專利名稱：采用MDM2p53相互作用的小分子抑制劑的聯(lián)合治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療癌癥或其它增殖性疾病的領(lǐng)域。特別是，本發(fā)明涉及采用MDM2p53相互作用的小分子抑制劑的聯(lián)合治療。
HDM2是hdm2的表達(dá)產(chǎn)物，hdm2是在各種癌癥特別是軟組織肉瘤中過度表達(dá)的癌基因(Momand，J.等人，Nucl.Acids Res.263453-3459(1998))。
p53是轉(zhuǎn)錄因子，其在細(xì)胞增殖與細(xì)胞生長停滯/編程性細(xì)胞生長死亡之間平衡的調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵性作用。在正常條件下，p53的半壽期非常短，因而相應(yīng)地細(xì)胞中p53的水平就低。然而，為響應(yīng)細(xì)胞DNA損傷、細(xì)胞應(yīng)力或其它因素，p53的水平就會升高。p53水平的升高反過來又提高誘導(dǎo)細(xì)胞生長停滯或進(jìn)行編程性細(xì)胞生長死亡(即受控制的細(xì)胞死亡)的多個基因的轉(zhuǎn)錄。p53的功能是阻止細(xì)胞的不受控制的增殖，因此保護(hù)機(jī)體免于癌癥的發(fā)展(回顧，參見Levine，A.J.，細(xì)胞88323-331(1997))。
p53是潛伏而短壽的轉(zhuǎn)錄因子，其被多個細(xì)胞應(yīng)力，包括DNA損傷、UV損傷、紡錘體損傷、低氧、炎性細(xì)胞因子、病毒感染、激活的癌基因和核糖核苷酸耗盡誘導(dǎo)并且是關(guān)于它們的整合點。p53的激活調(diào)節(jié)基因表達(dá)的平衡中的變化，這樣，涉及增殖的許多基因的表達(dá)受到抑制，同時涉及生長停滯(例如p21WAF1和GADD45)、修復(fù)(例如p53RE)和編程性細(xì)胞生長死亡(例如Bax，Killer/DR5和PIGs)的基因被激活。p53激活的生物結(jié)果(無論是持久還是短暫的生長停滯或編程性細(xì)胞生長死亡)取決于若干因素，包括誘導(dǎo)應(yīng)力的類型和強(qiáng)度以及細(xì)胞或組織的類型。
p53和MDM2存在于負(fù)調(diào)節(jié)反饋環(huán)中，其中p53刺激mdm2基因的轉(zhuǎn)錄，而MDM2結(jié)合p53并以其為目標(biāo)由26S蛋白酶體進(jìn)行降解。p53誘導(dǎo)過程中的關(guān)鍵因素是p53-MDM2復(fù)合物的破裂，所述復(fù)合物使p53在胞核中蓄集。這種機(jī)制似乎是p53由此被激活的所有通路而共有的，雖然近來的證據(jù)顯示在這種激活實際實現(xiàn)的分子事件中有相當(dāng)?shù)淖兓?br> p53腫瘤抑制基因的失活在人腫瘤形成中是時常發(fā)生的事件。這種失活可以通過p53基因的突變或者通過結(jié)合病毒或細(xì)胞癌基因蛋白例如SV40大T抗原和MDM2而發(fā)生。盡管野生型p53抑制腫瘤細(xì)胞生長的機(jī)制還沒有定論，但生長抑制的一個關(guān)鍵特征是p53作為轉(zhuǎn)錄因子起作用的特性是清楚的(Farmer，G.等人，Nature 35883-86(1992)；Funk，W.D.等人，Mol.Cell.Biol.122866-2871(1992)；Kern，S.E.，等人，Science 256827-830(1992))。目前，人們正在努力去發(fā)現(xiàn)通過p53結(jié)合到接近或在這些基因內(nèi)的序列元件來調(diào)節(jié)生長控制的基因。若干這樣的基因已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)。在例如肌肉肌酸激酶基因(Weintraub，H.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，884570-4571(1991)；Zambetti，G.P.等人，Genes Dev.61143-1152(1992))和GLN反轉(zhuǎn)錄病毒元件(Zauberman，A.等人，EMBO J.122799-2808(1993))的情況下，這些基因在生長控制的抑制中可能起的作用是不清楚的。然而有其它的實例，即mdm2(Barak，Y.等人，EMBO J.12461-468(1993)；Wu，X.等人，Genes Dev.71126-1132(1993))GADD45(Kastan，M.B.等人，Cell 71587-597(1992))和WAF1或CIP1(E1-Beiry，W.S.等人，Ceu 75817-825(1993)；Harper，J.W.等人，Ceu 75-805-816(1993))，其中它們在細(xì)胞生長調(diào)節(jié)中的參與得到較好的了解。
mdm2-一種已知的癌基因，最初是在小鼠雙微染色體中發(fā)現(xiàn)的(Cahilly-Snyde r.，L.等人，Somatic Cell Mol.Genet.13235-244(1987))。它的蛋白產(chǎn)物其后被發(fā)現(xiàn)與p53形成復(fù)合物，所述復(fù)合物是首先在預(yù)先用溫度敏感小鼠p53基因轉(zhuǎn)染的大鼠成纖維細(xì)胞系(Clone 6)中發(fā)現(xiàn)的(Michalovitz，D.等人，Cell 62671-680(1990))。大鼠細(xì)胞系在37℃生長良好，但是當(dāng)減至32℃時顯示G1停滯，這與在p53構(gòu)像和活性中觀察到的溫度依賴開關(guān)是完全一致的。然而，p53-MDM2復(fù)合物只是在32℃被大量地觀察到，在該溫度p53主要是功能或“野生型”形式(Barak，Y.等人，EMBO J.112115-2121(1992)和Momand，J.等人，Cell 691237-1245(1992))。通過將大鼠細(xì)胞系溫度減至32℃并阻斷novo蛋白的合成，結(jié)果顯示只是“野生型”p53誘導(dǎo)mdm2基因的表達(dá)，由此可以從p53轉(zhuǎn)錄活性的意義上解釋復(fù)合物的不同數(shù)量(Barak，Y.等人，EMBO J.12461-468(1993)。這種解釋通過野生型p53在mdm2基因的第一內(nèi)含子內(nèi)的DNA結(jié)合位點的發(fā)現(xiàn)而得到進(jìn)一步的發(fā)展(Wu，X.等人，Genes Dev.71126-1132(1993))。利用這種p53DNA結(jié)合位點的報道基因構(gòu)建物揭示，當(dāng)野生型p53與MDM2共同表達(dá)時它們是失活的。
這種p53轉(zhuǎn)錄活性的抑制，可以通過MDM2阻斷p53的激活域和/或DNA結(jié)合位點引起。因此，提出mdm2的表達(dá)是經(jīng)由MDM2蛋白對野生型p53的轉(zhuǎn)錄活性的抑制作用而自動調(diào)節(jié)的。這種p53-mdm2自動調(diào)節(jié)反饋環(huán)提供了關(guān)于細(xì)胞生長如何被p53調(diào)節(jié)的新見解。最高達(dá)三分之一的人肉瘤被認(rèn)為是通過擴(kuò)增hdm2基因(mdm2的人同源物)來克服p53調(diào)節(jié)的生長控制(Oliner，J.D.等人，Nature 35880-83(1992))。因此，p53與HDM2之間的相互作用代表關(guān)鍵的潛在治療目標(biāo)。MDM2能夠促進(jìn)腫瘤發(fā)生的一個機(jī)制是通過它對p53的抑制作用。p53的腫瘤抑制功能在細(xì)胞周期的控制中控制決定性關(guān)卡(綜述于Levine，A.J.，Cell 88323-331(1997))。p53是通過編程性細(xì)胞死亡引起細(xì)胞周期停滯或細(xì)胞死亡的多種蛋白的轉(zhuǎn)錄因子。細(xì)胞DNA損害提高p53的水平和轉(zhuǎn)錄活性。MDM2蛋白通過結(jié)合到p53兩親性N-末端螺旋，取消p53與其它蛋白的相互作用和它的轉(zhuǎn)錄活性來抑制p53功能。與MDM2的相互作用也在遍在蛋白依賴的蛋白退化方面使p53成為目標(biāo)。通過與一些下游區(qū)效應(yīng)子例如pRB和EF2的直接相互作用，MDM2也顯示p53對細(xì)胞周期的獨立作用(綜述于Zhang，R.和Wang，H.，Cur.Pharm.Des.6393-416(2000))。
在恢復(fù)對過度表達(dá)HDM2的細(xì)胞的細(xì)胞周期控制中，作為一線癌癥治療，阻斷HDM2結(jié)合p53是治療有用的。更一般地說，抑制HDM2可以通過增強(qiáng)編程性細(xì)胞死亡和生長停滯信號通路，而在p53正常癌癥中提高化療和放射的療效。
開發(fā)使用抑制HDM2與p53之間相互作用的小分子的新治療策略，是繼續(xù)存在的需要。
背景技術(shù)：
相關(guān)技術(shù)化療或放射與p53激活劑的聯(lián)合使用可以產(chǎn)生增強(qiáng)的抗腫瘤活性。例如，臨床試驗表明，患有晚期癌癥的患者對使用化療和放射與抗瘤酮A10和AS2-1的聯(lián)合治療反應(yīng)良好(Tsuda等人，2002，OncologyReports，9(1)65-68)?？沽鐾ㄟ^啟動子序列的脫甲基化和組蛋白的乙酰化來調(diào)節(jié)基因p53和p21的表達(dá)(Burzynski，2004，Integr CancerTher.，3(1)47-58)。有人提出p53基因治療與化療的組合可以在患有軟組織肉瘤(STS)的患者中提高療效(Zhan等人，2001，Cancer，92(6)1556-1566)。另外，當(dāng)將反義抗HDM2寡核苷酸與癌癥化療和放射治療聯(lián)合使用時探測到化學(xué)敏感化和放射敏感化(Wang等人，2003，Annals of the New York Academy of Sciences，1002(TherapeuticOligonucleotides)217-235)。
雖然聯(lián)合治療效果已經(jīng)被提高p53的基因表達(dá)和降低mdm2的基因表達(dá)的各種基因療法所證明，但HDM2p53相互作用的小分子抑制劑在這樣的聯(lián)合治療中是否同樣有效仍然是不確定的。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及使用第一種形式的化療劑與抑制HDM2和p53之間相互作用的小分子的聯(lián)合治療，這樣第一種形式的化療劑的抗腫瘤活性得以提高。
本發(fā)明的一般方面是抑制細(xì)胞生長的方法，包括步驟a)向細(xì)胞給藥抗腫瘤劑；和b)向細(xì)胞給藥抑制蛋白MDM2和p53之間結(jié)合的小分子。
本發(fā)明的另一個一般方面是抑制細(xì)胞生長的方法，包括步驟a)將細(xì)胞暴露于放射治療中；和b)向細(xì)胞給藥抑制蛋白MDM2和p53之間結(jié)合的小分子。
在一個優(yōu)選的實施方案中，所述抗腫瘤劑是多柔比星。
在另一實施方案中，抑制蛋白MDM2與p53之間結(jié)合的化合物是苯并二氮雜二酮類化合物，所述化合物描述于WO2003041715或WO2004096134中。WO2003041715和WO2004096134中的描述本文將其引用作為參考。
本發(fā)明還提供了監(jiān)測抑制蛋白MDM2與p53之間結(jié)合的小分子的效果的方法，包括以下步驟a)從被給藥抑制蛋白MDM2與p53之間結(jié)合的小分子的個體獲得樣本；和b)測定其轉(zhuǎn)錄被p53調(diào)節(jié)的基因的基因表達(dá)水平。
在一個實施方案中，其轉(zhuǎn)錄被p53調(diào)節(jié)的基因是p21waf1/cip1基因。
附圖的簡要描述

圖1.TDP665759以野生型p53依賴方式抑制細(xì)胞增殖。將乳腺癌細(xì)胞，MCF7(wtp53)和MDA-MB-231(突變型p53)，在用TDP665759處理72小時之前粘連過夜。測定BrdU摻入的量。將結(jié)果表示為相對于用DMSO載體對照處理的細(xì)胞的抑制百分比。圖中顯示的是4個獨立研究的代表性試驗，其中誤差條代表一式三份樣本的標(biāo)準(zhǔn)偏差。MCF7方塊，IC50＝0.5μM；MDA-MB-231三角形，IC50＞5μM。
圖2.TDP521252誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞中半胱天冬酶-3和-7的活性。按照指示，將HepG2細(xì)胞用TDP521252、TDP536356或載體對照處理8-48小時。在該時間點的終點，將細(xì)胞裂解，加入半胱天冬酶底物，并且在2小時的時間內(nèi)，每20分鐘測定一次活性。將比活性記錄為，加入底物后，20分鐘-40分鐘之間的時間框架內(nèi)，每分鐘每μg全部蛋白的活性速度。TDP521252圓；TDP536356方塊；和DMSO菱形。
圖3.TDP521252調(diào)節(jié)p53通路。使HepG2肝細(xì)胞癌細(xì)胞經(jīng)受TDP521252或TDP536356處理1、2、4或8小時，然后收獲全部細(xì)胞RNA。進(jìn)行定量RT-PCR以測定圖中所示p53目標(biāo)基因的上調(diào)。將結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化為GAPDH，并表示為相對于時間0的增加倍數(shù)。所示結(jié)果是兩個單獨試驗的代表。TDP521252p21(實心圓)；PIG3(實心方塊)；Hdm2(實心三角形)；p53(星形)；PUMA(實心菱形)。TDP536356p21(空心圓)。DMSOp21(空心三角形)。
圖4.TDP665759在體內(nèi)誘導(dǎo)p21waf1/cip1。將裸小鼠用25或50mg/kgTDP665759腹膜內(nèi)注射b.i.d.4天或者在第3天用10mg/kg多柔比星腹膜內(nèi)注射一次。在第4天第一次劑量給予后6小時，將小鼠殺死并獲取肝進(jìn)行總RNA提取。進(jìn)行定量PCR以測定肝組織中p21waf1/cip1的相對比率。將數(shù)據(jù)表示為每組3個單獨動物的平均值±S.D.。*表示通過ANOVA確定的與載體對照的統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)和通過后hocNewman-Keul’s檢驗確定的治療之間的差異。
圖5.TDP665759與多柔比星協(xié)同抑制A375腫瘤生長。將A375黑素瘤異種移植物在雌性裸小鼠中建立并使其達(dá)到80-120mg尺寸。此時，將小鼠隨機(jī)分配到治療組中，并用載體(20.25％羥丙基-β-環(huán)糊精(cyclodextran)(bid×10)、100mg/kg TDP665759(bid×10)、1.5或3mg/kg多柔比星(Qd×5)或100mg/kg TDP665759(bid×10)+1.5mg/kg多柔比星(Qd×5)的組合開始治療。對小鼠每天進(jìn)行一般健康監(jiān)測，并且每3或4天測量腫瘤大小。當(dāng)腫瘤大小超過2克時將小鼠安樂死。此中所表示的數(shù)據(jù)是腫瘤塊的平均值±S.D.。載體方塊；向上的三角形3mg/kg多柔比星；向下的三角形1.5mg/kg多柔比星；菱形100mg/kg TDP665759；圓100mg/kg TDP665759+1.5mg/kg多柔比星。
優(yōu)選實施方案的詳細(xì)描述本發(fā)明涉及與HDM2和/或MDM2結(jié)合的一類新的小分子化合物在聯(lián)合治療中的應(yīng)用。通過干擾HDM2-p53或MDM2-p53相互作用，這些化合物提高了p53的細(xì)胞內(nèi)濃度。因此，這些小分子化合物在增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對化療的敏感性方面具有治療用途。在對于功能性p53的提高特別敏感的腫瘤類型中，這種類型的化合物足以誘導(dǎo)編程性細(xì)胞死亡。本發(fā)明化合物也適用于治療其中HDM2或MDM2過度表達(dá)的腫瘤類型。
本發(fā)明化合物包括式I化合物
或其溶劑化物、水合物或可藥用鹽，其中R1和R2獨立地是氫、烷基、鏈烯基、炔基、任選取代的環(huán)烷基、任選取代的環(huán)烷基烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳烷基、烷氧基、任選取代的芳氧基、任選取代的雜芳氧基、氰基、氨基、烷?；被?、硝基、羥基、羧基或烷氧基羰基；或者R1和R2與它們所連接于其上的兩個碳原子一起形成5-10元非芳族或6-10元芳族碳環(huán)或者其中1或2個環(huán)原子是雜原子的5-10元芳族或非芳族環(huán)，其中每一個環(huán)任選被Ra取代1-4次，其中每次出現(xiàn)的Ra獨立地是氫、鹵素、任選取代的烷基、任選取代的鏈烯基、任選取代的炔基、任選取代的環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳烷基、烷氧基、任選取代的芳氧基、任選取代的雜芳氧基、氰基、任選取代的氨基、氨基甲酰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷?；被?、硝基、羥基、羧基、烷氧基羰基或酰基、任選取代的烷硫基、任選取代的三氟烷硫基、任選取代的羥基亞胺烷基；X是下列化合物的二價基團(tuán)任選取代的烷烴、任選取代的環(huán)烷烴、任選取代的芳烴、任選取代的雜芳烴、任選取代的芳烷烴或任選取代的雜芳烷烴、任選取代的胺；且R3是-CO2Rd、-CO2M、-OH、-ORd、-NHRd、-NRdRd、-SO2Rd、-NHCONHRd、-NHCONRdRd、-CH2Rd，任選取代的脒基或任選取代的胍基，其中Rd是氫、烷基、任選取代的烷氧基、任選取代的環(huán)烷基或任選取代的飽和或部分不飽和雜環(huán)，并且M是陽離子或H；或者R3-X-是氫或電子對；R4是氧、兩個氫或-NR9R10，其中R9和R10獨立地是氫、任選取代的烷基、環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳烷基、羧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、氨基羰基、氨基羰基烷基、烷基氨基羰基或烷基氨基羰基烷基、烷氧基；或者R3和R4與它們所連接于其上的兩個碳原子一起形成5-10元非芳族或6-10元芳族碳環(huán)，或者其中1或2個環(huán)原子是雜原子的5-10元芳族或非芳族環(huán)，其中每一個環(huán)任選被Ra取代1-4次，其中Ra如上面所定義；R5是環(huán)烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基烷基、芳烷基、雜芳烷基或者飽和或部分不飽和雜環(huán)，所述每一基團(tuán)是任選取代的；R6、R7和R8獨立地是氫、烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、飽和或部分不飽和雜環(huán)、環(huán)烷基烷基、芳烷基或雜芳基烷基，所述每一基團(tuán)是任選取代的；或者R6和R7與它們所連接于其上的碳原子一起形成任選被Ra取代1-3次的3-7元碳環(huán)，其中Ra如上面所定義；R11是烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、飽和或部分不飽和雜環(huán)、芳烷基或雜芳基烷基，所述每一基團(tuán)是任選取代的。
有用的R1和R2包括氫，C1-6烷基，C2-6鏈烯基，C2-6炔基，任選取代的C3-8環(huán)烷基，任選取代的C3-8環(huán)烷基(C1-4)烷基，任選取代的苯基，任選取代的萘基，任選取代的苯基(C1-6)烷基，任選取代的萘基(C1-6)烷基，任選取代的雜芳基，所述雜芳基具有5-7個環(huán)原子，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，任選取代的雜芳基(C1-6)烷基，其中雜芳基部分具有5-7個環(huán)原子，而1或2個環(huán)原子是雜原子，C1-6烷氧基，任選取代的苯氧基，任選取代的芐氧基，任選取代的萘氧基，任選取代的雜芳基氧基，其中雜芳基部分具有5-7個環(huán)原子，而1或2個環(huán)原子是雜原子，氰基，氨基，(C1-6烷?；?氨基，硝基，羥基，羧基或(C1-6烷氧基)羰基。特別有用的R1和R2包括氫，任選取代的苯基，任選取代的芐基，任選取代的環(huán)戊基，任選取代的環(huán)己基，任選取代的C3-8環(huán)烷基(C1-4)烷基和C1-6烷基。
還有用的是，R1和R2與它們所連接于其上的兩個碳原子一起形成任選取代的芳族或非芳族的5-7元環(huán)，其中0、1或2個環(huán)原子是雜原子。以這種方式形成的特別有用的環(huán)包括任選取代的苯和任選取代的吡啶。
當(dāng)R1和R2與它們所連接于其上的兩個碳原子一起形成環(huán)時，所述環(huán)任選被Ra取代一次或多次，優(yōu)選1或2次。
有用的Ra包括氫，鹵素，C1-6烷基，C2-6鏈烯基，C2-6炔基，C3-8環(huán)烷基，任選取代的C6-10芳基，任選取代的(C6-10芳基)C1-6烷基，任選取代的烷硫基，任選取代的5-7元雜芳基，任選取代的雜芳基(C1-6)烷基，其中雜芳基部分具有5-7個環(huán)原子，而1或2個環(huán)原子是雜原子，C1-6烷氧基，任選取代的(C6-10芳基)氧基，任選取代的雜芳基氧基，其中雜芳基部分具有5-7個環(huán)原子，而1或2個環(huán)原子是雜原子，氰基，氨基，氨基甲酰基，(C1-6烷基)氨基羰基，二-(C1-6烷基)氨基羰基，(C1-6烷酰基)氨基，硝基，羥基，羧基，(C1-6烷氧基)羰基和C1-6?；?。
特別有用的X包括下列化合物的二價基團(tuán)C1-6烷烴，任選取代的C6-10芳烴，任選取代的5-7元雜芳烴，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，任選取代的(C6-10芳基)C1-6烷烴，和任選取代的雜芳基(C1-6)烷烴，其中雜芳基部分具有5-7個環(huán)原子并且其中1或2個環(huán)原子是雜原子。優(yōu)選的X包括下列化合物的二價基團(tuán)C1-6烷烴、任選取代的苯、任選取代的呋喃、任選取代的噻吩、任選取代的吡咯和任選取代的吡啶。更優(yōu)選的X包括下列化合物的二價基團(tuán)甲烷、乙烷、正丙烷、正丁烷、正戊烷、正己烷、苯和呋喃。當(dāng)X是烷烴的二價基團(tuán)時優(yōu)選烷烴具有至少3個碳原子；優(yōu)選烷烴是非支鏈；并且優(yōu)選X是α，ω-二價基團(tuán)。
特別有用的R3包括-CO2Rd和-CO2M，其中Rd是氫、C1-6烷基或任選取代的C3-8環(huán)烷基，并且M是陽離子。優(yōu)選的R3包括-CO2Rd和-CO2M，其中Rd是氫或C1-6烷基，且M是陽離子。更優(yōu)選的R3包括-CO2Rd，其中Rd是氫或C1-4烷基。最優(yōu)選的是COOH。
特別有用的R5包括C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，5-7元雜芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分具有5-7個環(huán)原子并且其中1或2個環(huán)原子是雜原子，和5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的。優(yōu)選的R5是任選取代的苯基。當(dāng)R5是苯基時，優(yōu)選在4位上被取代1次或者在3和4位上被取代2次，而優(yōu)選被鹵素、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基和/或氨基取代。更優(yōu)選的R5包括4-氯苯基、4-三氟甲基苯基、4-三氟甲氧基苯基、4-氯-3-硝基苯基、3-氨基-4-氯苯基和3-溴苯基。
特別有用的R6包括C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，5-7元雜芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分具有5-7個環(huán)原子并且其中1或2個環(huán)原子是雜原子，和5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的。優(yōu)選的R6包括任選取代的苯基、任選取代的芐基、任選取代的吡啶基和任選取代的萘基。更優(yōu)選的是任選取代的苯基。當(dāng)R6是取代的苯基或取代的芐基時，優(yōu)選在對位上被取代1次或者在間位和對位上被取代2次，或者在鄰位和對位上被取代2次，而優(yōu)選被鹵素、硝基和/或氨基取代。更優(yōu)選的R6包括苯基、4-氯苯基、3，4-二氯苯基、2-氨基-4-氯苯基、2-氨基-4-氯-5-氟苯基、3-氨基-4-氯苯基和4-氯-3-硝基苯基。優(yōu)選的R6還包括對氯芐基和4-甲基-1-萘基。
特別有用的R7包括氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基和(C3-8環(huán)烷基)烷基。優(yōu)選的R7包括氫、C1-6烷基和C3-6環(huán)烷基。更優(yōu)選的R7包括氫、甲基和環(huán)丙基。
特別有用的R8包括氫和C1-6烷基。優(yōu)選的R8包括氫、甲基和乙基。更優(yōu)選的是氫。
特別有用的R9包括氫、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基、羥基(C1-6)烷基、氨基(C1-6)烷基、羧基(C1-6)烷基、(C1-6烷氧基)羰基、(C1-6烷氧基)羰基(C1-6)烷基、氨基甲?；被柞；?C1-6)烷基、(C1-6烷基氨基)羰基和(C1-6烷基氨基)羰基(C1-6)烷基。優(yōu)選的R9包括氫、C1-6烷基、羥基(C1-6)烷基、氨基(C1-6)烷基和氨基甲?；?C1-6)烷基。更優(yōu)選的R9包括氫、甲基、2-羥基乙基、3-羥基丙基、2-氨基乙基、氨基甲?；谆桶被柞；一?br> 特別有用的R10包括氫和C1-6烷基。優(yōu)選的R10包括氫、甲基和乙基。更優(yōu)選的是氫。
在-個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明化合物是式II化合物 或其溶劑化物、水合物或可藥用鹽，其中Ra、R3、X、R5、R6、R7和R8如式I所定義，并且n是0、1、2、3或4。
在該實施方案中，特別有用和優(yōu)選的R3、X、R5、R6、R7和R8如式I化合物所描述。
在該實施方案中，特別有用的Ra包括鹵素、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、氰基、C3-8環(huán)烷基、羥基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6?；?、氨基甲?；?、(C1-6烷基)氨基羰基、氨基和硝基。優(yōu)選的Ra包括鹵素、C2-6炔基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6?；桶被柞；８鼉?yōu)選的Ra包括碘、溴、氯、乙炔基、乙?；⒓籽趸驶?、羧基和氨基甲酰基。
在該實施方案中，特別有用的n包括0、1和2。優(yōu)選的n包括1和2。更優(yōu)選是1。當(dāng)n是1時，Ra出現(xiàn)在7或8位，更優(yōu)選在7位。當(dāng)n是2時，Ra優(yōu)選出現(xiàn)在7和8位。
一組優(yōu)選的化合物是式II化合物，其中每一Ra獨立地是鹵素、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、氰基、C3-8環(huán)烷基、羥基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6?；被柞；?、(C1-6烷基)氨基羰基、氨基或硝基、烷硫基；n是0、1或2；當(dāng)n是1時，Ra出現(xiàn)在7或8位；當(dāng)n是2時，Ra出現(xiàn)在7和8位；X是下列化合物的二價基團(tuán)C1-6烷烴，任選取代的C6-10芳烴，任選取代的5-7元雜芳烴，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，任選取代的(C6-10芳基)C1-6烷烴，或任選取代的雜芳基(C1-6)烷烴，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且其中1或2個環(huán)原子是雜原子；R3是-CO2Rd或-CO2M，其中Rd是氫、C1-6烷基或任選取代的C3-8環(huán)烷基，并且M是陽離子；R5是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子的5-7元雜芳基，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且1或2個環(huán)原子是雜原子，或者5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的。
R6是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子的5-7元雜芳基，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且其中1或2個環(huán)原子是雜原子，或5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的；R7是氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基或(C3-8環(huán)烷基)烷基；和R8是氫或C1-6烷基。
一組優(yōu)選的化合物是式II化合物，其中每一Ra獨立地是鹵素、C2-6炔基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6?；虬被柞；籲是1或2；當(dāng)n是1時，Ra出現(xiàn)在7位；當(dāng)n是2時，Ra出現(xiàn)在7和8位；X是下列化合物的二價基團(tuán)C1-6烷烴、任選取代的苯、任選取代的呋喃、任選取代的噻吩、任選取代的吡咯或任選取代的吡啶；R3是-CO2Rd或-CO2M，其中Rd是氫或C1-6烷基，并且M是陽離子；R5是任選取代的苯基；R6是任選取代的苯基、任選取代的芐基、任選取代的吡啶基或任選取代的萘基；R7是氫、C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基；且R8是氫。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明化合物是式III化合物 或其溶劑化物、水合物或可藥用鹽，其中Ra、R5、R6、R7、R8、R9和R10如式I化合物所定義，并且n是0、1、2、3或4。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員將會認(rèn)識到，當(dāng)R4是-NR9R10時，式I化合物是脒，當(dāng)R9和R10中至少一個是氫時，所述脒存在于互變異構(gòu)形式之間的平衡。盡管式III只是例證說明了一種形式，但本發(fā)明意圖包括兩種互變異構(gòu)體。
在該實施方案中，特別有用和優(yōu)選的R5、R6、R7、R8、R9和R10如式I化合物所描述。
在該實施方案中，特別有用的Ra包括鹵素、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、氰基、C3-8環(huán)烷基、羥基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6?；?、氨基甲?；?、(C1-6烷基)氨基羰基、氨基、烷硫基和硝基。優(yōu)選的Ra包括鹵素、C2-6炔基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6?；桶被柞；?。更優(yōu)選的Ra包括碘、溴、氯、乙炔基、乙?；⒓籽趸驶?、羧基和氨基甲?；?。
在該實施方案中，特別有用的n包括0、1和2。優(yōu)選的n包括1和2。更優(yōu)選是1。當(dāng)n是1時，Ra優(yōu)選出現(xiàn)在7或8位，更優(yōu)選在7位。當(dāng)n是2時，Ra優(yōu)選出現(xiàn)在7和8位。
一組優(yōu)選的化合物是式III化合物，其中每一情況下，Ra獨立地是鹵素、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、氰基、C3-8環(huán)烷基、羥基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6?；?、氨基甲?；?C1-6烷基)氨基羰基、氨基、烷硫基和硝基；n是0、1或2；當(dāng)n是1時，Ra出現(xiàn)在7或8位；當(dāng)n是2時，Ra出現(xiàn)在7和8位。
R5是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子的5-7元雜芳基，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且其中1或2個環(huán)原子是雜原子，或者5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的。
R6是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子的5-7元雜芳基，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且其中1或2個環(huán)原子是雜原子，或5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的；R7是氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基或(C3-8環(huán)烷基)烷基；R8是氫或C1-6烷基；R9是氫、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基、羥基(C1-6)烷基、氨基(C1-6)烷基、羧基(C1-6)烷基、(C1-6烷氧基)羰基、(C1-6烷氧基)羰基(C1-6)烷基、氨基甲?；?、氨基甲?；?C1-6)烷基、(C1-6烷基氨基)羰基或(C1-6烷基氨基)羰基(C1-6)烷基；且R10是氫或C1-6烷基。
一組更優(yōu)選的化合物是式III化合物，其中每一Ra獨立地是鹵素、C2-6炔基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6?；虬被柞；?；n是1或2；當(dāng)n是1時，Ra出現(xiàn)在7位；當(dāng)n是2時，Ra出現(xiàn)在7和8位；R5是任選取代的苯基；R6是任選取代的苯基、任選取代的吡啶基、任選取代的芐基或任選取代的萘基；R7是氫、C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基；R8是氫；R9是氫、C1-6烷基、羥基(C1-6)烷基、氨基(C1-6)烷基或氨基甲酰基(C1-6)烷基；和R10是氫。
本發(fā)明的第二個方面涉及藥物組合物，所述藥物組合物包括a)至少一種式1的化合物或其可藥用鹽；和b)一種或多種可藥用賦形劑。
優(yōu)選地，所述藥物組合物是無菌的。
本發(fā)明的第三個方面涉及抑制mdm2編碼的蛋白與p53蛋白結(jié)合的方法，所述方法包括將p53或一種或多種mdm2編碼的蛋白與一種或多種式I化合物接觸，其中R1-R8和X如上面所定義。
本發(fā)明的第四個方面涉及誘導(dǎo)編程性細(xì)胞死亡的方法，所述方法包括使動物與包含藥物有效量的至少一種式I化合物或其可藥用鹽，其中R1-R8和X如上面所定義，和任選一種或多種可藥用賦形劑的組合物接觸。
本發(fā)明的第五個方面涉及治療癌癥的方法，所述方法包括使動物與(a)藥物有效量的抗腫瘤劑，和(b)藥物有效量的至少一種式I化合物或其可藥用鹽，其中R1-R11和X如上面所定義，和任選一種或多種與(a)、(b)或(a)和(b)組合的可藥用賦形劑接觸。
本發(fā)明的第六個方面涉及治療癌癥的方法，所述方法包括使動物與包含(a)藥物有效量的至少一種式I化合物或其可藥用鹽，其中R1-R11和X如上面所定義，(b)至少一種或多種誘導(dǎo)或引起DNA損害的活性劑，和任選(c)一種或多種可藥用賦形劑的組合物接觸。
本發(fā)明的第七個方面涉及制備式I化合物的方法。
