專利名稱：氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及的是氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體及其制備方法，屬于醫(yī)藥領域。
背景技術：
羥基喜樹堿(hydroxycamptothecin，HCPT)是從中國珙桐科植物喜樹中提取出來的生物堿，具有較強的細胞毒活性，可用于治療多種惡性腫瘤，對腹水型肝癌、頭頸癌、胃癌、膀胱癌等有明顯的療效，在臨床上被廣泛應用。因其難溶于水，常將其內酯環(huán)打開形成鈉鹽制備成注射液而應用于臨床，但其在體內代謝很快，半衰期僅5min。同時，在臨床使用時發(fā)現(xiàn)其在發(fā)揮其抗腫瘤活性的同時，還產生骨髓抑制、嘔吐和腹瀉等嚴重副作用，導致藥效顯著降低且毒副作用增加。同時，喜樹堿類藥物的內酯結構是它們作用于靶酶的必要結構，內酯開環(huán)后形成的鈉鹽雖在生理條件下(pH7.4)可部分閉環(huán)轉化成為內酯型而發(fā)生藥效，但其只占總藥量的10％～20％。
為提高HCPT療效，同時降低其毒副作用，現(xiàn)國內外藥學研究者將HCPT進行了劑型改革，已有HCPT微球、脂質體、納米乳、固體脂質納米粒等研制的報道。近年來，納米脂質體作為一種新型藥物傳遞系統(tǒng)，在提高藥物溶解度、增加藥物穩(wěn)定性、降低藥物副作用、緩控釋給藥和基因傳輸等方面有著廣泛的應用。
但普通脂質體在體內易被單核巨噬細胞(MPS)吞噬，在血液循環(huán)中的滯留時間較短，藥物的靶向釋放減少。當脂質體粒徑小于100nm，在血循環(huán)時間較長，但若粒徑大于200nm，則易被巨噬細胞作為外來異物而吞噬，脂質體在體內循環(huán)時間很短。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體及其制備方法，該氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體具有高效、低毒、長循環(huán)的優(yōu)點。
實現(xiàn)本發(fā)明目的的技術方案為一種氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體，該納米脂質體含有氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿，平均粒徑在0～100nm之間，脂質體基本組分為卵磷脂∶膽固醇2～4∶1，羥基喜樹堿藥物∶類脂1∶15～25，羥基喜樹堿藥物濃度為0.4～0.6mg/mL，水化介質為pH5.0～7.8的磷酸鹽緩沖液。
且氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體為凍干品，含有5～15％(W/V)的凍干保護劑，凍干保護劑可用海藻糖、山梨醇、甘露醇、蔗糖、乳糖。
本發(fā)明還提供了制備氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體的方法，其具體步驟如下(1)、采用薄膜分散法制備羥基喜樹堿脂質體，按處方量精密稱取磷脂與膽固醇，溶解于足量含α-生育酚0.5～5mg·mL-1的氯仿溶液中，得類脂溶液，再加入處方量的羥基喜樹堿甲醇溶液，轉移至茄形瓶中，25～50℃恒溫水浴中，用旋轉蒸發(fā)儀減壓蒸餾除去有機溶劑，在瓶壁上形成均勻類脂薄膜，以溶解有凍干保護劑的水化介質于25～50℃水化類脂薄膜，形成粗懸液，旋渦輕輕振搖，超聲處理。
