專利名稱：由9-二氫-13-乙?；鶟{果赤霉素iii半合成紫杉醇的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于藥物合成領域，具體涉及一種由9-二氫-i3-乙?；鶟{果赤霉素in半合成紫 杉醇的方法。
背景技術：
紫杉醇是一種具有廣譜抗腫瘤活性、源自天然的化合物，具有如下結構
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1971年，Wani等從短葉紅豆杉(Taxus brevifolia)樹皮中分離得到紫杉醇 (Paclitaxd)。它對常規(guī)化療，包括順鉑在內無效的卵巢癌有獨特的療效。美國食品和 藥物管理局于1992年12月批準紫杉醇作為治療轉移性卵巢癌的新藥上市，1994年又 批準該藥用于治療轉移性乳腺癌。
紫杉醇通過影響在細胞分裂和其它細胞機能中起著重要的微管而表現(xiàn)出阻止癌細 胞生長的獨特機理。在細胞分裂開始時，生成了大量微管，當細胞分裂到達末期時，微 管通常破裂。紫杉醇能阻止微管破裂，這樣就將癌細胞堵塞到一定程度，使癌細胞停止 生長和分裂。紫杉醇在臨床上能有效地治療難治療的卵巢癌和乳腺癌，目前其臨床適應 癥擴大到肺癌、頭頸部癌、軟組織癌、白血病和胃腸道癌等，被認為是迄今人類發(fā)現(xiàn)的 療效最好的抗癌藥。目前，該藥已在40多個國家上市。
目前，市場銷售的紫杉醇主要來源于紅豆杉屬植物的樹皮、樹枝和樹葉經提取分離 純化所得到的天然紫杉醇及由中間體IO-脫乙酰基漿果赤霉素III通過化學途徑制得的半 合成紫杉醇。加拿大紅豆杉中含有多種活性有效成分，包括紫杉醇、三尖杉寧堿、10-脫乙酰漿果赤霉素III、漿果赤霉素III、 9-二氫-13-乙酰基漿果赤霉素m、 10-脫乙酰紫杉 醇等。其中紫杉醇含量在250ppm左右，10-脫乙酰漿果赤霉素III含量在300ppm左右， 9-二氫_13_乙?；鶟{果赤霉素111在750ppm左右。而9-二氫-13-乙?；鶟{果赤霉素III與漿果赤霉素III只有在C-9和C-13位的基團有一定差別，由于9-二氫-13-乙?；鶟{果赤霉
素m在加拿大紅豆杉樹粉中大量存在，如果能以其為原料半合成紫杉醇，對于保護紅豆 杉植物物種及資源，增加市場紫杉醇供應，擴大腫瘤臨床的應用，降低治療費用等，都 具有極為重要的意義和巨大的經濟利益。
中國專利CN98806624.6公開了采用對甲氧基芐氯保護C-7為的羥基，4-甲基嗎啉 N-氧化物(NMO)氧化C-9位的羥基成羰基，然后再用甲基鋰脫去C-13位的乙?；?然后與(3R,4S)-3- (l-乙氧基乙氧基)-4-苯基-N-苯甲酰基-2-氮雜環(huán)丁酮在六甲基二硅氮 鋰(LiHMDS)和-78'C的低溫下縮合，然后用乙醇/鹽酸脫去乙氧乙氧基保護集團，用2, 3-二氯-5, 6-二氰基苯醌(DDQ)脫去C-7位的保護基團。
中國專利CN99106538.7公開了采用三甲基氯硅烷保護C-7位羥基，然后用氯鉻酸 吡啶嗡鹽(PCC)氧化C-9位的羥基，然后再用5%的碳酸氫鈉脫去(>13位的乙?；?br> 以上方法在氧化C-9位的羥基的步驟，收率只有20%，存在著收率低、有副反應產 物等缺點。且在母核與側鏈的對接中，反應條件苛刻，需要在-78'C的條件下完成。因 此以上以9-二氫-13-乙酰基漿果赤霉素m為原料半合成紫杉醇的方法，存在成本高、產 品得率低、雜質多，工藝條件不易控制等缺點，不適合應用于工業(yè)化生產。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是針對上述現(xiàn)有技術的缺陷，提供了一種制備工藝步驟短、最終產品 得率高、產品成本低、工藝條件易于控制并適合應用工業(yè)生產的由9-二氫-13-乙?；鶚?br> 赤霉素in半合成紫杉醇的方法。
為了實現(xiàn)上述目的本發(fā)明采取的技術方案是 一種由9-二氫-i3-乙?；鶚嗝顾豱i
半合成紫杉醇的方法，包括如下的步驟
(1) 用保護基保護9-二氫-13-乙?；鶟{果赤霉素III的C-7羥基，獲得保護產物；
(2) 用氧化劑將保護產物的C-9羥基氧化；
(3) 選擇性脫去C-13乙酰基，得到中間體；
(4) 中間體與紫杉醇側鏈進行縮合反應；
(5) 縮合反應后脫去C-7位和C-2'位的保護基團，得到紫杉醇；
其中，所述保護基選自三乙基硅醚保護基、叔丁氧甲?；?、三氯乙氧甲酰基； 所述的氧化劑選自氧化鉻的硫酸水溶液、氯鉻酸吡啶鎰鹽、重鉻酸吡啶鐺鹽； 所述步驟3中用NaBH4和LiCl的0.05M磷酸鹽緩沖液，選擇性脫去C-13乙酰基，得 到中間體；
5所述中間體具有如下的通式:
<formula>formula see original document page 6</formula>
其中R選自三乙基硅醚保護基、叔丁氧甲?；⑷纫已跫柞；?；
所述步驟4中的縮合反應是將中間體用四氫呋喃溶解，在惰性氣體的保護下降溫至 -3(TC -4(TC，加入催化劑，在低溫下保持0.5 1.5小時活化C-13位羥基，再加入紫杉 醇側鏈進行縮合反應，在1 1.5小時內均勻升溫至0'C，并在(TC保持1小時至反應完畢;
所述紫杉醇側鏈具有如下通式
其中R選自1-乙氧乙氧基、三乙基硅垸基； 所述催化劑選自正丁基鋰、氫化鈉、六甲基二硅基氨基鈉。
所述的步驟5是將步驟4所得的產物水解脫保護，用四氫呋喃和甲酸溶液的混合溶液， 在4(TC水浴下水解5小時至反應完畢，同時脫去C-7位和C-2'位的保護基團，得到紫杉 醇。
