專利名稱：：用于無義突變抑制治療的口服活性1,2,4-噁二唑組合物的制作方法用于無義突變抑制治療的口服活性1,2,4-噁二唑組合物1.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及利用1,2,4-噪二唑笨甲酸化合物治療或預(yù)防與無義突變有關(guān)的疾病的特定劑量和給藥方案。具體地說，本發(fā)明涉及在患與無義突變有關(guān)的疾病的哺乳動(dòng)物中，利用含3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸的特定劑量和給藥方案。2.
背景技術(shù)：
：一種新型1，2,4噁二唑化合物和其用于治療、預(yù)防或控制通過調(diào)節(jié)翻譯提前終止或無義介導(dǎo)的mRNA降解來緩解的疾病，描述于2006年1月31日公告的美國專利號(hào)6,992,096Bl中，發(fā)明名稱"1,2，4噁二唑笨甲酸化合物和其用于無義抑制和疾病治療的用途"，其整體引入本文以供參考。其中一種化合物是3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸。對(duì)于所有藥物來i兌，治療患有疾病如嚢性纖維化(CysticFibrosis)和杜氏肌營養(yǎng)不良(DuchenneMuscularDystrophy)的患者的正確劑量和舌會(huì)藥方案對(duì)于獲4尋無不良或有害作用的期望或最佳治療效果是必需的。因此，需要存在安全、有效、且無毒的劑量和給藥方案，從而可以預(yù)防或降低任何不良反應(yīng)或有害作用，或提供一種最佳的治療效果或者兩者，即提供期望的治療整體效果(therapeuticprofile)。3.發(fā)明概述本發(fā)明包括下述給藥方案以特定的時(shí)間間隔施用特定劑量的3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，以調(diào)節(jié)翻譯提前終止或無義介導(dǎo)的mRNA降解，或改善與其相關(guān)的一種或多種癥狀，同時(shí)降低或避免不良反應(yīng)或有害作用。本方明進(jìn)一步包括3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的特定劑量和單位劑型。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及在24小時(shí)期間內(nèi)一次、兩次或三次給有此需要的患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的方法。本發(fā)明還涉及在24小時(shí)時(shí)間間隔內(nèi)一次、兩次或三次給有此需要的患者施用含有有效量3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的藥物組合物的方法。24小時(shí)期間內(nèi)的每次給藥劑量可以相同或者不同。在一個(gè)實(shí)施方案中，在24小時(shí)期間內(nèi)給藥3次時(shí)，前兩次的給藥量相同，第三次的劑量是第一次劑量的兩倍。在另一個(gè)實(shí)施方案中，三次劑量全部相同。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療、預(yù)防或控制通過調(diào)節(jié)翻譯才是前終止或無義介導(dǎo)的mRNA降解來緩解的疾病的方法，包括在24小時(shí)期間內(nèi)一次、兩次或三次給有此需要的患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。優(yōu)選地，給藥是每天連續(xù)地進(jìn)行三次，或者中斷幾天、幾周、幾月或幾年。本發(fā)明還涉及治療、預(yù)防或控制通過調(diào)節(jié)翻譯提前終止或無義介導(dǎo)的mRNA降解來緩解的疾病的方法，包括在24小時(shí)期間內(nèi)一次、兩次或三次給有此需要的患者施用含有效量3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的藥物組合物。優(yōu)選地，給藥是每天連續(xù)地進(jìn)行三次，或者中斷幾天、幾周、幾月或幾年。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種施用3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的方法，其中在24小時(shí)期間內(nèi)，給有此需要的患者施用一次、兩次或三次該活性劑，其中優(yōu)選每次給藥間隔約4-14小時(shí)。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，逐漸增加第一次到第三次的活性劑劑量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及連續(xù)治療，其中在某段時(shí)間內(nèi)(如5、7、10、14、20、24、28、60或120天或更長時(shí)間內(nèi))給有此需要的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及以劑量范圍在0.1mg/kg-500mg/kg、1mg/kg-250mg/kg、1mg/kg-150mg/kg、1mg/kg-100mg/kg、1mg/kg-50mg/kg、1mg/kg-25mg/kg、1mg/kg-10mg/kg或2mg/kg-10mg/kg之間的單一劑量或分開劑量(每天三次)給有此需要的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物是以約4mg/kg、約7mg/kg、約8mg/kg、約10mg/kg、約14mg/kg或約20mg/kg的劑量給藥的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在24小時(shí)內(nèi)施用前述實(shí)施方案中所述的任何劑量的3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物一次、兩次或三次。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含約35mg-約1400mg、約125mg-約1000mg、約250mg-約1000mg、或約500mg-約1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的單位劑量制劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含35mg、50mg、70mg、100mg、125mg、140mg、175mg、200mg、250mg、280mg、350mg、500mg、560mg、700mg、750mg、1000mg或1400mg的3隱[5-(2-氟-苯基)隱[1,2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的單位劑量制劑。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含125mg、250mg或1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的單位劑量制劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及讓患者的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的血漿濃度大于約0.1jxg/ml、0.5(ig/ml、1(ig/ml、2fxg/ml、約5pg/ml、約10|ig/ml、約20|ig/ml、約25pg/ml、約40嗎/ml、約50嗎/ml、100嗎/ml、200嗎/ml、300嗎/ml、400嗎/ml、或500嗎/ml保持至少約1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小時(shí)或更長時(shí)間的方法，包括給有此需要的患者施用有效量3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。4.詳細(xì)描述4.1定義用于本文的"翻譯提前終止"指使對(duì)應(yīng)氨基酸的密碼子轉(zhuǎn)變?yōu)榻K止密碼子的突變結(jié)果。用于本文的"無義介導(dǎo)的mRNA降解"指介導(dǎo)含有提前翻譯終止密碼子的mRNA降解的任何機(jī)理。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，無義介導(dǎo)的mRNA降解由DNA的無義突變所致。用于本文的"提前終止密碼子"或"提前結(jié)束密碼子"指在對(duì)應(yīng)氨基酸的密碼子的位置出現(xiàn)終止密碼子。用于本文的"無義突變"是將與氨基酸對(duì)應(yīng)的密碼子變?yōu)榻K止密碼子的點(diǎn)突變。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，無義突變是發(fā)生在DNA中，然后被轉(zhuǎn)錄入mRNA的突變。用于本文的"無義抑制"指對(duì)翻譯提前終止和/或無義介導(dǎo)的mRNA降解的抑制或壓制。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，mRNA降解是由DNA的無義突變導(dǎo)致的。用于本文的"對(duì)翻譯提前終止和/或無義介導(dǎo)的mRNA降解的調(diào)節(jié)"指通過改變無義抑制的水平調(diào)節(jié)基因表達(dá)。例如，如果要提高具有提前終止密碼子的基因編碼的缺陷蛋白的生成，即允許讀過(readthrough)疾病基因的提前終止密碼子，從而發(fā)生基因的翻譯，那么翻譯提前終止和/或無義介導(dǎo)的mRNA降解的調(diào)節(jié)伴隨無義抑制的向上調(diào)節(jié)。用于本文的術(shù)語"不良反應(yīng)"或"副作用"包括但不限于惡心、嘔吐、腹瀉、頭痛、血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)增高、血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)增高、暈眩、血清肌酸激酶(CK)增高、腹痛、腹脹、眼痛、眼部腫脹、眼部燒傷、乳頭敏感、乳房壓痛、肌肉骨骼胸痛、皮珍、瘙癢、頜下淋巴結(jié)疼痛、血清乳酸脫氫酶(LDH)增高、血清醛縮酶增高和血清甘油三酯增高。用于本文的術(shù)語"活性劑"、"藥"和"藥物"指3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。用于本文的術(shù)語"劑量"指一次施用的活性劑的量。用于本文的術(shù)語"單位劑型"包括片劑；嚢片；膠囊，例如，軟彈性明膠膠囊；小藥嚢劑；扁嚢劑；錠劑；糖錠劑；分散劑；粉劑；溶液；凝膠劑；適用于患者口服或粘膜給藥的液體劑型，包括懸液(例如，含水或不含水液^f本懸液)、乳液(例如，7jc包油乳液或油包水乳液)，；容液和酏劑；和可重構(gòu)以適用于向患者提供口服或胃腸外給藥的液體劑型的滅菌固4本(例如，晶型或非晶型固體)。該單位劑型不必必需以單一劑量給藥。用于本文的術(shù)語"給藥方案"和"劑量"指每個(gè)時(shí)間單位給予的活性劑的量和給藥時(shí)間。用于本文的術(shù)語"患者"指動(dòng)物(例如，母牛、馬、羊、豬、小雞、火雞、鵪l鳥、貓、狗、小鼠、大鼠、兔、豚鼠等)，優(yōu)選哺乳動(dòng)物例如非靈長目動(dòng)物和靈長目動(dòng)物(例如猴和人)，最優(yōu)選人。在某些實(shí)施方案中，所述患者是胎兒、嬰兒、兒童、青少年或成人。在一實(shí)施方案中，通過預(yù)篩選確定所述患者具有無義突變。在另一實(shí)施方案中，通過預(yù)篩選確定所述患者患有何種無義突變(即，UAA、UGA或UAG)。本文所用術(shù)語"有效量"是指在疾病的處理和醫(yī)治中，3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物足以提供治療益處，或者足以延遲或最大限度地減少與所述疾病有關(guān)的癥狀的量。在一個(gè)實(shí)施方案中，術(shù)語"有效量"是指3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2，4〗噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物足以在某段時(shí)間內(nèi)獲得期望的血漿水平的量。優(yōu)選的有效量具體描述于本文中。本文所用術(shù)語"控制"是指患者從施用3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2，4]噁二唑-3-基]-苯曱酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物獲得的有益效果，它并不導(dǎo)致疾病的治療。用于本文的術(shù)語"預(yù)防"是指通過施用3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物預(yù)防疾病或其癥狀在患者中發(fā)生、復(fù)發(fā)、傳播或惡化。因?yàn)榕c無義突變相關(guān)的疾病可能是遺傳性疾病，因此可以針對(duì)存在無義突變來對(duì)患者進(jìn)行篩選。一旦通過篩選確定患者具有無義突變，那么就可給該患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，從而預(yù)防疾病或其癥狀的發(fā)生、復(fù)發(fā)、傳播或惡化。用于本文的術(shù)語"治療"是指根除或緩解疾病或與所述疾病相關(guān)的癥狀。在某些實(shí)施方案中，該術(shù)語指通過給患有這類病的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2，4]噪二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物最大限度地減少疾病的傳播或惡化。用于本文的術(shù)語"藥學(xué)上可接受的鹽"是指由藥學(xué)上可接受的無毒酸或堿，包括無機(jī)酸和堿和有機(jī)酸和石咸制備的鹽。適合3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸的藥學(xué)上可接受的堿加成鹽包括但不限于由鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉和鋅制備的金屬鹽，或由賴氨酸、N,N'-二千基乙二胺、氯代普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、麥格魯明(N-甲基葡糖胺)和普魯卡因制備的有機(jī)鹽。