專利名稱：20(s)－原人參二醇糖基化衍生物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域，具體的說，涉及一種20(s)-原人參二醇糖基化衍生物及其制備方法和應用。
背景技術：
人參是公認的滋補強身的貴重中藥，人參的主要有效成分是人參皂苷。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的人參皂苷有60種，人參皂苷根據(jù)皂苷元可分為達瑪烷型人參皂苷和齊墩果烷皂苷。達瑪烷型人參皂苷是人參、三七、和西洋參等藥材中的重要活性成分，近十幾年來國內(nèi)外對其藥效進行了很多的研究，取得了很大的進展。達瑪烷型人參皂苷屬于四環(huán)三萜，其皂苷元主要有20(S)-原人參二醇和20(S)-原人參三醇兩種，藥材中的人參皂苷主要是以葡萄糖為結構單元的三糖或四糖的多糖鏈皂苷，也有部分以葡萄糖為結構單元的單糖鏈皂苷，本發(fā)明所要求的20(S)-原人參二醇糖基化衍生物屬于3位、12位以及3位、12位均糖基修飾的20(S)-原人參二醇類皂甙，在結構上類似天然人參皂苷，但是為天然所不存在的新化合物。
有關一些20(S)-人參皂苷文獻報道的制備方法，主要有以下幾種(1)酶解法(中國專利CN1105781C；金東史等，《大連輕工業(yè)院學報》，2001，20(2)99-104)。采用皂甙-葡萄糖苷酶或-阿拉伯糖苷酶等皂甙酶，對于人參屬的所有種類參的人參皂甙進行水解處理，使皂甙分子甙元上的部分糖基被水解掉，從而得到Rh2。
這種方法雖然是利用了生物技術，但所需的皂甙糖苷酶的培養(yǎng)時間較長，水解后得到的也多是混合皂甙，故Rh2單體的得率不高，此方法的成本較高。
(2)以人參皂苷二醇組作為半合成原料合成20(S)-人參皂苷Rh2a.中國專利CN1091448C將原人參二醇組分皂苷的水溶液與堿金屬低醇化物或金屬氫氧化物的醇溶液混合，或?qū)⒃藚⒍冀M分皂苷的低級醇溶液與堿金屬醇化物的低級醇溶液混合，于高溫、高壓下反應后用低級醇萃取，再經(jīng)低壓硅膠柱層析法層析純化，收集洗脫物從甲醇/水中重結晶，得到20(S)-人參皂苷Rh2。
該方法主要缺陷在于起始原料需要原人參二醇組皂苷，且反應需要在高溫高壓下進行，條件比較苛刻，運行成本較高，且目標產(chǎn)物20(S)-人參皂苷Rh2得率不高。
b.韓國人參煙草研究所公開了從人參成分中制備20(R&S)-人參皂苷Rh2的方法，其特征在于首先得到原人參二醇皂苷組分，再經(jīng)酸水解處理得20(R&S)-人參皂苷Rg3，然后將人參皂苷Rg3處理得人參皂苷Rh2。
該方法的起始原料也需要原人參二醇組皂苷，使得反應步驟較繁瑣，原料損失較大，操作麻煩，從而導致成本增加，且難以提高產(chǎn)率，而水解后得到的是(R&S)構型的混合皂甙。
(3)以原人參二醇作為半合成原料合成20(S)-人參皂苷Rh2a.日本專利特開平8-208688，1996年該方法線性合成路線為六步，且在糖苷化反應中使用了當量的碳酸銀作為催化劑，價格貴重，使得該方法成本較高，且該催化劑的反應產(chǎn)物立體選擇性不好。故從成本和收率兩方面來考慮，均不利于大規(guī)模生產(chǎn)。
b.韓國人參煙草研究所公開了用強堿的醇溶液水解人參葉和根的干燥粉末，得到20(S)-人參皂甙甙元，然后再在碳酸銀等催化劑存在下與葡萄糖縮合以制備20(S)-人參皂苷Rh2。
該方法也是使用了碳酸銀作為催化劑，價格貴重，使該方法成本較高，且使用碳酸銀做催化劑的反應產(chǎn)物為α、β兩種糖苷鍵構型的混合物。
c.Atopkina，L.N.，Denisenko，V.A.，Novikov，V.L.，Uvarova，N.I.，CHNCA8，Chem.Nat.Compd.(Engl.Transl.)，1986，22(3)，279-288Atopkina，L.N.等在Chem.Nat.Compd.(天然產(chǎn)物化學)上報道了原人參二醇和乙酰溴代葡萄糖在氧化銀的作用下縮合以制備20(S)-人參皂苷Rh2。
該方法由于原人參二醇的12位及20位的羥基都未被保護，則很容易被葡萄糖基單取代和多取代，得到的是3位、12位及20位葡萄糖基單取代的原人參二醇和3位及12位、3位及20位葡萄糖基雙取代的原人參二醇的五種產(chǎn)物的混合物(其中3位葡萄糖基單取代的原人參二醇含量僅為27％)，造成目標產(chǎn)物20(S)-人參皂苷Rh2難以分離，得率很低。
d.中國專利ZL2004100532692首先選擇性保護原人參二醇，得到單取代的原人參二醇，再由葡萄糖基給體和單取代的原人參二醇在路易斯酸的催化作用下進行糖苷化反應，脫去保護基，經(jīng)分離純化得到20(S)-人參皂苷Rh2。
