專利名稱：：胸腺素α-1在制備預(yù)防和治療變態(tài)反應(yīng)的藥物中的應(yīng)用的制作方法胸腺素a-l在制備預(yù)防和治療變態(tài)反應(yīng)的藥物中的應(yīng)用本發(fā)明涉及胸腺素a-l在制備預(yù)防和治療變態(tài)反應(yīng)的藥物中的應(yīng)用。變態(tài)反應(yīng)是一種對(duì)通常無(wú)害于人的對(duì)物質(zhì)反應(yīng)過度的疾病，與正常免疫應(yīng)答相比，它們構(gòu)成了突發(fā)性有害(paroxitic)免疫應(yīng)答。機(jī)體免疫系統(tǒng)的功能通常是保護(hù)機(jī)體免遭病原體如細(xì)菌、病毒或毒性物質(zhì)的危害。而變態(tài)反應(yīng)則是免疫系統(tǒng)對(duì)非病原生物的超敏免疫反應(yīng)。個(gè)體第一次接觸引起變態(tài)反應(yīng)的變應(yīng)原以后，每次接觸此變應(yīng)原時(shí)個(gè)體即能識(shí)別此變應(yīng)原。第二次和所有以后接觸此變應(yīng)原所產(chǎn)生的癥狀實(shí)際上不僅取決于所涉及的變應(yīng)原，而且取決于受影響的機(jī)體和其免疫反應(yīng)的強(qiáng)度。當(dāng)變應(yīng)原接觸個(gè)體的免疫系統(tǒng)時(shí)，它會(huì)剌激(機(jī)體)產(chǎn)生能結(jié)合含組胺細(xì)胞的抗體。產(chǎn)生這種物質(zhì)能引起病人典型的變應(yīng)性癥狀受影響組織搔癢、腫脹，過度分泌粘液和肌肉痙攣。這些癥狀的嚴(yán)重程度和差別具有很強(qiáng)的個(gè)人主觀性，因?yàn)樗Q于個(gè)體。最常見的變應(yīng)原有食物、藥物、化妝品中含有的某些成分、珠寶首飾所用的某些金屬、昆蟲的叮咬、塵螨、花粉、霉菌和寵物。如果母親在哺乳期間不吃某些食物，例如牛奶、雞蛋和堅(jiān)果，哺乳兒童發(fā)生接觸性(contracting)變態(tài)反應(yīng)(包括哮喘)的可能性較低。如果發(fā)生變態(tài)反應(yīng)，只有采用適當(dāng)?shù)闹委熀捅M可能避免接觸有關(guān)變應(yīng)原才能將未來發(fā)生變態(tài)反應(yīng)危險(xiǎn)的可能性降至最小。癥狀的嚴(yán)重程度和類型的差別取決于所述反應(yīng)、受累及機(jī)體區(qū)域和病人免疫系統(tǒng)的敏感性。然而，有某些共同癥狀鼻炎、咳嗽、呼吸問題、流淚增加、接觸區(qū)(通常為眼、鼻、咽喉和皮膚)搔癢、皮疹、嘔吐、腹瀉、頭痛。變應(yīng)性疾病是由易感個(gè)體對(duì)常見的環(huán)境抗原(變應(yīng)原)產(chǎn)生了T輔助細(xì)胞(Th2)禾卩IgE-特異性應(yīng)答所導(dǎo)致。研究在預(yù)防變應(yīng)原引起這些潛在過敏性不良免疫反應(yīng)中，對(duì)天然的或誘導(dǎo)的T調(diào)節(jié)(Treg)細(xì)胞群作用的興趣日益增高。近年來的證據(jù)提示，Treg細(xì)胞可主動(dòng)地預(yù)防非特應(yīng)性個(gè)體對(duì)變應(yīng)原產(chǎn)生Th2應(yīng)答，而在變態(tài)反應(yīng)病人中它們的功能可能減弱。這顯示通過調(diào)節(jié)Treg細(xì)胞的功能有可能進(jìn)行治療。近年來的研究目的是了解產(chǎn)生變應(yīng)原特異性Treg細(xì)胞和發(fā)揮其功能所涉及的機(jī)制。主要目的是促進(jìn)開發(fā)適合誘導(dǎo)持久的但同時(shí)局限化的非全身性變應(yīng)原特異性抑制機(jī)制的治療方案。迄今，一直采用抗組胺藥物和含考的松的那些抗炎藥物或有時(shí)采用順勢(shì)(homeopathic)療法來治療變態(tài)反應(yīng)。然而，用某些藥物治療可能會(huì)引起相當(dāng)大的有時(shí)是嚴(yán)重的副作用，例如引起免疫抑制或各種代謝疾病。