專利名稱：膠陀螺多糖，其制備方法和以該化合物為活性成分的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開一種膠陀螺多糖，同時提供了其制備方法和以該化合物為活性成分的藥物組合物，屬于中藥有效成分提取物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
膠陀螺(Jiaotuoluo，Bulgaria)為膠陀螺科真菌膠陀螺Bulgariainquinans(Pers.)Fr.的干燥子實體，又稱“豬嘴蘑”、“拱嘴蘑”。目前由于發(fā)現(xiàn)膠陀螺有很高的醫(yī)療價值，從中分離得到麥角甾醇、半乳糖醇和草酸等成分，對其藥用價值正在深入研究。用膠陀螺乙醇提取物制成的藥物制劑(陀螺銀消膠囊)具有治療銀屑病的作用。但用膠陀螺為原料，大量制備膠陀螺多糖，并制成藥物，用于抗腫瘤、升高白細胞、抗?jié)?、抗肝炎、增強免疫、降血脂的醫(yī)學(xué)臨床應(yīng)用未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種具有藥用價值的膠陀螺多糖。
本發(fā)明還提供了從膠陀螺或其菌絲體中提取上述物質(zhì)的制備方法，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明進一步提供了以活性膠陀螺多糖組分為主要藥物或與其他藥物組方用于抗腫瘤、升高白細胞、抗?jié)儭⒖垢窝?、增強免疫、降血脂的藥物?br> 膠陀螺多糖是通過以下提取方法獲得的將膠陀螺或其菌絲體粉碎，加4～8倍水煎煮2～4小時，過濾取濾液，反復(fù)2～4次，合并濾液，濃縮至1200～1800ml，放置，冷卻至室溫，經(jīng)活性炭過柱2次，收集流出液，濃縮至800～1500ml，加4～6倍乙醇沉淀，放置18～24小時，過濾，并加適量乙醇洗脫，將所得沉淀減壓干燥(溫度65～75℃，真空度0.085～0.095mPa)，即得膠陀螺多糖。
用酚硫酸法，在490nm紫外波長，以葡萄糖為對照品測得膠陀螺多糖的純度為35～55％。
經(jīng)過藥理學(xué)試驗篩選，上述化合物具有抗腫瘤、升高白細胞、抗?jié)?、抗肝炎、增強免疫、降血脂的藥理活性?br> 按藥劑學(xué)方法，可以將本發(fā)明的膠陀螺多糖制備成多種臨床藥物劑型作為抗腫瘤、升高白細胞、抗?jié)?、抗肝炎、增強免疫、降血脂的藥物，所說的藥劑是任何一種藥劑學(xué)上所說的劑型。
本發(fā)明的藥物組合物含有治療有效量的上述化合物為活性成分，以及含有一種或多種藥學(xué)上可以接受的載體。
上文的載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，包括稀釋劑、賦型劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體。
本發(fā)明可以組合物的形式通過口服、直腸、靜脈、肌肉注射或胃腸外給藥方式施用于這種治療的患者。按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備各種劑型如片劑、顆粒劑、沖劑、膠囊、栓劑、噴霧劑、緩釋劑和注射劑。也可使其活性成分與一種或多種載體或藥物混合，自成所需劑型。
本發(fā)明的藥物優(yōu)選含有1％-99％的膠陀螺多糖和99％-1％的賦型劑(包括其他配伍用的藥物)，優(yōu)選含有30％-80％的膠陀螺多糖和70％-20％的賦型劑(包括其他配伍用的藥物)，最好含有60％-70％的膠陀螺多糖和40％-30％的賦型劑(包括其他配伍用的藥物)。
本發(fā)明的積極效果在于從膠陀螺中提取具有治療效果的多糖物質(zhì)，用于生產(chǎn)抗腫瘤、升高白細胞、抗?jié)儭⒖垢窝?、增強免疫、降血脂的藥物，療效顯著，毒副作用小，實用方便。
下述的藥理實驗證實了膠陀螺多糖具有抗腫瘤、升高白細胞、抗?jié)?、抗肝炎、增強免疫、降血脂等藥理活性膠陀螺多糖的藥理學(xué)作用摘要以荷S180瘤小鼠及艾氏腹水型小鼠為模型，研究了膠陀螺多糖的體內(nèi)抗腫瘤作用。結(jié)果表明膠陀螺多糖不僅具有抗腫瘤作用，還能增強機體的免疫能力。另外，膠陀螺多糖還具有明顯的升高白細胞、抗?jié)?、抗肝炎、降血脂作用?br> 1材料