該方法反應條件溫和，成本低，反應產(chǎn)物立體選擇性高，產(chǎn)率高，純度高，因此本發(fā)明合成方法是適宜于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)的方法。
本發(fā)明所要求的是20(S)-原人參二醇的3位、12位以及3位和12位均用鼠李糖基、阿拉伯糖基、木糖基、半乳糖基、纖維二糖基、葡萄糖基等糖基修飾的20(S)-原人參二醇糖基化衍生物。這些20(S)-原人參二醇糖基化衍生物的研究還未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種20(s)-原人參二醇糖基化衍生物。
本發(fā)明的目的還提供一種20(s)-原人參二醇糖基化衍生物的制備方法。
本發(fā)明的目的還提供一種20(s)-原人參二醇糖基化衍生物在制備抗腫瘤藥物方面的應用。
為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了一種20(s)-原人參二醇糖基化衍生物，其結構通式如下所示 其中R1優(yōu)選為氫、結構式為 的鼠李糖基、結構式為 的吡喃型的阿拉伯糖基、結構式為 的吡喃型的木糖基、結構式為 的吡喃型的半乳糖基、結構式為 的纖維二糖基或結構式為 的葡萄糖基。
R優(yōu)選為氫、結構式為 的鼠李糖基、結構式為 的吡喃型的阿拉伯糖基、結構式為 的吡喃型的木糖基、結構式為 的吡喃型的半乳糖基、結構式為 的纖維二糖基或結構式為 的葡萄糖基。
并且，當R1為氫或結構式為 的葡萄糖基時，R不為氫或結構式為 的葡萄糖基。
上述結構式中的R2優(yōu)選為氫、C2-C6的烷基取代酰基或苯甲?；?br> 本發(fā)明還提供了一種20(S)-原人參二醇的糖基化衍生物的制備方法，包括如下步驟a)選擇性保護20(S)-原人參二醇，得到結構式為下式的單取代的20(S)-原人參二醇， 式中R3優(yōu)選為芳香烴類酰基、烷烴取代的芳香烴類?；駽3-C6的烷基取代酰基，在反應中20(S)-原人參二醇和含保護基團反應物的摩爾比優(yōu)選為1∶3.0-5.0，反應溫度優(yōu)選為-10-25℃，反應時間優(yōu)選為1.5-12小時，反應有機溶劑優(yōu)選為C2-C4的氯代烷烴、三乙胺、吡啶或N，N-二甲基甲酰胺中一種或一種以上的混合物，用量優(yōu)選為1mol原人參二醇用6.5-10升有機溶劑。
b)單取代的20(S)-原人參二醇、糖基給體、路易斯酸催化劑和分子篩在惰性氣體保護下，在有機溶劑中進行糖苷化反應，其中單取代的20(S)-原人參二醇、糖基給體和路易斯酸催化劑的摩爾比優(yōu)選為1∶0.8-5.0∶0.01-1.0，單取代的20(S)-原人參二醇和分子篩的重量比優(yōu)選為1∶0.1-7.0，反應溫度優(yōu)選為-20-40℃，反應時間優(yōu)選為0.5-4.5小時，反應溶劑用量優(yōu)選為1mol單取代的原人參二醇用4-12升有機溶劑，反應結束時加入淬滅劑淬滅反應，產(chǎn)物用柱層析或重結晶純化。
c)將步驟b)中純化后的產(chǎn)物和一價堿金屬化物在極性溶劑中進行脫保護基反應生成20(S)-原人參二醇的3位糖基化衍生物。其中，步驟b)純化后的產(chǎn)物和一價堿金屬化物的摩爾比優(yōu)選為1∶4-10，反應溫度優(yōu)選為40-100℃，反應時間優(yōu)選為10-18小時，極性溶劑的用量優(yōu)選為1mol步驟b)純化后的產(chǎn)物用10-30升極性溶劑，本步生成的產(chǎn)物經(jīng)重結晶純化。
本發(fā)明還提供了一種20(S)-原人參二醇的糖基化衍生物的制備方法，包括如下步驟d)20(S)-原人參二醇、糖基給體、路易斯酸催化劑和分子篩在惰性氣體保護下，在有機溶劑中進行選擇性糖苷化反應，選擇性得到20(S)-原人參二醇的12位單糖基化而3位羥基裸露的產(chǎn)物。其中20(S)-原人參二醇、糖基給體和路易斯酸催化劑的摩爾比優(yōu)選為1∶0.6-1.5∶0.01-1.0，20(S)-原人參二醇和分子篩的重量比優(yōu)選為1∶0.1-7.0，反應溫度優(yōu)選為-50-0℃，反應時間優(yōu)選為0.5-4.5小時，反應溶劑用量優(yōu)選為1mol 20(S)-原人參二醇用4-12升有機溶劑，反應結束時加入淬滅劑淬滅反應，產(chǎn)物用柱層析或重結晶純化。
e)將上述步驟d)中純化后的產(chǎn)物和一價堿金屬化物在極性溶劑中進行脫?；Ｗo基反應生成20(S)-原人參二醇的12位糖基化衍生物。其中，純化后的產(chǎn)物和一價堿金屬化物的摩爾比優(yōu)選為1∶4-10，反應溫度優(yōu)選為40-100℃，反應時間優(yōu)選為10-18小時，極性溶劑的用量優(yōu)選為1mol純化后的反應物用10-30升極性溶劑，生成的產(chǎn)物經(jīng)重結晶純化。
