專利名稱：用作金屬蛋白酶抑制劑的吡咯烷－2－羧酸酰肼衍生物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明的目標化合物是有用的金屬蛋白酶，如鋅蛋白酶特別是鋅水解酶抑制劑，這類化合物可有效地預防和治療一些與越來越多出現(xiàn)的血管收縮相關聯(lián)的疾病狀態(tài)。這種疾病的例子有高血壓、冠狀動脈疾病、心臟功能不足、腎臟和心肌局部缺血、腎臟功能不足、透析、大腦局部缺血、心臟梗塞、偏頭痛、蛛網(wǎng)膜下腔出血、雷諾氏綜合癥和肺部高壓。此外這類化合物是用于抑制移植物排斥、器官保護和治療眼科疾病的有用的抑制細胞生長劑和大腦保護劑。
內(nèi)皮素是存在三種異構體的肽，這三種異構體是ET-1，ET-2和ET-3，它們各自被三種各截然不同的基因編碼。它們最初是1988年由Yanagisawa在豬內(nèi)皮細胞的條件培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)的(Yanagisawa M；Kurihara H；Kimura S；Tomobe Y；Kobayashi M；Mitsui Y；YazakiY；Goto K；Masaki T血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的一種新的強烈的血管收縮肽[參閱注解]，NARURE(1988年3月31日)，332(6163)卷，411～5頁)。這些活性的ET是帶有兩個分子內(nèi)二硫橋鍵的21個氨基酸的肽。它們是由203～212氨基酸的前原蛋白質產(chǎn)生的，此前原蛋白質被具有弗林蛋白酶特征的肽鏈內(nèi)切酶處理成生物惰性的大-內(nèi)皮素(大-ET)。這些大-ET在氨基酸21和22之間水解斷裂而被特殊地處理為成熟的各種ET，氨基酸21和22分別是色氨酸21-纈氨酸22(大-ET-1、大ET-2)和在大-ET-3中為色氨酸21-異亮氨酸22。早在1988年就假定是一種特殊的金屬蛋白酶造成這種特殊的斷裂。在1994年從牛腎上腺純化并克隆了ECE-1(內(nèi)皮素轉變酶-1)(Xu D、Emoto N、Giaid A、Slaughter C、Kaw S、de Witt D、Yanagisawa M“ECE-1一種促進大-內(nèi)皮素-1的蛋白水解活性的膜-結合金屬蛋白酶”，Cell(1994年)78期473～485頁)。
ECE-1是膜結合的II型鋅-肽鏈內(nèi)切酶，具有最佳中性pH值及鋅結合的不固定HExxHx(＞20)E。它屬于亞族M13，具有包括活性部位的大的681氨基酸胞外結構域。M13族的其它成員有NEP24.11(中性肽鏈內(nèi)切酶)、PEX、一種磷酸鹽調節(jié)的中性肽鏈內(nèi)切酶、及凱爾血型蛋白，此蛋白最近被描述為大-ET3加工酶。人類血統(tǒng)的M13族成員的特征是高的分子量(＞80kDa)、保存許多二硫橋鍵和復雜的糖基化模式。最近解決了NEP的結構。(Oefner等J.Mol.Biol.2000年，296卷，341-349頁)。ECE的催化區(qū)域結構和有關人類M13蛋白酶明顯地比基體金屬蛋白酶(MMP)的成員大(＞650個氨基酸)。MMP族屬于metzincins，顯示典型的HExxHxxGxxH模式，與MMP族不同，M13族成員是包括HExxHx(＞20)E模式的gluzincins。這兩個族在催化區(qū)域結構的大小、結構和配體的鋅配位模式方面無疑是不同的。兩個族的活性部位顯示了明顯的差異，這種差異對抑制劑的類型和潛在的選擇性有明顯的影響。
因此，本發(fā)明的一個方面是提供了用于選擇性抑制ECE-1的化合物，尤其是化學式(I)的化合物，及其藥用的酯和/或藥用鹽 其中R1是氫、烷基羰基，或芳基羰基；R2是烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、環(huán)烷基、鹵代烷基、羧烷基、氨基烷基、二烷基氨基烷基、烷氧基烷基、烷氧羰基烷基、鏈炔基、芳基、芳烷基、芳烷基(烷氧羰基)烷基、芳基羰基烷基、芳氧基烷基、芳基鏈烯基、芳基(烷氧羰基)烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基烷基；R3是氫、芳基、烷基或芳烷基、芳基磺?；?、雜芳基磺?；籖4是氫、芳烷基、烷基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺?；?、雜芳基磺?；Ⅳ韧榛?、羧烷基磺?；?、或烷氧羰基烷基；或基團-NR3R4或R5-[N-N(R4)]-R3形成飽和或不飽和5-或6-元脂肪族環(huán)；R5是氫、烷基磺?；⒎蓟酋；?、雜芳基磺酰基、烷氧羰基、芳氧基羰基、雜芳氧基羰基、烷基羰基、芳基羰基、雜芳基羰基、雜芳基烷基羰基、雜環(huán)基、(單-或二烷基氨基)-烷基羰基、(單-和二烷基)氨基磺酰基、芳氨基羰基、烷基、烷基羰基、烷氧羰基、芳基、芳烷基、芳基烷氧羰基或雜芳基；R6是氫、烷基、芳基或羧烷基；X是-S(O)2-、-S(O)2-NH-、-C(O)-，-C(O)NR6或C(O)-O-。
這里所使用的術語“烷基”，單獨地或結合的，是指含有最多7個、優(yōu)選最多4個碳原子的直-鏈或支-鏈烷基，例如甲基、乙基、正丙基、2-甲基丙基(異-丁基)、1-甲基乙基(異-丙基)、正丁基和1，1-二甲基乙基(叔丁基)。
術語“羧基”指基團-C(O)OH。
術語“氨基甲?；敝富鶊F-C(O)NH2。
術語“羰基”指基團-C(O)-。
術語“鹵素”指氟、溴、氯和碘，優(yōu)選氟和/或氯，最優(yōu)選氟。
術語“磺酰基”指基團-S(O2)-。
術語“鏈烯基”指定義與烷基相同的烴鏈中含有至少一個烯屬雙鍵(包括例如乙烯基、烯丙基及丁烯基)術語“鏈炔基”指定義與烷基相同的烴鏈中含有至少一個烯屬三鍵(包括例如丙炔基，丁炔-(1)-基等)。
術語“烷氧基”，單獨的或結合的，是指烷基醚基團，其中術語‘烷基’具有上述含義，如甲氧基、乙氧基，正丙氧基，異丙氧基，正丁氧基，異丁氧基，仲丁氧基，叔丁氧基等。
術語“烷氧羰基”指化學式為-C(O)Rc的基團，其中Rc是上文定義的烷氧基。
術語“羥基”指基團-OH；術語“氰基”指基團-CN。
術語“羥烷基”是指被羥基取代的上文定義的烷基。
術語“硫代烷基”指被-SH基團取代的上文定義的烷基。
術語“鹵代烷基”指被一至三個鹵素原子，優(yōu)選氟取代的上文定義的烷基，例如三氟甲基、2，2，2-三氟乙基等。
“羧烷基”是指被HOOC-基團取代的上文定義的低級-烷基。
術語“烷基羰基”，單獨的或結合的，是指從鏈烷羧酸衍生的?；赐榛?C(O)-，如乙酰基、丙酰基、丁?；⑽祯；?、4-甲基戊?；取?br> 術語“環(huán)烷基”，單獨的或結合的，表示有3～8個、優(yōu)選3～6個碳原子的飽和環(huán)烴基團，如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基等。
術語“氨基”指基團-NH2。
術語R2的“芳基”，單獨的或結合的，指芳香族碳環(huán)基團，即芳香族或部分芳香族的6元或10元環(huán)，例如苯基、萘基或四氫萘基，優(yōu)選苯基或萘基，及最優(yōu)選苯基。此芳基部分可任選地被一個或多個，優(yōu)選1～5個、更優(yōu)選1～3個基團取代。這些基團獨立地選自鹵素，優(yōu)選氟；烷氧羰基，例如甲基羰基；羧基；氰基；烷基；烷氧基；苯基；苯氧基；三氟甲基；三氟甲氧基。更優(yōu)選氟、烷氧羰基、烷基、三氟甲基和三氟甲氧基，及最優(yōu)選氟。最優(yōu)選的芳香族基團是被一個或多個氟原子取代的萘基或苯基，例如萘基、2，3，4，5，6-五氟苯基或聯(lián)苯基。
術語R3和R6的“芳基”，單獨的或結合的，指芳香族碳環(huán)基團，即芳香族或部分芳香族的6元或10元環(huán)，例如苯基、萘基或四氫萘基，優(yōu)選苯基或萘基，及最優(yōu)選苯基。此芳基部分任選被一個或多個，優(yōu)選1～5個、更優(yōu)選1～3個基團取代。這些基團獨立地選自鹵素，優(yōu)選氟；烷氧羰基，例如甲基羰基；羧基；氰基；烷基；烷氧基；苯基；苯氧基；三氟甲基；三氟甲氧基；羥基；烷基酰氨基例如乙酰氨基；硝基；烷基磺?；缂谆酋；?。更優(yōu)選烷基或烷氧基。
術語R4的“芳基”，單獨的或結合的，指芳香族碳環(huán)基團，即芳香族或部分芳香族的6元或10元環(huán)，例如苯基、萘基或四氫萘基，優(yōu)選苯基或萘基，及最優(yōu)選苯基。此芳基部分任選被一個或多個，優(yōu)選地1-3個基團取代。這些基團獨立地選自鹵素，優(yōu)選氟；烷氧羰基，例如甲基羰基；羧基；氰基；烷基；烷氧基；苯基；苯氧基；三氟甲基；三氟甲氧基；環(huán)己基；羥基；烷基酰氨基，例如乙酰氨基；硝基；烷基磺酰基，例如甲基磺酰基。更優(yōu)選氟、氯、溴、烷氧基、羧基、烷氧羰基，及最優(yōu)選氟。芳香族基團的實例是苯基、2，4，5-三氟苯基和2，4-二氟苯基。
術語R5的“芳基”，單獨的或結合的，指芳香族碳環(huán)基團，即芳香族或部分芳香族的6元或10元環(huán)，例如苯基、萘基或四氫萘基，優(yōu)選苯基或萘基，及最優(yōu)選苯基。此芳基部分任選被一個或多個、優(yōu)選1～5個、更優(yōu)選1-3個基團取代。這些基團獨立地選自鹵素、優(yōu)選氟；烷氧羰基，例如甲基羰基；羧基；氰基；烷基；烷氧基；苯基；苯氧基；三氟甲基；三氟甲氧基。更優(yōu)選烷基或烷氧基，例如甲基或甲氧基。這些芳基基團的實例有4-甲基-苯基和4-甲氧基-苯基。
術語“芳氧基”指上文定義的芳基通過氧連接到母體結構上，即芳基-O-。
術語R4的“雜芳基”，單獨的或結合的，指一價單-或二環(huán)芳香族基團，它具有5～10個、優(yōu)選具有5～6個環(huán)原子，并含有一個到三個雜原子、優(yōu)選含有一個雜原子，雜原子如獨立地選自氮、氧或硫。雜芳基的實例有噻吩基、異噁唑基、噻唑基、吡啶基、吡咯基、咪唑基、四唑基，優(yōu)選吡啶基、異噁唑基和噻唑基。任選地，雜芳基可獨立地被單-、雙-或三-取代，取代基為苯基、烷基、烷基羰基、烷氧羰基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羧基、烷氧羰基烷基，優(yōu)選烷基。
術語R3或R5的“雜芳基”，單獨的或結合的，指一價單-或二環(huán)芳香族基團，它具有5～10個、優(yōu)選具有5～6個環(huán)原子，并含有一個到三個雜原子、優(yōu)選含有一個雜原子，雜原子如獨立地選自氮、氧或硫。雜芳基的實例有吡啶基、噻吩基、異噁唑基、異喹啉基、喹啉基、吲哚基、嘧啶、噠嗪和吡嗪，優(yōu)選噻吩基、呋喃基、吡咯烷基、吲哚基和異噁唑基。這些雜芳基基團可任選獨立地被單-、二-或三-取代，取代基是苯基、烷基、烷基羰基、烷氧羰基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羧基，氧，烷氧羰基烷基，優(yōu)選烷基。
術語“雜環(huán)基”，單獨的或結合的，指非-芳香族單-或二環(huán)的一價基團，它具有5～10個、優(yōu)選5～6個環(huán)原子，并含有一個到三個雜原子、優(yōu)選含有一個雜原子，雜原子如獨立地選自氮、氧或硫。這些雜環(huán)可任選被取代，取代基獨立地選自鹵素、烷基、烷氧基、氧代羧基、烷氧羰基等；和/或在仲氮原子(即-NH-)上被烷基、芳基烷氧羰基、烷基羰基取代；或在叔氮原子(即＝N-)上被氧化。雜環(huán)基團的實例是嗎啉基、吡咯烷基、哌啶基等。
術語“二聚體形式”是指化合物中兩個同樣的化學式I化合物的兩個R1基團被普通單鍵替代；或其中R1是谷胱甘肽-S-、或半胱氨酸-S-或酯、和/或它們的烷基羰基或芳基羰基衍生物，如乙酰基半胱氨酸-S-或苯甲酰半胱氨酸-S-，優(yōu)選谷胱甘肽-S-、半胱氨酸-S-、乙?；腚装彼?S-或苯甲酰半胱氨酸-S-。
術語“藥用鹽”指保留游離堿或游離酸的生物有效性和性質的那些鹽，這些游離堿或游離酸是生物或其他方面合乎需要的。這些鹽由無機酸和有機酸形成，無機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；有機酸如乙酸、丙酸、羥基乙酸、丙酮酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸等。此外這些鹽可通過在游離酸中加入無機堿或有機堿來制備。無機堿衍生的鹽包括，但不限于，鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂鹽等。有機堿衍生的鹽包括，但不限于，伯、仲和叔胺、取代胺包括自然存在的取代胺、環(huán)狀胺和堿性離子交換樹脂的鹽，如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、賴氨酸、精氨酸、N-乙基哌啶、哌啶、聚乙烯亞胺樹脂等的鹽。