本發(fā)明范圍內(nèi)的化合物描述于實施例中。優(yōu)選的化合物的實例包括5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸；5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-乙炔基-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸；5-[4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-(3S)-3-(4-三氟甲基-苯基)-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸；5-[4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-(3S)-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸；6-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-己酸；7-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基1-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-庚酸；4-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基甲基}-苯甲酸；4-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-丁酸；3-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-丙酸；5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基甲基}-呋喃-2-甲酸；5-{(3S)-8-氯-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸；5-{3-(4-氯苯基)-4-[(4-氯苯基)-環(huán)丙基-甲基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸；5-{3-(4-氯苯基)-4-[1-(3，4-二氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸；5-[4-[1-(3-氨基-4-氯苯基)-乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸；5-[4-[1-(4-氯-3-硝基苯基)-乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸；5-{3-(4-氯苯基)-7-碘-4-[1-(4-甲基-萘-1-基)-乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸；5-[4-(4-氯芐基)-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸；5-{3-(4-氯苯基)-4-[2-(4-氯苯基)-1-甲基-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸；5-{(3S)-3-(3-溴-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸；[4-芐基-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-乙酸；5-{(3S)-3-(4-氯-3-硝基-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸；5-{(3S)-7-乙?；?3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸；5-{(3S)-3-(3-氨基-4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸；(3S)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-3，4-二氫-苯并[e][1，4]二氮雜-5-酮；2-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-5-氧代-4，5-二氫-3H-苯并[e][1，4]二氮雜-2-基氨基}-乙酰胺；(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-乙基氨基)-7-碘-3，4-二氫苯并[e][1，4]二氮雜-5-酮；(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-2-(3-羥基-丙基氨基)-7-碘-3，4-二氫-苯并[e][1，4]二氮雜-5-酮；N-(2-{(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-5-氧代-4，5-二氫-3H-苯并[e][1，4]二氮雜-2-基氨基}-乙基)-乙酰胺；(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-2-甲基氨基-3，4-二氫-苯并[e][1，4]二氮雜-5-酮；2-(2-氨基-乙基氨基)-(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-3，4-二氫-苯并[e][1，4]二氮雜-5-酮；2-[N-(3-氨基-3-氧代丙基)氨基]-(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-3，4-二氫-1，4-苯并二氮雜-5-酮；5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-甲氧基羰基-2，5-二氧代-3，4-二氫-1H-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸叔丁酯；(3S)-1-(4-叔丁氧基羰基-丁基)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-7-甲酸；7-氨基羰基-5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代-3，4-二氫-1H-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸；5-[4-(4-氯-2-甲基-芐基)-3-(R，S)-(4-氯-苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸；5-{(3R)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基)-戊酸鈉；5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-[(R，S)-1-羥基乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸；5-[(R，S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-(1-(R，S)-羥基乙基)-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸；5-[(3S)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-3-(4-三氟甲基-苯基)-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸；5-{(S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-乙炔基-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸鈉；5-{(3R，S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R，S)-1-(4-氯苯基)-2-羥基乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸；5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸鈉；5-[(3R，S)-4-(4-氯-2-甲基-芐基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸；5-{(3R)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸鈉；5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-(1-(R，S)-羥基乙基)-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸；5-[(3R，S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-[(R，S)-1-羥基-乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸；5-[(3S)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-3-(4-三氟甲基-苯基)-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸；5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-4-氯苯基)-乙基]-7-乙炔基-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸鈉；5-{3-(4-氯苯基)-4-[1-(4-氯苯基)-2-羥基-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸；5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸鈉；5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(甲硫基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸；5-[(3R)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(甲硫基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸；5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(三氟甲硫基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸；5-[(3S)-3-(2-烯丙氧基-4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸；5-[(3S)-3-(4-氯-2-羥基苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸；5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代-7-苯基-1，4-二氮雜-1-基]戊酸鈉鹽；5-[(3S)-7-(2-溴苯基)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代-1，4-二氮雜-1-基]戊酸鈉鹽；5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(2，5-二基苯基)-2，5-二氧代-1，4-二氮雜-1-基]戊酸鈉鹽；5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(2-甲基苯基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸鈉鹽；5-[4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸鈉鹽；5-[4-[(2-氨基-4-氯芐基]-7-溴-3-(4-氯苯基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸鈉鹽；4-(4-氯-芐基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；4-(R)-[1-(2-氨基-4-氯-5-氟-苯基)-乙基]-3(S)-(4-氯-苯基)-7-碘-1-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；4(R，S)-[1-(2-氨基-4-氯-5-羥基-苯基)-乙基]-3(S，R)-(4-氯-苯基)-7-碘-1-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；3(S)-(4-氯-2-羥基-苯基)-4(R)-[1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；4-[1-(2-氨基-4-氯-苯基)-乙基]-3-(4-氯-苯基)-7-碘-1-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基]-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；4-(2-氨基-4-氯-芐基)-3-(4-氯-苯基)-1-(4-二甲基氨基-丁基)-7-碘-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；4-(2-氨基-4-氯-芐基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-1-(4-嗎啉-4-基-丁基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；4-(2-氨基-4-氯-芐基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-1-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丁基]-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；4-(2-氨基-4-氯-芐基)-3-(4-氯-苯基)-1-(3-二甲基氨基-丙基)-7-碘-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；4-(2-氨基-4-氯-芐基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-1-(3-嗎啉-4-基-丙基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；4-(4-氯-2-羥基芐基)-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基-乙氧基)乙基]-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；4-[(S)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-(3R)-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-(2-嗎啉-4-基乙基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；4-(2-氨基-4-氯芐基)-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)丙基]-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；5-(2-烯丙氧基-4-氯芐氧基)-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-1，3-二氫苯并[e][1，4]二氮雜-2-酮；4-(2-氨基-4-氯芐基)-3-(4-氯苯基)-7-碘-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；4-[1-(3-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；4-芐基-7-溴-3-(4-氯苯基)-1-甲基-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮；7-溴-3-(4-氯苯基)-1-甲基-4-(1-苯乙基)-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮；1，3-二氫-4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮；3-(4-氯苯基)-4-[1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基]-7-碘-1-[2-(4-嗎啉代)乙基]-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮；5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸鈉鹽；4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮；4-[(R)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-(3S)-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮；(3R)-4-[(S)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮；4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(4-嗎啉代)乙基]-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮；(3S)-4-[(R)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(4-嗎啉)乙基]-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮；(3R)-4-[(S)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(4-嗎啉代)乙基]-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮；3-(4-氯苯基)-4-[1-(2，6-二氯-3-吡啶基)乙基]-7-碘-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮；1，3-二氫-4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-甲基-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮；1，3-二氫-4-[1-(2-乙酰基氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮；1，3-二氫-4-[1-(2-疊氮基-3-吡啶基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮；4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮鹽酸鹽；(3S)-4-[(R)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮鹽酸鹽；4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-1-[2-(4-嗎啉代)乙基]-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮鹽酸鹽；(3S)-4-[(R)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-1-[2-(4-嗎啉代)乙基]-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮鹽酸鹽；4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，3-二氫-1H-1，4-苯并二氮雜-5-酮；4-[1-(2-氨基-6-氯-3-吡啶基)甲基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮鹽酸鹽；4-[1-(3-氨基-4-氯苯基)環(huán)丙基]-3-(4-氯苯基)-1-[2-(4-嗎啉代)乙基]-7-碘-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮甲磺酸鹽；(3S)-4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[(R)-2-(1-哌嗪基)-2-氧代乙基]-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮鹽酸鹽；4-(4-氯-2-甲基-芐基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-1-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；3-(S)-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-1-(2-嗎啉-4-基-2-氧代-乙基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；3-(S)-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-1-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，4二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；3-(R)-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-1-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；3-(S)-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-1-[2-(2-甲氧基-乙氧基)-乙基]-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；3-(S)-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基-7-(1-羥基亞氨基-乙基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；7-碘-4-萘-1-基甲基-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；4-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基甲基-3-(4-氯-苯基)-7-碘-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；4-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基甲基-7-碘-3-(四氟甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；7-碘-4-(2-吡啶-2-基-乙基)-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；4-芐基-3-(4-氯-苯基)-7-碘-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；3-(4-氯-苯基)-7-碘-4-苯乙基-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；4-芐基-7-碘-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮；7-碘-4-苯乙基-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮。
本文公開的本發(fā)明還意圖包括所公開化合物的體內(nèi)代謝產(chǎn)物。這樣的產(chǎn)物可以例如由給藥化合物的氧化、還原、酰胺化、酯化等產(chǎn)生，而主要是由酶促過程產(chǎn)生。因此，本發(fā)明包括由這樣的方法產(chǎn)生的化合物，所述方法包括使本發(fā)明化合物與哺乳動物接觸足以產(chǎn)生其代謝產(chǎn)物的時間。這樣的產(chǎn)物一般通過以下方法予以鑒定制備放射性標(biāo)記的本發(fā)明化合物，將其以可探測的劑量胃腸外給藥于動物例如大鼠、小鼠、豚鼠、猴子或者人，給予足夠時間以使代謝發(fā)生，然后從尿、血液或其它生物樣本分離出其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。
本文公開的某些化合物可以具有一個或多個不對稱中心，因此產(chǎn)生對映體、非對映體和其它立體異構(gòu)形式。本發(fā)明也意圖包括全部這樣可能的形式以及它們的外消旋和拆分形式及其混合物。當(dāng)本文所描述的化合物具有烯屬雙鍵或其它幾何不對稱中心時，除非另有規(guī)定，意圖包括E和Z幾何異構(gòu)體。本發(fā)明也意圖包括全部互變異構(gòu)體。
如本文所使用，術(shù)語“立體異構(gòu)體”是用于單獨分子的所有異構(gòu)體的一般術(shù)語，所述異構(gòu)體只是在它們的空間原子取向上有所不同。其包括對映體以及具有一個以上手性中心的彼此不是鏡像的化合物的異構(gòu)體(非對映體)。
術(shù)語“手性中心”是指連接著4個不同基團(tuán)的碳原子，或連接著3個不同基團(tuán)的硫原子，其中硫原子及其連接的基團(tuán)形成亞砜、亞磺酸酯、锍鹽或亞硫酸酯。
術(shù)語“對映體”或“對映體的”是指這樣的分子，該分子不能重疊在其鏡像上并因此是旋光性的，其中對映體在一個方向上旋轉(zhuǎn)偏振光的平面，而其鏡像在相反方向上旋轉(zhuǎn)偏振光的平面。
術(shù)語“外消旋”是指等量的對映體的混合物，并且是沒有旋光性的。
術(shù)語“拆分”是指分離或濃縮或耗減兩種對映體形式的分子當(dāng)中的一種形式。術(shù)語“對映體過量”是指這樣的混合物，其中一種對映體以大于其鏡像分子的濃度存在。
式I化合物還可以溶劑化，尤其是水合。水合可在化合物或包含化合物的組合物的生產(chǎn)期間發(fā)生，或者水合可由于化合物的吸濕性而隨著時間的延長發(fā)生。
式I范圍內(nèi)的某些化合物是被稱作“前藥”的衍生物。措詞“前藥”表示已知直接作用藥物的衍生物，其衍生物較之該藥物具有提高的遞送特性和治療價值，并且通過酶促或化學(xué)過程被轉(zhuǎn)化為活性藥物。前藥是具有代謝可裂解基團(tuán)的本發(fā)明發(fā)明化合物的衍生物，并且通過水解或者在生理條件下在體內(nèi)變?yōu)榫哂兴幬锘钚缘谋景l(fā)明化合物。例如，本發(fā)明化合物的酯衍生物通常是在體內(nèi)而不是體外具有活性。本發(fā)明化合物的其它衍生物以其酸或酸式衍生物的形式具有活性，但是酸式衍生物在哺乳動物機(jī)體中通常具有溶解性、組織相容性或延遲釋放的有利性(參見Bundgard，H.，Design of Prodrug，PP.7-9，21-24，Elsevier，Amsterdam 1985)。前藥包括為本領(lǐng)域的技術(shù)人員眾所周知的酸式衍生物，例如，通過使母酸與適宜的醇反應(yīng)制備的酯，或者通過母酸式化合物與胺反應(yīng)制備的酰胺。衍生自在本發(fā)明化合物上的酸性基團(tuán)的簡單的脂族或芳族酯是優(yōu)選的前藥。在某些情況下，制備雙酯類型前藥例如(酰氧基)烷基酯或((烷氧基羰基)氧基)烷基酯是合乎需要的。有用的前藥是其中Rb是烷基、鏈烯基、炔基或芳烷基的那些前藥。
當(dāng)在任何構(gòu)分或式I中任何變量多次出現(xiàn)時，其每次出現(xiàn)時的定義不受其每次其它出現(xiàn)時的定義的制約。同樣，取代基和/或變量的組合是容許的，條件是這樣的組合產(chǎn)生適宜的化合物。
定義本文所用術(shù)語“烷基”，本身或作為另一基團(tuán)的的部分，除非鏈長另有限制，是指最高達(dá)10個碳原子的直鏈和支鏈基團(tuán)，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、異丁基、戊基、己基、異己基、庚基、4，4-二甲基戊基、辛基、2，2，4-三甲基戊基、壬基或癸基。
本文所用術(shù)語“鏈烯基”，除非鏈長另有限制，意指2-10個碳原子的直鏈或支鏈基團(tuán)，其中在鏈上的兩個碳原子之間至少有一個雙鍵，包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基等。優(yōu)選地，鏈烯基鏈?zhǔn)?-8個碳原子鏈長，最優(yōu)選2-4個碳原子鏈長。
本文所用術(shù)語“炔基”，除非鏈長另有限制，意指2-10個碳原子的直鏈或支鏈基團(tuán)，其中在鏈上的兩個碳原子之間至少有一個三鍵，包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基等。優(yōu)選地，炔基鏈?zhǔn)?-8個碳原子鏈長，最優(yōu)選2-4個碳原子鏈長。
在本文所有情況下，如果有鏈烯基或炔基部分作為取代基，不飽和鍵即乙烯基鍵優(yōu)選不直接連接到氮、氧或硫部分上。
術(shù)語“烷氧基”或“烷基氧基”是指連接到氧原子上的任何上述烷基。典型實例是甲氧基、乙氧基、異丙氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。
本文所用術(shù)語“芳基”，本身或作為另一基團(tuán)的部分，是指在環(huán)部分具有6-12個碳原子、優(yōu)選6-10個碳原子的單環(huán)或雙環(huán)芳族基團(tuán)。典型的實例包括苯基、聯(lián)苯基、萘基或四氫萘基。
本文所用術(shù)語“芳烷基”或“芳基烷基”，本身或作為另一基團(tuán)的部分，是指上面所述具有芳基取代基的C1-6烷基，所述芳基是例如芐基、苯乙基或2-萘基甲基。
本文所用術(shù)語“雜芳基”是指這樣的基團(tuán)，所述基團(tuán)具有5-14個環(huán)原子；在環(huán)排列中共享的6、10或14個π電子，并且含有碳原子和1，2，3或4個氧、氮或硫雜原子(其中雜芳基的實例是噻吩基、苯并[b]噻吩基、萘并[2，3-b]噻吩基、噻蒽基、呋喃基、吡喃基、異苯并呋喃基、苯并唑基、色烯基、呫噸基、phenoxathiinyl、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、中氮茚基、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、異喹啉基、喹啉基、2，3-二氮雜萘基、1，5-二氮雜萘基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、4αH-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、啶基、菲咯啉基、吩嗪基、異噻唑基、吩噻嗪基、異唑基、呋咱基、吩嗪基和四唑基)。
本文所用短語“飽和或部分不飽和雜環(huán)”，本身或作為另一基團(tuán)的部分，是指具有5-14個環(huán)原子的飽和或不飽和環(huán)系，所述環(huán)原子選自碳原子和1、2、3或4個氧、氮或硫雜原子。典型的飽和實例包括吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、哌啶基、哌嗪基、奎寧環(huán)基、嗎啉基和二氧雜環(huán)己基。典型的部分不飽和實例包括吡咯啉基、咪唑啉基、吡唑啉基、二氫吡啶基、四氫吡啶基和二氫吡喃基。這些系統(tǒng)中的任何一個都可以任選與苯環(huán)稠合。
本文所用術(shù)語“雜芳基烷基”和“雜芳烷基”是指連接到烷基上的雜芳基。典型的實例包括2-(3-吡啶基)、3-(2-呋喃基)-正丙基、3-(3-噻吩基)-正丙基和4-(1-異喹啉基)-正丁基。
本文所用術(shù)語“環(huán)烷基”，本身或作為另一基團(tuán)的部分，是指含有3-9個碳原子的環(huán)烷基。典型的實例是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基和環(huán)壬基。
本文所用術(shù)語“環(huán)烷基烷基”或“環(huán)烷基(烷基)”，本身或作為另一基團(tuán)的部分，是指連接到烷基上的環(huán)烷基。典型的實例是2-環(huán)戊基乙基、環(huán)己基甲基、環(huán)戊基甲基、3-環(huán)己基正丙基和S-環(huán)丁基正戊基。
本文所用術(shù)語“環(huán)烯基”，本身或作為另一基團(tuán)的部分，是指含有3-9個碳原子和1-3個碳-碳雙鍵的環(huán)烯基。典型的實例包括環(huán)丙烯基、環(huán)丁烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、環(huán)己二烯基、環(huán)庚烯基、環(huán)庚二烯基、環(huán)辛烯基、環(huán)辛二烯基、環(huán)辛三烯基、環(huán)壬烯基和環(huán)壬二烯基。
本文所用“鹵素”或“鹵代”，本身或作為另一基團(tuán)的部分，是指氯、溴、氟或碘。
本文所用術(shù)語“單烷基胺”或“單烷基氨基”，本身或作為另一基團(tuán)的部分，是指其中一個氫已經(jīng)被上面所定義的烷基取代的基團(tuán)NH2。
本文所用術(shù)語“二烷基胺”或“二烷基氨基”，本身或作為另一基團(tuán)的部分，是指其中兩個氫已經(jīng)被上面所定義的烷基取代的基團(tuán)NH2。
本文所用術(shù)語“羥基烷基乃是指任何上述烷基，其中它們的一個或多個氫被一個或多個羥基部分取代。
本文所用術(shù)語“鹵代烷基”是指任何上述烷基，其中它們的一個或多個氫被一個或多個鹵原子取代。典型的實例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氯乙基、三氟乙基、氟丙基和溴丁基。
本文所用術(shù)語“羧基烷基”是指上述任何烷基，其中它們的一個或多個氫被一個或多個羧酸部分取代。
本文所用術(shù)語“雜原子乃意指氧原子(“O”)、硫原子(“S”)或氮原子(“N”)。將會認(rèn)識到，當(dāng)雜原子是氮時，可以形成NRaRb部分，其中Ra和Rb彼此獨立地是氫或C1-C8烷基，或者與它們連接于其上的氮一起形成飽和或不飽和的5、6或7元環(huán)。
短語“任選取代的”，當(dāng)沒有明確定義時，是指任選被一個或多個獨立地選自下列的基團(tuán)取代羥基、硝基、三氟甲基、鹵素、C1-6烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C1-6亞烷二氧基、C1-6氨基烷基、C1-6羥基烷基、C2-4鏈烯基、C2-4炔基、C6-10芳基、苯氧基、芐氧基、5-10元雜芳基、C1-6氨基烷氧基、氨基、單(C1-4)烷基氨基、二(C1-4)烷基氨基、C2-6烷基羰基氨基、C2-6烷氧基羰基氨基、C2-6烷氧基羰基、C2-6烷氧基羰基烷基、羧基、C2-6羥基烷氧基、(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基、單(C1-4)烷基氨基C2-6烷氧基、二(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基C2-10單(羧基烷基)氨基、雙(C2-10羧基烷基)氨基、C2-6羧基烷氧基、C2-6羧基烷基、羧基烷基氨基、胍基烷基、羥基胍基烷基、氰基、三氟甲氧基或全氟乙氧基。
優(yōu)選的任選取代基包括獨立地選自下列的一個或多個取代基硝基、羥基、羧基、C1-4烷氧基、C1-4烷基、鹵素、C1-4鹵代烷基、C1-4烷硫基、硫基、氨基、單(C1-4)烷基氨基和二(C1-4)烷基氨基。
本文所用“生物樣本”是指含有或包括細(xì)胞或組織物質(zhì)例如從個體分離的細(xì)胞或生物液體的樣本。
“個體”可以是哺乳動物，例如大鼠、小鼠、猴子或人，這些動物已經(jīng)是治療、觀察或試驗的對象。生物樣本的實例包括，例如，痰、血液、血細(xì)胞(例如白血細(xì)胞)、羊膜液、血漿、精液、骨髓、組織或細(xì)針抽吸活檢樣本、尿、腹膜液體、胸膜液體和細(xì)胞培養(yǎng)物。生物樣本也可以包括組織切片，例如用于組織學(xué)目的的冷凍切片。試驗生物樣本是作為分析、監(jiān)測和觀察對象的生物樣本。對照生物樣本可以是用于試驗生物樣本的陽性對照或陰性對照。通常，對照試驗樣本含有與試驗生物樣本同樣類型的有意義的組織、細(xì)胞和/或生物液體。
“細(xì)胞”是指適合檢測方法的靈敏度的至少一個細(xì)胞或兩個以上細(xì)胞。適合于本發(fā)明的細(xì)胞可以是細(xì)菌的，但優(yōu)選是真核的，而最優(yōu)選是哺乳動物的。
本文所用“mdm2”或“hdm2”基因意指鼠源雙微體2基因，和在其它動物中發(fā)現(xiàn)的同源基因。這種基因是轉(zhuǎn)錄因子腫瘤蛋白p53的靶基因。其編碼蛋白MDM2或HDM2。這種基因的過度表達(dá)能夠?qū)е履[瘤蛋白p53的過度失活，減弱了它的腫瘤抑制因子功能。已經(jīng)從腫瘤和正常組織中分離出了40多個可變剪接轉(zhuǎn)錄子變體。
本文所用“MDM2乃或“HDM2”意指作為mdm2癌基因表達(dá)結(jié)果獲得的蛋白。在該術(shù)語的含義內(nèi)，能夠理解MDM2包括由mdm2編碼的所有蛋白、它們的突變型、它們的可變剪接蛋白和它們的磷酸化蛋白。另外，如本文所用，可以理解術(shù)語“MDM2”包括其它動物的MDM2同源體(例如HDM2)。
“MDM2”或“HDM2乃蛋白是核內(nèi)磷蛋白，其結(jié)合并抑制腫瘤蛋白p53的轉(zhuǎn)錄，作為自身調(diào)節(jié)的負(fù)反饋環(huán)。這種蛋白具有E3遍在蛋白連接酶活性，其將腫瘤蛋白p53導(dǎo)向蛋白酶體的降解。這種蛋白通過與其它蛋白相互作用，還影響細(xì)胞周期、編程性細(xì)胞死亡和腫瘤發(fā)生，所述其它蛋白包括成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤1和核糖體蛋白L5。示例性“MDM2”包括人MDM2同種型，例如由GenBank蛋白ID所列的那些NP_002383、NP_006869、NP_006870、NP_006871、NP_006872、NP_003873，以及它們的結(jié)構(gòu)和功能多態(tài)現(xiàn)象?！岸鄳B(tài)現(xiàn)象”是指在種群個體中特別遺傳座上的一組遺傳變體。MDM2還包括其它動物中的MDM2的orthologs，所述其它動物包括鼠、小鼠、豬、狗和猴子。
p21waf1/cip1基因是指細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑1A的基因。這種基因編碼有效的細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑。編碼的蛋白結(jié)合并抑制細(xì)胞周期蛋白-CDK2或-CDK4復(fù)合物并抑制其活性，因此在G1起著細(xì)胞周期進(jìn)展調(diào)節(jié)因子的作用。這種基因的表達(dá)受到腫瘤抑制因子蛋白p53的緊密控制，通過這種控制，所述蛋白介導(dǎo)p53細(xì)胞依賴性周期G1期停滯，以響應(yīng)各種應(yīng)力刺激。由p21waf1/cip1編碼的蛋白能夠與增殖性細(xì)胞核抗原(PCNA)，DNA聚合酶輔助因子相互作用，并在S期DNA復(fù)制和DNA損害修復(fù)中起調(diào)節(jié)作用。這樣的基因的實例包括兩種可變剪接變體，GenBank cDNA編號NM_000389和NM_078467，其編碼人的同一蛋白?！皃21waf1/cip1基因”還包括其它動物中的人p21waf1/cip1基因的orthologs，所述其它動物包括大鼠、小鼠、豬、狗和猴子。
“p53”或“TP53”或“腫瘤蛋白p53”都是指在細(xì)胞周期特別是從G0到G1的轉(zhuǎn)換中的調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵的作用。然而，發(fā)現(xiàn)在正常細(xì)胞中非常低的水平上，在各種轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系中，它是以高量表達(dá)的，并且據(jù)信促進(jìn)轉(zhuǎn)化和癌變(malignancy)。p53是含有DNA結(jié)合、寡聚和轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域的DNA結(jié)合蛋白。其作為四聚體結(jié)合到p53結(jié)合位點并激活抑制生長和/或侵入的下游基因的表達(dá)，由此起著腫瘤抑制因子的作用。通常發(fā)生于若干不同的人類癌癥中的P53的突變體，未能結(jié)合一致性DNA結(jié)合位點，由此造成腫瘤抑制因子活性的喪失。TP53基因的改變不但作為體細(xì)胞突變發(fā)生于人類惡性腫瘤中，而且作為種系突變發(fā)生于某些具有Li-Fraumeni綜合癥的家族中。示例性“p53”包括人p53，例如GenBank蛋白ID所列NP_000537及其它的結(jié)構(gòu)和功能多態(tài)現(xiàn)象。P53還包括其它動物中的p53的orthologs，所述其它動物包括大鼠、小鼠、豬、狗和猴子。
本文所用短語“抗腫瘤劑”意指被用于治療或預(yù)防癌癥或包括細(xì)胞的失控增殖和生長的其它病癥的任何劑?？鼓[瘤劑包括抗癌癥劑。
本文所用短語“接觸一種或多種蛋白”意指將溶液中的本發(fā)明化合物與一種或多種目標(biāo)蛋白接觸。式I化合物和一種或多種目標(biāo)蛋白可以一同在水溶液、非水溶液或水溶液與非水溶液的組合的溶液中。其它蛋白可以與式I化合物和目標(biāo)蛋白一起存在于溶液中。其它無機(jī)或有機(jī)分子可以存在于該溶液中。這樣的無機(jī)和有機(jī)分子包括但不限于NaCl、HEPES和辛基葡糖苷。所述溶液可以在動物細(xì)胞內(nèi)或在動物細(xì)胞外。
本文所用短語“抑制結(jié)合”意指阻止或減少一種或多種分子、肽、蛋白、酶或受體的直接或間接的結(jié)合；或者阻止或減輕一種或多種分子、蛋白、酶或受體的正?；钚?。
本文所用短語“誘導(dǎo)編程性細(xì)胞死亡”意指直接或間接引起動物起源的細(xì)胞進(jìn)行編程性細(xì)胞死亡-有控制的或按程序的細(xì)胞死亡。
本文所用術(shù)語“HDM2抑制劑”是用于描述，在實施例35描述的測定中抑制HDM2功能的活性劑。
本文所用短語“抑制蛋白MDM2與p53之間結(jié)合的小分子乃是指抑制兩種蛋白p53與MDM2之間結(jié)合的小有機(jī)化合物，即具有50以上而小于約3000的分子量的小有機(jī)化合物。“抑制蛋白MDM2與p53之間結(jié)合的小分子”的實例包括但不限于描述于WO2003041715或WO2004096134中的苯并二氮雜二酮類化合物、合成查耳酮類化合物、降冰片烷衍生物、順式咪唑啉衍生物(Nutlins)、吡唑烷二酮磺酰胺和1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮，以及色氨酸衍生物(Buolamwini等人，2005，Curr Cancer Drug Targets.5(1)57-68)。如本文所用，“放射療法”或“放射治療”是指包括將個體或細(xì)胞暴露于放射中的治療。這樣的療法或治療對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員是已知的。放射治療的適宜方案與臨床治療中已經(jīng)使用的方案相類似，其中放射治療可以單獨或者與其它化療聯(lián)合使用。
式I化合物的可藥用鹽(以水或油可溶或可分散產(chǎn)物的形式)包括例如由無機(jī)或有機(jī)酸或堿形成的常規(guī)無毒鹽或季氨鹽。這樣的酸加成鹽的實例包括乙酸鹽、己二酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、葡糖酸氫鹽(digluconate)、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、延胡索酸鹽、葡糖庚酸鹽、甘油基磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、溴酸鹽、碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽和十一酸酯。堿式鹽包括銨鹽、堿金屬鹽例如鈉和鉀鹽、堿土金屬鹽例如鈣和鎂鹽、與有機(jī)堿例如二環(huán)己胺、N-甲基-D-葡糖胺形成的鹽和與氨基酸例如精氨酸、賴氨酸形成的鹽，等等。同樣，可以將含氮的堿基用低烷基鹵這樣的劑季銨化，所述低烷基鹵例如甲基、乙基、丙基、丁基氯、溴碘；二烴基硫酸鹽例如二甲基、二乙基、二丁基、和二戊基硫酸鹽；長鏈鹵化物例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂酰氯、溴和碘；芳烷基鹵例如芐基和苯乙基溴等。優(yōu)選的形成酸式加成鹽的酸包括HCl、乙酸、三氟乙酸和富馬酸。
組合物和方法的使用本發(fā)明組合物包括藥物組合物，其中包含式I化合物(其中R1-R11和X如上面所定義)和一種或多種可藥用賦形劑。優(yōu)選的本發(fā)明組合物是包含選自上面定義的優(yōu)選的式I化合物和一種或多種可藥用賦形劑的組合物。
可以將本發(fā)明藥物組合物給藥于能夠感受本發(fā)明化合物的有益效果的任何動物。在這些動物中最主要的是人，雖然本發(fā)明并非意圖受如此限制。
本發(fā)明藥物組合物可以用達(dá)到其預(yù)期目的的任何方法給藥。例如，給藥可以通過皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、頰或眼途徑，直腸、腸外、全身內(nèi)、陰道內(nèi)、局部(如通過粉劑、軟膏劑、滴劑或經(jīng)皮斑貼劑)，或者作為口或鼻噴霧。另外，或者同時，給藥可以通過口服途徑。給藥劑量取決于年齡、健康狀況和接受者的體重、同時治療的種類(如果有的話)、治療頻率和要求的效果的性質(zhì)。
除了藥物活性化合物以外，新藥物制劑可以含有使用的可藥用載體例如賦形劑和輔助劑，所述可藥用載體有助于將活性化合物制備成可以藥用的制劑。