步驟e)中脫酰基保護基反應是除去糖基給體中的C2-C6的烷基取代?；虮郊柞；?。
本發(fā)明還提供了一種20(S)-原人參二醇的糖基化衍生物的制備方法，包括如下步驟f)20(S)-原人參二醇、糖基給體、路易斯酸催化劑和分子篩在惰性氣體保護下，在有機溶劑中進行選擇性糖苷化反應，選擇性得到20(S)-原人參二醇的12位單糖基化而3位羥基裸露的產(chǎn)物，其中20(S)-原人參二醇、糖基給體和路易斯酸催化劑的摩爾比優(yōu)選為1∶0.6-1.5∶0.01-1.0，20(S)-原人參二醇和分子篩的重量比優(yōu)選為1∶0.1-7.0，反應溫度優(yōu)選為-50-0℃，反應時間優(yōu)選為0.5-4.5小時，反應溶劑用量優(yōu)選為1mol 20(S)-原人參二醇用4-12升有機溶劑，反應結束時加入淬滅劑淬滅反應，產(chǎn)物用柱層析或重結晶純化。
g)將上述步驟f)中純化后的產(chǎn)物與糖基給體、路易斯酸催化劑和分子篩在惰性氣體保護下，在有機溶劑中進行糖苷化反應，純化后的產(chǎn)物、糖基給體和路易斯酸催化劑的摩爾比是1∶1.0-2.0∶0.01-1.0，純化后的產(chǎn)物和分子篩的重量比為1∶0.1-7.0，反應溫度是-20-50℃，反應時間是0.5-4.5小時，反應溶劑用量是1mol純化后的產(chǎn)物用4-12升有機溶劑，反應結束時加入淬滅劑淬滅反應，產(chǎn)物用柱層析或重結晶純化；h)將上述步驟g)中純化后產(chǎn)物和一價堿金屬化物在極性溶劑中進行脫酰基保護基反應生成20(S)-原人參二醇的3和12位糖基化衍生物，其中，純化后的反應物和一價堿金屬化物的摩爾比是1∶4-10，反應溫度是40-100℃，反應時間是10-18小時，極性溶劑的用量是1mol純化后的反應物用10-30升極性溶劑，生成的產(chǎn)物經(jīng)重結晶純化。
步驟h)中脫?；Ｗo基反應是除去糖基給體中的C2-C6的烷基取代?；虮郊柞；?。
所述糖基給體是結構式為 的鼠李糖基給體、結構式為 的吡喃型的阿拉伯糖基給體、結構式為 的吡喃型的木糖基給體、結構式為 的吡喃型的半乳糖基給體、結構式為 的纖維二糖基給體或結構式為 的葡萄糖基給體；R4是C2-C6的烷基取代?；虮郊柞；?；X為OC(NH)CCl3或SEt或Br。
所述路易斯酸催化劑優(yōu)選為C3-C9的鹵代酰胺、C1-C6的氟代烴基磺酸、C2-C8的硅基氟代烴基磺酸酯、C1-C6的氟代烴基磺酸銀、三氟化硼-乙醚絡合物或三氟化硼-乙醚混合物。
所述的惰性保護氣體優(yōu)選為氮氣、氬氣或氦氣。
所述糖苷化反應中的有機溶劑優(yōu)選為C2-C4的氯代烷烴或甲苯。
所述淬滅劑優(yōu)選為三甲胺、三乙胺或硫代硫酸鈉。
所述的分子篩優(yōu)選為3-5型硅鋁酸鹽分子篩。
柱層析所用的填充劑優(yōu)選為硅膠、氧化鋁或大孔樹脂。
所述柱層析純化中洗脫用的溶劑優(yōu)選為石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲醇或環(huán)己烷中一種或多種的混合物。
所述一價堿金屬化物優(yōu)選為氫氧化鈉、甲醇鈉、氫氧化鉀或氫氧化鋰。
所述脫保護基反應中的極性溶劑優(yōu)選為四氫呋喃、甲醇、二氯甲烷、乙醇、水中的一種或多種的混合物。
所述重結晶純化中的溶劑優(yōu)選為三氯甲烷、C1-C4的烷基醇、乙酸乙酯、丙酮、水中一種或多種的混合物。
實驗結果表明，20(S)-原人參二醇糖基化衍生物具有良好的抗腫瘤效果。
具體實施例方式
以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
實施例1單取代的20(S)-原人參二醇 即12-特戊?；?20(S)-原人參二醇的合成。
合成反應式為 20(S)-原人參二醇(按中國發(fā)明專利CN1569882公開方法制備)40g(0.087mo1)溶于二氯甲烷(700m1)和三乙胺(85m1)的混合溶劑中，加入特戊酰氯36.5ml(0.298mol)，冷至-8℃，反應1.5h，薄層層析檢測至反應完全。加入甲醇終止反應，飽和NaCl水液洗滌，此水液用二氯甲烷提取，合并有機相，再用飽和NaCl水液洗至中性，干燥。硅膠柱過濾后濃縮，得單取代的20(S)-原人參二醇42.5g，收率89.8％，純度為99.6％。
12-特戊酰基-20(S)-原人參二醇的物化數(shù)據(jù)與中國專利ZL2004100532692中所述一致。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.28(d，1H)，3.6(m，1H)，3.2(s，1H)，2.2-1.8(m，6H)，1.72-1.38(m，14H)，1.28-1.14(m，22H)，1.1(s，3H)，0.98-0.72(m，9H)。
