專利名稱：抑制異種器官移植免疫排斥反應(yīng)的五糖抗原的合成方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及糖類物質(zhì)的合成方法，尤其涉及一種抑制異種器官移植免疫排斥反應(yīng)的五糖抗原的合成方法。
背景技術(shù)：
異種器官移植被認(rèn)為是解決器官移植中供體器官短缺的方法之一。超級(jí)免疫排斥反應(yīng)被視為異種器官移植中最具挑戰(zhàn)性的障礙。它由人體循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)一種名為anti-Gal的天然抗體特異性識(shí)別非靈長(zhǎng)目動(dòng)物器官細(xì)胞上表達(dá)的含Gal 1→3Gal-R寡糖片斷的抗原所引起，用合成的寡糖抗原來(lái)中和anti-Gal抗體是抑制超級(jí)免疫排斥反應(yīng)的可能的途徑之一。
有關(guān)研究表明，五糖Gal 1-3Gal 1-4GlcNAc 1-3Gal 1-4Glc-R是Gal抗原表位的主要組分之一[Cooper，D.K.C.；Koren，E.；Oriol，R.Immunol.Rev.1994，141，31；Galili，U.Immunol.Today 1993，14，480；Sandrin，M.S.；Vaughan，H.A.；McKenzie，I.F.C.Transplant.Rev.1994，8，134；Samuelsson，B.E.；Rydberg，L.；Breimer，M.E.；Backer，A.；Gustavsson，M.；Holgersson，J.；Karlsson，E.；Uyterwaal，A.-C.；Cairns，T.；Welsh，K.Immunol.Rev.1994，141，151.]。雖然有文獻(xiàn)報(bào)道用化學(xué)以及酶的方法對(duì)五糖抗原合成進(jìn)行了研究[Zhu，T.；Boons，G.-J.J.Chem.Soc.，Perkin Trans.1 1998，857；Gege，C.；Kinzy，W.；Schmidt，R.R.Carbohydr.Res.2000，328，459；Fang，J.；Li，J.；Chen，X.；Zhang，Y.；Wang，J.；Guo，Z.；Zhang，W.；Yu，L.；Brew，K.；Wang，P.G.J.Am.Chem.Soc.1998，120，6635.]，但文獻(xiàn)中所報(bào)道的五糖抗原的合成方法均不同程度的存在步驟較多，總收率低，不能滿足較大量寡糖樣品的需求等缺陷。本發(fā)明人在申請(qǐng)?zhí)枮?3156098.9的專利申請(qǐng)文件中公開(kāi)了該五糖抗原的“三組分一釜”的合成方法，雖然該合成方法的合成效率與現(xiàn)有技術(shù)相比有明顯提高，但該方法仍存在合成步驟較多、不夠簡(jiǎn)捷的缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種更為簡(jiǎn)捷、高效的抑制異種器官移植免疫排斥反應(yīng)的五糖抗原的合成方法。
本發(fā)明目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的一種抑制異種器官移植免疫排斥反應(yīng)的五糖抗原的合成方法，主要包括以下步驟1、將下述4種通式化合物，即通式I、II、III和IV，在同一個(gè)反應(yīng)體系中進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得到全保護(hù)五糖，將所得的全保護(hù)五糖脫去全部或部分保護(hù)基后，即得所需的五糖，其產(chǎn)品結(jié)構(gòu)式見(jiàn)通式V 通式I其中R1、R2可以是氫、芐基、硅保護(hù)基、苯甲酰基、乙?；?、氯乙?；?、丙?；蛐挛祯；?；或R1和R2一起是芐叉基；R3、R4可以是氫、芐基、烯丙基、硅保護(hù)基、苯甲?；?、乙?；⒙纫阴；⒈；蛐挛祯；籖可以是苯基、對(duì)甲基苯基、甲基、乙基、丙基或丁基。
通式II其中R5、R6可以是氫、芐基、硅保護(hù)基、苯甲?；?、乙?；?、氯乙?；?、丙?；蛐挛祯；?，或R5和R6一起是芐叉基；R7可以是氫、苯甲?；⒁阴；?、氯乙?；?、丙?；蛐挛祯；?；R是苯基、對(duì)甲基苯基、甲基、乙基、丙基或丁基。
通式III其中R8、R9可以是氫、芐基、硅保護(hù)基、烯丙基、苯甲?；⒁阴；?、氯乙?；?、丙酰基或新戊?；?；NR10是氨基，疊氮基，鄰苯二甲酰亞胺基，2’，2’，2’-三氯乙氧羰酰胺基(-NHC(O)OCH2CH2Cl3)，芐氧羰酰胺基(-NHC(O)OCH2Ph)或乙酰胺基(-NHAc)；R可以是苯基、對(duì)甲基苯基、甲基、乙基、丙基或丁基。