適合的無毒酸包括，但不限于無機(jī)和有機(jī)酸，例如乙酸、海藻酸、鄰氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙烯磺酸(ethenesulfonic)、甲酸、富馬酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡萄糖酸、葡糖眵酸、谷氨酸、乙醇酸、氫溴酸、氫氯酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、雙羥萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、水楊酸、石更脂酸、琥珀酸、磺胺酸、辟^酸、酒石酸、和對(duì)甲苯磺酸。具體的無毒酸包括氫氯酸、氫溴酸、磷酸、硫酸、和甲磺酸。從而具體鹽的實(shí)例包括鹽酸鹽和甲磺酸鹽。鹽的其它實(shí)例為本領(lǐng)域戶斤熟知,參見，例^口，ie附/"gtow/7wrmflcew"ca/5We"ce51，第18版，MackPublishing,EastonPA(1990)。用于本文的術(shù)語"水合物"是指3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-笨甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽，進(jìn)一步包括用分子間非共價(jià)力結(jié)合的化學(xué)計(jì)量或非化學(xué)計(jì)量量的水。用于本文的術(shù)語"溶劑化物"是指3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3隱基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽，進(jìn)一步包括用分子間非共價(jià)力結(jié)合的化學(xué)計(jì)量或非化學(xué)計(jì)量量的溶劑。4.2與翻譯提前終止有關(guān)的疾病本發(fā)明包括在患者中治療、預(yù)防或控制通過抑制翻譯提前終止和/或無義介導(dǎo)的mRNA降解來緩解的疾病和病癥的方法，它包括根據(jù)本文描述的劑量和/或給藥方案，給有此需要的患者施用有效量的口服生物可用的化合物(如3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-笨甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括與表現(xiàn)出翻譯提前終止和/或無義介導(dǎo)的mRNA降解的基因有關(guān)的任何疾病的治療、預(yù)防或控制。在一個(gè)實(shí)200680020100.4說明書第9/52頁施方案中，所述疾病部分地由提前終止密碼子所導(dǎo)致的基因表達(dá)缺失引起。表現(xiàn)出翻譯提前終止和/或無義介導(dǎo)的mRNA降解的基因和與翻i奪提前終止和/或無義介導(dǎo)的mRNA降解有關(guān)的疾病的具體實(shí)例見于2002年6月21日提交的美國專利申請(qǐng)?zhí)?0/390,747中，題為"調(diào)節(jié)翻譯提前終止和無義介導(dǎo)的mRNA降解的小分子的鑒別方法"。在此其全文引入作為參考。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，本文提供的方法、組合物、劑量、單^f立劑型和給藥方案可用于在胚胎或胎兒中治療、預(yù)防或控制與基因中的無義突變有關(guān)的疾病，所述胚胎或胎兒患有或易患與基因內(nèi)的無義突變相關(guān)的疾病，例如本文所述的那些。按照該實(shí)施方案，給孕婦施用能通過胎盤傳遞給胚胎或胎兒的有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-笨甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，將有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物口服施予孕婦。與翻譯提前終止和/或無義介導(dǎo)的mRNA降解的抑制有關(guān)或被其所緩解的疾病或病癥包括但不限于遺傳病、癌癥、自身免疫性疾病、血液病、月交原病、糖尿病、神經(jīng)變性疾病、增生性疾病、心血管疾病、肺病、炎性疾病或中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。在本發(fā)明方法的范圍內(nèi)的具體遺傳疾病包括但不限于多發(fā)性內(nèi)分泌腫瘤(l、2和3型)、淀粉樣變性病、粘多糖病(I和III型)、先天性腎上腺發(fā)育不全、結(jié)腸腺瘤性息肉病、先天性家族性視網(wǎng)膜血管瘤病(VonHippelLandauDisease)、巻發(fā)綜合征(MenkesSyndrome)、血友病A型、血友病B型、膠原質(zhì)VII、先天性肝內(nèi)膽管發(fā)育不良征、Townes-Brocks綜合征、橫紋肌樣瘤、大皰型表皮松解癥、賀勒氏癥、科-勒二氏綜合征(Coffin-LowrySyndrome)、無虹膜癥、屑(^骨肌萎縮癥、肌小管肌病、性聯(lián)肌小管肌病、性聯(lián)軟骨發(fā)育不良、性聯(lián)丙種球蛋白缺乏癥、多囊腎病、脊髓性肌萎縮癥、家族性大腸瘛肉癥、丙酮酸脫氫酶缺乏癥、苯丙酮尿癥、纖維神經(jīng)瘤l型、纖維神經(jīng)瘤2型、阿爾茨海默氏病、家族性白癡病、瑞特綜合癥、Hermansky-Pudlak綜合癥、外胚層發(fā)育不良/皮膚脆性綜合征、Leri-Weill軟骨骨生成障礙癥、佝僂病、低磷酸血性佝僂病、腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良癥、回轉(zhuǎn)性萎縮癥、動(dòng)脈粥樣硬化、感音神經(jīng)性耳聾癥、肌張力障礙、Dent癥、急性間歇性紫質(zhì)癥、考登綜合征(CowdenDisease)、Herlitz大皰性表皮松解癥、肝豆?fàn)詈俗冃?、下頜-面發(fā)育不良(Treacher-CollinsSyndrome)、丙酮酸激酶缺乏癥、巨大癥、侏儒癥、甲狀腺功能減退癥、甲狀腺功能亢進(jìn)癥、衰老、肥胖、帕金森氏癥、C型尼曼匹克癥、囊性纖維化、肌肉萎縮癥、心臟病、腎結(jié)石、共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張癥、家族性高膽固醇血癥、視網(wǎng)膜炎色素變性、溶酶體貯積癥、結(jié)節(jié)性硬化癥、杜氏肌肉營養(yǎng)不良癥和馬凡氏綜合癥。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述遺傳病是自身免疫性疾病。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述自身免疫性疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或移植物抗宿主疾病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述遺傳病是血液病。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述血液病是A型血友病、馮維勒布蘭德氏病(3型)、共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張癥、b-地中海貧血或腎結(jié)石。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述遺傳疾病是膠原病。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述膠原病是成骨不全或肝硬化。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述遺傳疾病是糖尿病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述遺傳疾病是炎性疾病。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述炎性疾病是關(guān)節(jié)炎。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述遺傳疾病是中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述中樞神經(jīng)系鄉(xiāng)克疾病是神經(jīng)變性疾病。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病是多發(fā)性硬化、肌營養(yǎng)不良、杜氏肌營養(yǎng)不良、阿爾茨海默氏病、家族性白癡病、晚期型嬰兒神經(jīng)元蠟樣質(zhì)脂褐質(zhì)沉積病(LINCL)或帕金森氏病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述遺傳疾病是癌癥。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述癌癥是頭癌和頸癌、眼癌、皮4夫癌、口腔癌、喉癌、食道癌、胸癌、骨癌、肺癌、結(jié)腸癌、乙狀結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、前列腺癌、乳癌、卵巢癌、腎癌、肝癌、胰癌、腦癌、腸癌、心臟癌或腎上S象癌。所述癌癥可能是原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性的。癌癥包括實(shí)體瘤，血癌和其他腫瘤。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述癌癥與腫瘤抑制基因有關(guān)(參見，如Garinis等2002,HumGen111:115-117;Meyers等1998,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95:15587-15591;Kung等2000，NatureMedicine6(12):1335-1340)。這類腫瘤抑制基因包括，但不限于APC、ATM、BRAC1、BRAC2、MSH1、pTEN、Rb、CDKN2、NF1、NF2、WTl和p53。在一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述胂瘤抑制基因是p53基因。已在p53基因中鑒定出無義突變，意味著無義突變與癌癥有關(guān)。已在p53基因中鑒別幾種無義突變(參見，例如，Masuda等，2000,TokaiJExpClinMed.25(2):69-77;Oh等，2000,MolCells10(3):275-80;Li等，2000,LabInvest.80(4):493陽9;Yang等，1999,ZhonghuaZhongLiuZaZhi21(2):114-8;Finkdstein等，1998,MolDiagn.3(1):37-41;Kajiyama等，1998，DisEsophagus.11(4):279-83;Kawamura等，1999,LeukRes.23(2):115-26;Radig等，1998，HumPathol.29(11):1310-6;Schuyer等，1998,IntJCancer76(3):299-303;Wang-Gohrke等，1998,OncolRep.5(1):65-8;Fulop等，1998，JReprodMed.43(2):119-27;Ninomiya等，1997,JDermatolSci.14(3):173-8;Hsieh等，1996，CancerLett.100(1-2):107-13;Rail等，1996,Pancreas.12(l):10-7;Fukutomi等，1995,NipponRinsho.53(11):2764-8;Frebourg等，1995,AmJHumGenet.56(3):608-15;Dove等，1995，CancerSurv.25:335-55;Adamsom等，1995，BrJHaematol.89(l):61-6;Grayson等，1994，AmJPediatrHematolOncol.16(4):341-7;Lepelley等，1994,Leukemia.8(8):1342-9;Mclntyre等，1994,JClinOncol.12(5):925-30;Horio等，1994,Oncogene.9(4):1231-5;Nakamura等，1992，JpnJCancerRes.83(12):1293誦8;Davidoff等，1992,Oncogene.7(l):127-33;和Ishioka等，1991,BiochemBiophysResCommun.177(3):901-6;這些公開引入到本文作為參考)。在其它實(shí)施方案中，通過給予有此需要的患者有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2,4]噁二唑-3-基]-苯曱酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物治療、預(yù)防或控制的疾病包括但不限于實(shí)體腫瘤、肉瘤、癌、纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、4欠骨肉瘤、骨原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內(nèi)皮瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因氏肉瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸瘤、胰癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、骨髓癌、支氣管癌、腎細(xì)胞癌、肝細(xì)胞瘤、膽管癌、絨毛膜癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌、維耳姆斯氏瘤、宮頸癌、睪丸瘤、肺癌、小細(xì)胞肺癌、膀胱瘤、上皮瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、卡波濟(jì)氏肉瘤、松果體瘤、成血管細(xì)胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)月交質(zhì)瘤、menangioma、黑素瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、成4見網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、血生成肺瘤、急性淋巴細(xì)胞白血病、急性成淋巴細(xì)胞B細(xì)胞白血病、急性成淋巴細(xì)胞T細(xì)胞白血病、急性成髓細(xì)胞白血病、急性前髓細(xì)胞白血病、急性單核細(xì)胞白血病、急性紅白血病、急性巨核細(xì)胞白血病、急性骨髓單核細(xì)胞白血病、急性非淋巴細(xì)胞白血病、急性未分化細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、毛細(xì)胞白血病、或多發(fā)性骨髓瘤。