(2)、取藥用殼聚糖適量，按摩爾比為HCl∶CS＝1.2～6∶1加到0.1～0.5mol/L的稀HCl中，加完后繼續(xù)攪拌20～40min，超聲脫氣5～10min，再靜置溶脹10～30min，然后加丙酮沉淀，邊加邊攪拌，將沉淀完全的氯化殼聚糖抽濾，并用少量丙酮洗2-3次，抽干后進行冷凍干燥，即得白色海綿狀氯化殼聚糖。
(3)、取出制備好的脂質體粗懸液，以1～3mL/min的速度恒速滴加到40～120mL的0.1～0.5％(w∶v)的氯化殼聚糖溶液中，勻速攪拌，待脂質體全部滴加完畢再繼續(xù)攪拌10～30min，即得混懸狀氯化殼聚糖包衣脂質體，將所得包衣脂質體經高壓均質機在140～280M Pa壓力下經50～100nm膜擠壓乳勻6～10次。
(4)、加入5～15％(W/V)凍干保護劑后，取包衣脂質體懸浮液裝入小西林瓶中，以10～20K/min的降溫速度降至-80～-65℃并預凍24～36h，再在壓力5～8Pa，擱板溫度-15～20℃的條件下冷凍干燥24～48小時，加蓋即得氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體粉末狀凍干品。
為解決普通脂質體在體內易被單核巨噬細胞(MPS)吞噬，在血液循環(huán)中的滯留時間較短，藥物的靶向釋放減少這一問題題，本發(fā)明采用了減小粒徑，做成納米脂質體，即將脂質體平均粒徑控制在在0～100nm.之間；以及用氯化殼聚糖對脂質體進行包衣，在脂質體表面高度修飾，形成立體保護作用，使脂質體不被血液中的調理素識別、攝取，從而使脂質體清除速度減慢，血液中滯留時間延長。包衣脂質體與普通脂質體相比依包衣材料不同具備如下優(yōu)勢(1)增加長循環(huán)效果(延長藥物t1/2)；(2)延緩或穩(wěn)定藥物釋放；(3)增加制劑的主動靶向性；(4)增加生物粘附力；(5)促進藥物的吸收。
而且本發(fā)明用殼聚糖的水溶性衍生物——氯化殼聚糖(Chitosan chloride，CS-Cl)作包衣，不僅可顯著改善包衣材料的溶解性能，并由于靜電作用可增加包衣脂質體對腫瘤細胞的靶向性。同時能增加脂質體膜的穩(wěn)定性，緩慢釋放藥物，且脂質體乳勻到納米級(粒徑小于100nm)，在體內可以逃匿MPS的捕獲，延長脂質體在血液循環(huán)中的滯留時間，達到緩釋，靶向，長效的作用。
本發(fā)明將納米技術與親水性高分子包衣技術相結合，并利用凍干技術，制備的羥基喜樹堿氯化殼聚糖包衣納米脂質體，包封率高，穩(wěn)定性好，大小均勻，表面荷正電，體外釋藥曲線符合Higuchi方程，靜脈注射后能顯著延長藥物在血液循環(huán)中的時間，減少MPS對脂質體的捕獲，能提高HCPT體內抗腫瘤活性。
本發(fā)明提供的羥基喜樹堿氯化殼聚糖包衣納米脂質體保存時為粉末狀凍干品，使用前用生理鹽水2mL復水化即可均勻形成脂質體混懸液，供靜脈注射使用。
本發(fā)明提供的氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體較其他羥基喜樹堿制品，具有高效、低毒、在血液循環(huán)中滯留時間長等優(yōu)點，從而提高主藥的抗腫瘤活性。
具體實施例方式
氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體實施例如下實施例1氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體基本組分為卵磷脂∶膽固醇2.2∶1，羥基喜樹堿藥物∶類脂1∶18，羥基喜樹堿藥物濃度為0.45mg/mL，水化介質為pH5.8的磷酸鹽緩沖液，含有8％(W/V)的凍干保護劑乳糖，平均粒徑小于100nm之間。