通式IV其中R11、R12、R13、R14、R15、R16可以是氫、芐基、硅保護(hù)基、烯丙基、苯甲?；⒁阴；?、氯乙?；?、丙?；蛐挛祯；?；或R11和R12一起是芐叉基；R17是氫、芐基；R18是氫、芐氧羰基；或N(R17)R18是疊氮基；n為1-12。
通式V其中R1、R2可以是氫、芐基、硅保護(hù)基、苯甲酰基、乙酰基、氯乙?；⒈；蛐挛祯；换騌1和R2一起是芐叉基；R3、R4可以是氫、芐基、烯丙基、硅保護(hù)基、苯甲?；?、乙?；⒙纫阴；⒈；蛐挛祯；?；R5、R6可以是氫、芐基、硅保護(hù)基、苯甲?；⒁阴；?、氯乙?；?、丙?；蛐挛祯；?，或R5和R6一起是芐叉基；R7可以是氫、苯甲?；?、乙?；⒙纫阴；?、丙酰基或新戊?；?；R8、R9可以是氫、芐基、硅保護(hù)基、烯丙基、苯甲?；?、乙?；?、氯乙?；?、丙酰基或新戊?；?；NR10是氨基，疊氮基，鄰苯二甲酰亞胺基，2’，2’，2’-三氯乙氧羰酰胺基(-NHC(O)OCH2CH2Cl3)，芐氧羰酰胺基(-NHC(O)OCH2Ph)或乙酰胺基(-NHAc)；R11、R12、R13、R14、R15、R16可以是氫、芐基、硅保護(hù)基、烯丙基、苯甲酰基、乙?；?、氯乙?；?、丙?；蛐挛祯；?；或R11和R12一起是芐叉基；R17是氫、芐基；R18是氫、芐氧羰基；或N(R17)R18是疊氮基；n為1-12。
上述合成方法中，偶聯(lián)反應(yīng)體系中所用的活化劑為N-碘代丁二酰亞胺/三氟甲磺酸(NIS/TfOH)，三氟甲磺酸化二甲基(甲基硫基)锍鹽(DMTST)，N-哌啶基苯基亞砜/三氟甲磺酸酐(BSP/Tf2O)，苯基氯化硫/三氟甲磺酸銀(PhSCl/AgOTf)以及其它活化硫醚或亞砜的試劑等；偶聯(lián)反應(yīng)所用的反應(yīng)溶劑為甲苯，二氯甲烷，氯仿，乙腈，乙醚，DMF(二甲基甲酰胺)，THF(四氫呋喃)，DME(二甲氧基乙烷)等；偶聯(lián)反應(yīng)溫度為-78℃～25℃。偶聯(lián)反應(yīng)中結(jié)構(gòu)單元的離去基團(tuán)為S-R/SOR，其中R為芳香基或烷基。
本發(fā)明五糖抗原的合成方法采用“四組分一釜”的合成方法，即選擇常用的保護(hù)基對(duì)糖結(jié)構(gòu)單元進(jìn)行合適的保護(hù)，然后將這些結(jié)構(gòu)單元用四組分“一釜合成法”進(jìn)行裝配，快速、立體選擇、高收率地得到了所需的五糖抗原系列，本發(fā)明相對(duì)于“三組分一釜”合成法，省去了一步糖基化偶聯(lián)的分離純化操作，具有更為高效、簡(jiǎn)捷的優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式
以下將結(jié)合實(shí)施例具體說(shuō)明本發(fā)明，本發(fā)明的實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，并非限定本發(fā)明的實(shí)質(zhì)。
五糖的合成說(shuō)明化合物9屬于通式化合物I的一種；化合物10屬于通式化合物II的一種；化合物3屬于通式化合物III的一種；化合物8屬于通式化合物IV的一種；五糖1屬于通式化合物V的一種。
一、化合物9(通式化合物I的一種)的合成 1、化合物9a的制備在500ml圓底燒瓶中加入1，2，3，4，6-五乙酰基保護(hù)的半乳糖(20g，0.05mol)，加入對(duì)-甲基苯硫酚(9.5g，0.075mol)，加入CH2Cl2(150ml，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥)，攪拌溶解，加入BF3.Et2O(13ml，14.19g，0.1mol)，室溫下攪拌5h，TLC檢測(cè)，反應(yīng)完全。反應(yīng)物用CH2Cl2(150ml)稀釋，用80ml左右的飽和NaHCO3溶液洗滌2-3次至中性，再用飽和NaCl溶液(40ml)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥后，過(guò)濾干燥劑，濃縮，所得固體用石油醚-乙酸乙酯(V石油醚∶V乙酸乙酯＝3∶1)重結(jié)晶，得白色固體，重21g，收率90％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.38(d，J＝8.1Hz，2H)，7.10(d，J＝8.1Hz，2H)，5.38(d，J＝2.4Hz，1H)，5.19(t，J＝9.9Hz，1H)，5.01(dd，J＝3.3，9.9Hz，1H)，4.62(d，J＝9.9Hz，1H)，4.05-4.19(m，2H)，3.88(t，J＝7.2Hz，1H)，2.32(s，3H)，2.09(s，3H)，2.08(s，3H)，2.02(s，3H)，1.95(s，3H).
