專利名稱：高含量白藜蘆醇分離純化的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種分離純化的方法，特別是一種以含有白藜戸醇的粗品作原 料，利用氧化鋁柱層析分離純化制備高含量白藜蘆醇分離純化的方法。
背景技術(shù)：
因白藜蘆醇具有多種藥理作用，能抗腫瘤、抗衰老、降低膽固醇、抑制血小 板聚集等，它主要存在于葡萄、虎杖、藜蘆等植物中，其中以虎杖中白藜蘆醇含 量最高。白藜蘆醇主要用于抗癌和心血管疾病等方面的治療，為此有關(guān)的研究報 導(dǎo)和專利文獻(xiàn)很多，且各種方法都有不同的特色。
專利號CN00121100.5 "白藜蘆醇和白藜戸醇甙分離方法及其應(yīng)用"，其方法 涉及初提取進(jìn)行乙酸乙酯萃取進(jìn)而采用氯仿一甲醇或乙酸乙酯一乙醇作為層析 洗脫液進(jìn)行硅膠柱層析，再以甲醇一氯仿為結(jié)晶溶劑進(jìn)行重結(jié)晶得到白藜蘆醇苷 并通過二次層析以及重結(jié)晶得到白藜蘆醇。因采用硅膠柱層析作為必需分離手 段，硅膠柱存在樣品分離量小、產(chǎn)量小、填料用量大的缺點，而且填料硅膠難以 再生利用，因此工業(yè)生產(chǎn)成本高，因使用鹵代烴類溶液，不僅溶液使用成本較高， 還對環(huán)境有嚴(yán)重危害，最終產(chǎn)品不可避免會涉及有害溶劑殘留問題，同時所得成 品含量較低，需反復(fù)重結(jié)晶處理、操作程序麻煩。
專利號CN200310112538.3 "虎杖苷和白藜蘆醇的新制備方法"，用聚酰胺層 析法分離制備虎杖苷和白藜蘆醇，但在實際操作中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)聚酰胺柱層析后白藜 蘆醇收率很低，白藜蘆醇純度不高，還需進(jìn)行二次層析或用活性炭脫色才能提高 純度彌補其的不足，且活性炭易造成有效成分死吸附，因此程序多、操作麻煩、 有效成分損失大。
專利申請?zhí)朇N200610161949. 5 "—種從中藥虎杖中分離純化白藜戸醇苷和 白藜戸醇的方法"，采用高速逆流色譜來分離純化白藜盧醇，此方法一次性設(shè)備 投入大，而產(chǎn)能少，很難滿足工業(yè)生產(chǎn)要求，另外采用的是大孔樹脂層析其產(chǎn)品 純度低，還需再用活性炭脫色和反復(fù)結(jié)晶處理，因此操作也麻煩。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種高含量白藜蘆醇分離純化的方法， 具有工藝簡便，設(shè)備投入少，操作簡單，而產(chǎn)品具有高收率、高純度，制備無污 染的特點，并易于實現(xiàn)規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)、實用性強。
本發(fā)明解決上述問題所采用的技術(shù)方案為高含量白藜蘆醇分離純化的方 法，步驟1、選料以市售的白藜蘆醇粗品為原料，其白藜蘆醇含量按干燥品 計達(dá)到15% 90%，原料為浸膏狀或粉末、顆粒狀；
2、 上樣溶液制備以粗品的重量比為1，用濃度為60% 80%的含水乙醇溶 解粗品，作為上樣溶液，含水乙醇用量(L):粗品(Kg)45 25: 1;
3、 裝柱采用常規(guī)的工藝，氧化鋁用濕法或干法裝柱；
4、 上樣洗脫將含有白藜蘆醇的含水乙醇溶液上氧化鋁柱層析，流速控制 在0.1% 1.0%乂柱體積/分鐘，收集流份，上樣結(jié)束后再用同濃度的相當(dāng)一個柱 體積容量的含水乙醇沖洗氧化鋁柱一次，同時收集流份，將兩次流份合并；
