專利名稱：用于大規(guī)模接種系統(tǒng)的活抗原的疫苗穩(wěn)定化制劑的制作方法
用于大規(guī)模接種系統(tǒng)的活抗原的疫苗穩(wěn)定化制劑
背景技術：
本文所公開的發(fā)明是一種活疫苗穩(wěn)定化制劑，其可用于提高疫苗在 溶液中的存活時間，從而實現(xiàn)動物的合格免疫。本文也公開了制備與應 用方法。
接種，作為一項預防措施，是為了在現(xiàn)代生產體系中實現(xiàn)動物健康 而進行的一系列活動中的一部分。它與生物安全體系、充足的飲食一起， 使得生產者在整個周期中能夠獲得生產體系的正確性能，從而獲得較高 的經(jīng)濟利益。動物控制野外挑戰(zhàn)的能力較低會引起傳染病爆發(fā)，導致顯 著的經(jīng)濟損失，這一發(fā)現(xiàn)證明了適當免疫接種計劃的重要性。
在確定接種計劃時，有幾個因素必須要分析，其中包括所用疫苗的 種類、林系、給藥途徑、所用技術及追蹤方法。
在技術方面，使用的施用途徑和技術非常重要，因為它們的實施直 接決定著可能的操作成敗。
疫苗本身并不是較高操作費用的一個因素，然而，它是一項需要更 多關注、保障與管理的活動。與這項活動相關的人力成本很高，因為存 在錯誤的可能性、偏差或較低的一致性。
對于活抗原疫苗，為了成功接種而必須給予的處理與保護尤其關 鍵。當前的密集生產體系需要大規(guī)模的接種和藥物處理技術，這使得生 產者能夠在短時間內使用少量人力來免疫大量家禽，從而降低相關費 用、擴大收益。
這些體系也必須為生產者提供靈活性與安全性，以面對由于新生產 體系中家禽密度增加導致傳染性疾病增加而引起的新的健康挑戰(zhàn)。
考慮到家禽養(yǎng)殖開發(fā)的規(guī)模，由于病原微生物與不利理化條件的存 在，生產農場中所使用的水質難以保證。根據(jù)所用供水系統(tǒng)的地理位置 及其存儲類型的不同，水具有不同的硬度(無機鈣和鎂)狀態(tài)，遠離中性的pH范圍，并且含有來自用于去除水中病原體的處理系統(tǒng)的卣素、 氯化物和》典化物。
這些條件對于動物的健康是不利的，對于接種和給藥程序則更為不
利。接種和給藥(medication)是需要非常特定的水質條件的兩個程序 中性pH、不含氯和碘、低硬度，因而在正常的野外條件下很少能達到最 佳結果。
然而，為使此項操作能提供最大可能的保護， 一些因素必須注意， 其中最重要的是所噴水的質量。使用不具備接種所需最低質量特征的 水，就會不可避免地降低所用疫苗的有效性，從而使所接種的動物種群 的健康受到威脅。
實現(xiàn)接種和給藥程序的最大有效性所需要的最低質量條件涉及三 個主要參數(shù)pH、水的硬度和作為消毒劑的囟素的存在。
pH是接種和給藥程序的效率的一個決定因素。對于前者，病毒和細 菌對高于中性酸度或堿度范圍引起的變性或失活高度耐受。接種或給藥 的理想pH是pH 7。
水的硬度是指鈣和鎂離子的存在，它們主要來自于地下礦床。這些 離子對于預防中所使用的病毒、細菌及活性成分具有螯合或凝集作用。 理想狀態(tài)是當接種或給藥時水中不含或含有最低可能濃度的這些離子。
由于水中病原體的存在，需要用抗微生物劑來處理，其中最廣泛使 用的是氯和碘。然而，由于它們對疫苗具有同樣的效果而使其失活，從 而干擾接種過程。對于此項操作，水中必須完全不含鹵素。
在接種時，家禽消化道和呼吸道中存在的介質條件對病毒和細菌的 生存能力產生不利影響。因此，在抗原停留于它們必須在其上生長的特 定組織上之前，使用一些能夠阻止抗原破壞的材料。
每個活的微生物，無論病毒還是細菌，都有空間結構或三級結構， 這種結構可被溶液的滲透壓所改變，而且當其改變時，能夠導致細菌外 壁破壞或大部分病毒變性。因此，為了保持活抗原穩(wěn)定，理想的是接種 溶液具有最小的等電電勢。