2、化合物9的制備在500ml圓底燒瓶中，化合物9a(21g，0.047mol)溶于250ml甲醇，加入催化量的金屬鈉，室溫下攪拌5h，反應(yīng)完畢，用強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂中和至PH＝5～6，濾去樹(shù)脂后，濃縮，蒸干溶劑后得化合物9b。然后加入150mlDMF，盡量使其溶解。冰水冷卻下，慢慢加入NaH(7g，0.28mol)，再加入溴化芐(35ml，47.89g，0.28mol)，6h后停止反應(yīng)，將反應(yīng)混合物到入冰水中，攪拌，有固體析出，過(guò)濾，水洗，石油醚洗，再將所得固體用石油醚-乙酸乙酯(V/V＝3∶1)重結(jié)晶得白色固體產(chǎn)物21g，產(chǎn)率89％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.45(d，J＝8.1Hz，2H)，7.24-7.40(m，20H)，6.97(d，J＝8.4Hz，2H)，4.95(d，J＝11.7Hz，1H)，4.67-4.80(m，4H)，4.58(d，J＝11.7Hz，1H)，4.56(d，J＝9.6Hz，1H)，4.42(ABq，J＝12.0Hz，2H)，3.97(d，J＝2.7Hz，1H)，3.89(t，J＝9.3Hz，1H)，3.55-3.65(m，4H)，2.27(s，3H)。
二、化合物10(通式化合物II的一種)的制備
Bz＝苯甲酰基；Lev＝乙酰丙酰基；Tol＝對(duì)甲基苯基；CSA＝樟腦磺酸；levulinic acid＝乙酰丙酸；DCC＝1，3-二環(huán)己基碳二亞胺；DMAP＝4-二甲胺基吡啶。
1、化合物10a的制備在100ml反應(yīng)瓶中加入化合物9b(5.0g，0.0176mol)，注入無(wú)水乙腈(40ml)，加入苯甲醛二甲縮醛(4.05ml，4.01g，0.0264mol)及樟腦磺酸(0.081g，0.352mmol)，室溫?cái)嚢?h，析出白色固體，加入三乙胺中和，濃縮抽干，在無(wú)水乙醇中重結(jié)晶得白色針狀晶體4.63g，收率70.5％。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.58(d，J＝7.8Hz，2H)，7.26-7.38(m，5H)，7.12(d，J＝7.8Hz，2H)，5.51(s，1H)，4.46(d，J＝9.0Hz，1H)，4.39(dd，J＝12.6，1.5Hz，1H)，4.21(d，J＝2.4Hz，1H)，4.01(dd，J＝12.6，1.5Hz，2H)，3.55-3.73(m，3H)，2.48-2.58(m，1H)，2.34(s，3H)。
2、化合物10b的制備在100ml反應(yīng)瓶中加入化合物10a(0.374g，1mmol)，注入無(wú)水CH2Cl215ml，攪拌溶解，加入1，3-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(0.32g，1.5mmol)，4-二甲胺基吡啶(DMAP)(0.062g，0.5mmol)，乙酰丙酸(Levulinic acid)(0.14g，1.2mmol)，室溫反應(yīng)3h，TLC檢驗(yàn)反應(yīng)完，加入CH2Cl2(15ml)稀釋，過(guò)濾除渣，濾液濃縮至干，殘余物柱層析分離[洗脫劑石油醚∶乙酸乙酯(V/V)＝3∶1]得白色固體0.255g，收率54％。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.56(d，J＝8.1Hz，2H)，7.33-7.41(m，5H)，7.05(d，J＝8.1Hz，2H)，5.44(s，1H)，4.93(dd，J＝3.6，9.6Hz，1H)，4.53(d，J＝9.6Hz，1H)，4.35-4.27(m，2H)，3.84-3.98(m，2H)，3.53(br.s，1H)，2.81(d，J＝2.7Hz，1H)，2.67(t，J＝6.0Hz，2H)，2.54(t，J＝6.0Hz，2H)，2.33(s，3H)，2.02(s，3H)。
3、化合物10的制備將化合物10b(1.40g，3mmol)加入100ml反應(yīng)瓶中，加入30ml吡啶，冰水冷卻下慢慢注入BzCl(苯甲酰氯)(0.76ml，927mg，6.6mmol)，攪拌5分鐘后撤冰水室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，TLC檢驗(yàn)反應(yīng)完，減壓蒸干吡啶得黃色固體，得化合物10c；再向其中加入THF和甲醇混合液(25ml，v/v＝10∶1)，攪拌使固體溶解。另取冰醋酸(1.5ml)于干燥試管中，小心加入無(wú)水肼(0.77ml，217mg，24mmol)，并加入適量THF和甲醇混合液(v/v＝10∶1)，然后將此混合液注入到反應(yīng)瓶中，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，反應(yīng)完全，減壓蒸干溶劑，加入CH2Cl2(200ml)攪拌，過(guò)濾，濾液依次用飽和NaHCO3和NaCl洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，殘余物柱層析分離[洗脫劑石油醚∶乙酸乙酯(V/V)＝3∶1]得白色固體0.95g，收率68％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.06(d，J＝6.9Hz，2H)，7.37-7.60(m，10H)，7.06(d，J＝8.1Hz，2H)，5.51(s，1H)，5.18(t，J＝9.6Hz，1H)，4.75(d，J＝9.9Hz，1H)，4.41(d，J＝12.0Hz，1H)，4.24(d，J＝3.0Hz，1H)，4.05(dd，J＝12.0，1.5Hz，1H)，3.86(dd，J＝3.6，9.6Hz，1H)，3.60(br.s，1H)，2.34(s，3H)。