參見，如//am、owWw一/es/"&rwo/MWc/we,EugeneBraunwald等編，第491-762頁(第15版，2001)。4.3劑量和給藥方案不受限于任何理論，本發(fā)明部分地包括3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的具體劑量和給藥方案，從而對(duì)抑制翻譯提前終止和/或無義介導(dǎo)的mRNA降解進(jìn)行優(yōu)化。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述無義介導(dǎo)的mRNA降解是由DNA的無義突變導(dǎo)致。本發(fā)明的新方法包括治療、預(yù)防和控制可通過抑制翻譯提前終止和/或無義介導(dǎo)的mRNA降解而治療或預(yù)防的疾病或其癥狀，同時(shí)降低或避免不良反應(yīng)或有害作用，如毒性或副作用。本文所述的劑量和給藥方案的優(yōu)選給藥途徑是口服(即攝取溶液、膠體溶液或含超過活性劑飽和濃度的額外的活性劑溶液)認(rèn)為本文所述的劑量和給藥方案有用是因?yàn)樗鼈兙哂心塬@得和保持所述活性劑的期望血漿濃度的能力。不受限于理論，認(rèn)為在如24小時(shí)或更長的時(shí)間內(nèi)，獲得并且保持活性劑(如第4.4部分所述的活性劑)的相對(duì)穩(wěn)定的血漿濃度可以提供給患者有益的治療效果。本文描述的劑量和給藥方案可用于獲得和保持活性劑的這種治療性血漿濃度。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及施用3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的方法，其中在12或24小時(shí)內(nèi)給有此需要的患者服用該活性劑一次。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及施用3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的方法，其中在12或24小時(shí)內(nèi)給有此需要的患者服用該活性劑兩次，其中每次給藥優(yōu)選間隔約4-14小時(shí)，在一個(gè)實(shí)施方案中12小時(shí)。在這些實(shí)施方案中，所述活性劑可以在用餐時(shí)，如早餐和晚餐時(shí)服用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及施用3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的方法，其中在12或24小時(shí)內(nèi)給有此需要的患者服用該活性劑三次，其中每次給藥優(yōu)選間隔約4-14小時(shí)。在一具體實(shí)施方案中，在早上服用一次該活性劑，中午服用一次，晚上服用一次。優(yōu)選的用藥間隔包括4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14小時(shí)。在一個(gè)實(shí)施方案中，在整個(gè)24小時(shí)內(nèi)活性劑劑量逐步加大。在另一個(gè)實(shí)施方案中，第二次的給藥劑量增加(如加倍)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，第一次和第二次的給藥劑量保持穩(wěn)定，第三次的給藥劑量增加(如加倍)。在一具體實(shí)施方案中，24小時(shí)內(nèi)的三次劑量是按照下述公式給藥IX、1X、2X,其中X是一個(gè)具體的起始劑量(如4mg/kg、7mg/kg或10mg/kg)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述活性劑是在患者進(jìn)食(即之前或之后)約10、15、30、45或60分鐘內(nèi)服用的。在一個(gè)實(shí)施方案中，將有效量的活性劑灑在或混在食物內(nèi)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述活性劑不與食物一起服用。一個(gè)特別優(yōu)選的給藥方案是間隔約6-、6-、和12-小時(shí)在餐后30分鐘內(nèi)(如在早餐后的上午7:00，午餐后的下午1:00和晚餐后的下午-7:00)給患者施用活性劑。而在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及以劑量范圍在0.1mg/kg-500mg/kg、1mg/kg匿250mg/kg、1mg/kg-150mg/kg、1mg/kg-100mg/kg、1mg/kg-50mg/kg、1mg/kg-25mg/kg、1mg/kg-10mg/kg或2mg/kg和10mg/kg之間的單一劑量或分開劑量(如24小時(shí)內(nèi)分三次)給有此需要的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，3-[5-(2-氟-笨基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物是以約2-6mg/kg、約5-9mg/kg、約6-10mg/kg、約8-12mg/kg、約12-16mg/kg或約18-22mg/kg的劑量給藥。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-笨甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物是以約4mg/kg、約7mg/kg、約8mg/kg、約10mg/kg、約14mg/kg或約20mg/kg的劑量給藥。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在24小時(shí)內(nèi)施用前述實(shí)施方案中所述的任何劑量的3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物三次。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及連續(xù)療法，其中在一段時(shí)間(如5、7、10、14、20、24、28、60或120天或更長的時(shí)間內(nèi))內(nèi)，每天給有此需要的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)24小時(shí)期間內(nèi)連續(xù)施用所述活性劑三次。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述活性劑是每天、每周、每月或每年連續(xù)給藥。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述活性劑是一連幾天、幾周、幾月或幾年，每24小時(shí)期間內(nèi)以約4mg/kg，約4mg/kg和約8mg/kg的劑量連續(xù)給藥三次。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述活性劑是一連幾天、幾周、幾月或幾年，每24小時(shí)期間內(nèi)以約7mg/kg，約7mg/kg和約14mg/kg的劑量連續(xù)給藥三次。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述活性劑是一連幾天、幾周、幾月或幾年，每24小時(shí)期間內(nèi)以約10mg/kg,約10mg/kg和約20mg/kg的劑量連續(xù)給藥三次。在所迷活性劑給藥的各個(gè)24小時(shí)期間內(nèi)，優(yōu)選的三次給藥是間隔約6-、6、和12-小時(shí)(如在早餐后的上午7:00,午餐后的下午1:00和晚餐后的晚上7:00)。優(yōu)選用連續(xù)療法治療、預(yù)防或控制囊性纖維化和杜氏肌營養(yǎng)不良癥。一個(gè)療程的治療時(shí)間可跨1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、IO周、ll周、12周、13周、14周、4個(gè)月、5個(gè)月、6個(gè)月、7個(gè)月、8個(gè)月、9個(gè)月、10個(gè)月、11個(gè)月、I年、2年、3年、4年、5年或更長時(shí)間。治療時(shí)間可以中斷，中斷時(shí)間可跨1天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、IO周、ll周、12周、13周、14周、4個(gè)月、5個(gè)月、6個(gè)月、7個(gè)月、8個(gè)月、9個(gè)月、IO個(gè)月、ll個(gè)月、l年、2年、3年、4年、5年或更長時(shí)間。這種決定可以讓本領(lǐng)域的技術(shù)人員來確定(如醫(yī)師)。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，治療持續(xù)14天，隨后的14天不進(jìn)行治療，接著再連續(xù)治療14天。在一個(gè)實(shí)施方案中，在第二個(gè)14天治療期間的給藥劑量高于第一個(gè)14天治療期間的給藥劑量。作為非限制性的實(shí)施例，在24小時(shí)期間內(nèi)，給有此需要的患者施用三劑3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物(如4mg/kg，4mg/kg和8mg/kg)，持續(xù)續(xù)14天，隨后的14天不進(jìn)行治療，接著連續(xù)14天，在24小時(shí)期間內(nèi)給有此需要的患者施用三劑3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物(如10mg/kg,10mg/kg和20mg/kg)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，連續(xù)治療28天。在某些實(shí)施方案中，按照本文所描述的劑量和給藥方案并與第二種活性劑組合(如同時(shí)地或順序地)施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2，4]噁二唑-3-基〗-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。在具體實(shí)施方案中，按照本文所描述的劑量和給藥方案并與氨基糖苷類、皮質(zhì)類固醇、胰腺酶、抗生素、胰島素，降血糖劑、Q-3脂肪酸、化療劑或酶替代療法組合施用3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。第二活性劑可以局部、腸內(nèi)(如口服、十二指腸、直腸)、腸道外(如靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、皮內(nèi)或腹膜內(nèi))或鞘內(nèi)給藥。在某些實(shí)施方案中，按照本文所描述的劑量和給藥方案并與放射療法組合施用3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。應(yīng)該理解，給有此需要的患者施用的活性劑的量是或者可以基于相關(guān)患者的實(shí)際體重，或相關(guān)患者群(如白種男性、白種女性、非洲裔美國男性、非洲裔美國女性、亞洲男性或亞洲女性，包括成年人和兒童)的平均體重計(jì)算出來的。4.4血漿濃度在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種讓患者內(nèi)的3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的血漿濃度大于約0.1pg/ml、約0.5ng/ml、約2|ig/ml、約5jig/ml、約10|xg/ml、約20昭/ml、約25昭/ml、約40貼/ml、約50昭/ml、約100[xg/ml、約150pg/ml、約200pg/ml、約250ng/ml或約500jag/ml保持至少約2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小時(shí)或更長時(shí)間的方法，包括給有此需要的患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，采用口服給藥。血漿內(nèi)的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物水平可以如通過高效液相層析法(HPLC)來進(jìn)行測定。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種讓患者內(nèi)的約0.1i!g/ml至約500昭/ml或約2pg/ml至約10(ig/ml的3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物血漿濃度保持至少約2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小時(shí)或更長時(shí)間的方法，包括給有此需要的患者以相同或遞增的劑量(如本文所述的IX、IX、2X)每天施用一次、兩次或三次有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，采用口服給藥。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，通過每天給有此需要的患者施用所述活性劑一次、兩次或三次，讓患者的3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的血漿水平保持高于約2略/ml至少約2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小時(shí)或更長。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，通過每天給有此需要的患者施用所述活性劑一次、兩次或三次，讓患者的3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的血漿水平保持約2pg/ml至約10昭/ml至少約2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小時(shí)或更長。