5、 流份處理將收集的流份減壓濃縮至原體積的1/3 1/10,再加10 20 'C的飲用水，加水量為濃縮體積的1 6倍，再經(jīng)2 14小時的放置析晶，再過 濾并在50 6(TC經(jīng)真空干燥6 8小時得到的晶體為目標(biāo)產(chǎn)物白藜蘆醇結(jié)晶粉 末。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于采用氧化鋁柱層析技術(shù)并用到白藜蘆 醇的分離純化，通過氧化鋁對粗品中非目標(biāo)產(chǎn)物的吸附，充分發(fā)揮了該技術(shù)在制 備高含量白藜蘆醇的特有優(yōu)勢；氧化鋁層析柱在整個上柱解析過程中所用的都為 乙醇一水系統(tǒng)，此溶劑使用安全，同時在層析過程中沒有廢液產(chǎn)生，流出成分均
為目標(biāo)產(chǎn)物，對生產(chǎn)人員及環(huán)境影響少，大批量工業(yè)化生產(chǎn)條件容易控制；而所 用設(shè)備簡單，同時氧化鋁柱層析過程目標(biāo)產(chǎn)物收得率高，下柱流份純度高，不需
多次反復(fù)層析、結(jié)晶，操作程序簡便，所以生產(chǎn)成本低。
具體實施例方式
下面對本發(fā)明的實施例作進(jìn)一步描述。
步驟
1、選料以市售的白藜蘆醇粗品為原料，其白藜蘆醇含量按干燥品達(dá)到 15% 90%，為浸膏狀或粉末、顆粒狀；或選用虎杖藥材經(jīng)過發(fā)酵后通過醇提取， 再用乙酸乙酯萃取所得的萃取物；虎杖經(jīng)醇提取后通過發(fā)酵使虎杖苷轉(zhuǎn)換成白藜 蘆醇，再用乙酸乙酯萃取處理的萃取物；也包括上述乙酸乙酯萃取物再經(jīng)堿水除 雜后的粗品；
2、 上樣溶液制備以粗品的重量比為l，用濃度為60% 80%的含水乙醇溶 解粗品，作為上樣溶液，含水乙醇用量(L):粗品(Kg)48 22: 1;
3、 選用氧化鋁層析柱采用常規(guī)的工藝濕法或干法裝柱； 氧化鋁層析可用中性氧化鋁或堿性氧化鋁，其為60 250目的白色顆粒；
4、 上樣洗脫將含有白藜蘆醇的含水乙醇溶液上氧化鋁柱層析，流速控制 在0.1% 1.0%乂柱體積/分鐘，收集流份，上樣結(jié)束后再用同濃度的相當(dāng)一個柱 體積容量的含水乙醇沖洗氧化鋁柱一次，同時收集流份，將兩次流份合并；
5、 流份處理將收集的流份減壓濃縮(真空度控制在-0.05 -0.09Mpa) 至原體積的1/3 1/10，再加10 20'C的飲用水，加水量為濃縮體積的1 6倍， 并上面覆蓋尼龍膜密封靜置2 14小時后，過濾或離心，在溫度50 6(TC再經(jīng) 真空干燥(真空度控制在-0. 08 -0. 1Mpa) 6 8小時得到目標(biāo)產(chǎn)物白色結(jié)晶 性粉末。
實例l
40g粗品(虎杖藥材經(jīng)過發(fā)酵后通過醇提取，再用乙酸乙酯萃取所得的萃取 物的干燥粉末，經(jīng)HPLC檢測含白藜蘆醇18. 6%)用800ml的70%乙醇攪拌溶解， 上樣至備用堿性氧化鋁柱上(柱體積約為350ml,堿性氧化鋁規(guī)格100 200目， 采用濕法裝柱)，收集流份，上樣結(jié)束再用350ml的70%乙醇洗脫，收集流份， 合并兩部分流份約1140ml，減壓濃縮至200ml，加飲用水200ml，密封放置12 小時析晶，過濾，晶體真空干燥7小時(6(TC, -0. 09 -0. lMpa)，最終產(chǎn)物7. lg。 經(jīng)HPLC檢測含白藜蘆醇為99. 3%。
實例2