鑒于以上所述，證明需要能預(yù)防和治療變態(tài)反應(yīng)但沒有已知療法缺點(diǎn)的新藥物。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)胸腺素a-l能有效預(yù)防和治療變態(tài)反應(yīng)而對(duì)機(jī)體沒有任何毒性。胸腺素a-l(Ta-l)是一種天然胸腺肽，己熟知可單用或與IFN-a聯(lián)用來治療某些病毒感染，也可用作免疫佐劑(GoldsteinA.等，2004ExpertOpin.Biol.Ther.4:559-573)。也已知可用胸腺素a-l治療的其它適應(yīng)癥，如治療免疫缺陷癥、腫瘤和AIDS。還已知胸腺素a-l可與IFN-a聯(lián)用，在治療某些病毒感染中作為生物應(yīng)答的調(diào)節(jié)劑，還可用作免疫佐劑(GoldsteinA.等，2004ExpertOpin.Biol.Ther.4:559-573)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)了此分子具有新的出乎意料的作用。近年業(yè)已證明Tal能通過Toll樣受體(TLR)9調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞(DC)的功能，起著先天性和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)內(nèi)源調(diào)節(jié)劑的作用(RomaniL.等,2004,Blood103:4232-4239)。由于對(duì)DC具有這種功能活性，業(yè)已發(fā)現(xiàn)Tal能在體內(nèi)外誘導(dǎo)功能活性Treg細(xì)胞(RomaniL,Blood2006)。這些研究為將Tal用作功能活性Treg細(xì)胞的誘導(dǎo)劑提供了合理的前提。面對(duì)例如目前的皮質(zhì)類固醇藥物療法的全身性不加區(qū)別的免疫抑制作用，上述方法的優(yōu)點(diǎn)是可調(diào)節(jié)高度選擇性的和特定的異常免疫反應(yīng)。本發(fā)明的具體目的是用Tal來制備預(yù)防和治療變態(tài)反應(yīng)的藥物，例如，所述變態(tài)反應(yīng)是由變應(yīng)原，如食物(如卵清蛋白)、藥物、化妝品中所含成分、珠寶首飾所用的某些金屬(如鎳)、昆蟲的叮咬、塵螨、花粉、霉菌、寵物和真菌如煙曲霉0^pe/^7/u5/Mw/gafus)弓I起的?，F(xiàn)在通過一些優(yōu)選實(shí)施方式，并具體參見附圖描述本發(fā)明，目的是說明而非限制本發(fā)明圖1顯示Tal在ABPA(A)和OVA引起的變態(tài)反應(yīng)(B)中效果的數(shù)據(jù)。無(wú)(None)代表對(duì)照小鼠。圖2顯示Tal和CpG對(duì)ABPA的效果的比較數(shù)據(jù)。圖3顯示Tal對(duì)ABPA中肺部募集單核細(xì)胞的效果的數(shù)據(jù)。圖4顯示Tal對(duì)ABPA中局部炎癥病理變化的效果的數(shù)據(jù)。實(shí)施例1:在兩種實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)模型中評(píng)價(jià)胸腺素a-l的效果。一種模型包括在產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)的條件下給予雞卵清蛋白(OVA)誘導(dǎo)變態(tài)反應(yīng)。另一種模型包括用環(huán)境變應(yīng)原即煙曲霉孢子誘導(dǎo)變態(tài)反應(yīng)。方法變態(tài)反應(yīng)和治療按表1所述，用曲霉(^^"^///^)誘導(dǎo)病理變態(tài)反應(yīng)(稱為ABPA，變應(yīng)性支氣管肺曲霉菌病)，用OVA誘導(dǎo)病理變態(tài)反應(yīng)(MontagnoliC,FallarinoF,GazianoR,BozzaS，BellocchioS,ZelanteT,KurupWP,PitzurraL，PuccettiP,RomaniL."