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，通過每天給有此需要的患者施用所述活性劑一次、兩次或三次，讓患者的3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的血漿水平保持高于約10pg/ml至少約2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、8、12或24小時(shí)或更長。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，采用口服給藥。4.5患者群本發(fā)明方法和組合物對(duì)其起作用的具體患者群包括患有或者易患(如由于環(huán)境或基因原因)與無義突變相關(guān)的疾病，如本文所述的那些疾病的成年人和兒童。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過預(yù)篩選來確定所述患者或患者親屬患有無義突變(即UAA、UGA或UAG)。4.6藥物組合物和單位劑型含有3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的藥物組合物和單一單位劑型也包括在本發(fā)明中。本發(fā)明的具體劑型可適用于口服、粘膜(包括舌下、口腔、直腸、鼻或陰道)或胃腸外(包括皮下、肌內(nèi)、大劑量注射、動(dòng)脈內(nèi)、或靜脈內(nèi))給藥。優(yōu)選的藥物組合物和單一單位劑型可適用于口服給藥。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物是固體口服劑型。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物是液體口服劑型。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供劑量、單位劑型和藥物組合物，其中3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯曱酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物是可以口服生物利用的?？诜o藥的優(yōu)勢(shì)可以包括易于給藥、對(duì)劑量方案更高的患者順從性、臨床有效性、更少的并發(fā)癥、更短的住院期和整體的費(fèi)用節(jié)省。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及含有約35mg至約1400mg、約125mg至約1000mg、約250mg至約1000mg、或約500mg至約1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的單位劑型。在一個(gè)實(shí)施方案中，單位劑型包括3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物和一種或多種適合在瓶中懸浮于藥學(xué)上可接受的溶劑(如水、牛奶、碳酸飲料、果汁、蘋果醬、嬰兒食品和嬰兒配方)中的載體或賦形劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及單位劑型含有35mg、50mg、70mg、100mg、125mg、140mg、175mg、200mg、250mg、280mg、350mg、500mg、560mg、700mg、750mg、1000mg或1400mg的3畫[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的單位劑型。優(yōu)選的單位劑型包括約125mg,約250或約1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，單位劑型包括3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物和一種或多種適合在瓶中懸浮于藥學(xué)上可接受的溶劑(如水、牛奶、碳酸飲料、果汁、蘋果醬、嬰兒食品和嬰兒配方)中的載體或賦形劑。優(yōu)選的單位劑型是粉劑和藥囊劑。雖然建議將本文描迷的單位劑型保存在約2"C至約8"C之間，但在重新配制前可將單位劑型保存在室溫下約48小時(shí)。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過向含3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的瓶中直接添加約10mL水，讓在懸浮液總體積內(nèi)的濃度達(dá)到約25mg/mL,而實(shí)現(xiàn)250mg單位劑型的3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的重新配制。對(duì)于1000mg單位劑型的3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物來說，直接向含3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的瓶中加約20mL的水，讓在懸浮液總體積內(nèi)的濃度達(dá)到約50mg/mL。加入水之后，立刻將瓶子蓋上，手動(dòng)輕輕晃動(dòng)至少約30秒，獲得均一懸液。雖然在攝取前，該重新配制懸液可以在塑料瓶中保存長至24小時(shí)，但推薦在重新配制之后立刻使用該藥物。如果在重新配制和給藥之間延遲超過15分鐘，建議再次手動(dòng)輕輕晃動(dòng)藥瓶至少約30秒。建議直接從瓶子服用該懸液。如果是服用整個(gè)單位劑量，進(jìn)一步建議將瓶子用水漂洗一次，將這些漂洗水?dāng)z入體內(nèi)，以便保證在瓶中沒有剩下粉劑。如果是服用部分量的單位劑量，那就可以用勺子或注射器獲取合適劑量。適合患者口服給藥的本發(fā)明的單一單位劑型包括但不限于小藥嚢；扁囊劑；片劑；囊片；膠嚢，如軟彈性明膠膠嚢；錠劑；糖錠劑；分散劑；粉劑；溶液；液體劑型，包括懸液(例如，含水或不含水液體懸液)；乳液(例如，水包油乳液，或油包水乳液)；和酏劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及含有超過飽和濃度的其它活性劑的膠體溶液或溶液。本發(fā)明所包括的具體劑型的這些和其它形式會(huì)相互不同，這對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員是顯然的。參見iemz'"gtow's戶/wrmacew"ca/Sc/ewces,第18版,MackPublishing,EastonPA(1990)。本發(fā)明進(jìn)一步包括含3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的無水藥物組合物和劑型。在低水份或低濕度的條件下，用無水或含低水分的各種成分，可制備本發(fā)明的無水藥物組合物和劑型。根據(jù)常規(guī)制藥混合技術(shù)，通過使所述活性成分與至少一種載體或賦形劑密切混合，制備本發(fā)明的一般口服劑型。根據(jù)所希望的給藥途徑的劑型，賦形劑可采取多種形式。例如，適用于口服液體或氣溶膠劑型的賦形劑包括但不限于水、乙二醇、油、醇、增味劑(如香草精)、防腐劑和著色劑。適用于固體口服劑型(例如，粉劑、片劑、小藥嚢、膠囊和膠囊藥片)的賦形劑的實(shí)例包括，但不限于，淀粉、糖、微晶纖維素、稀釋劑、成粒劑、潤滑劑、粘合劑、和崩解劑。尤其優(yōu)選的單位劑型是含有有效量活性劑的粉劑，所述粉劑適合與藥學(xué)上可接受的載體(如水、牛奶、碳酸飲料、果汁、蘋果醬、嬰兒食品或嬰兒配方)重新配制和后續(xù)口服給藥。在一個(gè)具體實(shí)施方案予中，該粉劑任選地含有一種或多種與活性劑組合的載體或賦形劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在給藥或重新配制前，該粉劑保存在一密封容器中。而在另一個(gè)實(shí)施方案中，該粉劑裝入膠囊內(nèi)(如在明膠膠囊內(nèi))。適合口服給藥的液體制劑可采取，例如溶液、糖漿或懸液的形式，或者它們?cè)谑褂们俺室盟蚱渌m用溶媒配制的干燥制品(如粉末或顆粒)形式?？捎贸Ｒ?guī)的方法，用藥學(xué)上可接受的添加劑如懸浮劑(例如，山梨醇糖漿、纖維素衍生物或氫化可食用脂肪)；乳化劑(例如，卵磷脂或阿拉伯膠)；非水溶媒(例如，杏仁油、油酯、乙醇或分餾過的植物油)；和防腐劑(例如，甲基或丙基-對(duì)-鞋基苯甲酸酯或山梨酸)制備這類液體制劑。需要時(shí)所述制劑也可含有緩沖鹽、調(diào)味劑、著色劑和甜味劑?？捎糜诒景l(fā)明固體口服劑型的賦形劑的實(shí)例包括但不限于粘合劑、》真充劑、崩解劑和潤滑劑。適用于藥物組合物和劑型中的粘合劑包括但不限于玉米淀粉、馬鈴薯淀粉或其它淀粉、明膠、天然和合成的樹膠例如阿拉伯膠、藻酸鈉、藻酸、其它藻酸鹽、粉狀黃蓍膠、瓜爾膠、纖維素及其書亍生物(例如，乙基纖維素、纖維素乙酸酯、羧曱基纖維素釣、羧甲基纖維素鈉)、聚乙烯基吡咯烷酮、甲基纖維素、預(yù)膠化淀粉、羥基丙基甲基纖維素(例如第2208、2906、2910號(hào))、微晶纖維素、及它們的混合物。優(yōu)選的賦形劑包括LitesseUltra(精制葡聚糖)甘露醇、表面活寸生劑(聚乙二醇3350和LutrolmicroF127(泊洛沙姆(poloxamer)407粉末))、崩解劑(交聯(lián)聚維酮)、膠體二氧化硅(cab-o-sil)、Carbopol、聚丙烯酸和其它賦形劑(羥乙基纖維素，香草香料，硬脂酸鎂[非牛源]和硅膠)。適用于藥物組合物和固體劑型中的填充劑的實(shí)例包括，但不限于，乳糖、滑石、碳酸鈣(例如，顆?；蚍勰?、微晶纖維素、粉末纖維素、葡萄糖結(jié)合劑、白陶土、木糖醇、硅酸、山梨糖醇、淀粉、預(yù)膠化淀粉及其混合物。本發(fā)明藥物組合物中的粘合劑或填充劑一般以所述藥物組合物或劑型的約50至約99%重量存在。微晶纖維素的適用形式包括，但不限于，以AVICEL-PH-101、AVICEL-PH-103、AVICELRC-581、AVICEL-PH-105出售的原料(從FMCCorporation,AmericanViscoseDivision,AvicelSales,MarcusHook,PA購得)及其混合物。具體粘合劑是以AVICELRC-581出售的微晶纖維素和,菱甲基纖維素鈉的混合物。適用的無水或低水份賦形劑或添加劑包括AVICEL-PH-103TM和Starch1500LM。以舉例的方式給出下述非限制性實(shí)施例。5.1實(shí)施例3-5-(2-氟-苯基)-[1，2，41噁二唑-3-基-苯甲酸的制備向3-氰基苯甲酸(44.14g,300mmol)的DMF(0.6L)溶液加入K2C03(62.19g，450mmol)，室溫下攪拌30分鐘。用20分鐘向該懸液加入碘代甲烷(28mL，450mmol),于室溫下再攪拌該反應(yīng)混合物4小時(shí)。將該混合物倒入1.2L冰水中，攪拌30分鐘，濾去沉淀物。將白色塊狀物溶解在甲醇(70mL)中，然后于冷水中再沉淀。得到產(chǎn)率為79%的白色粉末狀所需產(chǎn)物(38g，LC/UV純度99%)。iH-雇R(CDC丄3)S8.85(2H)，8.28(1H)，8.02(1H)，4.17(3H)。室溫下，向3-氰基苯甲酸甲酯(50g，310mmol)的乙醇(500mL)溶液加入50%含水幾胺(41ml,620mmol)。100°C下攪拌該反應(yīng)混合物1小時(shí)，減壓除去溶劑。將該油性殘余物溶解在20/80乙醇/甲苯(50mLx2)中，然5.實(shí)施例后再次濃縮。得到98n/。純度(LC/UV)的白色粉末狀所需酯(61g，定量產(chǎn)率)。!H-應(yīng)R(CDCl3)59.76(lH)，8.24(1H)，7.82(2H)，7.51(1H)，5.92(2H)，3.82(3H)。于5°C,向3-(N-羥基甲脒基)-苯甲酸甲酯(60g,310mmol)的無水THF(200mL)溶液加入二異丙基乙胺(75mL，434mmo1),然后用20分剖，向該混合物中添加2-氟代苯甲酰氯(48.1mL，403mmol)。室溫下攪拌該反應(yīng)混合物l小時(shí)。濾去沉淀物，減壓濃縮該濾液。4吏殘余物溶解在乙酸乙酯(400mL)中，再用水(200mLx2)洗滌。減壓除去溶劑，于己烷中的60%乙酸乙酯中結(jié)晶所需產(chǎn)物，生成白色固體狀所需產(chǎn)物(81g，產(chǎn)率83%)。iH-NMR(CDCl3)S8.18(lH)，8.03(3H)，7.48(2H)，7.18(2H)，5.61(2H)，3.即H)。在130。C下用Dean-Stark裝置回流甲苯(500mL)中的44g3-(N-2-氟代苯甲?；纂呋?-苯甲酸甲酯4小時(shí)。5。C下攪拌該反應(yīng)混合物18小時(shí)。濾出白色沉淀，濃縮濾液，再于甲苯中結(jié)晶。得到白色固體狀的99%純度(LC/UV)的所需噁二唑(38g,產(chǎn)率92%)。iH-麗R(CDCl3)58.91(lH)，8.38(1H)，8.15(2H)，7.62(2H)，7.35(2H),3.95(3H)。向3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸甲酯(3.3g,11mmol)的THF(40mL)溶液加入1.5M含水NaOH(10mL,14mmol)。于100°C回流該反應(yīng)混合物2小時(shí)。除去有機(jī)溶劑，用水(50mL)稀釋含水溶液，接著用含水HC1酸化。過濾出白色沉淀，用冷水洗滌白色塊狀物，然后用冷凍干燥器干燥。得到98X純度(LC/UV)的白色粉末狀所需酸(3.0g，產(chǎn)率96%)。熔點(diǎn)242。C;IR3000(芳香C-H)，1710(C=0);iH-NMR(D6-DMSO)58.31(IH),8.18(2H),8.08(IH),7.88(2H)，7.51(2H);13C-NMR(D6-DMSO)5172.71,167.38，166.48，161.25,135.80，132.24，131.79，131.79,131.08,130.91,129.81，127.76，125.48，117.38，111.70;19F-NMR(D6-DMSC0S109.7?？捎帽绢I(lǐng)城所熟知的方法制備3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2，4]噁二唑-3-基〗-苯甲酸的藥學(xué)上可接受的鹽?？砂聪旅灾苽溻c鹽。向3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸甲酯(33g,111mol)的THF(400mL)溶液加入1.5M含水NaOH(100mL，144mmol)。于100°C回流該反應(yīng)混合物2小時(shí)。減壓除去有機(jī)溶劑，5。C下攪拌該含水溶液2小時(shí)。濾去白色沉淀物，濃縮濾液，再在水中沉淀。用冷水洗滌白色塊狀物，然后用冷凍干燥機(jī)干燥。得到98.6y。