本發(fā)明藥物制劑可以用已知的方法制備，例如通過常規(guī)的混合、成粒、制成糖衣丸、溶解或凍干方法。因此，口服使用的藥物制劑這樣獲得將活性化合物與固體賦形劑混合，任選將混合物粉碎并加工顆粒混合物，加入適宜的(如果需要或必要)后，獲得片劑或糖衣丸內(nèi)核。
適宜的賦形劑是，特別是，填充劑例如糖類，例如乳糖或蔗糖，甘露糖醇或山梨糖醇，纖維素制劑和/或磷酸鈣，例如磷酸三鈣或磷酸氫鈣，以及粘合劑例如淀粉糊，用例如玉米淀粉，小麥淀粉，大米淀粉，土豆淀粉，明膠，黃蓍，甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素，羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要，可以加入崩解劑，例如上面所述淀粉以及還有羧甲基淀粉，交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮，瓊脂或者藻酸或它的鹽，例如藻酸鈉。輔助劑是，尤其是，流動調(diào)節(jié)劑和滑潤劑，例如硅石粉，滑石粉，硬脂酸或它的鹽，例如硬脂酸鈉或硬脂酸鈣，和/或聚乙二醇。可以將糖衣丸內(nèi)核包以適宜的包衣，所述包衣，如果需要，是抗胃液的。出于這種目的，可以使用濃縮的糖溶液，所述糖溶液含有阿拉伯膠，滑石粉，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇和/或二氧化鈦，天然漆溶液和適宜的有機(jī)溶劑或溶劑混合物。為了制備抗胃液的包衣，適宜的纖維素制劑例如乙酰纖維素鄰苯二甲酸酯或羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯可以予以使用。例如，為了辨認(rèn)或表現(xiàn)活性化合物劑量的組合的特征，可以將顏料或色素加到片劑或糖衣丸包衣中。
可以口服使用的其它藥物制劑包括由明膠制成的嵌合型(push-fit)膠囊，以及用明膠和增塑劑例如甘油和山梨糖醇制成的軟的密封膠囊。嵌合型(push-fit)膠囊可以含有顆粒形式的活性化合物，其可以與填充劑例如乳糖，粘合劑例如淀粉，和/或滑潤劑例如滑石粉或硬脂酸鎂以及任選穩(wěn)定劑混合。在軟膠囊中，將活性化合物優(yōu)選溶解或懸浮于適宜的液體例如脂肪油或液體石蠟中。此外，可加入穩(wěn)定劑。
用于胃腸外給藥的適宜的制劑包括水溶形式的活性化合物，例如水溶性鹽，堿性溶液和環(huán)糊精包涵復(fù)合物的水溶液。特別優(yōu)選的堿式鹽是制備的銨鹽，例如用tris、膽堿氫氧化物、Bis-Tris丙烷、N-甲基葡糖胺或精氨酸制成的銨鹽。一種或多種修飾的或未修飾的環(huán)糊精可以被用來穩(wěn)定和增加本發(fā)明化合物的溶解性。適用于本發(fā)明目的的環(huán)糊精公開于U.S.專利4,727,064、4,764,604和5,024,998中。
另外，可以給藥作為適宜的油狀注射懸浮液的活性化合物的懸浮液。適宜的親油溶劑或載體包括脂肪油，例如，芝麻油，或合成脂肪油，例如油酸乙酯或甘油三酯或聚乙二醇-400(化合物在PGE-400中是可溶的)。水注射懸浮液可以含有增加懸浮液粘度的物質(zhì)，例如，羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇和/或葡聚糖。任選地，懸浮液也可以含有穩(wěn)定劑。
用于口服給藥的液體劑型包括可藥用乳劑、溶液、懸浮液、糖漿和酏劑。除了活性化合物以外，液體劑型可以含有本領(lǐng)域通常使用的惰性稀釋劑例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特別是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇和脫水山梨糖醇的脂肪酸酯以及它們的混合物。
除了活性化合物以外，懸浮液可以含有懸浮劑，例如，乙氧基化異十八烷醇，聚氧乙烯山梨糖醇和脫水山梨糖醇酯，微晶纖維素，偏氫氧化鋁，膨潤土，瓊脂和黃蓍，以及它們的混合物。
局部給藥包括給藥于皮膚或粘膜，包括肺和眼的表面。包括吸入在內(nèi)的用于局部給藥的組合物，可以制備為加壓或未加壓的干粉。在未加壓的粉末組合物中，可以將粉末形式的活性組分與較大尺寸的可藥用惰性載體混合使用，所述可藥用惰性載體具有例如直徑最高達(dá)100微米的尺寸。適宜的惰性載體包括糖例如乳糖。合乎需要地，至少95％重量的活性組分的顆粒具有0.01-10微米的有效粒徑。
或者，組合物可以被加壓并含有壓縮氣體，例如氮氣或液化的氣體推進(jìn)劑。液化的推進(jìn)劑介質(zhì)以及當(dāng)然全部組合物優(yōu)選是這樣的，即活性組分溶解于其中決不能達(dá)到實質(zhì)程度。加壓的組合物也可以含有表面活性劑。表明活性劑可以是液體或固體非粒子表面活性劑，或者可以是固體陰離子表面活性劑。優(yōu)選使用鈉鹽形式的固體陰離子表面活性劑。
局部給藥的另外形式是給藥于眼睛。將本發(fā)明化合物和組合物以可藥用眼用載體遞送，這樣將化合物與眼表面保持接觸足夠的時間期間，以便使化合物穿透眼的角膜和內(nèi)部區(qū)域，例如眼的前房，后房、玻璃體、眼房水、玻璃體水、角膜、虹膜/睫毛、晶狀體、脈絡(luò)膜/視網(wǎng)膜和鞏膜?？伤幱醚塾幂d體可以，例如，是軟膏、菜子油和包囊材料。
用于直腸或陰道給藥的組合物優(yōu)選是將本發(fā)明化合物與適宜的非刺激性賦形劑或載體混合制備的栓劑，所述賦形劑或載體例如可可油、聚乙二醇或栓劑蠟，它們在室溫是固體而在體溫下是液體，并由此在直腸或陰道腔體內(nèi)融化而釋放藥物。
本發(fā)明組合物也可以脂質(zhì)體形式給藥。如本領(lǐng)域已知，脂質(zhì)體一般得自磷脂或其它脂質(zhì)物質(zhì)。脂質(zhì)體是由分散于水介質(zhì)中的單或多層狀水合液晶形成的。任何能夠形成脂質(zhì)體的無毒可生理接受的可代謝的脂質(zhì)都能夠予以使用。除了本發(fā)明化合物外，脂質(zhì)體形式的本發(fā)明組合物可以含有穩(wěn)定劑、防腐劑、賦形劑等。優(yōu)選的脂質(zhì)是天然和合成的磷脂和磷脂酰膽堿(卵磷脂)。形成脂質(zhì)體的方法在本領(lǐng)域是已知的(參見例如Prescott，等人，Meth.Cell Biol.1433(1976))。
本發(fā)明化合物可以與一種或多種另外的抗腫瘤劑聯(lián)合使用。可以將本發(fā)明化合物與其它抗腫瘤劑一起配制，以便將含有式I化合物和一種或多種另外的抗腫瘤劑的藥物組合物給藥于動物?；蛘?，可以將式I化合物作為與含有一種或多種另外的抗腫瘤劑的組合物分開的藥物組合物給藥?？梢耘c本發(fā)明化合物聯(lián)合給藥的抗腫瘤劑包括選自下列化合物和抗腫瘤劑類別的化合物1.氟嘧啶類，例如5-FU(5-氟尿嘧啶)、氟脫氧尿苷、替加氟、5’-脫氧氟尿苷(5’-脫氧氟尿苷)、UFT和S-1卡培他濱；2.嘧啶核苷類，例如脫氧胞苷、阿糖胞苷、阿糖胞苷(Cytarabine)、阿扎胞苷、5-氮雜胞嘧啶、吉西他濱和5-氮雜胞嘧啶-阿拉伯糖苷；3.嘌呤類，例如6-巰嘌呤、巰鳥嘌呤、巰唑嘌呤、別嘌呤、克拉屈濱、氟達(dá)拉濱、噴司他丁和2-氯腺苷；4.鉑類似物，例如順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、四鉑、鉑-DACH、奧馬鉑和CI-973、JM-216；5.蒽環(huán)類/蒽二酮類，例如多柔比星、柔紅霉素、表柔比星、伊達(dá)比星和米托蒽醌；6.表鬼臼毒素類，例如依托泊苷和替尼泊苷；7.喜樹堿類，例如伊立替康、托泊替康、9-氨基喜樹堿、10，11-亞甲二氧基喜樹堿、9-硝基喜樹堿和TAS 103；8.激素類和激素類似物，例如己烯雌酚、他莫昔芬、托瑞米芬(Toremefine)、Tolmudex、Thymitaq、氟他胺、氟甲睪酮、比卡魯胺、非那雄胺、雌二醇、曲沃昔芬、地塞米松、醋酸亮丙瑞林、雌莫司汀、曲洛昔芬、甲羥孕酮、醋酸甲地孕酮、氨魯米特、睪內(nèi)酯、睪酮、二丙酸己烯雌酚和羥孕酮；9.酶類、蛋白類和抗體類，例如天冬酰胺酶、白介素、干擾素、亮丙立德和培門冬酶；10.長春花堿屬生物堿類，例如長春新堿、長春堿、長春瑞濱和長春地辛；11.紫杉烷類，例如紫杉醇、泰索帝和多西他賽。
可以與本發(fā)明化合物聯(lián)合使用的抗腫瘤劑也包括選自下列基于作用機(jī)制的類別的化合物1.抗激素類-參見上面激素和激素類似物分類，阿那曲唑、戈舍瑞林和氨魯米特。
2.葉酸抗代謝物類，例如甲氨蝶呤、亞葉酸、氨蝶呤、三甲曲沙、甲氧芐啶、pyritrexim、乙胺嘧啶、依達(dá)曲沙和MDAM；3.抗微管劑，例如Taxanes、長春花堿屬生物堿和Vinorelbine；4.烷化劑(經(jīng)典的或非經(jīng)典的)，例如氮芥類(氮芥、苯丁酸氮芥、美法侖、烏拉莫司汀)、Oxazaphosphorines(異環(huán)磷酰胺、環(huán)磷酰胺、培磷酰胺、Trophosphamide)、烷基磺酸鹽類(白消安)、亞硝基尿類(卡莫司汀、洛莫司汀、鏈佐星)、塞替派和達(dá)卡巴嗪；5.抗代謝藥類，例如上面所列的嘌呤類、吡啶類和核苷類似物；6.抗生素類，例如蒽環(huán)類/蒽二酮類、博來霉素、放線霉素D、絲裂霉素、普卡霉素、噴司他丁和鏈佐星；7.拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑類，例如喜樹堿類(Topo I)、表鬼臼毒素類、AMSA、VP-16和橢圓玫瑰樹堿類(Topo I)；8.抗病毒類，例如AZT、阿西洛韋、噴昔洛韋、泛昔洛韋(Fam環(huán)vir)、二脫氫二脫氧胸苷、二脫氧胸苷、-SddC、更昔洛韋、二脫氧肌苷和病毒特異性蛋白酶抑制劑類；9.雜類細(xì)胞毒害劑，例如羥基脲、米托坦、融合毒素類、PZA、苔蘚抑素、類視色素、丁酸和衍生物、戊聚糖、夫馬潔林、米托蒽醌、骨髓生長因子和丙卡巴肼。
本發(fā)明化合物適用于治療失控的增殖和/或癌癥。本發(fā)明化合物可以產(chǎn)生有益的抑制和/或細(xì)胞毒效應(yīng)。細(xì)胞抑制效應(yīng)包括抑制細(xì)胞進(jìn)一步生長和/或細(xì)胞分裂。細(xì)胞毒效應(yīng)包括通過包括編程性細(xì)胞死亡和細(xì)胞壞死。尤其是，本發(fā)明化合物適用于治療下列癌癥乳房癌、卵巢癌、頸癌、子宮內(nèi)膜癌、絨膜癌、軟組織肉瘤、骨肉瘤、橫紋肌肉瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、頭和頸癌、肺和支氣管源性癌、腦癌、成神經(jīng)細(xì)胞癌、食道癌、結(jié)腸直腸腺癌、膀胱癌、尿路上皮癌、白血病、淋巴癌、惡性黑素瘤、口鱗狀癌、成肝細(xì)胞瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、星形細(xì)胞瘤、成髓細(xì)胞瘤、尤因肉瘤、脂瘤、肌肉瘤、惡性成纖維細(xì)胞組織瘤、惡性施萬鞘瘤、睪丸癌、甲狀腺癌、維爾姆斯瘤、胰腺癌、結(jié)腸直腸腺癌、舌癌、胃癌和鼻咽癌。優(yōu)選地，本發(fā)明用于治療選自下列的癌癥乳房癌、絨膜癌、軟組織肉瘤、骨肉瘤、橫紋肌肉瘤、脂瘤和肌肉瘤。上面所列癌癥只是意指例證說明性的，而非意指限制性或排他性的清單。
另外，本文所述化合物和組合物可用于治療任何不希望的或有害的疾病，所述疾病產(chǎn)生于抑制p53或誘導(dǎo)編程性細(xì)胞死亡、引起細(xì)胞死亡或調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的其它細(xì)胞蛋白的功能的HDM2蛋白或MDM2蛋白。
本發(fā)明也用于抑制p53與HDMX和/或MDMX之間的相互作用。MDMX，也被稱作MDM4，是與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)有關(guān)的細(xì)胞蛋白。例如，參見Riemenschneider等人，Cancer Res.59(24)6091-6(1999)。
當(dāng)與引起或誘導(dǎo)DNA損害的活性劑一起給藥時，HDM2和/或MDM2與p53的相互作用的抑制劑也可以用于治療癌癥，抑制細(xì)胞生長/復(fù)制，并誘導(dǎo)細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡和壞死(參見Chen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95195-200(1998))。通過與引起或誘導(dǎo)DNA損害的活性劑一起給藥，本發(fā)明化合物可以用于治療癌癥，抑制細(xì)胞生長/復(fù)制，并誘導(dǎo)細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡和壞死。誘導(dǎo)細(xì)胞DNA損害的活性劑包括放射和化學(xué)劑。放射可以內(nèi)部或外部給予?；瘜W(xué)劑包括引起或誘導(dǎo)DNA損害的任何化合物或成分(element)。
本發(fā)明化合物可以以約0.01mg/kg-約300mg/kg、優(yōu)選1.0mg/kg-100mg/kg體重的劑量范圍內(nèi)的有效量給藥。本發(fā)明化合物可以以單次日劑量給藥，或者將總?cè)談┝糠殖?、3或4次均分劑量每天給藥。
化合物的制備本發(fā)明化合物可以利用烏吉特縮合反應(yīng)的改型，按照反應(yīng)方案I以及Keating和Armstrong，J.Am.Chem.Soc.，1182574-2583(1996)中詳細(xì)描述的合成途徑來制備。適當(dāng)取代或未取代的氨基羧酸1、胺3和醛2可用于制備本發(fā)明化合物，其中R1、R2、R5、R6、R7、R8、R9和R10如上面所定義。當(dāng)R3X的選擇是除氫或電子對以外的基團(tuán)時，可以在堿例如NaH和溶劑例如THF和/或催化劑例如碘化四丁基銨存在下，用R3X-鹵素引入R3X。當(dāng)R3X是氫時，通過使用三氯氧化磷和適當(dāng)取代的胺，將化合物7轉(zhuǎn)變?yōu)殡?。
反應(yīng)方案1常規(guī)二氮雜合成 或者，可以用靛紅酸酐化學(xué)制備本發(fā)明化合物。將任選取代的呋喃-2，5-二酮(9)用三甲基甲硅烷基疊氮化物處理，得到靛紅酸酐10。然后在溶劑例如吡啶中將化合物10用任選取代的氨基酯處理，并且在密封的管中于125℃加熱1.5小時，繼之用堿例如tBuOK處理，得到化合物11。然后將化合物11用堿例如氫化鈉繼之用適當(dāng)取代的烷基鹵處理。然后于0℃在溶劑例如無水DMF中，將形成的產(chǎn)物用雙(三甲基甲硅烷基)氨基化鋰處理。10分鐘后，加入適當(dāng)取代的烷基鹵，得到最終二氮雜結(jié)構(gòu)12?；蛘?，在溶劑例如DMF中，將化合物10用堿例如NaH處理，繼之加入適當(dāng)取代的烷基鹵。然后在溶劑例如吡啶中將形成的化合物13用任選取代的氨基酯處理，并且在密封的管中于125℃加熱1.5小時，繼之用堿例如tBuOK處理，得到化合物12和14。
反應(yīng)方案2另一種二氮雜合成#1 或者，可以從任選取代的α-鹵代酯開始制備本發(fā)明化合物。在堿例如K2CO3存在下，在溶劑例如乙腈中，將化合物15用任選取代的胺處理，得到化合物16。在堿例如二異丙基乙胺存在下，在溶劑例如二氯甲烷中，將化合物16用任選取代的α，β-不飽和酰氯處理，得到化合物17。在溶劑例如DMF和堿例如二異丙基乙胺中，將化合物17用甲醇中的氫氧化鈉處理，繼之在偶聯(lián)劑例如PyBrOP和HOBt存在下用任選取代的胺偶聯(lián)，得到化合物18。隨后將化合物18用三氟甲磺酸銀處理，繼之加入苯硒基溴和DMF。然后，在溶劑例如THF存在下加入過氧化氫，得到化合物19。如果R3X是氫，可以在堿例如NaH和溶劑例如DMF存在下，用R3X-鹵素引入增溶基團(tuán)。
反應(yīng)方案3另一種二氮雜合成#2 下面的實施例例證說明而不是限制本發(fā)明化合物、方法和組合物。其它適宜的改良，和臨床治療中通常遇到的各種條件和參數(shù)的修改，其為本領(lǐng)域技術(shù)人員所顯而易見，都在本發(fā)明的實質(zhì)和范圍之內(nèi)。
實施例通過下面的一般方法合成實施例中的化合物。
常規(guī)合成二氮雜?；衔锏囊话惴椒▽⒁胰?0.20mmol)和胺(0.20mmol)在甲醇(2.0mL)中的溶液在室溫攪拌30分鐘。向該溶液中加入環(huán)己烯-1-異腈(0.21mmol)在己烷中的溶液，繼之加入芳基或雜芳基氨基酸(0.20mmol)。將溶液在室溫攪拌3天。緩慢加入乙酰氯(0.2mL)。然后將溶液晃動另外3小時并在真空下濃縮。將殘余物用預(yù)填充的硅膠筒純化(二氯甲烷至10％乙酸乙酯在二氯甲烷中的混合物)。將殘余物用預(yù)填充的硅膠筒純化(8％乙酸乙酯在二氯甲烷中的混合物至10％甲醇在二氯甲烷中的混合物)，得到本標(biāo)題化合物。
在1位上將二氮雜烷基化的一般方法在氮氣氛下把烷基化劑(1.5當(dāng)量)加到烘箱干燥的配備以攪拌棒的兩英錢瓶中。加入將要進(jìn)行烷基化的二氮雜(1.0當(dāng)量)，并將所得混合物溶解于溶劑例如DMF中。加入碳酸鉀(2.0當(dāng)量)，繼之加入碘化四丁基銨(催化劑)。把反應(yīng)混合物蓋緊并在80℃加熱過夜。將反應(yīng)過濾、濃縮，并裝載到1000μm TLC板上。用10％EtOAc/己烷洗脫兩次后，分離下面的帶，得到1-烷基化的化合物。
合成脒的一般方法將1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮(0.181mmol)、4-(N，N-二甲基氨基)吡啶(122mg，1.0mmol)和三氯氧化磷(350μL，1.4mmol)在二氯乙烷(4mL)中的溶液在密封的管中于135℃攪拌2小時。將該溶液冷卻至室溫后，真空除去過量三氯氧化磷。然后將殘余物溶解在無水CH2Cl2(6mL)中，在0℃于氬氣氛下，在攪拌下滴加胺(2-10當(dāng)量)。10分鐘后，讓該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?。然后將溶劑蒸發(fā)，通過硅膠色譜純化殘余物(EtOAc/己烷，1∶1)，獲得了本標(biāo)題化合物，為無色固體。
另一合成二氮雜的一般方法#1將靛紅酸酐(1mmol)與氨基酸酯(1.3mmol)在吡啶(3mL)中的溶液在密封的管中于125℃攪拌1.5小時。冷卻至室溫后，真空除去溶劑。通過硅膠色譜法純化(EtOAc/己烷，1∶1)，獲得了適當(dāng)取代的N-(2-氨基苯甲酰基)-2-(芳基)甘氨酸甲酯，將其溶解在THF(10mL)中。然后在-78℃于氬氣氛下緩慢地加入叔丁醇鉀(1M在THF中的溶液，1.1mL)。讓該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝亍?4小時后，用乙酸(150μL)中止該反應(yīng)，然后將溶劑蒸發(fā)至干，將殘余物用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌，干燥(Na2SO4)，并減壓濃縮至干。通過硅膠色譜法純化(AcOEt/己烷，1∶1)，獲得了二氮雜?；衔铮瑸闊o色棱柱狀物。或者，將靛紅酸酐(10)用堿例如NaH在溶劑例如DMF中于0℃-室溫處理，然后加入取代的鹵代衍生物以生成(13)。將其用氨基酯(1.5當(dāng)量)于80-120℃處理，然后在-20℃至室溫加入t-BuOK，生成本標(biāo)題化合物。
另一合成二氮雜的一般方法#2將α-鹵代酯(10mmol)、任選取代的胺(10mmol)、K2CO3(20mmol)和TBAI(1.35mmol)在乙腈中的溶液于45℃攪拌12小時。將該粗的混合物用乙酸乙酯從水中萃取，然后通過硅膠色譜純化(EtOAc∶己烷5∶95)。將產(chǎn)物(3.0mmol)用DIEA(11.5mmol)在DCM(30mL)中處理，然后在0℃加入任選取代的α，β-不飽和胺(3.25mmol)。將該粗的反應(yīng)混合物用EtOAc從水中萃取，然后通過硅膠色譜純化(己烷∶EtOAc8∶1)，獲得了相應(yīng)的產(chǎn)物。將該產(chǎn)物(1.0mmol)用NaOH(15.0mmol)在THF和甲醇中于室溫皂化，然后用EtOAc從1N HCl中萃取。之后將該酸(0.88mmol)用氯化銨(1.76mmol)、PyBrOP(1.32mmol)、HOBt(1.32mmol)和DIEA(3.52mmol)在DMF(3mL)中于室溫處理，攪拌2小時。將該粗的混合物用EtOAc從水中萃取，然后通過硅膠色譜純化(AcOEt∶己烷1∶3)。將所得酰胺(3.3mmol)與三氟甲磺酸銀(6.6mmol)在乙腈(120mL)中于室溫攪拌。加入在DMF(5.2mL)中的苯硒基溴(6.53mmol)，并攪拌2小時。將粗的殘余物用EtOAc從水中萃取，通過色譜法純化(AcOEt∶己烷1∶3)。將相應(yīng)的產(chǎn)物(0.49mmol)用過氧化氫(500μL，30％的水溶液)在THF中于室溫處理，攪拌20分鐘。將該粗的混合物用EtOAc從1N碳酸氫鈉中萃取，然后通過硅膠色譜純化(AcOEt∶己烷∶DCM 1∶2∶2)，獲得了本標(biāo)題化合物。
二氮雜的二烷基化的一般方法在20℃，將堿例如碳酸鉀(0.88mmol)加到二氮雜(11)(0.82mmol)在無水DMF(4mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中。10分鐘后，加入任選取代的烷基鹵(0.96mmol)，繼續(xù)在25-70℃攪拌1-12小時。然后將該反應(yīng)用冰冷的水(30mL)稀釋，將殘余物過濾，用水洗滌，然后真空干燥。接下來，在0℃將堿例如K2CO3(1.1當(dāng)量)加到在無水溶劑例如DMF(2mL)內(nèi)的該產(chǎn)物中。10分鐘后，加入任選取代的烷基鹵(0.32mmol)，繼續(xù)在25-80℃攪拌5-24小時。然后用乙酸(50μL)中止反應(yīng)。將粗產(chǎn)物通過硅膠色譜純化(EtOAc/己烷，1.1)。從乙醇/乙醚中重結(jié)晶，獲得了化合物12，為無色晶體。
實施例15-{(3S-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸
a)5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸叔丁酯本標(biāo)題化合物是按照用于常規(guī)合成二氮雜?；衔锏囊话惴椒ǎ缓蟀凑沼糜谠?位將二氮雜?；衔锿榛囊话惴椒ê铣傻馁|(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C32H33Cl2IN2O4的計算值706.09；實測值707.1(M+H)。
b)5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸將5-{(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸叔丁酯(1.0g，1.4mmol)于室溫溶解于20％TFA[10mL]在二氯甲烷中的溶液2小時。把反應(yīng)濃縮并將產(chǎn)物用色譜法純化(己烷∶EtOAc 1∶1)，得到本標(biāo)題化合物(0.88g，96％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.75(d，J＝2.3Hz.1H)，7.62-7.56(m，3H)，7.39(d，J＝8.6Hz，2H)，7.00(d，J＝8.6Hz，2H)，6.92(d，J＝8.6Hz，1H)，6.58-6.56(m，2H)，6.21-6.14(m，1H)，5.27(s，1H)，4.24-4.15(m，1H)，3.69-3.61(m，1H)，1.80(t，J＝7.2Hz，2H)，1.63(d，J＝7.2Hz，3H)，1.56-1.21(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESIpos.)C28H25Cl2IN2O4的計算值650.02；實測值650.8(M+H)。
實施例25-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-乙炔基-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.60(d，J＝8.6Hz，2H)，7.53(d，J＝2.1Hz，1H)，7.42-7.33(m，3H)，7.12(d，J＝8.6Hz，1H)，6.99(d，J＝8.4Hz，2H)，6.57(d，J＝7.7Hz，2H)，6.23-6.15(m，1H)，5.29(s，1H)，4.31-4.22(m，2H)，3.78-3.68(m，1H)，2.20-2.12(m，2H)，1.63(d，J＝7.0Hz，3H)，1.41-1.38(m，2H)，1.27-1.22(m，2H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C30H26Cl2N2O4的計算值548.13；實測值548.9(M+H)。
實施例35-[4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-(3S)-3-(4-三氟甲基-苯基)-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.94(d，J＝2.1Hz，1H)，7.50(d，J＝8.4Hz，2H)，7.44(dd，J＝8.6Hz，2.1Hz，1H)，7.33(d，J＝8.6Hz，2H)，7.18(d，J＝8.4Hz，2H)，6.68(d，J＝8.4Hz，2H)，6.57(d，J＝8.6Hz，2H)，6.46-6.39(m，1H)，5.39(s，1H)，4.39-4.31(m，1H)，3.70-3.62(m，1H)，2.37(t，J＝7.0Hz，2H)，1.75(d，J＝7.2Hz，3H)，1.67-1.58(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H25ClF3IN2O4的計算值684.05；實測值684.8(M+H)。
實施例45-[4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-(3S)-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.89(d，J＝2.1Hz，1H)，7.48(d，J＝8.4Hz，2H)，7.43(dd，J＝8.6Hz，2.1Hz，1H)，7.32(d，J＝8.6Hz，2H)，6.75(d，J＝8.4Hz，2H)，6.59-6.53(m，3H)，6.42-6.35(m，1H)，5.36(s，1H)，4.41-4.31(m，1H)，3.67-3.57(m，1H)，2.37(t，J＝7.0Hz，2H)，1.73(d，J＝7.2Hz，3H)，1.67-1.52(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H25ClF3IN2O5的計算值700.04；實測值700.86(M+H)。
實施例56-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-己酸
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.78-7.74(m，1H)，7.62-7.55(m，2H)，7.42-7.39(m，3H)，7.02-6.99(m，2H)，6.93(d，J＝8.62H)，6.58(d，7.7Hz，2H)，6.28-6.14(m，1H)，5.28(s，1H)，4.29-4.19(m，1H)，3.71-3.62(m，1H)，2.15-2.07(m，2H)，1.65-1.58(m，3H)，1.50-0.96(m，6H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H27Cl2IN2O4的計算值664.04；實測值664.8(M+H)。
實施例67-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-庚酸 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.77-7.75(m，1H)，7.63-7.55(m，2H)，7.45-7.37(m，3H)，7.03-6.98(m，2H)，6.93-6.83(m，1H)，6.58(d，J＝8.6Hz，2H)，6.28-6.13(m，1H)，5.28(s，1H)，4.30-4.23(m，1H)，3.69-3.62(m，1H)，2.14(t，J＝7.44Hz，2H)，1.64-1.59(m，3H)，1.54-0.97(m，8H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)的計算值C30H29Cl2IN2O4678.05；實測值678.9(M+H)。
實施例74-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基甲基}-苯甲酸 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.12-7.91(m，3H)，7.47-7.37(m，3H)，7.33-7.24(m，3H)，7.18-7.02(m，1H)，6.97-6.85(m，2H)，6.61-6.50(m，3H)，6.45-6.33(m，1H)，5.37(s，1H)，5.35(d，J＝15.6Hz，1H)，4.99(d，J＝15.8Hz，1H)，1.64(d，J＝7.2Hz，3H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C31H23Cl2IN2O4的計算值684.01；實測值684.7(M+H)。
實施例84-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-丁酸
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.76，(d，J＝2.1Hz，1H)，7.61-7.58(m，2H)，7.41-7.39(m，2H)，7.00(d，J＝8.8Hz，2H)，6.94-6.86(m，1H)，6.60-6.50(m，2H)，6.29-6.14(m，1H)，5.29(s，1H)，4.30-4.20(m，1H)，3.75-3.66(m，1H)，2.13(t，J＝7.2Hz，2H)，1.85-1.70(m，1H)，1.65(d，J＝7.21，3H)，1.64-1.54(m，2H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C27H23Cl2IN2O4的計算值636.01；實測值636.8(M+H)。
實施例93-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-丙酸 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.73(d，J＝2.1Hz，1H)，7.64-7.35(m，5H)，7.21-6.96(m，2H)，6.97-6.49(m，3H)，6.28-6.14(m，1H)，5.25(s，1H)，4.51-4.31(m，1H)，3.94-3.80(m，1H)，2.44-2.29(m，1H)，1.91(s，1H)，1.68-1.57(m，3H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C26H21Cl2IN2O4的計算值621.99；實測值622.8(M+H)。
實施例105-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基甲基}-呋喃-2-甲酸
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.04-7.85(m，1H)，7.58(d，J＝8.4Hz，1H)，7.70-7.44(m，2H)，7.39-7.30(m，3H)，7.10(d，J＝7.7Hz，1H)，6.91(d，J＝8.1Hz，2H)，6.74(d，J＝8.6Hz，1H)，6.54(d，J＝3.2Hz，1H)，6.47(d，J＝8.1Hz，2H)，5.55(s，1H)，5.27-4.90(m，2H)，1.82-1.66(m，3H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H21Cl2IN2O5的計算值673.99；實測值674.8(M+H)。
實施例115-{(3S)-8-氯-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.08(s，1H)，7.46(d，J＝8.4Hz，2H)，7.30(d，J＝8.4Hz，2H)，6.95-6.88(m，3H)，6.45(d，J＝7.7Hz，2H)，6.40-6.34(m，1H)，5.33(s，1H)，4.39-4.27(m，1H)，3.69-3.59(m，1H)，2.45-2.34(m，2H)，1.70(d，J＝7.2Hz，3H)，1.67-1.52(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H24Cl3IN2O4的計算值683.98；實測值684.8(M+H)。
實施例125-{3-(4-氯苯基)-4-[(4-氯苯基)-環(huán)丙基-甲基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.74(d，J＝2.1Hz，1H)，7.66(d，J＝8.4Hz，2H)，7.59(dd，J＝8.6Hz，2.1Hz，1H)，7.40(d，J＝8.6Hz，2H)，7.01(d，J＝8.8Hz，2H)，6.92(d，J＝8.8Hz，1H)，6.59(dd，J＝8.6Hz，0.93Hz，2H)，5.51(s，1H)，5.16(d，J＝10.7Hz，1H)，4.38-4.29(m，1H)，3.71-3.62(m，1H)，2.19-2.11(m，2H)，1.91-1.81(m，1H)，1.54-1.21(m，4H)，0.81-0.71(m，1H)，0.62-0.52(m，1H)，0.48-0.34(m，2H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C30H27Cl2IN2O4的計算值676.04；實測值677.0(M+H)。
實施例135-{3-(4-氯苯基)-4-[1-(3，4-二氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.85-7.76(m，2H)，7.63-7.55(m，3.0H)，7.02(d，J＝8.6Hz，2H)，6.90(d，J＝8.6Hz，1H)，6.63(d，J＝8.6Hz，2H)，6.13-6.06(m，1H)，5.38(s，1H)，4.31(m，1H)，3.72-3.64(m，1H)，2.18-2.11(m，2H)，1.65(d，J＝6.9Hz，3H)，1.55-1.43(m，1H)，1.48-1.28(m，3H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H24Cl3IN2O4的計算值683.98；實測值684.8(M+H)。
實施例145-[4-[1-(3-氨基-4-氯苯基)-乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.74(d，J＝2.1Hz，1H)，7.59(dd，J＝8.6Hz，2.1Hz，1H)，7.12(d，J＝8.1Hz，1H)，7.03-6.98(m，3H)，6.92(d，J＝8.6Hz，2H)，6.70(dd，J＝8.6Hz，2.1Hz，2H)，6.63(d，J＝8.6Hz，2H)，6.13-6.04(m，1H)，5.41(s，2H)，5.19(s，1H)，4.33-4.22(m，1H)，3.73-3.63(m，1H)，2.19-2.12(m，2H)，1.57-1.45(m，3H)，1.44-1.31(m，3H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H26Cl2IN3O4的計算值665.03；實測值665.8(M+H)。
實施例155-[4-[1-(4-氯-3-硝基-苯基)-乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.24(d，J＝2.1Hz，1H)，7.90(dd，J＝8.6Hz，2.3Hz，1H)，7.78(d，J＝2.1Hz，1H)，7.73(d，J＝8.4Hz，1H)，7.58(dd，J＝8.6Hz，2.1Hz，1H)，7.01(d，J＝8.6Hz，2H)，6.90(d，J＝8.8Hz，1H)，6.66-6.63(m，2H)，6.20-6.13(m，1H)，5.43(s，1H)，4.29-4.20(m，1H)，3.72-3.63(m，1H)，2.19-2.11(m，2H)，1.69(d，J＝7.2Hz，3H)，1.53-1.44(m，1H)，1.41-1.32(m，3H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H24Cl2IN3O6的計算值695.01；實測值695.8(M+H)。
實施例165-{3-(4-氯苯基)-7-碘-4-[1-(4-甲基-萘-1-基)-乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.39(d，J＝8.8Hz，1H)，8.06(d，J＝8.4Hz，1H)，7.87-7.76(m，2H)，7.70-7.55(m，3H)，7.35(d，J＝8.1Hz，1H)，6.90(d，J＝8.6Hz，2H)，6.64(d，J＝8.6Hz，2H)，6.18-6.13(m，2H)，5.18(s，1H)，4.37-4.27(m，1H)，3.73-3.64(m，1H)，2.58(s，3H)，2.23-2.15(m，2H)，1.75(d，J＝7.0Hz，3H)，1.54-1.30(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C33H30ClIN2O4的計算值680.09；實測值680.8(M+H)。
實施例175-[4-(4-氯芐基)-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.05(bs，1H)，7.71(d，J＝2.1Hz，1H)，7.62(dd，J＝8.8Hz，2.3Hz，1H)，7.43(m，4H)，7.17(d，J＝8.6Hz，2H)，6.95(d，J＝8.8Hz，1H)，6.83(d，J＝7.7Hz，2H)，5.70(s，1H)，5.27(d，J＝14.6Hz，1H)，4.69(d，J＝14.4Hz，1H)，4.21-4.13(m，1H)，3.67-3.58(m，1H)，2.11(t，J＝7.0Hz，2H)，1.32-1.22(m，2H)，0.88-0.83(m，2H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C27H23Cl2IN2O4的計算值636.01；實測值637.0(M+H)。
實施例185-{3-(4-氯苯基)-4-[2-(4-氯苯基)-1-甲基-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.71-7.65(m，1H)，7.60-7.53(m，1H)，7.39-7.24(m，4H)，7.17-7.04(m，2H)，6.92-6.71(m，3H)，5.74(s，1H)，5.34-5.14(m，1H)，4.25-3.99(m，1H)，3.70-3.59(m，1H)，3.12(m，1H)，2.98-2.86(m，1H)，2.18-2.09(m，2H)，1.52-1.13(m，7H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H27Cl2IN2O4的計算值664.04；實測值664.9(M+H)。
實施例195-{(3S)-3-(3-溴-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-2，5二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.95(d，J＝2.1Hz，1H)，7.51-7.44(m，3H)，7.37-7.29(m，2H)，7.08-7.03(m，1H)，6.81-6.71(m，1H)，6.65-6.61(m，1H)，6.59(d，J＝8.8Hz，1H)，6.48-6.42(m，1H)，6.43-6.35(m，1H)，5.33(s，1H)，4.41-4.32(m，1H)，3.67-3.57(m，1H)，2.40-2.34(m，2H)，1.72(d，J＝7.2Hz，3H)，1.67-1.54(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H25BrClIN2O4的計算值695.78；實測值696.8(M+H)。
實施例20[4-芐基-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-乙酸 1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.80(d，J＝2.1Hz，1H)，7.58-7.47(m，3H)，7.42-7.28(m，3H)，6.99(s，4H)，6.89(d，J＝8.8Hz，1H)，5.51(s，1H)，5.49(s，1H)，5.18(d，J＝14.4Hz，1H)，4.57(d，J＝17.0Hz，1H)，4.13(d，J＝17.2Hz，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C24H18ClIN2O4的計算值560.00；實測值561.1(M+H)。
實施例215-{(3S)-3-(4-氯-3-硝基-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.06-7.96(m，1H)，7.55-7.44(m，3H)，7.39-7.28(m，3H)，7.13-7.04(m，2H)，6.70-6.54(m，1H)，6.46-6.36(m，1H)，5.30(s，1H)，4.40-4.07(m，1H)，3.70-3.38(m，1H)，2.45-2.24(m，2H)，1.98-1.77(m，1H)，1.72(d，J＝7.0Hz，3H)，1.64-1.54(m，3H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H24Cl2IN3O6的計算值695.01；實測值695.7(M+H)。