“藥用的酯”是指通式(I)的化合物可在官能團處衍生，所提供的衍生物能夠在體內(nèi)轉化回到母體化合物。這種化合物的實例包括生理上可接受的及代謝中易變的酯類衍生物，如甲氧基甲基酯，甲硫基甲基酯和新戊酰氧基甲基酯。此外，與代謝中易變的酯類似，能夠在體內(nèi)產(chǎn)生通式(I)的母體化合物的任何生理上可接受的通式(I)化合物的等價物都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
化學式(I)的化合物可用于抑制哺乳動物的金屬蛋白酶活性，特別是鋅水解酶的活性。更明確地，化學式(I)的化合物是有用的治療和預防一些失調的藥物，這些失調與內(nèi)皮素-轉變酶(ECE)活性引起的疾病相關聯(lián)。對這種酶的抑制將有用于治療心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療及控制月經(jīng)、青光眼。此外該化合物是有用的抑制細胞生長劑和大腦保護劑，用于抑制移植物排斥、器官保護及治療眼科疾病。
更詳細地，本發(fā)明涉及下列化學式(I)的化合物，及其二聚體形式，和/或它們的藥用酯和/或藥用鹽，優(yōu)選它們的藥用酯和/或藥用鹽，及最優(yōu)選它們的藥用鹽 其中R1是氫、烷基羰基或芳基羰基；(是烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、環(huán)烷基、鹵代烷基、羧烷基、氨基烷基、二烷基氨基烷基、烷氧基烷基、烷氧羰基烷基、鏈炔基、芳基、芳烷基、芳烷基(烷氧羰基)烷基、芳羰基烷基、芳氧基烷基、芳基鏈烯基、芳基(烷氧羰基)烷基、雜芳基、雜芳烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基烷基；R3是氫、芳基、烷基、或芳烷基、芳基磺?；?、雜芳基磺酰基；R4是氫、芳烷基、烷基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、烷基磺?；⒎蓟酋；⒎纪榛酋；?、雜芳基磺?；Ⅳ韧榛?、羧烷基磺?；?、或烷氧羰基烷基；或基團-NR3R4或R5-[N-N(R4)]-R3形成飽和或不飽和的5-或6-元脂肪族環(huán)；R5是氫、烷基磺?；?、芳基磺酰基、雜芳基磺?；⑼檠豸驶?、芳氧基羰基、雜芳氧基羰基、烷基羰基、芳基羰基、雜芳基羰基、雜芳基烷基羰基、雜環(huán)基、(單-或二烷基氨基)-烷基羰基、(單-和二烷基)氨基磺酰基、芳基氨基羰基、烷基，烷基羰基，烷氧羰基，芳基，芳烷基，芳基烷氧羰基或雜芳基；R6是氫、烷基、芳基或羧烷基；X是-S(O)2-、-S(O)2-NH-、-C(O)-、-C(O)NR6或C(O)-O-。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及其中R1是氫的化合物。
在本發(fā)明另一個優(yōu)選的實施方案中，R2是烷基、鹵代烷基、烷基氨基、烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烷基氨基、芳基、芳烷基、芳氧基、芳烷基氨基、芳基烷氧基、雜芳基、氨基或(單-和二烷基)氨基；更優(yōu)選烷基、鹵代烷基、烷基氨基、烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烷基氨基、芳基、芳烷基或雜芳基；更更優(yōu)選芳基或雜芳基；及最優(yōu)選芳基。在R2的定義中，術語芳基尤其表示萘基或苯基，其中苯基任選被一個或多個氟取代或被一個苯基取代，例如R2是萘基、2，3，4，5，6-五氟苯基或聯(lián)苯基。
根據(jù)本發(fā)明，R3優(yōu)選為氫或烷基，最優(yōu)選氫。
在上述化合物中R4優(yōu)選氫、芳烷基、烷基、芳基磺?；㈦s芳基磺?；h(huán)烷基烷基或羧烷基，更優(yōu)選氫、烷基、芳烷基、環(huán)烷基、芳基磺酰基或羧烷基，最優(yōu)選氫、烷基、環(huán)烷基、羧烷基或芳烷基，甚至更優(yōu)選氫、烷基或芳烷基，例如氫、2，4，5-三氟芐基、2，4-二氟芐基、芐基、甲基、乙基、異丙基、異丁基、芐基或HO2C-CH2-、或環(huán)烷基丙基甲基。
在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中R5是氫、烷基羰基、烷氧羰基、烷基磺?；⒎蓟?、芳烷基、芳基羰基、(單-和二烷基氨基)烷基羰基、(單-和二烷基)氨基磺酰基、芳基烷氧羰基、芳基氨基羰基、芳基磺?；?、雜芳基羰基、雜芳基烷基羰基、雜芳基磺?；⒎蓟被驶?、雜芳基或雜環(huán)基，更優(yōu)選芳基、芳烷基、芳基羰基、芳基烷氧基、芳基氨基羰基、芳基磺酰基、雜芳基羰基、雜芳基烷基羰基、雜芳基磺?；?、芳基氨基羰基、雜芳基或雜環(huán)基，更優(yōu)選芳基磺酰基、芳烷基、雜芳基烷基羰基、雜芳基磺酰基，及最優(yōu)選4-甲基-苯磺酰基、芐基、4-甲氧基苯磺?；?、(1H-吲哚-3-基)乙?；⑧绶?2-基或3，5-二甲基-異噁唑-4-磺酰基。
在上述化合物中X優(yōu)選-SO2-、-C(O)-，及最優(yōu)選-SO2-。
在本發(fā)明最優(yōu)選的實施方案中的化合物是可用化學式(II)來描述的化合物及其藥用酯和/或鹽 其中R1，R2，R3，R4，R5和X的定義同上。
在本發(fā)明進一步優(yōu)選的實施方案中，R1是氫；R2是萘基或苯基，其中苯基任選地被一個或多個氟取代，或被一個苯基取代；R3是氫或烷基；R4是氫、烷基或芳基烷基；R5是芳基磺酰基、芳烷基、雜芳基烷基羰基、雜芳基磺?；患癤是-SO2-。
本發(fā)明優(yōu)選實施方案的化合物是實施例中說明的化合物。尤其本發(fā)明包括根據(jù)化學式(I)或(II)的選自下組的化合物a)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯磺酰基)-酰肼；b)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；c)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-酰肼；d)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；e)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-甲基-N’-(4-甲基-苯磺酰基)-酰肼；f)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-苯磺?；?酰肼；g)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲氧基-苯磺?；?-酰肼；h)(2S，4R)4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-[(1H-吲哚-3-基)-乙酰基]-酰肼；i)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-噻吩-2-磺酰基-酰肼；j)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(3，5-二甲基-異噁唑-4-磺?；?-酰肼；k)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-環(huán)丙基甲基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；1)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲基-苯磺?；?-N’-(2，4，5-三氟-芐基)-酰肼；m)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟-芐基)-N’-(4-甲基-苯磺酰基)-酰肼；n)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-異丙基-N’-(4-甲基-苯磺酰基)-酰肼；o)(2S，4R)-[N’-[4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-N-(4-甲基-苯磺?；?-肼基]-乙酸；p)(2S，4R)-1-(聯(lián)苯基-4-磺?；?-4-巰基-吡咯烷-2-羧酸N’-甲基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；q)(2S，4R)-4-巰基-1-(2，3，4，5，6-五氟-苯磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；r)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N’-(4-甲氧基-苯磺?；?-酰肼；s)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-(4-甲基-苯磺酰基)-酰肼；及t)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-芐基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼。
放射免疫測定(對ECE-抑制的E，參閱下文)中這些化合物顯示的IC50值為大約50nM～1μM。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，這些組合物含有上文定義的化合物和藥用的賦形劑。
本發(fā)明一個進一步的實施方案涉及上文定義的化合物作為藥劑制造中活性成分的用途，該藥劑包含上文定義的化合物，用于預防和治療內(nèi)皮素-轉化酶(ECE)的活性引起的疾病，尤其是心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、與抑制細胞生長關聯(lián)的疾病、眼科以及大腦保護性適應癥和器官保護。
本發(fā)明進一步涉及上述化合物治療或預防一些疾病的用途，這些疾病與心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調、內(nèi)毒素休克和敗血病有關聯(lián)，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、與抑制細胞生長關聯(lián)的疾病、眼科以及大腦保護性適應癥和器官保護。
此外本發(fā)明包括的上述化合物可用作治療的活性物質，特別在與鋅水解酶活性有關的疾病的范圍，這些疾病如心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調、內(nèi)毒素休克和敗血病，以及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、與抑制細胞生長關聯(lián)的疾病、眼科以及大腦保護性適應癥和器官保護。
本發(fā)明還包括一種方法，用于治療和/或預防處理心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、與抑制細胞生長關聯(lián)的疾病、眼科以及大腦保護性適應癥和器官保護，此方法包括將上文定義的化合物引入到人類或動物肌體中。
本發(fā)明還涉及使用上文定義的化合物來抑制鋅水解酶的活性。
本發(fā)明還涉及制備上文定義的化合物的方法，它包括化學式III的化合物 其中R1，R2和X的定義同上文，及A是HS-保護基，a)與HNR3NR4R5反應來引入酰肼；或b)HNR3NR4R5中R5為保護基團接著轉換或引入R3和R4；可任選地接著轉換R5和/或R2-X基團為不同的R5和/或R2-X基團、和/或脫保護基和/或者釋放硫醇，及其中R3、R4和R5的定義同上。
本發(fā)明還涉及任何時候根據(jù)上述方法制造的上述化合物。
化學式(I)的化合物可根據(jù)本領域已知的方法或下述方法來制備。