實施例2氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體基本組分為卵磷脂∶膽固醇4∶1，羥基喜樹堿藥物∶類脂1∶23，羥基喜樹堿藥物濃度為0.6mg/mL，水化介質為pH7.5的磷酸鹽緩沖液，含有15％(W/V)的凍干保護劑甘露醇，平均粒徑在0～100nm之間。
氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體制備方法實施例如下實施例3采用薄膜分散法制備HCPT脂質體。精密稱取各處方量的磷脂與膽固醇(總類脂為100mg)，溶解于3mL含α-生育酚1mg·mL-1的氯仿溶液中，得類脂溶液。再加入處方量的HCPT甲醇溶液，轉移至250mL茄形瓶中，40℃恒溫水浴中，用旋轉蒸發(fā)儀減壓蒸餾除去有機溶劑，在瓶壁上形成均勻類脂薄膜，以10mL溶解有凍干保護劑山梨醇的水化介質于40℃水化類脂薄膜，形成粗懸液，旋渦輕輕振搖2h，超聲2min。
取藥用殼聚糖適量，按摩爾比HCl∶CS＝1.2∶1加到0.1mol·L-1的稀HCl中，待其加完繼續(xù)攪拌20min，超聲脫氣5min，再靜置溶脹10min，然后加丙酮沉淀，邊加邊攪拌，將沉淀完全的氯化殼聚糖置G3砂型漏斗中抽濾。并用少量丙酮洗2-3次，抽干后進行冷凍干燥，即得白色海綿狀氯化殼聚糖。
取出制備的脂質體粗懸液10ml，以1mL·min-1的速度恒速滴加到40mL的0.4％(w∶v)的氯化殼聚糖溶液中，攪拌速度為300rpm，待脂質體全部滴加完畢再繼續(xù)攪拌10min，即得混懸狀氯化殼聚糖包衣脂質體。將上述包衣脂質體經高壓均質機在140M Pa壓力下經50nm膜擠壓乳勻6次。
加入15％(W/V)凍干保護劑山梨醇后，取2ml包衣脂質體懸浮液裝入小西林瓶中，以20K/min的降溫速度降至-65℃并預凍24h，再冷凍干燥24h、壓力8Pa，擱板溫度-15℃，加蓋即得。
上述羥基喜樹堿氯化殼聚糖包衣納米脂質體保存時為粉末狀凍干品，使用前用生理鹽水2mL復水化即可均勻形成脂質體混懸液，供靜脈注射使用。
實施例4精密稱取各處方量的磷脂與膽固醇(總類脂為100mg)，溶解于3mL含α-生育酚2mg·mL-1的氯仿溶液中，得類脂溶液。再加入處方量的HCPT甲醇溶液，轉移至250mL茄形瓶中，37℃恒溫水浴中，用旋轉蒸發(fā)儀減壓蒸餾除去有機溶劑，在瓶壁上形成均勻類脂薄膜，以10mL溶解有凍干保護劑蔗糖的水化介質于37℃水化類脂薄膜，形成粗懸液，旋渦輕輕振搖2h，超聲2min。
取藥用殼聚糖適量，加到0.3mol·L-1的稀HCl中(HCl∶CS＝1.0∶1摩爾比)，待其加完繼續(xù)攪拌20min，超聲脫氣5min，再靜置溶脹10min，然后加丙酮沉淀，邊加邊攪拌，將沉淀完全的氯化殼聚糖置G3砂型漏斗中抽濾。并用少量丙酮洗2-3次，抽干后進行冷凍干燥，即得白色海綿狀氯化殼聚糖。
取出制備的脂質體粗懸液(約10ml)，以2mL·min-1的速度恒速滴加到60mL的0.2％(W/V)的氯化殼聚糖溶液中，攪拌速度為500rpm，待脂質體全部滴加完畢再繼續(xù)攪拌10min，即得混懸狀氯化殼聚糖包衣脂質體。將上述包衣脂質體經高壓均質機在140M Pa壓力下經50nm膜擠壓乳勻8次。
加入15％(W/V)凍干保護劑蔗糖后，取2mL包衣脂質體懸浮液裝入小西林瓶中，以20K/min的降溫速度降至-65℃并預凍36h，再冷凍干燥24h(壓力8Pa，擱板溫度-15℃)，加蓋即得。
權利要求
1.一種氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體，其特征在于納米脂質體含有氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿，平均粒徑在0～100nm之間。
