專(zhuān)利名稱(chēng)：：六味地黃丸雙波長(zhǎng)覆蓋融合指紋圖譜的質(zhì)量控制方法六味地黃丸雙波長(zhǎng)覆蓋融合指紋圖譜的質(zhì)量控制方法發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明屬于采用現(xiàn)代分析檢測(cè)儀器檢測(cè)中藥制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及一種中藥質(zhì)量的控制方法，更具體的說(shuō)是一種六味地黃丸雙波長(zhǎng)覆蓋融合指紋圖譜的質(zhì)量控制方法。技術(shù)背景六味地黃丸是中醫(yī)補(bǔ)益劑中滋補(bǔ)腎陰的代表方劑。其配方源自經(jīng)典古方，由熟地黃、山茱萸(制)、牡丹皮、澤瀉、山藥、茯茶6味藥材組成，具有滋陰補(bǔ)腎的主要功能。其立法以腎、肝、脾三陰并補(bǔ)，補(bǔ)腎為主。熟地黃滋補(bǔ)腎陰、填精益髓為主藥；山茱萸藥性酸溫，可補(bǔ)益肝腎，澀精斂汗；山藥味甘性平，健脾補(bǔ)肺，固腎益精。而澤瀉配熟地黃則瀉腎降濁；牡丹皮配山茱萸以清瀉肝火；茯薈配山藥滲水利濕。配伍組方以補(bǔ)為主，并將補(bǔ)虛與去邪結(jié)合，形成"三補(bǔ)三瀉"，相反相成之勢(shì)，適合于肝腎陰虛之癥。主治由腎陰虧虛引起的腰膝酸軟、頭暈?zāi)垦?、耳鳴耳卑、潮熱盜汗、口燥咽干、骨蒸潮熱，盜汗遺精，消渴等癥狀。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)六味地黃丸還有許多新功效。如提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物降低的脾臟白細(xì)胞介素2活性，拮抗使用醋酸可的松造成的脾臟重量減輕。進(jìn)一步研究還發(fā)現(xiàn)，六味地黃丸對(duì)多形核白細(xì)胞的免疫功能有明顯的雙向調(diào)節(jié)作用，且具有一定的防癌作用；對(duì)腎功能的影響研究發(fā)現(xiàn)，服用六味地黃丸的大鼠其細(xì)胞生成溶酶體的速度明顯加快，從而提高了細(xì)胞的解毒能力而改善腎功能；延緩衰老，六味地黃丸能明顯增加陰虛動(dòng)物體重，增強(qiáng)其抗疲勞、耐低溫和耐缺氧能力。有明顯的抗氧化作用，對(duì)老年性癡呆有一定治療作用。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)代分析檢測(cè)儀器的普及應(yīng)用，使中藥檢測(cè)分析水平有了顯著提高，藥品質(zhì)量控制方法不斷完善。其中指紋圖譜技術(shù)在中藥質(zhì)量控制中發(fā)揮越來(lái)越重要作用。它是采用光譜、色譜等分析手段對(duì)中藥材(或中成藥)的成分進(jìn)行檢測(cè)，形成特有的專(zhuān)屬化學(xué)圖譜，該圖譜能全面反映中藥所含內(nèi)在化學(xué)成分的種類(lèi)與數(shù)量，具有相對(duì)唯一性，故稱(chēng)之為中藥材(或中成藥)的指紋圖譜.中藥指紋圖譜由于體現(xiàn)了中醫(yī)藥的整體、宏觀、復(fù)雜的特點(diǎn)很快成為國(guó)內(nèi)外廣泛接受的中藥質(zhì)量控制方法。六味地黃丸在中藥制劑中占有很重要的地位。目前，市場(chǎng)銷(xiāo)售有很多廠(chǎng)家生產(chǎn)的六味地黃丸，其質(zhì)量良莠不齊，因而六味地黃丸的穩(wěn)定性難以保證。2005版中國(guó)藥典規(guī)定的含量測(cè)定牡丹皮中含丹皮酚(CA。03)計(jì)，水蜜丸每lg不得少于1.Omg;小蜜丸每lg不得少于0.70mg;大蜜丸每丸不得少于6.3mg。含山茱萸以馬錢(qián)苷(CH260lfl)計(jì)，水蜜丸每lg不得少于0.70mg;小蜜丸每lg不得少于0.5mg;大蜜丸每丸不得少于4.5mg。采用此標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定牡丹皮中的丹皮酚和山茱萸中馬錢(qián)苷作為含量質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)是在兩個(gè)不同波長(zhǎng)下，使用不同的前處理方法分別進(jìn)行測(cè)定；此方法不能從整體上評(píng)價(jià)和控制的中藥質(zhì)量，且藥典中馬錢(qián)苷測(cè)定方法流動(dòng)相體系和前處理均較復(fù)雜。