實施例225-{(3S)-7-乙?；?3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.05(d，J＝2.3Hz，1H)，7.79(dd，J＝8.6Hz，2.3Hz，1H)，7.62(d，J＝8.6Hz，2H)，7.41(m，2H)，7.25(d，J＝8.8Hz，1H)，6.96(d，J＝8.6Hz，2H)，6.59(d，J＝8.6Hz，2H)，6.21(m，1H)，5.35(s，1H)，4.36-4.26(m，1H)，3.84-3.74(m，1H)，2.21-2.13(m，2H)，1.66(d，J＝7.2Hz，3H)，1.46-1.33(m，3H)，1.30-1.20(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C30H28Cl2N2O5的計算值566.14；實測值566.9(M+H)。
實施例235-{(3S)-3-(3-氨基-4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.13-7.84(m，1H)，7.61-7.27(m，4H)，7.01-6.81(m，1H)，6.76-6.64(m，1H)，6.66-5.63(m，5H)，5.38-5.10(m，2H)，4.41-3.89(m，2H)，3.62-3.27(m，3H)，1.79-1.32(m，6H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H26Cl2IN3O4的計算值665.03；實測值665.8(M+H)。
實施例24(3S)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基[-7-碘-3，4-二氫-苯并[e][1，4]二氮雜-5-酮
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.76(d，J＝5.5Hz，3H，CH3)，5.10(brs，1H，CH)，6.46(q，J＝5.5Hz，1H，CH)，6.53(d，J＝6.3Hz，1H，ArH)，6.58(d，J＝6.0Hz，2H，ArH)，6.91(d，J＝6.6Hz，2H，ArH)，7.33(d，J＝6.6Hz，2H，ArH)，7.41(dd，J＝6.3Hz，J＝1.5Hz，1H，ArH)，7.53(d，J＝6.6Hz，2H，ArH)，8.03(d，J＝1.5Hz，1H，ArH)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C23H18Cl2IN3O的計算值548.99；實測值551.0(M+H)。
實施例252-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-5-氧代-4，5-二氫-3H-苯并[e][1，4]二氮雜-2-基氨基}-乙酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.76(d，J＝5.4Hz，3H，CH3)，4.26-4.40(m，2H，CH2)，5.09(br s，1H，CH)，5.68(br s，1H，NH)，6.30(br s，1H，NH)，6.44(q，J＝5.4Hz，1H，CH)，6.53-6.58(m，3H，ArH)，6.87(d，J＝6.3Hz，2H，CH2)，7.31-7.40(m，3H，ArH)，7.53(d，J＝6.3Hz，2H，ArH)，8.00(d，J＝1.5Hz，1H，ArH)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C25H21Cl2IN4O2的計算值606.01；實測值607.0(M+H)。
實施例26(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-2-(2-羥基-乙基氨基)-7-碘-3，4-二氫-苯并[e][1，4]二氮雜-5-酮
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.71(d，J＝5.4Hz，3H，CH3)，3.76-3.79(m，2H，CH2)，3.95-3.98(m，2H，CH2)，4.96(s，1H，CH)，6.43(q，J＝5.4Hz，1H，CH)，6.54-6.56(m，3H，ArH)，6.89(d，J＝6.6Hz，2H，ArH)，7.31(d，J＝6.3Hz，2H，ArH)，7.38(dd，J＝6.3Hz，J＝1.5Hz，1H，CH)，7.50(d，J＝6.3Hz，2H，ArH)，7.98(d，J＝1.5Hz，1H，ArH)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C25H22Cl2IN3O2的計算值593.01；實測值594.0(M+H)。
實施例27(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-2-(3-羥基-丙基氨基)-7-碘-3，4-二氫-苯并[e][1，4]二氮雜-5-酮 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.72(d，J＝5.1Hz，3H，CH3)，1.91-1.95(m，2H，CH2)，3.78-3.86(m，4H，2CH2)，4.89(s，1H，CH)，6.45(q，J＝5.1Hz，1H，CH)，6.54(d，J＝6.0Hz，2H，ArH)，6.58(d，J＝6.6Hz，1H，ArH)，6.91(d，J＝6.3Hz，2H，ArH)，7.32(d，J＝6.0Hz，2H，ArH)，7.37-7.39(m，1H，ArH)，7.49(d，J＝6.3Hz，2H，ArH)，7.98(d，J＝1.5Hz，1H，ArH)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C26H24Cl2IN3O2的計算值607.03；實測值608.0(M+H)。
實施例28N-(2-{(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-5-氧代-4，5-二氫-3H-苯并[e][1，4]二氮雜-2-基氨基}-乙基)-乙酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.72(d，J＝5.1Hz，3H，CH3)，2.24(s，3H，CH3)，3.47-3.90(m，4H，2CH2)，6.08(s，1H，CH)，6.54(q，J＝5.1Hz，1H，CH)，6.91(d，J＝6.0Hz，2H，CH3)，7.15-7.18(m，3H，ArH)，7.37(d，J＝6.0Hz，2H，CH2)，7.53-7.55(m，3H，ArH)，8.13(d，J＝1.5Hz，1H，ArH)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C27H25Cl2N4O2的計算值634.04；實測值635.1(M+H)。
實施例29(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-2-甲基氨基-3，4-二氫-苯并[e][1，4]二氮雜-5-酮
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.67(d，J＝5.1Hz，3H，CH3)，3.17(s，3H，CH3)，4.85(br s，1H，CH)，6.42(q，J＝5.1Hz，1H，CH)，6.53(d，J＝6.3Hz，2H，ArH)，6.60(d，J＝6.3Hz，1H，ArH)，6.89(d，J＝6.3Hz，2H，ArH)，7.31(d，J＝6.3Hz，2H，ArH)，7.38(dd，J＝6.3Hz，J＝1.5Hz，1H，ArH)，7.47(d，J＝6.3Hz，2H，ArH)，7.97(d，J＝1.5Hz，1H，ArH)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)的計算值C24H20Cl2IN3O563.00；實測值563.9(M+H)。
實施例302-(2-氨基-乙基氨基)-(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-3，4-二氫-苯并[e][1，4]二氮雜-5-酮 質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C25H23Cl2IN4O的計算值592.03；實測值593.0(M+H)。
實施例31
2-[N-(3-氨基-3-氧代丙基)氨基]-(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-3，4-二氫-1，4-苯并二氮雜-5-酮 質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C26H23Cl2IN4O2的計算值620.02；實測值621.0(M+H)。
實施例325-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-甲氧基羰基-2，5-二氧代-3，4-二氫-1H-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸叔丁酯 將5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-3，4-二氫-1H-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸叔丁酯(300mg，0.42mmol)、二氯雙-(三苯基膦)Pd(II)(21mg，0.030mmol)和三乙胺(200μL，1.43mmol)在DMF(4mL)和甲醇(1.5mL)中的溶液，在一氧化碳?xì)夥障掠?0℃攪拌24小時。在溶液冷卻至室溫后，把溶劑減壓蒸發(fā)。將粗反應(yīng)產(chǎn)物用硅膠柱色譜法純化(EtOAc/己烷，1∶2)，得到本標(biāo)題化合物。(226mg，83％)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.45(s，9H，3CH3)，1.58-1.62(m，2H，CH2)，1.75(d，J＝5.4Hz，3H，CH3)，2.24(t，J＝10.5Hz，2H，CH2)，3.62-3.90(m，3H，3CH)，3.91(s，3H，CH3)，4.23-4.31(m，1H，CH)，5.34(s，1H，CH)，6.45(q，J＝5.4Hz，1H，CH)，6.50(d，J＝6.3Hz，2H，ArH)，6.84(d，J＝6.3Hz，2H，ArH)，6.94(d，J＝6.6Hz，1H，ArH)，7.32(d，J＝6.6Hz，2H，ArH)，7.50(d，J＝6.3Hz，2H，ArH)，7.84(dd，J＝6.3Hz，J＝1.5Hz，1H，ArH)，8.33(d，J＝1.5Hz，1H，ArH)。
實施例33(3S)-1-(4-叔丁氧基羰基-丁基)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-7-甲酸 將5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-甲氧基羰基-2，5-二氧代-3，4-二氫-1H-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸叔丁酯(實施例32)(200mg，0.31mmol)和NaOH(1N水溶液，380μL)在THF/MeOH/H2O(2mL/400μL/100μL)中的溶液于室溫攪拌12小時。把混合物蒸發(fā)至干。然后，把殘余物溶解于水(10mL)中，并用1NHCl將pH調(diào)整到4。將溶液用乙醚(3×20mL)萃取，然后將有機(jī)層干燥(Na2SO4)并減壓濃縮至干。在硅膠上過濾，得到本標(biāo)題化合物(150mg，77％)質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C33H34Cl2IN2O6的計算值624.18；實測值568.9(M+H-t-bu)。
實施例347-氨基羰基-5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代-3，4-二氫-1H-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸 將(3S)-1-(4-叔丁氧基羰基-丁基)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-7-甲酸(實施例33)(63mg，0.10mmol)、O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸鹽(57mg，0.15mmol)、HOBT(20mg，0.15mmol)N，N-二異丙基乙基胺(70μL，0.4mmol)、氯化銨(11mg，0.2mmol)在DMF(400μL)中的溶液于室溫攪拌1小時。溶劑蒸發(fā)后，把殘余物用EtOAc(15mL)稀釋，用水(10mL)洗滌，干燥(Na2SO4)然后減壓濃縮至干。通過硅膠色譜法純化(EtOAc/己烷，1∶1)，得到anoil(58mg)，將其溶解于二氯甲烷(1.5mL)和TFA(0.5mL)中。將該溶液于室溫攪拌10小時，然后蒸發(fā)至干燥。把殘余物溶解于冰冷的水(10mL)中并加入AcONa(100mg)/AcOH(100μL)。用乙醚(3×20mL)提取該溶液，然后將有機(jī)層干燥(Na2SO4)并減壓濃縮至干。用柱色譜法純化(EtOAc/CH2Cl2/EtOH，5∶4∶1)，得到無色油狀物，將其用EtOH中的NaOH 1N轉(zhuǎn)化為它的鈉鹽。從EtOH/乙醚中重結(jié)晶，得到本標(biāo)題化合物(37mg，62％)，為白色粉末質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H27Cl2IN3O5的計算值567.13；實測值568.0(M+H)。
實施例355-[4-(4-氯-2-甲基-芐基)-3-(R，S)-(4-氯-苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.71(d，J＝2.2Hz，1H)，7.64-7.68(m，1H)，7.32(m，1H)，7.16-7.24(m，4H)，7.00(d，J＝7.0Hz，1H)，6.88(d，J＝7.6Hz，2H)，5.25(s，1H)，5.31(d，J＝15.6Hz，1H)，4.68(d，J＝15.4Hz，1H)，4.20(m，2H)，3.70(m，2H)，2.32(s，4H)，2.16-2.20(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H25Cl2IN2O4的計算值650.02；實測值650.8(M+H)。
實施例365-{(3R)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸鈉 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.88(d，J＝2.0Hz，1H)，7.56-7.60(m，1H)，7.40-7.44(m，4H)，7.10-7.14(m，2H)，6.90-6.95(m，2H)，6.80-6.84(d，J＝8.8Hz，1H)，6.36-6.40(m，1H)，5.32(s，1H)，4.04-4.10(m，1H)，3.52-3.60(m，1H)，2.03-2.12(m，1H)，1.64-1.68(d，J＝7.2Hz，4H)，1.40-1.52(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H24Cl2IN2NaO4的計算值672.1；實測值673.2(M+H)。
實施例375-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-[R，S)-1-羥基乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸 a)5-[(3R，S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-[(R，S)-1-羥基-乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]-二氮雜-1-基]-戊酸叔丁酯將5-{(3R，S)-7-乙酰基-3-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸叔丁酯(60mg，0.096mmol)在MeOH(2mL)中的溶液用NaBH4(5.0mg，0.13mmol)處理。將該溶液在室溫攪拌18小時。將全部溶液施加到制備TLC板(Analtech Silica Gel GF，20×20cm，2000微米s)上。刮下所需的帶，用MeOH萃取10分鐘，過濾并濃縮，得到本標(biāo)題化合物(55mg，92％)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C34H38Cl2N2O5的計算值624.22；實測值625.4(M+H)。
b)5-[(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-7-(1-(R，S)-羥基-乙基)-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸按照實施例1步驟b的方法，由5-[(3R，S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-[(R，S)-1-羥基-乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]-二氮雜-1-基]-戊酸叔丁酯合成本標(biāo)題化合物。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.56-7.61(m，3H)，7.40-7.50(m，1H)，7.18-7.38(m，3H)，7.00-7.08(t，J＝8.3Hz，1H)，6.83-6.87(m，2H)，6.50-6.56(m，2H)，6.35-6.40(m，1H)，5.35(s，1H)，4.68-4.72(m，1H)，4.30-4.40(m，1H)，3.70-3.79(m，1H)，2.10-2.18(m，2H)，1.72-1.76(d，J＝7.3Hz，4H)，1.50-1.70(m，4H)，1.21-1.26(d，J＝6.6Hz，3H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C30H30Cl2N2O5的計算值568.1；實測值569.3(M+H)。
實施例385-[R，S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-(1-(R，S)-羥基乙基)-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸 依次按照實施例37描述的操作制備本標(biāo)題化合物1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.00-7.61(m，9H)，6.84-6.92(m，2H)，6.36-6.56(m，3H)，5.30-5.36(m，1H)，4.08-4.76(m，2H)，3.50-3.80(m，1H)，2.05-2.20(m，2H)，1.72-1.76(d，J＝7.3Hz，3H)，1.20-1.70(m，7H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C30H30Cl2N2O5的計算值568.1；實測值569.2(M+H)。
實施例395-[(3S)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-3-(4-三氟甲基-苯基)-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.86-7.91(d，J＝2.0Hz，1H)，7.52-7.58(m，1H)，7.45-7.51(m，4H)，7.12-7.22(m，2H)，6.92-7.05(m，2H)，6.82-6.94(d，J＝8.8Hz，1H)，6.32-6.38(m，1H)，5.32(s，1H)，4.08-4.11(m，1H)，3.52-3.64(m，1H)，2.06-2.11(m，2H)，1.62-1.70(d，J＝7.2Hz，4H)，1.40-1.46(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H25ClF3IN2O4的計算值684.05；實測值685.1(M+H)。
實施例405-{(S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-乙炔基-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸鈉 a)5-{(3R，S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-乙炔基-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸叔丁酯將5-{(3R，S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸叔丁酯(3.2g，4.5mmol)、三甲基甲硅烷基炔化物(1.9mL，13.5mmol)、CuI(189mg，0.99mmol)和二氯雙(三苯基膦)鈀(II)(318mg，0.45mmol)在三乙胺(200mL)中的混合物在氮氣氛下加熱至55℃。1小時后，將該溶液趁熱過濾，將濾液濃縮。將5-{(3R，S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代-7-三甲基甲硅烷基乙炔基-2，3，4，5-四氫苯并[e ][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸叔丁酯(6.7g，9.9mmol)在THF(100mL)用氟化叔丁基銨(10mL 1M在THF中的溶液，10mmol)處理。1小時后將反應(yīng)溶液濃縮。通過快速色譜法純化(硅膠，EtOAc/己烷3∶7)，得到本標(biāo)題化合物(5.3g，兩步的產(chǎn)率為89％)。
5-{(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-乙炔基-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸鈉 按照實施例1步驟b，由5-{(3R，S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-乙炔基-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸叔丁酯合成本標(biāo)題化合物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.59-7.64(m，3H)，7.30-7.40(m，3H)，7.08-7.10(d，J＝8.5Hz，1H)，6.90-6.93(d，J＝8.5，2H)，6.53-6.58(d，J＝8.8，2H)，6.32-6.39(m，1H)，5.36(s，1H)，4.24-4.32(m，1H)，3.76-3.84(m，1H)，3.52(s，1H)，2.12-2.20(m，2H)，1.72-1.76(d，J＝7.1Hz，3H)，1.52-1.64(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C30H25Cl2N2NaO4的計算值570.11；實測值571.2(M+H)。
實施例415-{(3R，S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R，S)-1-(4-氯苯基)-2-羥基乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.84-7.87(d，J＝2.1Hz，1H)，7.55-7.60(m，3H)，7.36-7.40(m，2H)，6.88-6.96(m，3H)，6.56-6.60(d，J＝7.7，2H)，6.20-6.28(m，1H)，5.40(s，1H)，4.12-4.33(m，3H)，3.70-3.80(s，1H)，2.12-2.20(m，2H)，1.50-1.76(m，6H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H25Cl2IN2O5的計算值666.02；實測值667.2(M+H)。
實施例425-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸鈉
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.75-7.77(d，J＝2.1Hz，1H)，7.56-7.64(m，3H)，7.39-7.44(m，2H)，6.98-7.03(m，2H)，6.90-6.95(m，1H)，6.56-6.60(d，J＝7.7Hz，1H)，6.16-6.22(m，1H)，5.26(s，1H)，4.15-4.24(m，1H)，3.60-3.70(m，1H)，1.76-1.84(m，2H)，1.60-1.68(d，J＝7.1Hz，3H)，1.44-1.56(m，1H)，1.28-1.37(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H24Cl2IN2NaO4的計算值672.01；實測值651.2(M-Na)+。
實施例435-[(3R，S)-4-(4-氯-2-甲基-芐基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.71(d，J＝2.2Hz，1H)，7.64-7.68(m，1H)，7.32(m，1H)，7.16-7.24(m，4H)，7.00(d，J＝7.0Hz，1H)，6.88(d，J＝7.6Hz，2H)，5.25(s，1H)，5.31(d，J＝15.6Hz，1H)，4.68(d，J＝15.4Hz，1H)，4.20(m，2H)，3.70(m，2H)，2.32(s，4H)，2.16-2.20(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H25Cl2IN2O4的計算值650.02；實測值650.8(M+H)。
實施例445-{(3R)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸鈉 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.88(d，J＝2.0Hz，1H)，7.56-7.60(m，1H)，7.40-7.44(m，4H)，7.10-7.14(m，2H)，6.90-6.95(m，2H)，6.80-6.84(d，J＝8.8Hz，1H)，6.36-6.40(m，1H)，5.32(s，1H)，4.04-4.10(m，1H)，3.52-3.60(m，1H)，2.03-2.12(m，1H)，1.64-1.68(d，J＝7.2Hz，4H)，1.40-1.52(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H24Cl2IN2NaO4的計算值672.1；實測值673.2(M+H)。
實施例455-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-(1-(R，S)-羥基乙基)-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.56-7.61(m，3H)，7.40-7.50(m，1H)，7.18-7.38(m，3H)，7.00-7.08(t，J＝8.3Hz，1H)，6.83-6.87(m，2H)，6.50-6.56(m，2H)，6.35-6.40(m，1H)，5.35(s，1H)，4.68-4.72(m，1H)，4.30-4.40(m，1H)，3.70-3.79(m，1H)，2.10-2.18(m，2H)，1.72-1.76(d，J＝7.3Hz，4H)，1.50-1.70(m，4H)，1.21-1.26(d，J＝6.6Hz，3H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C30H30Cl2N2O5的計算值568.1；實測值569.3(M+H)。
實施例465-[(3R，S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-[(R，S)-1-羥基-乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.00-7.61(m，9H)，6.84-6.92(m，2H)，6.36-6.56(m，3H)，5.30-5.36(m，1H)，4.08-4.76(m，2H)，3.50-3.80(m，1H)，2.05-2.20(m，2H)，1.72-1.76(d，J＝7.3Hz，3H)，1.20-1.70(m，7H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C30H30Cl2N2O5的計算值568.1；實測值569.2(M+H)。
實施例475-[(3S)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-3-(4-三氟甲基-苯基)-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基]-戊酸 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.86-7.91(d，J＝2.0Hz，1H)，7.52-7.58(m，1H)，7.45-7.51(m，4H)，7.12-7.22(m，2H)，6.92-7.05(m，2H)，6.82-6.94(d，J＝8.8Hz，1H)，6.32-6.38(m，1H)，5.32(s，1H)，4.08-4.11(m，1H)，3.52-3.64(m，1H)，2.06-2.11(m，2H)，1.62-1.70(d，J＝7.2Hz，4H)，1.40-1.46(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H25ClF3IN2O4的計算值684.05；實測值685.1(M+H)。
實施例485-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-4-氯苯基)-乙基]-7-乙炔基-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸鈉
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.59-7.64(m，3H)，7.30-7.40(m，3H)，7.09(d，J＝8.5Hz，1H)，6.92(d，J＝8.5，2H)，6.54(d，J＝8.8，2H)，6.32-6.39(m，1H)，5.36(s，1H)，4.24-4.32(m，1H)，3.76-3.84(m，1H)，3.52(s，1H)，2.12-2.20(m，2H)，1.73(d，J＝7.1Hz，3H)，1.52-1.64(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C30H25Cl2N2NaO4的計算值570.1；實測值571.2(M+H)。
實施例495-{3-(4-氯苯基)-4-[1-(4-氯苯基)-2-羥基-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.85(d，J＝2.1Hz，1H)，7.55-7.60(m，3H)，7.36-7.40(m，2H)，6.88-6.96(m，3H)，6.58(d，J＝7.7，2H)，6.20-6.28(m，1H)，5.40(s，1H)，4.12-4.33(m，3H)，3.70-3.80(s，1H)，2.12-2.20(m，2H)，1.50-1.76(m，6H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H25Cl2IN2O5的計算值666.02；實測值667.2(M+H)。
實施例505-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸鈉 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.76(d，J＝2.1Hz，1H)，7.56-7.64(m，3H)，7.39-7.44(m，2H)，6.98-7.03(m，2H)，6.90-6.95(m，1H)，6.57(d，J＝7.7Hz，1H)，6.16-6.22(m，1H)，5.26(s，1H)，4.15-4.24(m，1H)，3.60-3.70(m，1H)，1.76-1.84(m，2H)，1.64(d，J＝7.1Hz，3H)，1.44-1.56(m，1H)，1.28-1.37(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H24Cl2IN2NaO4的計算值672.01；實測值651.2(M-Na)+。
實施例515-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(甲硫基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸
a)(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(甲硫基)-1，3-二氫-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮。
將(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基}-7-碘-1，3-二氫-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮(221mg，0.400mmol)、硫代甲醇鈉(38mg，0.521mmol)和四(三苯基膦)鈀(0)(46mg，0.04mmol)在氮氣氛下懸浮于正丁醇(5mL)中。把反應(yīng)在110℃加熱16小時。然后，使反應(yīng)冷卻至室溫，將其在乙酸乙酯與氫氧化鈉(1N)之間分配，并用鹽酸洗滌(1N)。收集有機(jī)層，將其用硫酸鈉干燥，過濾并在真空下濃縮。將殘余物用柱色譜法純化(AcOEt/己烷，1∶1)，得到本標(biāo)題化合物(91mg，48％)，確認(rèn)為“下方的非對映體”(在用AcOEt/己烷進(jìn)行的TLC中，1∶1)1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.16(s，1H)，7.50(d，J＝2.3Hz，1H)，7.45(d，J＝8.5Hz，2H)，7.24(d，J＝8.5Hz，2H)，7.00(dd，J＝2.3，J＝8.5Hz，1H)，6.83(d，J＝8.5Hz，2H)，6.61(d，J＝8.5Hz，1H)，6.56(d，J＝8.5Hz，2H)，6.39(m，1H)，5.16(s，1H)，2.33(s，3H)，1.64(d，J＝7.19Hz，3H)；以及(3R)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(甲硫基)-1，3-二氫-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮(45mg，24％)，確認(rèn)為“上方的非對映體”(在用AcOEt/己烷進(jìn)行的TLC中，1∶1)1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.73(s，1H)，7.60(d，J＝2.3Hz，1H)，7.24(d，J＝8.5Hz，2H)，7.15(d，J＝8.5Hz，2H)，7.04(m，3H)，6.93(d，J＝8.5Hz，2H)，6.45(d，J＝8.5Hz，1H)，6.38(m，1H)，5.01(s，1H)，2.36(s，3H)，1.59(d，J＝7.2Hz，3H)。
b)5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(甲硫基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸按照實施例1步驟b描述的方法，由(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(甲硫基)-1，3-二氫-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮制備本標(biāo)題化合物1H NMR(400MHz，Cl3CD)δ10.89(s，1H，酸-OH)，7.38(d，J＝8.5Hz，2H)，7.33(d，J＝2.3Hz，1H)，7.20(d，J＝8.5Hz，2H)，6.97(dd，J＝2.3，J＝8.5Hz，1H)，6.75(d，J＝8.5Hz，2H)，6.67(d，J＝8.5Hz，1H)，6.36(d，J＝8.5Hz，2H)，6.29(m，1H)，5.26(s，1H)，4.28(m，1H)，3.54(m，1H)，2.35(s，3H)，2.34(m，2H)，1.63(d，J＝7.19Hz，3H)，1.46(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H28Cl2N2O4S的計算值570.1；實測值571.0(M+H)。
實施例525-[(3R)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(甲硫基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.42(d，J＝2.3Hz，1H)，7.27(m，4H)，6.98(m，3H)，6.75(d，J＝8.5Hz，2H)，6.62(d，J＝8.5Hz，1H)，6.37(m，1H)，5.22(s，1H)，4.05(m，1H)，3.37(m，1H)，2.35(s，3H)，2.19(m，2H)，1.58(d，J＝7.2Hz，3H)，1.38(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H28Cl2N2O4S的計算值570.1；實測值571.0(M+H)。
實施例53
5-[(3S)3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(三氟甲硫基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸 a)(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(三氟甲硫基)-1，3-二氫-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮將(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-1，3-二氫-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮(248mg，0.449mmol)、三氟甲硫醇銅(79.5mg，0.483mmol)、碘化銅(4mg，0.021mmol)、乙二醇(54.5mg，0.878mmol)和碳酸鉀(121mg，0.878mmol)在氮氣氛下懸浮于異丙醇(5mL)中。把反應(yīng)在110℃加熱24小時。然后，使反應(yīng)冷卻至室溫，將其在乙酸乙酯與氫氧化鈉(1N)之間分配，用鹽酸(1N)洗滌。收集有機(jī)層，將其干燥(Na2SO4)，過濾并在真空下濃縮。用硅膠色譜法純化(AcOEt/己烷，3∶7)，得到本標(biāo)題化合物(203mg，86％)，確認(rèn)為“下方的非對映體”(在用AcOEt/己烷進(jìn)行的TLC中，1∶1)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.31(s，1H)，7.98(d，J＝1.0Hz，1H)，7.44(d，J＝8.5Hz，2H)，7.40(dd，J＝1.0，J＝8.5Hz，1H)，7.25(d，J＝8.5Hz，2H)，6.87(d，J＝8.5Hz，2H)，6.55(d，J＝8.5Hz，2H)，6.47(d，J＝8.5Hz，1H)，6.38(m，1H)，5.22(s，1H)，1.64(d，J＝7.2Hz，3H)；以及(3R)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(三氟甲硫基)-1，3-二氫-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮(24mg，10％)，確認(rèn)為“上方的非對映體”(在用AcOEt/己烷進(jìn)行的TLC中，1∶1)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.28(s，1H)，8.07(d，J＝2.0Hz，1H)，7.44(dd，J＝2.0，J＝8.5Hz，1H)，7.24(d，J＝8.5Hz，2H)，7.19(d，J＝8.5Hz，2H)，7.07(d，J＝8.5Hz，2H)，6.92(d，J＝8.5Hz，2H)，6.36(m，1H)，6.27(d，J＝8.5Hz，1H)，5.01(s，1H)，1.58(d，J＝7.2Hz，3H)。
b)5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(三氟甲硫基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸.