1.1藥物膠陀螺多糖為多脂磷傘中提取的多糖物質(zhì)。環(huán)磷酰胺上海華聯(lián)制藥有限公司產(chǎn)品，批號20010304。
1.2 S180及艾氏腹水瘤株中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院定期傳代瘤株。
1.3動物昆明種小鼠，雌雄兼用，體重(22±2)g，購自中國人民解放軍農(nóng)牧大學(xué)實驗動物中心。
2方法2.1小鼠荷瘤取接種6d的S180及艾氏腹水型小鼠腹水，用滅菌生理鹽水(13)稀釋，經(jīng)右上肢靠右肩甲骨處皮下注射(sc)或腹腔注射(ip)0.2mL(4×106～6×106個瘤細胞，活細胞率＞95％)，制成實體瘤型或腹水型荷瘤小鼠模型。
2.2藥物劑量與給藥途徑按實驗設(shè)計劑量ip(實體瘤型)或肌肉注射im(腹水瘤型)給藥，陰性對照組用生理鹽水ip或肌肉注射(im)，陽性對照組用環(huán)磷酰胺ip或im，每只小鼠每天用藥1次。
2.3抑瘤率、脾指數(shù)和胸腺指數(shù)的計算荷S180實體瘤型小鼠于接種后24h隨機分組，連續(xù)給藥8d，8d后稱重、處死，分別取瘤、脾和胸腺，體重，計算抑瘤率、脾指數(shù)和胸腺指數(shù)并進行統(tǒng)計學(xué)處理。
2.4存活率的計算艾氏腹水型小鼠于接種后24h隨機分組，連續(xù)給藥8d，停藥后繼續(xù)觀察，直到自然死亡，計算其存活延長率。
3結(jié)果3.1對荷S180瘤小鼠的抑瘤作用結(jié)果表明，膠陀螺多糖100-400mg/kg·d有明顯抑瘤作用(22.6％-63.2％)，膠陀螺多糖400mg/kg·d與陽性對照組環(huán)磷酰胺組相比，抑瘤率與后者(58.3％)相近。見表1。
表1對荷S180小鼠腫瘤的抑制作用(x±s)

與對照組相比*P＜0.05**P＜0。
3.2對艾氏腹水型小鼠存活期的影響
結(jié)果表明，膠陀螺多糖400mg/kg·d能明顯延長艾氏腹水型小鼠的存活期(48.0％)，膠陀螺多糖400mg/kg·d與陽性對照組環(huán)磷酰胺組相比，存活期延長率比后者(29.7％)高。見表2。
表2對艾氏腹水型小鼠存活期的影響(x±s)

與對照組相比*P＜0.05**P＜0.01；與環(huán)磷酰胺組相比□P＜0.053.3對荷S180瘤小鼠免疫指標的影響小鼠荷瘤后，引起免疫指標不正常，表現(xiàn)為脾指數(shù)升高，為正常鼠的198.1％，胸腺指數(shù)下降，為正常鼠的56.5％，膠陀螺多糖不同劑量組均能使荷瘤小鼠脾指數(shù)降低，胸腺指數(shù)升高，向正常值靠攏。膠陀螺多糖400mg/kg·d劑量組降低脾指數(shù)最顯著(127.8％)，與對照組相比有顯著差異(P＜0.01，與環(huán)磷酰胺組相比無顯著差異(P＞0.05)。400mg/kg·d劑量組上升胸腺指數(shù)最顯著，與對照組相比有顯著差異(P＜0.01，與環(huán)磷酰胺組(69.4％)相比有顯著差異(P＜0.01，說明膠陀螺多糖增強免疫功能的作用強于環(huán)磷酰胺。見表3。
表3對荷S180瘤小鼠免疫指標的影響(x±s)

#空白對照組、各用藥組與正常組脾指數(shù)比率；##空白對照組、各用藥組與正常組胸腺指數(shù)比率。與對照組相比*P＜0.01；與環(huán)磷酰胺組相比□P＜0.01綜上(表1-3)所述，膠陀螺多糖不僅能抑制荷瘤小鼠腫瘤的生長，延長小鼠生命，而且有增強荷瘤小鼠免疫機能的作用。
3.4對化療小鼠的升高白細胞作用結(jié)果表明，膠陀螺多糖對化療小鼠具有明顯的升高白細胞作用。結(jié)果見表4。
