專利名稱：：一種新型的奧沙利鉑衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，特別是涉及一種新型的奧沙利鉑衍生物及其作為抗癌藥的用途。
背景技術(shù)：
：癌癥是人類的一大疾病，嚴(yán)重威脅著人們的健康和安全,成為人類亟待攻克的難題?；熓悄壳芭R床治療癌癥的三大手段之一，因此世界各國每年都投入大量人力、物力和財力進(jìn)行化療用的抗癌藥物的研究和開發(fā),取得了許多成就，使癌癥治療的有效率提高，病f誕展時間延長，患者總的生存期和生活質(zhì)量等有顯著改善閨銳、孫燕主編，新世紀(jì)癌的化學(xué)預(yù)防與藥物治療，人民軍醫(yī)出版社，2005，北京]。在臨床使用的上百種抗癌藥中，鉑類藥物占有重要的地位，是治療許多常見惡性腫瘤的首選藥物[李以欣承癌癥化學(xué)治療的首選藥物，國外醫(yī)藥-合成藥、生化藥、制劑分冊，1998，19,89-101;ErnestW.，ChristenM.G.，Currentstatusofplatinum-basedanti-tumordrugs,CheaRev.,1999，99，2451-2466]。奧沙利鈾(Oxaliplatin)是鄉(xiāng)鵬白、卡鉑后的第三代鉑類抗癌藥，于1996被法國批準(zhǔn)上市，2001年在美國批準(zhǔn)上市，我國也于2001年批準(zhǔn)上市。奧沙利鉑對結(jié)、M癌W^i子的療效，它與5—氟尿嘧啶和亞葉酸聯(lián)用是治療結(jié)、M癌的首選方案,同時它別頓鉑產(chǎn)生耐藥的某些腫皿效[RaymondE.,ChaneyS.G.，TaamrnaA.,CvitkovicE.，0xaliplatin:Areviewofpreclinicalandclinicalstudies,AnnalsofOncology,1998，9,1053-1071]，這是因?yàn)樗妮d體基團(tuán)DACH還能嵌在DNA的大溝中影響癌細(xì)胞的耐藥機(jī)制[王聯(lián)紅，龍啟東，茍少華，抗腫瘤鉑類配合物的研，展，藥物化學(xué)進(jìn)展，2003，2，161_186]。但是奧沙利鉑毒性較大,其靜脈注射給藥對ICR小鼠的半數(shù)致死劑量LDw為19.8mg/kg,常見的毒副反應(yīng)為神經(jīng)毒性和消化毒性，其中神經(jīng)毒性為劑量限制毒性，有些患者使用后出現(xiàn)了如癡呆、記憶力喪失、震顫等嚴(yán)重的化療腦的癥狀[PasettoL.M.,Oxaliplatin-relatedneurotoxicity:Howandwhy，CriticalReviewsinOncology/Hematology,2006，59，159-168]。因此，如何通過結(jié)構(gòu)改造降低奧沙利鉑的毒性一直是藥物化學(xué)界的研究熱點(diǎn)[GalanskiM.，Recentdevelopmentsinthefieldofanticancerplatinumcomplexes,RecentPatentsonAnti_cancerDrugDiscovery,2006,1，285-295]。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>奧沙利鉑(Oxaliplatin)'
發(fā)明內(nèi)容現(xiàn)有很多研究表明[JakuperM.A.，GalanskiM.,Tumour-inhibitingplatinumcomplexes~stateofartandfutureperspectives,Rev.Physiol.Biochem.Pharmacol.，2003，146,l-53]，鉑類抗癌配合物cis-[Pt(II)A2Xj進(jìn)入癌細(xì)胞后，釋放出活性部分cis-[PtA2]"和離去基團(tuán)&，cis-[PtAj"與DNA結(jié)合，破壞DNA的結(jié)構(gòu)與功能，從而抑制DNA的復(fù)制。奧沙利鉑的離去基團(tuán)X2為草酸根。草酸會與在細(xì)胞內(nèi)的鈣離子反應(yīng)，生成草,沉淀，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的鈣離子代謝和信號傳導(dǎo)的素亂[TheMerkIndex,13th，2001]，草酸對人體毒性主要表現(xiàn)在神經(jīng)系統(tǒng)，癥狀與奧沙利鉑類似。