專利名稱：一種輔助防治心、腦血管疾病的保健品的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及保健品的技術領域，具體是涉及一種將積雪草總苷作為功能因子，制備一種輔助預防和治療心、腦血管疾病的保健品。
背景技術：
積雪草Centella asiatica(L.)Urban為傘形科積雪草屬植物，廣泛分布于長江流域以南各地。全草入藥。在我國積雪草外用及內(nèi)服治病已有兩千多年歷史。其具有清熱利濕，解毒消腫之功能。適用于濕熱黃疸，中暑腹瀉，砂淋血淋，癰腫瘡毒，跌撲損傷。
積雪草的化學成分以三萜類為主，如積雪草苷(asiaticoside)、羥基積雪草苷(madecassoside)、波熱模苷(brahmoside)、波熱米苷(brahminoside)、參枯尼苷(thankuni-side)、異參枯尼苷(isothankuniside)、centelloside等五環(huán)三萜型酯苷。積雪草中還含有一些三萜酸類，如積雪草酸(asiatic acid)、羥基積雪草酸(madecassic acid)、波熱米酸(brahmic acid)、馬達積雪草酸(madasiatic acid)、centicacid、centoic acid、cenellic acid、indocentic acid等。此外，積雪草中還有少量的多炔烯類、揮發(fā)油類、beta-谷甾醇、香草酸等。
從含量和活性兩方面，積雪草總苷被認為是藥理活性成分并作為積雪草質量的標志性成分，主要包括積雪草苷和羥基積雪草苷兩個三萜皂苷(中國中醫(yī)藥信息雜志，2002，9(8)81-84)。積雪草苷分子式C48H78O19，分子量為958。羥基積雪草苷分子式C48H78O20，分子量為974。
積雪草苷R＝H羥基積雪草苷R＝OH
積雪草總苷主要藥理活性有(1)對皮膚組織的作用積雪草甙能促進創(chuàng)傷愈合，刺激肉芽生長，促進表皮角質化，用于治療皮膚潰瘍，如頑固性創(chuàng)傷、皮膚結核、麻風等疾病和皮膚化妝品中應用。同時通過抑制成纖維細胞增殖和膠原蛋白的合成，抑制瘢痕形成。
(2)抗菌體外抗菌實驗表明，積雪草對金黃色葡萄菌、溶血型鏈球菌、各種痢疾桿菌、傷寒桿菌均有抑制作用。
(3)抗?jié)冇糜谥委熚笣儭?br> (4)對中樞作用刺激中樞神經(jīng)系統(tǒng)，用于抑郁癥的治療，改善記憶和抗疲勞。積雪草甙對小鼠和大鼠有解痙、鎮(zhèn)靜、安定作用，主要是對中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的膽堿能系統(tǒng)和γ氨基丁酸(GABA)的影響。
(5)減輕靜脈曲張引起的癥狀，這可能與積雪草苷具有改善血管壁結締組織的結構和增強靜脈的功能有關，用于靜脈功能不足(venous insufficiency)。
(6)其他積雪草總苷還具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、治療乳腺增生癥、抗肝纖維化、肺纖維化和腎纖維化等活性和用途。
但未見積雪草總苷用于防治心絞痛、心肌梗死等冠心病和腦血栓形成、腦栓塞等腦血管病作為保健品的報道。
冠心病是由于供應心臟營養(yǎng)物質的血管—冠狀動脈發(fā)生了粥樣硬化所致。冠狀動脈的粥樣硬化斑塊可使冠狀動脈管腔嚴重狹窄甚至閉塞，導致心肌的血流量減少，供氧不足，表現(xiàn)胸悶，憋氣，心絞痛，心肌梗死甚至猝死等。冠心病在國內(nèi)平均患病率約為6.49％，且患病率隨著年齡增長而增高，因而冠心病是老年人最常見的一種心血管疾病。目前冠心病的發(fā)病趨向低齡化，已成為中老年人的常見病。