純度(LC/UV)的白色粉末狀所需鹽(33g,96%產(chǎn)率)。5.2實(shí)施例2:無義突變介導(dǎo)的囊腫性纖維化的口服治療本實(shí)施例闡迷了用于治療無義突變介導(dǎo)的囊腫性纖維化的示例性給藥方案。提供懸3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的浮用香草味粉末。該藥物按照現(xiàn)行生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(cGMP)制備。該制劑可以包括粘合劑和懸浮劑、表面活性劑、和各種有助于該制備過程的少量賦形劑。將該混合物放在用箔封口和白色塑料兒童安全蓋密封的40mL塑料(高密聚乙烯[HDPE])瓶中。每瓶包括125、250或1000mg藥物，占制劑總重量的25.0%。另外，該混合物可以包括在小藥嚢制劑內(nèi)，如實(shí)施例6所述。賦形劑(和其占總制劑重量的比例)包括懸浮劑(1^6556@Ultra[精制葡聚糖]-25.7%)、可提供味道遮蔽的粘合劑(甘露醇-25.0%)、表面活性劑(聚乙二醇3350-12.8%和LutrolmicroF127[泊洛沙姆(poloxamer)407粉末]-3.7%)、崩解劑(交聯(lián)聚維酮-5.0%)，而且可包括分別小于2%的其它賦形劑(羥乙基纖維素，香草香料，硬脂酸鎂[非牛源]和硅膠)。瓶子標(biāo)簽注明了藥物成分、批號(hào)、藥量和保存條件(4口室溫或5。C-8。C冷藏)。藥物的給藥劑量以毫克藥物/每千克患者體量為基礎(chǔ)。藥物劑量可以與可用的藥瓶大小相一致。給藥方案可以確保實(shí)際的總給藥量絕不會(huì)小于需要?jiǎng)┝?0mg以下或者大于需要?jiǎng)┝?50mg以上(即總保持在5mg/kg的給定劑量水平)。例如，重40kg的患者以4mg/kg的劑量治療，計(jì)算出的所需劑量就是160mg。該患者會(huì)得到一瓶250mg瓶裝藥(總共250mg)或6.25mg/kg/劑量。同一患者當(dāng)以晚上8mg/kg的劑量治療時(shí)，計(jì)算出的劑量是320mg,會(huì)得到兩瓶250mg瓶裝藥(總共500mg)或12.5mg/kg。同一患者當(dāng)以10mg/kg的劑量治療時(shí)，計(jì)算出的劑量是400mg，會(huì)得到兩瓶250mg瓶裝藥(總共500mg)或12.5mg/kg。同一患者當(dāng)以晚上20mg/kg的劑量治療時(shí)，計(jì)算出的劑量是800mg，會(huì)得到一瓶1000mg瓶裝藥(總共1000mg)或25mg/kg。在室溫下完成藥品重新配制和給藥。在重新配制前不需要對(duì)藥品進(jìn)行特別加熱。將藥品與任何藥學(xué)上可接受的溶劑(如水、牛奶、」碳酸飲料、果汁、蘋果醬、嬰兒食品和嬰兒配方)配置在一起。對(duì)每瓶250mg來說，加入10mL水或其它藥學(xué)上可接受的溶劑，讓懸液總體積內(nèi)的濃度約為25mg/mL。對(duì)每瓶1000mg來說，加入20mL水或其它藥學(xué)上可接受的溶劑，讓懸液總體積內(nèi)的濃度約為50mg/mL。在給干研究藥物添加水或其它藥學(xué)上可接受的溶劑之后，馬上將藥瓶蓋上，手動(dòng)劇烈晃動(dòng)約60秒，獲得均一懸液。雖然在攝取前，該懸液可以在塑料瓶中保存長至24小時(shí)，但推薦在重新配制之后立刻食用該藥物。如果在重新配制和給藥之間延遲超過15分鐘，那就要再手動(dòng)劇烈晃動(dòng)藥瓶約60秒。只要需要即可對(duì)患有或易患囊腫性纖維化的患者進(jìn)行連續(xù)給藥治療。表l示出3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的示例性給藥方案，其中每天間隔6-、6-和12-小時(shí)在用餐時(shí)給藥三次(如上午7:00、下午1:00和晚上7:00)。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，給患者施用如表1所述的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物連續(xù)14天，接著M天不進(jìn)行治療，接著后面的14天給藥，接著后面的14天不進(jìn)行治療。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，給患者施用如表1所述的3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物連續(xù)14天，每日三次劑量4mg/kg，4mg/kg和8mg/kg，接著14天不進(jìn)行治療，接著后面的14天以每日三次劑量10mg/kg，10mg/kg和20mg/kg給藥，然后后面的14天不進(jìn)行治療。在某個(gè)實(shí)施方案中，每天按照表1所示進(jìn)行單獨(dú)的每天給藥方案。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在不同時(shí)間段，按照表1所示進(jìn)行不同的給藥方案。表1.給藥方案<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>優(yōu)選患者服藥是在餐后30分鐘內(nèi)進(jìn)行的；理想情況是，服藥是間隔約6-、6和12-小時(shí)進(jìn)行的(如，在早餐后的上午7:00,在午餐后的下午~1:00，和在晚餐后的晚上7:00)。患者服藥是用所需量的水或其它藥學(xué)上可接受的溶劑填充每個(gè)藥瓶，蓋上蓋并晃動(dòng)各藥瓶約60秒，然后根據(jù)劑量攝入所需要的藥瓶數(shù)量和尺寸的藥物。一次攝取一劑完整的重新配制藥物。在服藥后，將每個(gè)給藥瓶用水或另一種藥學(xué)上可接受的溶劑半填充，蓋好蓋并晃動(dòng)，讓患者攝入瓶中的水或其它藥學(xué)上可接受的溶劑。這種沖洗步驟應(yīng)進(jìn)行一次。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，提供的藥物是小藥囊。在這些實(shí)施方案中，在給藥前，可對(duì)適量的藥物進(jìn)行稱重和測量，并和合適的藥學(xué)上可接受的溶劑混合。5.3實(shí)施例3:無義突變介導(dǎo)的杜氏肌營養(yǎng)不良的口服治療本實(shí)施例闡述了用于治療無義突變介導(dǎo)的杜氏肌營養(yǎng)不良的示例性纟會(huì)藥方案。提供懸3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的浮用香草味粉末。該藥物按照現(xiàn)行生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(cGMP)制備。該制劑可以包括粘合劑和懸浮劑、表面活性劑、和各種有助于該制備過程的少量賦形劑。將該混合物放在用箔封口和白色塑料兒童安全蓋密封的40mL塑料(高密聚乙烯[HDPE])瓶中。每瓶包括125、250或1000mg藥物，占制劑總重量的25.0%。另外，該混合物可以包括在小藥嚢制劑內(nèi)，如實(shí)施例6所迷。賦形劑(和其占總制劑重量的比例)包括懸浮劑(LitesseUltra[精制聚葡萄糖]-25.7%)、可提供味道遮蔽的祐合劑(甘露醇-25.0%)、表面活性劑(聚乙二醇3350-12.8%和LutrolmicroF127[泊洛沙姆(poloxamer)407粉末]-3.7%)、崩解劑(交聯(lián)聚維酮-5.0%),而且可包括分別小于2%的其它賦形劑(羥乙基纖維素，香草香料，硬脂酸鎂[非牛源]和硅膠)。瓶子標(biāo)簽注明了藥物成分、批號(hào)、藥量和保存條件(如室溫或5"C-8。C冷藏)。藥物的給藥以毫克藥物/每千克患者體量為基礎(chǔ)?？梢杂?jì)算出與給患者施用的藥物總毫克量相對(duì)應(yīng)的總體積。例如，如果一名30公斤重患者按照4mg/kg計(jì)算，那么需要的劑量就是30X4=120mg。該患者應(yīng)該用250mg的劑量瓶服藥。因?yàn)?50mg劑量瓶中的每毫升懸液包含250/10=25mg藥物，所以對(duì)于每位4mg/kg劑量來說，該患者應(yīng)服用120/25=5mL的懸液。當(dāng)同一患者以晚間8mg/kg的劑量治療時(shí)，算出的劑量是240mg，需要得到一瓶250mg瓶裝藥(IOmL懸液)。應(yīng)該用塑料的口服給藥注射器從藥瓶中吸出各種劑量的懸液體積。為了將<10(對(duì)250mg瓶來說)或〈20mL(對(duì)1000mg瓶來說)的微量體積轉(zhuǎn)移，應(yīng)該將研究藥物瓶中所需的量吸到合適類型和大小的給藥注射器(如Baxa，Exacta-Med，有刻度的、不含橡膠的塑料口服給藥注射器)中，并用同一個(gè)注射器給藥。在藥物重新配制的24小時(shí)內(nèi)，可以從同一懸液瓶中取出>1劑量；但是，重新配制藥物的保存時(shí)間不應(yīng)超過24小時(shí)，這樣該材料可以用于再給相同的患者多次給藥。如果l天內(nèi)服用的藥物總量超過了10mL(對(duì)250mg瓶裝藥來說)或20mL(對(duì)1000mg瓶裝藥來說)的重新配制藥物，那么每次給藥就要用一瓶新藥。在室溫下完成藥品重新配制和給藥。在重新配制前不需要對(duì)藥品進(jìn)行特別加熱。將藥品與任何藥學(xué)上可接受的溶劑(如水、牛奶、碳酸飲料、果汁、蘋果醬、嬰兒食品和嬰兒配方)配置在一起。對(duì)每瓶250mg來"i兌，加入10mL水或其它藥學(xué)上可接受的溶劑，讓懸液總體積內(nèi)的濃度約為25mg/mL。對(duì)每瓶1000mg來說，加入20mL水或其它藥學(xué)上可接受的溶劑，讓懸液總體積內(nèi)的濃度約為50mg/mL。在給干的研究藥物添加水或其它藥學(xué)上可接受的溶劑之后，馬上將藥瓶蓋上，手動(dòng)劇烈晃動(dòng)約60秒，獲得均一懸液。雖然在攝取前，該懸液可以在塑料瓶中保存長至24小時(shí)，但推薦在重新配制之后立刻食用該藥物。如果在重新配制和給藥之間延遲超過15分鐘，那就要再手動(dòng)劇烈晃動(dòng)藥瓶約60秒。只要需要即可對(duì)患有或易患杜氏肌營養(yǎng)不良的患者進(jìn)行連續(xù)給藥治療。表2示出3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的示例性給藥方案，其中每天間隔6-、6-、和12-小時(shí)用餐時(shí)給藥三次(如上午~7:00,下午1:00和晚上7:00)。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，給患者施用如表2所述的3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物連續(xù)28天。在某些實(shí)施方案中，每天按照表2所示進(jìn)行單獨(dú)的給藥方案。在另一些實(shí)施方案中，在不同天數(shù)上，按照表2所示進(jìn)行不同的給藥方案。在某些實(shí)施方案中，提供的藥物是小藥囊。在這些實(shí)施方案中，在給藥前，可對(duì)適量的藥物進(jìn)行稱重和測量，并與合適的藥學(xué)上可接受的溶劑混合。表2.給藥方案<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>縮寫TID-每日三次患者服藥是在飯后30分鐘內(nèi)進(jìn)行的；理想情況是，服藥是間隔約6-、6和12-小時(shí)間隔進(jìn)行的(如，在早餐后的上午7:00,在午餐后的下午1:00,和在晚餐后的晚上7:00)。患者服藥是用所需量的水或其它藥學(xué)上可接受的溶劑填充每個(gè)藥瓶，蓋上蓋，每瓶晃動(dòng)約60秒，用口服給藥注射器從瓶中吸出適量體積，直接從該給藥注射器服藥。根據(jù)劑量，一次服用一劑完整計(jì)算體積的重新配制藥物。服藥后，將該給藥注射器填滿與劑量體積相同體積的水或其它藥學(xué)上可接受的溶劑，并讓患者服用。這種沖洗步驟應(yīng)進(jìn)行一次。治療效力可通過測定足肌伸趾短肌(EDB)活組織檢查中的營養(yǎng)不良蛋白水平基本測量中的變化來確定。5.4實(shí)施例4:3-15-(2-氟-苯基)-[1，2,4]噁二唑-3-基-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物無香劑的制備提供3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物懸的浮用粉末。該藥物按照現(xiàn)行生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(cGMP)制備。將該藥物與粘合劑和懸浮劑、表面活性劑、和各種有助于該制備過程的少量賦形劑混合。將該混合物放在用箔封口和白色塑料兒童安全蓋密封的40mL塑料(高密聚乙烯[HDPE])瓶中。每瓶包括約35mg、約70mg、約125mg、約140mg、約175mg、約250mg、約280mg、約350mg、約560mg、約700mg、約1000mg或約1400mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。賦形劑(和其占總制劑重量的比例)任選包括懸浮劑(LitesseUltra-25.7%)、可提供味道遮蔽的祐合劑(甘露醇-25.0%)、表面活性劑(聚乙二醇3350-12.8%和LutrolmicroF127[泊洛沙姆(poloxamer)407粉末]-3.7%)、崩解劑(交聯(lián)聚維酮-5.0%)，而且可包括分別小于2%的其它賦形劑(膠體二氧化硅、羥乙基纖維素、硬脂酸鎂[非牛源]和硅膠)。瓶子標(biāo)簽注明了藥物成分、批號(hào)、藥量和保存條件(如室溫或5t-8t:冷藏)。在給藥前，將藥品與合適體積的藥學(xué)上可接受的溶劑(如水、牛奶、碳酸飲料、果汁、蘋果醬、嬰兒食品或嬰兒配方)重新組配。5.5實(shí)施例5:3-[5-(2-氟-苯基)-1，2，引噁二唑-3-基-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物香型劑的制備提供3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的懸浮用香草香型(通過添加香草精)粉末。該藥物按照現(xiàn)行生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(cGMP)制備。將該藥物與粘合劑和懸浮劑、表面活性劑、和各種有助于該制備過程的少量賦形劑混合。該混合物放在用箔封口和白色塑料兒童安全蓋密封的40mL塑料(高密聚乙烯[HDPE])瓶中。每瓶包括約35mg、約70mg、約125mg、約140mg、約175mg、約250mg、約280mg、約350mg、約560mg、約700mg、約1000mg或約1400mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。