本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案是
所述的保護基優(yōu)選為叔丁氧甲?；x用保護劑二碳酸二叔丁酯保護C-7羥基，該保 護劑與9-二氫-13-乙?；鶟{果赤霉素III的用量摩爾比為1.7: 1~3: 1。
所述的氧化劑優(yōu)選為氧化鉻的硫酸水溶液，其中&03濃度為24wt%-28wt%，硫酸濃度 體積比為20%_26%。
所述的紫杉醇側鏈優(yōu)選為EE型紫杉醇側鏈，艮卩(3R，4S)-3- (l-乙氧基乙氧基)-4-苯基 -N-苯甲?；?2-氮雜環(huán)丁酮，所述的中間體為7-叔丁氧甲?；?漿果赤霉素m， EE型紫杉醇 側鏈與所述中間體7-叔丁氧甲?；?漿果赤霉素III的用量摩爾比為5: 1~6: 1。
所述的催化劑為正丁基鋰正已烷溶液，所述的中間體為7-叔丁氧甲酰基-漿果赤霉素 III，正丁基鋰正己烷溶液與所述中間體7-叔丁氧甲?；?漿果赤霉素III的用量摩爾比為1:1~2: 1。
本發(fā)明的紫杉醇合成路線是以9-二氫-13-乙?；鶟{果赤霉素m (9DHB)為原料，用二 碳酸二叔丁酯保護C-7位的羥基，得到7-叔丁氧甲?；?9-二氫-13-乙?；鶟{果赤霉素m
(7-BOC-9DHB);用003硫酸水溶液氧化C-9位的羥基，得到7-叔丁氧甲酰基-13-乙?；?漿果赤霉素ni (7-BOC-13-Ac-BaccIII);用LiC1/NaBH4的磷酸鹽緩沖液，脫去C-13位乙 酰基，得到中間體7-叔丁氧甲酰基-漿果赤霉素III(7-BOC-BaccIII);再與紫杉醇側鏈縮合、 水解脫去C-7位的保護基，制得紫杉醇。經波譜鑒定證實，該化合物與天然紫杉醇，即從 加拿大紅豆杉樹粉提取純化的紫杉醇結構完全一致。
以下用化合物l、化合物2、化合物3、化合物4、化合物5、化合物6和化合物7分 別代表9-二氫-13-乙?；鶚嗝顾?11、 7-B0C-9DHB、 7-B0C-13-0Ac-Bacc111、 7-B0C-Bacc III 、 EE型紫杉醇側鏈、2' -(1-乙氧乙氧基)-7-叔丁氧甲酰基-紫杉醇
(2， -EE-7-B0C-TAX0L)、紫杉醇。
以下是紫杉醇半合成路線:
化合物5 化合物4
化合物7
本發(fā)明具有產物得率高的優(yōu)點，采用二碳酸二叔丁酯保護C-7位羥基，叔丁氧甲?；?保護基團在四氫呋喃和甲酸存在的條件下易于脫去；采用在丙酮溶液中溶解帶有保護塞的 9DHB ，然后用硅膠分散均勻，將Cr03硫酸溶液的+6價鉻離子吸附于表面，可以選擇性氧化C-9位的羥基，其中003濃度為24wt%-28wt%，硫酸濃度體積比為20%_26%，此方法收 率高，原料反應完全，收率大于90%;使用加入LiC卜H2O和NaBH4的0.05M磷酸鹽緩沖 液，可以選擇性脫去C-13位的乙?；?；對于中間體7-BOC-BaccIII與側鏈的對接反應，使 用無水THF作為反應溶劑，在氬氣保護和-30—4(TC溫度下，使用正丁基鋰正己垸溶液活 化C-13位羥基，選用EE型紫杉醇側鏈，g|3(3R,4S)-3- (l-乙氧基乙氧基)4-苯基-N-苯甲 ?；?2-氮雜環(huán)丁酮光學純化合物，可以以大于90%的收率得到目標產物，此反應條件易于 控制，優(yōu)于傳統(tǒng)的對接反應條件，由于乙氧基乙氧基保護基團的C-1位為手性碳，EE型紫 杉醇側鏈為非對映異構體混合物，因此此產物也存在為兩種非對映體的混合物，但在脫去 EE保護基團所得產物為一種物質。
具體實施例方式
下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，但不作為對本發(fā)明的限定。 以10g9DHB為原料，采用對甲氧基芐氯保護C-7為的羥基，4-甲基嗎啉N-氧化物 (NMO)氧化C-9位的羥基成羰基，然后再用甲基鋰脫去C-13位的乙酰基，只可得到 1.496g C-7位保護的漿果赤霉素III。再與(3R，4S)-3- (l-乙氧基乙氧基)-4-苯基^-苯甲 ?；?2-氮雜環(huán)丁酮在六甲基二硅氮鋰(LiHMDS)和-78。C的低溫下縮合，然后用乙醇/ 鹽酸脫去乙氧乙氧基保護集團，用2， 3-二氯-5， 6-二氰基苯醌(DDQ)脫去C-7位的 保護基團，共可得0.5g紫杉醇。
而采用本發(fā)明的方法，以10g9DHB為原料，可以得到6.5g以上的C-7保護漿果赤 霉素III，最終可得到5g以上的高純度紫杉醇。
實施例1 步驟一、7-BOC-9DHB的制備
在50L干燥的反應瓶中，通過抽真空進行氮氣置換，稱取400g (0.634mol) 9DHB, 9DHB是市售的從加拿大紅豆杉提取分離得到的中間體，加入反應瓶中，加入6L四氫呋喃 充分攪拌溶解，快速加入94.4g (0.773mol) 4-二甲氨基吡啶(DMAP)，再向溶液中緩慢滴 加300ml Cl.304mo1) 二碳酸二叔丁酯((BOC)20)，在25。C 26。C水浴下攪拌2小時至反應 完畢。向反應液中加入15L二氯甲烷攪拌均勻，再加入5L2. 5%HC1終止反應，靜置分層， 用5L20%NaCl洗滌二氯甲烷層，55。C減壓回收二氯甲烷層至干?？傻玫?-B0C-9DHB產品 440g， HPLC檢測歸一化含量為86. 7%，收率為82. 3%。
步驟二、 7-BOC-13-OAc-BaccHI的制備