隨著人口老齡化，腦血管病發(fā)病率不斷增高，成為危害人類健康最重要的疾病之一。在聯(lián)合國世界衛(wèi)生組織調查的57個國家中死于腦血管病者占11.3％，其中40個國家腦血管病占死因前三位。世界平均發(fā)病率為150～200萬/(10萬人口/年)，患病率為500～600萬/(10萬人口/年)，全世界按50億人口算，大約有2500～3000萬病人。在我國死于腦血管病者多于心臟病及癌癥，居三大死因首位。我國標化的發(fā)病率為120～180萬/(10萬人口/年)，患病率為429萬/(10萬人口/年)，大約有500～600萬病人，其中缺血性腦血管病占多數(shù)，包括腦血栓形成、腦栓塞、腔隙性腦梗塞和短暫性腦缺血發(fā)作。腦血栓形成、腦栓塞具有高發(fā)病率、高致殘率及高復發(fā)率的特點，造成大量的殘疾人群，帶來了沉重的社會及經(jīng)濟負擔。
保健食品具有防治疾病的功能活性，使用方便，無明顯的毒副作用。積雪草總苷，主要活性成分為積雪草苷和羥基積雪草苷，大鼠腹腔注射2g/kg不死，小鼠和兔口服1g/kg能耐受，表明積雪草總苷基本無毒。此外，積雪草是衛(wèi)生部批準可用于保健食品的中草藥之一(中國食品衛(wèi)生雜志，2002，14(3)59)。心腦血管疾病的發(fā)生和發(fā)展有個過程。在出現(xiàn)明顯癥狀之前，采用保健食品對心腦血管疾病一級和二級預防具有重要價值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于將積雪草總苷作為功能因子，制備一種輔助防治心、腦血管疾病的保健品。
本發(fā)明所述的積雪草總苷，主要活性成份為積雪草苷和羥基積雪草苷。在心腦血管疾病模型中，積雪草苷和羥基積雪草苷的活性相近，因此無需進一步將積雪草苷和羥基積雪草苷分開，也無需進一步明確總苷中兩類苷之間的比例即可獲得滿意的療效。
在本發(fā)明中，防治心、腦血管疾病的保健品，含有0.4-40％的積雪草總苷作為活性成分配以食品和藥品所允許的輔料和/或添加劑制成的食品或醫(yī)藥上可接受的口服劑；較好的是含有1-30％的積雪草總苷作為活性成分配以食品和藥品所允許的輔料和/或添加劑制成的食品或醫(yī)藥上可接受的口服劑，可以選擇的是含有5-25％的積雪草總苷作為活性成分配以食品和藥品所允許的輔料和/或添加劑制成的食品或醫(yī)藥上可接受的口服劑。
在本發(fā)明中，所述的積雪草總苷中積雪草苷和羥基積雪草苷的含量之和大于或等于40％?？赡艿氖浅^60％，較好的是超過80％。
當口服劑為膠囊劑，每顆膠囊重0.25-0.35克，含有積雪草總苷10-40％，藥用輔料60-90％；口服劑為片劑，每片重量為0.15-0.25克，含有積雪草總苷10-40％，藥用輔料60-90％。口服劑為口服液，含有積雪草總苷0.4-2％，天然甜味劑15-25％，其余為水。
在本發(fā)明中，所述的食品和藥品所允許的輔料和/或添加劑可以是(1)谷類；淀粉；糊精；(2)蔬菜泥；(3)甜味劑-甜菊甙或蛋白糖，或木醇糖等；
(4)香精；(5)羧甲基纖維素；(6)阿拉伯膠等。
本發(fā)明從積雪草中提取積雪草總苷的工藝步驟如下(1)將積雪草粉碎后用75％乙醇回流，2小時共3次；(2)回收乙醇得浸膏；(3)浸膏加去離子水溶解；(4)將上述水溶解液通過脫色樹脂脫色，收集流出液，再用乙醇溶液通過該脫色樹脂后收集乙醇洗脫液，合并上述的流出液和乙醇洗脫液；(5)將上述合并的液體減壓濃縮至干，得粘稠狀物；(6)用甲醇溶解上述粘稠狀物，比例為粘稠狀物(kg)∶甲醇的體積(ml)＝1∶100～500，得積雪草總苷溶液；(8)將上述積雪草總苷溶液用乙酸乙酯結晶，比例為積雪草總苷溶液的體積(ml)∶乙酸乙酯的體積(ml)＝1∶1～100。按常規(guī)方法減壓濃縮至干，得白色粉末狀積雪草總苷。用積雪草苷和羥基積雪草苷的標準品和HPLC法檢測所提雪草總苷中積雪草苷和羥基積雪草苷的含量。所得的積雪草總苷，其中積雪草苷和羥基積雪草苷的含量超過40％以上，可以滿足制備防治心臟病藥物的要求。