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足,提供一種六味地黃的新指紋圖i普，及基于其指紋圖語(yǔ)的雙波長(zhǎng)覆蓋融合的含量測(cè)定方法，以保證六味地黃藥物的質(zhì)量更加安全、可靠本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的六味地黃丸雙波長(zhǎng)覆蓋融合指紋圖i普的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法按如下步驟進(jìn)行(l)供試品溶液的制備取本品六味地黃丸切碎，取約lg，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入曱醇25mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲提取60~120分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用曱醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；(2)對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取馬錢(qián)苷對(duì)照品、丹皮酚對(duì)照品適量，加曱醇分別制成每lmL含馬錢(qián)苷對(duì)照品14ng、丹皮酚對(duì)照品18ng的溶液，即得；(3)測(cè)定方法照高效液相色譜條件(中國(guó)藥典2005版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑AgilentSBC18(4.6咖x250mm，5^m);流動(dòng)相梯度見(jiàn)表1;流速1.0mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)236nm、274nm;進(jìn)樣量10jiL,理論塔板數(shù)計(jì)算，應(yīng)不低于3000;表1流動(dòng)相梯度洗脫表<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>(4)雙波長(zhǎng)覆蓋融合將雙波長(zhǎng)下的色譜圖中相同組分按最大峰面積覆蓋融合，使其成為一張能夠同時(shí)反映兩個(gè)波長(zhǎng)的信息的色譜圖，達(dá)到定量的目的。(5)對(duì)上述確定的測(cè)定方法進(jìn)行有效性評(píng)價(jià)，其中包括專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確度、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、測(cè)定范圍以及耐用性。本發(fā)明所述六味地黃丸指紋圖譜檢測(cè)的質(zhì)量控制方法，優(yōu)選的供試品溶液的制備該方法供試品溶液的制備取本品水蜜丸切碎，取約lg，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入曱醇25mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲提取60分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用曱醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。本發(fā)明所述六味地黃丸指紋圖鐠檢測(cè)的質(zhì)量控制方法中，超聲處理，超聲60分鐘。本發(fā)明所述六味地黃丸指紋圖譜檢測(cè)的質(zhì)量控制方法，優(yōu)選的測(cè)定方法照高效液相色語(yǔ)條件(中國(guó)藥典2005版一部附錄VID)測(cè)定。色鐠條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色諳柱AgilentSBC18(4.6mmx250咖，5|iun);流動(dòng)相梯度見(jiàn)表1;流速1.0mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)236nm、274nm;進(jìn)樣量IOnL,理論塔板數(shù)計(jì)算，應(yīng)不低于3000。本發(fā)明所述的質(zhì)量控制方法，其中優(yōu)選的雙波長(zhǎng)融合為在236nm波長(zhǎng)下測(cè)得以馬錢(qián)香為對(duì)照的色鐠圖的保留時(shí)間與峰面積；與在274nm波長(zhǎng)下丹皮酚為對(duì)照的色鐠圖的保留時(shí)間與峰面積，再使用Matlab7.1進(jìn)行編程，將不同波長(zhǎng)下的色語(yǔ)圖中相同組分按最大峰面積覆蓋融合，使其成為一張能夠同時(shí)反映兩個(gè)波長(zhǎng)信息的色譜圖。覆蓋后的指紋圖譜特征參數(shù)為有七個(gè)共有峰，見(jiàn)圖8，各特征峰以7號(hào)峰為參照峰，相對(duì)保留時(shí)間分別為0.26，0.36，0.50，0.68，0.82，0.91,1。更加優(yōu)選的雙波長(zhǎng)覆蓋融合，指的是將236nm波長(zhǎng)下測(cè)得馬錢(qián)魯?shù)谋Ａ魰r(shí)間與峰面積分別17.423min和600062，在274nm波長(zhǎng)下丹皮酚的保留時(shí)間與峰面積為34.517min和3396812，使用Matlab7.1進(jìn)行編程，計(jì)算指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間，其中馬錢(qián)苷的相對(duì)保留時(shí)間為0.45-0.55,丹皮酚的保留時(shí)間為1。本發(fā)明所述六味地黃丸指紋圖譜的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)是牡丹皮中含丹皮酴(C,IW)3)計(jì)，水蜜丸每lg不得少于1.0mg;小蜜丸每lg不得少于0.70mg;大蜜丸每丸不得少于6.3mg。