除非另外指明，取代基R1、R2、R3、R4、R5、R6和X與上述相同。流程1 流程1的步驟a)描述了羥基和氨基的全硅烷化，例如化合物1與六甲基二硅烷基胺/140℃反應，接著與R2SO2Cl在THF中反應或全部轉換成下述其他R2X或與重碳酸二丁酯/NaHCO3在二噁烷/H2O中反應(BOC保護)。對于構型倒置的情況，生成的醇2用MeSO3H/Ph3P/DIAD在甲苯中處理(室溫～80℃)(通過甲磺酸鹽)；或用LiBr/DEAD/Ph3P在THF中處理(4℃～室溫)(通過溴化物)；或用Ph3P/CCl4在CH2Cl2中處理(3℃～室溫)(通過氯化物)。在保持構型的情況(通過甲磺酸鹽)，醇2可通過與MeSO2Cl/吡啶/DMAP(0℃～室溫)的反應轉化為化學式3化合物。
為了引入保護的硫醇部分，化學式3的化合物被例如三苯基甲硫醇或4-甲氧基芐基硫醇及K-Ot-Bu在DMF中處理(對Br0℃～室溫；對Cl0℃；對甲磺酸鹽室溫～100℃)。酯4用水性LiOH在THF中水解(0℃～室溫)給出酸5。
最終化合物的合成由流程2表示。
合成由酸1a的預活化(N-羥基-2-吡啶酮、N，N-二環(huán)己基碳二亞胺、4-乙基嗎啉在CH2Cl2中，在室溫)開始，接著與一種烷基肼(NHR3NHR4)反應(步驟a)，或酯1b直接用肼(NH2NH2·H2O)在EtOH中(在室溫)處理生成羧酸酰肼2(R3、R4、R5＝H)。以下列方式完成成為游離硫醇3的轉換當PG(保護基團)是Tr時，通過與例如TFA/Et3SiH在0℃～室溫反應；或者當PG是PMB時通過與例如TFA/Et3SiH在0～80℃的反應(步驟b)。
在羧酸酰肼2(R3、R4、R5＝H)的情況，通過還原氨基化引入R4由醛在EtOH中形成亞胺，接著用NaBH3CN在THF中還原給出化合物4(步驟c)。為引入新的R5，在R4是烷基(R5＝H)的情況，通過與ClCOR5、ClCO2R5、ClSO2R5或ClSO2NR5，iPr2NEt或Huenig堿-CH2Cl2，在催化量DMAP或DMAP-聚合物或R5NCO的存在下，室溫在THF中反應給出化合物4，化合物4脫保護生成上述最終的硫醇5(步驟c和b)。
化合物2或4選擇性地脫BOC保護基(TFA、CH2Cl2在0℃)，接著與ClCO2R2、NEM或iPr2Net、CH2Cl2或R2NCO在THF中在0℃～室溫反應(或轉換成在上文引入R5中所述的全部其它R2X)給出化合物7(步驟e)。如上述脫去硫醇保護基給出最終的硫醇8(步驟b)。
流程3出示了合成酰肼的不同方法。
酸1預活化(N-羥基-2-吡啶酮、N，N-二環(huán)己基碳二亞胺、4-乙基嗎啉在CH2Cl2中，在室溫)，接著與烷基-肼羧酸芐酯(NHR3NHR4)反應(步驟a)給出酰肼2，酰肼2用HBr在AcOH中于0℃轉化為3(步驟b)。也可通過預活化及與NHR3NR4R5反應從1直接轉換到3(步驟c)。新R3的引入是用鹵化物/NaH在DMF中(在0℃～室溫，直接到化合物4，步驟e)反應來完成的。用下列方法脫保護基生成硫醇5在PG是Tr的情況，通過與例如TFA/Et3SiH在0℃～室溫反應，或在PG是PMB的情況，通過與例如TFA/Et3SiH在0℃～80℃反應(步驟d)。流程3
流程4表示合成酰肼另外的路線。
酸1預活化(N-羥基-2-吡啶酮、N，N-二環(huán)己基碳二亞胺、4-乙基嗎啉在CH2Cl2中，在室溫)接著與2-烷基-肼羧酸叔丁酯(NHR3NHBOC)反應(步驟a)給出酰肼2，用三乙基硅烷在TFA中0～80℃處理給出硫醇3(步驟b)。用鹵代烷(R5-鹵化物)和DMF及用NaH作為堿烷基化(0℃～室溫)生成化合物4，化合物4用Et3SiH/TFA脫保護基(如流程1所述)后給出硫醇5(步驟c、d)。
選擇性脫BOC-保護基(TFA在CH2Cl2中到化合物6)接著在催化量DMAP或DMAP-poly存在下與ClCO2R4、ClSO2R4、iRr2NBt或NEM在CH2Cl2中于室溫反應給出化合物7(R4＝R5)和8，將它們分離并脫保護基(如流程所述用Et3SiH/TFA)生成硫醇5(步驟e、f和d)。非完全取代的酰肼8可進一步被烷基化(R5-鹵化物，及DMF/NaH，0℃～室溫)，并脫保護基(如流程1所述用Et3SiH/TFA)生成硫醇5(步驟g和d)。流程4 流程5表示酰肼1進一步的轉化。在iPr2EtN存在下在THF中用γ-溴代烷?；弱；?0℃～室溫)給出化合物2，化合物2環(huán)化(NaH在DMF中，室溫)，分離兩個異構體并脫去硫醇的保護基(Et3SiH/TFA，如流程1所述)給出酰肼3和4。流程5 制備化學式5的化合物可按照流程6的反應路線流程1中敘述了由羥基脯氨酸合成起始原料1?；亓?0分鐘TFA/三異丙基脫保護基給出硫醇2，硫醇2被連接到樹脂上。既可在開始或在NR3NR4R5處理后引入最終的R2X(流程9)。在第二種情況下，用本領域已知的方法將起始酸1的R2X(＝BOC)轉化為易變的非酸性保護基團(例如R2X＝FMOC時，步驟a首先用40％TFA在CH2Cl2中室溫下選擇性脫BOC-保護基，接著以NaHCO3作為堿與Fmoc-Osu在二噁烷/水中反應)，這些方法在例如M.Bodanszky和A.Bodanszky著“The Practice of Peptide Synthesis”中有說明，該書1984年由Springer Verlag在Berlin出版。流程6
如下制備樹脂(步驟b)連接劑4-(α，α-二苯基羥甲基)苯甲酸用TPTU、DIEA在DMF中活化，并加入二苯甲基胺樹脂3。然后此樹脂用硫醇2在CH2Cl2/TFA處理給出樹脂負載的起始材料5。
流程7出示在樹脂1上合成最終的化合物此合成從預活化酸1(TPTU、Huenig堿，在DMF中在室溫)開始，接著與烷基-肼(NH2NHR4)反應(步驟a)給出中間體2a，2b或4(R3、R4、R5＝H，步驟c)。用TFA/iPr3SiH在CH2Cl2中于室溫完成與樹脂的脫離給出游離的硫醇3(步驟b)。在羧酸酰肼4的情況，通過與ClCOR5、ClCO2R5、ClSO2R5或ClSO2NR5在DMF中反應引入新的R5給出化合物2，化合物2可任選被烷基化(鹵代烷/DBU，在DMF中)給出二取代酰肼6(步驟d和f)。如上述與樹脂脫離給出最終的硫醇3。在酰肼4與ClSO2R5反應的情況，發(fā)生了化合物2a和2b的雙磺酰基化(步驟d)，這些化合物如同相應的硫醇3一樣，可在脫離樹脂后分離。
如果R2X是FMOC化合物2脫保護基(20％哌啶/DMF，然后與ClCO2R2、吡啶、DMF或R2NCO在DMF中于室溫反應或轉換為上文R4-引入中所述的全部其它R2X)給出化合物5(步驟e)。如上述烷基化(鹵代烷/DBU在DMF中)和脫樹脂保護基給出最終的硫醇3(步驟f和b)。
可通過各種本領域普通技術人員了解的體外和體內(nèi)試驗，來證明化學式(I)的化合物抑制金屬蛋白酶活性特別是鋅水解酶活性的能力。
A)細胞培養(yǎng)如說明(Schweizer等1997年，Biochem.J.，328卷871-878頁)直到融合前在“細胞工廠”培養(yǎng)穩(wěn)定的人類臍靜脈內(nèi)皮細胞系(ECV304)。在融合時用胰島素/EDTA溶液洗脫細胞并用低速離心收集細胞。此細胞粒用磷酸鹽緩沖的pH7.0的鹽水洗滌一次并在-80℃儲存?zhèn)溆谩?br> B)從ECV304細胞中增溶ECE如果沒有另外說明，全部程序在0～4℃下進行。有1×109個細胞的細胞粒懸浮在50ml緩沖液A(20mM Tris/HCl，pH7.5，含有5mM MgCl2、100μM PMSF、20μM E64、20μM亮肽素)中并超聲破碎。所生成的細胞均漿在100,000gav下離心60分鐘。按照說明棄去上層清液，所生成的膜小球在50ml緩沖液A中勻化并離心。重復兩次在緩沖液A中洗滌膜的碎片，最終制備的膜在4℃在50ml緩沖液B(緩沖液A+0.5％吐溫20(v/v)、0.5％CHAPS(w/v)、0.5％毛地黃皂苷(w/v))中勻化并攪拌2小時。然后如說明沉積剩余的膜碎片。所生成的透明上層清液含有溶解的ECE，并以1.0ml的等分試樣在-120℃儲存直到使用。
C)ECE試驗該試驗測量人類大ET-1產(chǎn)生的ET-1。為測量高數(shù)量的樣品在96孔板中來完成試驗。并使用特別先進的和最佳的涂布技術，在相同的孔中進行酶反應和所產(chǎn)生的ET-1的放射免疫測定。
D)涂板Fluoronunc Maxisorp white(編碼437796)96孔板在UV Stratalinker2400(Stratagene)中以1焦耳能量照射30分鐘。然后此96孔板每孔注入300μl蛋白質A溶液(2μg/ml在0.1M Na2CO3中，pH9.5)，并在4℃孵育48小時。涂過的板在使用前可在4℃最多儲存3星期。
使用前棄去蛋白質A溶液，且此板在4℃用在0.1M Na2CO3中pH為9.5的0.5％牛血清白蛋白(BSA)封閉2小時。
板用雙蒸水洗滌，并已準備好進行ECE試驗。
E)篩選試驗試驗化合物在DMSO中溶解并稀釋。在孔中放入10μl DMSO，接著放入含有200ng大ET-1的125μl試驗緩沖液(50mM Tris/HCl，pH7.0，1μMN-(2-(巰甲基)-1-氧-3-苯丙基)-甘氨酸(Thiorphan)、0.1％NaN3、0.1％牛血清白蛋白)。通過加入50μl溶解的ECE(在試驗緩沖液中稀釋1∶30～1∶60倍(v/v))開始酶反應。酶反應在37℃進行30分鐘。加入10μl pH7.0的150mMETDA使酶反應停止。
放射免疫測定ET-1的放射免疫測定基本按照以前的說明(Lffler，B.-M.和Maire，J.-P.，1994年，Endothelium 1273-286頁)來完成。在含有EDTA停止酶反應的混合物的板中加入25μl試驗緩沖液，試驗緩沖液含有20000cpm的(3-(125I)酪氨酸)-內(nèi)皮素-1和25μl的ET特效的抗血清AS-3(在試驗緩沖液中稀釋，1∶1000)。這些板在混合下在4℃培養(yǎng)過夜。然后，用洗板器吸去液相，用雙蒸水將板洗滌一次。在此洗過的板中加入200μl閃爍液(Microscint 40LSC-Cocktail，Packard，編碼6013641)，在Topcount計數(shù)器上對板上每孔計數(shù)2分鐘。
在板上用合成的ET-1以最終濃度為每孔0～3000pg的ET-1制出標準曲線。全部板都測試了最大ECE活性(在10μl DMSO存在下)的對照樣品和產(chǎn)生ET-1免疫反應活性本底(在10mM EDTA或100μM磷酰二肽存在下)的對照樣品。測定重復進行三次。
F)動力學測試通過改變測試中使用的底物濃度，可使用所述試驗格式來測定所使用的ECE制劑及不同的ECE抑制劑的動力學特征(即Km，Ki)。
G)以細胞為基礎的ECE試驗如已發(fā)表的(Schweizer等1997年，Biochem.J.，328卷871-878頁)，MDCK細胞穩(wěn)定地表達人類ECE-1c。在24孔板上培養(yǎng)的細胞在濕潤空氣/CO2(19∶1)氣氛中融合在Dulbecco改進的Eagles介質(DMEM)中，此介質中補充了10％(v/v)牛胎兒血清(FBS)、0.8mg/ml geneticin、100i.u./ml青霉素和100μg/ml鏈霉素。在ECE試驗前，用0.5ml DMEM-HBSS(1∶1)、pH7.0的補充了0.1％(w/v)牛血清白蛋白的10mM HEPES代替上述介質。加入溶在DMSO中的抑制劑，使其最終濃度為1％。加入0.42μM人的大ET-1使酶反應開始，并在培養(yǎng)器中于37℃使酶反應進行1.5小時。在培養(yǎng)結束時迅速移出培養(yǎng)介質，如上述用放射免疫測定法分析等分試樣中產(chǎn)生的ET-1。
通過測量磷酰二肽(IC500.8±0.2μM)和CGS 314447(IC5020±4nM)特有的抑制常數(shù)，來驗證ECE篩選試驗[De Lombaert，Stephane、Stamford，LisaB.、Blanchard，Louis、Tan，Jenny、Hoyer，Denton、Diefenbacher，Clive G.、Wei，Dongchu、Wallace，Eli M.、Moskal，Michael A.等“內(nèi)皮素-轉變酶和中性肽鏈內(nèi)切酶24.11的有效的非-肽雙重抑制劑”，Bioorg.Med.Chem.Lett.，(1997年)，7卷(8期)，1059～1064頁]。用與文獻所述沒有明顯不同的方法由IC50值測量兩種抑制劑，但所用的測量試驗規(guī)程不同。在這種以細胞為基礎的試驗中磷酰二肽顯示的IC50為4μM。因為如ECE被包埋在正常血漿膜環(huán)境中，此試驗還給出了另外有關在更加生理的條件下抑制劑抑制效力的信息。重要的是要說明此篩選試驗是在1μM N-(2-(巰甲基)-1-氧-3-苯丙基)-甘氨酸存在的情況下完成的，用以阻止由于NEP24.11的作用造成的任何潛在的大ET-1的降解。在存在或不存在N-(2-(巰甲基)-1-氧-3-苯丙基)-甘氨酸的情況下測量ET-1產(chǎn)生的初步試驗中，在MDCK-ECE-lc轉染的細胞中都不存在NEP活性。在后來的試驗中不再在培養(yǎng)介質中加N-(2-(巰甲基)-1-氧-3-苯丙基)-甘氨酸。