按照在1位進(jìn)行烷基化的一般方法，繼之按照實施例1步驟b的方法脫保護(hù)，由(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(三氟甲硫基)-1，3-二氫-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮制備本標(biāo)題化合物1H NMR(400MHz，Cl3CD)δ10.93(s，1H，酸-OH)，7.83(s，1H)，7.38(m，3H)，7.20(d，J＝7.9Hz，2H)，6.77(d，J＝8.0Hz，2H)，6.51(d，J＝8.5Hz，1H)，6.35(d，J＝7.9Hz，2H)，6.28(m，1H)，5.28(s，1H)，4.25(m，1H)，3.55(m，1H)，2.27(br s，2H)，1.62(d，J＝6.8Hz，3H)，1.49(m，4H)。
實施例545-[(3S)-3-(2-烯丙氧基-4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸 a)5-氯-2-羥基甲基苯酚將4-氯水楊酸(25g，145mmol)溶解于四氫呋喃(100mL)中并在氬氣氛下用冰-水浴冷卻至0℃。在30分鐘期間謹(jǐn)慎地滴加硼烷二甲硫醚復(fù)合物(101mL，2M在THF中的溶液)，然后把所得溶液回流16小時。使反應(yīng)達(dá)到室溫并倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取，并用鹽酸(1N)洗滌。收集有機(jī)層，將其用硫酸鈉干燥，過濾并在真空下濃縮。將殘余物用硅膠色譜法純化，得到本標(biāo)題化合物(83％)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.66(br s，1H)，6.96(d，J＝8.0Hz，1H)，6.91(d，J＝0.95Hz，1H)，6.85(dd，J＝0.95，8.0Hz，1H)，8.86(s，2H)。
b)4-氯-2-羥基苯甲醛把2，3-二氯-5，6-二氰基-1-4-苯醌(DDQ，9.92g，43.7mmol)加到5-氯-2-羥基甲基苯酚在二氯甲烷(65mL)和四氫呋喃(15mL)內(nèi)的溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌4小時。然后，使溶劑在真空下蒸發(fā)，并將粗產(chǎn)物用硅膠色譜法純化，得到本標(biāo)題化合物(72％)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.17(s，1H)，9.86(s，1H)，7.49(d，J＝7.3Hz，1H)，7.00(m，2H)。
c)2-烯丙氧基-4-氯苯甲醛把4-氯-2-羥基苯甲醛(254mg，1.62mmol)和碳酸銫(793mg，2.43mmol)在THF(3mL)中的混合物加熱回流3小時。反應(yīng)混合物冷卻至室溫后，使溶劑蒸發(fā)并將殘余物在乙酸乙酯與鹽酸(1N)之間分配。收集有機(jī)層，將其用硫酸鈉干燥，過濾并在真空下濃縮。將殘余物用柱色譜法純化(AcOEt/己烷，1∶9)，得到本標(biāo)題產(chǎn)物(97％)1H NMR(400MHz，Cl3CD)δ10.46(s，1H)，7.80(d，J＝8.3Hz，1H)，7.05(dd，J＝0.78，8.3Hz，1H)，6.99(d，J＝0.78Hz，1H)，6.09(m，1H)，5.45(m，2H)，4.67(m，2H)。
d)(3S)-3-(2-烯丙氧基-4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-1，3-二氫-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮按照合成二氮雜的一般方法制備本標(biāo)題化合物，并確認(rèn)為“下方的非對映體”(在用AcOEt/己烷進(jìn)行的TLC中，1∶1)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1H NMR 9.49(s，1H)，7.99(d，J＝1.9Hz，1H)，7.38(m，3H)，7.15(d，J＝8.4Hz，2H)，6.40(m，3H)，6.32(m，1H)，6.24(d，J＝7.8Hz，1H)，5.87(m，1H)，5.29(m，3H)，4.31(m，1H)，1.62(d，J＝7.2Hz，3H)。在該反應(yīng)中獲得(3R)-3-(2-烯丙氧基-4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-1，3-二氫-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮并確認(rèn)為“上方的非對映體”(在用AcOEt/己烷進(jìn)行的TLC中，1∶1)
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.22(s，1H)，8.06(d，J＝1.6Hz，1H)，7.45(dd，J＝1.6，8.3Hz，1H)，7.22(d，J＝8.3Hz，2H)，7.08(d，J＝8.4Hz，2H)，6.76(d，J＝8.4Hz，1H)，6.65(dd，J＝1.3，J＝8.4Hz，1H)，6.59(d，J＝1.3Hz，1H)，6.28(m，2H)，5.83(m，1H)，5.24(m，1H)，5.05(s，1H)，4.35(m，2H)，1.50(d，J＝7.1Hz，3H)。
e)5-[(3S)-3-(2-烯丙氧基-4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸按照在1位進(jìn)行烷基化的一般方法，繼之按照實施例1步驟b的方法脫保護(hù)，由(3S)-3-(2-烯丙氧基-4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-1，3-二氫-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮制備本標(biāo)題化合物1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.63(br s，1H)，7.94(d，J＝2.1Hz，1H)，7.45(m，3H)，7.26(d，J＝8.5Hz，2H)，6.56(d，J＝8.6Hz，1H)，6.48(d，J＝1.9Hz，1H)，6.43(m，1H)，6.35(m，1H)，6.16(m，1H)，5.96(m，1H)，5.35(m，2H)，5.23(s，1H)，4.42(m，2H)，4.20(m，1H)，3.54(m，1H)，2.34(m，2H)，1.75(d，J＝7.1Hz，3H)，1.56(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C31H29Cl2IN2O5的計算值706.05；實測值706.7(M+H)。
實施例555-[(3S)-3-(4-氯-2-羥基苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸
a)5-[(3S)-3-(4-氯-2-羥基苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸叔丁酯在室溫把5-[(3S)-3-(2-烯丙氧基-4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸叔丁酯(224mg，0.29mmol)和二氯雙(三苯基膦)鈀(II)(10mg，0.015mmol)溶解于THF(5mL)中。加入硼氫化鈉(11mg，0.29mmol)，并將反應(yīng)在氬氣氛下攪拌30分鐘。加入甲醇(10mL)，并將反應(yīng)再攪拌15分鐘。在真空下使溶劑蒸發(fā)，然后將殘余物用柱色譜法純化(AcOEt/己烷，1∶2)，得到200mg混雜以5-[(3S)-3-(2-烯丙氧基-4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸叔丁酯的本標(biāo)題化合物。將該化合物不用進(jìn)一步純化直接用于下一步驟。
b)5-[(3S)-3-(4-氯-2-羥基苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸按照實施例1步驟b的方法，由5-[(3S)-3-(4-氯-2-羥基苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸叔丁酯制備本標(biāo)題化合物1H NMR(400MHz，Cl3CD)δ7.99(d，J＝2.1Hz，1H)，7.42(m，3H)，7.22(d，J＝8.5Hz，2H)，6.62(d，J＝8.6Hz，1H)，6.50(d，J＝1.9Hz，1H)，6.34(m，2H)，6.09(m，1H)，5.26(s，1H)，3.87(m，1H)，3.74(m，1H)，2.39(m，2H)，1.75(m，7H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H25Cl2IN2O5的計算值666.02；實測值666.6(M+H)；以及21mg 5-[(3S)-3-(4-氯-2-羥基苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸1H NMR(400MHz，Cl3CD)δ7.67(m，1H)，7.41(d，J＝8.4Hz，2H)，7.21(d，J＝8.4Hz，2H)，7.15(m，1H)，7.06(m，1H)，6.88(d，J＝8.1Hz，1H)，6.54(d，J＝1.9Hz，1H)，6.35(m，1H)，6.27(dd，J＝1.9，J＝8.4Hz，1H)，6.10(d，J＝8.4Hz，1H)，5.26(s，1H)，3.85(m，2H)，2.39(m，2H)，1.72(m，7H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H26Cl2N2O5的計算值540.1；實測值540.8(M+H)。
實施例565-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代-7-苯基-1，4-二氮雜-1-基]戊酸鈉鹽 a)α-溴-α-(4-氯苯基)乙酸甲酯將4-氯苯基乙酸甲酯(14.6g，79.1mmol)、N-溴琥珀酰亞胺(14.4g，80.7mmol)和過氧化苯甲酰(1.91g，7.89mmol)在四氯化碳(100mL)中的溶液回流加熱3小時。在混合物冷卻至室溫后，加入己烷(500mL)。過濾反應(yīng)混合物并在真空下使溶劑蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物用硅膠柱色譜法純化(EtOAc/己烷，15∶85)，得到作為無色油狀物的本標(biāo)題化合物(16.9g，63％)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.81(s，3H，CH3)，5.34(s，1H，CH)，7.44(dd，J＝60.4Hz，J＝8.4Hz，4H，ArH)。
b)α-(4-氯苯基)-α-[(R)-N-[1-(4-氯苯基)乙基]氨基]乙酸甲酯鹽酸鹽將α-溴-α-(4-氯苯基)乙酸甲酯(2.63g，10mmol)、(R)-1-(4-氯苯基)乙胺(1.55g，10mmol)、碳酸鉀(2.76g，20mmol)和碘化四丁基銨(500mg，1.35mmol)在無水乙腈(10mL)中的混合物在45℃加熱12小時。在混合物冷卻至室溫后，將溶劑在真空下蒸發(fā)。然后，將殘余物在冰冷的水(50mL)與乙酸乙酯(70mL)之間分配。將水層用另外的乙酸乙酯(2×50mL)萃取兩次并干燥(Na2SO4)。在溶劑蒸發(fā)后，將殘余物通過硅膠色譜法純化(EtOAc/己烷，5∶95至15∶85)，然后轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽，得到作為無色粉末的本標(biāo)題化合物(2.5g，74％，兩種非對映體的混合物)1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.74(t，J＝6.8Hz，3H，CH3)，3.69(s，1.5H，0.5CH3)，3.82(s，1.5H，0.5CH3)，4.41(q，J＝6.8Hz，0.5H，0.5CH)，4.49(q，J＝6.8Hz，0.5H，0.5CH)，4.99(s，0.5H，0.5CH)，5.12(s，0.5H，0.5CH)，7.42-7.56(m，8H，ArH)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C17H17Cl2NO2的計算值337.0；實測值338.0(M+H)+。
c)(R，S)-α-(4-氯苯基)-α-[(R)-N-[1-(4-氯苯基)乙基]-N-(肉桂?；?氨基]乙酸甲酯在0℃向(R，S)-α-(4-氯苯基)-α-[(R)-N-[1-(4-氯苯基)乙基]氨基]乙酸甲酯(1.0g，2.96mmol)和4-(N，N-二甲基氨基)吡啶(100mg，0.82mmol)在二氯甲烷(30mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中加入肉桂酰氯(542mg，3.25mmol)。然后，緩慢加入N，N-二異丙基乙基胺(2.0mL，11.5mmol)。于0℃攪拌20分鐘后，將反應(yīng)混合物在25℃加熱1小時，然后用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌，干燥(Na2SO4)，并減壓濃縮至干。通過硅膠色譜法純化(AcOEt/己烷，1∶8)，得到作為淡黃色固體的本標(biāo)題化合物(1.0g，74％)質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C26H23Cl2NO3的計算值467.0；實測值468.0(M+H)+。
d)α-(4-氯苯基)-α-[(R)-N-[1-(4-氯苯基)乙基]-N-(肉桂?；?氨基]乙酸把(R，S)-α-(4-氯苯基)-α-[(R)-N-[1-(4-氯苯基)乙基]-N-(肉桂?；?氨基]乙酸甲酯(453mg，1.0mmol)和氫氧化鈉(600mg，15.0mmol)在四氫呋喃(5mL)、甲醇(8mL)和水(2mL)中的溶液在25℃攪拌2小時。將反應(yīng)混合物減壓濃縮，并用1N HCl將pH調(diào)節(jié)至4。將所得溶液用AcOEt(20mL)萃取2次，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)，得到作為無色粉末的本標(biāo)題化合物(420mg，92％，兩種非對映體的混合物)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.62(d，J＝7.0Hz，1.5H，0.5CH3)，1.84(d，J＝7.0Hz，1.5H，0.5CH3)，4.84(s，1H，CH)，4.88(s，1H，CH)，5.45-5.53(m，1H，CH)，6.93-7.91(m，15H，13ArH+2CH)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C25H21Cl2NO3的計算值453.0；實測值454.0(M+H)+。
e)(S)-α-(4-氯苯基)-α-[(R)-N-[1-(4-氯苯基)乙基]-N-(肉桂?；?氨基]乙酰胺向(R，S)-α-(4-氯苯基)-α-[(R)-N-[1-(4-氯苯基)乙基]-N-(肉桂?；?氨基]乙酸(400mg，0.88mmol)、O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N，N’-四甲基脲六氟磷酸鹽(502mg，1.32mmol)、氯化鋁(94mg，1.76mmol)和1-羥基苯并三唑(178mg，1.32mmol)在二甲基甲酰胺(3mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中緩慢加入N，N-二異丙基乙胺(613μL，3.52mmol)。2小時后，將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯(100mL)與水(60mL)之間分配，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。用柱色譜法純化(AcOEt/己烷，2∶8)，得到作為無色固體的本標(biāo)題化合物(150mg，38％，“在用AcOEt/己烷1∶3進(jìn)行的TLC中，下方的非對映體”)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.86(d，J＝6.8Hz，3H，CH3)，4.76(s，1H，CH)，5.40-5.49(m，1H，CH)，5.62(brs，1H，NH)，6.32(br s，1H，NH)，6.90-7.86(m，15H，13ArH+2CH)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C25H22Cl2N2O2的計算值452.0；實測值453.0(M+H)+。
f)(3S)-1，3，6，7-四氫-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-苯基-6-(苯基硒基)-1，4-二氮雜-2，5-二酮將三氟甲磺酸銀(1.69g，6.6mmol)加到(S)-α-(4-氯苯基)-α-[(R)-N-[1-(4-氯苯基)乙基]-N-(肉桂?；?氨基]乙酰胺(1.5g，3.3mmol)在乙腈(120mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中。向所得溶液中依次加入苯硒基溴(1.54g，6.53mmol)和二甲基甲酰胺(5.2mL)。6小時后，使溶劑在真空下蒸發(fā)。將殘余物在乙酸乙酯(100mL)與1N碳酸氫鈉(70mL)之間分配，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。用柱色譜法純化(AcOEt/己烷，1∶3)得到本標(biāo)題化合物，將其從Et2O中重結(jié)晶，得到無色棱晶(855mg，43％)1H NMR(400MHz，CDCl2)δ1.68(d，J＝7.0Hz，3H，CH3)，4.29(d，J＝12.2Hz，1H，CH)，4.79(d，J＝12.2Hz，1H，CH)，5.28(s，1H，CH)，6.21-6.25(m，3H，ArH)，6.31(q，J＝7.0Hz，1H，CH)，6.71-6.76(m，4H，ArH)，6.93-7.11(m，6H，NH+5ArH)，7.34-7.40(m，4H，ArH)，7.50(d，J＝8.4Hz，2H，ArH)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C31H26Cl2N2O2Se的計算值608.0；實測值609.0(M+H)+。
g)(3S)-1，3-二氫-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-苯基-1，4-二氮雜-2，5-二酮將過氧化氫(500μL，30％在水中)緩慢加到(3S)-1，3，6，7-四氫-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-苯基-6-(苯基硒基)-1，4-二氮雜-2，5-二酮(300mg，0.49mmol)在氫呋喃(6mL)內(nèi)的溶液中。20分鐘后，把溶劑減壓蒸發(fā)，并將殘余物在1N碳酸氫鈉(20mL)與乙酸乙酯(50mL)之間分配，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。用柱色譜法純化(AcOEt/己烷/CH2Cl2，1∶2∶2)得到作為無色粉末的本標(biāo)題化合物(200mg，85％)1HNMR(400MHz，CDCl3)δ1.70(d，J＝7.2Hz，3H，CH3)，5.28(s，1H，CH)，5.70(d，J＝1.6Hz，1H，CH)，6.35(q，J＝7.2Hz，1H，CH)，6.83(d，J＝8.8Hz，2H，ArH)，7.09(d，J＝8.8Hz，2H，ArH)，7.18-7.42(m，7H，ArH)，7.53(d，J＝8.8Hz，2H，ArH)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C25H20Cl2N2O2的計算值450.0；實測值451.0(M+H)+。
h)5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代-7-苯基-1，4-二氮雜-1-基]戊酸鈉鹽按照在1位上進(jìn)行烷基化的一般方法，然后按照實施例1步驟b中描述的方法脫保護(hù)，由(3S)-1，3-二氫-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-苯基-1，4-二氮雜-2，5-二酮合成本標(biāo)題化合物1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.45-1.53(m，4H，2CH2)，1.68(d，J＝7.2Hz，3H，CH3)，2.29(t，J＝6.8Hz，2H，CH2)，2.87-2.93(m，1H，CH)，4.15-4.23(m，1H，CH)，5.40(s，1H，CH)，5.72(s，1H，CH)，6.32(q，J＝7.2Hz，1H，CH)，6.81(d，J＝7.6Hz，2H，ArH)，7.02-7.08(m，4H，ArH)，7.26-7.34(m，5H，ArH)，7.48(d，J＝8.4Hz，2H，ArH)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C30H28Cl2N2O4的計算值550.0；實測值551.0(M+H)+。
實施例575-[(3S)-7-(2-溴苯基)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代-1，4-二氮雜-1-基]戊酸鈉鹽 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.46-1.53(m，4H，2CH2)，1.69(d，J＝7.2Hz，3H，CH3)，2.29(t，J＝6.8Hz，2H，CH2)，2.87-2.93(m，1H，CH)，4.15-4.23(m，1H，CH)，5.41(s，1H，CH)，5.66(s，1H，CH)，6.31(q，J＝7.2Hz，1H，CH)，6.88(d，J＝7.6Hz，2H，ArH)，7.10-7.60(m，10H，ArH)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C30H27BrCl2N2O4的計算值628.0；實測值629.0(M+H)+。
實施例585-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(2，5-二甲基苯基)-2，5-二氧代-1，4-二氮雜-1-基]戊酸鈉鹽 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.43-1.63(m，4H，2CH2)，1.70(d，J＝7.2Hz，3H，CH3)，2.04(s，3H，CH3)，2.12(s，3H，CH3)，2.27-2.34(m，2H，CH2)，2.87-2.93(m，1H，CH)，4.15-4.23(m，1H，CH)，5.51(s，1H，CH)，5.75(s，1H，CH)，6.26(q，J＝7.2Hz，1H，CH)，6.77(d，J＝7.6Hz，2H，ArH)，6.80-7.65(m，9H，ArH)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C32H32Cl2N2O4的計算值578.0；實測值579.0(M+H)+。
實施例595-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(2-甲基苯基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸鈉鹽
a)(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(2-甲基苯基)-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮將(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮(120mg，0.22mmol)、四(三苯基膦)鈀(0)(25mg，0.022mmol)、2-甲基苯硼酸(35mg，0.26mmol)和碳酸鈉(220μL，2M水溶液)在乙醇(300μL)和甲苯(5mL)中的溶液在氬氣氛下于90℃加熱10小時。混合物于室溫冷卻后，使溶劑在真空下蒸發(fā)。將殘余物在AcOEt(20mL)與水(15mL)之間分配，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。通過硅膠色譜法純化(AcOEt/己烷/CH2Cl2，1∶6∶3)獲得本標(biāo)題化合物(92mg，68％)，為無色粉末1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.78(d，J＝7.2Hz，3H，CH3)，1.99(s，3H，CH3)，5.29(s，1H，CH)，6.51(q，J＝7.2Hz，1H，CH)，6.64-6.67(m，2H，ArH)，6.71(d，J＝8.4Hz，1H，ArH)，6.93(d，J＝8.4Hz，2H，ArH)，7.05-7.11(m，1H，ArH)，7.15(dd，J＝8.0Hz，J＝2.0Hz，1H，ArH)，7.20-7.26(m，3H，ArH)，7.35(d，J＝8.4Hz，2H，ArH)，7.56(d，J＝8.4Hz，2H，ArH)，7.61(d，J＝2.0Hz，1H，ArH)，7.91(br s，1H，NH)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C30H24Cl2N2O2的計算值514.0；實測值515.0(M+H)+。
b)5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(2-甲基苯基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸鈉鹽按照在1位上進(jìn)行烷基化的一般方法，然后按照實施例1步驟b中描述的方法脫保護(hù)，由(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(2-甲基苯基)-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮制備本標(biāo)題化合物1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.65(m，7H，CH3+2CH2)，1.98(s，3H，CH3)，2.41(t，J＝7.6Hz，2H，CH2)，3.70-3.77(m，1H，CH)，4.39-4.46(m，1H，CH)，5.37(s，1H，CH)，6.44(q，J＝7.2Hz，1H，CH)，6.50-6.53(m，2H，ArH)，6.86(d，J＝8.8Hz，2H，ArH)，6.91(d，J＝8.4Hz，1H，ArH)，7.06-7.15(m，2H，ArH)，7.20-7.26(m，3H，ArH)，7.32(d，J＝8.4Hz，2H，ArH)，7.50-7.52(m，3H，ArH)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C35H32Cl2N2O4的計算值614.0；實測值615.0(M+H)+。
實施例605-[4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸鈉鹽 a)1-(4-氯-2-硝基苯基)乙醇在氬氣氛下于-78℃將甲基鋰(46mL，1.4M在Et2O中)溶液緩慢加到4-氯-2-硝基苯甲醛(10g，53.9mmol)在無水四氫呋喃(150mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中。20分鐘后，于-78C將反應(yīng)混合物用水(400mL)處理，用乙酸乙酯(500mL)萃取兩次，干燥(Na2S4)并減壓濃縮至干。通過硅膠色譜法純化(EtOAc/CH2Cl2/EtOH，1∶6∶1)。得到本標(biāo)題化合物(7.2g，66％)為黃色油狀物1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.56(d，J＝6.4Hz，3H，ArH)，2.40(br s，1H，OH)，5.42(q，J＝6.4Hz，1H，CH)，7.63(dd，J＝8.4Hz，J＝2.0Hz，1H，ArH)，7.82(d，J＝8.4Hz，1H，ArH)，7.92(d，J＝2.0Hz，1H，ArH)。
b)[(S)-1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基](1S)-樟腦酸鹽和[(R)-1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基](1S)-樟腦酸鹽于0℃氬氣氛下把二異丙基乙胺(9.3mL，53.3mmol)緩慢加到(R，S)-1-(4-氯-2-硝基苯基)乙醇(10.2g，50.8mmol)、4-二甲基氨基吡啶(244mg，2.0mmol)和(1S)-莰基氯(11.0g，50.8mmol)在四氫呋喃(70mL)中的溶液中。然后將反應(yīng)混合物加熱至室溫。8小時后，使溶劑在真空下蒸發(fā)，并將殘余物在CH2Cl2與1N NaHCO3之間分配，干燥(Na2SO4)并通過硅膠過濾。將溶劑減壓濃縮。把殘余物溶解于氯仿(100mL)中，然后緩慢地加入己烷(300mL)。10分鐘后，本標(biāo)題化合物開始結(jié)晶。20分鐘后，把棱晶過濾并用小部分二氯甲烷/己烷(1∶5)洗滌。該化合物稱為本標(biāo)題化合物(4.8g，25％)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.03(s，3H，CH3)，1.07(s，3H，CH3)，1.15(s，3H，CH3)，1.70(d，J＝6.4Hz，4H，2CH2)，1.88-2.01(m，2H，CH2)，235-2.42(m，1H，CH)，6.52(q，J＝6.4Hz，1H，CH)，7.64(dd，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz，1H，ArH)，7.71(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，7.99(d，J＝2.0Hz，1H，ArH)。將濾液在乙醚中重結(jié)晶，得到其它非對映體[(R)-1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基](1S)-樟腦酸鹽。
c)(R，S)-N-[1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基]鄰苯二甲酰亞胺于-78℃和氬氣氛下把偶氮二甲酸二異丙酯(1.46mL，7.44mmol)加到(R，S)-1-(4-氯-2-硝基苯基)乙醇(1.0g，4.96mmol)、三苯基膦(730mg，4.96mmol)和鄰苯二甲酰亞胺(730mg，4.96mmol)在四氫呋喃(20mL)內(nèi)的溶液中。然后，將反應(yīng)混合物加熱至25℃。2小時后，將溶劑減壓濃縮，通過硅膠色譜法純化(AcOEt/己烷，1∶1)獲得本標(biāo)題化合物(1.4g，85％)，為無色固體1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.97(d，J＝7.2Hz，3H，CH3)，6.04(q，J＝7.2Hz，1H，ArH)，7.58-7.61(m，1H，ArH)，7.72-7.75(m，2H，ArH)，7.81-7.84(m，3H，ArH)，7.81(d，J＝8.8，1H，ArH)。
d)(R，S)-1-(4-氯-2-硝基苯基)乙胺將(R，S)-N-[1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基]鄰苯二甲酰亞胺(1.2g，3.63mmol)和肼(1.2mL，38.2mmol)在乙醇(10mL)中的混合物回流加熱1小時。在混合物冷卻至室溫后，過濾去沉淀物并將溶劑在真空下蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物用硅膠柱色譜法純化(EtOAc/EtOH/CH2Cl2，4∶1∶5)，得到本標(biāo)題化合物(600mg，82％)，為無色油狀物1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.44(d，J＝6.5Hz，3H，CH3)，1.58(br s，2H，NH2)，4.60(q，J＝6.5Hz，1H，CH)，7.58(dd，J＝8.8Hz，J＝2.0Hz，1H，ArH)，7.79-7.81(m，2H，ArH)。
e)5-[3-(4-氯苯基)-4-[1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸叔丁酯按照合成二氮雜的一般方法，由(R，S)-1-(4-氯-2-硝基苯基)乙胺制備本標(biāo)題化合物1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.45(s，9H，3CH3)，1.60-1.69(m，4H，2CH2)，1.79(d，J＝6.8Hz，3H，CH3)，2.22(t，J＝7.0Hz，2H，CH2)，3.58-3.67(m，1H，CH)，4.17-4.25(m，1H，CH)，5.38(s，1H，CH)，6.52(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，6.62-6.70(m，3H，2ArH+CH)，6.94(d，J＝8.8Hz，2H，ArH)，7.45(dd，J＝8.4Hz，J＝2.0Hz，1H，ArH)，7.56(dd，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz，1H，ArH)，7.67(d，J＝8.4Hz，1H，ArH)，7.86(d，J＝2.4Hz，1H，ArH)，7.97(d，J＝2.0Hz，1H，ArH)f)5-[4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸叔丁酯將氯化銨(220mg，4.3mmol)在水(2.5mL)中的溶液加到5-[3-(4-氯苯基)-4-[1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸叔丁酯(230mg，0.306mmol)在乙醇(5mL)內(nèi)的溶液中。把所得溶液加熱至80℃并加入鐵(200mg，3.58mmol)。于80℃2小時后，將反應(yīng)混合物在室溫冷卻，通過硅藻土過濾并蒸發(fā)。將殘余物在乙酸乙酯與水之間分配，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。通過硅膠色譜法純化(EtOAc/己烷，1∶1)獲得本標(biāo)題化合物(210mg，95％)，為無色固體1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.44(s，9H，3CH3)，1.57-1.63(m，4H，2CH2)，1.74(d，J＝7.2Hz，3H，CH3)，2.24(t，J＝7.2Hz，2H，CH2)，3.63-3.70(m，1H，CH)，4.28-4.35(m，1H，CH)，4.75(br s，2H，NH2)，5.28(s，1H，CH)，6.27(q，J＝7.2Hz，1H，CH)，6.60-6.69(m，5H，ArH)，6.90(d，J＝9.2Hz，2H，ArH)，7.20(d，J＝8.4Hz，1H，ArH)，7.49(dd，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz，1H，ArH)，7.93(d，J＝2.0Hz，1H，ArH)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C32H34Cl2IN3O4的計算值721.0；實測值722.0(M+H)+。
g)5-[4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸鈉鹽按照實施例1步驟b描述的方法，由5-[4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸叔丁酯制備本標(biāo)題化合物(76％)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.63-1.68(m，4H，2CH2)，1.75(d，J＝6.8Hz，3H，CH3)，237-2.41(m，2H，CH2)，3.64-3.71(m，1H，CH)，4.33-4.40(m，1H，CH)，5.29(s，1H，CH)，6.26(q，J＝6.8Hz，1H，CH)，6.61-6.68(m，5H，ArH)，6.90(d，J＝8.8Hz，2H，ArH)，7.21(d，J＝8.4Hz，1H，ArH)，7.50(dd，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz，1H，ArH)，7.93(d，J＝2.0Hz，1H，ArH)。質(zhì)譜(LCMS，ESI poS.)C28H26Cl2IN3O4的計算值665.0；實測值666.0(M+H)+。