含山茱萸以馬錢(qián)苷(CnH2且。)計(jì)，水蜜丸每lg不得少于0.70mg;小蜜丸每lg不得少于0.5mg;大蜜丸每丸不得少于4.5mg。本發(fā)明所述的質(zhì)量控制方法，可檢測(cè)提取方法相同或相近含有六味地黃組成的任何一種劑型.包括水蜜丸、大蜜丸、濃縮丸、顆?；蚰z嚢。優(yōu)選六味地黃丸的質(zhì)量控制方法為丸劑。本發(fā)明的六味地黃丸雙波長(zhǎng)覆蓋融合指紋圖鐠質(zhì)量控制方法與現(xiàn)有的中國(guó)藥典規(guī)定的測(cè)定方法相比所具有的積極效果在于(1)本發(fā)明首次公開(kāi)雙波長(zhǎng)覆蓋融合指紋圖譜用于含量測(cè)定的方法，通過(guò)指紋圖譜中主要特征峰面積或峰面積的比值的測(cè)定，能有效的檢測(cè)和控制六味地黃丸的質(zhì)量，融合后的特征，反映兩個(gè)吸收波長(zhǎng)的峰面積，解決了同一張色鐠圖，兩個(gè)最大吸收波長(zhǎng)反映不同的兩個(gè)待測(cè)組分的峰面積。(2)本發(fā)明的質(zhì)量控制方法，其優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好、易于掌握，能從色語(yǔ)的整體特征面貌上把握六味地黃丸的品種和質(zhì)量情況.(3)本發(fā)明是將指紋圖譜技術(shù)，結(jié)合被檢測(cè)組分的特點(diǎn)，利用不同化合物最大紫外吸收波長(zhǎng)產(chǎn)生的吸收峰覆蓋融合，可消除不同波長(zhǎng)產(chǎn)生吸收峰的干擾，確保所檢測(cè)成分準(zhǔn)確、可靠。雙波長(zhǎng)覆蓋融合檢測(cè)方法的應(yīng)用，提供了一個(gè)適合中藥特點(diǎn)的多組分含量測(cè)定方法，為中藥質(zhì)量控制提供全新的分析方法。(4)本發(fā)明采用雙波長(zhǎng)覆蓋融合指紋圖鐠用于六味地黃丸含量測(cè)定，提高了六味地黃丸的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，從而有效確保了六味地黃丸的安全、均一、穩(wěn)定、有效、可控，保證了工藝的規(guī)范化和質(zhì)量的穩(wěn)定一致。圖1、236nm波長(zhǎng)下對(duì)照品馬錢(qián)苷與丹皮酚的色圖譜。圖2、274nm波長(zhǎng)下對(duì)照品馬錢(qián)苷與丹皮酚的色圖鐠。圖3、馬錢(qián)苷的紫外掃描圖。圖4、丹皮酚的紫外掃描圖。圖5、六味地黃丸236mn波長(zhǎng)下HPLC指紋圖譜。圖6、六味地黃丸274nm波長(zhǎng)下HPLC指紋圖鐠。圖7為Matlab7.1編程的兩個(gè)波長(zhǎng)覆蓋融合的色鐠圖。其中1-5圖中的1為馬錢(qián)苷(Loganin)，2為丹皮酚(Paeonol)。兩個(gè)波長(zhǎng)覆蓋融合的色譜特征數(shù)據(jù)是為馬錢(qián)苷的相對(duì)保留時(shí)間為0.50，覆蓋后的峰面積為600062，丹皮酚的相對(duì)保留時(shí)間為1，覆蓋后的峰面積為3396812;其他特征峰的相對(duì)保留時(shí)間為0.26，0.36，0.68,0.82,0.91。圖8為覆蓋融合后指紋圖譜各共有指紋峰。圖9陰性樣品的HPLC色謙圖。具體實(shí)施方式以下結(jié)合較佳實(shí)施例，對(duì)依據(jù)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式詳細(xì)說(shuō)明如下；同時(shí)為了簡(jiǎn)單和清楚的目的，下文恰當(dāng)?shù)氖÷粤斯夹g(shù)的描述，以免那些不必要的細(xì)節(jié)影響對(duì)本技術(shù)方案的描述。實(shí)施例1取六味地黃丸水蜜丸切碎，取l.Og，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入曱醇25mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲提取，超聲處理60分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用曱醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取馬錢(qián)苷對(duì)照品、丹皮酚對(duì)照品適量，加曱醇分別制成每lmL含馬錢(qián)苷對(duì)照品14mg、丹皮酚對(duì)照品18jug的溶液，即得.測(cè)定方法照高效液相色譜條件(中國(guó)藥典2005版一部附錄VID)測(cè)定。色鐠條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱AgilentSBC18(4.6咖x250mm，5nm);流動(dòng)相梯度見(jiàn)表1;流速1.0mL/min;檢領(lǐng)'J波長(zhǎng)236nm、274nm;進(jìn)樣量IOpL。理論塔板數(shù)計(jì)算，應(yīng)不低于3000。