賦形劑(和其占總制劑重量的比例)任選包括懸浮劑(LitesseUltra[精制聚葡萄糖]-25.7%)、可提供味道遮蔽的粘合劑(甘露醇-25.0%)、表面活性劑(聚乙二醇3350-12.8%和LutrolmicroF127[泊洛沙姆(poloxamer)407粉末]-3.7%)、崩解劑(交聯(lián)聚維酮-5.0%)，而且可包括分別小于2%的其它賦形劑(膠體二氧化硅、幾乙基纖維素、香草香料、硬脂酸鎂[非牛源]和硅膠)。瓶子標(biāo)簽注明了藥物成分、批號(hào)、藥量和保存條件(如室溫或5。C-8t:冷藏)。在給藥前，將藥品與合適體積的藥學(xué)上可接受的溶劑(如水、牛奶、碳酸飲料、果汁、蘋果醬、嬰兒食品或嬰兒配方)重新組配。在重新配制前，該藥品可在室溫下儲(chǔ)存長至48小時(shí)。本文引述了大量參考文獻(xiàn)，其整體全部引入本文以供參考。5.6實(shí)施例6:3-5-(2-氟-苯基)-l，2，4噁二唑-3-基-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的藥囊劑用含多個(gè)薄層的嚢或藥囊包裹混合物，所述多個(gè)薄層可包括紙層，鋁箔層和沙林(surlyn)層。每個(gè)藥囊包含約125mg、約250mg、約500mg或約1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。賦形劑(和其總制劑重量比)任選地包括下述表3和表4所示中的任一種。表3.制劑<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>藥囊標(biāo)簽注明了藥物成分、批號(hào)、藥量和保存條件(如2。C-8。C冷藏)。在給藥前，將適量的藥品與合適體積的藥學(xué)可接受溶劑(如水、牛奶、碳—酸飲料、果汁、蘋果醬、嬰兒食品或嬰兒配方)重新組配。在重新配制前，該藥品可在室溫下儲(chǔ)存長至48小時(shí)。5.7實(shí)施例7:跨上皮電位差(TEPD)分析通過評(píng)估跨上皮生物電特性來測量跨上皮電位差(TEPD)，又稱為鼻部電位差，會(huì)獲得直接在分泌上皮細(xì)胞中鈉和氯化物轉(zhuǎn)運(yùn)的靈敏度評(píng)價(jià)(Knowles等，1981，TV.A/ed305(25):1489-95;Knowles等，1995,i/w附.Ge"e77^r.6:445)。用標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)，在各鼻孔內(nèi)進(jìn)行TEPD(Standaert等，2004,P"/m.37:385-92)。在該過程中，用小型塑料導(dǎo)管評(píng)價(jià)跨鼻孔內(nèi)鼻粘膜細(xì)胞外部細(xì)胞膜的電位差。TEPD值用毫伏或mV表示。氯化物電導(dǎo)等于或電性低于-5.0mV通常認(rèn)為是正常范圍。對(duì)沿下鼻甲劃線的鼻上皮細(xì)胞進(jìn)行TEPD評(píng)價(jià)，因?yàn)檫@些細(xì)胞比沿下呼吸道劃線的呼吸上皮細(xì)胞更容易評(píng)價(jià)，而且顯示這些細(xì)胞具有相同的離子轉(zhuǎn)運(yùn)特性(Knowles等，1981,爿m.Wev.ie5^/r72"":484-90)。還可以對(duì)直腸上皮細(xì)胞和下呼吸道上皮細(xì)胞迸行TEPD評(píng)價(jià)。由于CFTR蛋白在轉(zhuǎn)運(yùn)氯離子跨細(xì)胞膜中的作用，而且由于缺乏這種蛋白，囊胂性纖維化患者會(huì)有異常TEPD氯化物電導(dǎo)。作為一個(gè)技術(shù)指標(biāo)(endpoint)，TEPD有其優(yōu)勢(shì)，因?yàn)樗軝z測氯化物轉(zhuǎn)運(yùn)的變化，該變化定量整合了呼吸道細(xì)胞中CFTR的存在、功能活性和頂端位置。另外，它是直接測量CFTR活性，不太可能會(huì)受CF的輔助療法或治標(biāo)療法影響(全身給藥的氨基糖普類抗生素可能除外)。重要的證據(jù)是證明TEPD值可能與肺功能障礙及放射照相異常有關(guān)(Ho等,1997,ie^/r.70(9」:2018-22;Fajac等，1998,五wr7^戸>.J.12(6):1295-300;Sermet-Gaudelus等，2005，JW，Y.C置Med171(9):1026-1031)。尤其是TEPD評(píng)估異丙腎上腺素誘導(dǎo)的CFTR氯化物活性顯示出比在確定FEV1中的基因型和放射性評(píng)分更好的預(yù)測值(Ho等，/997，五wi^戸V丄10(9):2018-22)。根據(jù)基準(zhǔn)條件，TEPD評(píng)估的氯化物通道活性很難在CF患者中自發(fā)正常化；預(yù)計(jì)觀察到的TEPD評(píng)估的氯化物通道活性的任何改進(jìn)都會(huì)給CFTR校正療法的藥理活性予以特異性地指示。因此，它已成為旨在校正CFTR功能障礙的藥理學(xué)和基因置換1-2期研究中的主要技術(shù)指標(biāo)(Peckham等，1995,A/.C//"fXowfe"」.89(3):277-84;Wilschanski等，2003,JMed349(15):1433-41)。5.8實(shí)施例8:CFTR免疫熒光利用標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)對(duì)患者的各鼻孔進(jìn)行鼻腔祐膜刮除的采集和處理，通過免疫熒光和量化CFTRmRNA來測量CFTR蛋白(Clancy等，2001,爿w./ie^z>.O".OweMed163(7):1683-92;Amaral等，2004,JFAras.3Sm///2:17-23)。正常上皮細(xì)胞(如來自鼻腔粘膜刮層)的免疫熒光染色揭示了大部分CFTR蛋白存在于頂端表面。在無義突變調(diào)節(jié)的CF動(dòng)物模型中或在患無義突變調(diào)節(jié)的CF的患者中，CFTR染色不存在(如在患過早終止純合突變的患者中)或者主要在核周區(qū)域內(nèi)觀察到(如在患AF508突變的患者內(nèi)，AF508突變防止正常的CFTR細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸)。通過免疫熒光評(píng)估，在動(dòng)物模型和患者體內(nèi)成功產(chǎn)生功能性野生型或非野生型CFTR蛋白都與頂端上皮CFTR蛋白的再現(xiàn)相關(guān)聯(lián)(Clancy等，2001,爿m.Jie^/rO".CoreMet/.163(7):1683-92;Wilschanski等，〃/MW.349(15):1433-41)。5.9實(shí)施例9:肺功能檢查肺功能檢測，包括FEVbFVC、和MEF25.75用標(biāo)準(zhǔn)肺活量測定程序來測量。肺功能評(píng)估(包括MEF2W5、FVC、特別是FEV,)已被公認(rèn)是CF患者明確的臨床技術(shù)指標(biāo)(食品藥品監(jiān)督管理局，62ndAnti-InfectiveDrugsAdvisoryCommittee.DiscussionofNDAfortobramycinsolutionforinhalation(Tobi)forthemanagementofcysticfibrosispatients.November,1997;Tiddens，2002,戶e&a化.Pw/附o"o/.34(3):228-31)。FEVt和其它肺功能檢查措施已被證明與就衛(wèi)生保健利用來說的疾病嚴(yán)重度，預(yù)測發(fā)病率和IV抗生素使用有關(guān)，而且指示著CF相關(guān)死亡率的風(fēng)險(xiǎn)(食品藥品監(jiān)督管理局,62ndAnti-InfectiveDrugsAdvisoryCommittee.DiscussionofNDAfortobramycinsolutionforinhalation(Tobi)forthemanagementofcysticfibrosispatients.November,1997)。肺功能檢查易于管理(即使對(duì)年僅7歲的患者)，而且使用的標(biāo)準(zhǔn)化設(shè)備和技術(shù)是可廣泛獲得的?？紤]患者年齡、身高、和性別，用建好的規(guī)范方程進(jìn)行解釋。FEVi改善已公認(rèn)能定量地演示有意義的CF臨床益處，而且曾作為監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)阿法鏈道酶(dornasealfa)和吸入式托普霉素的依據(jù)(食品藥品監(jiān)督管理局，62ndAnti-InfectiveDrugsAdvisoryCommittee.DiscussionofNDAfortobramycinsolutionforinhalation(Tobi)forthemanagementofcysticfibrosispatients.November,1997)。5.10實(shí)施例10:3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4噁二唑-3-基-苯甲酸口服治療無義突變調(diào)節(jié)的囊性纖維化的II期研究病人必須符合下列全部條件才有資格參與研究1.在確切異常汗液試驗(yàn)的書面證據(jù)的基礎(chǔ)上，診斷CF(利用毛果云香堿離子電滲試驗(yàn)，汗液氯化物〉60mEq/公升(LeGrys，Sweattesting:Samplecollectionandquantitativeanalysis:Approvedguidelines-Secondedition.NationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandards2000;Vol20:14));2.利用TEPD測定的異常氯化物分泌(高于用無氯化物的氨氯吡脒和異丙腎上腺素進(jìn)行的氯化物分泌的-5mVTEPD評(píng)估值)；3.在c/^基因的一個(gè)等位基因上存在無義突變；4.提供文件證明已經(jīng)進(jìn)行了c/"基因測序；5.年齡^18周歲；6.體重^40kg;7.根據(jù)年齡、性別和身高預(yù)測FEV^40y。(Knudson標(biāo)準(zhǔn))(Knudson,1983,iev.127:725-734);8.在室內(nèi)空氣下的氧飽和度(由脈沖血氧定量法測定)292%;9.男性和女性患者愿意在研究藥品給藥和隨后的時(shí)間段內(nèi)如果不是無菌手術(shù)避免性交或使用阻隔或醫(yī)學(xué)方法避孕；10.陰性懷孕測試(對(duì)于潛在的適齡生育女性)；11.愿意并有能力遵守預(yù)定的訪問、藥品給藥計(jì)劃、研究程序(包括TEPD測量，臨床實(shí)驗(yàn)室測試，和PK采樣)、和研究限制；12.有能力提供書面知情同意書；和13.親自簽名并注明日期的知情同意文件的證據(jù)，表明該患者已被告知該試驗(yàn)的全部相關(guān)方面。存在下列任何一種情況就排除病人參與研究1.事先或正存在的醫(yī)學(xué)狀況(如伴隨疾病，精神狀況，酗酒，濫用藥物)、醫(yī)療史、身體結(jié)果、ECG結(jié)果、或化-險(xiǎn)異常，以研究人員的觀點(diǎn)，可能會(huì)影響該患者的安全，從而導(dǎo)致不太可能讓治療過程或后續(xù)工作完成，或有可能妨礙研究結(jié)果的評(píng)估；2.在開始研究治療前2周內(nèi)正患有急性疾病，包括急性上或下呼吸道感染；3.在開始研究治療前2個(gè)月內(nèi)有肺部疾病重大并發(fā)癥史(包括最近大塊咳血或氣胸)；4.篩檢胸部x線異常提示除CF之外的臨床上顯著的活躍性肺疾病，或新的重大異常如肺不張或胸腔積液，這可能暗示著繼發(fā)于CF的臨床上顯著的活躍性肺病變；5.乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎抗體檢測、或人免疫缺陷病毒(HIV)檢測陽性；6.血紅蛋白〈10g/dL;7.血清白蛋白〈2.5g/dL;8.肝功能異常(血清總膽紅素>正常上限，或血清ALT、AST或0。1>正常上限2.0倍)；9.腎功能異常(血肌酐>正常上限1.5倍)；10.孕期或母乳喂養(yǎng)；11.固體器官或血液移植史；12.在開始研究治療前的14天內(nèi)，接觸過另一種研究藥物；13.正在參與任何其它治療性臨床試驗(yàn)；14.正在^吏用塞唑二酮過氧化物酶^f本增殖物激活的受體y(PPAR力激動(dòng)劑，如羅格列酮(Avandia⑧或等同物)或吡格列酮(Actos⑧或等同物)；15.在開始研究治療前的14天內(nèi)，鼻腔藥物改變(包括使用皮質(zhì)類固醇，色甘酸，異丙托溴銨，苯腎上腺素，或羥甲唑啉)；16.在開始研究治療前的14天內(nèi)，用全身或吸入性類固醇的治療改變；17.在開始研究治療前的14天內(nèi)或研究治療期間，使用或要求用吸入性慶大霉素或丁胺卡那霉素；或18.在開始研究治療前的14天內(nèi)，需要用全身性氨基糖苷類抗生素。3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸以本文所述提供的制劑提供。按照下文的56天日程表，給15名患者(12名在以色列進(jìn)行II期試驗(yàn)，3名在美國進(jìn)行II期試驗(yàn)；7名患者是男性，8名女性；患者中位數(shù)年齡22歲；而且所有患者都有多種囊性纖維化病征和癥狀，包括一定程度的肺部機(jī)能障礙)口服施用3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸每天三次(TID)以4mg/kg，4mg/kg和8mg/kg施用3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-笨甲酸14天，隨后14天不進(jìn)行治療(第1循環(huán)，由28天組成)，接著每天三次(TID)以10mg/kg，10mg/kg和20mg/kg施用3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸14天，隨后14天不進(jìn)行治療(第2循環(huán)，由28天組成)。用上面所述的步驟評(píng)價(jià)臨床終點(diǎn)。在治療前，在第l循環(huán)和第2循環(huán)的第14和28天進(jìn)行TEPD測定。在治療前，在第1循環(huán)和第2循環(huán)的第14和28天，對(duì)各患者各鼻孔進(jìn)行鼻粘膜刮除采集。在正在以色列進(jìn)行的研究中，在治療前，在第2循環(huán)的第1天，第1循環(huán)的第13或14天和第2循環(huán)的第13或14天進(jìn)行肺部試驗(yàn)測量，包括FEV!，F(xiàn)VC和MEF25-75，在正在美國進(jìn)行的研究中，在治療前，在第2循環(huán)的第13或14天對(duì)同樣參數(shù)進(jìn)行測量。7E尸D襲^參塗^^乎衫f必。