8、 將7-B0C-9DHB440g加入30L丙酮中溶解后加入到干燥的反應瓶中，再加入1000g硅 膠攪拌均勻，向溶液中緩慢滴加1200mlCr03硫酸溶液(276mlH2S04+924mlH20+320gCr03)， 在常溫下反應1小時至反應完畢。將反應液過濾，并用35L乙酸乙酯洗滌硅膠，合并丙酮 和乙酸乙酯洗脫液，加入40L5免NaHC03洗滌，分離出乙酸乙酯層，用20%NaCl以40L/次洗 滌2次，乙酸乙酯層在55。C下減壓回收至干?？傻?-BOC-13-OAc-BaccIII產品440g， HPLC 檢測歸一化含量為82.6%，收率為95.5%。
步驟三、7-BOC-Baccm的制備
將7-BOC-13-OAc-BaccIII產品440g加入24L四氫呋喃溶解，加入到干燥的反應瓶中， 在室溫下通過真空抽入緩慢加入13L 0.05M磷酸鹽緩沖液(pH=7.0)
(28.3gK2HP04+54.3gK2HP04+13LH20)，向溶液中加入38.5g (0.627mol) LiCl H20， 攪拌均勻。通過冰浴將反應液降溫至0。C時，緩慢加入376g (9.939mol) NaBH4，在0°C 下攪拌反應2小時至反應結束。向反應液加入80L20%NaCl終止反應，再加入80L 二氯甲 烷進行萃取，二氯甲烷層再用80L20%NaCl萃取，靜置分層，分離出二氯甲烷層。二氯甲 垸層5(TC減壓回收至干?？傻?-BOC-BaccIII粗品5U.2g，歸一化含量為70.05%。 7-BOC-BaccIII粗品通過32kg硅膠柱層析，以二氯甲烷/乙酸乙酯(5/1， V/V)進行洗脫， 7-BOC-BaccIII層析物再以乙酸乙酯/正己垸系統(tǒng)結晶，可制得7-BOC-BaccIII純品260g， HPLC檢測歸一化含量98.8%。，收率為75.0%。
步驟四、2'-EE-7-BOC-TAXOL的制備
稱取7-BOC-BaccIII 100.14g (0.146mol)，溶于1L無水THF中，通入氬氣保護，降溫 至-40。C，滴加90. 0ml2. 5M正丁基鋰正己烷溶液(0. 225mol)，保持1小時，滴加1LEE型 紫杉醇側鏈無水THF溶液(247.8g， 0.730mol)，將該溶液自然升溫至0°C ，升溫時間為1 小時，在0。C保持1小時。加入1L 10%乙酸的THF溶液淬滅反應，用2L飽和NaHC03和2L 二氯甲垸分配，有機層5(TC減壓回收至干，可得2'-EE-7-BOC-TAXOL粗品固體千燥物 401. 17g。再通過8Kg硅膠層析，正己垸/乙酸乙酯(5/2)洗脫，可得2'-EE-7-BOC-TAXOL 干燥物148.40g。由于側鏈EE保護基團的C-1位為手性碳，EE型紫杉醇側鏈為非對映異構 體混合物，因此，此產物也存在兩種非對映體的混合物，HPLC檢測歸一化含量分別為 51.93%和43.47%，收率為95.8%。
步驟五、紫杉醇的制備稱取2， -EE-7-BOC-TAX0L純品148.40g，加入9LTHF溶解，加入6L甲酸(88%),在 40。C水浴下攪拌5小時。反應液加入30L 10%NaHC03，調節(jié)pH至3 4。用二氯甲烷以18L/ 次萃取3次，再用25L水洗滌二氯甲烷層，合并二氯甲垸層，在40'C減壓回收至干，可得 紫杉醇粗品干燥物148.68g。通過8Kg硅膠層析，二氯甲垸/乙酸乙酯(2/1，V/V)洗脫， 經乙酸乙酯/正己垸(1/3,V/V)結晶，產品在6(TC真空干燥16小時，可得白色固體紫杉 醇78.03g， HPLC檢測歸一化含量98.2y。，收率為65. 0%。 [ a ]。2°=-52° (C=0. 01g/ml，甲 醇)，mp 213 215°C。波譜數據與天然紫杉醇數據完全一致。
iH-NMR (600MHz，CDCl3) 5卯m: 8.15 (2H， dd， J=8.4， 0.6Hz， 2隱o-Ph) ，7.75 (2H， dd， J=8.4, 1.2Hz， N-o-Ph) ,7.62 (1H， tt， J=7.2，l.lHz， 2-p-Ph) ,7.52 (2H， m， 2-m-Ph) 7.49
(3H， m， N-m,p-Ph) 7.44~7.40 (4H， m， 3'-o,p-Ph) 7.37 (1H， d， J=7.8Hz， 3，-p-Ph) 6.98 (1H， d， J=9Hz， NH) 6.28 (1H， s， 10-H) 6.25 (1H， t，風3Hz， 13-H) 5.80 (1H， dd， J=9,2.4Hz， 3，-H) 5.69 (1H， d, J=6.6Hz， 2-H) 4.95 (1H， dd， J=7.9，2.4Hz， 5-H) 4.80 (1H， d， J=2.4Hz, 2，-H) 4.40 (1H， dd， J=10.9,6.6Hz， 7-H) 4.31 (1H， d， J=8.4Hz， 20-Ha) 4.21 (1H， d， J=9Hz， 20-H卩)3.81 (1H， d， J=7.2Hz， 3-H) 2.54 (1H， m， 6-Ha) 2.39 (3H, s， 4-COCH3) 2.36 (2H， d， J=9Hz， 14-H2) 2.25 (3H， s， 10-COCH3) 1.88
(1H， m， 6鄰)1.80 (3H， d， J=1.2Hz， 18-CH3) 1.71 (3H， s， 19-CH3) 1.25 (3H， s， 17-CH3) 1.15 (3H， s， 16陽CH3)。