三、化合物3(通式化合物III的一種)的制備 Ac2O＝醋酸酐；Pyr＝吡啶；NPhth＝鄰苯二甲酰亞胺基；Bn＝芐基；Phathic anhydride＝鄰苯二甲酸酐。
1、化合物2a的制備氨基葡萄糖鹽酸鹽(11g，0.050mol)于500ml反應(yīng)瓶中，加入250ml甲醇，NaOMe(7.3ml，30％的甲醇溶液，0.0001mol)，室溫反應(yīng)0.5h，冷卻至0℃，加入鄰苯二甲酸酐(8.9g，0.06mol)，1h后升至室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，減壓蒸干溶液。再冷卻至0℃，加入100ml吡啶和50ml醋酸酐的混合液，反應(yīng)2h升至室溫，反應(yīng)過(guò)夜，停止反應(yīng)，減壓蒸干溶劑，殘余物柱層析分離[洗脫劑石油醚∶乙酸乙酯(V/V)＝1∶1]得黃色糖漿16.13g，收率67.7％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.74-7.88(m，4H)，6.52(d，J＝9.0Hz，1H)，5.89(dd，J＝9.0，9.5Hz，1H)，5.20(t，J＝10.0Hz，1H)，4.48(dd，J＝9.0，11.8Hz，1H)，4.38(dd，J＝4.5，10.0Hz，1H)，4.01-4.17(m，2H)，2.12(s，3H)，2.05(s，3H)，2.01(s，3H)，1.81(s，3H)。
2、化合物2b的制備在500ml圓底燒瓶中加入化合物2a(12g，0.025mol)，加入對(duì)-甲基苯硫酚(3.98g，0.031mol)，加入CH2Cl2(150ml，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，攪拌溶解，加入BF3.Et2O(14.2ml，14.19g，0.1mol)，室溫下攪拌5h，TLC檢測(cè)，反應(yīng)完全。反應(yīng)物用CH2Cl2(150ml)稀釋，用80ml左右的飽和NaHCO3溶液洗滌2-3次至中性，再用飽和NaCl溶液(40ml)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥后，過(guò)濾干燥劑，濃縮，所得固體用石油醚-乙酸乙酯(V石油醚∶V乙酸乙酯＝3∶1)重結(jié)晶，得白色固體，重10.5g，收率86％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.74-7.90(m，4H)，7.30(d，J＝8.5Hz，2H)，7.18(d，J＝8.5Hz，2H)，5.78(dd，J＝9.0，10.0Hz，1H)，5.65(d，J＝10.0Hz，1H)，5.12(dd，J＝9.3，10.2Hz，1H)，4.17-4.35(m，3H)，3.85-3.91(m，1H)，2.33(s，3H)，2.11(s，3H)，2.02(s，3H)，1.83(s，3H)。
3、化合物2c的制備化合物2b(11.7g，0.021mmol)于500ml反應(yīng)瓶中，加入200ml無(wú)水甲醇溶解，注入NaOMe(0.4ml，30％的甲醇溶液，0.0042mmol)，室溫?cái)嚢?h，停止反應(yīng)，加入強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂中和至PH＝5-6，濾去樹(shù)脂后，濃縮抽干得黃色油狀物。再在反應(yīng)瓶中加入無(wú)水乙腈(200ml)，加入苯甲醛二甲縮醛(4.4ml，3.58g，28.6mmol)及樟腦磺酸(0.2g，0.88mmol)，室溫?cái)嚢?h，溶液變成澄清，TLC檢測(cè)反應(yīng)完，加入三乙胺中和，濃縮蒸干溶劑，殘余物柱層析分離[洗脫劑石油醚∶乙酸乙酯(V/V)＝1∶2]得白色晶體6.93g，收率64.8％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.73-7.89(m，4H)，7.05-7.49(m，9H)，5.63(d，J＝10.5Hz，1H)，5.56(s，1H)，4.62(t，J＝7.8Hz，1H)，4.39(dd，J＝4.6，10.4Hz，1H)，4.31(t，J＝10.2Hz，1H)，3.82(t，J＝10.2Hz，1H)，3.70(td，J＝9.6，4.8Hz，1H)，3.58(t，J＝9.0Hz，1H)，2.50(d，J＝2.7Hz，1H)，2.31(s，3H)。