實施例2 20(S)-原人參二醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷 化合物(12-特戊酰基-20(S)-原人參二醇，A2)44g(0.081mol，純度99.6％)和化合物(D1)約82g(0.132mol)溶于850ml無水二氯甲烷中，加入4分子篩80g，在氬氣保護下攪拌0.5小時，滴加三氟甲磺酸三甲基硅基酯1.47ml(0.0081mol)，室溫攪拌反應0.5小時。反應結束后加入三甲胺1.2ml(0.0086mol)淬滅反應。過濾，濾液濃縮后，經(jīng)硅膠柱層析[洗脫劑石油醚與乙酸乙酯的體積比6∶1]純化，得結構式為 的白色固體，即化合物(3A’)67.5g，收率83％，HPLC測定純度為93％。
化合物(3A’)的物化數(shù)據(jù)如下1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.09-7.25(m，15H，3C6H5)，5.84(dd，1H)，5.71-5.65(m，2H)，5.19-5.16(m，1H)，5.09(s，1H)，4.85-4.78(td，1H)，4.31-4.08(m，1H)，3.24-3.17(m，1H)，1.70(s，3H)，1.62(s，3H)，1.30(d，3H)，1.22(s，9H，CH3)3CCO2-)，1.11(s，3H)，1.04(s，3H)，1.03(s，3H)，0.96(s，3H)，0.94(s，3H)，0.91(s，3H)。
脫保護基反應化合物(3A’)5.66g(0.0056mol，HPLC93％)溶解于13.5m1二氯甲烷和27ml甲醇的混合溶劑中，攪拌下滴加5.72g(50％，0.055mol)甲醇鈉10ml甲醇溶液，80℃反應10小時，薄層層析檢測，反應完畢。反應液濃縮得白色固體，用乙醇和乙酸乙酯混合溶液重結晶，得到化合物(3A)3.09g，收率91％，HPLC測定純度為99.2％。
化合物(3A)的物化數(shù)據(jù)如下ESI-MS(m/z)606.6[M]+。
1H NMR(300MHz，C5D5N)5.33(m，1H)，4.54(m，1H)，4.28-4.23(m，1H)，4.31-4.27(m，2H)，3.95-3.88(td，1H)，3.17(dd，1H)，1.65(s，3H)，1.62(s，3H)，1.42(s，3H)，0.98(s，3H)，0.95(s，3H)，0.92(s，3H)，0.82(s，3H)，0.80(s，3H)。
實施例3 20(S)-原人參二醇-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷 化合物(12-特戊?；?20(S)-原人參二醇，A2)42.5g(0.078mol，HPLC99.48％)和化合物(D2)約37.8g(0.0625mol)溶于390ml甲苯中，加入3分子篩260g，在氬氣保護下攪拌1小時，滴加三氟甲磺酸三甲基硅基酯14.16ml(0.078mol)，0℃攪拌反應4.5小時。反應結束后加入三乙胺2.0ml(0.0143mol)淬滅反應。過濾，濾液濃縮后，經(jīng)硅膠柱層析[洗脫劑石油醚與三氯甲烷的體積比4∶1]純化，得結構式為 的白色固體，即化合物(3B’)58.2g，收率75.8％，HPLC測定純度為96％。
化合物(3B’)的物化數(shù)據(jù)如下1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.08-7.25(m，15H，3C6H5)，5.78(dd，1H)，5.68-5.64(m，1H)，5.60(dd，1H)，5.18(m，1H)，4.85-4.75(m，2H)，4.28(dd，1H)，3.88(d，1H)，3.16(dd，1H)，1.69(s，3H)，1.62(s，3H)，1.20(s，9H，CH3)3CCO2-)，1.12(s，3H)，0.96(s，3H)，0.91(s，3H)，0.81(s，3H )，0.76(s，3H)，0.65(s，3H)。
脫保護基反應化合物(3B’)3.95g(0.004mol，HPLC96％)溶解于13.5ml四氫呋喃和27ml乙醇的混合溶劑中，攪拌下加0.016mol氫氧化鉀，40℃反應18小時，薄層層析檢測，反應完畢。反應液濃縮得白色固體，用乙醇和乙酸乙酯混合溶液重結晶，得到化合物(3B)2.12g，收率89.7％，HPLC測定純度為99.1％。
化合物(3B)的物化數(shù)據(jù)如下ESI-MS(m/z)644.6[M+Na]+1H NMR(300MHz，C5D5N)5.31(t，1H)，4.77(d，1H)，4.47(t，1H)，4.33-4.29(m，1H)，4.19(dd，1H)，3.94-3.79(m，2H)，3.32(dd，1H)，1.65(s，3H)，1.62(s，3H)，1.47(s，1H)，1.28(s，3H)，0.96(s，3H)，0.95(s，3H)，0.94(s，3H)，0.83(s，3H)。