13C-NMR(125MHz,CDC13) S ppm: 203.61(C-9), 172.77(C-1，)， 171.22(10-￡OCH3),170.35(4 -￡OCH3),167.26(N-￡OPh), 166.94(2-￡OPh),141.91(C-12)，137.94,133.65,133.24(C-ll)，132.0， 130.12,130.07,129.17，129.00,128.68,128.34,127.04(C-Ph)，84.40(C-5),8U7(C-4)，78.96(C-l),76. 50(C-20),75.57(C-10),74.99(C-2),73.18(C-2，),72.39(C-13)，72.15(C-7),58.60(C-8),55.05(C-3,),4 5.63(C-3),43.18(C-15),35.69(C-14),35.60(C-6),26.84(C-17),22.60(4-CO)QH3),21.83(C-16),20.8 2(10-CO￡H3),14.79(C-18)，9.55(C-19)
ESI-MSm/z: 1729.63(2M+Na)+,876.31 (M+Na)+,591 JSCM-Sc+Naf^OS.O^Sc+Na"
實施例2 步驟一、7-BOC-9DHB的制備
在50L干燥的反應瓶中，通過抽真空進行氮氣置換，稱取400g (0.634mol) 9DHB， 9DHB是市售的從加拿大紅豆杉提取分離得到的中間體，加入反應瓶中，加入6L四氫呋喃 充分攪拌溶解，快速加入94.4g (0.773mol) DMAP，再向溶液中緩慢滴加250ml (1.087mol)
10(BOC)20，在25'C 26'C水浴下攪拌2小時至反應完畢。向反應液中加入15L 二氯甲烷攪 拌均勻，再加入5L2. 5%HC1終止反應，靜置分層，用5L20《NaCl洗滌二氯甲烷層，55。C減 壓回收二氯甲烷層至干。可得到7-BOC-9DHB產品442g， HPLC檢測歸一化含量為88.1%， 收率為84. 0%。
步驟二、 7-BOC-13-OAc-Baccm的制備
將7-B0C-9DHB442g加入30L丙酮中溶解后，加入到干燥的反應瓶中，再加入1000g 硅膠攪拌均勻，向溶液中緩慢滴加1200mlCr03硫酸溶液(240mlH2S04+980mlH20+288gCr03)， 在常溫下反應l小時至反應完畢。將反應液過濾，并用35L乙酸乙酯洗滌硅膠，合并丙酮 和乙酸乙酯洗脫液，加入40L5MNaHC03洗滌，分離出乙酸乙酯層，用20%NaCl以40L/次洗 滌2次，乙酸乙酯層在55。C下減壓回收至干。可得7-BOC-13-OAc-BaccIII產品448g， HPLC 檢測歸一化含量為82.2%，收率為94.8%。
步驟三、7-BOC-Baccm的制備
將7-BOC-13-OAc-BaccIII產品448g加入24L四氫呋喃溶解，加入到干燥的反應瓶中， 在室溫下通過真空抽入緩慢加入13L 0.05M磷酸鹽緩沖液(pH=7.0)
(28.3gK2HP04+54.3gK2HP04+13LH20)，向溶液中加入38.5g (0,627mol) LiCl H20， 攪拌均勻。通過冰浴將反應液降溫至0。C時，緩慢加入376g (9.939mol) NaBH4，在0°C 下攪拌反應2小時至反應結束。向反應液加入80L20%NaCl終止反應，再加入80L 二氯甲 烷進行萃取，二氯甲烷層再用80L20%NaCl萃取，靜置分層，分離出二氯甲垸層。二氯甲 垸層50。C減壓回收至干?？傻?-BOC-BaccIII粗品455g，歸一化含量為72.05%。7-BOC-Bacc m粗品通過32kg硅膠柱層析，以二氯甲烷/乙酸乙酯(5/1, V/V)進行洗脫，7-BOC-Bacc in層析物再以乙酸乙酯/正己垸系統(tǒng)結晶，可制得7-BOC-BaccIII純品265g， HPLC檢測歸 一化含量98.8%。，收率為76.4%。
步驟四、2，-EE-7-BOC-TAXOL的制備
稱取7-BOC-BaccIIl50,lg (0.073mol)，溶于0.5L無水THF中，通入氬氣保護，降溫 至隱36。C，滴加52. 5ml2. 5M正丁基鋰正己垸溶液(0, 131mol)，保持0. 5小時，滴加0. 5LEE 型紫杉醇側鏈無水THF溶液(136.3g， 0.401mol)，將該溶液自然升溫至0°C，升溫時間為 1. 5小時，在(TC保持1小時。加入0. 5L 10%乙酸的THF溶液淬滅反應，用1L飽和NaHC03 和1L 二氯甲垸分配，有機層5(TC減壓回收至干，可得2'-EE-7-BOC-TAXOL粗品固體干
11燥物198g。再通過4Kg硅膠層析，正己烷/乙酸乙酯(5/2)洗脫，可得2'-EE-7-BOC-TAXOL 干燥物75.2g。由于側鏈EE保護基團的C-l位為手性碳，EE型紫杉醇側鏈為非對映異構體 混合物，因此此產物也存在為兩種非對映體的混合物，HPLC檢測歸一化含量分別為51.1% 和44.2%，收率為95.7%。
步驟五、紫杉醇的制備
稱取2， -EE-7-B0C-TAX0L純品75. 2g，加入4. 5LTHF溶解，加入3L甲酸(88%)，在 4(TC水浴下攪拌5小時。反應液加入15L 10%NaHC03，調節(jié)pH至3 4。用二氯甲垸以9L/ 次萃取3次，12.5L水洗滌二氯甲烷層，合并二氯甲垸層，在4(TC減壓回收至干，可得紫 杉醇粗品干燥物74. 2g。通過4Kg硅膠層析，二氯甲烷/乙酸乙酯(2/1， V/V)洗脫，經乙 酸乙酯/正己垸(1/3， V/V)結晶，產品在6(TC真空干燥16小時，可得白色固體紫杉醇 40. lg， HPLC檢測歸一化含量98. 5%，收率為67. 2%。 [ a ]D20=-54° (C=0. 01g/ml，甲醇)， mp 213 215°C。波譜數據與天然紫杉醇數據完全一致。