根據(jù)上述方法，本發(fā)明的化合物在放射免疫測定(對ECE-抑制的E)中顯示的IC50值為大約50nM～大約1000μM。優(yōu)選化合物顯示的值為50nM～1μM。
如上所述，含有化學式I的化合物的藥物，如同制造這種藥物的方法都是本發(fā)明的目標，該方法包括將一個或多個化學式I的化合物、及如果需要，將一種或多種其它有治療價值的物質帶到蓋倫氏制劑的給藥形式中。
藥物組合物可以口服給藥，例如以藥片、帶涂層的藥片、糖衣丸、硬的或軟的凝膠膠囊、溶液、乳液或懸浮液形式。還可實行直腸給藥例如使用栓劑；局部或經(jīng)由皮膚給藥，例如使用藥膏、乳劑、凝膠或溶液；或非腸道給藥例如使用可注射的溶液。
為了制備藥片、帶涂層藥片、糖衣丸或硬凝膠膠囊，本發(fā)明化合物可與藥物惰性的無機或有機賦形劑混合。藥片、糖衣丸或硬凝膠膠囊適宜的賦形劑的實例包括乳糖、玉米淀粉或它們的衍生物；滑石粉；硬脂酸或它們的鹽。
用于軟凝膠膠囊適宜的賦形劑包括例如植物油、蠟、脂肪、半-固態(tài)或液態(tài)多元醇等；然而根據(jù)活性成分的本性，可能有軟凝膠膠囊根本不需要賦形劑的情況。
制備溶液和糖漿可使用的賦形劑包括例如水、多元醇、蔗糖、轉化糖和葡萄糖。
注射液可使用的賦形劑包括例如水、醇、多元醇、甘油和植物油。
栓劑和局部或經(jīng)由皮膚的用藥可使用的賦形劑包括例如天然或硬化油、蠟、脂肪和半-固態(tài)或液態(tài)多元醇。
藥物組合物還可包含防腐劑、抗氧劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、增味劑、改變滲透壓的鹽、緩沖液、涂層劑或抗氧劑。它們還可包含其他治療上有價值的試劑。
其中以化學式I的化合物有效量給藥的劑量依賴于具體活性成分的本性、患者的年齡和需求及用藥的方式。一般考慮劑量為每天0.1～100mg/kg體重，雖然如果表明需要，可超越所引用的上限。
下面提供具體的實施例作為幫助實踐本發(fā)明的指南，而無意限制本發(fā)明的范圍。
縮寫詞EtOH乙醇；THF四氫呋喃；Et2O乙醚；MeOH甲醇；CH2C12二氯甲烷；EDCIN-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳二亞胺鹽酸鹽；HOBT1-羥基苯并三唑；DBU1，8-二氮雜雙環(huán)-[5.4.0]-十一碳-7-烯(1，5-5)；LAH氫化鋁鋰；LDA二異丙酰胺基鋰；DEAD偶氮二羧酸二乙酯；DIAD偶氮二羧酸二異丙酯；DMAP4-二甲氨基吡啶；DMAP-聚合物聚合物-負載的(聚苯乙烯基2％DVB樹脂，約1.6mmol“DMAP”/g樹脂)4-(N-芐基-N-甲基氨基)吡啶；NEMN-乙基嗎啉；NMMN-甲基嗎啉；TBAF氟化四丁基銨；DIEA二乙胺；DMF二甲基甲酰胺；TFA三氟乙酸；TPTU四氟硼酸[2-(2-吡啶酮-1-基)-1，1，3，3-四甲基]uronium鹽；iPr2NEtHuenigs堿或N-乙基二異丙基胺；FMOC-Osu9-芴基甲氧基羰基-N-羥基琥珀酰亞胺酯。實施例1起始原料(酯-流程1)將40g(220mmol)L-羥基脯氨酸甲酯-鹽酸鹽(在甲苯中懸浮兩次并在減壓下蒸發(fā)除去水)懸浮在600ml六甲基二硅烷基胺中并回流2小時。溶液在減壓下蒸發(fā)并溶于100ml THF中，緩慢加入49.9g(220mmol)2-萘-磺酰氯在200ml THF中的溶液并室溫攪拌16小時。加入150ml H2O，1小時后蒸發(fā)溶劑。剩余物在水/乙酸乙酯(3×)之間分配，有機相用10％NaCl洗滌，并用Na2SO4干燥給出60.4g(82％)(2S，4R)-4-羥基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸甲酯，MS335 (M+)。流程1 類似物L-羥基脯氨酸芐酯-鹽酸鹽和1-萘磺酰氯給出(2S，4R)-4-羥基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸芐酯。MS411(MH+)；L-羥基脯氨酸芐酯-鹽酸鹽和甲磺酰氯給出(2S，4R)-4-羥基-1-甲磺?；?吡咯烷-2-羧酸芐酯，mp132～133℃，MS300(MH+)；L-羥基脯氨酸甲酯-鹽酸鹽和甲磺酰氯用CH2Cl2萃取后給出(2S，4R)-4-羥基-1-甲磺酰基-吡咯烷-2-羧酸甲酯，mp115.5-117℃，MS164(M-COOMe)。
通過甲磺酸鹽將13.9ml(215mmol)甲磺酸、29.8ml(215mmol)三乙胺和58.7g(224mmol)三苯基膦在150ml甲苯中的兩相溶液加到60g(179mmol)(2S，4R)-4-羥基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸甲酯的300ml甲苯懸浮液中，懸浮液被機械攪拌。加入44.9ml(233mmol)偶氮二羧酸二異丙基酯(放熱！)后，將溶液在80℃加熱2.5小時。室溫加入300ml水，用乙酸乙酯(3×300ml)萃取。有機相用10％KHSO4(2×100ml)水溶液、10％NaCl(2×150ml)洗滌、Na2SO4干燥及蒸發(fā)，給出180g粗產(chǎn)物，快速色譜(乙酸乙酯/己烷1∶1)給出63.7g(86％)的(4S，2S)-4-甲磺酰氧基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸甲酯。
室溫將64.2g(167mmol)三苯基甲硫醇緩慢加入到17.9g(160mmol)叔丁醇鉀在300ml DMF的溶液中，并機械攪拌30分鐘。然后在20℃加入63g(152mmol)(4S，2S)-4-甲磺酰氧基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸甲酯在300ml DMF中的溶液，在末端用冰浴冷卻。反應物在100℃加熱1.3小時，冷卻，蒸發(fā)到400ml并用250ml飽和的NH4Cl水溶液/乙酸乙酯萃取(3×300)。有機相用10％NaCl水溶液洗滌、干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)?？焖偕V(CH2Cl2/MeOH 99∶1)給出58.6g(65％，(2S，4R)/(2R，4R)-異構體約為4∶1，1H-NMR)及9.2g(10％，(2S，4R)/(2R，4R)-異構體約為1∶1，1H-NMR)(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸甲酯，MS594(MH+)。
類似物(2S，4R)-4-羥基-1-甲磺酰基-吡咯烷-2-羧酸甲酯在80℃ 3.75小時后給出(4S，2S)-4-甲磺酰氧基-1-(甲磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸甲酯，它與三苯基甲硫醇在100℃加熱45分鐘給出(2S，4R)-1-甲磺?；?4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸甲酯((2S，4R)/(2R，4R)-異構體約為9∶1，1H-NMR)，MS482(MH+)；(2S，4R)-4-羥基-1-甲磺?；?吡咯烷-2-羧酸芐酯在80℃ 5小時后給出(2S，4S)-1-甲磺?；?4-甲磺酰氧基-吡咯烷-2-羧酸芐酯，它與4-甲氧基芐基硫醇/叔丁醇鉀加熱30分鐘給出(2S，4S)-1-甲磺酰基-4-甲磺酰氧基-吡咯烷-2-羧酸芐酯，mp 91-92℃，MS453(M+NH4+)。
通過溴化物在溫度1.5～4.5℃之間用0.5小時往76.5g(291.6mmol，6當量)三苯基膦的650ml THF溶液中加入44.6ml(286.8mmol，5.9當量)DEAD在70ml THF中的溶液。溶液攪拌0.5小時，然后加入42.2g(486.1mmol，10當量)LiBr，反應混合物再冷卻到4℃以加入20g(48.6mmol)(2S，4R)-4-羥基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸芐酯在75mlTHF中的溶液。室溫攪拌3小時，加入水及將此懸浮液濃縮并再溶于700ml乙酸乙酯和水。分層，無機相用100ml乙酸乙酯(3x)萃取，合并的有機層用鹽水洗滌、MgSO4干燥并蒸發(fā)。通過結晶從乙酸乙酯/己烷中移出氧化三苯基膦，母液用使用己烷∶乙酸乙酯3∶1的硅膠柱色譜純化，產(chǎn)生13.4g(62％)無色固體(2S，4S)-4-溴-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸芐酯，mp97-98℃，MS473(MH+)。
在0℃用4.4ml(31.5mmol，1.15當量)4-甲氧基芐硫醇處理在150mlDMF中的3.38g(30.1mmol，1.1當量)叔丁醇鉀。溶液在室溫攪拌1小時，然后加入12.99g(27.4mmol)(2S，4S)-4-溴-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸芐酯在100ml DMF中的溶液。反應物室溫攪拌過夜，真空下除去DMF，剩余物再溶于乙酸乙酯和1M KHSO4水溶液。分層，有機相用鹽水洗滌、Na2SO4干燥并蒸發(fā)。油狀粗產(chǎn)物用己烷/乙酸乙酯(3∶1～2∶1)作淋洗液通過硅膠快速色譜純化，產(chǎn)生7.23g(48％)淺黃色固體(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸芐酯，mp90-91℃，MS547(M+)。
類似物(2S，4R)-4-羥基-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯與4-甲氧基芐硫醇/叔丁醇鉀給出(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐硫烷基)-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯，MS382(MH+)。
(2S，4R)-4-羥基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸甲酯與4-甲氧基芐硫醇/叔丁醇鉀給出無色油狀(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸甲酯，MS472(MH+)。
通過氯化物((2S，4R)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯本發(fā)明中間體的合成是本領域已知的，例如在國際專利申請WO 9820001和歐洲專利申請公開號EP-A-696593中有述)將374g(1.48mol)(2S，4R)-4-羥基-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯在1.6升CH2Cl2中的溶液用680g(2.6mol)三苯基膦處理，冷卻到3～5℃并用1.24升(12.8mol)CCl4處理10分鐘。在此溫度2小時后停止冷卻，反應溫度在2小時期間上升到35℃。冷卻回到20℃并再攪拌45分鐘。加入4升正庚烷，反應蒸發(fā)到2.9升，冷卻到0℃，過濾，剩余物用同樣的方法處理兩次，第三次將剩余物再溶解在2升CH2Cl2中，蒸發(fā)溶劑，用己烷/叔-丁基甲基醚9∶1作淋洗液通過硅膠過濾。蒸發(fā)溶劑給出347g(89％)(2S，4S)-4-氯-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯，MS246(MH+)。