積雪草總苷的功能活性試驗方案和結果如下(1)利用離體大鼠心臟缺氧/再灌損傷模型，給積雪草總苷5mg/kg、10mg/kg、積雪草甙或羥基積雪草甙各5mg/kg，使冠脈流量明顯增加，心率保持不變或減慢，心臟跳動規(guī)則，梗塞面積明顯縮小，從對照組的33.7％下降到積雪草總苷10mg/kg組的10.9％，效果極為顯著。
(2)利用結扎大鼠冠脈引起急性心肌梗塞病理模型，觀察積雪草苷和羥基積雪草苷的保護心肌作用。結果發(fā)現(xiàn)，結扎前1h灌服積雪草總苷20mg/kg、40mg/kg積雪草甙或羥基積雪草甙各20mg/kg、20mg/kg，能使冠脈結扎后大鼠比結扎前心率均有所減慢，大鼠心電圖像S-T段、T波下降，大鼠血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)值均比對照組降低，對心肌梗塞面積有明顯的縮小作用。心肌梗死面積從對照組的36.5％下降到積雪草總苷40mg/kg組的13.6％，效果非常顯著。
(3)利用結扎犬冠狀動脈左前降支中段引起犬心肌梗死模型，觀察積雪草苷和羥基積雪草苷的抗心肌梗死作用。結果發(fā)現(xiàn)，積雪草總苷能明顯減少結扎冠脈造成的心肌梗死區(qū)重量，與對照組比較下降49.2％，同時使反映心肌損害范圍的生化代謝指標LDH及CK活性明顯下降。
(4)利用大鼠急性局灶性腦缺血模型觀察積雪草總苷的療效。將吸有50％三氯化鐵溶液(1mol/L鹽酸)的小片定量濾紙敷于大鼠大腦中動脈上制備腦血栓形成模型。造模前連續(xù)給藥3天，實驗動物分成正常對照組、模型對照組、積雪草總苷20mg/kg、積雪草總苷40mg/kg、積雪草苷20mg/kg組、羥基積雪草苷20mg/kg組。結果發(fā)現(xiàn)，積雪草總苷、積雪草苷和羥基積雪草苷均能明顯縮小腦梗死面積，能明顯降低大腦中動脈栓塞大鼠腦的含水量。
在本發(fā)明中，若非特指，所有的量、份和百分比均為重量單位，所有的設備和原材料等均可從市場購得或是本行業(yè)常用的。
以下結合實施例詳述本發(fā)明，但實施例僅用于說明并不能限制本發(fā)明的范圍。
具體實施例方式
實施例1 積雪草總苷的制備取1公斤新鮮干的積雪草粉碎，用3升的75％乙醇先浸泡過夜，再回流2小時，共進行3次，回收乙醇，常規(guī)減壓濃縮得浸膏。把浸膏加3升去離子水溶解，再將水溶解液加到脫色樹脂，收集流出液，再用60％乙醇溶液通過該脫色樹脂后收集乙醇洗脫液，合并上述的流出液和乙醇洗脫液。將上述合并的液體減壓濃縮至于，得粘稠狀物。用500毫升分析純甲醇溶解上述粘稠狀物，得積雪草總苷溶液。再用4升分析純乙酸乙酯結晶，于40℃真空干燥，得到21.1克白色粉末狀固體。
實施例2 膠囊劑的制備積雪草總苷原料300克，藥用淀粉1000克，攪拌均勻，裝入0號膠囊，每粒0.3克，每次口服2粒，每日1-3次。
實施例3 片劑制備積雪草總苷原料200克，藥用淀粉1000克，攪拌均勻，用適量乙醇制粒，經(jīng)整粒，壓片，每片0.2克，口服，每次2片，每日1-3次。
實施例4 口服液的制備積雪草總苷原料5克，加少量蒸餾水溶解，再加甜菊甙20克，邊攪拌邊加蒸餾水至體積1000ml，灌封，滅菌即得。每支10ml，每次1支，每日1-2次。
實施例5 口服液的制備積雪草總苷原料10克，加少量蒸餾水溶解，再加甜菊甙15克，邊攪拌邊加蒸餾水至體積1000ml，灌封，滅菌即得。每支10ml，每次1支，每日1-2次。
實施例6 沖劑的制備積雪草總苷原料10％，加甜菊甙及其它輔料90％，充分攪拌均勻，經(jīng)20目篩制粒，冷凍，干燥，分別裝入小塑料袋內(nèi)，每袋40克，輻射滅菌，即成。所述輔料選自淀粉，糊精，香精等。
