專利名稱：一種抗血小板藥物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種抗血小板藥物及其在制備預(yù)防或治療動(dòng)脈血栓形成性疾病的抗血小板藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
動(dòng)脈血栓形成性疾病在當(dāng)今世界各國(guó)的發(fā)生率及由此造成的死亡率一直居高不下。由于血小板的活化聚集在血栓形成的發(fā)生和發(fā)展過程中起著重要的作用，因此，抗血小板藥是防治上述疾病的有效藥物。隨著對(duì)血小板形態(tài)功能方面的研究日益深化，世界各國(guó)對(duì)抗血小板藥的研究與開發(fā)也格外關(guān)注。研究和開發(fā)抗血小板新藥，是人民身體健康的需要，對(duì)促進(jìn)國(guó)民經(jīng)濟(jì)和醫(yī)藥工業(yè)的發(fā)展有著十分重要的意義。植物在長(zhǎng)期的生物進(jìn)化過程中，形成了大量結(jié)構(gòu)獨(dú)特、具有各種生理作用的活性物質(zhì)。這些天然活性物質(zhì)與合成化合物相比具有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，是創(chuàng)新藥物研究的重要源泉。因此，充分利用中國(guó)豐富的藥用植物資源及在應(yīng)用上積累的數(shù)千年的寶貴經(jīng)驗(yàn)，從植物中尋找天然活性先導(dǎo)化合物，研究和開發(fā)新型的抗血小板藥物，是一條十分重要的有效途徑。目前用于臨床治療的抗血小板藥已有很多，最常用的是阿司匹林和塞氯匹定，但由于對(duì)胃腸道的毒副作用限制了它們的應(yīng)用，其它抗血小板藥也大多局限于對(duì)抗單一的激動(dòng)劑。因此，臨床上急需毒副作用相對(duì)較小而療效確切的抗血小板新藥。迄今為止，沒有關(guān)于獨(dú)活屬素(Heraclenin)作為有效成分治療動(dòng)脈血栓形成性疾病的抗血小板藥物的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種含有預(yù)防或治療動(dòng)脈血栓形成性疾病的抗血小板藥物有效量的式I化合物獨(dú)活屬素及可藥用載體和/或賦形劑。本發(fā)明的化合物獨(dú)活屬素具有原料新、藥效高、毒性低的優(yōu)點(diǎn)。
為了達(dá)到本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案一種抗血小板藥物，其中含有預(yù)防或治療動(dòng)脈血栓形成性疾病的抗血小板藥物有效量的式I化合物獨(dú)活屬素及可藥用載體和/或賦形劑。
式I本發(fā)明同時(shí)提供了上述化合物在制備預(yù)防或治療動(dòng)脈血栓形成性疾病的抗血小板藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的化合物獨(dú)活屬素用作藥物上時(shí)，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用，該藥物組合物含有0.1-99％，優(yōu)選0.5-90％的獨(dú)活屬素，其余為藥物學(xué)上可接受的、對(duì)人和動(dòng)物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
所述的藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、超填料以及藥物制品輔劑。將所述的有效部位以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明的藥物可經(jīng)口服給藥。
口服可用其固體或液體制劑，如片劑、散劑、糖衣劑、膠囊、溶液、乳劑、糖漿、滴丸劑等。
具體實(shí)施例方式為了更好地理解本發(fā)明，下面將用本發(fā)明的式I化合物獨(dú)活屬素及其與藥物載體和/或賦形劑組成的藥物的生物活性結(jié)果來說明它在醫(yī)藥領(lǐng)域中的應(yīng)用。
(1)對(duì)獨(dú)活屬素(簡(jiǎn)稱HRN)通過口服途徑給藥的毒性進(jìn)行了研究，結(jié)果表明HRN的毒性較小，其LD50為1.22mg/kg(見表1)。
