專(zhuān)利名稱(chēng)：多聚不飽和磷脂酰膽堿的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及多聚不飽和磷脂酰膽堿(Poly unsaturated PhosphatidylCholine，簡(jiǎn)稱(chēng)PPC)的用途，尤其涉及其在制藥領(lǐng)域中的用途。
背景技術(shù)：
多聚不飽和磷脂酰膽堿是從大豆提取和純化得到的成分多樣但成分分明的多烯磷脂酰膽堿(或稱(chēng)多烯卵磷脂)的混合物.多聚不飽和卵磷脂已在西歐多國(guó)被批準(zhǔn)用來(lái)治療慢性肝病。
多聚不飽和卵磷脂中含有72-76％的磷脂酰膽堿和24-28％的磷脂，在72-76％的磷脂酰膽堿中兩個(gè)最主要成分為雙亞油酸磷脂酰膽堿(32-42％)和棕櫚酸-亞油酸磷脂酰膽堿(18-19％)。
有報(bào)告指出，多聚不飽和卵磷脂對(duì)在狒猴中由酒精引起的肝纖維化和肝硬化有療效，其作用機(jī)理是促進(jìn)膠原的分解(Lieber CS.等，Gastroenterology，1994，106(1)152-9)。
還有報(bào)告指出，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular Endothelial GrowthFactor，簡(jiǎn)稱(chēng)VEGF)的過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致明顯的肝癌發(fā)展及新生血管的聚集，腫瘤增長(zhǎng)的程度與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因的表達(dá)有關(guān)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的抑制使已存在的腫瘤生長(zhǎng)受到遏制，而與原先腫瘤的大小無(wú)關(guān)。這些結(jié)果表明血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在與內(nèi)皮細(xì)胞有關(guān)的肝癌細(xì)胞發(fā)展中起著關(guān)鍵的作用(Yoshiji，H.等，Vascular endothelial growth factor tightlyregulates in vivo development of murine hepatocellular carcinoma cells，Hepatology 28(6)1489-96(1998))。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人等對(duì)多聚不飽和卵磷脂抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)進(jìn)行了深入的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，多聚不飽和卵磷脂可有效抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)，并進(jìn)而對(duì)治療和預(yù)防肝臟疾病有效，從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明的目的在于提供多聚不飽和卵磷脂的新用途，即在制藥中的新應(yīng)用。
更具體地說(shuō)，本發(fā)明提供多聚不飽和卵磷脂在制備血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)抑制劑中的用途，在制備肝臟疾病治療劑中的用途，以及含有多聚不飽和卵磷脂作為有效成分的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)抑制劑和肝臟疾病治療劑。
具體實(shí)施例方式
為更好地理解本發(fā)明，以下給出具體的實(shí)驗(yàn)例和制劑例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。
實(shí)驗(yàn)例1.實(shí)驗(yàn)藥物采用由Rhone-Poulenc Rorer GmbH(Cologne，Germany)公司生產(chǎn)的多聚不飽和卵磷脂，其組成如下表1所示。
表1PPC的組成

2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的形式使用8只小鼠(C57B6系)，靜脈注射右旋2-氨基半乳糖，按每公斤體重注射2克，成為右旋2-氨基半乳糖誘導(dǎo)的肝炎小鼠。
3.檢驗(yàn)在上述2中得到的肝炎小鼠模型中多聚不飽和卵磷脂對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的抑制作用將上述8只肝炎小鼠分成2組，每組4只。其中4只小鼠接受右旋2-氨基半乳糖，另外4只進(jìn)食含有多聚不飽和卵磷脂的食物，使每天多聚不飽和卵磷脂的進(jìn)食量在0.5～1.0毫克之間。五天之后，用部分肝臟切除術(shù)從每只小鼠的肝臟上切除一葉肝，從中提取出全部的RNA，用于定量RT-PCR分析。
調(diào)節(jié)RNA的濃度至OD260為0.1，然后用此濃度的RNA在PE7700序列檢測(cè)儀上做定量RT-PCR。
為此，設(shè)計(jì)一對(duì)PCR引物及一個(gè)適用于PE7700序列檢測(cè)儀的寡聚核苷酸熒光探針。其引物對(duì)的3′引物的序列是5′TCGGTGTTCCCAAAACTG-3′，5′引物的序列是5′-TTTTTTGTCCCACTTGGT3′，寡聚核苷酸熒光探針的序列為熒光標(biāo)記-5′-TCCCCTGCCCAAGAATGTGC-3′-熒光湮滅。耙位點(diǎn)的序列為VEGFcDNA序列的一部分，即5′-TTTTTTGTCCCACTTGGTGGGGCCAGGGTCCTCTCCCCTGCCCAAGAATGTGCAAGGCCAGGGCATGGGGGCAAAATATGACCCAGTTTTGGGAACACCGACA-3′。
在此實(shí)驗(yàn)中，VEGF cDNA每復(fù)制一次，Taq DNA合成酶利用其外切酶作用切下一個(gè)探針引物上的熒光分子，以此來(lái)定量RT-PCR。在RT-PCR實(shí)驗(yàn)初期，根據(jù)熒光發(fā)射量來(lái)推斷VEGF RNA的起始量。這樣，我們可以比較兩組實(shí)驗(yàn)小鼠的不同。
如附圖所示，兩組小鼠ΔCT的差異為3.1，相當(dāng)于多聚不飽和卵磷脂治療組的VEGF信號(hào)減少了10倍。這一數(shù)據(jù)有力地說(shuō)明，多聚不飽和卵磷脂可以明顯地降低肝組織的VEGF水平，抑制肝組織的血管增生。
制劑例膠囊使用由Rhone-Poulenc Rorer GmbH(Cologne，Germany)公司生產(chǎn)的多聚不飽和卵磷脂，按常法制成軟膠囊，每粒軟膠囊含0.18g多聚不飽和卵磷脂。


圖1是在右旋2-氨基半乳糖誘導(dǎo)的肝炎小鼠中用PPC治療和未治療組的對(duì)照?qǐng)D。圖中橫坐標(biāo)表示RT-PCR反應(yīng)的循環(huán)次數(shù)，縱坐標(biāo)表示熒光標(biāo)記的信使核糖核酸(mRNA)的拷貝數(shù)。
權(quán)利要求
1.多聚不飽和卵磷脂在制備血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)抑制劑中的用途，其中所述血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)抑制劑用于制備治療肝臟疾病的藥物，其中所述肝臟疾病是肝纖維化或肝硬化。
全文摘要
本發(fā)明提供一種多聚不飽和卵磷脂的在制備血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)抑制劑中的新用途，特別是在制備肝臟疾病治療劑中的新用途。含有該多聚不飽和卵磷脂的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)抑制劑可顯著降低受損肝組織中激發(fā)的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的水平，抑制肝組織的血管增生。
文檔編號(hào)A61P1/00GK1518987SQ200310119898
公開(kāi)日2004年8月11日 申請(qǐng)日期2000年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2000年6月2日
發(fā)明者托馬斯·文尼志, 托馬斯 文尼志 申請(qǐng)人:大連萬(wàn)友貿(mào)易有限公司