實施例7 保健餅(或糕)的制備(1)配方(a)積雪草總苷原料5％，面粉93％，甜味劑2％；(b)積雪草總苷原料10％，面粉54％，玉米粉35％，甜味劑1％；(c)積雪草總苷原料15％，面粉53.5％，蕎麥粉30％，甜味劑1.5％。
(2)制法按食療(保健)作用的要求，分別選取上述配方之一，稱取后拌勻，加入食用小蘇打和水適量，揉成面團，放置1-2小時(室溫低于15℃時，放置2小時)，將面團投入成型機內(nèi)或手工制成各種形狀的餅或糕坯，將坯裝盤或入爐烘烤，或上籠蒸熟，約30分鐘即成。
實施例8 保健掛面的制備積雪草總苷原料2％，其余為面粉和少量輔料，先用溫水對積雪草總苷原料進行溶解，然后與面粉進行混合攪拌，捏和，壓面，進入烘干室掛干。烘干過程采用低溫定條，高溫烘干，低溫冷卻三個階段。冷卻后即成型。分裝為70-100克一包的掛面產(chǎn)品。輔料為各式調料，每一小包中添加乳酸鈣粉0.1-2g。
實施例9 積雪草總苷對離體大鼠心臟缺氧/再灌注損傷的影響Wistar清潔大鼠，雄性，體重200-240g。積雪草總苷自行制備，對照品積雪草苷(純度大于95％)和羥基積雪草苷(純度大于95％)購自中國藥品生物制品檢定所。積雪草總苷和羥基積草苷用生理鹽水溶解，積雪草苷用無水乙醇溶解，再用生理鹽水稀釋，乙醇終濃度為0.1％(V/V)。紅四氮唑(TTC)由上海試劑三廠生產(chǎn)，磷酸鉀鹽緩沖液(pH7.8)自配，肝素鈉注射液，上海第一生化藥業(yè)公司，乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒、磷酸肌酸激酶(CK)試劑盒由中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)。Langendorff灌流裝置，日本光電心電圖儀，SABA-18全自動生化分析儀。
取體重為200-240g的大鼠，腹腔注射500U/kg肝素抗凝，15min后注射異戊巴比妥鈉(30mg/kg)麻醉，迅速在打開胸腔，暴露心臟，剪破心包膜，分離出心臟后輕輕提起，于主動脈根部5-7mm處用彎頭組織剪迅速剪斷上下腔靜脈，肺動脈，主動脈及心臟周圍組織，摘出心臟，置于預冷(4℃)的K-H液中，用手指輕輕擠壓心臟，使心臟內(nèi)剩余血液排出，以防止凝血塊形成而堵塞血管，將主動脈用絲線固定于灌流裝置的套管上。以37.5℃的灌流液恒壓(壓力高度為75cm水柱)進行逆行灌流。Krebs-Henseleit(K-H)平衡營養(yǎng)液，組成成分為(mmol/L)NaCl118，KCl4.63，MgCl21.2，CaCl24.8，NaHCO325，KH2PO41.17，葡萄糖11.0，實驗前先將營養(yǎng)液通入95％O2和5％CO2的混合氣10min進行充分飽和，氣流量為1.0L/min，pH7.4。在實驗過程中，心臟放在玻璃小室中以保持在38±1℃的外環(huán)境中。剪去心臟周圍的附著組織，在肺動脈起始部和右室圓錐部位剪開一小口，有利于冠脈回流液的排出，用刻度量杯測量流出液即冠脈流量。定時收集冠脈流出液，記錄1min冠脈流量(CF)，用全自動生化儀測定流出液的乳酸脫氫酶(LDH)和磷酸肌酶(CK)含量。分別在左心室部和右心房部插入鉑金電極，描記心電圖II導聯(lián)，用于觀察心率(HR)、S-T段、T波、R波、Q-T間期的變化。心臟逆行灌流10min為平衡時間，利用恒流泵將5ml生理鹽水或藥液(1mg或2mg藥量)以0.5ml/min的速度同灌流液灌入心臟內(nèi)，給藥10min后于冠狀動脈前降支根部穿一根000號絲線，連同1mm直徑塑料棒一起結扎，30min后取出塑料棒，使冠狀動脈前降支支配的心肌再通60min。實驗結束后，將心臟取下切成0.1cm厚的5片，將心肌片放在1％的TTC磷酸緩沖溶液中，pH 7.8，在37℃溫孵15min，正常心肌染為紅色，梗死區(qū)的心肌不著色或淺著色，染色后將心肌片放入10％甲醛溶液中固定。用電子天平稱取全心重，再剪取未著色區(qū)(梗死區(qū)心肌)稱重，計算心肌梗塞面積。心肌梗塞面積(％)＝梗塞重(mg)/全心重(mg)×100％。