4、化合物2的制備化合物2c(70mg，0.14mmol)加入到50ml茄形瓶中，注入DMF(5ml)溶解，冷卻至0℃，加入NaH(7mg，0.28mmol)，注入溴化芐(25μl，35.9mg，0.21mmol)，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)4h，停止反應(yīng)，將化合物倒入冰水中，然后用乙酸乙酯(3×10ml)萃取，乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，殘余物柱層析分離[洗脫劑石油醚∶乙酸乙酯(V/V)＝3∶1]得黃色糖漿74.5mg，收率92.2％。1HNMR(300MHz，CD3COCD3-d6)δ7.89(m，3H)，7.72(m，1H)，7.56(dd，J＝2.4，8.1Hz，2H)，7.35-7.44(m，3H)，7.25(d，J＝8.1Hz，2H)，7.09(d，J＝8.1Hz，2H)，6.87-6.99(m，5H)，5.79(s，1H)，5.63(dd，J＝0.9，10.5Hz，1H)，4.76(d，J＝12.6Hz，1H)，4.50(d，J＝12.3Hz，1H)，4.41(q，J＝9.3Hz，1H)，4.36(d，J＝10.2Hz，1H)，4.23(t，J＝9.9Hz，1H)，3.93-3.86(m，2H)，3.77(m，1H)，2.27(s，3H)。
5、化合物3的制備在反應(yīng)瓶中加入化合物2(74mg，0.18mmol)，3分子篩(2.5g)，注入干燥THF(10ml)，N2保護(hù)，室溫?cái)嚢?.5h，加入NaCNBH3(0.11g，1.625mmol)，注入HCl-Et2O(2.6ml，1M的乙醚溶液，2.5mmol)，有氣泡放出，10min后反應(yīng)完，加入10ml二氯甲烷稀釋反應(yīng)液，硅藻土過(guò)濾除3MS，濾液依次用飽和NaHCO3和NaCl洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，得黃色油狀物，柱層析分離[洗脫劑石油醚∶乙酸乙酯(V/V)＝3∶1]得黃色糖漿43mg，收率57.9％。1HNMR(300MHz，CD3COCD3-d6)δ7.69-7.84(m，4H)，7.27-7.40(m，7H)，6.88-7.01(m，7H)，5.56(d，J＝10.2Hz，1H)，4.83(d，J＝12.0Hz，1H)，4.51-4.64(m，3H)，4.28(dd，J＝7.8，10.2Hz，1H)，4.16(t，J＝10.2Hz，1H)，3.95(d，J＝9.3Hz，1H)，3.74-3.82(m，2H)，3.32(br.s，2H)，2.22(s，3H)。
四、化合物8(通式化合物IV的一種)的合成 1、化合物5的合成在500ml圓底燒瓶中加入乳糖(32.4g，0.1mol)，無(wú)水乙酸酐(180ml，163.2g，1.6mol)，醋酸鈉(16.6g，0.2mol)，加熱到120℃回流攪拌3h，減壓蒸除乙酸酐得深黃色糖漿，加入200ml CH2Cl2溶解，用150ml左右的飽和NaHCO3溶液洗滌2-3次至中性，再用飽和NaCl溶液(100ml)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥后，過(guò)濾干燥劑，濃縮，所得固體用石油醚-乙酸乙酯(V石油醚∶V乙酸乙酯＝3∶2)重結(jié)晶，得白色固體57.95g，產(chǎn)率85.5％。
2、化合物6的合成化合物5(200mg，0.3mmol)和化合物HO(CH2)3NHCbz(63mg，0.35mmol)于50ml茄形瓶中，加入15ml干燥CH2Cl2溶解，注入三氟化硼乙醚(BF3.OEt2)(1.01ml，127.7mg，0.90mmol)，室溫下攪拌8h，停止反應(yīng)，加入50mlCH2Cl2稀釋，依次用飽和NaHCO3和NaCl洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，得黃色油狀物，柱層析分離[洗脫劑石油醚∶乙酸乙酯(V/V)＝1∶1]得黃色糖漿98.4mg，收率43％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.24-7.32(m，5H)，5.31(d，J＝2.7Hz，1H)，5.16(t，J＝9.6Hz，1H)，5.05-5.11(m，3H)，4.93(dd，J＝3.6，10.5Hz，1H)，4.85(dd，J＝7.8，9.6Hz，1H)，4.42-4.51(m，3H)，3.97-4.13(m，4H)，3.79-3.86(m，2H)，3.75(t，J＝9.6Hz，1H)，3.52-3.59(m，2H)，3.14-3.27(m，2H)，2.11(s，3H)，2.05(s，3H)，2.02(s，3H)，2.01(s，3H)1.98(s，3H)，1.93(s，3H)，1.89(s，3H)，1.75(m，2H)；13CNMR(75MHz，CDCl3)δ170.78，170.70，170.50，170.41，170.09，169.43，156.80，137.05，128.86，128.46，128.42，101.45，100.78，76.60，73.11，73.08，71.96，71.33，71.06，69.49，67.88，66.97，62.22，61.16，60.75，38.58，29.85，21.15，20.99，20.86；FAB-MS(M+H)+828。元素分析(％)C37H49O20N計(jì)算值C，53.69；H，5.97；N，1.69.實(shí)測(cè)值C，53.59；H，5.96；N，1.66。