(2)對(duì)獨(dú)活屬素的主要藥效進(jìn)行了研究，結(jié)果如下對(duì)獨(dú)活屬素體外、體內(nèi)(十二指腸給藥)抗血小板聚集活性及作用機(jī)制作了研究，結(jié)果表明(a)HRN體外明顯抑制花生四烯酸(AA)誘導(dǎo)的兔血小板聚集，并具有濃度依賴性，其IC50為23.6±4.5μM，阿司匹林抑制AA誘導(dǎo)聚集的IC50為35.2±8.6μM(見表2)；HRN對(duì)二磷酸腺苷(ADP)和血小板活化因子(PAF)誘導(dǎo)的血小板聚集也有一定的抑制作用，但活性較弱，其IC50分別為351.7±92.9μM和445.0±277.8μM(見表3)，提示HRN體外對(duì)AA誘導(dǎo)的血小板聚集有較高的選擇性；(b)HRN經(jīng)十二指腸給藥進(jìn)行體內(nèi)活性研究發(fā)現(xiàn)50mg/kg的HRN給藥后30-180min對(duì)AA引起的家兔血小板聚集均無明顯影響(P＞0.05與給藥前或同時(shí)間點(diǎn)的2％羧甲基纖維素鈉組比較)；100mg/kg的HRN給藥后，于60min起效(aP＜0.05與給藥前或同時(shí)間點(diǎn)的2％羧甲基纖維素鈉組比較)，至給藥后90和120min達(dá)最大抑制效應(yīng)(bP＜0.01與給藥前或同時(shí)間點(diǎn)的2％羧甲基纖維素鈉組比較)，至180min時(shí)則無顯著影響；HRN在200mg/kg劑量時(shí)，于給藥后30min即明顯降低AA誘導(dǎo)的血小板聚集率，90min時(shí)達(dá)最強(qiáng)抑制作用，藥效可持續(xù)至120min。與100mg/kg HRN組相比，200mg/kg組在給藥后30-120min時(shí)間段的血小板聚集率均明顯降低。20mg/kg的阿司匹林十二指腸給藥后30-180min均顯著抑制AA引起的血小板聚集，且90-180min內(nèi)的聚集率均明顯低于200mg/kg HRN組(cP＜0.05與200mg/kg的HRN組比較)。結(jié)果表明HRN在體內(nèi)明顯抑制AA引起的血小板聚集，并與劑量呈正相關(guān)性(見表4)。綜合HRN在體外和體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，提示HRN對(duì)血小板聚集表現(xiàn)為選擇性的抑制血小板活化反應(yīng)。AA通過其代謝產(chǎn)物血栓素B2(thromboxane B2，TXB2)來引起血小板活化，包括血小板粘附、聚集和活性物質(zhì)的釋放。HRN在體內(nèi)外均選擇性明顯抑制AA誘導(dǎo)的血小板聚集，提示HRN可能通過AA代謝通路而發(fā)揮抗血小板作用的。HRN體內(nèi)外均顯示明顯抗血小板聚集活性，毒性較小，HRN或其衍生物能制成抗血小板新藥。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合本發(fā)明的實(shí)施例來進(jìn)一步對(duì)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容和有益效果進(jìn)行說明，但本發(fā)明的技術(shù)方案并不局限于此。
實(shí)施例1獨(dú)活屬素的提取分離取白亮獨(dú)活藥材的根部10公斤，粉碎后置于50升滲濾罐中，用40升丙酮在室溫下滲濾提取三次(三次共用120升)，每次24小時(shí)。合并滲濾提取液(約100升)，在50℃以下濃縮至體積約為1升，拌800克硅膠后進(jìn)行硅膠柱層析分離(硅膠為200-300目，柱規(guī)格為0.015×2.0米)，用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，用薄層層析法追蹤所需的化合物。石油醚-乙酸乙酯(2∶1)洗脫部分經(jīng)回收溶劑后得獨(dú)活屬素粗品22克，在丙酮中重結(jié)晶三次得獨(dú)活屬素純品15克(純度＞98％)，得率0.15％(以植物干樣計(jì)算)。
實(shí)施例2按實(shí)施例1制得獨(dú)活屬素，按獨(dú)活屬素與賦形劑重量比1∶1的比例加入賦形劑，制粒壓片。
實(shí)施例3按實(shí)施例1制得獨(dú)活屬素，按獨(dú)活屬素與賦形劑重量比1∶2的比例加入賦形劑，制粒壓片。
實(shí)施例4片劑獨(dú)活屬素 100mg淀粉 100mg玉米漿 適量硬脂酸鎂 適量實(shí)施例5按實(shí)施例1制得獨(dú)活屬素，按常規(guī)膠囊制劑方法制成膠囊。
實(shí)施例6膠囊劑獨(dú)活屬素100mg淀粉100mg葡萄糖 200mg硬脂酸鎂適量制備方法將獨(dú)活屬素與助劑研勻混合，過篩，在合適的容器中均勻混合，把得到的混合物裝入硬明膠膠囊。
實(shí)施例7散劑獨(dú)活屬素 100mg淀粉100mg蔗糖200mg制備方法將獨(dú)活屬素、淀粉、蔗糖研細(xì)，混合均勻，過篩，分包即得。