實施例4 20(S)-原人參二醇-3-O-β-D-吡喃木糖苷 化合物(12-特戊?；?20(S)-原人參二醇，A2)42.5g(0.078mol，HPLC99.48％)和化合物(D3)約236.7g(0.39mol)溶于620ml四氯甲烷中，加入5分子篩125g，在氮氣保護下攪拌2.5小時，滴加三氟甲磺酸三甲基硅基酯7.08ml(0.039mol)，-20℃攪拌反應2.5小時。反應結束后加入硫代硫酸鈉0.0086mol淬滅反應。過濾，濾液濃縮后，經(jīng)硅膠柱層析[洗脫劑環(huán)己烷與石油醚的體積比1∶1]純化，得結構式為 的白色固體，即化合物(3C’)57.5g，收率74.5％，HPLC測定純度為92％。
化合物(3C’)的物化數(shù)據(jù)如下ESI-MS(m/z)990.6[M+H]+脫保護基反應化合物(3C’)3.98g(0.004mol，HPLC92％)溶解于13.5ml二氯甲烷和27ml乙醇的混合溶劑中，攪拌下0.028mol氫氧化鈉，100℃反應14小時，薄層層析檢測，反應完畢。反應液濃縮得白色固體，用乙醇和乙酸乙酯混合溶液重結晶，得到化合物(3C)2.22g，收率93.1％，HPLC測定純度為99.6％.
化合物(3C)的物化數(shù)據(jù)如下ESI-MS(m/z)644.6[M+Na]+1H NMR(300MHz，C5D5N)5.33(t，1H)，4.90(d，1H)，4.37(dd，1H)，4.22-4.11(m，2H)，4.00(t，1H)，3.95(dd，1H)，3.97-3.86(m，1H)，3.75(t，1H)，3.35(dd，1H)，1.66(s，3H)，1.64(s，3H)，1.44(s，3H)，1.32(s，3H)，1.01(s，3H)，0.99(s，3H)，0.98(s，3H)，0.85(s，3H)。
實施例5 20(S)-原人參二醇-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷
化合物(12-特戊?；?20(S)-原人參二醇，A2)42.5g(0.078mol，HPLC99.48％)和化合物(D4)約74.8g(0.112mol)溶于850ml無水二氯甲烷中，加入4分子篩80g，在氬氣保護下攪拌0.5小時，滴加三氟甲磺酸三甲基硅基酯1.43ml(0.0078mol)，室溫攪拌反應2小時。反應結束后加入三甲胺1.2ml(0.0086mol)淬滅反應。過濾，濾液濃縮后，經(jīng)硅膠柱層析[洗脫劑石油醚與乙酸乙酯的體積比5∶2]純化，得結構式為 的白色固體，即化合物(3D’)78.5g，收率89.6％，HPLC測定純度為91.94％。
化合物(3D’)的物化數(shù)據(jù)如下1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.1-7.2(m，20H，4C6H5)，5.92(t，1H)，5.86(dd，1H)，5.60(dd，1H)，5.16(t，1H)，4.82(d，2H)，4.60-4.51(m，2H)，4.32(m，1H)，3.0-3.12(dd，1H)，3.10(dd，1H)，1.70(s，3H)，1.62(s，3H)，1.22(s，9H，CH3)3CCO2-)，1.12(s，3H)，0.91(s，3H)，0.85(s，3H)，0.80(s，3H)，0.68(s，3H)，0.66(s，3H)。
脫保護基反應化合物(3D’)4.66g(0.004mol，HPLC92.8％)溶解于13.5ml二氯甲烷和27ml乙醇的混合溶劑中，攪拌下滴加4.32g(50％，0.04mol)甲醇鈉10ml甲醇溶液，80℃反應10小時，薄層層析檢測，反應完畢。反應液濃縮得白色固體，用乙醇和乙酸乙酯混合溶液重結晶，得到化合物(3D)2.13g，收率82.4％，HPLC測定純度為99.16％。
化合物(3D)的物化數(shù)據(jù)如下ESI-MS(m/z)645.3(M++Na)。
13C NMR(300MHz，C5D5N)130.73，126.30，107.54，107.53，88.75，76.84，75.45，75.43，73.14，72.93，70.95，70.28，62.45，62.44，56.37，54.77，51.68，50.38，48.56，40.0，39.64，39.12，36.95，35.85，35.14，32.03，31.32，28.13，27.07，26.84，26.80，25.81，22.98，18.43，17.68，17.02，16.74，16.37，15.82。
