專利名稱：一種含有白花蛇舌草凍干粉針劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及利用植物材料的提取物所制成的藥物制劑及其制備方法，更具體地說是以白花蛇舌草提取物所制成的凍干粉針劑及其制備方法，屬于中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
中藥材白花蛇舌草屬茜草科一年生草本植物，白花蛇舌草--Oldenlan-diadiffusa.(Willd.)Roxd.的全草。別名蛇舌草，廣泛分布于我國長江以南地區(qū)，生于田邊、園地和曠野，含有豐富的有機鍺、黃酮、多酚、免疫多糖、熊果酸等的化合物。藥材性狀全草纏繞成團塊狀，灰綠色或灰褐色，莖纖弱，圓柱形，有分枝。葉對生，近無柄，常皺縮、破碎或脫落，完整葉展平后葉片線形，長1～2厘米或過之；托葉長0.1厘米左右?；ɑ蜉艄紊~腋，花白色，蒴果小，扁球形。氣微，味微苦。以葉多、色灰綠者為佳。性味和功用性寒，味微苦，微甘，涼，歸心、肝、脾經(jīng)。
白花蛇舌草以全草供藥用，具有清熱解毒、利尿消腫、活血止痛的功能。主治惡性腫瘤、闌尾炎、肝炎、呼吸道感染、支氣管炎、扁桃體炎、喉炎、肺炎、膽囊炎、闌尾炎、泌尿系統(tǒng)感染、盆腔炎、附件炎及手術(shù)后感染等癥；外用治瘡癤癰腫、毒蛇咬傷?，F(xiàn)代中醫(yī)臨床用于治療胃癌、食管癌、腸癌、子宮癌、鼻咽癌等多種癌癥。
現(xiàn)今市場上含有白花蛇舌草的藥劑較多，比如根據(jù)部頒藥品標準WS3-B-3176-98中給出的制備方法制備而成的白花蛇舌草水針劑，具有清熱解毒，利濕消腫作用，用于治療濕熱蘊毒所致的呼吸道感染，扁桃體炎、肺炎、膽囊炎、闌尾炎、癰癤膿腫及手術(shù)后感染等疾病，亦可用于癌癥輔助治療的純中藥水針劑，經(jīng)臨床驗證，療效確切，是臨床和家庭用于治療此類病癥的常用藥物。
由于現(xiàn)有水針劑受制備技術(shù)限制及中藥成份復雜性的影響，中藥水針劑往往容易產(chǎn)生急性過敏反應或不良反應，久置易沉淀，注射時增加疼痛等缺點。并且水針劑在使用過程中也多有不便1、純度低、劑量不準確；2、在實際操作需多抽用液體，制劑極易感染熱源或被細菌污染；3、在實際臨床中，多種病癥要求減少病人輸液量，而水針劑則無法解決；4、在寒冷季節(jié)，特別是在北方及高寒地區(qū)的運輸及儲藏均存在不便之處；5、液體制劑破損，對包裝及內(nèi)包裝極易造成交叉污染；6、應用范圍較窄。
另外，大多數(shù)藥物的口服制劑，比如白花蛇舌草的口服制劑，均存在純度低、副作用大、溶散時限長、溶出度低、吸收率差、肝腸首過效應和生物利用度較低等問題，從而影響藥效的發(fā)揮，也直接影響著治療效果。同時，常規(guī)的口服劑型，在制備過程中常會產(chǎn)生較大的粉塵污染，一定程度上會對工作人員的身體造成危害，同時也會給環(huán)境造成一定的污染。常規(guī)口服制劑的生產(chǎn)工藝也較復雜，生產(chǎn)成本較高，從而使患者的用藥成本也隨之提高，不利于提高廣大患者的就醫(yī)能力，亦不利于提高社會的總體健康水平。
凍干粉針劑自使用以來，因其具有儲存時間長、使用方便等諸多優(yōu)點，深受制藥廠商、醫(yī)院的信賴。但并非所原藥都適宜做成粉針劑，且制備工藝、制備技術(shù)等較為復雜，所以現(xiàn)今市場上還未有白花蛇舌草提取物的凍干粉針劑面世。經(jīng)申請人檢索，只是目前有二個含有白花蛇舌草粉針劑的專利申請公開，申請?zhí)枮?00510042044.1和200510055292.X。雖然與本發(fā)明現(xiàn)較為相似，但本發(fā)明不僅解決了白花蛇舌草提取物的提取、粉針劑制備等問題，而且因本發(fā)明的提取、制備方法的特殊性，使得本粉針劑的有效成分含量、質(zhì)量穩(wěn)定性、治療效果、使用效果等方面都更勝一籌。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種有效成分含量更高、穩(wěn)定性更好、溶解速度更快、治療效果更優(yōu)的含有白花蛇舌草提取物的凍干粉針劑。
本發(fā)明的另一目的在于提供一種含有白花蛇舌草提取物凍干粉針劑的制備方法。