對(duì)曲霉菌的免疫和耐受涉及到功能不同的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和色氨酸分角軍代謝(Immunityandtolerancetoy4s;erg〃/wsinvolvefunctionallydistinctregulatoryTcellsandtryptophancatabolism)"J.Immunol.2006，176:1712-1723)。使小鼠接受腹腔內(nèi)(i.p.)和皮下(s.c.)注射5溶于不完全弗氏佐劑(西格瑪公司(Sigma))的煙曲霉菌培養(yǎng)過濾物(CCFA)，然后連續(xù)接受兩次鼻內(nèi)注射(相隔一周)20CCFA。末次鼻內(nèi)接觸后一周，使小鼠氣管內(nèi)(i.t.)接受107個(gè)曲霉菌分生孢子04^^^7/^comW/fl)。對(duì)于OVA致敏，第0天小鼠通過i.p./s.c接受10[igOVA，然后連續(xù)接受兩次鼻內(nèi)注射(相隔一周)溶于滅菌鹽水中的10OVA(VI級(jí)雞OVA;西格瑪奧德里奇公司(Sigma-Aldrich))和1mgAl(OH)3佐齊!j(注射用鋁；伊利諾斯州羅克福德的皮爾斯公司(Pierce,Rockford,IL))。一周后分析小鼠的炎癥和變態(tài)反應(yīng)參數(shù)。對(duì)于組織學(xué)分析，將浸在石蠟中的組織切片(3-4pm)用希弗氏過碘酸(PAS)染色以評(píng)價(jià)總體形態(tài)。用50、200和400倍放大觀察PAS染色的肺切片以評(píng)估變態(tài)反應(yīng)的典型"杯狀(Globet)"細(xì)胞。用May-Grtowald試劑(吉姆薩(Giemsa)，西格瑪公司)對(duì)變應(yīng)性小鼠的肺進(jìn)行染色，以便進(jìn)行肺總細(xì)胞計(jì)數(shù)和差異性計(jì)數(shù)，然后進(jìn)行分析。羥脯氨酸測(cè)定按前人(MontagnoliC,FallarinoF,GazianoR，BozzaS,BellocchioS,ZelanteT，KurupWP，PitzurraL，PuccettiP,RomaniL."對(duì)曲霉菌的免疫和耐受涉及到功能不同的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和色氨酸分解代謝(Immunityandtoleranceto爿j^e,gz7/z^sinvolvefunctionallydistinctregulatoryTcellsandtryptophancatabolism)"J.Immunol.2006,176:1712-1723)所述測(cè)定了肺中的膠原蛋白水平。通過羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(O-IOOpg/ml)計(jì)算出羥脯氨酸濃度。血清IgE測(cè)定。用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定血清樣品中的總IgE(MontagnoliC,FallarinoF,GazianoR,BozzaS,BellocchioS,ZelanteT，Kur叩WP,PitzurraL，PuccettiP,RomaniL."對(duì)曲霉菌的免疫和耐受涉及到功能不同的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和色氨酸分解代謝"J.Immunol.2006,176:1712-1723，此文中關(guān)于用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定血清樣品的部分)。用胸腺素al治療。提供無(wú)菌干粉形式的Tal(購(gòu)自美國(guó)密蘇里州圣路易斯的西格瑪公司(Sigma，St丄ouis，MO，USA);產(chǎn)品編號(hào)T3410;分子式C^H2i5N33055)和亂序(scambled)肽。用無(wú)菌水(用標(biāo)準(zhǔn)鱟(Limulus)裂解物試驗(yàn)檢測(cè)內(nèi)毒素水平<0,03pg/ml)重建這些干粉。