由于奧沙利鉑有較高的親脂性，在神經(jīng)系統(tǒng)和細(xì)胞均有一定的分布[K印plerB.W003106469A1(2003)],因此我們認(rèn)為奧沙利鉑的神經(jīng)系統(tǒng)毒性主要來自它的離去基團(tuán)草酸根?；谶@些思路，我們對奧沙利鉑的離去基團(tuán)草酸根作了大量的更換，當(dāng)采用其他常見的二羧酸根如丙二酸、甲基丙二酸、乙基丙二酸、異丙基丙二酸、l,l一環(huán)丁烷二羧、3—羥基一1，l一環(huán)丁烷二羧酸等時所得的化合物高度不溶于水(〈1呢/ml)，而當(dāng)采用硫酸根或醋,其鹵代物時得到的化合物雖溶于水但不穩(wěn)定。為此，我們設(shè)計和合成出一種新型的二羧酸2，2-二(羥甲基)-l，3-丙二酸，以此為離去基團(tuán)，謝門共合成了水溶性高(〉10mg/ml).穩(wěn)定性好的一系列配合觀包括卡鉑衍生物(l)、奧沙利鉑衍生物(2)、舒鉑衍生物(3)?？拱┰囼?yàn)表明，奧沙利鉑衍生物的抗癌活性最高、明顯高于奧沙利鉑和其他鉑類抗癌藥卡鉑和舒鉬，而且毒性明顯低于奧沙禾糊。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>本發(fā)明的化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式(2)如下圖所示，是奧沙利鈾的新型衍生物，中文名為[1R，2R-環(huán)己烷二胺2，2_二(羥甲基)-1，3-丙二酸根合鉑(II)]，英文名為[(1R，2R-cyclohexanediamine)-2，2-Bis(hydroxymethyl)Malonato-platinum(II)]。2本發(fā)明化合物的制備方法是以K2[PtCl4]為起始原料，加入KI，轉(zhuǎn)化成K2Ptl4后，與載體基團(tuán)A2(A2=1R,2R-cyclohexanediamine)反應(yīng)，制備出相應(yīng)的cis-[Pt(II)A山]中間體，再在zR中與Ag2X2(&=2，2-二展甲基)-1，3-丙二酸根)等摩爾定量反應(yīng)，反應(yīng)完全后過濾分離Agl，母液濃縮和冷凍千燥得到粗品；或cis-[Pt(II)A山]先與Ag2S04在水中等摩爾定量反應(yīng)，反應(yīng)完全后過濾分離AgI，母液與等摩爾的BaX2定量反應(yīng)，過濾分離BaS04，母液濃縮和冷凍千燥得到粗品。粗品經(jīng)水:甲醇=1:1的體系中重結(jié)晶精制后得到純品。所涉及的主要化學(xué)反應(yīng)為cis-[PtA山]+Ag2X2--^cis-[PtA2X2]+2Agl或cis—[PtA山]+Ag2S04+2H20--cis-[PtA2(H20)2]S04+2Aglcis-[PtA2(H20)2]S04+BaX2---cis-[PtA2X2]+BaS04餅OH'OH本發(fā)明化^/對人非小細(xì)鵬市癌細(xì)胞株A549/ATCC和人胃癌細(xì)胞株SGC-7901和結(jié)腸癌細(xì)胞株HT—29的生長有明顯的抑制作用，其I&分別為2.1、4.32和1.72^iM，活性明顯高于奧沙利鉑和卡鉬和舒鈾，毒性低于奧沙利鉬,靜脈注射給藥對小鼠的LD5o為125mg/kg,同時具有水溶性高，穩(wěn)定的特點(diǎn)，顯示出良好的臨床應(yīng)用前景。具體實(shí)駄式(1)2，2-二(^甲基)-1,3-丙二酸銀的制備以市售的2，2-二(羥甲基)-1，3-丙二酸二乙酯為原料，鄉(xiāng)&K解后得到2，2-二(羥甲彰-1,3-丙二酸。取2,2-二(羥甲基)-1，3-丙二酸10g，溶于100ml的水中，用lmol/LNaOH調(diào)節(jié)PH=6-7，加入含128rnrno1AgN03(過量5%)溶液100ml，產(chǎn)生白色沉淀，過濾收集，用水、乙醇洗滌后在60一7CTC下真空干燥4小時，得到2，2-二(羥甲基)-1，3-丙二酸銀21g，產(chǎn)率91%。(2)cis-[Pt(II)A2l2]中間體的制備稱取5gK2PtCl4(12mmol)溶于50ml水中，過濾除去不溶物，在40。C下，緩慢加入含KI12g(72mmol)的7K溶液50ml，避光反應(yīng)1小時后，滴加等摩爾(12mmol)的1R,2R-環(huán)已烷二胺(A2)，得到黃色沉淀，過濾收集，用水、乙醇洗滌后在60—7(TC下真空干燥4小時，分別得到cis-[Pt(II)A山]6.4g，產(chǎn)率95%。(3)[1R，2R-環(huán)已烷二胺'2，2-二(羥甲基)-1，3-丙二酸根合鈾(n)](2)的合成取5g的cis-「Pt(II)A山]，懸浮100ml水中，加入J魏等摩爾量的2，2_二(羥甲基)-1,3-丙二酸銀3.34g，在45。