結果發(fā)現(xiàn)，積雪草總苷能使冠脈流量增加，其中以積雪草總苷10mg/kg劑量組和積雪草苷、羥基積雪草苷增加明顯，均比對照組高(表1)，表明積雪草總苷抗心肌梗死的活性。
表1積雪草總苷對大鼠離體心臟缺氧再灌注所致冠脈血流量變化的影響組別劑量 冠脈血流量(ml/min)mg/kg 平衡期給藥期5min 給藥期10min L15min L30minR15min R30min對照組 - 10.1±1.6 - 8.6±1.86.6±1.4 5.9±1.0 7.3±1.8 6.4±2.0積雪草總苷 5 9.2±1.2 10.5±2.0 10.2±1.2*8.5±1.5*9.0±1.5*8.2±2.g7.8±1.2積雪草總苷 10 9.5±1.5 11.2±1.8 10.6±2.1*9.5±1.0**9.8±1.2**9.0±1.0*8.8±1.8*積雪草苷5 11.0±2.0 11.5±2.5 9.5±2.5*9.2±1.8*9.2±1.2**9.0±2.5*8.5±2.0*羥基積雪草苷5 12.5±0 11.0±2.0 9.8±2.2*9.5±1.5*8.0±2.0*8.0±2.1*8.2±2.8*注與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。L結扎；R再灌給積雪草總苷、積雪草苷和羥基積雪草苷后，各組心率均略有所減慢。結扎和再灌后對照組心臟心率變慢(表2)。積雪草總苷和積雪草苷、羥基積雪草苷可使心率加快或保持正常。
表2積雪草總苷對大鼠離體心臟缺氧再灌注所致心率變化的影響組別 劑量 心率(次/min)mg/k 平衡期 給藥L30min R15min R30min R60ming 10min對照組-246±42224±40 184±54 181±25 191±34 173±52積雪草總苷5237±34222±41 211±92 210±60 210±56 200±64積雪草總苷10 250±40232±25 216±22*225±29 239±18*228±51積雪草苷 5243±18210±30 232±25*233±70*224±68 250±33羥基積雪草苷 5237±48220±40 237±82*294±114*257±47*228±93注與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。L結扎；R再灌積雪草總苷、積雪草苷和羥基積雪草苷均能使心肌梗死面積縮小(表3)，積雪草總苷高劑量組與積雪草苷組和羥基積雪草苷組效果相似。
表3積雪草總苷對大鼠離體心臟缺氧再灌注所致心肌梗塞面積的影響組別 劑量(mg/kg) 全心濕重(mg) 梗死區(qū)濕重(mg) 心肌梗死面積％對照組- 720.3±68.2247.8±84.9 33.7±9.3積雪草總苷5 680.2±33.9100.5±25.7*17.9±6.9**積雪草總苷10605.5±21.977.5±19.2***10.9±3.6***積雪草苷 5 674.2±24.170.8±39.8***9.4±3.0***羥基積雪草苷 5 634.4±34.172.2±24.2***10.1±2.2***注與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