實施例6 20(S)-原人參二醇-12-O-α-L-吡喃鼠李糖苷 化合物20(S)-原人參二醇(A1)42.5g(0.078mol，HPLC98.48％)和化合物(D1)約46.8g(0.101mol)溶于850ml無水二氯甲烷中，加入4分子篩80g，在氬氣保護下攪拌0.5小時，降溫至-15℃，滴加三氟甲磺酸三甲基硅基酯1.43ml(0.0078mol)，攪拌反應3小時。反應結束后加入三甲胺1.2ml(0.0086mol)淬滅反應。過濾，濾液濃縮后，經(jīng)硅膠柱層析[洗脫劑石油醚與乙酸乙酯的體積比6∶1]純化，得結構式為 的白色固體，即化合物(12A’)52.4g，收率67％，HPLC測定純度為90.9％。
化合物(12A’)的物化數(shù)據(jù)如下1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.09-7.25(m，15H，3C6H5)，5.84(dd，1H)，5.71-5.65(m，2H)，5.29-5.23(m，1H)，5.21(d，1H)，4.43-4.38(m，1H)，4.26(brs，1H)，3.88-3.80(td，1H)，3.22(dd，1H)，1.71(s，3H)，1.67(s，3H)，1.37(d，3H)，1.06(s，3H)，0.98(s，3H)，0.94(s，3H)，0.91(s，3H)，0.79(s，3H)。
脫保護基反應化合物(12A’)5.66g(0.0056mol，HPLC90.9％)溶解于13.5ml二氯甲烷和27ml乙醇的混合溶劑中，攪拌下滴加6.24g(50％，0.06mol)甲醇鈉10ml甲醇溶液，60℃反應14小時，薄層層析檢測，反應完畢。反應液濃縮得白色固體，用乙醇和乙酸乙酯混合溶液重結晶，得到化合物(12A)3.12g，收率91％，HPLC測定純度為98.4％。
化合物(12A)的物化數(shù)據(jù)如下ESI-MS(m/z)629.4[M+Na+]1H NMR(300MHz，CD3OD)5.15-5.11(m，1H)，5.02(s，1H)，3.76-3.57(m，3H)，3.37-3.30(m，1H)，3.28-3.12(m，1H)，1.68(s，3H)，1.62(s，3H)，1.27(d，3H)，1.16(s，3H)，1.02(s，3H)，0.96(s，3H)，0.94(s，3H)，0.92(s，3H)，0.77(s，3H)。
實施例7、20(S)-原人參二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-12-O-α-L-吡喃鼠李糖苷 化合物(12A’)77.9g(0.0777mol，HPLC98.48％)和化合物(D6)約74.8g(0.112mol)溶于850ml無水三氯甲烷中，加入4分子篩80g，在氬氣保護下攪拌0.5小時，降溫至-5℃，滴加三氟甲磺酸三甲基硅基酯1.43ml(0.0078mol)，室溫攪拌反應0.5小時。反應結束后加入三甲胺1.2ml(0.0086mol)淬滅反應。過濾，濾液濃縮后，經(jīng)硅膠柱層析[洗脫劑石油醚與乙酸乙酯的體積比6∶1]純化，得結構式為 的白色固體，即化合物(3，12A’)78.5g，收率82.7％，HPLC測定純度為91.94％。
化合物(3，12A’)的物化數(shù)據(jù)如下1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.13-7.21(m，35H，7C6H5)，5.94-5.84(m，2H)，5.78-5.67(m，2H)，5.58-5.52(m，2H)，5.29-5.22(m，2H)，4.85(d，1H)，4.55(d，2H)，4.44-4.39(m，1H)，4.30-4.07(m，1H)，3.83-3.80(m，1H)，3.09(dd，1H)，1.70(s，3H)，1.62(s，3H)，1.12(s，3H)，0.96(s，3H)，0.91(s，3H)，0.78(s，3H)，0.66(s，3H)，0.63(s，3H)脫保護基反應化合物(3，12A’)6.47g(0.004mol，HPLC92.8％)溶解于13.5ml二氯甲烷和27ml乙醇的混合溶劑中，攪拌下滴加4.32g(50％，0.04mol)甲醇鈉10ml甲醇溶液，90℃反應16小時，薄層層析檢測，反應完畢。反應液濃縮得白色固體，用乙醇和乙酸乙酯混合溶液重結晶，得到化合物(3，12A)2.68g，收率85.4％，HPLC測定純度為99.16％。
化合物(3，12A)的物化數(shù)據(jù)如下ESI-MS(m/z)1559.3(2M+Na+)。
1H NMR(300MHz，C5D5N)5.70(s，1H)，5.39(s，1H)，5.33(t，1H)，5.00(d，1H)，4.97(dd，1H)，4.77(dd，1H)，4.57(d，1H)，4.50-4.39(m，1H)，4.50-4.39(m，1H)，4.09-4.04(m，2H)，4.00(m，2H)。