iH-NMR (600MHz, CDC13) Sppm: 8.15 (2H， dd， J=8.4， 0.6Hz， 2-o-Ph) ,7.75 (2H， dd， J=8.4， 1.2Hz， N-o-Ph) ，7.62 (1H， tt, J=7.2,l.lHz， 2-p-Ph) ,7.52 (2H， m， 2-m-Ph) 7.49
(3H， m， N-m，p-Ph) 7.44~7.40 (4H， m， 3，-o,p-Ph) 7.37 (1H， d， J=7.8Hz， 3，-p-Ph) 6.98 (1H， d， J=9Hz， NH) 6.28 (IH， s， 10-H) 6.25 (1H， t， J=8.3Hz， 13-H) 5.80 (IH， dd， J=9，2.4Hz， 3，-H) 5.69 (1H， d， J=6.6Hz， 2-H) 4.95 (1H， dd， J=7.9，2.4Hz， 5-H) 4.80 (1H， d， J=2.4Hz， 2，-H) 4.40 (1H， dd， J=10.9,6,6Hz， 7-H) 4.31 (1H， d， J=8.4Hz， 20-Ha) 4.21 (1H, d， J=9Hz， 20-Hp) 3.81 (1H， d， J=7.2Hz， 3-H) 2.54 (1H， m， 6-Ha) 2.39 (3H， s， 4-COCH3) 2.36 (2H， d， J=9Hz, 14-H2) 2.25 (3H， s， 10-COCH3) 1.88
(IH， m， 6-Hp) 1.80 (3H， d， J=1.2Hz， 18-CH3) 1.71 (3H， s， 19-CH3) 1.25 (3H, s， 17-CH3) 1.15 (3H， s， 16-CH3)。
13C-NMR(125MHz,CDC13) S ppm: 203.61(C-9), 172.77(C-1，)， 171.22(10-￡OCH3),170.35(4 -￡OCH3),167.26(N-￡OPh), 166.94(2-￡OPh),141.91(C-12),137.94,133.65，133.24(C-ll),132.0， 130.12,130.07,129.17，129.00，128.68，128.34,127.04(C-Ph),84.40(C-5)，81.17(C-4),78.96(C-l),76. 50(C-20)，75.57(C-10),74.99(C-2),73.18(C-2，),72.39(C-13),72.15(C-7)，58.60(C-8)，55.05(C-3，),4 5.63(C-3),43.18(C-15),35.69(C-14),35.60(C-6),26.84(C-17),22.60(4-CO￡H3),21.83(C-16),20.8 2(10-CO￡H3)，14.79(C-18),9.55(C-19)
ESI-MSm/z: 1729.63(2M+Na)+,876.31 (M+Na)+,591.25(M-Sc+Na)+,308.09(Sc+Na)+實施例3 步驟一、7-BOC-9DHB的制備
在50L干燥的反應瓶中，通過抽真空進行氮氣置換，稱取400g (0.634mol) 9DHB， 9DHB是市售的從加拿大紅豆杉提取分離得到的中間體，加入反應瓶中，加入6L四氫呋喃 充分攪拌溶解，快速加入94.4g(0.773mol)DMAP，再向溶液中緩慢滴加438ml ( L904mo1) (BOC)20，在25'C 26'C水浴下攪拌2小時至反應完畢。向反應液中加入15L 二氯甲烷攪 拌均勻，再加入5L2.5XHC1終止反應，靜置分層，用5L20%NaCl洗滌二氯甲烷層，55。C減 壓回收二氯甲垸層至干。可得到7-B0C-9DHB產品446g， HPLC檢測歸一化含量為89. 7%， 收率為86. 3%。
步驟二、 7-BOC-13-OAc-Baccm的制備
將7-B0C-9DHB446g加入30L丙酮中溶解后，加入到干燥的反應瓶中，再加入1000g 硅膠攪拌均勻，向溶液中緩慢滴加1200mlCr03硫酸溶液(312mlH2S04+888mlH20+336gCr03)， 在常溫下反應l小時至反應完畢。將反應液過濾，并用35L乙酸乙酯洗滌硅膠，合并丙酮 和乙酸乙酯洗脫液，加入40L5MNaHC03洗滌，分離出乙酸乙酯層，用20%NaCl以40L/次洗 漆2次，乙酸乙酯層在55。C下減壓回收至干?？傻?-BOC-13-OAc-BaccIII產品450g, HPLC 檢測歸一化含量為84.6%，收率為95.4%。
步驟三、7-BOC-BaccIH的制備
將7-BOC-13-OAc-BaccIII產品450g加入24L四氫呋喃溶解，加入到干燥的反應瓶中， 在室溫下通過真空抽入緩慢加入13L 0.05M磷酸鹽緩沖液(pH=7.0)
(28.3gK2HP04+54.3gK2HP04+13LH20)，向溶液中加入38.5g (0.627mol) LiCl H20， 攪拌均勻。通過冰浴將反應液降溫至0'C時，緩慢加入376g (9.939mol) NaBH4，在0°C 下攪拌反應2小時至反應結束。向反應液加入80L20%NaCl終止反應，再加入80L 二氯甲 烷進行萃取，二氯甲烷層再用80L20%NaCl萃取，靜置分層，分離出二氯甲垸層。二氯甲 烷層5(TC減壓回收至千?？傻?-BOC-BaccIII粗品482g，歸一化含量為71.55%。7-BOC-Bacc in粗品通過32kg硅膠柱層析，以二氯甲烷/乙酸乙酯(5/1， V/V)進行洗脫，7-BOC-Bacc in層析物再以乙酸乙酯/正己垸系統(tǒng)結晶，可制得7-BOC-BaccIII純品270g， HPLC檢測歸 一化含量98.8%。，收率為75.3%。