幾年前在畜牧業(yè)中普遍和廣泛使用的做法是使用脫脂牛奶作為活抗原疫苗的穩(wěn)定劑。由于牛奶具有弱堿性特征，因而牛奶具有pH中和 的性質。
由于在許多情況下，牛奶本身含有會破壞疫苗的碘化物殘余物，牛
奶作為穩(wěn)定劑使用不是很有利，因而必須考慮只使用經(jīng)過檢定不含;^典化 物的牛奶或可商購的穩(wěn)定的制劑。而且，牛奶穩(wěn)定pH及水中卣素存在
的能力非常有限，幾乎為零。
其鈣含量導致了非常嚴重的問題，因為鈣含量實質上提高了水的硬 度水平，因而既能夠影響抗原的穩(wěn)定性，又能造成鈣在供水體系管道或 噴嘴上的沉積。它也是一種培養(yǎng)基，導致在水分配體系或噴射體系內部 形成生物斑塊膜，這對于動物健康是非常大的威脅。
因而，需要一種通過解決上述所有三個問題而為溶液中的抗原提供 必要穩(wěn)定性的產品，它具有高穩(wěn)定效率，直接的作用，而且同時不影響 接種所用的機械系統(tǒng)。

發(fā)明內容
本發(fā)明的應用領域為活抗原疫苗的飲用水接種和給藥系統(tǒng)以及噴 霧接種和給藥系統(tǒng)。疫苗分配介質通常為水，但并不限于水，所以疫苗 能夠應用其他分配介質，只要它是一種液體介質。
用于大規(guī)模接種系統(tǒng)的活抗原的疫苗穩(wěn)定化制劑包含一種多成分
(活病毒或細菌疫苗)提供延長的穩(wěn)定性。
本發(fā)明包括一種產品，它可以是與水混合用于農畜接種的液體或固 體的形式。
pH穩(wěn)定劑用于將疫苗溶液的pH穩(wěn)定在6.5 7.5范圍內，在此范圍 內大部分細菌和病毒能夠存活。pH穩(wěn)定劑可以是磷酸鹽、琥珀酸鹽、碳 酸氫鹽和乳酸鹽。優(yōu)選使用磷酸鉀，因為其具有低刺激性并且認為其可 安全地用于動物和人類。
,水硬度螯合劑用于去除能夠導致疫苗中的病毒和細菌失活的溶于 水中的礦物質。螯合劑包括乙二胺四乙酸鹽。其中，優(yōu)選使用乙二胺四乙酸二鈉鹽(EDTA二鈉)，因為認為其可安全使用，不會明顯改變溶 液的pH,且不會刺激活組織。
還原劑用于中和當?shù)?實施地)水中存在的消毒劑。這些消毒劑可以 基于氯、碘、過氧化物、溴、氟、臭氧或高錳酸鹽。所有這些都可認為 是氧化劑，可用(但不限于)疏代硫酸鈉、焦亞硫酸鈉(sodium me tab i su 1 f i te)、亞石l酸氫鈉、亞石克酸鈉、二IU匕好u、亞石克酸氬4妄及碌u 代硫酸銨中和。優(yōu)選使用硫代硫酸鈉，因其具有較高的中和能力，且被 認為是安全、無腐蝕性的。
必要時，可使用水溶性鹽來提供保持疫苗中存在的病毒三級結構穩(wěn) 定和細菌外壁完整所需的滲透壓。其中，包括鹽酸鹽、氫碘酸鹽、碳酸 鹽、碳酸氫鹽、磷酸鹽、碘酸鹽、氯酸鹽、氫溴酸鹽、溴酸鹽、氫氟酸 鹽、硝酸鹽、亞硝酸鹽、氫好^酸鹽、 〃琉酸鹽和亞-危酸鹽。其中，優(yōu)選使 用氯化鈉，因其無毒、無刺激性且被認為可安全使用。
必要時，可使用碳水化合物來保護病毒或細菌結構免受家禽消化道 不利條件的影響，其中，包括葡萄糖、右旋糖、乳糖、蔗糖、甘露糖和 果糖。優(yōu)選乳糖，因為其由于粉末粒徑而具有高溶解性，且與家禽的正 常代謝沒有不利的相互作用。
必要時，可使用食品級著色劑來為接種員提供一種可視的確認手 段，其可使穩(wěn)定劑的使用者知道何時已將保護劑加入水中，并最終知道 動物已經(jīng)接受了含有疫苗的水。其中，包括顏料和藍、紅、綠、紫、橙 等顏料制劑。優(yōu)選使用藍色顏料，因其與活組織的顏色具有對比效果。
必要時，可使用食品級抗?jié)駝﹣矸乐够旌衔镉捎谄淠承}的吸濕性 而濕潤。這些抗吸濕劑不會改變產品的理化功能，只是減少混合物變濕。 其實例包括二氧化硅、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、磷酸鈣、磷酸鎂、氧化鎂、 硅酸4丐、硅酸鎂、硅鋁酸鈉、硅酸鋁酸鈣等。其中，優(yōu)選使用硬脂酸鎂 和二氧化硅，因其無毒、無剌激性且被認為可安全使用。