實施例615-[4-[(2-氨基-4-氯芐基]-7-溴-3-(4-氯苯基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸鈉鹽 a)5-[7-溴-3-(4-氯苯基)-4-[(4-氯-2-硝基芐基]-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸叔丁酯按照苯并二氮雜的烷基化的一般方法，由5-[7-溴-3-(4-氯苯基)-3，4-二氫-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸叔丁酯和4-氯-2-硝基芐基氯制備本標(biāo)題化合物(63％)質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C31H30BrCl2N3O6的計算值689.0；實測值690.0(M+H)+。b)5-[4-(2-氨基-4-氯芐基)-7-溴-3-(4-氯苯基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸鈉鹽依次按照實施例1步驟e、f描述的方法，由5-[7-溴-3-(4-氯苯基)-4-[(4-氯-2-硝基苯基)甲基]-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸叔丁酯制備本標(biāo)題化合物(46％)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.62-1.78(m，4H，2CH2)，2.36-2.40(m，2H，CH2)，3.66-3.73(m，1H，CH)，4.24-4.31(m，1H，CH)，4.37(d，J＝14.8Hz，1H，CH)，5.39(s，1H，CH)，5.42(d，J＝14.8Hz，1H，CH)，6.60(dd，J＝8.4Hz，J＝2.4Hz，1H，ArH)，6.68-6.71(m，3H，ArH)，6.80(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，6.97(d，J＝8.4Hz，2H，ArH)，7.07(d，J＝8.4Hz，1H，ArH)，7.34(dd，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz，1H，ArH)，7.74(d，J＝2.4Hz，1H，ArH)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C27H24BrCl2N3O4的計算值603.0；實測值604.0(M+H)+。
實施例624-(4-氯-芐基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.09(s，1H)，7.87(s，1H)，7.52(d，J＝8.3Hz，1H)，7.44-7.37(br m，2H)，7.36-7.30(m，2H)，7.10-7.04(m，2H)，6.87-6.77(br m，2H)，6.43(d，J＝8.3Hz，1H)，5.33(s，1H)，5.03-4.91(m，2H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI，pos.)C22H15Cl2IN2O2計算值535.9；實測值537.03(M+H)。
實施例634-(R)-[1-(2-氨基-4-氯-5-氟-苯基)-乙基]-3(S)-(4-氯-苯基)-7-碘-1-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 a)1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙醇將4-氯-3-氟-苯甲醛(5.14g，32.4mmol)溶解于THF(100mL)并于-78℃和氮氣氛下放置。保持同樣溫度在3分鐘期間將甲基鋰(1.6M在乙醚中的溶液，22.3mL)加到反應(yīng)中。加入后，將反應(yīng)在室溫攪拌1小時。然后，把反應(yīng)倒入冰水上，并用乙酸乙酯和鹽酸1N萃取。收集有機(jī)層，將其用硫酸鈉干燥，過濾并在真空下濃縮得到粗產(chǎn)物，用50％己烷-乙酸乙酯作為溶劑將其進(jìn)行硅膠色譜純化，得到5.1g 1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙醇。1H NMR(400MHz，Cl3CD)δ7.37(t，J＝8.14Hz，1H)，7.20(dd，J＝1.86，10.00Hz，1H)，7.09(dd，J＝1.86，8.14Hz，1H)，4.89(m，1H)，1.93(br s，1H)，1.49(d，J＝6.51，3H)。
b)2-[1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙基]-異吲哚-1，3-二酮把1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙醇(5.1g，29.2mmol)、鄰苯二甲酰亞胺(4.3g，29.2mmol)和三苯基膦(11.49g，43.8mmol)溶解于THF(100ml)中并于-78℃氮氣氛下置放。然后，一次性加入偶氮二甲酸二異丙酯(8.86g，43.8mmol)。把反應(yīng)于室溫放置并攪拌30分鐘。將溶劑蒸發(fā)，并用70％己烷-乙酸乙酯作為溶劑將其進(jìn)行硅膠色譜純化，得到4.08g2-[1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙基]-異吲哚-1，3-二酮。1H NMR(400MHz，Cl3CD)δ7.83(m，2H)，7.73(m，2H)，7.34(m，2H)，7.21(dd，J＝1.93，8.14Hz，1H)，5.53(m，1H)，1.91(d，J＝7.29，3H)。
c)1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙胺把2-[1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙基]-異吲哚-1，3-二酮(4.08g，13.4mmol)溶解于THF(100mL)中。加入肼(4mL)。將反應(yīng)于80℃攪拌1小時。然后，將溶劑蒸發(fā)，并用乙酸乙酯作為溶劑將其硅膠色譜純化，得到2.0g 1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙胺。1H NMR(400MHz，Cl3CD)δ7.34(t，J＝7.97Hz，1H)，7.18(dd，J＝1.90，10.25Hz，1H)，7.08(dd，J＝1.90，7.97Hz，1H)，4.12(m，1H)，1.36(d，J＝6.64，3H)。
d)N-[1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙基]-2，2，2-三氟-乙酰胺把1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙胺(2.0g，11.5mmol)溶解于吡啶(20mi)中并于0℃和氮氣氛下放置。然后，一次性加入三氟乙酸酐(3.63g，17.2mmol)。使反應(yīng)達(dá)到室溫并攪拌16小時。真空下除去溶劑，并用乙酸乙酯-氫氧化鈉1N萃取粗產(chǎn)物。收集有機(jī)層并用鹽酸(1N)和鹽水再次萃取。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并在真空下濃縮得到粗產(chǎn)物，用50％己烷-乙酸乙酯作為溶劑將其進(jìn)行硅膠色譜純化，得到1.374gN-[1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙基]-2，2，2-三氟-乙酰胺。1H NMR(400MHz，Cl3CD)δ7.49(d，J＝7.29Hz，1H)，7.35(t，J＝7.92Hz，1H)，7.11(dd，J＝1.93，9.86Hz，1H)，7.04(dd，J＝1.93，7.29Hz，1H)，5.06(m，1H)，1.53(d，J＝7.07，3H)。
e)N-[1-(4-氯-3-氟-2-硝基-苯基)-乙基]-2，2，2-三氟-乙酰胺把N-[1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙基]-2，2，2-三氟-乙酰胺(1.374g，5.09mmol)于室溫溶解于濃硫酸(25mL)中。使用冰水浴，將溶液于0℃放置，并加入硝酸鉀(0.567g，5.60mmol)。將反應(yīng)在同樣溫度攪拌15分鐘，然后使其達(dá)到室溫并攪拌16小時。然后把反應(yīng)倒入冰水上并用乙酸乙酯-水萃取。收集有機(jī)層并用氫氧化鈉(1N)和鹽水再次萃取。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并在真空下濃縮得到粗產(chǎn)物，用80％己烷-乙酸乙酯作為溶劑將其進(jìn)行硅膠色譜純化，得到1.13g N-[1-(4-氯-3-氟-2-硝基-苯基)-乙基]-2，2，2-三氟-乙酰胺。1H NMR(400MHz，Cl3CD)δ8.16(d，J＝6.43Hz，1H)，7.30(d，J＝9.00Hz，1H)，7.08(br s，1H)，5.52(m，1H)，1.65(d，J＝7.07，3H)。
f)1-(4-氯-3-氟-2-硝基-苯基)-乙胺把N-[1-(4-氯-3-氟-2-硝基-苯基)-乙基]-2，2，2-三氟-乙酰胺(286mg，0.909mmol)于室溫溶解于THF(10mL)中。然后，加入氫氧化鋰一水合物(46mg，1.09mmol)在水(2mL)中的溶液。繼之用乙酸乙酯作為溶劑，將反應(yīng)進(jìn)行TLC。2小時后，再次加入氫氧化鋰一水合物(46mg，1.09mmol)在水(2mL)中的溶液。將反應(yīng)于室溫攪拌3天。然后，將反應(yīng)用乙酸乙酯-氫氧化鈉(1N)和鹽水萃取。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并在真空下濃縮得到粗產(chǎn)物，將其進(jìn)行硅膠色譜純化，得到148mg 1-(4-氯-3-氟-2-硝基-苯基)-乙胺。1H NMR(400MHz，Cl3CD)δ7.90(d，J＝6.43Hz，1H)，7.64(d，J＝10.07Hz，1H)，4.62(m，1H)，1.58(br s，2H)，1.33(d，J＝6.43，3H)。
g)4(R，S)-[1-(2-氨基-4-氯-5-氟-苯基)-乙基]-3(S，R)-(4-氯-苯基)-7-碘-1-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮按照合成二氮雜的一般方法合成本標(biāo)題化合物。1H NMR(400MHz，Cl3CD)δ7.79(d，J＝1.93Hz，1H)，7-57(dd，J＝1-93，6.64Hz，1H)，7.32(d，J＝10.23Hz，1H)，7.03(d，J＝6.64Hz，1H)，6.85(m，3H)，6-57(d，J＝8.36Hz，2H)，6.10(m，1H)，5.54(s，1H)，4.42(m，1H)，4.23(m，1H)，3.97(br s，2H)，3.74(br s，2H)，3.46(m，6H)，1-67(d，J＝7.07Hz，3H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H28Cl2FIN4O3的計算值696.06；實測值696.9(M+H)。
實施例644(R，S)-[1-(2-氨基-4-氯-5-羥基-苯基)-乙基]-3(S，R)-(4-氯-苯基)-7-碘-1-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮
該化合物是作為深灰色拉63的副產(chǎn)物獲得的(步驟g)。1H NMR(400MHz，Cl3CD)δ7.82(d，J＝1.93Hz，1H)，7.59(dd，J＝1.93，8.79Hz，1H)，7.31(s，1H)，7.02(s，1H)，6.88(m，3H)，7.37(d，J＝8.57Hz，2H)，6.05(m，1H)，5.76(s，1H)，4.41(m，1H)，4.24(m，1H)，3.97(br s，2H)，3.75(br s，2H)，3.47(m，6H)，1.75(d，J＝6.86Hz，3H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H29Cl2IN4O4的計算值694.06；實測值694.9(M+H)。
實施例653(S)-(4-氯-2-羥基-苯基)-4(R)-[1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，Cl3CD)δ8.97(s，1H)，8.03(d，J＝1.93Hz，1H)，7.66(br s，1H)，7.34(d，J＝8.57Hz，2H)，7.21(dd，J＝1.93，8.36Hz，1H)，7.16(d，J＝8.36Hz，2H)，6.42(m，2H)，6.31(m，2H)，6.22(d，J＝8.57Hz，1H)，5.13(s，1H)，1.88(br s，1H)，1.62(d，J＝7.07Hz，3H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C23H17Cl2IN2O3計算值565.9；實測值566.4(M+H)。
實施例664-[1-(2-氨基-4-氯-苯基)-乙基]-3-(4-氯-苯基)-7-碘-1-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基]-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.91(s，1H)，7.72(m，1H)，7.67(d，1H，J＝6.4Hz)，7.51(m，1H)，7.34(m，1H)，6.98(m，3H)，6.45(m，2H)，6.23(q，1H，J＝6.4Hz)，5.98(m，1H)，4.28(m，1H)，4.05-3.56(bm，10H)，3.40(bs，1H)，3.05(s，3H)，2.36-2.18(bm，2H)，1.89(d，3H，J＝6.8Hz)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C31H34Cl2IN5O2的計算值705.1；實測值705.9(M+H)。
實施例674-(2-氨基-4-氯-芐基)-3-(4-氯-苯基)-1-(4-二甲基氨基-丁基)-7-碘-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.85(d，1H，J＝2.0Hz)，7.48(dd，1H，J＝2.0，8.8Hz)，7.21(d，1H，J＝8.4Hz)，7.04(d，2H，J＝8.4Hz)，6.94(d，1H，J＝8.8Hz)，6.81(m，3H)，6.62(dd，1H，J＝2.0，8.8Hz)，5.53(s，1H)，5.23(d，1H，J＝14.4Hz)，4.63(d，1H，J＝14.4Hz)，4.40(m，1H)，3.77(m，1H)，3.07(m，2H)，2.85(d，6H，J＝5.2Hz)，1.71-1.52(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H29Cl2IN4O2的計算值650.07；實測值651.0(M+H)。
實施例684-(2-氨基-4-氯-芐基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-1-(4-嗎啉-4-基-丁基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.86(d，1H，J＝2.0Hz)，7.65(dd，1H，J＝2.0，8.8Hz)，7.21(d，1H，J＝8.4Hz)，7.04(d，2H，J＝8.8Hz)，6.94(d，H，J＝8.8Hz)，6.80(m，3H)，6.60(dd，1H，J＝2.0，8.8Hz)，5.54(s，1H)，5.25(d，1H，J＝14.4Hz)，4.62(d，1H，J＝14.4Hz)，4.40(m，1H)，4.09(m，2H)，3.75(m，3H)，3.41(m，2H)，3.09(m，4H)，1.60(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C30H31Cl2IN4O3的計算值692.08；實測值693.0(M+H)。
實施例694-(2-氨基-4-氯-芐基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-1-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丁基]-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.84(d，1H，J＝2.4Hz)，7.64(dd，1H，J＝2.0，8.4Hz)，7.21(d，1H，J＝8.0Hz)，7.04(d，2H，J＝8.4Hz)，6.94(d，H，J＝8.8Hz)，6.80(m，3H)，6.63(dd，1H，J＝2.4，8.4Hz)，5.53(s，1H)，5.27(d，1H，J＝14.4Hz)，4.61(d，1H，J＝14.4Hz)，4.39(m，1H)，3.78(m，1H)，3.40(m，4H)，3.20(m，4H)，2.91(s，3H)，2.88(m，2H)，1.70-1.52(m，4H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C31H34Cl2IN5O2的計算值705.1；實測值706.2(M+H)。
實施例704-(2-氨基-4-氯-芐基)-3-(4-氯-苯基)-1-(3-二甲基氨基-丙基)-7-碘-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.88(d，1H，J＝2.4Hz)，7.67(dd，1H，J＝2.0，8.4Hz)，7.23(d，1H，J＝8.0Hz)，7.07(d，2H，J＝8.4Hz)，6.93(d，1H，J＝8.8Hz)，6.85(d，2H，J＝8.8Hz)，6.78(d，1H，J＝2.0Hz)，6.62(dd，1H，J＝2.4，8.0Hz)，5.57(s，1H)，5.06(d，1H，J＝14.4Hz)，4.85(d，1H，J＝14.4Hz)，4.36(m，1H)，3.83(m，1H)，3.04(m，2H)，2.85(d，6H，J＝3.2Hz)，2.04-1.90(m，2H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C27H27Cl2IN4O2的計算值636.06；實測值636.9(M+H)。
實施例714-(2-氨基-4-氯-芐基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-1-(3-嗎啉-4-基-丙基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.88(d，1H，J＝2.4Hz)，7.66(dd，1H，J＝2.0，8.4Hz)，7.24(d，1H，J＝8.0Hz)，7.08(d，2H，J＝8.4Hz)，6.95(d，1H，J＝8.8Hz)，6.86(d，2H，J＝8.4Hz)，6.79(d，1H，J＝2.4Hz)，6.63(dd，1H，J＝2.4，8.4Hz)，5.58(s，1H)，5.04(d，1H，J＝14.8Hz)，4.84(d，1H，J＝14.8Hz)，4.39(m，1H)，4.09(m，2H)，3.82(m，1H)，3.74(m，2H)，3.42(m，2H)，3.08(m，4H)，2.04-1.95(m，2H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H29Cl2IN4O3的計算值678.07；實測值679.0(M+H)。
實施例724-(4-氯-2-羥基芐基)-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基-乙氧基)乙基]-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.95(d，J＝2.1Hz，1H)，7.56(dd，J＝2.2Hz，8.6Hz，1H)，7.13(t，J＝8.0Hz，2H)，7.07(d，J＝2.1Hz，1H)，6.98(d，J＝8.6Hz，2H)，6.82(dd，J＝2.1Hz，7.9Hz，1H)，6.59(dd，J＝1.0Hz，8.8Hz，2H)，5.51(s，1H)，5.41(d，J＝15.0Hz，1H)，5.33(s，1H)，4.41(d，15.0Hz，1H)，4.05-4.11(m，2H)，3.92-3.99(m，1H)，3.76-3.69(m，1H)，3.64-3.56(m，2H)，3.54-3.48(m，2H)，3.37(s，3H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C27H25C12IN2O5的計算值654.02；實測值654.8(M+H)。
實施例734-[(S)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-(3R)-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-(2-嗎啉-4-基乙基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.86(d，J＝2.1Hz，1H)，7.58(dd，J＝2.1Hz，8.5Hz，1H)，7.28(d，J＝8.1Hz，1H)，6.92(m，3H)，6.76(m，3H)，6.57(dd，J＝2.1Hz，8.4Hz，1H)，6.27(q，J＝7.3Hz，1H)，5.31(s，1H)，4.63-4.55(m，1H)，3.82-3.73(m，1H)，3.60-3.54(m，2H)，3.53-3.45(m，2H)，2.69-2.61(m，1H)，2.46-2.34(m，3H)，2.27-2.19(m，2H)，1.75(s，3H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H29Cl2IN4O3的計算值678.07；實測值678.9(M+H)。
實施例744-(2-氨基-4-氯芐基)-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)丙基]-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.83(d，J＝2.1Hz，1H)，7.63(dd，J＝2.1Hz，8.6Hz，1H)，7.20(d，J＝7.9Hz，1H)，7.07-7.02(m，2H)，6.95(d，J＝8.8Hz，1H)，6.85-6.80(m，2H)，6.77(d，J＝2.1Hz，1H)，6.57(dd，J＝2.1Hz，7.9Hz 1H)，5.50(s，1H)，5.13(d，J＝14.4Hz，1H)，4.73(d，J＝14.6Hz 1H)，4.44-4.32(m，1H)，3.81-3.70(m，1H)，3.37(s，2H)，2.10-2.72(m，11H)，1.63-1.85(m，2H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C30H32Cl2IN5O2的計算值691.1；實測值692.0(M+H)。
實施例755-(2-烯丙氧基-4-氯芐氧基)-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-1，3-二氫苯并[e][1，4]二氮雜-2-酮 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.01(d，J＝2.1Hz，1H)，7.86(dd，J＝2.1Hz，8.5Hz，1H)，7.58-7.47(m，3H)，7.42-7.330(m，3H)，6.96(dd，J＝1.9Hz，8.1Hz，1H)，6.92(d，J＝1.9Hz，1H)，6.13-6.02(m，1H)，5.51-5.31(m，4H)，4.67(s，1H)，4.63(m，2H)，4.12-4.02(m，1H)，3.97-3.89(m，1H)，3.87-3.79(m，1H)，3.66-3.59(m，1H)，3.58-3.54(m，2H)，3.51-3.45(m，2H)，3.36(s，3H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C30H29Cl2IN2O5的計算值694.05；實測值694.9(M+H)。
實施例764-(2-氨基-4-氯芐基)-3-(4-氯苯基)-7-碘-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.74(s，1H)，8.04(s，1H)，7.56(dd，J＝1.9Hz，8.3Hz，1H)，7.12-7.69(m，3H)，6.91-6.81(m，2H)，6.71(d，J＝1.9Hz，1H)，(dd，J＝1.9Hz，7.9Hz，1H)，6.52(d，J＝8.3Hz，1H)，5.5(d，J＝14.5Hz，1H)，4.93(s，2H)，4.34(d，J＝15.0Hz，1H)。
實施例774-[1-(3-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-3，4-二氫-1H-苯并[e ][1，4]二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.06(d，J＝2.1Hz，1H)，7.85(s，1H)，7.49(dd，J＝2.1Hz，8.3Hz，1H)，7.22(d，J＝8.1Hz，1H)，7.02(s，1H)，6.97(d，J＝8.5Hz，2H)，6.91(dd，J＝1.9Hz，8.3Hz，1H)，6.66(m，2H)，6.43(d，J＝8.3Hz，1H)，6.40-6.36(m，1H)，5.31(s，1H)，1.7(d，J＝7.3Hz，3H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C23H18Cl2IN3O2的計算值564.98；實測值565.5(M+H)。
實施例784-芐基-7-溴-3-(4-氯苯基)-1-甲基-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.43(s，3H)，4.65(d，J＝14.4Hz，1H)，5.38(d，J＝14.4Hz，1H)，5.47(s，1H)，6.60(dd，J＝8.4Hz，1.2Hz，2H)，6.75(d，J＝8.8Hz，1H)，6.96(d，J＝8.8Hz，2H)，7.28-7.41(m，4H)，7.48-7.51(m，2H)，7.80(d，J＝2.4Hz，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESIpos.)C23H18BrClN2O2的計算值468；實測值469(M+H)+。
實施例797-溴-3-(4-氯苯基)-1-甲基-4-(1-苯乙基)-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮 質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C24H20BrClN2O2的計算值482；實測值483(M+H)+。
實施例801，3-二氫-4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.61(d，J＝6.8Hz，3H)，5.00(s，1H)，5.78(s，2H)，6.09(q，J＝6.8Hz，1H)，6.51-6.54(m，1H)，6.67(d，J＝8.4Hz，1H)，6.77-6.81(m，3H)，7.08(d，J＝8.8Hz，2H)，7.26(d，J＝8.0Hz，1H)，7.59(dd，J＝8.8Hz，J＝2.0Hz，1H)，7.79(d，J＝1.6Hz，1H)，10.98(br s，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C23H18Cl2IN3O2的計算值565；實測值566(M+H)+。
實施例813-(4-氯苯基)-4-[1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基]-7-碘-1-[2-(4-嗎啉代)乙基]-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.81(d，J＝6.8Hz，3H)，2.23-2.28(m，2H)，2.37-2.46(m，3H)，2.59-2.66(m，1H)，3.54-3.63(m，5H)，4.44-4.51(m，1H)，5.42(s，1H)，6.57-6.70(m，4H)，6.94(d，J＝8.4Hz，2H)，7.44(dd，J＝8.8Hz，2.0Hz，1H)，7.55(dd，J＝8.4Hz，2.0Hz，1H)，7.63(d，J＝8.0Hz，1H)，7.86(d，J＝2.0Hz，1H)，7.96(d，J＝2.0Hz，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H27Cl2IN4O5的計算值708；實測值709(M+H)+。
實施例825-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸鈉鹽 a)(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮將丙炔(2mL)于-78℃在密封的試管中凝結(jié)。然后，加入(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮(200mg，0.362mmol)、碘化銅(15mg，0.0788mmol)、二氯雙(三苯基膦)鈀(II)(39mg，0.0556mmol)、三乙胺(2mL)和乙腈(4mL)。把密封的試管封閉并將反應(yīng)混合物加熱至室溫。12小時后，使反應(yīng)混合物冷卻至-78℃，然后打開密封的試管并在強(qiáng)烈攪拌下將其加熱至室溫。然后，將溶劑在真空下蒸發(fā)，進(jìn)行硅膠柱色譜純化(EtOAc/己烷，1∶1)得到為無色固體的本標(biāo)題化合物(150mg，89％)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.73(d，J＝7.1Hz，3H)，2.06(s，3H)，5.24(s，1H)，6.49(q，J＝7.1Hz，1H)，6.62-6.65(m，3H)，6.93(d，J＝8.4Hz，2H)，7.20(dd，J＝8.0Hz，J＝2.0Hz，1H)，7.33(d，J＝8.4Hz，2H)，7.53(d，J＝8.8Hz，2H)，7.79(d，J＝2.0Hz，1H)，8.57(br s，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C26H20Cl2N2O2的計算值463；實測值464(M+H)+。
b)5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮雜-1-基]戊酸鈉鹽按照在1位上進(jìn)行二氮雜的烷基化的一般方法，然后按照實施例1步驟b所描述的方法，由(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮制備本標(biāo)題化合物(58％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.60-1.74(m，7H)，2.02(s，3H)，2.37(t，J＝6.8Hz，2H)，3.64-3.71(m，1H)，4.27-4.34(m，1H)，5.31(s，1H)，6.42(q，J＝6.8Hz，1H)，6.46-6.49(m，2H)，6.76(d，J＝8.4Hz，1H)，6.87(d，J＝8.4Hz，2H)，7.16(dd，J＝8.4Hz，2.0Hz，1H)，7.29(d，J＝8.4Hz，2H)，7.48(d，J＝8.8Hz，2H)，7.67(d，J＝2.0Hz，1H)，7.90(br s，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C31H28Cl2N2O4的計算值562；實測值563(M+H)+。
實施例834-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.75(d，J＝6.8Hz，3H)，3.36(s，3H)，3.54-3.64(m，4H)，3.71-3.76(m，1H)，3.85-3.90(m，1H)，3.97-4.03(m，1H)，4.17-4.24(m，1H)，4.77(br s，2H)，5.27(s，1H)，6.27(q，J＝6.8Hz，1H)，6.62(dd，J＝8.4Hz，2.4Hz，1H)，6.66-6.70(m，3H)，6.90(d，J＝8.4Hz，2H)，6.97(d，J＝8.8Hz，1H)，7.21(d，J＝8.4Hz，1H)，7.48(dd，J＝8.4Hz，2.0Hz，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H28Cl2IN3O4的計算值667；實測值668(M+H)+。
實施例844-[(R)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-(3S)-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮 質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H28Cl2IN3O4的計算值667；實測值668(M+H)+。
實施例85(3R)-4-[(S)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮 質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H28Cl2IN3O4的計算值667；實測值668(M+H)+。
實施例864-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(4-嗎啉代)乙基]-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.76(d，J＝7.1Hz，3H)，2.26-2.31(m，2H)，2.42-2.50(m，3H)，2.60-2.66(m，1H)，3.53-3.70(m，5H)，4.48-4.55(m，1H)，4.74(br s，2H)，5.28(s，1H)，6.28(q，J＝7.1Hz，1H)，6.60(dd，J＝8.8Hz，2.4Hz，1H)，6.66-6.69(m，3H)，6.89(d，J＝8.4Hz，2H)，7.21-7.19(d，J＝8.4Hz，1H)，7.48(dd，J＝8.4Hz，2.0Hz)，7.93(d，J＝2.0Hz，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H29Cl2IN4O3的計算值678；實測值679(M+H)+。
實施例87(3S)-4-[(R)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(4-嗎啉代)乙基]-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮
質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H29Cl2IN4O3的計算值678；實測值679(M+H)+。
實施例88(3R)-4-[(S)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(4-嗎啉代)乙基]-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮 質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H29Cl2IN4O3的計算值678；實測值679(M+H)+。
實施例893-(4-氯苯基)-4-[1-(2，6-二氯-3-吡啶基)乙基]-7-碘-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.69(d，J＝6.8Hz，3H)，5.28(s，1H)，6.09(q，J＝6.8Hz，1H)，6.59(d，J＝8.4Hz，1H)，6.87(d，J＝8.4Hz，2H)，7.20(d，J＝8.8Hz，2H)，7.55-7.59(m，2H)，7.78(d，J＝2.0Hz，1H)，8.21(d，J＝8.0Hz，1H)，10.9(s，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C22H15Cl3IN3O2的計算值585；實測值586(M+H)+。
實施例901，3-二氫-4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-甲基-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.75(d，J＝6.8Hz，3H)，3.46(s，3H)，5.34(s，1H)，5.95(q，J＝6.8Hz，1H)，6.55(d，J＝8.4Hz，2H)，6.61(d，J＝8.8Hz，1H)，6.88-6.91(m，3H)，7.30-7.32(m，2H)，7.53(dd，J＝8.8Hz，2.0Hz，1H)，7.97(d，J＝2.0Hz，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C24H20Cl2IN3O2的計算值579；實測值580(M+H)+。