冷卻(-3℃)76g(0.68mol)叔丁醇鉀在1.5升DMF中的溶液并緩慢地(1.5小時)用202g(0.73mol)三苯基甲硫醇在0.8升DMF中的溶液處理(最高1℃)。在0℃ 2.5小時后，加入161g(0.61mol)(2S，4S)-4-氯-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯在0.35升DMF中的溶液。反應在2℃攪拌過夜，蒸發(fā)，溶于1.5升乙酸乙酯，傾入2.7升飽和NH4Cl水溶液并用乙酸乙酯萃取(2×)。有機相用飽和NaHCO3水溶液洗滌，Na25O4干燥并蒸發(fā)。使用己烷/乙酸乙酯(95∶5～7∶3)的硅膠高效液相色譜給出268g(87％)(2S，4R)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯，MS504(MH+)。實施例2水解(流程1)在0℃往14.8g(31.6mmol)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸甲酯的950ml THF溶液中加入950ml 0.1MLiOH(95mmol)。溶液在室溫攪拌2小時，用冰水稀釋，加入1M KHSO4(pH2)酸化，用乙酸乙酯萃取。合并的有機相用鹽水洗滌，Na2SO4干燥并蒸發(fā)，產(chǎn)物用乙酸乙酯/己烷結晶，產(chǎn)生13.15g(90％)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸無色固體，MS456(MH+)。
采用類似方法制備下列化合物淺棕色泡沫狀(2S，4R)-1-甲磺?；?4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸，MS466(M-H-)；(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯，MS366(M-H-)；可根據(jù)下列參考文獻制備其它化合物2-(異丁基)肼羧酸叔丁酯(Faessler，Alexander；Bold，Guido；Capraro，Hans-Georg；Cozens，Robert；Mestan，Juergen；Poncioni，Bernard；Roesel，Johannes；Tintelnot-Blomley，Marina；Lang，Marc具有口服生物可利用性的氮雜-肽類似物作為有效的人類免疫缺乏病毒I-型蛋白酶抑制劑，J.Med.Chem.(1996)，39(16)，3203-3216)。
2-(甲基)肼羧酸叔丁酯(Lenman，Morag M.；Lewis，Arwel；Gani，David稠合1，2，5-三氮雜-1，5-二酮和一些N2-和N3-取代的衍生物的合成順式-肽基脯氨酰胺可能的構象模擬，J.Chem.Soc.，Perkin Trans.1(1997)，16期，2297-2311)。
N-甲基-肼羧酸芐酯(Lenman，Morag M.；Lewis，Arwel；Gani，David稠合1，2，5-三氮雜-1，5-二酮和一些N2-和N3-取代的衍生物的合成順式-肽基脯氨酰胺可能的構象模擬，J.Chem.Soc.，Perkin Trans.1(1997)，16期，2297-2311)。實施例3合成酰肼實施例3a程序A(流程2)(步驟1)在4.4g(9.6mmol)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸的200ml CH2Cl2溶液中加入1.2g(10.8mmol，1.1當量)N-羥基-2-吡啶酮，接著在0℃在30分鐘期間加入2.2g(10.7mmol，1.1當量)N，N-二環(huán)己基碳二亞胺在25ml CH2Cl2中的溶液。在加入4.2ml(33.0mmol，3.4當量)NEM和1.9g(mmol，1.05當量)異丁基肼·硫酸鹽以前，此懸浮液在此溫度再攪拌4小時。反應混合物室溫攪拌過夜。此懸浮液用0.55ml(9.6mmol，1.0當量)冰乙酸的10ml水溶液處理并攪拌1.5小時，用NaHCO3(5％)水溶液稀釋并用CH2Cl2萃取。合并的有機相用1MKHSO4溶液、水和鹽水洗滌，Na2SO4干燥并蒸發(fā)。用己烷研制生成5.02g(定量)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-酰肼，它直接用于后面的反應。
(步驟2)在10mlTFA中的222mg(0.42mmol)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-酰肼用0.68ml(4.2mmol，10當量)三乙基硅烷在80℃處理90分鐘。真空下蒸發(fā)溶劑，粗產(chǎn)物用快速色譜純化，產(chǎn)生148mg(86％)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-酰肼淺黃色晶體，MS408(MH+)。
采用類似方法制備下列化合物由(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸和b)芐肼接著脫保護基(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-酰肼白色固體，MS442(MH+)；c)對甲苯磺?；陆又摫Ｗo基(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼白色固體，MS506(MH+)；d)甲肼接著脫保護基(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-甲基-酰肼白色晶體，MS366(MH+)；由(2S，4R)-1-甲磺酰基-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸和對-甲苯磺?；陆又摫Ｗo基(2S，4R)-4-巰基-1-甲磺?；?吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲基-苯磺酰基)-酰肼白色晶體，MS394(MH+)。實施例3b程序B (程序A的步驟1接著步驟3～4一流程2)(步驟3)在0℃用5.6ml(32.6mmol，4當量)N-乙基二異丙基胺、3.1g(16.3mmol，2當量)對甲苯磺酰氯和100mg(0.8mmol，0.1當量)DMAP處理在450ml CH2Cl2中的4.3g(3.15mmol)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-酰肼，室溫攪拌過夜，加入2.05g(16.1mmol，2當量)MeNHCH2CO2K，溶液在室溫攪拌1小時，加入1MKHSO4溶液并分相。有機層用飽和NaHCO3萃取，無機層用CH2Cl2洗滌。合并的有機相用鹽水洗滌，Na2SO4干燥和蒸發(fā)。粗的剩余物用己烷∶乙酸乙酯2∶1作淋洗液的快速色譜純化，生成2.68g(48％)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼，它可直接用于下面的反應。
(步驟4)在2.68g(3.9mmol，1當量)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷酮-2-羧酸N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼的100mlTFA溶液中加入6.2ml(39mmol，10當量)三乙基硅烷，混合物在80℃加熱1.5小時、真空濃縮及再溶于甲苯并蒸發(fā)。用己烷研制生成粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物進一步用己烷∶乙酸乙酯1∶1的快速色譜純化產(chǎn)生1.65g(74％)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼白色晶體，MS562(MH+)。
采用類似方法制備下列化合物(步驟1，3，4)由(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸b)和甲肼，接著與對-甲苯磺酰氯反應并脫保護基(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-酰肼白色晶體，MS520(MH+)；c)和異丁肼·硫酸鹽，接著與4-叔丁基-苯基磺酰氯反應并脫保護基(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-叔丁基-苯磺酰基)-N’-異丁基-酰肼白色晶體，MS604(MH+)；d)和甲肼，接著與甲磺酰氯反應并脫保護基(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-甲磺?；?N’-甲基-酰肼白色固體，MS444(MH+)；e)和異丁肼·硫酸鹽，接著與甲磺酰氯反應并脫保護基(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-N’-甲磺酰基-酰肼白色晶體，MS486(MH+)；f)和芐肼，接著與甲磺酰氯反應并脫保護基(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N’-甲磺?；?酰肼白色晶體，MS520(MH+)；g)和芐肼，接著與對-甲苯磺酰氯反應并脫保護基(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N’-(4-甲基-苯基磺酰基)-酰肼白色晶體，MS596(MH+)；由(2S，4R)-1-甲磺?；?4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸a2)與芐肼，接著與甲磺酰氯反應并脫保護基(2S，4R)-4-巰基-1-甲磺?；?吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N’-甲磺酰基-酰肼白色固體，MS408(MH+)；b2)與異丁基肼·硫酸鹽，接著與甲磺酰氯反應并脫保護基(2S，4R)-4-巰基-1-甲磺?；?吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-N’-甲磺?；?酰肼無色固體，MS450(MH+)；c2)與異丁基肼·硫酸鹽，接著與對-甲苯磺酰氯反應并脫保護基(2S，4R)-4-巰基-1-甲磺酰基-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼無色固體，MS374(MH+)；d2)與異丁基肼·硫酸鹽，接著與4-叔丁基-苯磺酰氯反應并脫保護基(2S，4R)-4-巰基-1-甲磺?；量┩?2-羧酸N’-(4-叔丁基-苯磺?；?-N’-異丁基-酰肼白色晶體，MS492(MH+)；實施例3c程序C(流程2)與程序A，B類似(步驟1，3)，由(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯和甲肼，接著用對-甲苯磺酰氯處理，得到(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺酰基)-肼基羰基]-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷-1-羧酸1-叔丁酯，它可直接用于后面的反應。
(步驟5)將在10ml CH2Cl2中的2.37g(4.3mmol)(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺酰基)-肼基羰基]-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷-1-羧酸1-叔丁酯用4ml TFA在0℃處理，在冰箱中保持過夜。蒸去溶劑，粗料用甲苯(2×)和己烷(3×)溶解并蒸發(fā)，產(chǎn)生(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷的TFA鹽粗產(chǎn)物，它沒有進一步純化可用于下面的反應。
(步驟6)在0℃往250mg(0.44mmol，1.0當量)(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺酰基)-肼基羰基]4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷酮·TFA的5ml CH2Cl2溶液中加入360μl(2.1mmol，4.8當量)N-乙基二異丙胺和70μl(0.56mmol，1.2當量)氯甲酸苯酯。溶液室溫攪拌過夜，加入1N KHSO4分相，無機相用CH2Cl2萃取，有機層用1M KHSO4和鹽水洗滌、Na2SO4干燥并蒸發(fā)。
