專利名稱：：異體人紅細胞膜蛋白在制備治療腫瘤的藥物中的應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域，具體涉及治療腫瘤的藥物。技術背景惡性腫瘤的治療方法主要有手術治療、放射治療、化學治療、中醫(yī)中藥治療和免疫治療。手術治療是治療腫瘤最有效的方法，但是單純依靠手術很難防止腫瘤復發(fā)和遠處轉移，難以達到根治的目的；放射治療雖然對某些腫瘤具有根治的效果，但還有一定的局限性。放射治療是一種局部治療手段，這能對局部病灶有治療作用，不能預防腫瘤的遠處轉移；放射治療是通過射線殺滅腫瘤細胞，對于一些射線不敏感的腫瘤細胞不能全部殺死，導致腫瘤殘留和復發(fā)?；瘜W治療對某些腫瘤的治愈率比較高，但化學藥物對腫瘤細胞殺傷的選擇性不強，毒性較大；中醫(yī)學在調動機體的抗病能力，減輕其他治療方法的不良反應有獨特的效果，但對腫瘤的局部控制效果較差，只能作為輔助治療的手段。免疫治療是指通過調動宿主的天然防衛(wèi)機制或給予某些生物物質以取得抗腫瘤效應的治療方法的總稱，其基本思路是通過相關技術方法調動宿主的免疫系統(tǒng)的抗腫瘤免疫應答能力，消滅已經形成的腫瘤細胞或抑制其進一步發(fā)展，關鍵是克服宿主對腫瘤細胞的免疫忽視狀態(tài)。用于免疫治療的藥物主要有以下幾種類型(1)腫瘤疫苗是利用腫瘤細胞或腫瘤抗原物質誘導機體的特異性細胞免疫和體液免疫反應，增強機體的抗癌能力，阻止腫瘤的生長、擴散和復發(fā)，因此稱它為腫瘤特異性主動免疫治療。腫瘤疫苗可加強和提高機體自身免疫功能和識別腫瘤抗原能力，避免腫瘤逃避免疫監(jiān)視，啟動自身主動的生理免疫抗瘤能力，以達到減少癌變發(fā)生、消除手術殘留癌灶、防止轉移復發(fā)的目的。目前研究較多的腫瘤疫苗有腫瘤細胞疫苗、腫瘤核酸疫苗、腫瘤多肽疫苗、腫瘤基因工程疫苗和抗獨特型腫瘤疫苗等五種。其中，細胞疫苗研究的最早，核酸疫苗、多肽疫苗和基因工程疫苗是1990年后才發(fā)展起來的新疫苗。腫瘤細胞疫苗是以自身腫瘤組織經過研磨、照射、藥物滅活等方法處理加佐劑后制成的腫瘤疫苗。這種疫苗臨床上已試用于多種實體瘤，有一定療效，但因科學性不高而受限制，對腫瘤異質性無很好作用，不能起到有效控制與治療腫瘤的目的。腫瘤核酸疫苗包括DNA疫苗和RNA疫苗。是由攜帶編碼抗原基因的真核表達質粒制成，直接輸入組織細胞內，使之在體內表達相應抗原而誘導機體產生相應特異性免疫反應。它的不利之處在于，被接種的肌肉細胞提呈抗原后導致免疫無能或免疫耐受，因此必須設法把DNA質粒轉化到肌肉組織的抗原提呈細胞上。腫瘤多肽疫苗是由來自腫瘤特異性抗原、病毒相關抗原、癌基因或抑癌基因突變蛋白的多肽組成的疫苗?？躬毺匦湍[瘤疫苗是由抗獨特型抗體制成的疫苗，其抗獨特型抗體Ab2具有模擬腫瘤抗原和免疫調節(jié)的雙重作用，可打破機體對腫瘤抗原的免疫狀態(tài)。這種疫苗在一些動物及人體試驗中已得到一些誘導保護性免疫的證據(jù)。但由于技術的限制，目前腫瘤疫苗的研究多停留在實驗室或臨床研究階段，少有實際應用者，臨床試驗的效果多數(shù)不理想。同時腫瘤疫苗引發(fā)機體特異性抗腫瘤免疫反應的前提條件是必需找到腫瘤特異性抗原，而目前絕大多數(shù)腫瘤尚未發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞特異性表達的抗原，多用腫瘤相關性抗原誘導機體的免疫反應，因此腫瘤疫苗的應用受到限制。(2)單克隆抗體即利用高度特異性的單克隆抗體為載體，將具有細胞毒性的殺傷分子帶到腫瘤病灶處，可特異地殺傷腫瘤細胞。