表1流動(dòng)相梯度洗脫表<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>以上六味地黃丸的指紋圖譜所用的儀器試劑Waters2695高效液相色鐠儀，配置自動(dòng)進(jìn)樣器、2996二極管陣列檢測(cè)器、柱溫箱。乙腈(色鐠純，美國(guó)Fisher),超純水(millipore);其它試劑為分析純.雙波長(zhǎng)覆蓋融合方法在236nm波長(zhǎng)下測(cè)得馬錢(qián)苷的保留時(shí)間與峰面積分別17.423min和600062，在274nm波長(zhǎng)下丹皮酚的保留時(shí)間與峰面積為34.517min和3396812。再使用Matlab7.1進(jìn)行編程，將不同波長(zhǎng)下的色譜圖進(jìn)行覆蓋融合，使其成為一張能夠同時(shí)反映兩個(gè)波長(zhǎng)信息的色譜圖，達(dá)到定量的目的，覆蓋后的指紋圖譜特征參數(shù)為有七個(gè)共有峰，見(jiàn)圖8。各特征峰以7號(hào)峰為參照峰，相對(duì)保留時(shí)間分別為0.26，0.36，0.50,0.68,0.82，0.91,1.其中馬錢(qián)苷的相對(duì)保留時(shí)間為0.5，丹皮酚的保留時(shí)間為1.實(shí)施例2取六味地黃濃縮丸切碎，取1.0g,精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲提取是超聲處理120分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用曱醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取馬錢(qián)苷對(duì)照品、丹皮酚對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每lmL含馬錢(qián)苷對(duì)照品14jig、丹皮酚對(duì)照品18mg的溶液，即得。測(cè)定方法照高效液相色謙條件(中國(guó)藥典2005版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色諳柱AgilentSBC18(4.6mmx250咖，5pun);流動(dòng)相梯度見(jiàn)表1;流速1.0mL/min;檢效'J波長(zhǎng)236nm、274nm;進(jìn)樣量IOpL。理論塔板數(shù)計(jì)算，應(yīng)不低于3000。表1流動(dòng)相梯度洗脫表時(shí)間(min)流速(mL/min)水％乙腈％01.099181.08812211.08812401.01090501.01090以上六味地黃丸的指紋圖鐠所用的儀器試劑:Waters2695高效液相色鐠儀，配置自動(dòng)進(jìn)樣器、2996二極管陣列檢測(cè)器、柱溫箱。乙腈(色譜純，美國(guó)Fisher)，超純水(millipore);其它試劑為分析純.雙波長(zhǎng)覆蓋融合方法在236nm波長(zhǎng)下測(cè)得馬錢(qián)苷的保留時(shí)間與峰面積分別17.423min和600062,在274nm波長(zhǎng)下丹皮酚的保留時(shí)間與峰面積為34.517min和3396812。再使用Matlab7.1進(jìn)行編程，將不同波長(zhǎng)下的色譜圖進(jìn)行覆蓋融合，使其成為一張能夠同時(shí)反映兩個(gè)波長(zhǎng)信息的色譜圖，達(dá)到定量的目的.覆蓋后的指紋圖鐠特征參數(shù)為有七個(gè)共有峰，各特征峰以7號(hào)峰為參照峰，相對(duì)保留時(shí)間分別為0.26，0.36，0.50,0.68,0.82,0.91，1(祥見(jiàn)見(jiàn)圖8)。其中馬錢(qián)苷的相對(duì)保留時(shí)間為0.5，丹皮酚的保留時(shí)間為1.實(shí)施例3采用常規(guī)方法與雙波長(zhǎng)覆蓋融合方法測(cè)定同一批號(hào)的六味地黃丸的比較實(shí)驗(yàn)常^L萬(wàn)法:取六味地黃丸樣品xxx藥業(yè)公司(批號(hào)為B058220)按照按藥典方法，分別測(cè)定馬錢(qián)苷和丹皮酚.馬錢(qián)苷測(cè)定方法為色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以四氫呋喃-乙腈一甲醇一0.05%磷酸溶液(1:8:4:87)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為236nm;柱溫40°C，理論板數(shù)按馬錢(qián)苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000,對(duì)照品溶液的制備取馬錢(qián)普對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加50%甲醇制成每lmL含20mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品水蜜丸或小蜜丸，切碎，取約0.712g，0.7029g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中,精密加入50%甲醇25mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理(功率250w，功率33kHz)15分鐘使溶散，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重童，搖勻.