C下攪拌反應(yīng)24小時，檢查反應(yīng)完全后過濾除去Agl沉淀，母液Mffi濃縮到20ml，冷凍干燥得白色晶體，在水:乙醇=1:1的體系中重結(jié)晶提純得到精品2.9克，產(chǎn)率70%,水中溶解度〉10mg/ml(室溫。特征結(jié)構(gòu)參數(shù)為<1>元素分析C27.8%，N5.92%，H4.28%，Pt41.2M與理論值C28.0%，N5.94%，H4.25%，Pt41.4。/。一致。<2>FAB+_MS(m/e，RI):472(C100%)<3>IR(cm—',KBr壓片)3218(s，kNH3),2938，2863(w，kCH2)，1629(vsyas(COO)),1384，1364(s,ks(COO))，1032(m,kC-0H),這些參數(shù)符合所發(fā)明的配合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。(4)發(fā)明的配合物(2)的體外抗癌活性以水為溶媒、分別以卡鉑、奧沙利鉑和舒鉑為對照，采用SRB法測定所發(fā)明的化合物對A549/ATCC人非小細(xì)鵬市癌細(xì)胞株、SGC-7901人胃癌細(xì)胞株和HT—29人結(jié)腸癌細(xì)胞株生長的抑制作用，計算I"。從IQo的大小可知，所發(fā)明的化合物(2)對A549/ATCC、SGC-7901和HT—29癌細(xì)胞生長的抑制明顯高于明顯高于其類似物1，3，4和目前臨床j細(xì)的鉑離癌藥卡鉬、奧沙利鉑和舒鉑。表1.化合物抑制癌細(xì)胞生長50%的濃度IOo(pM)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>(5)發(fā)明的化合物(2)的初^性選擇健康的ICR小鼠50只，雄雌各一半，體重在18-22g，隨機(jī)分為5組，每只10只，給藥前動物禁食約8小時，所發(fā)明的化合物用5%葡萄糖溶液溶解，動物按0.2ml/10g體重進(jìn)行小鼠尾靜脈給藥，給藥后連續(xù)觀察14天動物的中毒反應(yīng)和死亡情況，并計算藥物的半致死量UX。、LDw,測得所分明的化^tl注射給藥的LDW、LD50分別為90、125rag/kg(95%的可信度)，主要死亡原因與卡鈾類似，為骨髓抑制，但毒性比奧沙禾糊明顯低，相同的實(shí)驗(yàn)測得奧沙利鉑注射給藥的LD^22.l呢/kg。權(quán)利要求1.一種奧沙利鉑的衍生物[1R，2R-環(huán)己烷二胺·2，2-二(羥甲基)-1，3-丙二酸根合鉑(II)]，[(1R，2R-cyclohexanediamine)·2，2-Bis(hydroxymethyl)malonatoplatinum(II)]結(jié)構(gòu)式為id="icf0001"file="S2008100584106C00011.gif"wi="72"he="25"top="48"left="60"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>2.如權(quán)利要求1的化合觀其特征在刊喊凍干粉劑或7K溶液劑型。3.如權(quán)利要求l的化，,其特征在于用于帝恪臨床治療癌癥藥物的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及一種新型的奧沙利鉑衍生物[1R，2R-環(huán)己烷二胺·2，2-二(羥甲基)-1，3-丙二酸根合鉑(II)]，[(1R，2R-cyclohexanediamine)·2，2-Bis(hydroxymethyl)malonato-platinum(II)]。它的制備是以cis-[PtA₂I₂]為原料(A₂＝1R，2R-環(huán)己烷二胺)，與2，2-二(羥甲基)-1，3-丙二酸銀定量反應(yīng)，過濾分離AgI后母液濃縮和冷凍干燥得到粗品，粗品經(jīng)水∶乙醇＝1∶1的體系中重結(jié)晶得到純品。本發(fā)明配合物的抗癌活性明顯高于奧沙利鉑、毒副作用明顯比奧沙利鉑小，可以制成凍干粉或注射液，用于臨床治療癌癥。文檔編號A61K31/282GK101289468SQ200810058410公開日2008年10月22日申請日期2008年5月19日優(yōu)先權(quán)日2008年5月19日發(fā)明者堯余,侯樹謙,劉偉平,葉青松,樓麗廣,諶喜珠申請人:昆明貴金屬研究所;中國科學(xué)院上海藥物研究所