實驗例1
1受試藥物1.1名稱20(S)-原人參二醇糖基化五個衍生物分別為3A、3B、3C、12A、3，12A。
1.2提供單位上海中藥創(chuàng)新研究中心。
1.3配制方法分別稱取各樣品后，加入少量吐溫80助溶，再加入0.5％CMC-Na溶液逐漸稀釋至4mg/ml即可。溶液呈混懸狀，給藥前充分搖勻。
2實驗材料2.1溶劑0.5％CMC-Na溶液。
2.2陽性對照品注射用順鉑，購自上海齊魯制藥有限公司。
2.3瘤源小鼠H22肝癌模型由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院藥理室傳代維持。
3實驗動物3.1來源昆明種小鼠由上海中科院實驗動物中心提供，合格證號滬動合證字第107號。
3.2體重20-22克。
3.3性別雄性。
3.4動物數(shù)試驗組及陽性對照組每組10只小鼠，陰性對照兩組。
4劑量設置20(S)-原人參二醇糖基化五個衍生物每次給藥劑量采用同一種劑量，100mg/kg。
5給藥方案灌胃給藥，每天1次，連續(xù)10天，共給藥10次。
6試驗對照陰性對照給以與試驗組高劑量等體積等濃度的相應溶劑，陽性對照順鉑DDP 2mg/kg，每天一次，連續(xù)腹腔給藥七天。
7試驗主要步驟腋皮下接種模型無菌條件下取生長旺盛的瘤源，以勻漿法制備成約1×107/ml細胞懸液，于相應宿主腋皮下接種0.2ml/每鼠，次日按實驗設計方案給藥，兩周左右處死各組動物，剖取腫瘤稱重，按下列公式計算腫瘤抑制率腫瘤抑制率％＝[(對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/對照組平均瘤重)]×100％8實驗結果20(S)-原人參二醇糖基化衍生物3A、3B、3C、12A、3，12A均以100mg/kg，ig×10qd方案對小鼠皮下接種的H22肝癌模型的抗腫瘤療效分別為40.42％、36.59％、39.37％、35.89％及42.86％，結果件見表1。
表120(S)-原人參二醇糖基化對小鼠肝癌H22(皮下接種)療效試驗

*P值＜0.01與陰性對照組相比。
9實驗小結20(S)-原人參二醇糖基化五個衍生物采用相同的給藥方案，體內(nèi)均對小鼠皮下接種的H22肝癌模型均具有一定的抗腫瘤療效。
權利要求
1.一種20(S)-原人參二醇的糖基化衍生物，其結構通式如下所示 其特征在于R1為氫、結構式為 的鼠李糖基、結構式為 的吡喃型的阿拉伯糖基、結構式為 的吡喃型的木糖基、結構式為 的吡喃型的半乳糖基、結構式為 的纖維二糖基或結構式為 的葡萄糖基；R為氫、結構式為 的鼠李糖基、結構式為 的吡喃型的阿拉伯糖基、結構式為 的吡喃型的木糖基、結構式為 的吡喃型的半乳糖基、結構式為 的纖維二糖基或結構式為 的葡萄糖基；其中，R1為氫或結構式為 的葡萄糖基時，R不為氫或結構式為 的葡萄糖基；上述結構式中的R2為氫、C2-C6的烷基取代?；虮郊柞；?。
2.一種20(S)-原人參二醇的糖基化衍生物的制備方法，包括如下步驟a)選擇性保護20(S)-原人參二醇，得到結構式如下的單取代20(S)-原人參二醇， 式中R3為芳香烴類?；?、烷烴取代的芳香烴類?；駽3-C6的烷基取代?；诜磻?0(S)-原人參二醇和含保護基團反應物的摩爾比是1∶3.0-5.0，反應溫度是-10-25℃，反應時間是1.5-12小時，反應有機溶劑是C2-C4的氯代烷烴、三乙胺、吡啶或N，N-二甲基甲酰胺中一種或一種以上的混合物，用量是1mol原人參二醇用6.5-10升有機溶劑；b)單取代20(S)-原人參二醇、糖基給體、路易斯酸催化劑和分子篩在惰性氣體保護下，在有機溶劑中進行糖苷化反應，其中單取代20(S)-原人參二醇、糖基給體和路易斯酸催化劑的摩爾比是1∶0.8-5.0∶0.01-1.0，單取代20(S)-原人參二醇和分子篩的重量比為1∶0.1-7.0，反應溫度是-20-40℃，反應時間是0.5-4.5小時，反應溶劑用量是1mol單取代原人參二醇用4-12升有機溶劑，反應結束時加入淬滅劑淬滅反應，產(chǎn)物用柱層析或重結晶純化；c)將步驟b)中純化后的產(chǎn)物和一價堿金屬化物在極性溶劑中進行脫保護基反應生成20(S)-原人參二醇的3位糖基化衍生物，其中，步驟b)純化后的產(chǎn)物和一價堿金屬化物的摩爾比是1∶4-10，反應溫度是40-100℃，反應時間是10-18小時，極性溶劑的用量是1mol步驟b)純化后的產(chǎn)物用10-30升極性溶劑，本步生成的產(chǎn)物經(jīng)重結晶純化。