但是該方法對作為載體的單克隆載體的特異性要求非常高，即其相應的抗原在腫瘤組織中高表達，而在正常組織中含量較少。(3)細胞因子細胞因子是指由免疫細胞和某些細胞分泌的介導和調節(jié)免疫、炎性反應的小分子多肽，如淋巴因子等。細胞因子能增強一種或多種細胞的免疫功能，具有直接或間接的殺瘤效應，但是細胞因子是非特異性增強機體的免疫功能，不具有腫瘤細胞特異性殺傷作用。同時細胞因子要在臨床上起到明顯的治療腫瘤作用，所需劑量大，導致毒副作用增加，因此應用受到限制。(4)具有抗腫瘤活性的免疫細胞，如淋巴細胞激活的殺傷細胞、細胞因子誘導的殺傷細胞、腫瘤浸潤性淋巴細胞等，該類藥物的優(yōu)點是體外誘導效應細胞避開了腫瘤宿主村子的免疫抑制，易于活化和擴增，活化的殺傷細胞在體內可產生抗腫瘤效應，其缺點是不能產業(yè)化生產，制備繁瑣，質量控制較難，成本高，治療有效的瘤譜不夠廣泛?，F(xiàn)有的各種免疫治療方法未能取得較好療效的最主要的原因是均不能改善腫瘤微環(huán)境中免疫功能抑制狀態(tài)。研究發(fā)現(xiàn)抗原提呈細胞可迅速呈遞大多數(shù)腫瘤抗原，腫瘤患者體內也確實存在針對腫瘤抗原而產生的免疫應答，免疫應答產物主要包括細胞免疫中針對特異性抗原表位的CD8+T細胞和體液免疫中B細胞分泌的腫瘤抗原特異性的抗體，并且免疫應答的過程在腫瘤發(fā)生的早期階段就開始了。但免疫應答產物不能產生有效的抗腫瘤效應，并且多數(shù)免疫治療方法能夠增強患者全身的免疫功能，但抗腫瘤效果卻與預期的相差很多。主要原因是腫瘤患者免疫功能狀態(tài)并不能直接反應機體抗腫瘤免疫效應，即使患者全身的免疫功能得到改善，但腫瘤微環(huán)境內的免疫效應卻是仍處于抑制狀態(tài)。腫瘤微環(huán)境是腫瘤細胞在其發(fā)生發(fā)展過程中所處的內環(huán)境，由腫瘤細胞本身、間質細胞、微血管、組織液及少量浸潤細胞，如樹突狀細胞、巨噬細胞等共同組成。作為腫瘤免疫效應階段的執(zhí)行場所，腫瘤微環(huán)境內存在多種因素參與局部的免疫抑制狀態(tài)的產生，包括局部效應細胞功能障礙、抑制性免疫調節(jié)細胞Treg、細胞因子的免疫負調節(jié)作用、抑制性配體受體反應、效應細胞的代謝活性負調節(jié)、腫瘤細胞本身的作用等。在腫瘤組織微環(huán)境中，上述因素共同作用，形成了腫瘤局部微環(huán)境中免疫特有模式。腫瘤細胞不僅被動的逃避免疫系統(tǒng)的攻擊，同時也主動的抑制其生長環(huán)境中的免疫細胞的正常功能。目前尚沒有較好的方法打破腫瘤內環(huán)境對免疫細胞的抑制作用。紅細胞(redbloodcell,erythrocyte)是結構最簡單的細胞，是研究膜結構的最好材料，對膜結構的認識許多來自對紅細胞膜結構的研究。通過單向SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析紅細胞膜蛋白，發(fā)現(xiàn)有15種主要的蛋白帶，分子質量為15kDa到250kDa。其中有3種主要的蛋白，約占膜蛋白60%以上①血影蛋白(spectrin):又稱收縮蛋白，位于紅細胞膜下，不屬于紅細胞膜蛋白，是紅細胞膜骨架的主要成分。是一種長的可伸縮的纖維蛋白，長約100nm，有兩個亞基構成a-亞基分子質量200kDa;P-亞基分子質量220kDa。兩個亞基鏈為反平行排列，扭曲為麻花狀，形成異二聚體。兩個異二聚體頭頭連接形成200nm長的四聚體。②血型糖蛋白A(glycophorinA):又稱涎糖蛋白(sialoglycoprotein),富含唾液酸。