濾過(guò).精密稱(chēng)取續(xù)濾液10mL，置中性氧化鋁柱(100~200目，4g，內(nèi)徑lcm,干法裝柱)上，用40%甲醇50mL洗脫，收集流出液及洗脫液，蒸干，殘?jiān)?0%甲醇適量便溶解，并轉(zhuǎn)移至lOmL量瓶中，加50%曱醇適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加50%曱醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10pl，注入液相色諳儀，測(cè)定峰面積，即得。經(jīng)計(jì)算得，兩個(gè)平行樣含量分別0.8892mg/g,0.8818mg/g,平均值0.8855mg/g。即xxx藥業(yè)公司(批號(hào)B058220)中，馬錢(qián)苷的含量為0.8855mg/g。丹皮酚測(cè)定方法為色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以曱醇-水(70:30)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm,理論板數(shù)按丹皮酚峰計(jì)算應(yīng)不低于3500。對(duì)照品溶液的制備取丹皮酚對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加曱醉制成每lmL含20Hg的溶液，即得.供試品溶液的制備取本品，切碎，分別精密稱(chēng)取0.3038g，0.3005g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%曱醇50mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz)45分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用50%曱醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10y1，注入液相色鐠儀，測(cè)定峰面積，即得。經(jīng)計(jì)算得兩個(gè)平行樣中丹皮酚的含量分別為1.6360mg/g，1.6795mg/g，平均值為:1.6578mg/g。即xxx藥業(yè)公司(批號(hào)B058220)中，丹皮酚的含量為1.6578mg/g。按照本專(zhuān)利所述的檢測(cè)方法色譜條件，色i普柱AgilentSBC18(4.6mmx250mm，5薩)；流動(dòng)相梯度見(jiàn)表l;流速l.OmL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)236nm、274nm;進(jìn)樣量10uL，理論塔板數(shù)計(jì)算，應(yīng)不低于3000。表1流動(dòng)相梯度洗脫表<table>tableseeoriginaldocumentpage12</table對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取馬錢(qián)苷對(duì)照品、丹皮酚對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每lmL含馬錢(qián)苷對(duì)照品14yg、丹皮酚對(duì)照品18yg的溶液，即得。供試品溶液的制備:取六味地黃濃縮丸切碎，取1.0g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入曱醇25mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理60分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用曱醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得.測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10y1，注入液相色鐠儀，測(cè)定峰面積，即得.經(jīng)計(jì)算得，六味地黃丸樣品xxx藥業(yè)公司(批號(hào)B058220)中馬錢(qián)苷的含量為0.8789g，0.8836g，平均值為0.8812mg/g。計(jì)算得丹皮酚的含量為1.6708mg/g，1.6576mg/g，平均值為1.6642mg/g。本發(fā)明進(jìn)一步對(duì)上述確定的測(cè)定方法進(jìn)行有效性評(píng)價(jià)，其中包括專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確度、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性及線(xiàn)形范圍。