除。以PE(1μmol·L-1)或KCI(60mmol·L-1)誘發(fā)最大收縮幅度為100％，以加入藥物后的血管張力幅度與PE或KCI誘發(fā)最大收縮幅度之間的比率反映血管張力的變化。
實施例2牡荊素鼠李糖苷對離體主動脈環(huán)舒縮功能的作用 (1)觀察牡荊素鼠李糖苷對基礎(chǔ)狀態(tài)血管環(huán)張力的影響 試驗方法與實施例1實驗步驟相同 牡荊素鼠李糖苷來源同實施例1。采用累積加藥法，每10min加入牡荊素鼠李糖苷1次，觀察累積給予牡荊素鼠李糖苷4×10-5-128×10-5mol/L，對內(nèi)皮完整和內(nèi)皮去除血管環(huán)的作用；對照組以K-H液代替牡荊素鼠李糖苷等容加入。結(jié)果表明累積給予牡荊素鼠李糖苷4×10-5-128×10-5mol/L，對內(nèi)皮完整或去除的血管環(huán)的基礎(chǔ)張力均無顯著影響，見表1、表2。
表1牡荊素鼠李糖苷對內(nèi)皮完整的基礎(chǔ)狀態(tài)主動脈環(huán)張力的影響(單位g)
表1牡荊素鼠李糖苷對內(nèi)皮去除的基礎(chǔ)狀態(tài)主動脈環(huán)張力的影響(單位g)
(2)牡荊素鼠李糖苷對PE或KCI預(yù)收縮血管環(huán)張力的影響 以60mmol·L-1KCl或0.3μmol·L-1PE預(yù)收縮內(nèi)皮完整的血管環(huán)，每10min1次累積加入牡荊素鼠李糖苷4×10-5-128×10-5mol/L觀察其對預(yù)收縮內(nèi)皮完整和內(nèi)皮去除血管環(huán)張力的作用；對照組以K-H液代替牡荊素鼠李糖苷等容加入。結(jié)果表明牡荊素鼠李糖苷對PE預(yù)收縮的內(nèi)皮完整和去除的血管環(huán)表現(xiàn)為濃度依賴性舒張作用，且對去除內(nèi)皮的血管環(huán)的舒張作用較內(nèi)皮完整時的作用更弱，參見表3、表4；各濃度牡荊素鼠李糖苷均不能使KCl誘導(dǎo)收縮的內(nèi)皮完整或去除的血管環(huán)顯著舒張，且對去除內(nèi)皮的血管環(huán)的舒張作用較內(nèi)皮完整時的作用更弱，見表5、表6。
表3牡荊素鼠李糖苷對苯氧腎上腺素預(yù)收縮的內(nèi)皮完整的基礎(chǔ)狀態(tài)主動脈環(huán)張力的影響(單位％)
注+P＜0.05，++P＜0.01。
表4牡荊素鼠李糖苷對苯氧腎上腺素預(yù)收縮的內(nèi)皮去除的基礎(chǔ)狀態(tài)主動脈環(huán)張力的影響(單位％)
注+P＜0.05，++P＜0.01。
表5牡荊素鼠李糖苷對KCl預(yù)收縮的內(nèi)皮完整的基礎(chǔ)狀態(tài)主動脈環(huán)張力的影響(單位％)
注+P＜0.05，++P＜0.01。
表6牡荊素鼠李糖苷對KCl預(yù)收縮的內(nèi)皮去除的基礎(chǔ)狀態(tài)主動脈環(huán)張力的影響(單位％)
注+P＜0.05，++P＜0.01。
實施例3牡荊素鼠李糖苷對不同預(yù)處理主動脈環(huán)舒縮功能的作用 (1)牡荊素鼠李糖苷對內(nèi)皮完整血管環(huán)的作用 以一氧化氮合酶(NOS)抑制劑左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)(0.1mmol·L-1)或前列腺素合成酶抑制劑消炎痛(10μmol·L-1)預(yù)處理內(nèi)皮完整的血管環(huán)15min，而后用80mmol·L-1KCI預(yù)收縮血管，累積法加入牡荊素鼠李糖苷4×10-5-128×10-5mol/L，觀察收縮血管環(huán)張力的作用；對照組以K-H液代替牡荊素鼠李糖苷等容加入。
內(nèi)皮完整的血管環(huán)用L-NAME 100μmol·L-1或消炎痛10μmol·L-1預(yù)孵后，能顯著抑制牡荊素鼠李糖苷4×10-5-128×10-5mol/L的血管舒張作用，結(jié)果見表7。
表7牡荊素鼠李糖苷對KCl預(yù)收縮的內(nèi)皮完整的基礎(chǔ)狀態(tài)主動脈環(huán)張力的影響(單位％)