屬單次跨膜蛋白，由131個氨基酸構成，N端在外側，結合16個低聚糖側鏈。除A型外，血型糖蛋白還有B、C、D型，血型糖蛋白的基本功能可能是在它的唾液酸中含有大量的負電荷，防止紅細胞在循環(huán)過程中相互聚集沉積在血管中。③帶3蛋白(band3protein):屬紅細胞膜蛋白，在PAGE電泳中位于第3條帶而得名。帶3蛋白在紅細胞膜中含量很高，約為紅細胞膜蛋白的25%。是由兩個相同的亞基組成的二聚體，每條亞基含有929個氨基酸，是一種糖蛋白，跨膜12-14次，為多次跨膜蛋白。具陰離子轉運功能，被稱為陰離子通道。除上述3種蛋白外，紅細胞膜蛋白還包括肌動蛋白(actin):又稱帶5蛋白，是細胞骨架的主要成份，肌動蛋白纖維鏈長約35nm，其中含13個肌動蛋白單體和一個長35nm的原肌球蛋白分子。肌動蛋白纖維上有多個與血影蛋白結合的位點，通過與血影蛋白游離端的結合參與膜骨架結構的形成；錨定蛋白(ankyrin):又稱帶2.1蛋白，是一種比較大的細胞內連接蛋白，每個紅細胞約含IO萬個錨定蛋白，相對分子量為215000。錨蛋白一方面與血影蛋白相連，另一方面與跨膜的帶3蛋白的細胞質結構域部分相連，因此，錨蛋白借助帶3蛋白將血影蛋白連接到細胞質膜上，也就將骨架固定到質膜上；帶4.1蛋白(band4.1protein):是由兩個亞基組成的球形蛋白，它在膜骨架中的作用是通過與血影蛋白結合，促使血影蛋白與肌動蛋白結合。因為沒有肌動蛋白結合位點，故其本身不與肌動蛋白結合；內收蛋白(adducin):是由兩個亞基組成的二聚體，每個紅細胞有30000個分子。其形態(tài)為不規(guī)則的盤狀物，高5.4nm，直徑12.4nm。內收蛋白可與肌動蛋白及血影蛋白的復合體結合，并且通過Ca2+和鈣調蛋白的作用影響股價蛋白的穩(wěn)定性，從而影響紅細胞的形態(tài)。紅細胞是研究膜結構的最好材料①數(shù)量大，取材容易，并極少有其他的細胞污染。②成熟的哺乳動物的紅細胞中沒有細胞核和線粒體等膜相細胞器，細胞質膜是其唯一的膜結構，所以分離后不存在其他膜污染的問題。紅細胞膜蛋白的制備主要通過低滲溶解紅細胞，高速離心洗滌去除血紅蛋白后用等滲的鹽水或PBS重懸。紅細胞膜蛋白具有血型抗原活性，可與相應血型抗體反應，從而在紅細胞血型鑒定中發(fā)揮作用。紅細胞膜蛋白具有免疫調節(jié)功能，在體內可發(fā)揮紅細胞免疫功能，結合循環(huán)免疫復合物，及調節(jié)T淋巴細胞及B淋巴細胞的功能。尚未有紅細胞膜蛋白應用于腫瘤治療的報道。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的提供異體人紅細胞膜蛋白在制藥中的用途。本發(fā)明所提供的異體人紅細胞膜蛋白的用途是制備治療腫瘤的藥物。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)同物種的紅細胞膜蛋白在具有相應血型抗體的人體內具有很好的殺瘤效應，這是由于各種血型抗原在不同血型的人體內均存在相應的天然抗體，如ABO血型系統(tǒng)中，A型的人體內存在抗B型血抗原的天然抗體，B型的人體內存在抗A型血抗原的天然抗體，0型的人體內則同時存在抗A型血和B型血抗原的天然抗體；除ABO血型系統(tǒng)外，MN、P、Lewis等血型系統(tǒng)在人體內也存在相應的天然抗體，而人類的血型抗原主要分布在紅細胞膜表面，將紅細胞膜蛋白在具有相應血型抗體的人體里直接進行腫瘤內注射，可導致血型抗原和體內預存的天然抗體發(fā)生免疫反應，出現(xiàn)超急性炎癥反應，細胞因子釋放，炎癥細胞募集，抗原提呈細胞激活，抑制性免疫調節(jié)細胞減少，并可使腫瘤抗原暴露，從而逆轉腫瘤微環(huán)境的免疫抑制狀態(tài)，導致腫瘤壞死，達到治療腫瘤的目的。