所述制劑按以下方式組成乙二胺四乙酸(EDTA) 二鈉鹽，濃度 范圍為0.03%~ 34.19%,最佳濃度為3.75%;磷酸二氫鐘，濃度范圍為 0.03% ~ 34.48%,最佳濃度為5%;磷酸氬二鉀，濃度范圍為0.03% ~56.07%,最佳濃度為41.25%;硫代硫酸鈉，濃度范圍為0.03% ~ 33.73%， 最佳濃度為1.75%;氯化鈉，濃度范圍為0.03% ~ 35.91%,最佳濃度為 10,75%;乳糖，濃度范圍為0.03% ~ 51.02%,最佳濃度為28%; 二氧化 硅，濃度范圍為0.03% ~5%，最佳濃度為1%;硬脂酸鎂，濃度范圍為 0.03% ~ 5%,最佳濃度為1%;亮藍著色劑，濃度范圍為0.03%-44,25%, 最佳濃度為7.50%。
生產方法為在最大相對濕度30%、溫度15~35。 C下，以如下順序 加入原料，每次加入后，持續(xù)攪拌下逐步混合這些原料15分鐘磷酸 氫二鉀、乳糖、磷酸二氬鉀、乙二胺四乙酸(EDTA) 二鈉鹽、硫代硫 酸鈉、氯化鈉、硬脂酸鎂、二氧化硅和亮藍著色劑。
當將疫苗與在溫度15~35° C下制備的濃度為2.85 ~ 5.93克/升溶 液的穩(wěn)定化溶液相混合時，病毒或藥物沒有暴露于不利條件下，因此其 存活能力長期保持。當動物飲用含有疫苗的溶液時，乳糖在病毒外表面 上作為保護劑起作用，從而避免其在轉運直到到達下消化道系統(tǒng)的過程 中受到破壞，疫苗在下消化道系統(tǒng)中通過腸膜進入血流，開始免疫原性 反應。
使用方法限定如下根據(jù)組成不同，在不斷攪拌下，緩慢向制備的 每升疫苗溶液中加入2.85 ~ 5.93克/升的活疫苗穩(wěn)定劑。 一旦溶解，就 將所需量加入到疫苗中并應用于待接種的動物。
實施例1
粉末混合物包含0.03。/qEDTA、 5.19%磷酸二氫鉀、42.85 %磷酸氫 二鉀、1.82%硫代硫酸鈉、11.17%氯化鈉、31.16%乳糖、1.04 %二氧化 硅、1.04 %硬脂酸鎂和7.79 %著色劑。按每升水3.85克該混合物的比例 計量制備。
進行實驗室規(guī)模試驗，其中將產品加入到pH6、 100ppm總硬度及 5 ppm游離氯的空白水溶液中，并在5分鐘內加入到具有1000劑量效 價為3.7 log IO的作為生物模型的禽類傳染性支氣管炎疫苗(樣品A) 的小瓶中，還包括使用不含產品的空白溶液的重復樣品(樣品B)?；旌?小時后，獲得以下儀器分析理化測量和雞胚滴定生物測試凄史
據(jù)
樣品A:水硬度為55ppm總硬度、pH7.1、游離氯滴定值為0。觀 察到疫苗效價保持在濃度為起始應用濃度的94 %,因而只有6 %的疫苗 活性喪失。
樣品B:測得硬度為115ppm、 pH7.1、游離氯為4ppm。觀察到疫 苗效價減少為疫苗起始應用濃度的30%,因而有70%的疫苗活性喪失。
實施例2
粉末混合物包含3.75 % EDTA、 5.00 %磷酸二氫鉀、41.25 %磷酸氫 二鉀、1.75%石1代硫酸鈉、10.75 %氯化鈉、28%乳糖、1 %硬脂酸鎂、1 %二氧化硅和7.50 %著色劑。按每升水4克該混合物的比例計量制備。
進行實驗室規(guī)模試驗，其中將產品加入到pH6、 100ppm總硬度及 5 ppm游離氯的空白水溶液中，并在5分鐘內加入具有1000劑量效《介 為3.7 log 10的作為生物模型的禽類傳染性支氣管炎疫苗(樣品A)的小 瓶中，還包括使用不含產品的空白溶液的重復樣品(樣品B)。
混合2小時后，獲得以下儀器分析理化測量和雞胚滴定生物測試數(shù)
據(jù)
樣品A:水硬度為0ppm總硬度、pH7.0、游離氯滴定值為0。觀察 到疫苗效價保持在濃度為疫苗起始應用濃度的97 %，因而只有3 %的疫 苗活性喪失。