3、化合物7的合成化合物6(107.5mg，0.13mmol)于50ml反應(yīng)瓶中，加入20ml無(wú)水甲醇溶解，注入NaOMe(10μl，30％的甲醇溶液，0.0026mmol)，室溫?cái)嚢?h，停止反應(yīng)，加入強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂中和至中性，濾去樹(shù)脂后，濃縮蒸干得黃色油狀物。再在反應(yīng)瓶中加入Bu2SnO(58mg，0.023mmol)，注入無(wú)水甲醇20ml，N2保護(hù)，加熱回流攪拌16h，冷卻至室溫，減壓蒸干溶劑，向殘余物中加入4MS(4分子篩)，四丁基碘化胺(2.2mg，0.006mmol)，注入20ml干燥苯，烯丙基溴(18μl，25.16mg，0.208mmol)，N2保護(hù)，加熱回流攪拌5h，冷卻至室溫，硅藻土過(guò)濾除4MS，濃縮濾液得黃色油狀物。重復(fù)地在反應(yīng)瓶中加入Bu2SnO(58mg，0.023mmol)，注入無(wú)水甲醇20ml，N2保護(hù)，加熱回流攪拌16h，冷卻至室溫，減壓抽干溶劑，向殘余物中加入4MS，四丁基碘化胺(2.2mg，0.006mmol)，注入20ml干燥苯，烯丙基溴(18μl，25.16mg，0.208mmol)，N2保護(hù)，加熱回流攪拌5h，冷卻至室溫，硅藻土過(guò)濾除4MS，濃縮濾液得黃色油狀物，經(jīng)初步柱層析分離[洗脫劑甲醇∶乙酸乙酯(V/V)＝1∶15]后投入下步反應(yīng)。
將上面所得化合物加入50ml茄形瓶中，注入DMF(4ml)溶解，冷卻至0℃，加入NaH(39mg，1.56mmol)，注入BnBr(0.14ml，200.1mg，1.17mmol)，攪拌5h，停止反應(yīng)，將化合物倒入冰水中，然后用乙酸乙酯(3×10ml)萃取，乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，殘余物經(jīng)柱層析分離[洗脫劑石油醚∶乙酸乙酯(V/V)＝3∶1]得黃色糖漿0.111g，收率70％。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ7.12-7.34(m，40H)，5.92(m，1H)，5.32(dd，J＝1.5，17.0Hz，1H)，5.15-5.18(m，3H)，4.99(d，J＝11.0Hz，1H)，4.95(d，J＝11.5Hz，1H)，4.66-4.81(m，5H)，4.14-4.55(m，11H)，3.91(t，J＝10.0Hz，2H)，3.86(d，J＝2.5Hz，1H)，3.76(m，1H)，3.68(dd，J＝7.5，8.6Hz，2H)，3.53(t，J＝10Hz 2H)，3.29-3.35(m，8H)，1.85(m，2H)；13CNMR(75MHz，CDCl3)δ162.64，139.10，139.09，138.86，138.62，138.31，138.07，137.88，134.97，128.49，128.43，128.34，128.23，128.19，128.12，128.01，127.93，127.87，127.82，127.71，127.65，127.50，127.46，127.41，127.39，127.29，127.03，116.38，103.46，102.72，82.91，82.34，81.71，79.86，77.20，76.58，75.32，75.21，75.08，74.91，74.59，73.48，73.38，73.01，72.92，71.46，68.28，68.08，67.15，50.77，36.59，31.55；MALDI-TOF-MS(M+Na+H)+1227，(M+K+H)+1243。元素分析(％)C75H81O13N計(jì)算值C，74.79；H，6.78；N，1.16.實(shí)測(cè)值C，74.72；H，6.68；N，1.08。
4、化合物8的合成取化合物7(21mg，0.017mmol)于25ml茄形瓶中，N2保護(hù)，注入1.5ml無(wú)水甲醇，加入PdCl2(1.1mg，0.0068mmol)，室溫?cái)嚢?h，反應(yīng)完畢，加甲醇5ml稀釋，硅藻土過(guò)濾除PdCl2，濃縮濾液，殘余物經(jīng)柱層析分離[洗脫劑(v/v)石油醚∶乙酸乙酯＝1∶2]得淺黃色糖漿19.8mg，產(chǎn)率97.5％。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ7.14-7.34(m，40H)，5.15(br.s，2H)，5.00(d，J＝10.5Hz，1H)，4.25-4.81(m，16H)，3.95(t，J＝9.5Hz，1H)，3.86-3.92(m，1H)，3.83(br.s，1H)，3.66-3.79(m，2H)，3.26-3.56(m，10H)，2.18(d，J＝3.5Hz，1H)，1.85(m，2H).13CNMR(75MHz，CDCl3)δ157.87，138.97，138.64，138.52，138.35，138.07，137.93，137.79，136.65，128.91，128.45，128.37，128.29，128.20，128.04，127.92，127.81，127.77，127.67，127.62，127.53，127.48，127.10，103.43，102.56，82.72，81.62，80.52，75.83，75.28，74.98，74.87，74.02，73.27，73.11，73.04，68.14，67.86，67.11，50.68，44.67，43.65，28.59；MALDI-TOF-MS(M+Na+H)+1187，(M+K+H)+1203。元素分析(％)C72H77O13N計(jì)算值C，74.27；H，6.66；N，1.20.實(shí)測(cè)值C，74.10；H，6.61；N，1.12。