可見，紅細胞膜蛋白可用于制備治療腫瘤的藥物，不僅解決了采用提高機體整體免疫功能的免疫治療仍無法改變腫瘤微環(huán)境內處于免疫抑制狀態(tài)而導致治療效果不佳的問題，還同時繞過了尋找腫瘤特異性抗原的難題，對各種病理類型的腫瘤均有治療作用。本發(fā)明還提供一種治療腫瘤的注射液，該注射液由人紅細胞膜蛋白和緩沖液組成，其中紅細胞膜蛋白在緩沖液的濃度為10mg/mL30mg/mL，最佳是20mg/mL;所述的緩沖液為PH值78的磷酸鹽緩沖液(PBS)或生理鹽水。本發(fā)明所述的注射液中所述的紅細胞膜蛋白可采用公知的方法從人體血液中提取得到解決，其中含有所屬物種體內存在的天然抗體的血型物質；所用的血液可以是各種血型系統(tǒng)，如AB0型、MN、P和Lewis等。本發(fā)明所述注射液可通過以下方法制備獲得(1)取健康人血，加入35倍濃度為0.01mol/L的PBS,3000r/min離心20min，棄上清、白細胞層和血小板層，然后用預冷PBS洗滌24次分離得到紅細胞，每次洗滌加入PBS的量為紅細胞體積35倍，在4。C下5000r/min離心15min，棄上清；(2)取所得紅細胞加入4050倍體積的預冷0.Olmol/LTril-HC1，混合，4。C放置2h;然后9000r/min離心20min，棄上清；(3)重復步驟(2)至無肉眼可見的紅細胞為止，得沉淀物；(4)取步驟(3)所得沉淀物用0.Olmol/LPBS稀釋并調整紅細胞膜濃度為10mg/mL30mg/mL即可。本發(fā)明所述的注射液應于-20'C保存。本發(fā)明所述的注射液使用時，應根據(jù)腫瘤患者的血型抗體選擇含有不同血型紅細胞膜蛋白的注射液，直接腫瘤內注射即可。由于血型抗體和抗原所導致的非特異性免疫反應、逆轉腫瘤微環(huán)境的免疫抑制狀態(tài)與腫瘤的病理類型無關，只要能實現(xiàn)腫瘤內注射，即可達到殺滅腫瘤的目的，因此本發(fā)明注射液可適用于各種類型的實體瘤。本發(fā)明所述的注射劑針對單個病灶的治療，可激發(fā)明顯的抗腫瘤免疫，對遠處的病灶同樣有治療作用；可單獨應用也可以聯(lián)合其他的抗腫瘤手段同時應用；適用于中晚期腫瘤也適用于早期腫瘤的治療；毒副作用低，患者耐受性好，制備工藝簡單、成本低，治療方法簡單。下面將通過動物實驗來證明本發(fā)明的技術效果。1、紅細胞膜的制備取健康成人A型、B型或AB型抗凝混合血加0.Olmol/LPBS(pH7.4),離心3000r/min，20min，棄上清和上清下白細胞、血小板層，用相當于紅細胞壓積4倍的預冷PBS(pH7.4)冼滌3次(4。C，5000r/min，15min)，加預冷的0.Olmol/LTril-HCl(pH7.4)與紅細胞(V:V=40:1)混合，4'C放置2小時，再以9000r/min離心20min，棄上清(重復3次)至無肉眼可見紅細胞為止。沉淀物加0.Olmol/LPBS(pH7.4)稀釋，采用Lowry氏法測定紅細胞膜蛋白含量，調整濃度為20mg/ml，置-20'C分裝、保存。以上操作在無菌條件下進行。2、細胞培養(yǎng)將凍存的細胞迅速放入38。C水浴中，并不時搖動，在l'分鐘內使其完全融化，然后在無菌下取出細胞。