樣品B:測得硬度為105 ppm、 pH5.9、游離氯為5 ppm。觀察到 疫苗效價減少為疫苗起始應用濃度的25 %,因而有75 %的疫苗活性喪 失。
實施例3
粉末混合物包含34.19 % EDTA、 3.42 %磷酸二氫鉀、28.21 %磷酸 氬二鉀、1.20%硫代疏酸鈉、7.35°/。氯化鈉、9.5°/。乳糖、0.68 %硬脂 酸鎂、0,68 %二氧化硅和5.13 %著色劑。按每升水5.85克該混合物的比例計量制備。
進行實驗室規(guī)模試驗，其中將產品加入到pH6、 100卯m總硬度及 5ppm游離氯的空白水溶液中，并在5分鐘內加入到具有1000劑量效價 為3.7 1ogl0的作為生物模型的禽類傳染性支氣管炎疫苗(樣品A)的 小并瓦中，還包括使用不含產品的空白溶液的重復樣品(樣品B)。
混合2小時后，獲得以下儀器分析理化測量和雞胚滴定生物測試數(shù)
據(jù)
樣品A:水硬度為0ppm總硬度、pH7.0、游離氯滴定值為0。觀 察到疫苗效價保持在濃度為疫苗起始應用濃度的97 %，因而只有3 %的 疫苗活性喪失。
樣品B:測得硬度為110ppm、 pH6.0、游離氯為4ppm。觀察到疫 苗效價減少為疫苗起始應用濃度的30%，因而有70%的疫苗活性喪失。
實施例4
粉末混合物包含3.95 %EDTA、 0.03 %磷酸二氫鉀、43.41 %磷酸氫 二鉀、1.84%硫代硫酸鈉、11.31 %氯化鈉、29.47 %乳糖、1.05 %硬脂酸 鎂、1.05 %二氧化硅和7.89 %著色劑。按每升水3.8克該混合物的比例 計量制備。
進行實驗室規(guī)模試驗，其中將產品加入到pH 6、 100ppm總硬度 及5ppm游離氯的空白水溶液中，并在5分鐘內加入到具有1000劑量 效價為3.7 loglO的作為生物模型的禽類傳染性支氣管炎疫苗(樣品A) 的小瓶中，還包括使用不含產品的空白溶液的重復樣品(樣品B)。
混合2小時后，獲得以下儀器分析理化測量和雞胚滴定生物測試數(shù)
據(jù)
樣品A:水硬度為0ppm總硬度、pH7.6、游離氯滴定值為0。觀 察到疫苗效價保持在濃度為疫苗起始應用濃度的93 %,因而只有7 %的 疫苗活性喪失。
樣品B:測得石更度為102 ppm、 pH6.0、游離氯為5 ppm。 觀察到 疫苗效價減少為疫苗起始應用濃度的35%，因而有65%的疫苗活性喪
10失。
實施例6
粉末混合物包含2.59% EDTA、 34.48 %磷酸二氬鉀、28.45 %磷酸 氫二鉀、1.21%硫代硫酸鈉、7.41°/0氯化鈉、19.31 %乳糖、0.69 %硬脂 酸鎂、0.69 %二氧化硅和5.17 °/。著色劑。按每升水5.8克該混合物的比 例計量制備。
進行實驗室規(guī)模試驗，其中將產品加入到pH6、 100ppm總硬度 及5 ppm游離氯的空白水溶液中，并在5分鐘內加入到具有1000劑量 效價為3.7 loglO的作為生物模型的禽類傳染性支氣管炎疫苗(樣品A) 的小瓶中，還包括使用不含產品的空白溶液的重復樣品(樣品B)。
混合2小時后，獲得以下儀器分析理化測量和雞胚滴定生物測試數(shù)
據(jù)
樣品A:水硬度為0ppm總硬度、pH6.2、游離氯滴定值為0。觀 察到疫苗效價保持在濃度為疫苗起始應用濃度的83 %,因而只有17 % 的疫苗活性喪失。
樣品B:測得硬度為104 ppm、 pH6.0、游離氯為5 ppm。觀察到 疫苗效價減少為疫苗起始應用濃度的33 %，因而有67 %的疫苗活性喪 失。
實施例7
粉末混合物包含6.32。/oEDTA、 8.51 %磷酸二氫鉀、0.03 %磷酸氫 二鉀、2.98%硫代硫酸鈉、18.29 %氯化鈉、47.64 %乳糖、1.70 %硬脂酸 鎂、1.70 %二氧化硅和12.76 %著色劑。按每升水2.35克該混合物的比
例計量制備。