實施例10 積雪草總苷對結扎大鼠冠狀動脈引起急性心肌梗塞的影響Wistar清潔大鼠，雄性，體重200～240g。對照品積雪草苷(純度大于95％)和羥基積雪草苷(純度大于95％)購自中國藥品生物制品檢定所。紅四氮唑(TTC)由上海試劑三廠生產(chǎn)，磷酸鉀鹽緩沖液(pH7.8)自配，戊巴比妥鈉，上海化學試劑公司，乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒、磷酸肌酸激酶(CK)試劑盒由中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)。實驗儀器HXQ-1人工呼吸機，日本光電心電圖儀，SABA-18全自動生化分析儀，IEC離心機。
取200～240g大鼠，分組①模型對照組；②積雪草總苷20mg/kg組、③積雪草總苷40mg/kg組。②積雪草苷20mg/kg組、③羥基積雪草苷20mg/kg組。用1％羧甲基纖維素鈉混勻灌服給藥，1小時后，戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔淺麻醉，背位固定。用大半個橡皮球(大小正好套住大鼠頭頸部)連接到人工呼吸機，進行人工呼吸。胸部去毛、消毒、沿左鎖骨中線縱行切開皮膚約2cm，在第四或第五肋間鈍性分離肌層，打開胸腔，剪開心包，輕壓右側胸廓，擠出心臟。在動脈圓錐與左心耳之間冠狀靜脈處結扎前降支后，把心臟放回胸腔。迅速關閉胸腔，停止人工呼吸，用食指和拇指輕輕擠壓胸部，使心臟跳動恢復正常，放置動物籠內(nèi)進行觀察。使用心電圖儀分別記錄結扎前，結扎后2h、4h、6h心電圖，用于觀察S-T段變化。結扎6小時，用戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔淺麻醉后，打開腹腔，從下腔靜脈抽取5ml靜脈血，用離心機以3000轉/分，離心20分鐘，取血清，利用全自動生化儀測定血清乳酸脫氫酶(LDH)和磷酸肌酶(CK)的含量。實驗結束后，將大鼠心臟取出放置在心肌切片模具內(nèi)，切成0.1cm厚的5片放入1％的TTC磷酸緩沖溶液中，pH7.8，在37℃溫孵15min，正常心肌染為紅色，梗死區(qū)的心肌不著色或淺著色，染色后將心肌片放入10％甲醛溶液中固定，拍攝心肌梗塞影相。用電子天平稱取全心重、左心重，再剪取未著色區(qū)(心肌梗死區(qū))稱重，計算心肌梗塞面積。
全心肌梗塞面積(％)＝梗塞重(mg)/全心肌重(mg)×100％左心肌梗塞面積(％)＝梗塞重(mg)/左心肌重(mg)×100％結果發(fā)現(xiàn)，積雪草總苷、積雪草苷和羥基積雪草苷對心臟結扎冠脈大鼠S-T段均有下降作用，其中在結扎2h和4h較為明顯(表4)。
表4積雪草總苷對大鼠心臟結扎冠脈所致S-T段變化的影響組別劑量動物數(shù) S-T段抬高(mm)mg/kg (只) 結扎前 結扎2h 結扎4h結扎6h對照組 -60 3.1±1.5 1.2±0.7 1.2±1.0積雪草總苷 20 60 2.0±1.3*1.0±0.4 0.9±0.6積雪草總苷 40 60 1.4±0.4**0.8±0.3*0.7±0.2*積雪草苷20 60 1.2±0.4***0.4±0.2**0.8±0.4羥基積雪草苷20 60 1.1±1.8**0.5±0.3**0.5±0.3*注與對照組比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
積雪草總苷高劑量組、積雪草苷組和羥基積雪草苷組大鼠血清中CK、LDH值均比對照組低(表5)。
表5 積雪草總苷對大鼠心臟結扎冠脈所致CK、LDH值變化的影響組別劑 量動物數(shù) LDH(U/L) CK(U/L)(mg/kg)對照組 -6 1727.3±205.7 4216.6±443.5積雪草總苷 20 6 1510.1±203.2 3420.1±430.4積雪草總苷 40 6 1203.4±210.2*2451.4±203.6*積雪草苷20 6 1152.2±122.6*2153.2±1127.8*羥基積雪草苷20 6 1101.3±224.2*2082.5±786.8*注與對照組比，*P＜0.05。