CD揞翁唐者塞-取同一供試品溶液在上述條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，分別對(duì)2種物質(zhì)進(jìn)行定量測(cè)定，考察方法的精密度，結(jié)果表明，馬錢(qián)苷為0.75%,丹皮酚為0.99%。②重復(fù)性實(shí)驗(yàn)平行制備6份供試品溶液，在上述條件下分別對(duì)2種物質(zhì)進(jìn)行定量測(cè)定，考察方法的重復(fù)性，結(jié)果表明馬錢(qián)苷為1.94%，丹皮酚為2.71t③穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)同一供試品溶液，分別于O、3、6、9、16、24h對(duì)2種物質(zhì)進(jìn)行定量測(cè)定，考察方法的樣品穩(wěn)定性，結(jié)果表明馬錢(qián)苷為1.42%，丹皮酚為1.14%,④線(xiàn)形范圍在上述條件下，2個(gè)成分分別在9個(gè)濃度點(diǎn)，用峰面積(Y)對(duì)濃度(X)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，結(jié)果馬錢(qián)苦、丹皮酚的回歸方程分別為Y-17191X-1517.5(r=0.9998)，Y=5U01X+24480(r=0.9998)。馬錢(qián)苷在3.62~108.6ng/ml、丹皮酚在4.505~135.15jig/ml的范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。⑤專(zhuān)屬性按處方配置不含牡丹皮與山茱萸的空白樣品，再按供試品溶液制備方法，制得陰性樣品溶液.分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10pL,注入高效液相色鐠儀，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖9;陰性樣品溶液對(duì)含量測(cè)定無(wú)干擾。測(cè)定結(jié)果由市場(chǎng)直接購(gòu)買(mǎi)的六味地黃丸(水蜜丸)，按專(zhuān)利所述方法，測(cè)定其中的馬錢(qián)苷、丹皮盼2種成分。結(jié)果見(jiàn)表2。表23批六味地黃丸中各成分的含量(n-2)批號(hào)(LotNo.)馬錢(qián)苷(Loganin)mg/g丹皮盼(Paeonol)mg/gB0582200.88121.6642B0582070.87541.2296B0582270.76061.1657在詳細(xì)說(shuō)明的較佳實(shí)施例之后，熟悉該項(xiàng)技術(shù)人士可清楚地了解，在不脫離上述申請(qǐng)專(zhuān)利范圍與精神下可進(jìn)行各種變化與修改，凡依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與修飾，均屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍.且本發(fā)明亦不受限于說(shuō)明書(shū)中所舉實(shí)例的實(shí)施方式。權(quán)利要求1、六味地黃丸雙波長(zhǎng)覆蓋融合指紋圖譜的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法按如下步驟進(jìn)行(1)供試品溶液的制備取本品六味地黃丸切碎，取約1g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲提取60～120分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；(2)對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取馬錢(qián)苷對(duì)照品、丹皮酚對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每1mL含馬錢(qián)苷對(duì)照品14μg、丹皮酚對(duì)照品18μg的溶液，即得；(3)測(cè)定方法照高效液相色譜條件(中國(guó)藥典2005版一部附錄VID)測(cè)定，色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相梯度見(jiàn)表1；流速1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)236nm、274nm；進(jìn)樣量10μL，理論塔板數(shù)計(jì)算，應(yīng)不低于3000；表1流動(dòng)相梯度洗脫表<table-cwuid="table1"><tablewidth="709"><tgroupcols="4"><thead></column></row><row><column><entrycolwidth="28%"morerows="1"morelines="1"><p>時(shí)間(min)</p></entry><entrycolwidth="27%"morerows="1"morelines="1"><p>流速(mL/min)</p></entry><entrycolwidth="