進行實驗室規(guī)模試驗，其中將產品加入到pH 6、 100ppm總硬度 及5ppm游離氯的空白水溶液中，并在5分鐘內加入到具有1000劑量 效價為3.7 loglO的作為生物模型的禽類傳染性支氣管炎疫苗(樣品A) 的小瓶中，還包括使用不含產品的空白溶液的重復樣品(樣品B)。混合2小時后，獲得以下儀器分析理化測量和雞胚滴定生物測試數(shù)
據(jù)
樣品A:水硬度為2ppm總硬度、pH5.8、游離氯滴定值為0。觀 察到疫苗效價保持在濃度為疫苗起始應用濃度的73 %,因而只有27 % 的疫苗活性喪失。
樣品B:測得硬度為102 ppm、 pH5.9、游離氯為4 ppm。觀察到 疫苗效價減少為疫苗起始應用濃度的29%,因而有71 %的疫苗活性喪 失。
實施例8
粉末混合物包含2.80 % EDTA、 3.74 %磷酸二氫鉀、56.07 %磷酸氫 二鉀、1.31%硫代硫酸鈉、8.04 %氯化鈉、20.93 %乳糖、0.75 %硬脂酸 鎂、0.75 %二氧化硅和5.61 %著色劑。按每升水5.35克該混合物的比例 計量制備。
進行實驗室規(guī)模試驗，其中將產品加入到pH6、 100 ppm總硬度 及5ppm游離氯的空白水溶液中，并在5分鐘內加入到具有1000劑量 效價為3.7 log 10的作為生物模型的禽類傳染性支氣管炎疫苗(樣品A) 的小瓶中，還包括使用不含產品的空白溶液的重復樣品(樣品B)。
混合2小時后，獲得以下儀器分析理化測量和雞胚滴定生物測試數(shù)
據(jù)
樣品A:水硬度為3 ppm總硬度、pH7.6、游離氯滴定值為0。觀 察到疫苗效價保持在濃度為疫苗起始應用濃度的91%,因而只有9%的 疫苗活性喪失。
樣品B:測得硬度為108 ppm、 pH6.1、游離氯為5 ppm。觀察到 疫苗效價減少為疫苗起始應用濃度的36%，因而有64%的疫苗活性喪 失。
實施例9
粉末混合物包含3.82。/。EDTA、 5.09%磷酸二氫鉀、41.97 %磷酸氬二鉀、0.03%硫代硫酸鈉、10.94 %氯化鈉、28.49 %乳糖、1.02 %硬脂酸 鎂、1.02 %二氧化硅和7.63 %著色劑。按每升水3.93克該混合物的比例
計量制備。
進行實驗室規(guī)模試驗，其中將產品加入到pH 6、 100 ppm總硬度 及5ppm游離氯的空白水溶液中，并在5分鐘內加入到具有1000劑量 效價為3.7 log 10的作為生物模型的禽類傳染性支氣管炎疫苗(樣品A) 的小瓶中，還包括使用不含產品的空白溶液的重復樣品(樣品B)。
混合2小時后，獲得以下儀器分析理化測量和雞胚滴定生物測試數(shù)
據(jù)
樣品A:水硬度為4 ppm總硬度、pH 7.1 、游離氯滴定值為2 ppm。 觀察到疫苗效價保持在濃度為疫苗起始應用濃度的72 %,因而只有28 % 的疫苗活性喪失。
樣品B:測得硬度為100 ppm、 pH6.0、游離氯為5 ppm。觀察到 疫苗效價減少為疫苗起始應用濃度的35 %,因而有65 %的疫苗活性喪 失。
實施例10
粉末混合物包含2.53 %EDTA、 3.37%磷酸二氫鐘、27.82 °/。磷酸氫 二鉀、33.73 %硫代硫酸鈉、7,25 %氯化鈉、18.89 %乳糖、0.67 %硬脂酸 鎂、0.67 %二氧化硅和5.06 %著色劑。按每升水5.93克該混合物的比例 計量制備。
進行實驗室規(guī)模試驗，其中將產品加入到pH 6、 100 ppm總硬度 及5 ppm游離氯的空白水溶液中，并在5分鐘內加入到具有1000劑量 效價為3.7 log 10的作為生物模型的禽類傳染性支氣管炎疫苗(樣品A) 的小瓶中，還包括使用不含產品的空白溶液的重復樣品(樣品B)。
混合2小時后，獲得以下儀器分析理化測量和雞胚滴定生物測試數(shù)
據(jù)
樣品A:水硬度為1 ppm總硬度、pH7.0、游離氯滴定值為0。觀 察到疫苗效價保持在濃度為疫苗起始應用濃度的96%，因而只有4%的疫苗活性喪失。