注+P＜0.05，++P＜0.01。
實施例4牡荊素鼠李糖苷對內(nèi)皮去除血管環(huán)PE所致的兩種收縮反應(yīng)的作用 動脈穩(wěn)定后，換無鈣K-H液沖洗4次，再在無鈣K-H液中浸泡平衡20min，加入PE1.0μmol·L-1收縮血管，收縮后5min加入CaCl2 1.25mmol·L-1以恢復(fù)K-H液正常Ca2+濃度，血管環(huán)即再次出現(xiàn)收縮；待收縮穩(wěn)定后先用K-H液沖洗4次，平衡后再換無鈣K-H液沖洗、浸泡平衡，待反應(yīng)回到基線加入牡荊素鼠李糖苷40×10-5mol/L，孵育20min，重復(fù)以上步驟。比較給藥前后肌張力變化。牡荊素鼠李糖苷40×10-5mol/L，使PE 1.0μmol·L-1誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)鈣釋放引起的收縮顯著下降；牡荊素鼠李糖苷使PE引起細(xì)胞外鈣內(nèi)流產(chǎn)生的收縮也顯著下降，結(jié)果見表8。
表8牡荊素鼠李糖苷對PE所致的大鼠胸主動脈兩種收縮反應(yīng)的影響(單位g) 注+P＜0.05，++P＜0.01。
從上述試驗可以看出，牡荊素鼠李糖苷具有血管擴(kuò)張作用，根據(jù)實驗中牡荊素鼠李糖苷對PE預(yù)收縮的內(nèi)皮完整和去除的血管環(huán)表現(xiàn)不同，提示牡荊素鼠李糖苷更主要是通過血管內(nèi)皮依賴性和內(nèi)皮非依賴的方式產(chǎn)生作用；同時實驗結(jié)果還表明牡荊素鼠李糖苷對血管內(nèi)皮平滑肌細(xì)胞的內(nèi)鈣釋放和外鈣內(nèi)流有一定阻抑作用。這些研究結(jié)果可以擴(kuò)大牡荊素鼠李糖苷新的應(yīng)用領(lǐng)域，也進(jìn)一步提示牡荊素鼠李糖苷可以應(yīng)用于心腦血管疾病治療藥物。
權(quán)利要求
1.牡荊素鼠李糖苷在制備擴(kuò)血管藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牡荊素鼠李糖苷在制備擴(kuò)血管藥物中的應(yīng)用，其特征是在制備治療心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牡荊素鼠李糖苷在制備擴(kuò)血管藥物中的應(yīng)用，其特征是所述的牡荊素鼠李糖苷可與藥效學(xué)允許的藥用賦形劑組合制備成制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的牡荊素鼠李糖苷在制備擴(kuò)血管藥物中的應(yīng)用，其特征是所述的制劑形式為注射劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的牡荊素鼠李糖苷在制備擴(kuò)血管藥物中的應(yīng)用，其特征是所述制劑的給藥形式為靜脈給藥。
全文摘要
本發(fā)明公開了牡荊素鼠李糖苷在制備擴(kuò)血管藥物中的應(yīng)用，通過改進(jìn)的血管阻力與血管張力試驗測定方法，采用血管離體灌流技術(shù)，研究了牡荊素鼠李糖苷對擴(kuò)張血管作用的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，牡荊素鼠李糖苷對離體動脈環(huán)具有濃度依賴性舒張作用，該作用通過內(nèi)皮依賴性和內(nèi)皮非依賴的方式產(chǎn)生，并具有部分鈣拮抗劑的藥理作用特點。因此，發(fā)現(xiàn)牡荊素鼠李糖苷具有直接擴(kuò)張動脈血管的新的藥理作用，可用于心腦血管疾病治療藥物的制備。
文檔編號A61K31/7042GK101606944SQ20081012704
公開日2009年12月23日 申請日期2008年6月19日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月19日
發(fā)明者張曉芳 申請人:張曉芳