24%"morerows="1"morelines="1"><p>水％</p></entry><entrycolwidth="21%"morerows="1"morelines="1"><p>乙腈％</p></entry></column></row></thead><tbody></column></row><row><column><entrycolwidth="28%"morerows="1"morelines="1"><p>08214050</p></entry><entrycolwidth="27%"morerows="1"morelines="1"><p>1.01.01.01.01.0</p></entry><entrycolwidth="24%"morerows="1"morelines="1"><p>9988881010</p></entry><entrycolwidth="21%"morerows="1"morelines="1"><p>112129090</p></entry></column></row></tbody></tgroup></column></row><table></table-cwu>(4)雙波長(zhǎng)覆蓋融合在236nm波長(zhǎng)下測(cè)得供試品以馬錢(qián)苷為對(duì)照的色譜圖的保留時(shí)間與峰面積；與在274nm波長(zhǎng)下測(cè)得供試品以丹皮酚為對(duì)照的色譜圖的保留時(shí)間與峰面積，使用Matlab7.1進(jìn)行編程；覆蓋后的指紋圖譜特征參數(shù)為有七個(gè)共有峰，各特征峰以7號(hào)峰為參照峰，相對(duì)保留時(shí)間分別為0.26，0.36，0.50，0.68，0.82，0.91，1，見(jiàn)圖8；(5)對(duì)上述確定的測(cè)定方法進(jìn)行有效性評(píng)價(jià)，其中包括專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確度、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、測(cè)定范圍以及耐用性。2、如權(quán)利要求1所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于，該方法供試品溶液的制備取本品水蜜丸切碎，取約lg,精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入曱醇25mL,密塞，稱(chēng)定重量，超聲提取，放冷，再稱(chēng)定重量，用曱醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。3、如權(quán)利要求1所述的質(zhì)量控制方法，其中的雙波長(zhǎng)覆蓋融合，指的是將236nm波長(zhǎng)下測(cè)得六味地黃丸的HPLC色譜圖及在274nm波長(zhǎng)下測(cè)得六味地黃丸的HPLC色譜圖，使用Matlab7.1進(jìn)行編程覆蓋融合；計(jì)算指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間，其中馬錢(qián)苷的相對(duì)保留時(shí)間為0.45-0.55，丹皮酚的保留時(shí)間為1。4、如權(quán)利要求書(shū)1~3任一項(xiàng)所述的質(zhì)量控制方法，其中的六味地黃丸質(zhì)量控制方法可檢測(cè)提取方法相同或相近含有六味地黃組成的任何一種劑型。5、如權(quán)利要求書(shū)4所述的質(zhì)量控制方法，其中六味地黃丸的劑型包括水蜜丸、大蜜丸、濃縮丸、顆?；蚰z嚢。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了六味地黃丸雙波長(zhǎng)覆蓋融合指紋圖譜的質(zhì)量控制方法，它是將指紋圖譜技術(shù)，結(jié)合被檢測(cè)組分的特點(diǎn)，利用不同化合物最大紫外吸收波長(zhǎng)產(chǎn)生的吸收峰覆蓋融合的檢測(cè)方法，可消除不同波長(zhǎng)產(chǎn)生吸收峰的干擾，確保所檢測(cè)成分準(zhǔn)確、可靠。雙波長(zhǎng)覆蓋融合的應(yīng)用，更加準(zhǔn)確地把握有關(guān)藥品的質(zhì)量，從而有效確保了六味地黃丸的安全、均一、穩(wěn)定、有效、可控。本發(fā)明的質(zhì)量控制方法簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性較好，可用于中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)、中藥質(zhì)量控制和中藥新藥研發(fā)中。特別是可將其作為六味地黃丸質(zhì)量控制及真?zhèn)舞b別的指標(biāo)之一。文檔編號(hào)A61P25/00GK101229308SQ20081005204公開(kāi)日2008年7月30日申請(qǐng)日期2008年1月11日優(yōu)先權(quán)日2008年1月11日發(fā)明者劉征輝,葉挺祥,孟憲生,勇王,奕程,羅國(guó)安,趙洪芝,莉黎申請(qǐng)人:天津海世達(dá)檢測(cè)技術(shù)有限公司