樣品B:測得硬度為107 ppm、 pH6.1、游離氯為5 ppm。 觀察到 疫苗效價減少為疫苗起始應用濃度的32%，因而有68%的疫苗活性喪 失。
實施例11
粉末混合物包含4.20 % EDTA、 5.60 %磷酸二氫鉀、46.21 %磷酸氫 二鐘、1.96%硫代硫酸鈉、0.03 %氯化鈉、31.36 %乳糖、1.12 %硬脂酸 鎂、1.12 %二氧化硅和8.40 °/。著色劑。按每升水3.57克該混合物的比例 計量制備。
進行實驗室規(guī)模試驗，其中將產品加入到pH 6、 100ppm總硬度 及5ppm游離氯的空白水溶液中，并在5分鐘內加入到具有1000劑量 效價為3.7 log 10的作為生物模型的禽類傳染性支氣管炎疫苗(樣品A) 的小瓶中，還包括使用不含產品的空白溶液的重復樣品(樣品B)。
混合2小時后，獲得以下儀器分析理化測量和雞胚滴定生物測試數(shù)
據(jù)
樣品A:水硬度為0ppm總硬度、pH7.2、游離氯滴定值為0。觀 察到疫苗效價保持在濃度為疫苗起始應用濃度的96%,因而只有4%的 疫苗活性喪失。
樣品B:測得硬度為103 ppm、 pH6.0、游離氯為5 ppm。觀察到 疫苗效價減少為疫苗起始應用濃度的28%,因而有72%的疫苗活性喪失。
實施例12
粉末混合物包含2.69 % EDTA、 3.59 %磷酸二氫鉀、29.62 %磷酸氫 二鉀、1.26%硫代硫酸鈉、35.91 %氯化鈉、20.11 %乳糖、0.72 %硬脂酸 鎂、0.72 %二氧化硅和5.39 %著色劑。按每升水5.57克該混合物的比例
計量制備。
進行實驗室規(guī)模試驗，其中將產品加入到pH6、 100卯m總硬度 及5 ppm游離氯的空白水溶液中，并在5分鐘內加入到具有1000劑量效價為3.7 loglO的作為生物模型的禽類傳染性支氣管炎疫苗(樣品A) 的小瓶中，還包括使用不含產品的空白溶液的重復樣品(樣品B)。 混合2小時后，荻得以下儀器分析理化測量和雞胚滴定生物測試數(shù)
據(jù)
樣品A:水硬度為3 ppm總硬度、PH6.8、游離氯滴定值為0。觀 察到疫苗效價保持在濃度為疫苗起始應用濃度的91%,因而只有9%的 疫苗活性喪失。
樣品B:測得硬度為100 ppm、 H6.0、游離氯為5 ppm。觀察到疫 苗效價減少為疫苗起始應用濃度的31%,因而有69%的疫苗活性喪失。
實施例13
粉末混合物包含5.21 %EDTA、 6.94%磷酸二氫鉀、57.27 %磷酸氫 二鉀、2.43%硫代硫酸鈉、14.93 %氯化鈉、0.03 %乳糖、1.39 %硬脂酸 鎂、1.39 %二氧化硅和10.41 %著色劑。按每升水2.88克該混合物的比
例計量制備。
進行實驗室規(guī)模試驗，其中將產品加入到pH 6、 100 ppm總硬度 及5 ppm游離氯的空白水溶液中，并在5分鐘內加入到具有1000劑量 效價為3.7 loglO的作為生物模型的禽類傳染性支氣管炎疫苗(樣品A) 的小弁瓦中，還包括使用不含產品的空白溶液的重復樣品(樣品B)。
混合2小時后，獲得以下儀器分析理化測量和雞胚滴定生物測試數(shù)
據(jù)
樣品A:水硬度為4 ppm總硬度、pH7.0、游離氯滴定值為0。觀 察到疫苗效價保持在濃度為疫苗起始應用濃度的93%,因而只有7%的 疫苗活性喪失。
樣品B:測得硬度為100 ppm、 pH5.9、游離氯為4 ppm。觀察到 疫苗效價減少為疫苗起始應用濃度的36%,因而有64%的疫苗活性喪失。
實施例14
粉末混合物包含2.55 % EDTA、 3.40 %磷酸二氫鉀、28.06 %磷酸氫
15二鉀、1.19%硫代硫酸鈉、7.31 %氯化鈉、51.02 %乳糖、0.68 %硬脂酸 鎂、0.68 %二氧化硅和5.1 %著色劑。按每升水6.88克該混合物的比例 計量制備。