本發(fā)明凍干粉針劑藥物組分的用量是經(jīng)過發(fā)明人進行大量摸索總結(jié)得出的，各組分用量在下述重量份范圍內(nèi)都具有較好的療效一、主料白花蛇舌草提取物20-140份優(yōu)選白花蛇舌草提取物 28份上述提取物可采用如下方法進行制備取洗凈、干燥后的白花蛇舌草1000g，粉碎成20-40粗粉，用70-90％，優(yōu)選80％乙醇2000ml作溶劑，加熱回流提取3-5次，優(yōu)選4次，每次1-2h，優(yōu)選1.5h，合并提取液，冷藏8-12小時，離心，收集上清液，加入到聚酰胺樹脂柱中，調(diào)節(jié)流速為2-4ml/min，優(yōu)選3ml/min，用蒸餾水洗去雜質(zhì)，以70-90％，優(yōu)選80％乙醇為流動相解吸附，回收乙醇，用40-60％硫酸溶液調(diào)節(jié)PH值至2-4，靜置8-12小時，濾過，濾液再用30-50％NaOH溶液調(diào)PH值至中性，加入70-90％，優(yōu)選80％乙醇1000-3000ml，優(yōu)選2000ml，冷藏8-12小時，濾過，濾液減壓濃縮至200-400ml，優(yōu)選300ml，每次用2-8％，優(yōu)選5％碳酸鈉溶液500ml加熱，反復溶解4-6次，優(yōu)選5次，趁熱過濾，濾液加鹽酸，調(diào)節(jié)PH值為1-3，放冷濾取析出的沉淀，真空干燥即可。其中白花蛇舌草提取物以蘆丁(C27H30O16)計含5-8％總黃酮，優(yōu)選含7.1％總黃酮。
二、輔料甘露醇 80-200份吐溫-8020-100份亞硫酸氫鈉 1-6份滅菌注射用水 適量優(yōu)選甘露醇 150份吐溫-8040份亞硫酸氫鈉 2份滅菌注射用水 適量本發(fā)明藥物凍干粉針劑的工藝制備將主輔料精確稱定，攪拌使之全部溶解完全，加0.1-1％，優(yōu)選0.5％針用活性碳，充分攪拌，用30-50％，優(yōu)選40％氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)PH值為6.0-7.0，優(yōu)選PH值為6.5，用0.4μ和0.22μ的微孔濾膜脫碳過濾和除菌過濾、分裝，半加塞后轉(zhuǎn)入凍干箱進行冷凍干燥。
將放入冷凍干燥箱中的濾液溫度迅速降至-30--55℃后，優(yōu)選-42℃，形成冷凍塊，啟動真空泵抽真空，在5-10Pa，優(yōu)選8Pa的條件下，使冷凍塊的溫度升至-25--32℃，優(yōu)選-28℃，以0.5-1.5℃/1.5小時，優(yōu)選1.0℃/1.5小時的升溫速度升至-22--15℃后，優(yōu)選為-18℃，再以3-5℃/小時，優(yōu)選4℃/小時的升溫速度升至25-40℃，優(yōu)選為32℃，在25-40℃的溫度下，優(yōu)選32℃保溫5-20小時，優(yōu)選13小時，使凍干粉針劑所含的水份為白花蛇舌草提取物、輔料總重量的1-6％，優(yōu)選3.5％，即可出機軋蓋。
所得制品規(guī)格為含總黃酮1-11.2mg/支。
本發(fā)明藥物凍干粉針劑符合注射液檢查標準，使用安全，性質(zhì)穩(wěn)定，檢查結(jié)果如下PH值檢查取凍干粉，加注射用水，配制成注射液，PH值為6.0-7.0。
澄明度檢查取凍干粉，加注射用水，配制成注射液，取樣，目視，未見異物。
細菌內(nèi)毒素測定依照中國藥典2000年版二部附錄XI E進行檢查，本發(fā)明注射液每1mL中含細菌內(nèi)毒素的量小于5EU。
異常毒性測定依照中國藥典2000年版二部附錄XI C靜脈注射法檢查，未見異常。
蛋白質(zhì)檢查取凍干粉，加注射用水，配制成注射液。取1ml，加新鮮配制的30％磺基水楊酸試液1ml，混合放置5min，未出現(xiàn)渾濁。
急性毒性試驗小鼠的LD50(半數(shù)致死量)為129±0.15mg/kg體量。
慢性毒性試驗給各實驗組鼠按9mg/kg、12mg/kg的劑量連續(xù)給藥90天后，處死各組實驗小鼠，檢查其血小板、血細胞、心功能、肝腎功能及組織病理學檢查，無異常情況發(fā)生。
本發(fā)明藥物凍干粉針劑穩(wěn)定性測試結(jié)果良好。
本發(fā)明藥物凍干粉針劑具有清熱解毒，利濕消腫，用于濕熱蘊毒所致的呼吸道感染、扁桃體炎、肺炎、膽囊炎、闌尾炎、癰癤膿腫及手術(shù)后感染，亦可用于癌癥輔助治療。
本發(fā)明藥物的施用量可根據(jù)用藥途徑、服藥者年齡、體重等變化，其日劑量可以是0.01-12mg/kg體重，優(yōu)選1-6mg/kg體重，可以一次或多次施用。
本發(fā)明藥物的凍干粉針劑是白花蛇舌草提取物，再加入其它輔料組成。輔料可以是藥劑學上可接受的各種輔料。由于白花蛇舌草提取物具有清熱解毒，利濕消腫作用，所以其組合物的凍干粉針劑是以冷凍干燥原理制備的注射用無菌粉末，為凍干粉針劑型，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具備以下優(yōu)點1、制備工藝簡單，過程易于控制；2、溶解速度快，純度高，副作用小，療效確切；3、穩(wěn)定性好，有效期長，物理穩(wěn)定性不受溫度影響；4、劑量準確并可視情調(diào)整，能做到準確給藥；5、成品制劑為固體制劑，體積小，便于運輸和保存；6、克服了水針劑久置沉淀的缺點，能減輕注射時病人的疼痛感；7、能準確控制量，降低了病人的輸液量，使許多臨床上要求液體量的病種(如心衰等)得到治療，減輕了病人負擔；8、解決了破損后產(chǎn)品的交叉污染問題；9、解決了北方和寒冷地區(qū)冬季的運輸及儲藏問題；10、應用范圍廣，適用癥多，還可提供靜脈滴注給藥。