(步驟7)粗料再溶于10ml TFA，室溫加入700μl(4.4mmol，10當量)三乙基硅烷，溶液在80℃攪拌70分鐘。蒸發(fā)并用采用己烷∶乙酸乙酯1∶1的快速色譜純化、接著冷凍干燥產(chǎn)生149.2mg(75％)(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-羧酸苯酯白色固體，MS450(MH+)。
用相同的方式(步驟6，7)制備下列化合物由(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷·TFA和氯甲酸正丁酯、氯甲酸異-丙酯、丁基氨磺酰氯、環(huán)丙基氨磺酰氯、芐基氨磺酰氯(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-羧酸丁酯無色膠狀物，MS430(MH+)；(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-羧酸異丙酯白色固體，MS416(MH+)；(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-磺酸丁基酰胺白色凍干固體，MS463(M-H)-；(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-磺酸環(huán)丙基酰胺白色凍干固體，MS447(M-H)-；(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺酰基)-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-磺酸芐基酰胺白色凍干固體，MS497(M-H)-；根據(jù)規(guī)程(步驟5～7)，由(2S，4R)-2-[N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷-1-羧酸1-叔丁酯用氯甲酸異-丙基酯、氯甲酸正丁酯、氯甲酸芐酯、氯甲酸苯酯、喹啉-8-磺酰氯、噻吩-2-磺酰氯、芐基氨磺酰氯、丁基氨磺酰氯或環(huán)丙基氨磺酰氯處理給出下列化合物(2S，4R)-2-[N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-羧酸異丙基酯白色固體，MS458(MH+)；(2S，4R)-2-[N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯基磺酰基)-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-羧酸丁酯白色固體，MS472(MH+)；(2S，4R)-2-[N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯基磺酰基)-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-羧酸芐基酯白色固體，MS506(MH+)；(2S，4R)-2-[N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-羧酸苯酯白色固體，MS492(MH+)；
(2S，4R)-4-巰基-1-(喹啉-8-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-N’-(4-甲基-芐基)-酰肼白色固體，MS563(MH+)；(2S，4R)-4-巰基-1-(噻吩-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-N’-(4-甲基-芐基)-酰肼白色固體，MS518(MH+)；(2S，4R)-2-[N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-磺酸芐基酰胺白色凍干固體，mp 67℃，MS539(M-H)-；(2S，4R)-2-[N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯基磺酰基)-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-磺酸丁基酰胺白色凍干固體，MS467(M-H)-；(2S，4R)-2-[N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-磺酸環(huán)丙基酰胺白色凍干固體，MS489(M-H)-。實施例3d程序D-直接由酯形成(流程3)類似Ruye Xing和Robert P.HanzlikJ.Med.Chein.1998，41，1344-1351的方法進行下列反應(步驟8)在5g(10.6mmol，1當量)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸甲酯的20ml甲醇溶液中加入6.45ml(110mmol，10當量)水合肼，溶液在室溫攪拌3天。蒸發(fā)溶劑，接著用EtOH、乙醚和己烷溶解并蒸發(fā)。真空干燥淺黃色固體給出(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸酰肼，mp130℃，MS472(MH+)。
(步驟9)將150mg(0.3mmol，1.0當量)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸酰肼的5ml TFA溶液和0.65ml三異丙基硅烷在室溫攪拌3天，蒸發(fā)溶劑，剩余物再溶于飽和NaHCO3溶液乙酸乙酯中，分相后無機相用乙酸乙酯萃取。合并的有機相用水和鹽水洗滌。柱色譜得到68mg(61％)白色泡沫狀(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸酰肼，MS352(MH+)。流程3 實施例3e程序E-中間體(流程3)類似程序D步驟8，由(2S，4R)-1-(萘-2-磺酰基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸甲酯和水合肼制備下列化合物(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸酰肼灰白色固體，mp 172℃，MS594(MH+)。
(步驟10)在室溫向3.0g(5.05mmol)(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸酰肼的乙醇懸浮液中加入0.56ml(5.6mmol，1.1當量)苯甲醛，反應混合物在80 C加熱3小時。蒸發(fā)溶劑，剩余物用乙酸乙酯∶己烷1∶1作淋洗液的硅膠快速色譜純化，產(chǎn)生2.75g(80％)白色泡沫狀的(2S，4R-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸亞芐基-酰肼，MS682(MH+)。
(步驟11)向2.48g(3.64mmol)(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸亞芐基-酰肼中加入228.6mg(3.64mmol，1.0當量)NaBH3CN在12.4ml THF中的溶液，接著加入在8.7ml THF中的691.8mg(3.64mmol，1.0當量)甲苯-4-磺酸。該溶液在室溫攪拌2小時，另外加入mmol，0.3當量NaBH3CN，反應在室溫攪拌過夜?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂?，用鹽水、飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌，Na2SO4干燥及蒸發(fā)溶劑。
剩余物溶于11ml 1M NaOH和15ml THF中并攪拌1小時，用乙酸乙酯稀釋并加入9ml 1M KHSO4，接著加入5％NaHCO3溶液。此微堿性溶液用乙酸乙酯萃取。有機相用水和鹽水洗滌、Na2SO4干燥并蒸發(fā)產(chǎn)生2.45g(98％)白色泡沫狀的(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’芐基-酰肼，MS684(MH+)。(類似于Alexander Fssler，Guido Bold，Hans-Georg Capraro，Robert Cozens，Jurgen Mestan，Bernard Poncioni，Johannes Rsel，Marina Tintelnot-Blomley，and Marc LangJ.Med.Chem.1996年，39卷，16期，3203-3216頁.)用類似的方法由(2S，4R)-1-(萘-2-磺酰基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸酰肼和2，5-二氟-苯甲醛制備下列化合物(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟-芐基)-酰肼白色泡沫體，MS720(MH+)。實施例3e程序E-最終產(chǎn)物(流程3)(步驟12)在0℃往200mg(0.3mmol)(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-酰肼的3ml CH2Cl2溶液中加入60μl(0.35mmol，1.2當量)N，N-二異丙基乙胺、72.5mg(0.35mmol，1.2當量)4-甲氧基苯磺酰氯和22.5mg(0.12當量)DMAP-聚合物。室溫將懸浮液振動3天，另外加入25μl(0.15mmol，0.5當量)N，N二異丙基乙胺、31mg(0.15mmol，0.5當量)4-甲氧基苯磺酰氯和22.5mg(0.12當量)DMAP-聚合物，繼續(xù)反應1天。過濾并用CH2Cl2洗滌樹脂后，濃縮有機相，粗料通過快速色譜純化得到152mg(61％)(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N’-(4-甲氧基-苯磺?；?-酰肼，其可直接用于后面的反應。
(步驟13)在0C向148mg(0.17mmol)(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N’-(4-甲氧基-苯磺?；?-酰肼的3.0mlTFA溶液中加入276μl(1.73mmol，10當量)三乙基硅烷?；旌衔镌谑覝財嚢?0分鐘，蒸發(fā)溶劑，剩余物再溶于乙酸乙酯、飽和NaHCO3水溶液中，分層，無機相用乙酸乙酯萃取。合并的有機層用鹽水洗滌，Na2SO4干燥并蒸發(fā)。剩余物用乙酸乙酯∶己烷(1∶1.5～1∶1)的梯度通過快速色譜純化產(chǎn)生76mg(72％)白色泡沫狀的(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基N’-(4-甲氧基-苯磺?；?-酰肼，MS612(MH+)。
用類似方法由(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基酰肼和對甲苯酰氯、乙酰氯、對甲氧苯甲酰氯反應接著脫保護基制備下列化合物(b)(2S，4R)-4-甲基-苯甲酸N-芐基-N’-[4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羰基]-酰肼白色泡沫體，MS560(MH+)。
(c)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-乙?；?N’-芐基-酰肼白色固體，mp64℃，MS484(MH+)。
(d)(2S，4R)-4-甲氧基-苯甲酸N-芐基-N’-[4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-酰肼白色泡沫體，MS576(MH+)。
由(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟-芐基)-酰肼和2，4-二氟苯甲酰氯、2-噻吩碳酰氯、甲磺酰氯、甲氧基苯磺酰氯、2-噻吩磺酰氯、苯磺酰氯、4-氟苯磺酰氯
(e)(2S，4R)-2，4-二氟-苯甲酸N-(2，5-二氟-芐基)-N’-[4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-酰肼白色泡沫體，MS618(MH+)。
(f)(2S，4R)-噻吩-2-羧酸N-(2，5-二氟-芐基)-N’-[4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-酰肼白色泡沫體，MS588(MH+)。