按照表1和2中報(bào)告的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，在ABPA模型和OVA變態(tài)反應(yīng)模型中，i.p給予每公斤體重50和200微克劑量的Tal。對(duì)照小鼠接受亂序肽。在所選的實(shí)驗(yàn)中，治療小鼠，與已知能改善變態(tài)反應(yīng)癥狀的藥物即含非甲基化CpG序列的寡脫氧核苷酸作比較。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>a.CCFA:煙曲霉的培養(yǎng)過濾物表2<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>圖1顯示在ABPA(A)和OVA引起的變態(tài)反應(yīng)(B)中Tal效果的數(shù)據(jù)。此結(jié)果清楚地表明Tal治療后變應(yīng)性炎癥參數(shù)顯著下降，即作為變應(yīng)性炎癥介質(zhì)的羥脯氨酸和IgE抗體的局部產(chǎn)生顯著減少。此效果為劑量依賴性，發(fā)現(xiàn)在200微克Tal劑量時(shí)有效，而在更低劑量時(shí)無(wú)效，預(yù)防和實(shí)際治療時(shí)情況相同。無(wú)代表對(duì)照小鼠。圖2顯示Tal和CpG對(duì)ABPA的效果的比較數(shù)據(jù)。此結(jié)果清楚地表明Tal預(yù)防和治療時(shí)降低變應(yīng)性炎癥參數(shù)的效果與CpG相當(dāng)。無(wú)代表對(duì)照小鼠。圖3顯示Tal對(duì)ABPA中肺部募集單核細(xì)胞的效果的數(shù)據(jù)。此數(shù)據(jù)表明預(yù)防和治療時(shí)，通過Tal的作用顯著減少了引起變態(tài)反應(yīng)病理表現(xiàn)的嗜酸性粒細(xì)胞的募集。而且其效果與CpG相當(dāng)。Tal對(duì)其它類型細(xì)胞如中性粒細(xì)胞和單核/巨噬細(xì)胞的募集沒有任何明顯作用。圖4顯示Tal對(duì)ABPA中局部炎癥病理變化的效果的數(shù)據(jù)。用Tal治療(+)或不用Tal治療(-)的ABPA小鼠肺切片經(jīng)不同放大倍數(shù)觀察顯示在以下項(xiàng)目有顯著差異i)炎癥滲出液，用Tal預(yù)防性治療后炎癥滲出液顯著減少；ii)存在粘膜下腺細(xì)胞(稱為杯狀細(xì)胞)的存在，這種細(xì)胞是產(chǎn)生粘液的主要細(xì)胞，PAS染色呈紫色。用Tal治療伴有這些細(xì)胞增生的減少。總之，以上數(shù)據(jù)提示Tal對(duì)預(yù)防和治療變態(tài)反應(yīng)均有顯著的抗變態(tài)反應(yīng)作用。權(quán)利要求1.胸腺素α-1在制備預(yù)防和治療變態(tài)反應(yīng)的藥物中的應(yīng)用。2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述變態(tài)反應(yīng)是由變應(yīng)原，如食物、藥物或化妝品中所含物質(zhì)，珠寶首飾所含的金屬、昆蟲的叮咬、塵螨、花粉、霉菌、寵物和真菌的變應(yīng)原引起的。3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述食物中所含物質(zhì)是卵清蛋白。4.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述真菌是煙曲霉。全文摘要本發(fā)明涉及胸腺素α1在制備預(yù)防和治療變態(tài)反應(yīng)的藥物中的應(yīng)用。文檔編號(hào)A61K38/22GK101626778SQ200780039959公開日2010年1月13日申請(qǐng)日期2007年9月27日優(yōu)先權(quán)日2006年10月27日發(fā)明者E·加拉西,F·比斯托尼,G·拉斯,L·羅馬尼,P·西尼巴迪瓦萊波納申請(qǐng)人:適馬-道制藥業(yè)公司