具體實施例方式下面的實施例可以使本專業(yè)的技術(shù)人員全面、更好地理解本發(fā)明，但不可以任何方式限制本發(fā)明實施例1 本發(fā)明藥物凍干粉針劑的制備一、主料白花蛇舌草提取物28mg(含2mg總黃酮)其制備可采用如下方法取洗凈、干燥后的白花蛇舌草1000g，粉碎成30目粗粉，用80％乙醇2000ml作溶劑，加熱回流提取4次，每次1.5h。合并提取液，冷藏10小時，離心，收集上清液，加入到聚酰胺樹脂柱中，調(diào)節(jié)流速為3ml/min，用蒸餾水洗去雜質(zhì)，以80％乙醇為流動相解吸附，回收乙醇，用50％硫酸溶液調(diào)節(jié)PH值至3，靜置10小時，濾過，濾液再用40％NaOH溶液調(diào)PH值至中性，加入80％乙醇2000ml，冷藏10小時，濾過，濾液減壓濃縮至300ml，每次用5％碳酸鈉溶液500ml加熱，反復溶解5次，趁熱過濾，濾液加鹽酸，調(diào)節(jié)PH值為2，放冷濾取析出的沉淀，真空干燥，即得白花蛇舌草提取物4g，為淡黃色粉末。
《含量測定》對照品溶液的制備精密稱取蘆丁標準品(中國藥品生物制品鑒定所提供)10mg，置50ml量瓶中，加適量70％的乙醇，置水浴上微熱使溶解，放冷，加70％的乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含無水蘆丁0.2mg)。
標準曲線的制備 精密量取標準液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0與6.0ml，分別置25ml量瓶中，各加70％的乙醇至6ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置15分鐘，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，在507nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標、濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
測定法 精密量取本品1克，用50ml水洗脫，棄去洗脫液，用70％乙醇洗脫，收集洗脫液約25ml，置25ml量瓶中，加70％的乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取5ml，置甲、乙兩個25ml量瓶中，甲瓶中加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，在甲、乙兩瓶中各加氫氧化鈉試液10ml，再加乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15分鐘，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，以乙瓶為空白，在507nm的波長處測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量，為2.8mg/ml。
經(jīng)計算，本品每1克中含總黃酮以蘆丁(C27H30O16)計為71mg，含量為7.1％。
二、輔料甘露醇150mg吐溫-80 40mg亞硫酸氫鈉2mg滅菌注射用水 適量白花蛇草凍干粉針劑的工藝制備將主輔料精確稱定，攪拌使之全部溶解完全，加0.5％針用活性碳，充分攪拌，用40％氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)PH值為6.5，用0.4μ和0.22μ的微孔濾膜脫碳過濾和除菌過濾，分裝，半加塞后轉(zhuǎn)入凍干箱進行冷凍干燥。
使放入冷凍干燥箱中已經(jīng)過濾后的濾液的溫度迅速降至-42℃后，形成冷凍塊，啟動真空泵抽真空，在8Pa的條件下，使冷凍塊的溫度升至-28℃，以1.0℃/1.5小時的升溫速度升至-18℃后，再以4℃/小時的升溫速度升至32℃，在32℃的溫度下保溫13小時，使凍干粉針劑所含的水份為白花蛇舌草提取物、輔料總重量的3.5％，即可出機軋蓋。
所得制品規(guī)格總黃酮含量為2mg/支。
實施例2 本發(fā)明藥物凍干粉針劑的制備一、主料白花蛇舌草提取物56mg(含4mg總黃酮)其制備可采用如下方法取洗凈、干燥后的白花蛇舌草1000g，粉碎成30目粗粉，用80％乙醇2000ml作溶劑，加熱回流提取4次，每次1.5h。合并提取液，冷藏10小時，離心，收集上清液，加入到聚酰胺樹脂柱中，調(diào)節(jié)流速為3ml/min，用蒸餾水洗去雜質(zhì)，以80％乙醇為流動相解吸附，回收乙醇，用50％硫酸溶液調(diào)節(jié)PH值至3，靜置10小時，濾過，濾液再用40％NaOH溶液調(diào)PH值至中性，加入80％乙醇2000ml，冷藏10小時，濾過，濾液減壓濃縮至300ml，每次用5％碳酸鈉溶液500ml加熱，反復溶解5次，趁熱過濾，濾液加鹽酸，調(diào)節(jié)PH值為2，放冷濾取析出的沉淀，真空干燥，即得白花蛇舌草提取物4g，為淡黃色粉末。