積雪草總苷、積雪草苷和羥基積雪草苷對心臟結扎冠脈大鼠模型心肌梗塞面積有明顯的縮小作用(表6)。
表6積雪草總苷對大鼠心臟結扎冠脈所致心肌梗塞面積的影響組別 給藥劑量 動物數(shù) 心肌梗塞面積(％)(mg/kg) (只)占左心室面積 占左心室面積對照組 -6 36.5±3.5 31.4±2.2積雪草總苷 20 6 20.1±2.7*19.2±2.1*積雪草總苷 40 6 13.6±3.2**13.2±1.9**積雪草苷 20 6 14.6±4.0**12.8±3.5**羥基積雪草苷 20 6 14.9±3.6**12.8±2.9**注與對照組相比，**P＜0.05，**P＜0.01，實施例11 積雪草總苷對犬急性心肌梗死的影響造擇健康成年家犬36只，雌雄兼用，禁食過夜，隨機分為6組，每組6只。分組及給藥劑量見表。灌服給藥3小時后將家犬用烏拉坦麻醉并固定于手術臺，行氣管插管術，連接人工呼吸機，然后于左側第4肋間開胸暴露心臟，剪開心包膜并結扎冠狀動脈左前降支中段。6小時后，取血測定LDH和CK的活性；再取出全心稱重并橫切成若干薄塊，放進1％氯化三苯基四氮唑(TTC)溶液作大體標本染色10min，正常心肌被染為深紅色，梗死區(qū)不著色。仔細剪下不著色的心肌并稱重，計算心肌梗死部分占全心重量的百分比，見表1。結果表明，積雪草總苷能明顯縮小結扎冠脈造成的心肌梗死范圍，同時使反映心肌梗死損害范圍的生化代謝指標LDH及CK活性明顯下降(表7)。
表7積雪草總苷對冠脈結扎所致犬心肌梗死的影響組別劑量梗死區(qū)重量百分比LDH(U/L) CK(U/L)生理鹽水- 20.1±4.3 387.3±23.2 121.2±23.1積雪草總苷 10mg/kg 12.3±4.2*301.1±32.1*89.0±12.1*積雪草總苷 20mg/kg 10.2±2.6*254.1±26.9*72.1±15.8**積雪草甙10mg/kg 8.8±3.2**236.9±21.1*70.1±16.5**羥基積雪草甙10mg/kg 8.4±2.6**220.1±25.7**68.9±19.2**復方丹參片 1.5片/kg13.1±3.8*289.0±21.9*82.1±17.9*注與生理鹽水對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01
實施例12 積雪草總苷對大鼠急性局灶性腦缺血的影響Wistar大鼠，雄性，體重210±20克。二級。分為2批進行。試劑氯代三苯基四氮唑(TTC)北京化工廠生產(chǎn)。每批動物按體重隨機分為8組正常對照組、模型對照組、積雪草總苷20mg/kg、積雪草總苷40mg/kg、積雪草苷20mg/kg組、羥基積雪草苷20mg/kg組。每組12只。按體重灌胃給予各藥液0.5ml/100g體重，正常對照組和模型對照組給予等體積生理鹽水水，均連續(xù)給藥3天。于第2天藥后1h，戊巴比妥鈉(35mg/kg)腹腔注射麻醉。按文獻方法，暴露大鼠右側大腦中動脈，將吸有50％三氯化鐵溶液(1mol/L鹽酸)的小片定量濾紙敷于大腦中動脈上，用解剖顯微鏡觀察血栓形成后取下濾紙，縫合創(chuàng)口。對照組除不敷蓋三氯化鐵濾紙外，其余手術步驟同模型組。造模后23h再灌胃給藥1次。于造模后24h，斷頭取腦。腦梗塞面積的測定大鼠斷頭后迅速取出全腦，除去嗅球、小腦和低位腦干，剩余部分在4℃下冠狀切成5片。迅速將腦片置于TTC染液中(每5ml染液中含4％TTC 1.5ml，1mol/L K2HPO40.1ml)，37℃避光溫孵30min，取出后置于10％甲醛溶液中避光保存。經(jīng)染色后非缺血區(qū)為玫瑰紅色，梗塞區(qū)為白色。將白色組織仔細分離稱重，以梗塞組織重量占總腦重量的百分比作為腦梗塞面積。腦含水量的測定大鼠斷頭后迅速取出全腦，取右半腦球，稱濕重，110℃烘干24h，稱干重，計算腦含水量。