五、五糖1(通式V化合物的一種)的合成
1、全保護(hù)五糖11的合成在25ml茄形瓶中加入4分子篩(200mg)，化合物9(15mg，0.023mmol)，化合物10(11.1mg，0.023mmol)和BSP(N-哌啶基苯基亞砜)(3.4mg，0.016mmol)，注入干燥二氯甲烷(2ml)，N2保護(hù)，攪拌0.5h，冷卻至零下70℃，注入Tf2O(三氟甲磺酸酐)(3.1μl，5.3mg，0.0186mmol)，然后慢慢升至室溫反應(yīng)2h，TLC檢測(cè)化合物9基本消失。再冷卻至-70℃，加入BSP(N-哌啶基苯基亞砜)(3.9mg，0.0186mmol)，Tf2O(三氟甲磺酸酐)(3.5μl，5.9mg，0.021mmol)，用干燥二氯甲烷2ml溶解化合物3(13.8mg，0.023mmol)并加入反應(yīng)瓶中，然后慢慢升至室溫，2h后TLC檢測(cè)顯示上一步生成的新點(diǎn)基本消失，冷卻至-70℃，加入BSP(N-哌啶基苯基亞砜)(3.9mg，0.0186mmol)，Tf2O(三氟甲磺酸酐)(3.5μl，5.9mg，0.021mmol)，用干燥二氯甲烷2ml溶解化合物8(27mg，0.023mmol)并加入反應(yīng)瓶中，2h內(nèi)升至室溫，繼續(xù)反應(yīng)2h后，加入三乙胺2ml和CH2Cl2(10ml)稀釋，硅藻土過(guò)濾除4MS，濾液依次用飽和NaHCO3和NaCl洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，殘余物經(jīng)柱層析分離[洗脫劑石油醚∶乙酸乙酯(V/V)＝3∶1]得淡黃色油狀物24mg，收率41％。1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ7.97(d，J＝7.5Hz，2H)，7.63-7.73(m，6H)，7.44(t，J＝7.5Hz，2H)，7.37-7.02(m，67H)，6.86(d，J＝7.5Hz，3H)，6.74(t，J＝7.5Hz，4H)，5.55(s，1H)，5.40(dd，J＝8.0，10.0Hz，1H)，5.32(d，J＝3.0Hz，1H)，5.28(d，J＝8.0Hz，1H)，5.05(s，2H)，4.90(d，J＝11.5Hz，1H)，4.87(d，J＝8.0Hz，1H)，4.75(d，J＝11.0Hz，1H)，3.92-4.65(m，36H)，33.76-3.80(m，3H)，3.18-3.76(m，16H)，2.95-3.14(m，2H)，1.66-1.75(m，2H)；13CNMR(125MHz，DMSO-d6)δ167.44，164.52，155.80，139.14，138.86，138.58，138.34，138.27，138.03，137.98，137.87，136.89，134.37，133.64，131.53，130.50，129.38，128.93，128.76，128.65，128.39，128.30，128.17，128.10，127.99，127.88，127.82，127.72，127.61，127.54，127.40，127.35，127.21，127.16，127.02，126.91，126.70，126.29，126.17，123.06，102.25，101.23，100.04，99.99，99.01，93.34，81.84，80.97，78.06，77.66，77.41，76.85，76.41，75.14，74.44，74.19，74.13，74.05，73.66，73.56，73.40，73.31，72.53，72.47，72.34，71.88，71.22，70.81，68.94，68.38，68.15，68.04，67.90，67.40，66.28，66.10，65.03，55.80，49.95，48.60，44.48，43.61，30.00；MALDI-TOF-MS(M+Na+H)+2534，(M+K+H)+2550。
2、五糖1的合成取全保護(hù)五糖11(54mg，0.02mmol)于25ml茄形瓶中，注入3mL乙醇和1mL NH2NH2·H2O，加熱回流20h，然后加甲苯(3×5mL)共沸蒸干。向殘留物中加3mL吡啶和1mL乙酸酐，室溫?cái)嚢?h后，蒸干溶劑，加3mL甲醇溶解，注入NaOMe(10μl，30％的甲醇溶液，0.0026mmol)，室溫?cái)嚢?h，停止反應(yīng)，加入強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂中和至中性，濾去樹(shù)脂后，濃縮蒸干后經(jīng)柱層析粗分[洗脫劑 石油醚∶乙酸乙酯(V/V)＝2∶1]。所得產(chǎn)物用HOAc(0.25mL)/THF(2mL)/H2O(1mL)混合溶劑溶解，加入10％鈀-碳(15mg)進(jìn)行催化氫解，反應(yīng)22h后，用硅藻土濾除催化劑，濾液濃縮后過(guò)C-18反相柱[洗脫劑H2O]，分得產(chǎn)物經(jīng)冷凍干燥后得白色固體9mg，收率43％。1HNMR(500MHz，CD3OD)δ5.14(d，J＝4.0Hz，iH)，4.70(d，J＝8.5Hz，1H)，4.54(d，J＝8.0Hz，1H)，4.50(d，J＝8.0Hz，1H)，4.42(d，J＝8.0Hz，1H)，4.20-4.16(m，2H)，4.15(d，J＝3.0Hz，1H)，4.07-3.93(m，5H)，3.87-3.69(m，14H)，3.67-3.56(m，6H)，3.36-3.30(m，2H)，3.15(t，J＝7.0Hz，2H)，2.02(m，4H)，1.90(s，7H)；ESI-MS(M+H)+927。