(g)(2S，4R)-1-(萘-2-磺酰基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟-芐基)-N’-甲磺酰基-酰肼白色泡沫體，MS556(MH+)。
(h)(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟-芐基)-N’-(4-甲氧基-苯磺?；?-酰肼白色泡沫體，MS648(MH+)。
(i)(2S，4R)-1-(萘-2-磺酰基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟-芐基)-N’-(噻吩-2-磺?；?-酰肼白色泡沫體，MS624(MH+)。
(j)(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟-芐基)-N’-苯磺?；?酰肼白色泡沫體，MS618(MH+)。
(k)(2S，4R)-1-(萘-2-磺酰基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟-芐基)-N’-(4-氟-苯磺酰基)-酰肼白色泡沫體，MS636(MH+)。實施例3f根據(jù)流程4合成類似于程序A-步驟1，由(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸和N-甲肼羧酸芐酯制備中間體(2S，4R)-N’-[4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-N-甲肼羧酸芐酯灰白色晶體，MS620(MH+)。
(步驟14)將2.45g(1.52mmol)(2S，4R)-N’-[4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-N-甲肼羧酸芐酯溶于9ml乙酸，在0℃加入9ml HBr(33％乙酸溶液)并在0℃攪拌4小時。濃縮溶液，剩余物溶于CH2Cl2和飽和NaHCO3水溶液中，分層，無機相用CH2Cl2萃取，合并的有機相用鹽水洗滌，Na2SO4干燥。粗產(chǎn)物用乙酸乙酯∶己烷1∶1的快速色譜純化產(chǎn)生380mg(44％)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-芐基-N-甲基-酰肼白色固體，mp83.2℃，MS576(MH+)。
根據(jù)流程2(步驟4)脫保護基給出(2S，4R)4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-芐基-N-甲基-酰肼白色固體。mp69℃，MS456(MH+)。
(步驟16)將在7.5mlDMF中的180mg(0.31mmol)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-芐基-N-甲基-酰肼在0℃用16.5mg(0.34mmol，1.1當量)NaH和21μl(0.34mmol，1.1當量)碘甲烷處理，溶液在室溫攪拌3小時，溶液用水和CH2Cl2稀釋，分相，無機層用CH2Cl2萃取，合并的有機層用鹽水洗滌，Na2SO4干燥并蒸發(fā)。粗料通過快速色譜用乙酸乙酯∶己烷2∶1到乙酸乙酯的梯度淋洗純化得到110mg(60％)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N，N-二甲基-酰肼，它用流程2所述規(guī)程脫保護(步驟4)給出(2S，4R)4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N，N-二甲基-酰肼白色固體，mp133.2℃，MS470(MH+)。流程4 13)N-甲肼羧酸芐酯，N-羥基-2-吡啶酮，DDC，NEM，CH2Cl214)HBr，AcOH15)TFA，Et3SiH16)NaH，RBr，DMF17)TFA，Et3SiH實施例3g根據(jù)流程5合成類似程序A-步驟1，由(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸和2-(甲基)肼羧酸叔丁酯制備中間體(2S，4R)-N’-[4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羰基]-N’-甲肼羧酸叔丁酯白色晶體，MS586(MH+)。
(步驟19)在室溫向200mg(0.34mmol)(2S，4RR)-N’-[4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羰基]-N’-甲肼羧酸叔丁基酯的10ml TFA溶液中加入0.54ml(3.4mmol，10當量)三乙基硅烷，溶液在80℃攪拌1小時。真空蒸發(fā)溶劑，粗料用乙酸乙酯/己烷通過快速色譜純化生成61.6mg(40％)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-三氟乙?；?酰肼白色固體，MS461(MH+)。
(步驟20，21)根據(jù)程序(流程4，步驟16)，由(2S，4R)-N’-[4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羰基]-N’-甲肼羧酸叔丁酯和溴化芐制備(2S，4R)-N’-[4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-N’-甲基-N-芐基-肼羧酸叔丁酯，它根據(jù)流程2(步驟4)直接脫BOC和PMB-保護基給出無色油狀的(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-芐基-N-甲基酰肼，MS456(MH+)。
(步驟22)在9ml CH2Cl2中的2g(3.4mmol)(2S，4R)-N’-[4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-N’-甲肼羧酸叔丁酯用3.4mlTFA處理2小時。濃縮溶液，再溶于甲苯并蒸發(fā)。剩余物溶于乙酸乙酯和飽和NaHCO3水溶液中，分層，無機層用乙酸乙酯萃取，合并的有機層用鹽水洗滌，Na2SO4干燥及濃縮生成1.67g(定量)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-酰肼白色固體，MS486(MH+)。
(步驟23)向1.67g(3.4mmol)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-酰肼中加入0.78g(4.08mmol，1.2當量)甲苯磺酰氯、0.7ml(4.08mmol，1.2當量)N-乙基二異丙基胺和106mg(0.17mmol，0.05當量)DMAP-樹脂，接著3天后再加入324mg(1.7mmol，0.5當量)甲苯磺酰氯。過濾反應物，加入1M HCl，無機相用CH2Cl2萃取。合并的有機相用鹽水洗滌、Na2SO4干燥并濃縮。粗產(chǎn)物用乙酸乙酯∶己烷1∶2通過快速色譜純化產(chǎn)生350mg(13％)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷2-羧酸N-甲基-N’N’-二-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼白色固體，MS794(MH+)；和630mg(29％)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼白色固體，MS640(MH+)。
這些化合物根據(jù)流程2(步驟4)脫保護基給出(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’N’-二-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼白色晶體，mp110℃，MS674(MH+)。
(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-(4-甲基-苯磺酰基)-酰肼白色晶體，mp103.5℃，MS520(MH+)。
(步驟25，26)根據(jù)程序(流程4，步驟16)，由(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-(4-甲基-苯磺酰基)-酰肼和溴化芐制備(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-芐基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼，它根據(jù)流程2(步驟4)直接脫保護基給出(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-芐基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼白色固體，mp82.5℃，MS610(MH+)。流程5 16)NaH，BnBr，在DMF中17)Et3SiH，在TFA中實施例3h合成環(huán)狀化合物(流程6)(步驟27)在0℃向150mg(0.25mmol)(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸酰肼的65ml THF溶液中加入52μl(0.3mmol，1.2當量)iPr2EtN和29μl(0.25mmol)4-溴丁酰基氯。溶液在室溫攪拌2小時，將溶液濃縮并再溶于乙酸乙酯/H2O中，無機相用乙酸乙酯萃取，有機相用鹽水洗滌并用Na2SO4干燥。用乙酸乙酯∶己烷1∶1的柱色譜純化得到170mg(92％)(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-溴-丁酰基)-酰肼，它溶于120mlDMF中并用17mg(0.38mmol，55％在礦物油中)NaH處理，溶液攪拌2小時，濃縮并溶于乙酸乙酯/H2O中。無機相用乙酸乙酯萃取，有機相用鹽水洗滌并用Na2SO4干燥。粗產(chǎn)物通過柱色譜純化，得到75mg(45％)白色泡沫狀(2S，4R)-4-三苯甲硫烷基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸(2-氧代-吡咯烷-1-基)-酰胺和40mg(25％)白色泡沫狀的(2S，4R)-1-[4-三苯甲硫烷基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羰基]-四氫噠嗪-3-酮。這兩個化合物分別在0℃～室溫在TFA(2ml/mmol三苯甲硫烷基)中用10當量三乙基硅烷處理，直到檢測不到離析物為止，分別生成白色泡沫狀的(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸(2-氧代-吡咯烷-1-基)-酰胺，MS420(MH+)；及白色泡沫狀的(2S，4R)-1-[4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-四氫-噠嗪-3-酮，MS420(MH+)。流程6 27)Br(CH2)3COCl、iPr2NEt、THF28)NaH、DMF、室溫，接著分離兩個化合物29)Et3SiH、TFA實施例4酰肼衍生物的固相合成結構單元合成(流程7)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯(19.48g，53mmol)用TFA(80ml)在CH2Cl2(120ml)中處理15分鐘。減壓濃縮反應混合物，所生成的深紅色油狀物在乙醚/正己烷(1∶4v/v，860ml)中研制。收集沉淀的鹽并減壓干燥(18.9g)，直接用于下一步。