表4腔陀螺多糖對化療小鼠升高白細胞作用(x±s，n＝10)組別劑量WBC(109/L)(mg/kg) 0d 3d6d9d12d對照 8.2±1.12 8.3±0.30 8.0±0.32 8.4±0.59 8.8±0.46模型組8.3±1.12 3.3±0.30***2.6±0.32***4.4±0.59***6.8±0.46*膠陀螺多糖400 8.3±0.64 6.8±0.80##5.5±0.42###7.9±0.33###9.6±0.32##200 8.4±0.71 5.8±0.57#5.0±0.57##6.9±0.27##8.4±0.28##100 8.3±0.64 4.8±0.80 4.5±0.42#6.9±0.33##7.5±0.32與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與模型組比較#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001。
3.5對放療小鼠的升高白細胞作用結(jié)果表明，膠陀螺多糖對放療小鼠具有明顯的升高白細胞作用。結(jié)果見表4。
表4膠陀螺多糖對放療小鼠升高白細胞作用(x±s，n＝10)組別劑量 WBC(109/L)(mg/kg) 0d 3d6d9d12d對照 7.8±1.32 7.9±0.35 7.7±0.25 7.9±0.61 8.2±0.26模型組7.6±1.32 3.6±0.30***3.0±0.32***5.4±0.59***7.0±0.46*膠陀螺多糖400 7.8±0.71 4.8±0.80 5.7±0.42##8.5±0.33###10.3±0.52###200 7.4±0.66 4.2±0.45 5.0±0.57##7.9±0.27##9.4±0.28###100 7.3±0.51 3.8±0.80 4.7±0.22#6.5±0.21##8.5±0.26與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與模型組比較#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001。
3.6抗?jié)冏饔冒幢?分組給藥，于7天內(nèi)，每天灌胃一次，對照組灌胃等體積蒸餾水，末次給藥2h后，按文獻方法，測定大鼠應(yīng)激型潰瘍等級。結(jié)果見表6。膠陀螺多糖具有明顯的抗?jié)冏饔谩?br> 表6膠陀螺多糖的抗?jié)冏饔?x±s，n＝10)組別 劑量(mg/kg)潰瘍等級(x±s)對照 - 4.91±0.678膠陀螺多糖4001.75±2.64***2001.98±2.63***1002.21±2.47**與對照比較，**P＜0.01，***P＜0.0013.7抗肝炎作用按表7分組，模型組和給藥組按10ml/kg ip 0.1％CCl4豆油溶液，對照組ip同體積豆油，每天一次，連續(xù)3天，從第4天開始給藥治療，每天ig膠陀螺多糖一次，對照組和模型組ig同體積蒸餾水，連續(xù)6天，末次給藥后，禁食16h，取血分離血清，測血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(SGPT)，結(jié)果表明，膠陀螺多糖對肝損傷小鼠具有降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶的作用。
表7膠陀螺多糖降谷丙轉(zhuǎn)氨酶的作用(x±s，n＝10)組別 劑量 SGPT(g/kg) (U/dL)對照組-158±25.36***模型組-502±104.32膠陀螺多糖400 295±114.71**200 346±103.64***100 396±101.56***與模型組比較*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.0013.8降血脂作用將小鼠(18～22g)按表8所示分組給藥，每組動物雌雄各半，對照組和模型組灌胃蒸餾水10ml/kg。于15天內(nèi)每天灌胃一次，末次給藥1h后，模型組和給藥組按10ml/kg腹腔注射75％蛋黃生理鹽水溶液，對照組腹腔注射等體積生理鹽水，禁食16h后，再灌胃給藥一次，1h后，處死動物，取血，分離血清，按常規(guī)方法測TC、TG、HDL-C、LDL-C，結(jié)果見表8。膠陀螺多糖高劑量可明顯降低高脂血癥小鼠TC、TG、LDL-C水平。