該值是從治療期開始至結(jié)束，各研究參與者的TEPD氯化物電導(dǎo)變化的平均值。例如，如果三名參與者各自的TEPD氯化物電導(dǎo)變化是-7.0mV，-2.0mV和-9.0mV，那么這些參與者的TEPD氯化物電導(dǎo)平均變化就是-6.0mV。,感,(襲必參密^^j《^^"。該百分比是在用3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸治療結(jié)束時(shí)，證明患者有TEPD氯化物電導(dǎo)反應(yīng)的百分比。對(duì)于該試驗(yàn)的目的來說，氯化物電導(dǎo)反應(yīng)定義為TEPD氯化物電導(dǎo)改善至少-5mV。例如，在基線為+1.0mV的TEPD氯化物電導(dǎo)值，治療結(jié)束時(shí)TEPD氯化物電導(dǎo)值-6.0mV的患者內(nèi)，該TEPD氯化物電導(dǎo)改善就是-7.0mV，代表一種氯化物電導(dǎo)反應(yīng)。,虔;^r五尸D歲化務(wù)密^值攻善！i,遂^力殆^》比。如上所述，通常認(rèn)為氯化物電導(dǎo)等于或電性低于-5.0mV為正常范圍。這樣，患者的基線TEPD氯化物電導(dǎo)值為+1.0mV，就認(rèn)為該患者具有異常值，因?yàn)樵撝惦娦愿哂?5.0mV。如果，在治療結(jié)束時(shí)，該患者的TEPD氯化物電導(dǎo)值改善為-6.0mV，那么就代表改善到正常范圍內(nèi)，因?yàn)樵摳纳浦档碾娦缘陀?5.0mV?；诨颊咝詣e，年齡和身高，研究開始時(shí)的平均FEV!值是66。/。正常，研究開始時(shí)的平均FVC值是80%正常。進(jìn)行分析的15名患者中有14名患者呼吸道移生綠膿假單胞菌，這是一種在嚢性纖維化患者中常見的細(xì)菌感染，可導(dǎo)致重癥肺炎。另外，這15名患者中的14名患者胰功能不全，需要進(jìn)行慢性胰酶替代治療?；颊唧w重輕，研究開始時(shí)的平均體重是58.3kg。表5顯示5名患者的TEPD結(jié)果。對(duì)于每次測量來說，結(jié)果是在最佳鼻孔和兩鼻孔平均值基礎(chǔ)之上呈現(xiàn)的。從歷史觀點(diǎn)來說，通常的TEPD試驗(yàn)結(jié)果都是在最佳鼻孔基礎(chǔ)之上呈現(xiàn)的。但是，最近囊性纖維化療法發(fā)展網(wǎng)(CysticFibrosisTherapeuticsDevelopmentNetwork)提供的指導(dǎo)方案建議TEPD結(jié)果應(yīng)該以兩個(gè)基礎(chǔ)呈現(xiàn)。對(duì)患不同類型CFTR基因無義突變的患者內(nèi)的TEPD氯化物電導(dǎo)的改善進(jìn)行了標(biāo)注。表5TEPD結(jié)果低劑量水平高劑量水平結(jié)果p-值結(jié)果P-值TEPD氯化物電導(dǎo)平均變化最^圭鼻孑L...................................-9.0mV<0.001-6.4mV0.010兩鼻孔平均................................-6.7mV<0.001-4.4mV0.023TEPD氯化物電導(dǎo)改善^-5mV的患者數(shù)量最佳鼻孔....................................9/15(60%)<0.0018/15(53%)<0.001兩鼻孔平均................................6/15(40%)0.0057/15(47%)<0.001TEPD氯化物電導(dǎo)改善為正常的患者數(shù)量最佳鼻孔8/15(53%)0.0088/15(53%)0.008兩鼻孔平均6/15(40%)0.0327/15(47%)0.016統(tǒng)計(jì)上的低和高3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-笨甲酸劑量水平的治療效果并不顯箸，這說明進(jìn)一步加大劑量可能并不需要，甚至較低劑量的3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸就能有效提高TEPD氯化物電導(dǎo)。還觀察到了二級(jí)技術(shù)指標(biāo)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著結(jié)果和陽性趨勢(shì)。具體地說，雖然該試驗(yàn)對(duì)于檢測二級(jí)技術(shù)指標(biāo)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著變化并不十分有力，但觀察到了從研究開始至較高劑量治療循環(huán)結(jié)束時(shí)，患者平均FEV。FVC和體重統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著改善。表6顯示了該結(jié)果。由于肺功能變化，所以將一名患者除去，因?yàn)樵摶颊咴诟邉┝恐委熝h(huán)結(jié)束時(shí)無法進(jìn)行肺功能測量。表6技術(shù)指標(biāo)研究開高劑量治療結(jié)變化P-值肺功能(根據(jù)性別、年齡和身高，以正常百分比表示)<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>另外，雖然患者癥狀變化沒有通過利用基本生活條件調(diào)查表來進(jìn)行正式測量，但試驗(yàn)觀察員還是需要詢問患者囊性纖維化癥狀的變化。在包括在該臨時(shí)分析的15名患者中，據(jù)報(bào)道有6名健康全面改善，據(jù)報(bào)道有6名咳嗽減弱，據(jù)^艮道有IO名粘液濃度降低且粘液易于清除。5.11實(shí)施例ll:采用免疫熒光法和Western印跡檢測抗肌營養(yǎng)不良蛋白(dystrophin)、肌糖蛋白(sarcoglycan)、肌營養(yǎng)不良蛋白聚糖表達(dá)治療前，在局部麻醉和有意識(shí)的鎮(zhèn)靜狀態(tài)下(在某些情況下，可能需要全身麻醉)，對(duì)來自一只腳的EDB肌肉和上層皮膚進(jìn)行活檢，在治療最后一天對(duì)來自另一只腳的EDB肌肉和上層皮膚進(jìn)行活檢。活檢步驟按照標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)進(jìn)行(Stedman,2000，HumanGeneTherapy11:777-90)。在該步驟中，將整個(gè)肌腹(只要可能)去掉。在治療前采集活檢時(shí)，將所述肌肉標(biāo)本分成至少3份段片，治療最后一天采集的活檢標(biāo)本分成至少2份段片。將活檢標(biāo)本置于沾有林格氏生理鹽水的telfa紗布海綿之上。在低倍數(shù)的立體解剖顯微鏡下觀察該活檢標(biāo)本，以便建立纖維取向。然后，只要可能就用一鋒利手術(shù)刀沿一截面橫切(垂直于纖維方向)，靜止2分鐘讓痙攣停止。隨后，將該樣品冷凍在液氮冷卻的異戊烷內(nèi)，轉(zhuǎn)移至液氮儲(chǔ)存庫并保持距離液/汽界面上方1英寸長達(dá)2分鐘，使其緩慢冷卻，在浸泡在液氮中前讓異戊烷蒸發(fā)，用預(yù)冷(在液氮中和儲(chǔ)存在干冰上)的箔包裹，該箔用研究編號(hào)、現(xiàn)場編號(hào)、患者編號(hào)、日期、患者英文縮寫、和足側(cè)(右腳或左腳)進(jìn)行標(biāo)記。所有樣品容器都清楚地以能鑒定出對(duì)象和采集日期的方式進(jìn)行標(biāo)識(shí)。標(biāo)簽固定在樣品容器中的方式能防止標(biāo)簽脫落。程序完成后，為了進(jìn)行分析/培養(yǎng)/重要觀察，立刻發(fā)送樣品。為了檢測抗肌營養(yǎng)不良蛋白，使用3種可識(shí)別該蛋白C-端、N-端、和棒狀結(jié)構(gòu)域的商購抗體。為了檢測肌糖蛋白和肌營養(yǎng)不良蛋白聚糖復(fù)合物，當(dāng)可能時(shí)使用針對(duì)a-、|3-、y-和S-月幾糖蛋白，和P-肌營養(yǎng)不良蛋白聚糖的商購抗體。分析中使用落射熒光(Epifluorescence)顯《鼓鏡；在熒光強(qiáng)度對(duì)比正常肌肉標(biāo)本正?；?，用CCD相機(jī)捕獲圖像。數(shù)字化儲(chǔ)存影像，保存用于今后觀察和完成研究后進(jìn)行最終評(píng)價(jià)。還可以用同樣的抗<本，對(duì)組織進(jìn)行加工，以便用Western印跡檢測抗肌營養(yǎng)不良蛋白，肌糖蛋白和(3-肌營養(yǎng)不良蛋白聚糖。捕獲顯微圖像，保存用于今后觀察和完成研究后進(jìn)行最終評(píng)價(jià)。剩下的肌肉組織樣本保存作參與DMD的mRNA和蛋白的驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)。用免疫染色和Western印跡進(jìn)行蛋白檢測。一般地，對(duì)DMD對(duì)象進(jìn)行肌肉活檢，并將其作為研究情況下的診斷成分和治療效力的量度標(biāo)準(zhǔn)。選擇EDB是因?yàn)樗皇侨粘；顒?dòng)的必需肌肉，因此取樣該肌肉不會(huì)使對(duì)象產(chǎn)生不良的功能結(jié)果。因?yàn)樗苌俦皇褂?，因此EDB肌肉就不太可能表現(xiàn)出大幅的肌肉纖維化替換，從而可作為用于檢測抗肌營養(yǎng)不良蛋白產(chǎn)生的適合組織。EDB肌肉樣本提供了另外的實(shí)際優(yōu)勢(shì)，因?yàn)樗?艮容易識(shí)別，可以在局部麻醉下進(jìn)行解剖，并提供足夠量的組織進(jìn)行所需分析。免疫熒光和Western印跡是對(duì)肌肉活檢標(biāo)本進(jìn)行的常*1測試，從而可以確定完整長度的;R肌營養(yǎng)不良蛋白的存在與否。i人為缺失抗肌營養(yǎng)不良蛋白就確診為DMD。認(rèn)為抗肌營養(yǎng)不良蛋白復(fù)位，定位至肌肉膜，是臨床前和臨床藥理活性的直接測量方法(Barton-Davis,1999,/.C"w./賺s",」:375-81;Politano,2003,勿flAfyo/.22(7」:15-21)。5.12實(shí)施例12:上下肢肌測量法(myometry)按照下述標(biāo)準(zhǔn)化步驟，用手提式肌收縮計(jì)進(jìn)行上下肢肌測量(Beenakker,2001,臉腳m露w/.D/，d11(5):441-6;Hyde,2001,A^wrawtwct//.D/soW.7/(2,165-70)。建議(取決于對(duì)象的基本功能狀態(tài))評(píng)估的肌肉組織包括髖關(guān)節(jié)外展肌、膝關(guān)節(jié)伸肌、肘屈肌和伸肌、和手部握力。可以做兩側(cè)評(píng)估，對(duì)各側(cè)各肌肉組的三次測量進(jìn)行記錄。對(duì)治療前，治療的第二至最后一天，治療后的后續(xù)時(shí)期的這些參數(shù)進(jìn)行監(jiān)測。在治療前及治療期間，在肌肉活檢之前進(jìn)行肌測量程序。使用手提式測力計(jì)的肌測量評(píng)估是一種測量動(dòng)態(tài)和非動(dòng)態(tài)對(duì)象肌肉力量靈敏度高且可重現(xiàn)的方法(Beenakker，2001,iVewrami^cw/.Dfsorc/."^):441-6;Hyde,2001，A^wow"Mw/Z)&wY/."(7力165-70)。肌營養(yǎng)不良患者的測量評(píng)估者間信度(Inter-raterreliability)很高(Stuberg，1988,尸/zj^.TTer.198868(6):977-82;Hyde,2001,7Vewowwscw/.D&oM.7〃"165-70)。與人工肌肉力量測試相比，肌測量法是一種較靈敏且復(fù)雜性較低的肌肉功能測定法(McDonald,1995，4m.P/^s.Mec/.We/zaW/.(增刊5):S70-92)。評(píng)估人員(如醫(yī)師或物理治療師)可以很容易的進(jìn)行試驗(yàn)。5.13實(shí)施例13:定時(shí)功能試驗(yàn)定時(shí)功能試驗(yàn)包括從平躺姿勢(shì)到站立所用時(shí)間、步行io米所用時(shí)間、爬登4節(jié)標(biāo)準(zhǔn)尺寸梯級(jí)所用時(shí)間(Mendell,1989,TV.iWed320(24):1592-7;Griggs,1991,^rc/i.JVewn/.48(4):383-8)。在進(jìn)行治療前，治療第二天至最后一天，治療后的后續(xù)時(shí)期對(duì)這些參數(shù)進(jìn)行監(jiān)測。在治療前及治療期間，在進(jìn)行肌肉活檢前進(jìn)行定時(shí)功能測試。這些試驗(yàn)(從平躺姿勢(shì)到站立所用時(shí)間、步行10米所用時(shí)間、和爬登4節(jié)標(biāo)準(zhǔn)尺寸梯級(jí)所用時(shí)間)為動(dòng)態(tài)對(duì)象的功能能力提供另一種測量。該試驗(yàn)可再現(xiàn)，容易實(shí)施，易于管理，且有文件記載對(duì)用類固醇的治療干預(yù)有反應(yīng)(Mendell,1989,TV.丄MW.320卩":1592-7;Griggs,1991，Zrc/z.臉歸/.4柳:383-8)。5.14實(shí)施例14:血清CK水平血清CK活性是利用商購的NADH-聯(lián)動(dòng)力學(xué)檢測進(jìn)行評(píng)定的(DiagnosticChemicalsLtd"Oxford,CT)。血清CK水平是在治療前、治療期間的第1天(第一劑前)、第7天、第14天、第21天、和第27天、和治療后的第42天和第56天進(jìn)行測定的。杜氏肌營養(yǎng)不良癥中的血清CK增高，因此是該疾病一種非常容易測量的診斷標(biāo)記，且可作為藥物藥理活性的潛在生物標(biāo)記(Menddl等，1989，7Vew/.MM.32592-1597)。血清CK為全身肌肉完整性提供了一種量度。DMD患者血清中的該酶濃度增高50至100倍，對(duì)其水平進(jìn)行測量可用于該疾病的早期i會(huì)斷(Worton，Themusculardystrophies,In:ScriverC.R.,BeaudetA.L.,SlyW.S.:ValleD,eds.Themetabolicandmolecularbasisofinheriteddisease.她ed.Vol.4.NewYork:McGraw-Hill,2001:5493-523)。對(duì)血清CK水平進(jìn)行測量可以監(jiān)測該疾病的進(jìn)展并作為一種肌肉損害標(biāo)記物。雖然運(yùn)動(dòng)誘發(fā)的變化會(huì)導(dǎo)致變異性(Politano,2003,Jcto.M戶/.15-21)，但該標(biāo)記物有優(yōu)勢(shì)，因?yàn)樗强梢院苋菀椎亍⒅貜?fù)地和頻繁地評(píng)估廣泛使用的和可靠的檢測。