結果發(fā)現(xiàn)，積雪草總苷、積雪草苷和羥基積雪草苷均能明顯縮小腦梗死面積，能明顯降大腦中動脈栓塞引起的腦含水量。
表8積雪草總苷對大鼠急性局灶性腦缺血的影響組 別 劑量(mg/kg)動物 腦梗塞面積(％) 腦含水量(％)正常對照 - 100.01±0.00277.1±0.4模型對照 - 105.12±1.34#80.1±1.4#積雪草總苷 20 103.14±1.21*79.5±1.2積雪草總苷 40 102.12±1.29**78.1±2.1*積雪草甙 20 102.34±1.22**78.0±1.5*羥基積雪草甙 20 102.46±1.09*79.1±1.3*注與正常對照組比較，#P＜0.05；與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01本發(fā)明提供的含有積雪草總苷的保健品，能起到保護心腦血管，延緩衰老的作用，且功能確切，服用方便，為中老年人群提供了一種新型、可靠的保健品，對提高人們的生活質量，具有有益的效果。
權利要求
1 一種輔助防治心、腦血管疾病的保健品，其特征在于含有0.4-40％的積雪草總苷作為活性成分配以食品和藥品所允許的輔料和/或添加劑制成的食品或醫(yī)藥上可接受的口服劑。
2 根據(jù)權利要求1所述的防治心、腦血管疾病的保健品，其特征在于含有1-30％的積雪草總苷作為活性成分配以食品和藥品所允許的輔料和/或添加劑制成的食品或醫(yī)藥上可接受的口服劑。
3 根據(jù)權利要求1所述的防治心、腦血管疾病的保健品，其特征在于含有5-25％的積雪草總苷作為活性成分配以食品和藥品所允許的輔料和/或添加劑制成的食品或醫(yī)藥上可接受的口服劑。
4 根據(jù)權利要求1-3之一所述的保健品，其特征在于所述的積雪草總苷中積雪草苷和羥基積雪草苷的含量之和大于或等于40％。
5 根據(jù)權利要求1-3之一所述的保健品，其特征在于口服劑為膠囊劑，每顆膠囊重0.25-0.35克，含有積雪草總苷10-40％，藥用輔料60-90％。
6 根據(jù)權利要求1-3之一所述的保健品，其特征在于口服劑為片劑，每片重量為0.15-0.25克，含有積雪草總苷10-40％，藥用輔料60-90％。
7 根據(jù)權利要求1-3之一所述的保健品，其特征在于口服劑為口服液，含有積雪草總苷0.4-2％，天然甜味劑15-25％，其余為水。
8 根據(jù)權利要求1-7之一所述的保健品，其特征在于所述積雪草總苷是采用如下制備方法從積雪草中制得(1)將積雪草粉碎后用75％乙醇回流，2小時共3次；(2)回收乙醇得浸膏；(3)浸膏加去離子水溶解；(4)將上述水溶解液通過脫色樹脂脫色，收集流出液，再用乙醇溶液通過該脫色樹脂后收集乙醇洗脫液，合并上述的流出液和乙醇洗脫液；(5)將上述合并的液體減壓濃縮至干，得粘稠狀物；(6)用甲醇溶解上述粘稠狀物，比例為粘稠狀物(kg)∶甲醇的體積(ml)＝1∶100～500，得積雪草總苷溶液；(7)將上述積雪草總苷溶液用乙酸乙酯結晶，比例為積雪草總苷溶液的體積(ml)∶乙酸乙酯的體積(ml)＝1∶1～100。按常規(guī)方法減壓濃縮至干，得白色粉末狀積雪草總苷。
全文摘要
本發(fā)明涉及保健品技術領域，具體是將積雪草總苷制備輔助防治冠心病、心絞痛、心肌梗死、腦血栓形成、腦梗塞等心腦血管疾病的保健食品。所述的積雪草總苷中積雪草苷和羥基積雪草苷含量之和大于或等于40％。本發(fā)明所述的積雪草總苷加入添加劑后可制成膠囊、片劑、口服液等多種保健食品劑型。
文檔編號A61K31/704GK1582951SQ20041004648
公開日2005年2月23日 申請日期2004年6月10日 優(yōu)先權日2004年6月10日
發(fā)明者崔福貴 申請人:崔福貴