表3腔陀螺多糖對高脂血癥小鼠血脂的影響(mmol/L，x±s)組別 劑量(mg/kg) TCTGLDL-C對照 5.2±0.6***1.1±0.3**5.0±5.2**模 9.0±0.9 1.4±1.5 7.1±1.2膠陀螺多糖400 7.0±2.0**1.3±0.9*5.6±1.2**200 8.1±2.6 1.4±1.4 7.2±1.4n＝10，與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.00l
4結(jié)論膠陀螺多糖不僅具有抗腫瘤作用，還能增強機體的免疫能力。另外，膠陀螺多糖還具有明顯的升高白細胞、抗?jié)?、抗肝炎、降血脂作用?br> 具體實施例方式下列實施例旨在進一步舉例描述本發(fā)明，而不是以任何方式限制本發(fā)明.在不背離本發(fā)明的精神和原則的前提下，對本發(fā)明所作的本領(lǐng)城普通技術(shù)人員容易實現(xiàn)的任何改動或改變都將落入本發(fā)明的待批權(quán)利要求范圍之內(nèi)。
實施例1將膠陀螺或其菌絲體1kg粉碎，加6倍水煎煮3小時，過濾取濾液，反復(fù)3次，合并濾液，濃縮至2000ml，放置，冷卻至室溫，經(jīng)活性炭過柱2次，收集流出液，濃縮至1000ml，加5倍乙醇沉淀，放置24小時，過濾，并加適量乙醇洗脫，將所得沉淀減壓干燥(溫度70℃，真空度0.090mPa)，即得膠陀螺多糖。用酚硫酸法，在490nm紫外波長，以葡萄糖為對照品測得膠陀螺多糖的純度為45％。
實施例2將膠陀螺或其菌絲體1kg粉碎，加6倍水煎煮3小時，過濾取濾液，反復(fù)3次，合并濾液，濃縮至2000ml，放置，冷卻至室溫，經(jīng)活性炭過柱2次，收集流出液，濃縮至1000ml，加5倍乙醇沉淀，放置24小時，過濾，并加適量乙醇洗脫，將所得沉淀減壓干燥(溫度70℃，真空度0.090mPa)，即得膠陀螺多糖。用酚硫酸法，在490nm紫外波長，，以葡萄糖為對照品測得膠陀螺多糖的純度為45％。配液后G4漏斗過濾，濾液分裝滅菌，制成注射劑。
實施例3膠陀螺多糖1kg，藥用淀粉0.5kg，用80％濃度的乙醇濕法制粒，整粒，干燥，裝1#膠囊，每粒0.2g。其它項目應(yīng)符合中華人民共和國藥典2000年版膠囊項下要求。
實施例4膠陀螺多糖1kg，藥用淀粉0.5kg，糊精1kg，50％濃度乙醇適量，制粒，整粒，干燥，壓片，每片0.2g。其它項目應(yīng)符合中華人民共和國藥典2000年版片劑項下要求。
權(quán)利要求
1.一種膠陀螺多糖，其特征在于由下述方法制備獲得將膠陀螺或其菌絲體粉碎，加4～8倍水煎煮2～4小時，過濾取濾液，反復(fù)2～4次，合并濾液，濃縮至1200～1800ml，放置，冷卻至室溫，經(jīng)活性炭過柱2次，收集流出液，濃縮至800～1500ml，加4～6倍乙醇沉淀，放置18～24小時，過濾，并加乙醇洗脫，將所得沉淀物減壓干燥，即得膠陀螺多糖。
2.膠陀螺多糖在抗腫瘤、升高白細胞、抗?jié)?、抗肝炎、增強免疫、降血脂藥物中的?yīng)用。
3.用于抗腫瘤、升高白細胞、抗?jié)儭⒖垢窝?、增強免疫、降血脂的藥物組合物，其中含有治療有效量的膠陀螺多糖和藥學(xué)上可接受的載體。
4.根據(jù)權(quán)利要求2、3所述的藥物，其特征在于所說的藥劑是任何一種藥劑學(xué)上所說的劑型。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種膠陀螺多糖，并提供了其制備方法，將膠陀螺或其菌絲體粉碎，加水煎煮，過濾取濾液，合并濾液，濃縮，放置，冷卻至室溫，經(jīng)活性炭過柱2次，收集流出液，濃縮，加乙醇沉淀，放置，過濾，并加適量乙醇洗脫，將所得沉淀減壓干燥，即得膠陀螺多糖。同時提供了以膠陀螺多糖組分為主要藥物或與其他藥物組方，可用于抗腫瘤、升高白細胞、抗?jié)?、抗肝炎、增強免疫、降血脂?br> 文檔編號A61P1/04GK1523041SQ0312714
公開日2004年8月25日 申請日期2003年9月10日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月10日
發(fā)明者徐凌, 于春波, 陳曉光, 徐 凌 申請人:吉林高科生態(tài)開發(fā)有限公司