1000r/min離心510分鐘，棄去上層液，加入10X新生牛血清+RPMI-1640,接種濃度1X107L，37°C5%0)2培養(yǎng)箱1天換液，傳代計數(shù)，取0.5ml細胞小鼠腹腔注射傳代。3、瘤細胞接種抽取S180小鼠腹水，生理鹽水無菌條件下制成單細胞懸液，調整細胞數(shù)為1X107個/ml計數(shù)活細胞數(shù)〉95%,于小鼠背部皮下接種O.lml。4、動物分組40只昆明小鼠按體重隨機分為4組，每組10只。I組紅細胞膜蛋白0.2ml腹腔免疫，采用相同劑量l,4，7天免疫，最后一次免疫兩周后背部皮下注射0.lml腹水瘤細胞及0.lml紅細胞膜蛋白。觀測腫瘤生長情況。II組紅細胞膜蛋白0.2ml腹腔免疫，采用相同劑量l，4，7天免疫，最后一次免疫兩周后背部皮下注射0.lml腹水瘤細胞。兩周后測量背部腫瘤大小并連續(xù)3天瘤內注射紅細胞膜蛋白O.lml，觀測腫瘤生長情況。III組紅細胞膜蛋白0.2ml腹腔免疫，采用相同劑量l，4，7天免疫，最后一次免疫兩周后背部皮下注射0.lml腹水瘤細胞。兩周后測量背部腫瘤大小并連續(xù)3天瘤內注射0.lml生理鹽水，觀測腫瘤生長情況。IV組小鼠不免疫，和同組其余小鼠相同時間接種腫瘤，背部皮下注射0.lml腹水瘤細胞。兩周后測量背部腫瘤大小并連續(xù)3天瘤內注射紅細胞膜蛋白0.1ml，觀測腫瘤生長情況。V組小鼠不免疫，和同組其余小鼠相同時間接種腫瘤，背部皮下注射0.lml腹水瘤細胞。兩周后測量背部腫瘤大小并連續(xù)3天瘤內注射生理鹽水0.1ml，觀測腫瘤生長情況。瘤體積測定使用卡尺測量小鼠背部瘤塊長(a)，短徑(b)。瘤體積-abV2抑瘤率=(1-實驗組腫瘤體積/對照組腫瘤體積)X100%。5、結果表1人紅細胞對荷S180肉瘤小鼠腫瘤的影響(cm3)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>如表1和圖1所示，I組腫瘤生長較其他組緩慢，第14天腫瘤體積與第III、IV、V組腫瘤體積比較有統(tǒng)計學意義(P=0.001，P=0.046，P=0.000)。II組第14天腫瘤體積比III、V組腫瘤體積小，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.004,P=0.001)，說明經過紅細胞膜蛋白免疫后小鼠體內產生抗血型抗原抗體，腫瘤內注射紅細胞膜蛋白后產生免疫反應，抑制腫瘤生長。in、v組腫瘤內注射生理鹽水不能產生免疫反應，不能抑制腫瘤生長。因此，紅細胞膜蛋白注射液經過免疫后序貫瘤內注射可抑制腫瘤生長，且這種生長與產生的免疫反應有關。n組第i4天腫瘤體積比iv組腫瘤體積小，但無統(tǒng)計學意義(p=o.ii)。由于在動物體內進行實驗，應用的是人紅細胞膜蛋白，人紅細胞膜蛋白本身對于昆明小鼠就是異種蛋白，因此不進行免疫也可以產生免疫反應，進而在一定程度上抑制腫瘤生長。免疫后注射紅細胞膜蛋白注射液組與不免疫注射生理鹽水組比較抑瘤率達79.91%。免疫后注射紅細胞膜蛋白注射液組與免疫后注射生理鹽水組比較抑瘤率達82.37%。圖1是各組小鼠腫瘤體積變化的折線圖，其中+表示I組小鼠的腫瘤體積變化情況，表示II組小鼠的腫瘤體積變化情況，+表示III組小鼠的腫瘤體積變化情況，+表示IV組小鼠的腫瘤體積變化情況，+表示V組小鼠的腫瘤體積變化情況。