2.根據權利要求1所述的氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體，其特征在于脂質體基本組分為卵磷脂∶膽固醇2～4∶1，羥基喜樹堿藥物∶類脂1∶15～25，羥基喜樹堿藥物濃度為0.4～0.6mg/mL，水化介質為pH5.0～7.8的磷酸鹽緩沖液。
3.根據權利要求1或2所述的氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體，其特征在于脂質體為凍干品，加有5～15％(W/V)的凍干保護劑。
4.根據權利要求3所述的氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體，其特征在于凍干保護劑可用海藻糖、山梨醇、甘露醇、蔗糖或乳糖。
5.權利要求1所述的氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體的制備方法，其特征在于采用如下具體步驟(1)、采用薄膜分散法制備羥基喜樹堿脂質體，按處方量精密稱取磷脂與膽固醇，溶解于足量含α-生育酚0.5～5mg·mL-1的氯仿溶液中，得類脂溶液，再加入處方量的羥基喜樹堿甲醇溶液，轉移至茄形瓶中，25～50℃恒溫水浴中，用旋轉蒸發(fā)儀減壓蒸餾除去有機溶劑，在瓶壁上形成均勻類脂薄膜，以溶解有凍干保護劑的水化介質于25～50℃水化類脂薄膜，形成粗懸液，旋渦輕輕振搖，超聲處理。(2)、取藥用殼聚糖適量，按摩爾比為HCl∶CS＝1.2～6∶1加到0.1～0.5mol/L的稀HCl中，加完后繼續(xù)攪拌20～40min，超聲脫氣5～10min，再靜置溶脹10～30min，然后加丙酮沉淀，邊加邊攪拌，將沉淀完全的氯化殼聚糖抽濾，并用少量丙酮洗2-3次，抽干后進行冷凍干燥，即得白色海綿狀氯化殼聚糖。(3)、取出制備好的脂質體粗懸液，以1～3mL/min的速度恒速滴加到40～120mL的0.1～0.5％(w∶v)的氯化殼聚糖溶液中，勻速攪拌，待脂質體全部滴加完畢再繼續(xù)攪拌10～30min，即得混懸狀氯化殼聚糖包衣脂質體，將所得包衣脂質體經高壓均質機在140～280M Pa壓力下經50～100nm膜擠壓乳勻6～10次。(4)、加入5～15％(W/V)凍干保護劑后，取包衣脂質體懸浮液裝入小西林瓶中，以10～20K/min的降溫速度降至-65～-80℃并預凍24～36h，再在壓力5～8Pa，擱板溫度-15～20℃的條件下冷凍干燥24～48小時，加蓋即得氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體粉末狀凍干品。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體及其制備方法，該納米脂質體含有氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿，平均粒徑小于100nm，脂質體組分為卵磷脂∶膽固醇2～4∶1，羥基喜樹堿藥物∶類脂1∶15～25，藥物濃度為0.4～0.6mg/mL，水化介質為pH5.0～7.8的磷酸鹽緩沖液。本發(fā)明將納米技術與親水性高分子包衣技術相結合，并利用凍干技術，制備的氯化殼聚糖包衣的羥基喜樹堿納米脂質體，包封率高，穩(wěn)定性好，大小均勻，表面荷正電，體外釋藥曲線符合Higuchi方程，靜脈注射后能顯著延長藥物在血液循環(huán)中的時間，減少單核巨噬細胞對脂質體的捕獲，能提高羥基喜樹堿體內抗腫瘤活性。
文檔編號A61K31/475GK1857223SQ20061001927
公開日2006年11月8日 申請日期2006年6月7日 優(yōu)先權日2006年6月7日
發(fā)明者杜予民, 何文 申請人:武漢大學