《含量測定》對照品溶液的制備 標準曲線的制備同實施例1中的標準曲線制備。
測定法 精密量取本品1克，用50ml水洗脫，棄去洗脫液，用70％乙醇洗脫，收集洗脫液約25ml，置25ml量瓶中，加70％的乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取5ml，置甲、乙兩個25ml量瓶中，甲瓶中加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，在甲、乙兩瓶中各加氫氧化鈉試液10ml，再加乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15分鐘，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，以乙瓶為空白，在507nm的波長處測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量，為2.8mg/ml。
經(jīng)計算，本品每1克中含總黃酮以蘆丁(C27H30O16)計為71mg，含量為7.1％。
二、輔料甘露醇 200mg吐溫-80 80mg亞硫酸氫鈉 4mg滅菌注射用水適量白花蛇草凍干粉針劑的工藝制備將主輔料精確稱定，攪拌使之全部溶解完全，加0.5％針用活性碳，充分攪拌，用40％氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)PH值為6.5，用0.4μ和0.22μ的微孔濾膜脫碳過濾和除菌過濾，分裝，半加塞后轉(zhuǎn)入凍干箱進行冷凍干燥。
使放入冷凍干燥箱中已經(jīng)過濾后的濾液的溫度迅速降至-42℃后，形成冷凍塊，啟動真空泵抽真空，在8Pa的條件下，使冷凍塊的溫度升至-28℃，以1.0℃/1.5小時的升溫速度升至-18℃后，再以4℃/小時的升溫速度升至32℃，在32℃的溫度下保溫13小時，使凍干粉針劑所含的水份為白花蛇舌草提取物、輔料總重量的3.5％，即可出機軋蓋。
所得制品規(guī)格總黃酮含量為4mg/支。
實施例3 本發(fā)明藥物凍干粉針劑的制備一、主料白花蛇舌草提取物20mg(含1mg總黃酮)其制備可采用如下方法取洗凈、干燥后的白花蛇舌草1000g，粉碎成40目粗粉，用70％乙醇2000ml作溶劑，加熱回流提取3次，每次1h。合并提取液，冷藏8小時，離心，收集上清液，加入到聚酰胺樹脂柱中，調(diào)節(jié)流速為4ml/min，用蒸餾水洗去雜質(zhì)，以70％乙醇為流動相解吸附，回收乙醇，用40％硫酸溶液調(diào)節(jié)PH值至4，靜置8小時，濾過，濾液再用30％NaOH溶液調(diào)PH值至中性，加入70％乙醇1000ml，冷藏8小時，濾過，濾液減壓濃縮至200ml，每次用2％碳酸鈉溶液500ml加熱，反復溶解4次，趁熱過濾，濾液加鹽酸，調(diào)節(jié)PH值為1，放冷濾取析出的沉淀，真空干燥，即得白花蛇舌草提取物3g，為淺黃色粉末。
《含量測定》對照品溶液的制備 標準曲線的制備同實施例1中的標準曲線制備。
測定法 精密量取本品1克，用50ml水洗脫，棄去洗脫液，用70％乙醇洗脫，收集洗脫液約25ml，置25ml量瓶中，加70％的乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取5ml，置甲、乙兩個25ml量瓶中，甲瓶中加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，在甲、乙兩瓶中各加氫氧化鈉試液10ml，再加乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15分鐘，照分光光度法(附錄VB)，以乙瓶為空白，在507nm的波長處測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量，為2.0mg/ml。
經(jīng)計算，本品每1克中含總黃酮以蘆丁(C27H30O16)計為50mg，含量為5％。
二、輔料甘露醇 80mg吐溫-80 20mg亞硫酸氫鈉 1mg滅菌注射用水適量工藝制備將主輔料精確稱定，攪拌使之全部溶解完全，加0.1％針用活性碳，充分攪拌，用50％氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)PH值為6.0，用0.4μ和0.22μ的微孔濾膜脫碳過濾和除菌過濾，分裝，半加塞后轉(zhuǎn)入凍干箱進行冷凍干燥使放入冷凍干燥箱中已經(jīng)過濾后的濾液的溫度迅速降至-30℃后，形成冷凍塊，啟動真空泵抽真空，在10Pa的條件下，使冷凍塊的溫度升至-25℃，以1.5℃/1.5小時的升溫速度升至-22℃后，再以5℃/小時的升溫速度升至25℃，在25℃的溫度下保溫5小時，使凍干粉針劑所含的水份為白花蛇舌草提取物、輔料總重量的6％，即可出機軋蓋。