表1.HRN灌胃對(duì)ICR小鼠的急性毒性試驗(yàn)劑量(g/kg) 總數(shù) 死亡數(shù) LD50(g/kg)2 1081.61071.221.28 1051.024 1030.819 101LD50代表半數(shù)致死量。HRN按0.8的劑間比給小鼠以0.4mL/10g體重灌胃，觀察灌胃后7天內(nèi)動(dòng)物所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及其死亡數(shù)。
表2.HRN體外對(duì)AA誘導(dǎo)的兔血小板聚集的影響(x±s，n＝4)血小板聚集率％(血小板聚集抑制率％)Drug(□M)HRN Aspirin0 80.5±2.8 73.1±1.57.5 71.9±2.5(10.7±1.1) 58.1±2.3**(20.0±2.7)1557.9±2.3**(28.0±4.5) 54.0±1.7**(25.7±2.2)3036.1±1.6**(55.2±2.5) 46.8±1.3**(35.5±2.0)607.1±0.6**(91.2±0.6)30.1±1.3**(58.5±1.6)120 4.6±1.4**(94.3±1.6)12.0±1.2**(83.5±1.6)240 3.02±1.0**(96.3±1.1)**6.3±2.1**(91.3±2.9)IC5023.6±4.5 35.2±8.6*P＜0.05，**P＜0.01，與對(duì)照相比(t-test)
表3.HRN體外對(duì)PAF和ADP誘導(dǎo)的兔血小板聚集的影響(x±s，n＝4)血小板聚集率％(血小板聚集抑制率％)Drug(□M)PAFADP0 67.6±2.2 62.±13.430 57.1±4.3(8.2±2.1)60 63.8±1.4(5.6±2.1)50.5±3.4*(18.8±1.5)120 52.1±1.5**(22.7±4.5)43.9±3.4**(29.2±6.2)240 42.2±2.9**(37.6±2.9)39.3±4.7**(36.5±9.0)480 37.3±2.8**(44.8±3.3)25.8±3.0**(58.4±5.5)IC50445.0±277.8 351.7±92.9*P＜0.05，**P＜0.01，與對(duì)照相比(t-test)表4.HRN十二指腸給藥對(duì)AA誘導(dǎo)兔血小板聚集功能的影響劑量 血小板聚集率(％)組別(mg/kg)0min 30min 60min 90min 120min180min2％PEG 等體積 65.6±4.2 64.1±3.2 65.1±3.5 64.1±2.6 64.0±3.6 62.5±3.2HRN 50 66.9±2.6 65.9±4.4 65.6±2.4 64.5±1.6 65.0±3.6 64.1±0.910066.2±4.4 62.6±4.9 52.9±2.9a43.3±5.1b46.3±4.4b63.8±3.720067.1±3.1 43.8±6.6b31.9±1.5b24.9±6.6bc44.7±5.9bc64.9±5.2c阿司匹林20 67.9±2.2 44.2±2.9b34.6±1.8b13.1±3.9b36.7±5.3b56.6±4.1an＝4，x±s，aP＜0.05，bP＜0.01與給藥前或同時(shí)間點(diǎn)的2％PEG(羧甲基纖維素鈉)組比較；cP＜0.05與阿司匹林組比較。
權(quán)利要求
1.一種抗血小板藥物，其中含有預(yù)防或治療動(dòng)脈血栓形成性疾病的抗血小板藥物有效量的式I化合物獨(dú)活屬素(Heraclenin)及可藥用載體和/或賦形劑。 式I
2.權(quán)利要求1式I化合物在制備預(yù)防或治療動(dòng)脈血栓形成性疾病的抗血小板藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
提供一種抗血小板藥物，其中含有抗血小板藥物有效量的式I化合物獨(dú)活屬素(Heraclenin)及可藥用載體和/或賦形劑，同時(shí)提供了式I化合物在制備預(yù)防或治療動(dòng)脈血栓形成性疾病的抗血小板藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K31/366GK1561998SQ20041002233
公開日2005年1月12日 申請(qǐng)日期2004年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月15日
發(fā)明者黎勝紅, 牛雪梅, 孫漢董, 林中文 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所