實施例911，3-二氫-4-[1-(2-乙酰氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮 將乙酰氯(15μL，0.212mmol)于0℃和氬氣氛下加到1，3-二氫-4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮(100mg，0.177mmol)在四氫呋喃(5mL)和氯仿(5mL)內(nèi)的溶液中。然后，滴加三乙胺(30μL，0.21mmol)并將反應(yīng)混合物加熱至室溫。30分鐘后，把溶液減壓濃縮，并將殘余物在乙酸乙酯與1N碳酸氫鈉之間分配。將有機(jī)層干燥(Na2SO4)，蒸發(fā)，并將殘余物用柱色譜法進(jìn)行純化，獲得了本標(biāo)題化合物(49mg，45％)，為無色粉末1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.81(d，J＝6.8Hz，3H)，2.44(s，3H)，5.33(s，1H)，6.37(q，J＝6.8Hz，1H)，6.47(d，J＝8.4Hz，2H)，6.55(d，J＝8.4Hz，1H)，6.98(d，J＝8.4Hz，2H)，7.03(dd，J＝8.4Hz，2.0Hz，1H)，7.36(d，J＝8.4Hz，1H)，7.59(dd，J＝8.4Hz，2.0Hz，1H)，7.98(d，J＝2.0Hz，1H)，8.28(br s，1H)，8.54(d，J＝2.0Hz，1H)，9.94(s，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C25H20Cl2IN3O3的計算值607；實測值608(M+H)+。
實施例921，3-二氫-4-[1-(2-疊氮基-3-吡啶基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.94(d，J＝6.8Hz，3H)，5.06(s，1H)，6.50(d，J＝8.4Hz，1H)，6.85(q，J＝6.8Hz，1H)，7.01-7.04(m，2H)，7.19(d，J＝8.8Hz，2H)，7.45(t，J＝7.0Hz，1H)，7.56(dd，J＝8.8Hz，2.0Hz，1H)，7.94(d，J＝7.2Hz，1H)，8.06(d，J＝2.4Hz，1H)，9.12(d，J＝6.8Hz，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C22H16ClIN6O2的計算值559；實測值560(M+H)+。
實施例934-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮鹽酸鹽 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.61(d，J＝6.8Hz，3H)，2.00(s，3H)，3.17(s，3H)，3.30-3.65(m，6H)，3.85-3.92(m，1H)，4.33-4.39(m，1H)，5.13(s，1H)，6.08(q，J＝6.8Hz，1H)，6.52(dd，J＝8.4Hz，2.0Hz，1H)，6.69(d，J＝7.6Hz，2H)，6.78(d，J＝2.0Hz，1H)，6.98(d，J＝8.4Hz，2H)，7.20-7.28(m，3H)，7.40(d，J＝2.0Hz，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C31H31Cl2N3O4的計算值579；實測值580(M+H)+。
實施例94(3S)-4-[(R)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮鹽酸鹽 質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C31H31Cl2N3O4的計算值579；實測值580(M+H)+。
實施例954-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-1-[2-(4-嗎啉代)乙基]-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮鹽酸鹽 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.76(d，J＝6.8Hz，3H)，2.02(s，3H)，2.22-2.49(m，5H)，2.61-2.67(m，1H)，3.53-3.71(m，5H)，4.49-4.56(m，1H)，4.76(s，2H)，5.27(s，1H)，6.30(q，J＝6.8Hz，1H)，6.60(dd，J＝8.4Hz，2.0Hz，1H)，6.66-6.68(m，3H)，6.83(d，J＝8.8Hz，1H)，6.87(d，J＝8.4Hz，2H)，7.16-7.21(m，2H)，7.66(d，J＝2.0Hz，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C32H32Cl2N4O3的計算值590；實測值591(M+H)+。
實施例96(3S)-4-[(R)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-1-[2-(4-嗎啉代)乙基]-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮鹽酸鹽 質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C32H32Cl2N4O3的計算值590.19；實測值591.0(M+H)+。
實施例974-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，3-二氫-1H-1，4-苯并二氮雜-5-酮
a)4-[1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，3-二氫-1H-1，4-苯并二氮雜-5-酮把硼烷二甲硫醚復(fù)合物溶液(1.68mL，2M在THF中的溶液)緩慢加到4-[1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1，3-二氫-1，4-苯并二氮雜-2，5-酮(500mg，0.839mmol)在無水四氫呋喃(25mL)內(nèi)的溶液中。將所得溶液在65℃加熱2小時。然后，使反應(yīng)混合物在0℃冷卻，并緩慢加入NaOH(10mL，3N)。使溶劑蒸發(fā)并將殘余物在冰冷的水與乙酸乙酯之間分配，干燥(Na2SO4)，并蒸發(fā)。用硅膠色譜法進(jìn)行純化(AcOEt/己烷/CH2Cl2，1∶2∶1)得到粉末，將其進(jìn)行研制，得到本標(biāo)題化合物(370mg，76％)，為黃色固體1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.70(d，J＝6.8Hz，3H，CH3)，3.50(d，J＝14.0Hz，1H)，3.73(dd，J＝14.0，6.4Hz，1H)，4.42(br s，1H，NH)，4.67(d，J＝6.4Hz，1H)，6.17(q，J＝6.8Hz，1H)，6.72(d，J＝8.4Hz，2H)，7.07(d，J＝8.4Hz，2H)，7.37(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.50(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.61-7.64(m，2H)，8.58(d，J＝2.0Hz，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C23H18Cl2IN3O3的計算值580.9；實測值582.0(M+H)+。
b)4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，3-二氫-1H-1，4-苯并二氮雜-5-酮1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.63(d，J＝6.8Hz，3H)，3.60(d，J＝14.0Hz，1H)，4.05(dd，J＝14.0，6.0Hz，1H)，4.72(d，J＝5.2Hz，1H)，6.12(d，J＝8.8Hz，1H)，6.33(q，J＝6.8Hz，1H)，6.49(br s，1H)，6.54(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，6.77(d，J＝8.4Hz，2H)，6.95-7.01(m，3H)，7.28(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，8.46(d，J＝2.0Hz，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C23H20Cl2IN3O的計算值551.0；實測值552.0(M+H)+。
實施例984-[1-(2-氨基-6-氯-3-吡啶基)甲基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮鹽酸鹽
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.31(s，3H)，3.42-3.53(m，4H)，3.64-3.67(m，2H)，3.91-3.97(m，1H)，4.31-4.38(m，1H)，5.00(dd，J＝33.6，15.2Hz，2H)，5.56(s，1H)，6.85(d，J＝7.6Hz，1H)，6.86-6.89(m，2H)，7.10-7.13(m，3H)，7.64(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.86-7.88(m，2H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C26H25Cl2IN4O4的計算值654.0；實測值655.0(M+H)+。
實施例994-[1-(3-氨基-4-氯苯基)環(huán)丙基]-3-(4-氯苯基)-1-[2-(4-嗎啉代)乙基]-7-碘-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮甲磺酸鹽 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.29-1.38(m，2H)，1.53-1.60(m，1H)，1.81-1.86(m，1H)，3.17-3.29(m，4H)，3.65-4.11(m，7H)，4.47-4.54(m，1H)，5.98(s，1H)，6.75(d，J＝8.0Hz，2H)，6.86(d，J＝8.8Hz，1H)，7.11(d，J＝8.0Hz，2H)，7.21(d，J＝8.0Hz，1H)，7.33(d，J＝8.0Hz，1H)，7.42(s，1H)，7.64-7.67(m，1H)，7.83(d，J＝1.6Hz，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C30H29Cl2IN4O3的計算值690.0；實測值691.0(M+H)+。
實施例100(3S)-4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[(R)-2-(1-哌嗪基)-2-氧代乙基]-1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮鹽酸鹽 1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.72(d，J＝7.0Hz，3H)，3.31-3.40(m，2H)，3.88-3.95(m，6H)，4.64(d，J＝16.8Hz，1H)，5.05(d，J＝16.8Hz，1H)，5.31(s，1H)，6.26(q，J＝7.0Hz，1H)，6.59(dd，J＝8.4，2.4Hz，1H)，6.79-6.83(m，2H)，6.93-7.00(m，4H)，7.28-7.30(d，J＝8.0Hz，1H)，7.60(dd，J＝8.8，2.4Hz，1H)，7.80(d，J＝2.0Hz，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H28Cl2IN5O3的計算值691.0；實測值692.0(M+H)+。
實施例1014-(4-氯-2-甲基-芐基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-1-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.95-7.96(d，＝2.1Hz，1H)，7.46-7.52(m，1H)，7.33-7.36(m，1H)，7.28-7.29(m，4H)，7.16-7.24(m，2H)，6.99-7.02(m，2H)，6.68-6.73(m，3H)，5.34-5.40(d，J＝14.6Hz，1H)，5.30(s，1H)，4.68-4.72(d，J＝14.6Hz，1H)，4.46-4.56(m，1H)，3.58-3.63(m，5H)，2.40-2.54(m，5H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H28Cl2IN3O3的計算值663.0；實測值664.1(M+H)。
實施例1023-(S)-(4-氯-苯基)4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-1-(2-嗎啉-4-基-2-氧代-乙基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.91-7.92(d，J＝2.1Hz，1H)，7.51-7.35(m，2H)，7.43-7.46(m，1H)，7.35-7.40(m，2H)，6.90-6.96(m，2H)，6.72-6.76(m，2H)，6.60-6.63(d，J＝8.6Hz，1H)，6.40-6.48(m，1H)，5.35-5.36(s，1H)，5.00-5.042(d，J＝16.0Hz，1H)，4.02-4.07(d，J＝16.1Hz，1H)，3.44-3.88(m，9H)，1.71-1.74(d，J＝7.1Hz，2H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H26Cl2IN3O4的計算值677.0；實測值677.8(M+H)。
實施例1033-(S)-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-1-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.94-7.95(d，J＝2.1Hz，1H)，7.40-7.48(m，3H)，7.26-7.30(m，2H)，6.84-6.88(m，2H)，6.60-6.68(d，J＝8.8Hz，2H)，6.46-6.50(d，J＝7.5Hz，2H)，6.36.44(m，1H)，5.30(s，1H)，4.44-4.54(m，1H)，4.04-4.10(m，1H)，3.50-3.68(m，5H)，2.58-2.60(m，1H)，2.36-2.46(m，3H)，2.24-2.28(m，1H)，1.73-1.75(d，J＝7.1Hz，2H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H28Cl2IN3O3的計算值663.0；實測664.1(M+H)。
實施例1043-(R)-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-1-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.99-8.01(d，J＝2.1Hz，1H)，7.28-7.48(m，5H)，7.08-7.10(d，J＝8.6Hz，2H)，6.83-6.85(d，J＝8.6Hz，2H)，6.59-6.62(d，J＝8.6Hz，2H)，6.34-6.40(m，1H)，5.32-5.34(s，1H)，4.04-4.22(m，2H)，3.42-3.58(m，5H)，2.40-2.46(m，1H)，2.20-2.32(m，3H)，1.58-1.63(d，J＝7.1Hz，3H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C29H28Cl2IN3O3的計算值663.0；實測值664.2(M+H)。
實施例1053-(S)-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-1-[2-(2-甲氧基-乙氧基)-乙基]-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.91-7.92(d，J＝2.1Hz，1H)，7.40-7.50(m，3H)，7.28-7.30(m，2H)，6.82-6.86(m，3H)，6.46-6.49(m，2H)，6.36-6.42(m，2H)，5.28(s，1H)，4.10-4.20(m，2H)，3.92-4.00(m，2H)，3.80-3.88(m，1H)，3.68-3.72(m，2H)，3.44-3.60(m，4H)，1.70-1.73(d，J＝7.3Hz，3H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C28H27Cl2IN2O4的計算值652.0；實測值653.3(M+H)。
實施例1063-(S)-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-7-(1-羥基亞氨基-乙基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 將7-乙?；?3-(S)-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮(50mg，0.11mmol)、羥基胺鹽酸鹽(22mg，0.33mmol)、三乙胺(0.074mL，0.55mmol)在EtOH(0.5mL)中的溶液加熱至80℃。2小時后，將該反應(yīng)溶液施加到制備TLC板(Analtech Silica Gel GF，20×20cm，2000微米)上，用二氯甲烷/MeOH10∶1展開。刮下所需的帶，用MeOH提取，過濾并濃縮得到本標(biāo)題化合物(2.4mg)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.82-7.83(m，1H)，7.47-7.51(m，3H)，7.32(s，3H)，7.26-7.30(m，2H)，6.80-6.84(m，2H)，6.66-6.70(d，J＝8.4Hz，2H)，6.52-6.55(d，J＝8.6Hz，2H)，6.36-6.42(m，2H)，5.17(s，1H)，1.67-1.71(d，J＝7.3Hz，3H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C25H21Cl2N3O3的計算值481.1；實測值482.1(M+H)。
實施例1077-碘-4-萘-1-基甲基-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮
1H NMR(40+0MHz，DMSO-d6)δ10.76-10.80(s，1H)，8.16-8.20(d，J＝8.0Hz，1H)，7.85-8.00(m，2H)，7.80-7.82(m，1H)，7.54-7.61(m，5H)，7.00-7.20(m，4H)，6.60-6.64(d，J＝8.6Hz，1H)，5.86-6.00(d，J＝14.9Hz，1H)，5.50(s，1H)，5.10-5.16(d，J＝15.1Hz，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C27H18F3IN2O3的計算值602.0；實測值603.3(M+H)。
實施例1084-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基甲基-3-(4-氯-苯基)-7-碘-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.91-7.92(m，1H)，7.55-7.60(m，1H)，7.38-7.41(m，1H)，7.25-7.30(m，3H)，7.10-7.13(d，J＝8.6Hz，2H)，6.87-7.00(m，2H)，6.77-6.81(d，J＝7.7Hz，1H)，6.57-6.63(m，1H)，6.33-6.37(m，1H)，5.93-5.96(m，1H)，5.85-5.88(m，1H)，5.43-5.45(s，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C23H16ClIN2O4的計算值545.9；實測值547.8(M+H)。
實施例109
4-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基甲基-7-碘-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.88-7.90(m，1H)，7.54-7.70(m，1H)，7.30-7.40(m，1H)，7.15-7.17(m，1H)，6.95-7.04(m，3H)，6.78-6.81(d，J＝7.9Hz，2H)，6.59-6.6.63(d，J＝8.6Hz，2H)，6.32-6.36(m，1H)，5.93-5.96(m，1H)，5.83-5.87(m，2H)，5.48-5.49(s，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C24H16F3IN2O5的計算值596.01；實測值597.2(M+H)。
實施例1107-碘-4-(2-吡啶-2-基-乙基)-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.45-8.47(m，1H)，7.82-7.84(m，2H)，7.71-7.76(m，1H)，7.51-7.53(m，1H)，7.38-7.41(m，1H)，7.23-7.27(m，1H)，7.08-7.14(m，4H)，6.58-6.61(d，J＝8.4Hz，1H)，5.60(s，1H)，4.54-4.62(m，1H)，3.92-4.01(m，1H)，3.18-3.28(m，2H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C23H17F3IN3O3的計算值567.0；實測值568.1(M+H)。
實施例1114-芐基-3-(4-氯-苯基)-7-碘-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.80-7.82(m，1H)，7.59-7.62(m，2H)，7.20-7.50(m，7H)，6.90-7.00(m，2H)，6.65-6.70(d，J＝8.6Hz，1H)，5.55-5.58(m，1H)，5.20-5.30(d，J＝14Hz，1H)，4.77-4.84(d，J＝14.6Hz，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C22H16ClIN2O2的計算值501.9；實測值503.1(M+H)。
實施例1123-(4-氯-苯基)-7-碘-4-苯乙基-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.8-10.9(s，1H)，7.78-7.80(m，1H)，7.56-7.60(m，2H)，7.24-7.36(m，5H)，7.16-7.20(m，2H)，6.95-7.04(m，1H)，6.64-6.68(d，J＝8.4Hz，1H)，5.70-5.76(s，1H)，4.18-4.28(m，1H)，3.76-3.84(m，1H)，2.84-3.10(m，2H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C23H18ClIN2O2的計算值516.0；實測值517.1(M+H)。
實施例1134-芐基-7-碘-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.72-7.80(s，1H)，7.56-7.60(m，2H)，7.28-7.50(m，7H)，7.10-7.18(m，2H)，6.60-6.70(m，1H)，5.60(s，1H)，5.28-5.34(d，J＝14.6Hz，1H)，4.76-4.82(d，J＝14.8Hz，1H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C23H16F3IN2O3的計算值552.0；實測值553.1(M+H)。
實施例1147-碘-4-苯乙基-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.8-11.0(s，1H)，7.50-7.64(m，3H)，7.02-7.40(m，8H)，6.57-7.0(m，1H)，5.60(s，1H)，4.40-4.40(m，1H)，3.80-3.90(m，1H)，2.90-3.10(m，2H)。質(zhì)譜(LCMS，ESI pos.)C24H18F3IN2O3的計算值566.0；實測值567.0(M+H)。
實施例115熒光肽分析用與MDM2殘基17-125結(jié)合的p53來測定MDM2的抑制。這種復(fù)合物的已公開的晶體結(jié)構(gòu)(Kussie等人，Science 274948-953(1996))證實含有p53結(jié)合位點的片斷，并且我們已經(jīng)解析了p53肽類似物MPRFMDYWEGLN的X-射線結(jié)構(gòu)(Bottger等人，J.Mol.Biol.269744-756(1997))。本分析使用N末端熒光素RFMDYWEGL肽(Fl9mer)。
如下所述，The mdm217-125作為谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶融合體生成如下所述，將cDNA編碼殘基17-125克隆到pGEX4t-3(Pharmacia)內(nèi)。用含有部分人mdm2序列的ATCC條目編號384988作為模板和引物進(jìn)行PCR正向5’-CTC TCT CGG ATC CCA GAT TCC AGCTTC GGA ACA AGA G；反向5’-TAT ATA TCT CGA GTC AGTTCT CAC TCA CAG ATG TAC CTG AG。然后將PCR產(chǎn)物用BamHI和XhoI消化(引物中加下劃線的序列識別位點)，凝膠純化，連接到已經(jīng)用BamHI和XhoI消化的pGEX4t-3上。將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到大腸桿菌(E.coli)X90株內(nèi)，在TB 0.2％葡萄糖100μg/mL氨芐青霉素中生長至OD1.0，并用1mM IPTG誘導(dǎo)。誘導(dǎo)后5小時，將細(xì)胞收獲，離心分離，重懸浮于PBS 10mL/g細(xì)胞糊中。將細(xì)胞在Avestin微流化劑(microfluidizer)中溶解，離心，并將上清液粘結(jié)到谷胱甘肽瓊脂糖4B樹脂(Pharmacia)上。將樹脂用PBS洗滌，并通過加入2μg/mL凝血酶將MDM217-125從GST上切割下來(Enzyme Research Labs)。將切割的MDM2進(jìn)一步在Sepharose SP Fast Flow樹脂(Pharmacia)上純化，用20mM HEPES pH 7.5150mM NaCl洗脫。加谷胱甘肽至5mM，然后將蛋白在-70℃貯存。
將試驗化合物用在50mM HEPES pH 7.5、150mM NaCl、3mM辛基葡糖苷中的30nM熒光肽Fl 9mer和120nM MDM217-125溫育15分鐘。其后，通過在485nm激發(fā)并在530nm發(fā)射，測定熒光標(biāo)記物的偏振。將偏振表示為用具有Fl 9mer但沒有MDM2作為本底的無化合物對照的百分比。本發(fā)明化合物抑制p53與MDM2的結(jié)合。把化合物的效力作為IC50測量，所述IC50是抑制50％的MDM2與p53之間結(jié)合所需試驗化合物濃度的量度。本發(fā)明化合物的IC50值范圍在0.05μM至＞100μM之間。參見下面的實施例。
實施例116制備片劑如下面所舉例說明，制備分別含有25.0、50.0和100.0mg實施例1化合物(“活性化合物”)的片劑
含有25-100mg活性化合物的片劑量-mg
把全部活性化合物、纖維素和一部分玉米淀粉混合并制粒成10％的玉米淀粉糊。將所得顆粒過篩、干燥并與剩余的玉米淀粉和硬脂酸鎂混合。然后把所得顆粒壓制成每片分別含有25.0、50.0和100.0mg活性組分的片劑。
實施例117靜脈內(nèi)溶液制備如下制備實施例1化合物(“活性化合物”)的靜脈內(nèi)劑型活性化合物0.5-10.0mg檸檬酸鈉 5-50mg檸檬酸1-15mg氯化鈉1-8mg注射用水(USP) 適量至1ml用上述量，將活性化合物于室溫溶解于預(yù)先制備的氯化鈉、檸檬酸和檸檬酸鈉在注射用水內(nèi)的溶液中(USP，參見1995年United StatesPharmacopeia/National Formulary 1636頁，United StatesPharmacopeial Convention Inc.出版，Rockville，Maryland(1994))。
實施例118苯并二氮雜二酮化合物抑制腫瘤細(xì)胞增殖通過一組腫瘤細(xì)胞系測定苯并二氮雜二酮化合物的抗增殖活性。表1列出試驗的示例化合物TDP222669(4-氯苯基)-[3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-1，2，3，4-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-4-基]-乙酸，WO03/041715中的實施例62)，TDP665759(4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)-乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)-丙基]-3，4-二氫-1H-苯并[e][1，4]二氮雜-2，5-二酮，WO2004096134中的實施例66)和TDP521252(5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-乙炔基-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氫苯并[e][1，4]二氮雜-1-基}-戊酸，WO2004096134中的實施例2)。如本文所描述，可以使用同樣的方法試驗其它化合物。
細(xì)胞系如所推薦，將JAR絨膜癌細(xì)胞(HTB-144)、HepG2肝癌細(xì)胞(HTB-8065)和PC3前列腺癌細(xì)胞(CRL-1435)(全部來自ATCC(Manassas，VA))分別保存在補(bǔ)充以FBS的RPMI、EMEM和F12K中。同樣從ATCC購買圖1A所描述的其它細(xì)胞并如所推薦的那樣使其生長。mdm2/p53雙無標(biāo)志和mdmX/p53雙無標(biāo)志細(xì)胞系為Dr.Guillermina Lozano所捐贈(Univ.of Texas M.D.Anderson CancerCenter，Houston，Texas)并將其按照所描述保持(Parant等人，2001，Nat Genet 29，92-95.)。
增殖分析將細(xì)胞以每孔1×103個細(xì)胞接種于96孔板中。使其粘附過夜后，將細(xì)胞用各種濃度的化合物處理3天。將細(xì)胞用BrdU標(biāo)記6小時，固定并按照供應(yīng)商的使用說明書用ELISA進(jìn)行分析(BrdUCell Proliferation Assay，Exalpha，Watertown，MA)。除非另有說明，表2所顯示的值是三個試驗的平均值。
TDP222669是在體外相對有效的Hdm2抑制劑，熒光偏振(FP)分析具有0.57的IC50值(表1)。TDP222669的細(xì)胞效力很低，然而，很有可能是低的細(xì)胞滲透性所致。用甲基代替TDP222669的酸性部分并且在1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮的1位上導(dǎo)入戊?；?TDP521252)或者3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基(TDP665759)增溶部分，使化合物具有與TDP222669近似同等的體外效力，但具有提高了大約3-66倍的細(xì)胞活性(表2和圖1)。
與它們作為HMD2-p53相互作用抑制劑的角色相一致，這些化合物對于控制表達(dá)腫瘤細(xì)胞表達(dá)突變或無標(biāo)志p53的生長是不太有效的。與突變/無標(biāo)志p53細(xì)胞系比較，表達(dá)wtp53的細(xì)胞對TDP222669或TDP521252的細(xì)胞生長抑制活性具有約4倍的更高敏感性，或者對TDP665759的細(xì)胞生長抑制活性具有約10倍的更高敏感性(表2和圖1)。同樣，具有減少的Hdm2mRNA的量的腫瘤對化合物的細(xì)胞生長抑制活性也不太敏感(未顯示數(shù)據(jù))。
實施例119苯并二氮雜二酮化合物引起細(xì)胞Hdm2從p53解離在JAR絨膜癌細(xì)胞中研究苯并二氮雜二酮化合物對細(xì)胞中的Hdm2p53復(fù)合物的直接作用，JAR絨膜癌細(xì)胞具有較高且因此更容易探測的Hdm2和p53的基礎(chǔ)水平。
將JAR絨膜癌細(xì)胞首先分別用增加劑量的化合物TDP521252或TDP258625(表1)以及它們的無活性對映體TDP536356和TDP258626處理。隨后，將細(xì)胞在TritonX-100緩沖液(裂解緩沖液)[1％TritonX-100、10mM Tris pH 7.2、5mM EDTA、50mM NaCl、Complete MiniProtease Inhibitor Cocktail Tablets(Roche#1-836-153，1片/10ml裂解緩沖液)、磷酸酶抑制劑Cocktail 1(Sigma#P2850，1∶100稀釋)、磷酸酶抑制劑Cocktail 2(Sigma#P5726，1∶100稀釋)]中溶解。將細(xì)胞溶解產(chǎn)物正常化為蛋白，并用抗-p53抗體(FL-393，Santa CruzBiotechnology，Santa Cruz，CA)進(jìn)行免疫沉淀。將免疫沉淀物用緩沖液洗滌兩次，重懸浮于電泳樣本緩沖液(如為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的Lammeli緩沖液)中，并在4-12％雙-三聚丙烯酰胺凝膠上用1X MOPS電泳緩沖液(Invitrogen，Carlsbad，CA)進(jìn)行蛋白分析。把蛋白轉(zhuǎn)移到硝基纖維素薄膜上。將薄膜用5％乳緩沖液(TBS/0.1％Tween-20中的5％非脂肪干乳)阻斷，并在同樣的緩沖液中用抗-p53或抗-Hdm2抗體探查(DO-1，Oncogene Research Products，Boston，MA andSMP-14，Santa Cruz Biotechnology，Santa Cruz，CA，respectively)。用Typhoon Scanner(Molecular Dynamics，Sunnyvale，CA)形成掃描圖像后，通過ImageQuant分析測定Hdm2p53的比例，并將其正?；癁檩d體對照。
觀察到本發(fā)明化合物以與劑量有關(guān)的方式引起細(xì)胞Hdm2從p53的解離。在濃度40μM的情況下，高于細(xì)胞增殖抑制的IC50兩倍以上，TDP521252引起90％以上的Hdm2從p53的解離。早在將細(xì)胞用化合物處理后15分鐘就已經(jīng)觀察到了類似的結(jié)構(gòu)(未顯示數(shù)據(jù))。相反，無活性非對映體不能引起Hdm2從p53的解離。在用TDP222669、TDP258625和TDP258626的純化的對映體處理時，觀察到類似的結(jié)果。
實施例120苯并二氮雜二酮化合物誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞中的編程性細(xì)胞死亡腫瘤細(xì)胞系中，根據(jù)細(xì)胞環(huán)境，p53的激活導(dǎo)致細(xì)胞生長抑制和細(xì)胞編程性死亡事件(Slee等人，2004，Oncogene 23，2809-2818)。進(jìn)行試驗以確定苯并二氮雜二酮化合物是否起細(xì)胞生長抑制劑的作用并阻止進(jìn)一步的腫瘤生長，或者誘導(dǎo)編程性細(xì)胞死亡或潛在導(dǎo)致腫瘤衰退。特別是，在HepG2細(xì)胞中，測定編程性細(xì)胞死亡的兩個參數(shù)-半胱天冬酶活性和染色質(zhì)凝聚。
半胱天冬酶分析將HepG2肝細(xì)胞的癌細(xì)胞用40μMTDP521252、TDP536356或DMSO處理0、8、16、24或48小時。將細(xì)胞溶解并暴露于半胱天冬酶3和7的底物(ApoOne，Promega，Madison WI)，并且按照供應(yīng)商的描述測量特異性加工。然后，在加入底物后的20分鐘和40分鐘，用示差結(jié)果計算半胱天冬酶活性的比例。
Hoechst染色為了測定凋亡胞核，把HepG2細(xì)胞涂覆在四室SonicSeal載玻片(Nunc，Naperville，IL)上。暴露于化合物后，將細(xì)胞用3.7％甲醛固定15分鐘，在PBS中漂洗15分鐘并隨后用2.5μg/mlHoeschst染料染色15分鐘。染色后，將細(xì)胞再次漂洗并用ProlongAntifade(Molecular Probes，Eugene，OR)固定于載片，然后分析并用IX81顯微鏡(Melville，NY)拍照。
與用DMSO或無活性對映體TDP536356處理的細(xì)胞中觀察到的結(jié)果比較，在用活性對映體TDP521252處理的細(xì)胞中，半胱天冬酶-3和半胱天冬酶-7的激活比率顯著提高(圖2)。早在加入TDP521252后的16小時就觀察到半胱天冬酶的誘導(dǎo)，并且在后面的32小時提高了大約4.5倍。在另外的研究中，將不同步HepG2細(xì)胞暴露于TDP521252的活性和無活性對映體3天，然后將細(xì)胞收獲，固定并用Hoechst染料染色以測定染色質(zhì)。如通過胞核的點狀著色所看到的，暴露于活性對映體引起凝聚染色質(zhì)的積聚(未顯示數(shù)據(jù))。這些數(shù)據(jù)表示本發(fā)明化合物在HepG2細(xì)胞中激活了凋亡反應(yīng)。