步驟四、2，-EE-7-BOC-TAXOL的制備稱取7-BOC-BaccIII200g (0.292mol)，溶于2L無水THF中，通入氬氣保護，降溫至 -32°C，滴加140. 0ml2. 5M正丁基鋰正己垸溶液(0. 35mol)，保持1. 5小時，滴加2LEE型 紫杉醇側鏈無水THF溶液(495. 6g， 1.46mol)，將該溶液自然升溫至0°C，升溫時間為1 小時，在0。C保持1小時。加入2L 10%乙酸的THF溶液淬滅反應，用4L飽和NaHC03和4L 二氯甲烷分配，有機層50。C減壓回收至干，可得2'-EE-7-BOC-TAXOL粗品固體干燥物 805. 2g。再通過16Kg硅膠層析，正己烷/乙酸乙酯(5/2，V/V)洗脫，可得2，-EE-7-BOC-TAXOL 干燥物300.2§。由于側鏈EE保護基團的C-1位為手性碳，EE型紫杉醇側鏈為非對映異構 體混合物，因此此產物也存在為兩種非對映體的混合物，HPLC檢測歸一化含量分別為 50.93%禾卩46.47%，收率為97.8%。
步驟五、紫杉醇的制備
稱取2， -EE-7-B0C-TAX0L純品300. 2g，加入18LTHF溶解，加入12L甲酸(88%),在 40。C水浴下攪拌5小時。反應液加入60L 10%NaHC03，調節(jié)pH至3 4。用二氯甲烷以36L/ 次萃取3次，50L水洗滌二氯甲烷層，二氯甲烷層在4(TC減壓回收至干，可得紫杉醇粗品 干燥物302.4g。通過16Kg硅膠層析，二氯甲垸/乙酸乙酯(2/1， V/V)洗脫，經乙酸乙酯 /正己垸(1/3， V/V)結晶，產品在6(TC真空干燥16小時，可得白色固體紫杉醇160.4g， HPLC檢測歸一化含量98. 6%，收率為65. 9%。 [ a ]D20=-51° (00. 01g/ml，甲醇)，mp 213 215°C。波譜數據與天然紫杉醇數據完全一致。
iH-NMR (600MHz，CDCl3) 5ppm: 8.15 (2H， dd， J=8.4， 0.6Hz， 2-o-Ph) ,7.75 (2H， dd， J=8.4， 1.2Hz， N-o-Ph) ,7.62 (1H， tt， J=7.2,l.lHz， 2-p-Ph) ,7.52 (2H， m， 2-m-Ph) 7.49
(3H， m， N陽m，p-Ph) 7.44-7.40 (4H， m， 3，-o,p-Ph) 7.37 (1H， d， J=7.8Hz， 3，-p-Ph) 6.98 (1H， d， J=9Hz， NH) 6.28 (1H， s， 10-H) 6.25 (1H， t， J=8.3Hz， 13-H) 5.80 (IH， dd， J=9,2.4Hz， 3，-H) 5.69 (1H， d， J=6.6Hz， 2-H) 4.95 (1H， dd， J=7.9，2.4Hz， 5-H) 4.80 (1H， d， J=2.4Hz， 2，-H) 4,40 (1H， dd， J=10.9,6.6Hz， 7-H) 4.31 (1H， d， J=8.4Hz， 20-Ha) 4.21 (1H， d， J=9Hz， 20-H卩)3.81 (1H， d， J=7.2Hz， 3-H) 2.54 (1H， m， 6-Ha) 2.39 (3H， s， 4-COCH3) 2.36 (2H， d， J=9Hz， 14-H2) 2.25 (3H， s， 10-COCH3) 1.88
(1H， m， 6-H(3) 1.80 (3H， d， J=1.2Hz， 18-CH3) 1.71 (3H， s， 19-CH3) 1.25 (3H， s， 17-CH3) 1.15 (3H， s， 16-CH3)。
13C-NMR(125MHz,CDC13) S ppm: 203.61(C-9), 172.77(C-1，)， 171.22(10-￡OCH3),170.35(4 -￡OCH3),167.26(N-￡OPh), 166.94(2《OPh),141.91(C-12),137.94,133.65,133.24(C-ll),132.0,130.12,130.07,129.17,129.00，128.68,128.34,127.04(C-Ph),84.40(C-5),81.17(C-4),78.96(C-l)，76. 50(C-20),75.57(C-10)，74.99(C-2),73.18(C-2，),72.39(C-13)，72.15(C-7)，58.60(C-8),55.05(C-3，)，4 5.63(C-3),43.i8(C-15)，35.69(C-14),35.60(C-6)，26.84(C-17)，22.60(4-CO￡H3),21.83(C-16)，20.8 2(10-CO￡H3),14.79(C-18)，9.55(C-19)
ESI-MSm/z:1729.63(2M+Na)+,876.31 (M+Na)+,591.25(M-Sc+Na)+，308.09(Sc+Na)+
實施例4 步驟一、7-TES-9DHB的制備