40g粗品(虎杖藥材經(jīng)過發(fā)酵后通過醇提取，再用乙酸乙酯萃取所得的萃取 物的干燥粉末，經(jīng)HPLC檢測含白藜盧醇18. 6%)用1000ml的70%乙醇攪拌溶解， 上樣于備用的中性氧化鋁柱上(柱體積為350ml，中性氧化鋁規(guī)格100 200目， 采用濕法裝柱)，收集流份，上樣結(jié)束再用350ml的70%乙醇洗脫，收集流份， 合并兩部分流份約1340ml，減壓濃縮至300ml，加飲用水600ml，密封放置4小 時析晶，過濾，晶體真空干燥7小時(60°C, -0.09 -0.1Mpa)，最終產(chǎn)物7. 3g。 經(jīng)HPLC檢測含白藜蘆醇為99.1%。
實例3
40g粗品(虎杖經(jīng)醇提取后通過發(fā)酵使虎杖苷轉(zhuǎn)換成白藜蘆醇，再用乙酸乙 酯萃取處理的萃取物的干燥粉末，經(jīng)HPLC檢測含白藜蘆醇20. 3%)用800ml的
75%乙醇攪拌溶解，上樣至備用堿性氧化鋁柱上(柱體積約為350ml，堿性氧化 鋁規(guī)格100 200目，采用濕法裝柱)，收集流份，上樣結(jié)束再用350ml的75% 乙醇洗脫，收集流份，合并兩部分流份約1140ml，減壓濃縮至200ml，加飲用水 200ml，密封放置12小時析晶，過濾，晶體真空干燥7小時(6(TC， -0. 09 -0. 1Mpa)，最終產(chǎn)物7. 7g。經(jīng)HPLC檢測含白藜蘆醇為99. 5%。 實例4
40g粗品(乙酸乙酯萃取處理的萃取物再經(jīng)堿水除雜處理的干燥粉末，經(jīng) HPLC檢測含白藜蘆醇51. 6%)用800ml的75%乙醇攪拌溶解，上樣至備用堿性氧 化鋁柱上(柱體積約為350ml，堿性氧化鋁規(guī)格100 200目，采用濕法裝柱)， 收集流份，上樣結(jié)束再用350ml的75%乙醇洗脫，收集流份，合并兩部分流份約 1140ml，減壓濃縮至200ml，加飲用水200ml，密封放置12小時析晶，過濾，晶 體真空干燥7小時(60。C， -0. 09 -0.1Mpa)，最終產(chǎn)物19. 6g。經(jīng)HPLC檢測含 白藜蘆醇為99. 7%。
實例5
40g粗品(市售，經(jīng)HPLC檢測含白藜蘆醇52.390用800ml的75%乙醇攪拌 溶解，上樣至備用堿性氧化鋁柱上(柱體積約為350ml，堿性氧化鋁規(guī)格100 200目，采用濕法裝柱)，收集流份，上樣結(jié)束再用350ml的75%乙醇洗脫，收集 流份，合并兩部分流份約1140ml，減壓濃縮至210ml，加飲用水210ml，密封放 置12小時析晶，過濾，晶體真空干燥7小時(60'C， -0.09 -0.1Mpa)，最終產(chǎn) 物19.8g。經(jīng)HPLC檢測含白藜戸醇為99. 6%。
實例6白藜蘆醇大規(guī)模工業(yè)化制備方法
51kg粗品(虎杖藥材經(jīng)過發(fā)酵后通過醇提取，再用乙酸乙酯萃取所得的萃取 物的干燥粉末，經(jīng)HPLC檢測含白藜蘆醇18. 6%)用1000L的75%乙醇攪拌溶解， 上樣于備用的堿性氧化鋁柱上(柱體積為450L，堿性氧化鋁規(guī)格100 200目， 采用濕法裝柱)，收集流份，上樣結(jié)束再用450L的75%乙醇洗脫，收集流份，合 并兩部分流份約1450L，減壓濃縮至250L，加飲用水250L，密封放置12小時析 晶，過濾，晶體真空干燥7小時(60°C， -0.09 -0,1Mpa)，最終產(chǎn)物9.05kg。 經(jīng)HPLC檢測含白藜蘆醇為99. 2%。
權(quán)利要求