所得制品規(guī)格含總黃酮為1.0mg/支。
實施例4 含有本發(fā)明提取物凍干粉針劑的制備一、主料白花蛇舌草提取物140mg(含11.2mg總黃酮)
其制備可采用如下方法取洗凈、干燥后的白花蛇舌草1000g，粉碎成20目粗粉，用90％乙醇2000ml作溶劑，加熱回流提取5次，每次2h。合并提取液，冷藏12小時，離心，收集上清液，加入到聚酰胺樹脂柱中，調(diào)節(jié)流速為2ml/min，用蒸餾水洗去雜質(zhì)，以90％乙醇為流動相解吸附，回收乙醇，用60％硫酸溶液調(diào)節(jié)PH值至2，靜置12小時，濾過，濾液再用50％NaOH溶液調(diào)PH值至中性，加入90％乙醇3000ml，冷藏12小時，濾過，濾液減壓濃縮至400ml，每次用8％碳酸鈉溶液500ml加熱，反復溶解6次，趁熱過濾，濾液加鹽酸，調(diào)節(jié)PH值為3，放冷濾取析出的沉淀，真空干燥，即得白花蛇舌草提取物5g，為淺黃色粉末。
《含量測定》對照品溶液的制備 標準曲線的制備同實施例1中的標準曲線制備。
測定法 精密量取本品1克，用50ml水洗脫，棄去洗脫液，用70％乙醇洗脫，收集洗脫液約25ml，置25ml量瓶中，加70％的乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取5ml，置甲、乙兩個25ml量瓶中，甲瓶中加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，在甲、乙兩瓶中各加氫氧化鈉試液10ml，再加乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15分鐘，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，以乙瓶為空白，在507nm的波長處測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量，為3.2mg/ml。
經(jīng)計算，本品每1克中含總黃酮以蘆丁(C27H30O16)計為80mg，含量為8％。
二、輔料甘露醇 150mg吐溫-8040mg亞硫酸氫鈉 2mg滅菌注射用水 適量工藝制備將主輔料精確稱定，攪拌使之全部溶解完全，加1％針用活性碳，充分攪拌，用30％氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)PH值為7.0，用0.4μ和0.22μ的微孔濾膜脫碳過濾和除菌過濾，分裝，半加塞后轉(zhuǎn)入凍干箱進行冷凍干燥。
將放入冷凍干燥箱中的濾液溫度迅速降至-55℃后，形成冷凍塊，啟動真空泵抽真空，在5Pa的條件下，使冷凍塊的溫度升至-32℃，以0.5℃/1.5小時的升溫速度升至-15℃后，再以3℃/小時的升溫速度升至40℃，在40℃的溫度下保溫20小時，使凍干粉針劑所含的水份為白花蛇舌草提取物、輔料總重量的1％，即可出機軋蓋。
所得制品規(guī)格含總黃酮為11.2mg/支。
實施例5 本發(fā)明藥物凍干粉針劑的制備一、主料白花蛇舌草提取物20mg(含1.6mg總黃酮)其制備可采用如下方法取洗凈、干燥后的白花蛇舌草1000g，粉碎成20目粗粉，用90％乙醇2000ml作溶劑，加熱回流提取5次，每次2h。合并提取液，冷藏12小時，離心，收集上清液，加入到聚酰胺樹脂柱中，調(diào)節(jié)流速為2ml/min，用蒸餾水洗去雜質(zhì)，以90％乙醇為流動相解吸附，回收乙醇，用60％硫酸溶液調(diào)節(jié)PH值至2，靜置12小時，濾過，濾液再用50％NaOH溶液調(diào)PH值至中性，加入90％乙醇3000ml，冷藏12小時，濾過，濾液減壓濃縮至400ml，每次用8％碳酸鈉溶液500ml加熱，反復溶解6次，趁熱過濾，濾液加鹽酸，調(diào)節(jié)PH值為3，放冷濾取析出的沉淀，真空干燥，即得白花蛇舌草提取物5g，為淺黃色粉末。
《含量測定》對照品溶液的制備 標準曲線的制備同實施例1中的標準曲線制備。
測定法 精密量取本品1克，用50ml水洗脫，棄去洗脫液，用70％乙醇洗脫，收集洗脫液約25ml，置25ml量瓶中，加70％的乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取5ml，置甲、乙兩個25ml量瓶中，甲瓶中加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，在甲、乙兩瓶中各加氫氧化鈉試液10ml，再加乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15分鐘，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，以乙瓶為空白，在507nm的波長處測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量，為3.2mg/ml。