權(quán)利要求
1.一種抑制異種器官移植免疫排斥反應(yīng)的五糖抗原的合成方法，主要包括以下步驟將下述通式I、II、III和IV共4種化合物在同一個(gè)反應(yīng)體系中進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得到全保護(hù)五糖，所得的全保護(hù)五糖脫去部分保護(hù)基或全部保護(hù)基后，即得所需的五糖，其產(chǎn)品結(jié)構(gòu)式見(jiàn)通式V 通式I其中R1、R2可以是氫、芐基、硅保護(hù)基、苯甲酰基、乙酰基、氯乙?；?、丙?；蛐挛祯；?；或R1和R2一起是芐叉基；R3、R4可以是氫、芐基、烯丙基、硅保護(hù)基、苯甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、丙?；蛐挛祯；?；R可以是苯基、對(duì)甲基苯基、甲基、乙基、丙基或丁基。 通式II其中R5、R6可以是氫、芐基、硅保護(hù)基、苯甲?；?、乙?；?、氯乙酰基、丙酰基或新戊酰基，或R5和R6一起是芐叉基；R7可以是氫、苯甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、丙酰基或新戊?；?；R可以是苯基、對(duì)甲基苯基、甲基、乙基、丙基或丁基。 通式III其中R8、R9可以是氫、芐基、硅保護(hù)基、烯丙基、苯甲酰基、乙酰基、氯乙?；?、丙酰基或新戊?；籒R10是氨基，疊氮基，鄰苯二甲酰亞胺基，2’，2’，2’-三氯乙氧羰酰胺基(-NHC(O)OCH2CH2Cl3)，芐氧羰酰胺基(-NHC(O)OCH2Ph)或乙酰胺基(-NHAc)；R可以是苯基、對(duì)甲基苯基、甲基、乙基、丙基或丁基。 通式IV其中R11、R12、、R13、R14、R15、R16可以是氫、芐基、硅保護(hù)基、烯丙基、苯甲?；?、乙酰基、氯乙酰基、丙?；蛐挛祯；换騌11和R12一起是芐叉基；R17可以是氫、芐基；R18是氫、芐氧羰基(Cbz)；或N(R17)R18是疊氮基；n為1-12。 通式V其中R1、R2可以是氫、芐基、硅保護(hù)基、苯甲?；?、乙酰基、氯乙?；⒈；蛐挛祯；换騌1和R2一起是芐叉基；R3、R4可以是氫、芐基、烯丙基、硅保護(hù)基、苯甲?；?、乙?；?、氯乙酰基、丙?；蛐挛祯；籖5、R6可以是氫、芐基、硅保護(hù)基、苯甲?；⒁阴；?、氯乙?；⒈；蛐挛祯；騌5和R6一起是芐叉基；R7可以是氫、苯甲?；?、乙?；?、氯乙?；?、丙?；蛐挛祯；?；R8、R9可以是氫、芐基、硅保護(hù)基、烯丙基、苯甲?；⒁阴；?、氯乙?；?、丙?；蛐挛祯；?；NR10是氨基，疊氮基，鄰苯二甲酰亞胺基，2’，2’，2’-三氯乙氧羰酰胺基(-NHC(O)OCH2CH2Cl3)，芐氧羰酰胺基(-NHC(O)OCH2Ph)或乙酰胺基(-NHAc)；R11、R12、、R13、R14、R15、R16可以是氫、芐基、硅保護(hù)基、烯丙基、苯甲?；?、乙?；⒙纫阴；?、丙?；蛐挛祯；?；或R11和R12一起是芐叉基；R17是氫、芐基；R18是氫、芐氧羰基；或N(R17)R18是疊氮基；n為1-12。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成方法，其中偶聯(lián)反應(yīng)所用的活化劑為N-碘代丁二酰亞胺/三氟甲磺酸，三氟甲磺酸化二甲基(甲基硫基)锍鹽，N-哌啶基苯基亞砜/三氟甲磺酸酐，苯基氯化硫/三氟甲磺酸銀以及其它活化硫醚或亞砜的試劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成方法，其中偶聯(lián)反應(yīng)所用的反應(yīng)溶劑為甲苯，二氯甲烷，氯仿，乙腈，乙醚，DMF，THF，DME。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成方法，其中偶聯(lián)反應(yīng)的溫度為-78℃到25℃。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成方法，其中偶聯(lián)反應(yīng)中結(jié)構(gòu)單元的離去基團(tuán)為S-R/SOR，其中R為芳香基或烷基。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種抑制異種器官移植免疫排斥反應(yīng)的五糖抗原的合成方法，該方法的特征在于采用“四組分一釜”的合成方法，即選擇常用的保護(hù)基對(duì)四種糖結(jié)構(gòu)單元進(jìn)行合適的保護(hù)，然后將這些結(jié)構(gòu)單元用“四組分一釜合成法”進(jìn)行裝配，快速、立體選擇、高收率地得到了所需的五糖抗原系列，本發(fā)明相對(duì)于“三組分一釜”合成法，省去了一步糖基化偶聯(lián)的分離純化操作，具有更為高效、簡(jiǎn)捷的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P37/00GK1715286SQ20041005007
公開(kāi)日2006年1月4日 申請(qǐng)日期2004年7月2日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月2日
發(fā)明者葉新山, 王宇航, 張禮和 申請(qǐng)人:北京大學(xué)