實施例121苯并二氮雜二酮化合物提高p53-調(diào)控基因的基因表達(dá)p53的穩(wěn)定導(dǎo)致牽涉包括細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡在內(nèi)的多個活性的多個基因的上調(diào)(參見Levine，1997，細(xì)胞88，323-331；和Slee，supra)。進(jìn)行實驗來測定苯并二氮雜二酮化合物對于p53-調(diào)控基因例如PIG-3、PUMA、Hdm2和p21waf1/cip1的基因的基因表達(dá)。
將HepG2肝癌細(xì)胞以6×105個細(xì)胞/孔接種到6-孔板中并保持過夜。在第二天早晨，在8小時期間內(nèi)，將細(xì)胞用20μM TDP521252或其無活性對映體DP536356處理不同時間。根據(jù)制造商的說明方案，使用RNeasy試劑盒(Qiagen，Valencia，CA)分離總RNA。使用所分離的總RNA作為初始模板，以及Taqman One-Step RT-PCR MasterMix Reagent(Applied Biosystems，F(xiàn)oster City，CA)來進(jìn)行RT-PCR。用于人甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)、Hdm2、PUMA(細(xì)胞凋亡的p53上調(diào)調(diào)節(jié)劑)、p53、p21waf1/cip1和PIG-3(p53誘導(dǎo)基因-3)熒光標(biāo)記的引物/探針混合物購自Applied Biosystems(Foster City，CA)，并且是設(shè)計用來跨越內(nèi)含子/外顯子邊界來折扣基因組DNA污染。將所有樣本都規(guī)格化為GAPDH，并使用標(biāo)準(zhǔn)曲線方法進(jìn)行定量。在ABI Prism7000(Applied Biosystems，F(xiàn)oster City，CA)中進(jìn)行反應(yīng)。
對于p21waf1/cip1和Hdm2峰，暴露于TDP521252后4小時，在之后的時間點給予PUMA和PIG-3，觀測到早期mRNA誘導(dǎo)(圖3)。這些基因的早期和后期誘導(dǎo)的時間曲線與之前報道的啟動子占據(jù)的結(jié)果一致(Kaeser，2002，Proc Natl Acad Sci U S A 99，95-100)。相反，用DMSO或其無活性對映體TDP53635處理后，沒有觀測到p21waf1/cip1的誘導(dǎo)。在JAR絨毛膜癌細(xì)胞中觀測到類似作用(數(shù)據(jù)未顯示)。
在相應(yīng)蛋白的量中也觀測到劑量依賴性增加(數(shù)據(jù)未顯示)。在所測試的最高劑量的TDP521252(40μM)，相對于未處理的對照，用PUMA觀測到最大蛋白誘導(dǎo)，之后是p21waf1/cip1(67×)和Hdm2(45×)。此外，在40μM TDP521252存在下，p53蛋白水平高約3倍。
這些數(shù)據(jù)表明，TDP521252對p53的穩(wěn)定作用導(dǎo)致p53-調(diào)控基因的表達(dá)提高。
實施例122苯并二氮雜二酮化合物在體內(nèi)誘導(dǎo)p21waf1/cip1的基因表達(dá)為了確定苯并二氮雜二酮化合物是否能夠在體內(nèi)誘導(dǎo)p53活化，進(jìn)行藥動學(xué)分析來測定用苯并二氮雜二酮類治療后從不同組織中對p21waf1/cip1mRNA的誘導(dǎo)。之前已經(jīng)證明了多柔比星能夠活化p53，因此用作陽性對照(Yeh等人，2004，Oncogene 23，3580-3588)。
在處死和組織收集之前24小時，給雌性Balb/c nu/nu小鼠腹膜內(nèi)施用TDP665759(25或50mg/kg)，每天給藥兩次，總共給藥7次(間隔12小時)，或腹膜內(nèi)施用多柔比星(10mg/kg)一次。在這些實驗中，化合物在25mg/kg劑量良好地耐受，然而，在4天實驗結(jié)束時，50mg/kg實驗組有某些程度的體重下降(16％)。初次給藥化合物之后6小時，將小鼠殺死，收獲肝臟，在含有Rneasy的管中在干冰上迅速冷凍。如上所述分離總RNA。通過如上所述的RT-PCR測定在分離的總RNA中p21waf1/cip1mRNA的量。
苯并二氮雜二酮化合物和多柔比星在最大程度上提高肝臟中的p21waf1/cip1mRNA，在胸腺和脾臟中分別產(chǎn)生較小但可測定程度的誘導(dǎo)作用(數(shù)據(jù)未顯示)。肝臟對這些活性劑的最高敏感性與在p53轉(zhuǎn)基因小鼠中通過λ放射誘導(dǎo)的p21waf1/cip1一致(Fei等人，2002，Cancer Res62，7316-7327)。與載體對照相比，施用25mg/kg TDP665759產(chǎn)生30倍的p21waf1/cip1誘導(dǎo)作用；這與多柔比星治療相似(圖4)。在50mg/kg劑量，誘導(dǎo)作用相對于載體對照大150倍。The exponential-like effectof p21waf1/cip1mRNA誘導(dǎo)的指數(shù)樣效應(yīng)意味著調(diào)控途徑或正反饋回路的可能性，并且用該化學(xué)系列中的其它化合物已經(jīng)觀測到(數(shù)據(jù)未顯示)。
實施例123苯并二氮雜二酮化合物與其它化療劑的組合帶來提高的抗腫瘤活性該實施例測試了聯(lián)合治療的有效性，該聯(lián)合治療采用化療劑與Hdm2p53相互作用的小分子抑制劑。
將A375黑素瘤細(xì)胞(ATCC CRL-1619，Manassas，VA)以2000個細(xì)胞/孔接種到96-孔白壁板中，讓其粘附過夜。將TDP665759和化療劑以固定比例格式同時加入(Chou等人，1984，Adv Enzyme Regul22，27-55)。將細(xì)胞暴露于化合物48小時，使用Cell-Titer-Glo(Promega，Madison，WI)測定細(xì)胞的存活力。根據(jù)Chou and Talalay的方法(Trends in Pharm.Sciences，4450-454，1983)，使用CaluSyn軟件(Biosoft，Cambridge，Great Britain)來進(jìn)行聯(lián)合作用的計算。小于0.9的聯(lián)合指數(shù)是協(xié)同的，0.9-1.1的聯(lián)合指數(shù)是疊加的，大于1.1的聯(lián)合指數(shù)是拮抗的。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)TDP665759與多柔比星、5-氟尿嘧啶和伊立替康具有協(xié)同作用(表3)。相反，TDP665759與順鉑的組合帶來拮抗作用。
在A357異種移植物模型中，進(jìn)一步測定多柔比星與TDP665759的組合。A375異種移植物研究是在Piedmont Research Center，Inc.(Morrisveille，NC)用雌性裸小鼠(Harlan，Indianapolis，IN)進(jìn)行的。腫瘤大小達(dá)到80-120后，將小鼠隨機(jī)分配到治療組，并開始用載體(20.25％羥基丙基-β-環(huán)糊精，bid×10)、100mg/kg TDP665759(po，bid×10)、1.5或3mg/kg多柔比星(Qd×5)或100mg/kg TDP665759(bid×10)+1.5mg/kg多柔比星(Qd×5)的組合進(jìn)行治療。每日監(jiān)測小鼠的一般健康，每3或4天測定腫瘤大小。當(dāng)腫瘤達(dá)到2克時，對小鼠實施安樂死。
如附圖5所示，與載體相比，將100mg/kg TDP665759或低劑量的多柔比星(1.5mg/kg＝0.5MTD)對于A375腫瘤生長控制僅引起適度作用。然而，這兩種活性劑的組合導(dǎo)致的腫瘤生長控制類似于用較高劑量的多柔比星(3mg/kg＝MTD)進(jìn)行治療所帶來的效果。這些數(shù)據(jù)證實了多柔比星與p53:hdm2相互作用的小分子抑制劑之間在體內(nèi)的協(xié)同作用。
已經(jīng)充分描述了本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，在不影響本發(fā)明范圍或其任何實施方案的情況下，這些方案可以在寬的同等條件、制劑和其它參數(shù)內(nèi)進(jìn)行。本文中引用的所有專利和出版物都全文引入本文以供參考。
表1.Hdm2:p53相互作用的苯并二氮雜二酮抑制劑
表2.苯并二氮雜二酮抑制腫瘤細(xì)胞增殖
表3.TDP665759與不同化療劑在A375黑素瘤細(xì)胞中的聯(lián)合作用
權(quán)利要求
1.抗腫瘤劑和抑制蛋白MDM2與p53之間結(jié)合的小分子化合物的組合在制備用于治療癌癥或其它細(xì)胞增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用。
2.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述抗腫瘤劑是選自多柔比星、5-氟尿嘧啶和伊立替康的化合物。
3.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述抗腫瘤劑是多柔比星。
4.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述小分子化合物是式(I)化合物 或其溶劑化物、水合物或可藥用鹽；其中X和Y獨立地是-C(O)-、-CH2-或-C(S)-；R1、R2、R3和R4獨立地是氫、鹵素、烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳烷基、烷氧基、任選取代的芳氧基、任選取代的雜芳氧基、氰基、氨基、烷酰基氨基、硝基、羥基、羧基或烷氧基羰基；或者R1和R2，或R2和R3，或R3和R4一起形成-(CH2)u-，其中u是3-6，-CH＝CH-CH＝CH-或-CH2CH＝CHCH2-；R5是氫、烷基、環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳烷基、羧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、氨基羰基、氨基羰基烷基、烷基氨基羰基或烷基氨基羰基烷基；R6是環(huán)烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基烷基、芳烷基、雜芳基烷基或飽和或部分不飽和雜環(huán)，所述每一基團(tuán)是任選取代的；R7和R8獨立地是氫或烷基；R9是環(huán)烷基、芳基、雜芳基、飽和或部分不飽和雜環(huán)、環(huán)烷基(烷基)、芳烷基或雜芳基烷基，所述每一基團(tuán)是任選取代的；且R10是-(CH2)n-CO2Rb、-(CH2)m-CO2M、-(CH2)i-OH或-(CH2)j-CONRcRd，其中Rb是氫、烷基、任選取代的環(huán)烷基或任選取代的飽和或部分不飽和雜環(huán)；M是陽離子；Rc和Rd獨立地是氫、烷基、羥基烷基、羧基烷基、氨基烷基、任選取代的環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基烷基和任選取代的飽和或部分不飽和雜環(huán)；且n是0-8，m是0-8，i是1-8，且j是0-8。
5.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述小分子化合物是式(II)化合物 或其溶劑化物、水合物或可藥用鹽；其中每一Ra獨立地是鹵素、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、氰基、C3-8環(huán)烷基、羥基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6?；被柞；?C1-6烷基)氨基羰基、烷硫基、氨基或硝基；n是0；或n是1并且Ra出現(xiàn)在7或8位；或者n是2并且Ra出現(xiàn)在7和8位；X是下列化合物的二價基團(tuán)C1-6烷烴，任選取代的C6-10芳烴，任選取代的5-7元雜芳烴，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，任選取代的(C6-10芳基)C1-6烷烴，或任選取代的雜芳基(C1-6)烷烴，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且其中1或2個環(huán)原子是雜原子；R3是-CO2Rd或-CO2M，其中Rd是氫、C1-6烷基或任選取代的C3-8環(huán)烷基，并且M是陽離子；R5是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，5-7元雜芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且1或2個環(huán)原于是雜原子，或者5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的，R6是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，5-7元雜芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且1或2個環(huán)原子是雜原子，或者5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的；R7是氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基或(C3-8環(huán)烷基)烷基；且R8是氫或C1-6烷基。
6.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述小分子化合物是式(III)化合物 或其溶劑化物、水合物或可藥用鹽；其中每一Ra獨立地是鹵素、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、氰基、C3-8環(huán)烷基、羥基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6?；?、氨基甲?；?、(C1-6烷基)氨基羰基、氨基、烷硫基或硝基；n是0；或者n是1并且Ra出現(xiàn)在7或8位；或者n是2并且Ra出現(xiàn)在7和8位；R5是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，5-7元雜芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且1或2個環(huán)原子是雜原子，或者5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的，R6是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，5-7元雜芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且1或2個環(huán)原子是雜原子，或者5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的；R7是氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基或(C3-8環(huán)烷基)烷基；R8是氫或C1-6烷基；R9是氫、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基、羥基(C1-6)烷基、氨基(C1-6)烷基、羧基(C1-6)烷基、(C1-6烷氧基)羰基、(C1-6烷氧基)羰基(C1-6)烷基、氨基甲酰基、氨基甲酰基(C1-6)烷基、(C1-6烷基氨基)羰基或(C1-6烷基氨基)羰基(C1-6)烷基；且R10是氫或C1-6烷基。
7.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述小分子化合物是選自下列的化合物合成查耳酮類化合物、降冰片烷衍生物、順式咪唑啉衍生物(Nutlins)、吡唑烷二酮磺酰胺、1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮和色氨酸衍生物。
8.抑制蛋白MDM2與p53之間結(jié)合的小分子化合物在制備用于與放射治療聯(lián)合使用來治療癌癥或其它細(xì)胞增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求8的應(yīng)用，其中所述小分子化合物是式(I)化合物 或其溶劑化物、水合物或可藥用鹽；其中X和Y獨立地是-C(O)-、-CH2-或-C(S)-；R1、R2、R3和R4獨立地是氫、鹵素、烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳烷基、烷氧基、任選取代的芳氧基、任選取代的雜芳氧基、氰基、氨基、烷?；被?、硝基、羥基、羧基或烷氧基羰基；或者R1和R2，或R2和R3，或R3和R4一起形成-(CH2)u-，其中u是3-6，-CH＝CH-CH＝CH-或-CH2CH＝CHCH2-；R5是氫、烷基、環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳烷基、羧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、氨基羰基、氨基羰基烷基、烷基氨基羰基或烷基氨基羰基烷基；R6是環(huán)烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基烷基、芳烷基、雜芳基烷基或飽和或部分不飽和雜環(huán)，所述每一基團(tuán)是任選取代的；R7和R8獨立地是氫或烷基；R9是環(huán)烷基、芳基、雜芳基、飽和或部分不飽和雜環(huán)、環(huán)烷基(烷基)、芳烷基或雜芳基烷基，所述每一基團(tuán)是任選取代的；且R10是-(CH2)n-CO2Rb、-(CH2)m-CO2M、-(CH2)i-OH或-(CH2)j-CONRcRd，其中Rb是氫、烷基、任選取代的環(huán)烷基或任選取代的飽和或部分不飽和雜環(huán)；M是陽離子；Rc和Rd獨立地是氫、烷基、羥基烷基、羧基烷基、氨基烷基、任選取代的環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基烷基和任選取代的飽和或部分不飽和雜環(huán)；且n是0-8，m是0-8，i是1-8，且j是0-8。
10.權(quán)利要求8的應(yīng)用，其中所述小分子化合物是式(II)化合物 或其溶劑化物、水合物或可藥用鹽；其中每一Ra獨立地是鹵素、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、氰基、C3-8環(huán)烷基、羥基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6?；被柞；?C1-6烷基)氨基羰基、烷硫基、氨基或硝基；n是0；或n是1并且Ra出現(xiàn)在7或8位；或者n是2并且Ra出現(xiàn)在7和8位；X是下列化合物的二價基團(tuán)C1-6烷烴，任選取代的C6-10芳烴，任選取代的5-7元雜芳烴，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，任選取代的(C6-10芳基)C1-6烷烴，或任選取代的雜芳基(C1-6)烷烴，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且其中1或2個環(huán)原子是雜原子；R3是-CO2Rd或-CO2M，其中Rd是氫、C1-6烷基或任選取代的C3-8環(huán)烷基，并且M是陽離子；R5是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，5-7元雜芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且1或2個環(huán)原子是雜原子，或者5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的，R6是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，5-7元雜芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且1或2個環(huán)原子是雜原子，或者5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的；R7是氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基或(C3-8環(huán)烷基)烷基；且R8是氫或C1-6烷基。
11.權(quán)利要求8的應(yīng)用，其中所述小分子化合物是式(III)化合物 或其溶劑化物、水合物或可藥用鹽；其中每一Ra獨立地是鹵素、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、氰基、C3-8環(huán)烷基、羥基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6?；被柞；?C1-6烷基)氨基羰基、氨基、烷硫基或硝基；n是0；或者n是1并且Ra出現(xiàn)在7或8位；或者n是2并且Ra出現(xiàn)在7和8位；R5是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，5-7元雜芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且1或2個環(huán)原子是雜原子，或者5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的，R6是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，5-7元雜芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且1或2個環(huán)原子是雜原子，或者5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的；R7是氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基或(C3-8環(huán)烷基)烷基；R8是氫或C1-6烷基；R9是氫、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基、羥基(C1-6)烷基、氨基(C1-6)烷基、羧基(C1-6)烷基、(C1-6烷氧基)羰基、(C1-6烷氧基)羰基(C1-6)烷基、氨基甲酰基、氨基甲酰基(C1-6)烷基、(C1-6烷基氨基)羰基或(C1-6烷基氨基)羰基(C1-6)烷基；且R10是氫或C1-6烷基。
12.權(quán)利要求8的應(yīng)用，其中所述小分子化合物是選自下列的化合物合成查耳酮類化合物、降冰片烷衍生物、順式咪唑啉衍生物(Nutlins)、吡唑烷二酮磺酰胺、1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮和色氨酸衍生物。
13.監(jiān)測抑制蛋白MDM2與p53之間結(jié)合的小分子化合物的效果的方法，所述方法包括以下步驟a.從已經(jīng)被給藥抑制蛋白MDM2與p53之間結(jié)合的小分子化合物的個體獲取生物樣本；和b.測定其轉(zhuǎn)錄由p53調(diào)節(jié)的基因的基因表達(dá)水平。
14.權(quán)利要求13的方法，其中所述抑制蛋白MDM2與p53之間結(jié)合的小分子化合物是式(I)化合物 或其溶劑化物、水合物或可藥用鹽；其中X和Y獨立地是-C(O)-、-CH2-或-C(S)-；R1、R2、R3和R4獨立地是氫、鹵素、烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳烷基、烷氧基、任選取代的芳氧基、任選取代的雜芳氧基、氰基、氨基、烷?；被⑾趸?、羥基、羧基或烷氧基羰基；或者R1和R2，或R2和R3，或R3和R4一起形成-(CH2)u-，其中u是3-6，-CH＝CH-CH＝CH-或-CH2CH＝CHCH2-；R5是氫、烷基、環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳烷基、羧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、氨基羰基、氨基羰基烷基、烷基氨基羰基或烷基氨基羰基烷基；R6是環(huán)烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基烷基、芳烷基、雜芳基烷基或飽和或部分不飽和雜環(huán)，所述每一基團(tuán)是任選取代的；R7和R8獨立地是氫或烷基；R9是環(huán)烷基、芳基、雜芳基、飽和或部分不飽和雜環(huán)、環(huán)烷基(烷基)、芳烷基或雜芳基烷基，所述每一基團(tuán)是任選取代的；且R10是-(CH2)n-CO2Rb、-(CH2)m-CO2M、-(CH2)i-OH或-(CH2)j-CONRcRd，其中Rb是氫、烷基、任選取代的環(huán)烷基或任選取代的飽和或部分不飽和雜環(huán)；M是陽離子；Rc和Rd獨立地是氫、烷基、羥基烷基、羧基烷基、氨基烷基、任選取代的環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基烷基和任選取代的飽和或部分不飽和雜環(huán)；且n是0-8，m是0-8，i是1-8，且j是0-8。
15.權(quán)利要求13的方法，其中所述抑制蛋白MDM2與p53之間結(jié)合的小分子化合物是式(II)化合物 或其溶劑化物、水合物或可藥用鹽；其中每一Ra獨立地是鹵素、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、氰基、C3-8環(huán)烷基、羥基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6?；?、氨基甲?；?、(C1-6烷基)氨基羰基、烷硫基、氨基或硝基；n是0；或n是1并且Ra出現(xiàn)在7或8位；或者n是2并且Ra出現(xiàn)在7和8位；X是下列化合物的二價基團(tuán)C1-6烷烴，任選取代的C6-10芳烴，任選取代的5-7元雜芳烴，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，任選取代的(C6-10芳基)C1-6烷烴，或任選取代的雜芳基(C1-6)烷烴，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且其中1或2個環(huán)原子是雜原子；R3是-CO2Rd或-CO2M，其中Rd是氫、C1-6烷基或任選取代的C3-8環(huán)烷基，并且M是陽離子；R5是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，5-7元雜芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且1或2個環(huán)原子是雜原子，或者5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的，R6是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，5-7元雜芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且1或2個環(huán)原子是雜原子，或者5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的；R7是氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基或(C3-8環(huán)烷基)烷基；且R8是氫或C1-6烷基。
16.權(quán)利要求13的方法，其中所述抑制蛋白MDM2與p53之間結(jié)合的小分子化合物是式(III)化合物 或其溶劑化物、水合物或可藥用鹽；其中每一Ra獨立地是鹵素、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、氰基、C3-8環(huán)烷基、羥基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6?；被柞；?、(C1-6烷基)氨基羰基、氨基、烷硫基或硝基；n是0；或者n是1并且Ra出現(xiàn)在7或8位；或者n是2并且Ra出現(xiàn)在7和8位；R5是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，5-7元雜芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且1或2個環(huán)原子是雜原子，或者5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的，R6是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，5-7元雜芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且1或2個環(huán)原子是雜原子，或者5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的；R7是氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基或(C3-8環(huán)烷基)烷基；R8是氫或C1-6烷基；R9是氫、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基、羥基(C1-6)烷基、氨基(C1-6)烷基、羧基(C1-6)烷基、(C1-6烷氧基)羰基、(C1-6烷氧基)羰基(C1-6)烷基、氨基甲?；?、氨基甲?；?C1-6)烷基、(C1-6烷基氨基)羰基或(C1-6烷基氨基)羰基(C1-6)烷基；且R10是氫或C1-6烷基。
17.權(quán)利要求13的方法，其中步驟(b)包括測定基因p21waf1/cip1的基因表達(dá)水平。
18.一種藥盒，其中所述藥盒包括抗腫瘤劑和抑制蛋白MDM2與p53之間結(jié)合的小分子化合物。
19.權(quán)利要求18的藥盒，其中所述抗腫瘤劑是選自多柔比星、5-氟尿嘧啶和伊立替康的化合物。
20.權(quán)利要求18的藥盒，其中所述抗腫瘤劑是多柔比星。
21.權(quán)利要求18的藥盒，其中所述小分子化合物是式(I)化合物 或其溶劑化物、水合物或可藥用鹽；其中X和Y獨立地是-C(O)-、-CH2-或-C(S)-；R1、R2、R3和R4獨立地是氫、鹵素、烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳烷基、烷氧基、任選取代的芳氧基、任選取代的雜芳氧基、氰基、氨基、烷?；被?、硝基、羥基、羧基或烷氧基羰基；或者R1和R2，或R2和R3，或R3和R4一起形成-(CH2)u-，其中u是3-6，-CH＝CH-CH＝CH-或-CH2CH＝CHCH2-；R5是氫、烷基、環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳烷基、羧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、氨基羰基、氨基羰基烷基、烷基氨基羰基或烷基氨基羰基烷基；R6是環(huán)烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基烷基、芳烷基、雜芳基烷基或飽和或部分不飽和雜環(huán)，所述每一基團(tuán)是任選取代的；R7和R8獨立地是氫或烷基；R9是環(huán)烷基、芳基、雜芳基、飽和或部分不飽和雜環(huán)、環(huán)烷基(烷基)、芳烷基或雜芳基烷基，所述每一基團(tuán)是任選取代的；且R10是-(CH2)n-CO2Rb、-(CH2)m-CO2M、-(CH2)i-OH或-(CH2)j-CONRcRd，其中Rb是氫、烷基、任選取代的環(huán)烷基或任選取代的飽和或部分不飽和雜環(huán)；M是陽離子；Rc和Rd獨立地是氫、烷基、羥基烷基、羧基烷基、氨基烷基、任選取代的環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基烷基和任選取代的飽和或部分不飽和雜環(huán)；且n是0-8，m是0-8，i是1-8，且j是0-8。
22.權(quán)利要求18的藥盒，其中所述小分子化合物是式(II)化合物 或其溶劑化物、水合物或可藥用鹽；其中每一Ra獨立地是鹵素、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、氰基、C3-8環(huán)烷基、羥基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6?；被柞；?C1-6烷基)氨基羰基、烷硫基、氨基或硝基；n是0；或n是1并且Ra出現(xiàn)在7或8位；或者n是2并且Ra出現(xiàn)在7和8位；X是下列化合物的二價基團(tuán)C1-6烷烴，任選取代的C6-10芳烴，任選取代的5-7元雜芳烴，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，任選取代的(C6-10芳基)C1-6烷烴，或任選取代的雜芳基(C1-6)烷烴，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且其中1或2個環(huán)原子是雜原子；R3是-CO2Rd或-CO2M，其中Rd是氫、C1-6烷基或任選取代的C3-8環(huán)烷基，并且M是陽離子；R5是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，5-7元雜芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且1或2個環(huán)原子是雜原子，或者5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的，R6是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，5-7元雜芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且1或2個環(huán)原子是雜原子，或者5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的；R7是氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基或(C3-8環(huán)烷基)烷基；且R8是氫或C1-6烷基。
23.權(quán)利要求18的藥盒，其中所述小分子化合物是式(III)化合物 或其溶劑化物、水合物或可藥用鹽；其中每一Ra獨立地是鹵素、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、氰基、C3-8環(huán)烷基、羥基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6?；被柞；?、(C1-6烷基)氨基羰基、氨基、烷硫基或硝基；n是0；或者n是1并且Ra出現(xiàn)在7或8位；或者n是2并且Ra出現(xiàn)在7和8位；R5是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，5-7元雜芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且1或2個環(huán)原子是雜原子，或者5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的，R6是C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，5-7元雜芳基，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，(C3-8環(huán)烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(雜芳基)烷基，其中雜芳基部分含有5-7個環(huán)原子并且1或2個環(huán)原子是雜原子，或者5-7元飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中1或2個環(huán)原子是雜原子，其中每一前述基團(tuán)是任選取代的；R7是氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基或(C3-8環(huán)烷基)烷基；R8是氫或C1-6烷基；R9是氫、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基、羥基(C1-6)烷基、氨基(C1-6)烷基、羧基(C1-6)烷基、(C1-6烷氧基)羰基、(C1-6烷氧基)羰基(C1-6)烷基、氨基甲酰基、氨基甲?；?C1-6)烷基、(C1-6烷基氨基)羰基或(C1-6烷基氨基)羰基(C1-6)烷基；且R10是氫或C1-6烷基。
24.權(quán)利要求18的藥盒，其中所述小分子化合物是選自下列的化合物合成查耳酮類化合物、降冰片烷衍生物、順式咪唑啉衍生物(Nutlins)、吡唑烷二酮磺酰胺、1，4-苯并二氮雜-2，5-二酮和色氨酸衍生物。
全文摘要
本發(fā)明涉及治療癌癥或其它細(xì)胞增殖性疾病的聯(lián)合治療。這樣的治療將放射治療或化療的使用與MDM2P53相互作用的小分子抑制劑的使用聯(lián)合起來。
文檔編號A61K31/7072GK1853723SQ20061005158
公開日2006年11月1日 申請日期2006年3月6日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月4日
發(fā)明者T·盧, H·K·科布利什, A·馬羅尼 申請人:奧索-麥克尼爾藥品公司