經(jīng)計算，本品每1克中含總黃酮以蘆丁(C27H30O16)計為80mg，含量為8％。
二、輔料甘露醇 200mg吐溫-80 20mg亞硫酸氫鈉 6mg滅菌注射用水適量工藝制備將主輔料精確稱定，攪拌使之全部溶解完全，加0.1％針用活性碳，充分攪拌，用50％氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)PH值為6.0，用0.4μ和0.22μ的微孔濾膜脫碳過濾和除菌過濾，分裝，半加塞后轉(zhuǎn)入凍干箱進行冷凍干燥使放入冷凍干燥箱中已經(jīng)過濾后的濾液的溫度迅速降至-30℃后，形成冷凍塊，啟動真空泵抽真空，在10Pa的條件下，使冷凍塊的溫度升至-25℃，以1.5℃/1.5小時的升溫速度升至-22℃后，再以5℃/小時的升溫速度升至25℃，在25℃的溫度下保溫5小時，使凍干粉針劑所含的水份為白花蛇舌草提取物、輔料總重量的6％，即可出機軋蓋。
所得制品規(guī)格含總黃酮為1mg/支。
實施例6 含有本發(fā)明提取物凍干粉針劑的制備一、主料白花蛇舌草提取物140mg(含7.0mg總黃酮)其制備可采用如下方法取洗凈、干燥后的白花蛇舌草1000g，粉碎成40目粗粉，用70％乙醇2000ml作溶劑，加熱回流提取3次，每次1h。合并提取液，冷藏8小時，離心，收集上清液，加入到聚酰胺樹脂柱中，調(diào)節(jié)流速為4ml/min，用蒸餾水洗去雜質(zhì)，以70％乙醇為流動相解吸附，回收乙醇，用40％硫酸溶液調(diào)節(jié)PH值至4，靜置8小時，濾過，濾液再用30％NaOH溶液調(diào)PH值至中性，加入70％乙醇1000ml，冷藏8小時，濾過，濾液減壓濃縮至200ml，每次用2％碳酸鈉溶液500ml加熱，反復溶解4次，趁熱過濾，濾液加鹽酸，調(diào)節(jié)PH值為1，放冷濾取析出的沉淀，真空干燥，即得白花蛇舌草提取物3g，為淺黃色粉末。
《含量測定》對照品溶液的制備 標準曲線的制備同實施例1中的標準曲線制備。
測定法 精密量取本品1克，用50ml水洗脫，棄去洗脫液，用70％乙醇洗脫，收集洗脫液約25ml，置25ml量瓶中，加70％的乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取5ml，置甲、乙兩個25ml量瓶中，甲瓶中加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，在甲、乙兩瓶中各加氫氧化鈉試液10ml，再加乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15分鐘，照分光光度法(附錄VB)，以乙瓶為空白，在507nm的波長處測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量，為2.0mg/ml。
經(jīng)計算，本品每1克中含總黃酮以蘆丁(C27H30O16)計為50mg，含量為5％。
二、輔料甘露醇 80mg吐溫-80 100mg亞硫酸氫鈉 1mg滅菌注射用水適量工藝制備將主輔料精確稱定，攪拌使之全部溶解完全，加1％針用活性碳，充分攪拌，用30％氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)PH值為7.0，用0.4μ和0.22μ的微孔濾膜脫碳過濾和除菌過濾，分裝，半加塞后轉(zhuǎn)入凍干箱進行冷凍干燥。
將放入冷凍干燥箱中的濾液溫度迅速降至-55℃后，形成冷凍塊，啟動真空泵抽真空，在5Pa的條件下，使冷凍塊的溫度升至-32℃，以0.5℃/1.5小時的升溫速度升至-15℃后，再以3℃/小時的升溫速度升至40℃，在40℃的溫度下保溫20小時，使凍干粉針劑所含的水份為白花蛇舌草提取物、輔料總重量的1％，即可出機軋蓋。
所得制品規(guī)格含總黃酮為7.0mg/支。
以下通過試驗例進一步闡述本發(fā)明凍干粉針劑的有益效果試驗例1 溶解速度對比評價試驗試驗材料供試品A 取本發(fā)明實施例1所制備的含有白花蛇舌草提取物的凍干粉針劑，規(guī)格為2mg/支。
供試品B 以申請?zhí)?00510042044.1中提供的實施例1方法得到的白花蛇舌草粉針劑(珠海生物化學制藥廠實驗室提供)。
供試品C 以申請?zhí)?00510055292.X中提供的制備實施例1方法得到的白花蛇舌草粉針劑(珠海生物化學制藥廠實驗室提供)。
注射用生理鹽水(珠海生物化學制藥廠實驗室提供)試驗方法在試驗環(huán)境25±2℃濕度60±5％情況下，對三種粉針劑進行溶解速度對比試驗，統(tǒng)計結(jié)果如下
表1 三種粉針劑溶解速度對比情況統(tǒng)計表(試驗環(huán)境25±2℃濕度60±5％)

試驗結(jié)果本發(fā)明凍干粉針劑，在同等條件下，溶解速度更快，更方便使用。