具體實施方式例l1、本發(fā)明注射液的制備(1)取健康人A型血，加入4倍濃度為0.01mol/L的PBS，3000r/min離心20min，棄上清、白細胞層和血小板層，用相當于紅細胞體積4倍的預冷PBS洗滌4次，每次均在4'C下5000r/min離心15min分離紅細胞與上清；(2)取所得紅細胞加入45倍體積的預冷0.01mol/LTri1-HC1，混合，4匸放置2h;然后9000r/min離心20min,棄上清；(3)重復步驟(2)至無肉眼可見的紅細胞為止，得沉淀物；(4)取步驟(3)所得沉淀物用O.01mol/LPBS稀釋，采用Lowry氏法測定紅細胞膜蛋白含量，調整濃度為20mg/ml，分裝、-20'C保存。例2(1)取健康人B型血，加入5倍濃度為0.Olmol/L的PBS，3000r/min離心20min，棄上清、白細胞層和血小板層，用相當于紅細胞體積5倍的預冷PBS洗滌3次，每次均在4'C下5000r/min離心15min分離紅細胞與上清；(2)取所得紅細胞加入50倍體積的預冷0.01mon/LTril-HCl，混合，4"放置2h;然后9000r/min離心20min,棄上清；(3)重復步驟(2)至無肉眼可見的紅細胞為止，得沉淀物；(4)取步驟(3)所得沉淀物用0.Olmol/LPBS稀釋，釆用Lowry氏法測定紅細胞膜蛋白含量，調整濃度為30mg/ml，分裝、-2(TC保存。例3(1)取健康人AB型血，加入3倍濃度為0.Olmol/L的PBS,3000r/min離心20min，棄上清、白細胞層和血小板層，用相當于紅細胞體積3倍的預冷PBS洗滌3次，每次均在4'C下5000r/min離心15min分離紅細胞與上清；(2)取所得紅細胞加入40倍體積的預冷0.01mol/LTri1-HC1，混合，4'C放置2h;然后9000r/min離心20min，棄上清；(3)重復步驟(2)至無肉眼可見的紅細胞為止，得沉淀物；(4)取步驟(3)所得沉淀物用O.01mol/LPBS稀釋，采用Lowry氏法測定紅細胞膜蛋白含量，調整濃度為10mg/ml，，分裝、-2(TC保存。權利要求1、異體人紅細胞膜蛋白在制備治療腫瘤藥物中的應用。2、一種治療腫瘤的注射液，該注射液由人紅細胞膜蛋白和緩沖液組成；其中，所述的人紅細胞膜蛋白是從人血液中提取獲得，在緩沖液中的濃度為10mg/mL30mg/mL，所述的緩沖液為PH值78的磷酸鹽緩沖液或生理鹽水。3、如權利要求2所述的注射液，其特征在于所述的人紅細胞膜蛋白在緩沖液中的濃度為20mg/mL。4、權利要求2或3所述的注射液的制備方法，該方法由以下步驟組成(1)取健康人血，加入35倍濃度為0.Olmol/L的PBS，3000r/min離心20min，棄上清、白細胞層和血小板層，然后用預冷PBS洗滌35次分離得到紅細胞，每次洗滌加入PBS的量為紅細胞體積35倍，在4。C下5000r/min離心15min，棄上清；(2)取所得紅細胞加入4050倍體積的預冷0.Olmol/LTril-HCl，混合，4'C放置2h;然后9000r/min離心20min，棄上清；(3)重復步驟(2)至無肉眼可見的紅細胞為止，取沉淀物；(4)取步驟(3)所得沉淀物用緩沖液稀釋使紅細胞膜濃度為10mg/mL30mg/mL即可。全文摘要本發(fā)明涉及人紅細胞膜在制備治療腫瘤藥物中的用途。本發(fā)明還提供了一種體現(xiàn)所述用途的注射液，該注射液由人紅細胞膜蛋白和緩沖液成，人紅細胞膜蛋白在緩沖液中的濃度為10mg/mL～30mg/mL，所述的緩沖液為PBS或生理鹽水。本發(fā)明所述注射劑可治療各種實體腫瘤。文檔編號A61K38/17GK101327317SQ20081002954公開日2008年12月24日申請日期2008年7月18日優(yōu)先權日2008年7月18日發(fā)明者孫麗斌,張積仁,胡喜鋼申請人:南方醫(yī)科大學