1、一種高含量白藜蘆醇分離純化的方法，步驟1)、選料以市售的白藜蘆醇粗品為原料，其白藜蘆醇含量按干燥品計達(dá)到15％～90％，原料為浸膏狀或粉末、顆粒狀；2)、上樣溶液制備以粗品的重量比為1，用濃度為60％～80％的含水乙醇溶解粗品，作為上樣溶液，含水乙醇用量(L)∶粗品(Kg)＝15～25∶1；3)、裝柱采用常規(guī)的工藝，氧化鋁用濕法或干法裝柱；4)、上樣洗脫將含有白藜蘆醇的含水乙醇溶液上氧化鋁柱層析，流速控制在0.1％～1.0％×柱體積/分鐘，收集流份，上樣結(jié)束后再用同濃度的相當(dāng)一個柱體積容量的含水乙醇沖洗氧化鋁柱一次，同時收集流份，將兩次流份合并；5)、流份處理將收集的流份減壓濃縮至原體積的1/3～1/10，再加10～20℃的飲用水，加水量為濃縮體積的1～6倍，再經(jīng)2～14小時的放置析晶，再過濾并在50～60℃經(jīng)真空干燥6～8小時得到的晶體為目標(biāo)產(chǎn)物白藜蘆醇結(jié)晶粉末。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高含量白藜蘆醇分離純化的方法，其特征在于原 料還可選用虎杖藥材經(jīng)發(fā)酵后通過醇提取，再用乙酸乙酯萃取所得的萃取物；虎 杖經(jīng)醇提取后通過發(fā)酵使虎杖苷轉(zhuǎn)換成白藜戸醇，再用乙酸乙酯萃取處理的萃取 物；也包括上述乙酸乙酯萃取物再經(jīng)堿水除雜后的粗品。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高含量白藜蘆醇分離純化的方法，其特征在于氧 化鋁層析可用中性氧化鋁或堿性氧化鋁，其為60 25f)目的白色顆粒。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高含量白藜蘆醇分離純化的方法，其特征在于上 樣溶液含水乙醇用量(L):粗品(KgM8 22: 1。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高含量白藜盧醇分離純化的方法，其特征在于收 集的流份經(jīng)減壓真空度控制在-0. 05~-0. 09Mpa，過濾后在6CTC經(jīng)真空干燥并使 真空度控制在-0.08 -0.1Mpa得到晶體。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種高含量白藜蘆醇分離純化的方法，是以含有白藜蘆醇的粗品作原料，利用氧化鋁柱層析分離、純化、收集流份，并對流份處理、減壓濃縮、加水析晶、過濾、真空干燥制得，下柱流份純度高可制成純度高達(dá)99％以上的白藜蘆醇，且收率高，所得產(chǎn)物直接作為藥品、保健品使用，通過氧化鋁對粗品中非目標(biāo)產(chǎn)物的吸附、充分發(fā)揮該技術(shù)在制備高含量白藜蘆醇中的特有優(yōu)勢，層析、洗脫整個過程都是在乙醇—水系統(tǒng)中完成全部的生產(chǎn)過程，溶劑使用安全，整個層析過程中無廢液產(chǎn)生，流出成分均為目標(biāo)產(chǎn)物，對生產(chǎn)人員及環(huán)境影響少，便于大批量生產(chǎn)，不需多次重復(fù)層析、結(jié)晶，操作程序簡便，生產(chǎn)成本低。
文檔編號A61P35/00GK101353294SQ20081012013
公開日2009年1月28日 申請日期2008年7月23日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月23日
發(fā)明者戈 劉, 周紅波, 孫振蛟, 干崢嶸, 莊培生, 青 虞, 邵敏明 申請人:寧波立華植物提取技術(shù)有限公司