本發(fā)明的其它實施例2、3、4、5、6所得到的產(chǎn)品，采用上述方法進行試驗，得到基本相同的結(jié)果。
試驗例2 加速穩(wěn)定性對比評價試驗及有效成分含量對比試驗材料供試品A 取本發(fā)明實施例2所制備的含有白花蛇舌草提取物的凍干粉針劑，規(guī)格為4mg/支。
供試品B 以申請?zhí)?00510042044.1中提供的實施例2方法得到的白花蛇舌草粉針劑(珠海生物化學制藥廠實驗室提供)。
供試品C 以申請?zhí)?00510055292.X中提供的制備實施例2方法得到的白花蛇舌草粉針劑(珠海生物化學制藥廠實驗室提供)。
試驗方法在試驗環(huán)境50±2℃，濕度80±5％情況下，對三種粉針劑進行加速穩(wěn)定性評價對比試驗，統(tǒng)計結(jié)果如下表2 三種粉針劑加速穩(wěn)定性試驗統(tǒng)計表(試驗環(huán)境50±2℃濕度80±5％)

試驗結(jié)果通過上述加速穩(wěn)定性對比實驗，我們可以得出本發(fā)明凍干粉針劑與先前公開的二個粉針劑相比，不僅含量上大大超過，而且在經(jīng)過加速穩(wěn)定性對比試驗后，其有效成分保留了90％以上，而另兩個粉針劑有效成分則只保留62％、73％。因此，足以證明按照本發(fā)明制備方法得到的粉針劑穩(wěn)定性更好、有效成分含量更高。
本發(fā)明的其它實施例1、3、4、5、6所得到的產(chǎn)品，采用上述方法進行試驗，得到基本相同的結(jié)果。
試驗例3 對二甲苯引起小鼠耳殼炎癥的對比評價試驗試驗材料供試品A 取本發(fā)明實施例3所制備的含有白花蛇舌草提取物的凍干粉針劑，規(guī)格為1mg/支。
供試品B 以申請?zhí)?00510042044.1中提供的實施例3方法得到的白花蛇舌草粉針劑(珠海生物化學制藥廠實驗室提供)。
供試品C 以申請?zhí)?00510055292.X中提供的制備實施例3方法得到的白花蛇舌草粉針劑(珠海生物化學制藥廠實驗室提供)。
注射用生理鹽水(珠海生物化學制藥廠實驗室提供)試驗動物昆明種小鼠(20±2)g，雌雄兼用(珠海生物化學制藥廠動物房提供)。
試驗方法小鼠30只，分為3組，每組10只，將三種供試品用注射用生理鹽水溶解，按照3mg/kg給藥劑量給小鼠尾靜脈給藥，每天一次，給藥3天，生理鹽水組給藥容量0.5ml/只，每天1次，給藥3天，于末次給藥后1h，取二甲苯0.05ml/只均勻涂于左耳前后兩面致炎，15min后，處死動物，剪下耳殼，兩耳重疊，用直徑為8mm打孔器取圓片，稱量，左右耳重之差作為腫脹度，求出給藥組的腫脹抑制率。結(jié)果見表3。
表3 對二甲苯引起小鼠耳殼炎癥的影響

注與注射用生理鹽水比較**P＜0.01，與陽性對照組比較[*]P＜0.05試驗結(jié)果本發(fā)明粉針劑對由對二甲苯引起小鼠耳殼炎癥有更好的抑制效果。
本發(fā)明的其它實施例1、2、4、5、6所得到的產(chǎn)品，采用上述方法進行試驗，得到基本相同的效果。
試驗例4 有效期、穩(wěn)定性反應對比評價試驗試驗材料取本發(fā)明實施例4所制備的含有白花蛇舌草提取物的凍干粉針劑，規(guī)格為11.2mg/支。
試驗方法1)本發(fā)明藥物凍干粉針劑無菌粉末經(jīng)高溫(40℃、60℃、80℃)、高濕(RH92.5％、RH75％、25℃)及光照4000LX影響因素進行試驗。
試驗結(jié)果外觀性狀、澄明度、PH值、含量及無菌檢查均符合要求。
試驗方法2)本發(fā)明藥物凍干粉針劑加速試驗(40℃RH75％)留樣考察1、3、5、7、12、18個月。
試驗結(jié)果外觀性狀、澄明度、PH值、含量、及無菌檢查均符合要求。
試驗結(jié)論本發(fā)明粉針劑保存期可達3年，有效地避免了注射劑在長期貯存中發(fā)生的降解、渾濁、沉淀等現(xiàn)象，延長了白花蛇舌草藥物制劑的質(zhì)量有效期。
本發(fā)明的其它實施例1、2、3、5、6所得到的粉針劑產(chǎn)品，采用上述方法進行試驗，得到基本相同的效果。
對比例試驗材料取白花蛇舌草注射液，規(guī)格為2mg/支，吉林龍?zhí)┲扑幑煞萦邢薰咎峁?br> 試驗方法1)將白花蛇舌草注射液經(jīng)高溫(40℃、60℃、80℃)、高濕(RH92.5％、RH75％、25℃)及光照4000LX影響因素進行試驗。
試驗結(jié)果外觀性狀淡黃色、混濁。
試驗方法2)將白花蛇舌草注射液加速試驗(40℃RH75％)留樣考察1、3、5、6個月。
試驗結(jié)果6個月開始外觀變黃、混濁。
試驗結(jié)論推測白花蛇舌草注射液保存期可達2年。
試驗例5 提取物純度對比評價根據(jù)中藥部頒標準，白花蛇舌草注射液拼音名BaihuaSheshecao Zhusheye，書頁號Z17-67，標準編號WS3-B-3176-98。本品采用照流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法(附錄IO)提取，再將白花蛇舌草提取物制成滅菌水溶液。本品每1ml中含總黃酮以蘆丁(C27H30O16)計，不得少于0.25mg。