進行實驗室規(guī)模試驗，其中將產品加入到pH 6、 100 ppm總硬度 及5 ppm游離氯的空白水溶液中，并在5分鐘內加入到具有1000劑量 效價為3.7 loglO的作為生物模型的禽類傳染性支氣管炎疫苗(樣品A) 的小瓶中，還包括使用不含產品的空白溶液的重復樣品(樣品B)。
混合2小時后，獲得以下儀器分析理化測量和雞胚滴定生物測試數(shù)
據(jù)
樣品A:水硬度為21 ppm總硬度、pH7.3、游離氯滴定值為0。觀 察到疫苗效價保持在濃度為疫苗起始應用濃度的95%，因而只有5%的 疫苗活性喪失。
樣品B:測得硬度為107 ppm、 pH6.0、游離氯為5 ppm。觀察到 疫苗效價減少為疫苗起始應用濃度的31%,因而有69%的疫苗活性喪失。
實施例15
粉末混合物包含3.97。/。EDTA、 5.29%磷酸二氫鉀、43.64 %磷酸氫 二鉀、1.85%硫代硫酸鈉、11.37%氯化鈉、31.74 %乳糖、0.60 %硬脂酸 鎂、0.60 %二氧化硅和0.03 °/。著色劑。按每升水3.78克該混合物的比例 計量制備。
進行實驗室規(guī)模試驗，其中將該產品加入到pH 6、 100ppm總硬 度及5ppm游離氯的空白水溶液中，并在5分鐘內加入到具有1000劑 量效價為3.7 loglO的作為生物模型的禽類傳染性支氣管炎疫苗(樣品 A)的小瓶中，還包括使用不含產品的空白溶液的重復樣品(樣品B)。
混合2小時后，獲得以下儀器分析理化測量和雞胚滴定生物測試數(shù)
據(jù)
樣品A:水硬度為2ppm總硬度、pH7.0、游離氯滴定值為0。觀 察到疫苗效價保持在濃度為疫苗起始應用濃度的97%,因而只有3%的 疫苗活性喪失。樣品B:測得硬度為100 ppm、 pH6.0、游離氯為5 ppm。觀察到 疫苗效價減少為疫苗起始應用濃度的25%,因而有75%的疫苗活性喪失。
實施例16
粉末混合物包含2.21 %EDTA、 2.95%磷酸二氫鉀、24.34 %磷酸氫 二鉀、1.03%硫代硫酸鈉、6.34 %氯化鈉、17.70 %乳糖、0.59°/。硬脂酸 鎂、0.59 %二氧化硅和44.25 %著色劑。按每升水6.78克該混合物的比 例計量制備。
進行實驗室規(guī)模試驗，其中將該產品加入到pH 6、 100ppm總硬 度及5ppm游離氯的空白水溶液中，并在5分鐘內加入到具有1000劑 量效價為3.7 loglO的作為生物模型的禽類傳染性支氣管炎疫苗(樣品 A )的小并瓦中，還包括使用不含該產品的空白溶液的重復樣品(樣品B )。
混合2小時后，獲得以下儀器分析理化測量和雞胚滴定生物測試數(shù)
據(jù)
樣品A:水硬度為35 ppm總硬度、pH6.9、游離氯滴定值為0。觀 察到疫苗效價保持在濃度為疫苗起始應用濃度的92%，因而只有8%的 疫苗活性喪失。
樣品B:測得硬度為109 ppm、 pH6.0、游離氯為5 ppm。觀察到 疫苗效價減少為疫苗起始應用濃度的33%,因而有67%的疫苗活性喪 失。
已經(jīng)描述了本發(fā)明，認為本發(fā)明在應用領域具有新穎性，因而請求 專利保護權利要求書的內容。
權利要求
1. 用于大規(guī)模接種系統(tǒng)的活抗原的疫苗穩(wěn)定化制劑，其特征在于它包含緩沖溶液和還原劑。
2. 如權利要求1所述的用于大規(guī)模接種系統(tǒng)的活抗原的疫苗穩(wěn)定 化制劑，其特征在于所述緩沖溶液由pH穩(wěn)定劑和水硬度螯合劑制成。
3. 如權利要求1和2所述的用于大規(guī)^莫接種系統(tǒng)的活抗原的疫苗 穩(wěn)定化制劑，其特征在于所述pH穩(wěn)定劑是下列化合物之一磷酸鹽、 琥珀酸鹽、碳酸氫鹽、醋酸鹽和乳酸鹽等；優(yōu)選磷酸二氫鉀和磷酸氫二 鉀。