在500ml干燥的反應瓶中，通過抽真空進行氮氣置換，稱取2g G.17mmo1) 9DHB， 9DHB是市售的從加拿大紅豆杉提取分離得到的中間體，加入反應瓶中，加入100ml吡啶 充分攪拌溶解，再向溶液中緩慢滴加21.6ml (128.7mmo1)三乙基氯硅烷，在25。C 26。C 水浴下攪拌10小時至反應完畢。向反應液中加入400ml乙酸乙酯和200ml水,攪拌均勻終 止反應，靜置分層，乙酸乙酯用飽和硫酸銅以200ral/次萃取3次，乙酸乙酯層再用200ml 水洗1次,無水硫酸鈉干燥，55'C減壓回收乙酸乙酯層至干，以乙酸乙酯/正己烷(1/10 ， V/V)系統(tǒng)結晶，可得到7-TES-9DHB產品2. 2g， HPLC檢測歸一化含量為98.2%，收率為 91. 5%。
步驟二、 7-TES-13-OAc-BaccHI的制備
將7-TES-9DHB 2. 2g加入到干燥的反應瓶中，加入100ml 二氯甲烷中溶解后，再加入 5g硅膠攪拌均勻，向溶液中加入重鉻酸吡啶鑰鹽(PDC)4.5g，在常溫下反應2小時至反應 完畢。將反應液過濾，并用50ml乙酸乙酯洗滌硅膠，合并二氯甲烷和乙酸乙酯洗脫液， 用20%NaCl以100ml/次洗滌2次，有機層在55。C下減壓回收至干?？傻?-TES-13-OAc-Bacc III產品2.1g， HPLC檢測歸一化含量為70%，收率為68.4%。
步驟三、7-TES-BaccEI的制備
將7-TES-13-OAc-BaccIII產品2.1g加入120L四氫呋喃溶解，加入到干燥的反應瓶中， 在室溫下通過真空抽入緩慢加入65ml 0.05M磷酸鹽緩沖液(pH=7.0)
(0.1415gK2HPO4+0.2715gK2HPO4+65mlH2O)，向溶液中加入C).1925g (3.135mmo1) LiCl H20，攪拌均勻。通過冰浴將反應液降溫至0。C時，緩慢加入1. 88g (49. 695mrao1) NaBH4，在0。C下攪拌反應2小時至反應結束。向反應液加入400ml20%NaCl終止反應，再 加入400ml 二氯甲垸進行萃取，二氯甲垸層再用400ml20%NaCl萃取，靜置分層，分離出
15二氯甲烷層。二氯甲垸層50。C減壓回收至干。可得7-TES-BaccIII粗品2.5g，歸一化含量為 75.05%。 7-TES-BaccIII粗品通過160g硅膠柱層析，以二氯甲垸/乙酸乙酯(6/1， V/V)進 行洗脫，可制得7-TES-BaccIII純品1.03g， HPLC檢測歸一化含量97.8%。，收率為72.5%。
步驟四、2，，7-BIS(TES)-TAXOL的制備
稱取7-TES-Baccmi.03g (1.466mmo1)，溶于10ml無水四氫呋喃中，通入氬氣保護， 降溫至-4(TC，滴加1.2ml 2M六甲基二硅基氨基鈉四氫呋喃溶液(2.4mmo1)，保持lh。滴 加光學純TES型紫杉醇側鏈(2.478g, 7.3mmo0的10ml無水四氫呋喃溶液，將該溶液lh 內緩慢自然升溫至0°C，在(TC下攪拌lh。加入10ml 10%乙酸四氫呋喃溶液，反應液用20ml 1(mNaHC03和20ml 二氯甲烷分配，減壓回收有機層。得2，，7- (BIS) TES-TAXOL粗品 3.8967g， HPLC檢測歸一化含量41.75%。
將2，，7- (BIS) TES-TAXOL粗品3.8697g通過80g硅膠層析，正己烷:乙酸乙酯=3:1 洗脫，以40ml/瓶收集洗脫液，收集第7~18瓶洗脫液，5(TC減壓回收至干，可得 2，，7-BISTES-TAXOL干燥物1.610g， HPLC檢測歸一化含量88.48%，收率為95.4%。
步驟五、紫杉醇的制備
稱取2，，7- (BIS) TES-TAXOL純品1. 61g，加入90mlTHF溶解，加入60ml甲酸(88%)， 在40。C水浴下攪拌5小時。反應液加入300ml 10%NaHC03，調節(jié)pH至3 4。用二氯甲烷 以180ml/次萃取3次，再用250ml水洗滌二氯甲垸層，二氯甲垸層在4(TC減壓回收至干， 可得紫杉醇粗品干燥物1. 36g。通過80g硅膠層析，二氯甲垸/乙酸乙酯(2/1， V/V)洗脫， 經乙酸乙酯/正己烷(1/3， V/V)結晶，產品在6(TC真空干燥16小時，可得白色固體紫杉 醇1. 0544g， HPLC檢測歸一化含量99. 1%，收率為93. 8%。 [ a ]D20=-52° (C=0. 01g/ml， 甲醇)，nip 213 215°C。波譜數據與天然紫杉醇數據完全一致。
iH-NMR (600MHz, CDC13) S ppm: 8.15 (2H， dd， J=8.4， 0.6Hz， 2-o-Ph) ,7.75 (2H， dd， J=8.4， 1.2Hz， N-o-Ph) ，7.62 (IH， tt， J=7.2,l.lHz， 2-p-Ph) ,7.52 (2H， m， 2-m-Ph) 7.49 (3H， m， N-m，p-Ph) 7.44-7.40 (4H， m， 3'國o，p隱Ph) 7.37 (1H， d， J=7.8Hz， 3，-p-Ph) 6.98 (IH， d， J=9Hz， NH) 6.28 (1H， s， 10-H) 6.25 (1H， t， J=8.3Hz， 13-H) 5.80 (IH， dd， J=9，2.4Hz， 3，-H) 5.69 (1H， d， J=6.6Hz， 2-H) 4.95 (IH， dd， J=7.9,2.4Hz， 5-H) 4.80 (1H， d， J=2.4Hz， 2，-H) 4.40 (1H， dd， J=10.9,6.6Hz， 7-H) 4.31 (1H， d， J=8.4Hz， 20-Ha) 4.21 (1H， d， J=9Hz, 20-Hp) 3.81 (1H， d， J=7.2Hz， 3-H) 2.54 (1H， m， 6-Ha)2.39 (3H， s， 4-COCH3) 2.36 (2H， d， J=9Hz， 14-H2) 2.25 (3H， s， 10-COCH3) 1.88 (1H， m， 6-H(3) 1.80 (3H， d， J=1.2Hz， 18-CH3) 1.71 (3H， s， 19-CH3) 1.25 (3H， s， 17-CH3) 1.15 (3H， s， 16-CH3)。