采用本發(fā)明實施例1-6中白花蛇草提取物的制備方法，每1ml中含總黃酮以蘆丁(C27H30O16)計，為1.6-3.2mg，是部頒標準的6.4-12.8倍，足以看出本發(fā)明方法制備的提取物純度高，雜質(zhì)少，副作用當然也就小。且根據(jù)不同病證、患者可以調(diào)整輔料的用量，以控制本發(fā)明藥物凍干粉針劑的活性成分含量。
權(quán)利要求
1.一種含有白花蛇舌草提取物的凍干粉針劑，其組分中主料為白花蛇舌草提取物20-140份，輔料為甘露醇80-200份、吐溫-80 20-100份、亞硫酸氫鈉1-6份、滅菌注射用水適量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種凍干粉針劑，其特征在于所述的組分中白花蛇舌草提取物28份、甘露醇150份、吐溫-80 40份、亞硫酸氫鈉2份、滅菌注射用水適量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種凍干粉針劑，其特征在于所述的組分中白花蛇舌草提取物以蘆丁C27H30O16計含5-8％總黃酮。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種凍干粉針劑，其特征在于所述的組分中白花蛇舌草提取物以蘆丁C27H30O16計含7.1％總黃酮。
5.權(quán)利要求1-4中任意一種凍干粉針劑的制備方法，其特征在于包括如下步驟A)將主輔料精確稱定，攪拌使之全部溶解完全；B)加0.1-1％針用活性碳，充分攪拌，用30-50％氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)PH值為6.0-7.0；C)用0.4μ和0.22μ的微孔濾膜脫碳過濾和除菌過濾、分裝，半加塞后轉(zhuǎn)入凍干箱進行冷凍干燥；D)將放入冷凍干燥箱中的濾液溫度迅速降至-30--55℃，形成冷凍塊；E)啟動真空泵抽真空，在5-10Pa的條件下，使冷凍塊的溫度升至-25--32℃；F)以0.5-1.5℃/1.5小時的升溫速度升至-22--15℃后，再以3-5℃/小時的升溫速度升至25-40℃；G)在25-40℃的溫度下保溫5-20小時，使凍干粉針劑所含的水份為白花蛇舌草提取物、輔料總重量的1-6％，即可。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種凍干粉針劑的制備方法，其特征在于所述的步驟B)中針用活性碳為0.5％，氫氧化鈉溶液濃度為40％，PH值為6.5。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種凍干粉針劑的制備方法，其特征在于所述的步驟D)中將放入冷凍干燥箱中的濾液溫度迅速降至-42℃，形成冷凍塊。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種凍干粉針劑的制備方法，其特征在于所述的步驟E)中啟動真空泵抽真空，在8Pa的條件下，使冷凍塊的溫度升至-28℃。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種凍干粉針劑的制備方法，其特征在于所述的步驟F)中以1.0℃/1.5小時的升溫速度升至-18℃后，再以4℃/小時的升溫速度升至32℃。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種凍干粉針劑的制備方法，其特征在于所述的步驟G)中，凍干粉針劑在32℃的溫度下保溫13小時，使其所含的水份為白花蛇舌草提取物、輔料總重量的3.5％，即可。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種白花蛇舌草凍干粉針劑及其制備方法。其粉針劑以重量份計主料為白花蛇舌草提取物20－140份，輔料為甘露醇80－200份、吐溫－80 20－100份、亞硫酸氫鈉1－6份、滅菌注射用水適量。其制備方法是將主輔料精確稱定，攪拌溶解，加0.1－1％針用活性炭，調(diào)節(jié)pH值為6.0－7.0，用0.4μ和0.22μ的微孔濾膜過濾、分裝，半加塞后轉(zhuǎn)入凍干箱，在5－10Pa的條件下，進行冷凍干燥即可。本發(fā)明凍干粉針劑克服了現(xiàn)有白花蛇草提取物藥劑有效期短、副作用大、純度低、吸收率差等缺陷。本發(fā)明凍干粉針劑用于制備治療各種炎癥及手術(shù)后感染等，亦可用于癌癥輔助治療的藥物中。
文檔編號A61P1/16GK1772089SQ200510115179
公開日2006年5月17日 申請日期2005年11月14日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月14日
發(fā)明者丁釘生 申請人:珠海經(jīng)濟特區(qū)生物化學制藥廠