4. 如權利要求1和2所述的用于大規(guī)模接種系統(tǒng)的活抗原的疫苗 穩(wěn)定化制劑，其特征在于所述水螯合劑是下列化合物之一乙二胺四乙 酸(EDTA)單鈉鹽、乙二胺四乙酸(EDTA) 二鈉鹽、乙二胺四乙酸(EDTA)三鈉鹽、乙二胺四乙酸(EDTA)四鈉鹽等；優(yōu)選乙二胺四乙 酸(EDTA) 二鈉鹽。
5. 如權利要求1所述的用于大規(guī)模接種系統(tǒng)的活抗原的疫苗穩(wěn)定 化制劑，其特征在于所述還原劑是下列化合物之一硫代硫酸鈉、焦亞^琉酸鈉、亞碌u酸氫鈉、亞硫酸鈉、二氧化好u、亞碌u酸氫銨和碌u代碌u酸銨等，優(yōu)選硫代硫酸鈉。
6. 如權利要求1 ~ 5所述的用于大規(guī)模接種系統(tǒng)的活抗原的疫苗穩(wěn) 定化制劑，其特征在于可任選地加入下列化合物之一或其任意組合a) 水溶性鹽，如鹽酸鹽、氫碘酸鹽、碳酸鹽、碳酸氫鹽、磷酸鹽、 碘酸鹽、氯酸鹽、氫溴酸鹽、溴酸鹽、氬氟酸鹽、硝酸鹽、亞硝酸鹽、 氬硫酸鹽、硫酸鹽和亞硫酸鹽等；優(yōu)選氯化鈉，以提供必需的滲透壓來 保持病毒結構和細菌外壁穩(wěn)定；b) 碳水化合物，如葡萄糖、右旋糖、乳糖、蔗糖、甘露糖和果糖 等；優(yōu)選乳糖，來保護病毒或細菌結構免受家禽消化道不利條件的影響；c) 食品級著色劑，優(yōu)選亮藍色著色劑，為使用者提供一種可視的確 認手段來確定應用穩(wěn)定劑的時刻以及接受該制劑的動物；d)食品級抗?jié)駝?，如二氧化硅、硬脂?丐、硬脂酸鎂、磷酸4丐、 磷酸鎂、氧化鎂、硅酸4丐、硅酸鎂、硅鋁酸鈉、硅酸鋁酸4丐等；優(yōu)選二 氧化硅和硬脂酸鎂，以防止混合物在接觸環(huán)境時因具有吸濕性而濕潤。
7. 如權利要求1 ~ 6所述的用于大規(guī)模接種系統(tǒng)的活抗原的疫苗穩(wěn) 定化制劑，其特征在于所述乙二胺四乙酸(EDTA) 二鈉鹽的濃度范圍 為0.03% ~ 34.19%,所述磷酸二氬鉀的濃度范圍為0.03% ~ 34.48%,所 述磷酸氫二鉀的濃度范圍為0.03%~ 56.07%,所述硫代硫酸鈉的濃度范 圍為0.03%- 33.73%,所述氯化鈉的濃度范圍為0.03% ~ 35.91%,所述 乳糖的濃度范圍為0.03%~51.02%，所述二氧化硅的濃度范圍為 0.03%~5°/。，所述硬脂酸鎂的濃度范圍為0.03%~5%，所述亮藍著色劑 的濃度范圍為0.03% ~ 44.25%。
8. 如權利要求7所述的用于大規(guī)模接種系統(tǒng)的活抗原的疫苗穩(wěn)定 化制劑，其特征在于下列物質的最佳濃度分別為所述乙二胺四乙酸(EDTA) 二鈉鹽為3.75%,所述磷酸二氫鉀為5%，所述磷酸氫二鉀為 41.25%,所述硫代硫酸鈉為1.75%,所述氯化鈉為10.75%,所述乳糖 為28%，所述二氧化硅為1 %，所述硬脂酸鎂為1 %,所述亮藍著色劑 為7.50 %。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于在動物蛋白質生產過程中使用的大規(guī)模給藥和接種系統(tǒng)的活抗原的疫苗穩(wěn)定化制劑。本發(fā)明包括一種形式為能夠溶于水中的粉末或液體的產品，它是由有機和無機來源的化合物的均勻混合物形成的。本發(fā)明能夠用于在接種時穩(wěn)定水的關鍵理化參數(shù)(pH、硬度和消毒劑的存在)，從而減少接種時由環(huán)境暴露所造成的疫苗的微生物和病毒效價損失。本發(fā)明的制劑預期用于飲用水給藥和接種系統(tǒng)以及噴霧給藥和接種系統(tǒng)。
文檔編號A61K39/12GK101291689SQ200580051850
公開日2008年10月22日 申請日期2005年9月1日 優(yōu)先權日2005年9月1日
發(fā)明者若澤·路易斯·努諾·阿雅拉 申請人:若澤·路易斯·努諾·阿雅拉