13C-NMR(125MHz，CDC13) S ppm: 203.61(C-9)， 172.77(C-1，)， 171.22(10-￡OCH3),170.35(4 -￡OCH3),167.26(N-￡OPh)， 166.94(2-￡OPh),141.91(C-12)，137.94,133.65,133.24(C-ll)，132.0, l30.12，130.07,129.17，129.00,128.68,128.34,127.04(C-Ph),84.40(C-5),81.17(C-4),78.96(C-l)，76. 50(C-20),75.57(C-10),74.99(C-2),73.18(C-2，),72.39(C-13)，72.15(C-7),58.60(C-8),55.05(C-3 ，),4 5.63(C-3),43.18(C-15)，35.69(C-14)，35.60(C-6)，26.84(C-17),22.60(4-COGH3),21.83(C-16),20.8 2(10-CO￡H3),14.79(C-18)，9.55(C-19)
ESI-MSm/z:1729.63(2M+Na)+,876.31 (M+Na)+,591.25(M-Sc+Na)+，308.09(Sc+Na)+
權利要求
1. 一種由9-二氫-13-乙酰基漿果赤霉素III半合成紫杉醇的方法，包括如下的步驟(1)用保護基保護9-二氫-13-乙?；鶟{果赤霉素III的C-7羥基，獲得保護產物；(2)用氧化劑將保護產物的C-9羥基氧化；(3)選擇性脫去C-13乙?；玫街虚g體；(4)中間體與紫杉醇側鏈進行縮合反應；(5)縮合反應后脫去C-7位和C-2’位的保護基團，得到紫杉醇；其特征在于所述保護基選自三乙基硅醚保護基、叔丁氧甲?；?、三氯乙氧甲?；凰龅难趸瘎┻x自氧化鉻的硫酸水溶液、氯鉻酸吡啶鎓鹽、重鉻酸吡啶鎓鹽；所述步驟3中用NaBH4和LiCl的0.05M磷酸鹽緩沖液，選擇性脫去C-13乙?；?，得到中間體；所述中間體具有如下的通式其中R選自三乙基硅醚保護基、叔丁氧甲?；⑷纫已跫柞；?；所述步驟4中的縮合反應是將中間體用四氫呋喃溶解，在惰性氣體的保護下降溫至-30℃～-40℃，加入催化劑，在低溫下保持0.5～1.5小時活化C-13位羥基，再加入紫杉醇側鏈進行縮合反應在1～1.5小時內均勻升溫至0℃，并在0℃保持1小時至反應完畢；所述紫杉醇側鏈具有如下通式其中R’選自1-乙氧乙氧基、三乙基硅烷基；所述催化劑選自正丁基鋰、氫化鈉、六甲基二硅基氨基鈉；所述的步驟5是將步驟4所得的產物水解脫保護基，用四氫呋喃和甲酸溶液的混合液，在40℃水浴下水解5小時至反應完畢，同時脫去C-7位和C-2’位的保護基團，得到紫杉醇。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的保護基為叔丁氧甲酰基，選用 保護劑二碳酸二叔丁酯保護C-7羥基，該保護基與9-二氫-13-乙酰基漿果赤霉素III的用量摩爾比為1.7: 1 3: 1。
3. 根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于所述的氧化劑為氧化鉻的硫酸水 溶液，其中Cr03濃度為24wt%-28wt%，硫酸濃度體積比為20%-26%。
4. 根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于所述的紫杉醇側鏈為EE型紫杉醇 側鏈，艮P(3R,4S)-3- (l-乙氧基乙氧基)-4-苯基^-苯甲?；?2-氮雜環(huán)丁酮，所述的中間體 為7-叔丁氧甲?；?漿果赤霉素in, EE型紫杉醇側鏈與所述中間體7-叔丁氧甲酰基-漿果赤 霉素III的用量摩爾比為5: 1~6: 1。
5. 根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于所述的催化劑為正丁基鋰正已烷 溶液，所述的中間體為7-叔丁氧甲?；?漿果赤霉素m，正丁基鋰正已垸溶液與所述中間體 7-叔丁氧甲酰基-漿果赤霉素III的用量摩爾比為1: 1~2: 1。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種由9-二氫-13-乙?；鶟{果赤霉素III半合成紫杉醇的方法，該方法依次包括以下步驟以9-二氫-13-乙?；鶟{果赤霉素III為原料，用二碳酸二叔丁酯保護C-7位的羥基，得到7-叔丁氧甲?；?9-二氫-13-乙酰基漿果赤霉素III；用CrO₃硫酸水溶液氧化C-9位的羥基，得到7-叔丁氧甲?；?13-乙?；鶟{果赤霉素III；用LiCl/NaBH₄的磷酸鹽緩沖液，脫去C-13位乙酰基，得到7-叔丁氧甲酰基-漿果赤霉素III；再與紫杉醇側鏈縮合、水解脫去C-7位的保護基，制得紫杉醇。本發(fā)明工藝步驟短、最終產品得率高、產品成本低并適合應用工業(yè)生產。
文檔編號A61P35/00GK101544622SQ20081010275
公開日2009年9月30日 申請日期2008年3月26日 優(yōu)先權日2008年3月26日
發(fā)明者杜麗麗, 付 許 申請人:上海金杉生物科技有限公司