以前的臨床研究顯示，血清CK降低與用類固醇治療時(shí)肌肉強(qiáng)度改善相一致(Reitter,1995，5ra/"Z)ev./7Sw/p/:39-43)。5.15實(shí)施例15:皮纖維原細(xì)胞和肌細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)來自患者的肌肉組織和皮膚進(jìn)行研究，以確定在來自該患者的主要肌肉培養(yǎng)物中是否與體內(nèi)產(chǎn)生抗肌營養(yǎng)不良蛋白相一致產(chǎn)生抗肌營養(yǎng)不良蛋白。當(dāng)在體外通過用Myo-D-生成表達(dá)構(gòu)建體(Wang,2001,Deve/0;7we",4623-33)轉(zhuǎn)染而分化成肌細(xì)胞時(shí)，這些試驗(yàn)會(huì)評(píng)價(jià)來自患者的皮纖維原細(xì)胞是否會(huì)證明抗肌營養(yǎng)不良蛋白產(chǎn)生是對(duì)治療有反應(yīng)。皮細(xì)胞反應(yīng)與臨床活性之間的相關(guān)性可以提供一種簡單易得的預(yù)測性試驗(yàn)，該試驗(yàn)可以選出用于治療的未來患者或用于篩選出治療DMD的新制劑。按如下方式培養(yǎng)細(xì)胞。在運(yùn)輸過程中，活檢材料儲(chǔ)存在人增殖培養(yǎng)基(或PBS)中，如果需要再置于冰上較長時(shí)間。如果該組織在24小時(shí)內(nèi)不需要做好準(zhǔn)備，則可將該材料冷凍在含10%DMSO的人增殖培養(yǎng)基中，并儲(chǔ)存在液氮(或干冰)中。當(dāng)該組織需要做準(zhǔn)備調(diào)配成肌細(xì)胞培養(yǎng)物時(shí)，將活檢材料用PBS洗凈。PBS可保持該組織足夠濕度地加入到培養(yǎng)皿中。將該活檢材料用保險(xiǎn)刀片徹底切碎，獲得幾乎均一的懸液。每克組織加入約2毫升的膠原酶/分散酶/CaCl2溶液，繼續(xù)絞碎幾分鐘(如5X5X5mm的肌肉活檢用1毫升的酶溶液)。將懸液轉(zhuǎn)移至無菌試管，37。C下水浴蜉育，直到混合物成為良好漿液(如約20至30分鐘)。孵育時(shí)，再用吸量管上下吸取幾次使懸液均一。如果需要，可以通過用注射器上下吸取來進(jìn)行額外的重懸浮循環(huán)。將8mL的人增殖培養(yǎng)基加到該懸液內(nèi)混合。該混合物1200rpm離心10分鐘。細(xì)胞沉淀物用3ml的人增殖培養(yǎng)基重懸浮。將細(xì)胞植入用膠原包被的6孔平板中的一孔內(nèi)，或根據(jù)材料的量，植入T25膠原包被的培養(yǎng)瓶內(nèi)。細(xì)胞于37t，5%<:02培育48小時(shí)。移去未吸附細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移至膠原包被的另一孔內(nèi)(作備用)。向第一孔內(nèi)加入新鮮的增殖培養(yǎng)基(3ml)。培育第一孔內(nèi)的細(xì)胞匯合，并培育獲得兩瓶匯合的T75培養(yǎng)瓶。為了便于儲(chǔ)存，可將細(xì)胞從T75培養(yǎng)瓶冷凍入4個(gè)含1ml冷凍培養(yǎng)基的冷凍管內(nèi)。培養(yǎng)物的肌原細(xì)胞含量通過進(jìn)行結(jié)蛋白染色來確定。如果結(jié)蛋白陽性細(xì)胞百分比太低，那就需要預(yù)植該培養(yǎng)物。5.16實(shí)施例16:3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2，41噁二唑-3-基l-苯甲酸口服治療杜氏肌營養(yǎng)不良癥的II期研究患者必需滿足下述全部條件才有資格參與研究1.在5歲呈現(xiàn)的臨床表型基礎(chǔ)上，診斷杜氏肌營養(yǎng)不良癥(DMD),呈現(xiàn)臨床表型是血清CK增高，肌肉活檢中缺失抗肌營養(yǎng)不良蛋白(用識(shí)別肌營養(yǎng)不良蛋白蛋白質(zhì)C末端的抗體，肌纖膜染色陰性)；2.在抗肌營養(yǎng)不良蛋白基因中存在無義突變；3.有文件證明已經(jīng)進(jìn)行了抗肌營養(yǎng)不良蛋白基因測序或，如還沒進(jìn)行測序，有文件證明已送血樣為驗(yàn)證抗肌營養(yǎng)不良蛋白測序；4.兩足的EDB肌肉體檢或放射影像證據(jù)；5.具備走動(dòng)能力；6.男性；7.年齡^5歲；8.在知道有性活動(dòng)的患者中，愿意在研究藥品給藥和隨后的時(shí)間段內(nèi)，避免性交或使用阻隔或醫(yī)學(xué)方法避孕；9.愿意并有能力遵守預(yù)定的訪問、藥品給藥計(jì)劃、實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)、研究限制、和研究程序(包括肌肉活檢、肌測量和PK采樣)；10.如果年齡^18歲能夠提供書面知情同意，或如果年齡27歲提供書面知情同意(父母/監(jiān)護(hù)人同意)。如果該患者年齡<7歲，則父母/法定監(jiān)護(hù)人的單獨(dú)同意就可接受；和11.親自簽名并注明日期的知情同意文件的證據(jù)(兒童年齡^7歲還需要贊同，表明該患者/父母/法定監(jiān)護(hù)人已被告知該試驗(yàn)的將要進(jìn)4亍的全部相關(guān)方面。存在下列任何一種情況就排除病人參與研究1.事先或正存在的醫(yī)學(xué)狀況(如伴隨疾病、精神狀況、酗酒、濫用藥物)、醫(yī)療史、身體結(jié)果、ECG結(jié)果或化驗(yàn)異常，從研究人員的觀點(diǎn)看可能會(huì)影響該患者的安全，從而導(dǎo)致不太可能讓治療過程或后續(xù)工作完成，或有可能妨礙研究結(jié)果的評(píng)估；2.有充血'f生心臟衰竭的臨床癥4大禾口體征(AmericanCollegeofCardiology/AmericanHeartAssociationStageCorStageD)(Hunt,2001,J.4m.Co//.G^y/&/.3S:2101-13);3.乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎抗體檢測、或人免疫缺陷病毒(HIV)檢測陽性；4.血紅蛋白<10g/dL;5.血清白蛋白<2.5g/dL;6.異常GGT或總膽紅素(〉實(shí)驗(yàn)室正常上限)；7.腎功能異常(血肌酐>實(shí)驗(yàn)室正常上限1.5倍)；8.固體器官或血液移植史；9.正在進(jìn)行免疫抑制治療(除皮質(zhì)類固醇)；10.在開始研究治療前的28天內(nèi)，接觸過另一種研究藥物；11.正在參與任何其它治療性臨床試驗(yàn)；12.正在使用噻唑二嗣過氧化物酶體增殖物激活的受體y(PPAR力激動(dòng)劑，如羅格列酮(Avandia或等同物)或吡格列酮(Actos⑧或等同物)；13.在開始研究治療前的3個(gè)月內(nèi)，全身性皮質(zhì)類固醇治療改變(如治療開始；治療停止；改變類固醇劑量、日程、或類型)；或14.在開始研究治療前的3個(gè)月內(nèi)，用全身性氨基糖苷類抗生素治療。如本文所述的制劑形式提供3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸。對(duì)各治療組進(jìn)行28天的給藥治療。第一組患者以給定劑量(4-，4-，和8-mg/kg)每天三次地用3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸治療28天。如果第一組患者對(duì)該藥物有耐藥力，那么第二組患者就每天三次地接受更高劑量水平(如10-，10-,和20-mg/kg)的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸。這樣，每位患者就接受了總共84劑3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸。在28天治療結(jié)束后，每位患者接下來的28天不進(jìn)行治療。對(duì)每種劑量水平，建議每天三次間隔6-，6-和12-小時(shí)(士30分鐘)服用3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸。最好是在餐后30分鐘內(nèi)(如早餐后的上午7:00AM、午餐后的下午1:00、晚餐后的晚上7:00)服用各劑量。雖然應(yīng)認(rèn)識(shí)到，根據(jù)門診患者情況，給藥方案會(huì)發(fā)生變化，但建議處方藥的方案(包括給藥間隔和給藥方案與進(jìn)餐的關(guān)系)應(yīng)密切地跟隨PK樣本采集的時(shí)間。利用前述步驟來評(píng)價(jià)臨床技術(shù)指標(biāo)。應(yīng)理解，雖然本文描述的本發(fā)明的具體實(shí)施方案是用于闡釋，但本文描述的發(fā)明并不限于本文所公開的特定實(shí)施方案的范圍。這些實(shí)施方案意欲說明本發(fā)明的多個(gè)方面。任何等同的實(shí)施方案都落入本發(fā)明的范圍內(nèi)。事實(shí)上，除本文所給出和描述的那些內(nèi)容之外，從前述描述對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種改變對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說都是顯而易見的。權(quán)利要求1、治療與無義突變相關(guān)疾病的方法，該方法包括以每天三次劑量給有此需要的患者施用有效量的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。2、如權(quán)利要求1所述的方法，其中第一次和第二次劑量的量是相同的。3、如權(quán)利要求1所述的方法，其中第三次劑量的量是第一次劑量的兩倍。4、如權(quán)利要求l所述的方法，其中三次劑量的量相同。5、如權(quán)利要求l所述的方法，其中施用的第一次劑量是4mg/kg，第二次劑量是4mg/kg，第三次劑量是8mg/kg。6、如權(quán)利要求l所述的方法，其中施用的第一次劑量是7mg/kg，第二次劑量是7mg/kg,第三次劑量是14mg/kg。7、如權(quán)利要求l所述的方法，施用的第一次劑量是10mg/kg，第二次劑量是10mg/kg，第三次劑量是20mg/kg。8、如權(quán)利要求1所述的方法，其中第二次劑量是在第一次劑量施用約6小時(shí)后施用的。9、如權(quán)利要求1所述的方法，其中第三次劑量是在第二次劑量施用約6小時(shí)后施用的。10、如權(quán)利要求l所述的方法，其中第一次劑量是在前一天施用第三次劑量約12小時(shí)后施用的。11、如權(quán)利要求l所述的方法，其中將3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物連續(xù)給藥28天。12、如權(quán)利要求l所述的方法，其中將3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物連續(xù)給藥14天。13、如權(quán)利要求l所述的方法，其中將3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物連續(xù)施用14天，隨后的14天不施用3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，隨后連續(xù)施用3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物14天。14、如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述劑量口服施用。15、如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述與無義突變相關(guān)的疾病是遺傳病、癌癥、自身免疫性疾病、血液病、膠原病、糖尿病、神經(jīng)變性疾病、增生性疾病、心血管疾病、月，病、炎性疾病或中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。16、如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述與無義突變相關(guān)的疾病是囊性纖維化或杜氏肌營養(yǎng)不良癥。17、如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述患者是人。18、預(yù)防或控制與無義突變相關(guān)的疾病的方法，該方法包括以每天三次劑量給有此需要的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。19、單位劑型，其包含125mg至1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。20、如權(quán)利要求19所述的單位劑型，其包含250mg至1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。21、如權(quán)利要求19所述的單位劑型，其包含125mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。22、如權(quán)利要求19所述的單位劑型，其包含250mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。23、如權(quán)利要求19所述的單位劑型，其包含1000mg的3-[5-(2-氟-苯基)-[l，2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。24、如權(quán)利要求19所述的單位劑型，其中所述劑型適合口服給藥。25、讓患者的3-[5-(2-氟-苯基)-[l,2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物的血漿濃度保持高于約2pg/ml至少約12小時(shí)的方法，該方法包括給有此需要的患者施用3-[5-(2-氟-苯基)-[1,2,4]噁二唑-3-基]-苯甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。全文摘要本發(fā)明涉及使用1，2，4-噁二唑苯甲酸化合物治療或預(yù)防與無義突變有關(guān)的疾病的特定劑量和給藥方案。具體地說，本發(fā)明涉及在患與無義突變有關(guān)的疾病的哺乳動(dòng)物中，使用3-[5-(2-氟-苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-苯甲酸的特定劑量和給藥方案。文檔編號(hào)A61K31/4245GK101193632SQ200680020100公開日2008年6月4日申請(qǐng)日期2006年4月6日優(yōu)先權(quán)日2005年4月8日發(fā)明者薩米特·海拉華特,藍(lán)登·米勒申請(qǐng)人:Ptc醫(yī)療公司