3.一種20(S)-原人參二醇的糖基化衍生物的制備方法，包括如下步驟d)20(S)-原人參二醇、糖基給體、路易斯酸催化劑和分子篩在惰性氣體保護下，在有機溶劑中進行選擇性糖苷化反應，選擇性得到20(S)-原人參二醇的12位單糖基化而3位羥基裸露的產(chǎn)物，其中20(S)-原人參二醇、糖基給體和路易斯酸催化劑的摩爾比是1∶0.6-1.5∶0.01-1.0，20(S)-原人參二醇和分子篩的重量比為1∶0.1-7.0，反應溫度是-50-0℃，反應時間是0.5-4.5小時，反應溶劑用量是1mol 20(S)-原人參二醇用4-12升有機溶劑，反應結束時加入淬滅劑淬滅反應，產(chǎn)物用柱層析或重結晶純化；e)將上述步驟d)中純化后的產(chǎn)物和一價堿金屬化物在極性溶劑中進行脫酰基保護基反應生成20(S)-原人參二醇的12位糖基化衍生物，其中，純化后的產(chǎn)物和一價堿金屬化物的摩爾比是1∶4-10，反應溫度是40-100℃，反應時間是10-18小時，極性溶劑的用量是1mol純化后的反應物用10-30升極性溶劑，生成的產(chǎn)物經(jīng)重結晶純化。
4.一種20(S)-原人參二醇的糖基化衍生物的制備方法，包括如下步驟f)20(S)-原人參二醇、糖基給體、路易斯酸催化劑和分子篩在惰性氣體保護下，在有機溶劑中進行選擇性糖苷化反應，選擇性得到20(S)-原人參二醇的12位單糖基化而3位羥基裸露的產(chǎn)物，其中20(S)-原人參二醇、糖基給體和路易斯酸催化劑的摩爾比是1∶0.6-1.5∶0.01-1.0，20(S)-原人參二醇和分子篩的重量比為1∶0.1-7.0，反應溫度是-50-0℃，反應時間是0.5-4.5小時，反應溶劑用量是1mol 20(S)-原人參二醇用4-12升有機溶劑，反應結束時加入淬滅劑淬滅反應，產(chǎn)物用柱層析或重結晶純化；g)將上述步驟f)中純化后的產(chǎn)物與糖基給體、路易斯酸催化劑和分子篩在惰性氣體保護下，在有機溶劑中進行糖苷化反應，純化后的產(chǎn)物、糖基給體和路易斯酸催化劑的摩爾比是1∶1.0-2.0∶0.01-1.0，純化后的產(chǎn)物和分子篩的重量比為1∶0.1-7.0，反應溫度是-20-50℃，反應時間是0.5-4.5小時，反應溶劑用量是1mol純化后的產(chǎn)物用4-12升有機溶劑，反應結束時加入淬滅劑淬滅反應，產(chǎn)物用柱層析或重結晶純化；h)將上述步驟g)中純化后產(chǎn)物和一價堿金屬化物在極性溶劑中進行脫?；Ｗo基反應生成20(S)-原人參二醇的3和12位糖基化衍生物，其中，純化后的反應物和一價堿金屬化物的摩爾比是1∶4-10，反應溫度是40-100℃，反應時間是10-18小時，極性溶劑的用量是1mol純化后的反應物用10-30升極性溶劑，生成的產(chǎn)物經(jīng)重結晶純化。
5.如權利要求2～4任一所述的制備方法，其特征在于所述糖基給體是結構式為 的鼠李糖基給體、結構式為 的吡喃型的阿拉伯糖基給體、結構式為 的吡喃型的木糖基給體、結構式為 的吡喃型的半乳糖基給體、結構式為 的纖維二糖基給體或結構式為 的葡萄糖基給體；R4是C2-C6的烷基取代酰基或苯甲?；?；X為OC(NH)CCl3或SEt或Br。
6.如權利要求2～4任一所述的制備方法，其特征在于所述路易斯酸催化劑是C3-C9的鹵代酰胺、C1-C6的氟代烴基磺酸、C2-C8的硅基氟代烴基磺酸酯、C1-C6的氟代烴基磺酸銀、三氟化硼-乙醚絡合物或三氟化硼-乙醚混合物；所述的惰性保護氣體是氮氣、氬氣或氦氣；所述糖苷化反應中的有機溶劑是C2-C4的氯代烷烴或甲苯；所述淬滅劑是三甲胺、三乙胺或硫代硫酸鈉；所述的分子篩是3-5型硅鋁酸鹽分子篩；柱層析所用的填充劑是硅膠、氧化鋁或大孔樹脂；所述柱層析純化中洗脫用的溶劑是石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲醇或環(huán)己烷中一種或多種的混合物。
7.如權利要求2～4任一所述的制備方法，其特征在于所述一價堿金屬化物是氫氧化鈉、甲醇鈉、氫氧化鉀或氫氧化鋰；所述脫保護基反應中的極性溶劑是四氫呋喃、甲醇、二氯甲烷、乙醇、水中的一種或多種的混合物；所述重結晶純化中的溶劑是三氯甲烷、C1-C4的烷基醇、乙酸乙酯、丙酮、水中一種或多種的混合物。
8.20(S)-原人參二醇糖基化衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種20(S)－原人參二醇糖基化衍生物，即以20(S)－原人參二醇為母核的3位、12位分別糖基化的衍生物以及3位和12位均糖基化衍生物。本發(fā)明還涉及20(S)－原人參二醇糖基化衍生物的制備方法。藥理實驗結果表明，20(S)原人參二醇糖基化衍生物具有良好的抗腫瘤效果。
文檔編號A61K31/7028GK1919861SQ20061011605
公開日2007年2月28日 申請日期2006年9月14日 優(yōu)先權日2006年9月14日
發(fā)明者惠永正, 楊志奇, 劉峰剛, 騰繼軍, 葛強, 張艷 申請人:上海中藥創(chuàng)新研究中心