(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷-2-羧酸的TFA鹽(18.9g，53mmol)，在1，4-二噁烷/含有NaHCO3(17.8g，212mmol)的H2O(300ml)中用Fmoc-OSu(19.7g，58.3mmol)處理，并機械攪拌16小時。反應混合物用水(400ml)稀釋并用乙醚(2×)洗滌。加入乙酸乙酯(400ml)和HCl(25％，50ml)。有機相用H2O、飽和NaCl萃取和洗滌，用MgSO4干燥。過濾并減壓濃縮得到泡沫狀產(chǎn)物(22.5g)。流程7 1.40％TFA/CH2Cl22.Fmoc-Osu，NaHCO3，H2O，1，4-二噁烷3.TFA，三異丙基硅烷上述泡沫狀產(chǎn)物(20.7g，42.3mmol)溶于TFA(350ml)中，加入三異丙基硅烷(43.5ml)。混合物回流0.5小時，并減壓濃縮。加入乙醚(100ml)及正己烷(300ml)產(chǎn)生沉淀物。傾出上清液，減壓并在高真空下干燥沉淀物得到白色泡沫狀的(2S，4R)-4-硫烷基-1-(芴基甲氧基羰基)-吡咯烷-2-羧酸(9.6g，MS370 MH+)樹脂衍生化(流程8)連接劑4-(α，α-二苯基羥甲基)苯甲酸(18.3g，60mmol)用TPTU(17.8g，60mmol)、DIEA(30.8ml、180mmol)在DMF(無水，250ml)中活化3分鐘。將混合物加到含有二苯甲胺樹脂(負載-NH2量為0.9mmol/g，44.4g)的燒瓶中，燒瓶振動1小時。在過濾器上收集該樹脂并用(DMF/異丙醇，3次交替)、CH2Cl2、乙醚洗滌及干燥54.65g，0.65mmol/g(以重量增加計算的負載量)。
向上述CH2Cl2洗滌過的樹脂(46.9g，30mmol)中加入在CH2Cl2(無水，550ml)中的(2S，4R)-4-硫烷基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸(12.2g，36mmol)和TFA(80ml)的混合物。將紅色的混合物振動1.5小時，然后過濾樹脂，用(CH2Cl2/異丙醇，3次交替)、CH2Cl2、乙醚洗滌并干燥42g，0.65mmol/g(以重量增加計算的負載量)。
向上述CH2Cl2洗滌過的樹脂(33.5g，22mmol)中加入CH2Cl2(無水，450ml)中的(2S，4R)-4-硫烷基-1-(芴基甲氧基羰基)-吡咯烷-2-羧酸(9.7g，26mmol)和TFA(67ml)的混合物。將紅色混合物振動1.5小時，然后過濾樹脂，用(CH2Cl2/異丙醇，3次交替)、CH2Cl2、乙醚洗滌并干燥42g，0.59mmol/g(以重量增加計算的負載量)。流程8 1.4-(α，α-二苯基羥甲基)苯甲酸，四氟硼酸[O-(1，2-二氫-2-氧代吡啶-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基]uronium鹽(TPTU)，Huenig堿2.(2S，4R)4-硫烷基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸或(2S，4R)-4-硫烷基-1-(芴基甲氧基羰基)-吡咯烷-2-羧酸，TFA，CH2Cl2實施例5平行的固相化學(流程9)典型程序步驟1，2由上述(2S，4R)-4-硫烷基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸(0.4g，0.26mmol)衍生的樹脂用DMF(無水，5ml)、TPTU(0.18g，0.61mmol)、DIEA(0.21ml，1.21mmol)處理10分鐘。真空下除去DMF溶液，反應瓶中加入芐氧基碳酰肼(0.13g，0.77mmol)在DMF(無水，3ml)中的溶液。反應混合物振動0.5小時，在過濾器上收集樹脂，用(DMF/異丙醇交替三次)、CH2Cl2、乙醚洗滌并干燥。
樹脂(440mg)用40％TFA/CH2Cl2(10ml)、三異丙基硅烷(0.5ml)處理10分鐘，收集濾液并減壓濃縮，剩余物從乙酸(10ml)中冷凍-干燥產(chǎn)生41mg(2S，4R)-N’-[4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羰基]-肼羧酸芐酯白色凍干產(chǎn)物，MS508.3(MNa+)。
通過上述程序平行制備的其他化合物在表1中出示。流程9 3.NH2NHR4，TPTU，Huenig堿，DMF4.NH2NH2·H2O，TPTU，DMF5.R4SO2Cl，DMF，脫離樹脂后分離給出兩種產(chǎn)物(R3＝R4)6.R5鹵化物，DBU，DMF7.20％哌啶/DMF，然后R2-X-鹵化物、吡啶在DMF中典型程序步驟3，2上述由(2S，4R)-4-硫烷基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸(0.5g，0.33mmol)衍生的樹脂用DMF(無水，5ml)、TPTU(0.19g，0.65mmol)、DIEA(0.22ml，1.3mmol)處理10分鐘。真空下除去DMF溶液，反應瓶中加入4-甲氧基苯磺酰肼(0.20g，1.00mmol)的DMF(無水，5ml)溶液。反應混合物振動1小時，在過濾器上收集樹脂，用(DMF/異丙醇交替三次)、CH2Cl2、乙醚洗滌并干燥。
樹脂(540mg)用40％TFA/CH2Cl2、三異丙基硅烷(0.5ml)處理15分鐘，收集濾液并減壓濃縮，剩余物通過制備型RP-HPLC純化，匯集所需的級分，由乙酸(10ml)冷凍-干燥生成(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲氧基-苯磺?；?-酰肼白色凍干產(chǎn)物，MS520.1(MH-)通過上述程序平行制備的其他化合物在表1中出示。典型程序步驟3，6，2由上述(2S，4R)-4-硫烷基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸(4.3g，2.75mmol)衍生的樹脂用DMF(無水，30ml)、TPTU(1.63g，5.50mmol)、DIEA(1.41ml，8.25mmol)處理15分鐘。真空下除去DMF溶液，反應瓶中加入甲苯-4-磺酰肼(1.54g，8.25mmol)的DMF(無水，30ml)溶液。反應混合物振動16小時，在過濾器上收集樹脂，用(DMF/異丙醇交替三次)、CH2Cl2、乙醚洗滌并干燥。典型的烷基化步驟例如向樹脂(0.8g，0.45mmol)中加入DMF(無水，10ml)、二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(0.08ml，0.54mmol)、2，5-二氟溴化芐(0.11g，0.54mmol)，混合物振動16小時，在過濾器上收集樹脂，用(DMF/異丙醇交替三次)、CHCl2、乙醚洗滌并干燥。
樹脂(0.16g)用40％TFA/CH2Cl2(10ml)、三異丙基硅烷(0.5ml)處理15分鐘，收集濾液并減壓濃縮，剩余物用制備型RP-HPLC純化，所需級分匯集并由乙酸中冷凍-干燥產(chǎn)生(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟芐基)-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼白色凍干產(chǎn)物，MS632.0(MH+)。
通過上述程序平行制備的其他化合物在表1中出示。還得到了二取代產(chǎn)物。典型程序步驟4，5，2上述由(2S，4R)-4-硫烷基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸(1.0g，0.65mmol)衍生的樹脂，用DMF(無水，10ml)、TPTU(0.39g，1.3mmol)、DIEA(0.45ml，2.6mmol)處理10分鐘。真空下除去DMF溶液，反應瓶加入水合肼(25％，0.42ml，3.25mmol)的DMF(無水，8ml)溶液。反應混合物振動1小時，在過濾器上收集樹脂，用(DMF/異丙醇交替三次)、CH2Cl2、乙醚洗滌并干燥。
在此樹脂(0.22g，0.14mmol)中加入DMF(無水，3ml)、DIEA(0.10ml，0.60mmol)、4-氟苯磺酰氯(0.11g，0.56mmol)，混合物振動3.5小時，在過濾器上收集樹脂，用(DMF/異丙醇交替三次)、CH2Cl2、乙醚洗滌及干燥。
此樹脂(0.25mg)用40％TFA/CH2Cl2(10ml)、三異丙基硅烷(0.5ml)處理15分鐘，收集濾液并減壓濃縮，剩余物通過制備型RP-HPLC純化，匯集所需級分并從乙酸(10ml)中冷凍-干燥得到(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-氟-苯磺酰基)-酰肼白色凍干產(chǎn)物，MS510.2(MH-)。
通過上述程序平行制備的其他化合物在表1中出示。典型程序步驟3，7，2由上述(2S，4R)-4-硫烷基-1-(芴基甲氧基羰基)-吡咯烷-2-羧酸(20.1g，11.9mmol)衍生的樹脂用DMF(無水，150ml)、TPTU(7.1g，23.8mmol)、DIEA(6.1ml，35.7mmol)處理10分鐘。真空下除去DMF溶液，反應瓶中加入甲苯-4-磺酰肼(6.65g，35.7mmol)的DMF(無水，100ml)溶液。反應混合物振動16小時，在過濾器上收集樹脂，用(DMF/異丙醇交替三次)、DMF洗滌。
用20％哌啶/DMF(2×5分鐘)實現(xiàn)Fmoc基團的脫去。
吡咯烷取代反應按照例如
在此樹脂(0.60g，0.30mmol)中加入DMF(無水，6ml)、吡啶(0.12ml，1.50mmol)、8-喹啉磺酰氯(0.08g，0.36mmol)，混合物振動16小時，在過濾器上收集此樹脂，用(DMF/異丙醇交替三次)、CH2Cl2、乙醚洗滌并干燥。
此樹脂(0.25mg)用40％TFA/CH2Cl2(10ml)、三異丙基硅烷(0.5ml)處理15分鐘，收集濾液并減壓濃縮，剩余物用制備型RP-HPLC純化，匯集所需級分，從乙酸(10ml)中冷凍-干燥得到(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-氟-苯磺酰基)-酰肼白色凍干產(chǎn)物，MS505.3(MH-)。
通過上述程序平行制備的其他化合物在表1中出示。
實施例A以常規(guī)方式加工含有下列成分的片劑
實施例B以常規(guī)方式加工含有下列成分的膠囊
實施例C注射液可具有下列組分
實施例D500mg化學式I的化合物懸浮在3.5ml Myglyol 812和0.08g芐醇中。懸浮液被充入一個帶有劑量閥門的容器中。通過閥門在壓力下在容器中充入5.0g氟里昂12。通過振動使氟里昂溶于Myglyol-芐醇混合物中。此噴霧容器含有可單獨使用的大約100次單次劑量。
權利要求
1.通式I的化合物，和它們的藥用酯，和/或它們的藥用鹽 其中R1是氫、烷基羰基、或芳基羰基；R2是烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、環(huán)烷基、鹵代烷基、羧烷基、氨基烷基、(單-和二烷基)氨基烷基、烷氧基烷基、烷氧羰基烷基、鏈炔基、芳基、芳烷基、芳烷基(烷氧羰基)烷基、芳基羰基烷基、芳氧基烷基、芳基鏈烯基、芳基(烷氧羰基)烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)烷基；R3是氫、芳基、烷基或芳烷基、芳基磺?；㈦s芳基磺?；?；R4是氫、芳烷基、烷基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、烷基磺?；?、芳基磺?；?、芳基烷基磺?；?、雜芳基磺?；?、羧烷基、羧烷基磺?；蛲檠豸驶榛?；或基團-NR3R4或R5-[N-N(R4)]-R3形成飽和或不飽和的5-元或6-元脂肪環(huán)；R5是氫、烷基磺酰基、芳基磺?；?、雜芳基磺酰基、烷氧羰基、芳氧基羰基、雜芳氧基羰基、烷基羰基、芳基羰基、雜芳基羰基、雜芳基烷基羰基、雜環(huán)基、(單-或二烷基氨基)-烷基羰基、(單-和二烷基)氨基磺?；⒎及被驶?、烷基、烷基羰基、烷氧羰基、芳基、芳基烷基、芳基烷氧羰基或雜芳基；R6是氫、烷基、芳基或羧烷基；X是-S(O)2-、-S(O)2-NH-、-C(O)-、-C(O)NR6或C(O)-O-。
2.根據(jù)權利要求1的化學式(I)的化合物，其中R1是氫。
3.根據(jù)權利要求1～2中任意一項的化合物，其中R2是烷基、鹵代烷基、烷基氨基、烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烷基氨基、芳基、芳烷基、芳氧基、芳烷基氨基、芳基烷氧基、雜芳基、氨基、或(單-和二烷基)氨基。
4.根據(jù)權利要求1～3中任意一項的化合物，其中R2是烷基、鹵代烷基、烷基氨基、烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烷基氨基、芳基、芳烷基或雜芳基。
5.根據(jù)權利要求1～4中任意一項的化合物，其中R2是芳基或雜芳基。
6.根據(jù)權利要求1～5中任意一項的化合物，其中R2是芳基。
7.根據(jù)權利要求1～6中任意一項的化合物，其中R2是萘基或苯基，其中苯基任選地被一個或多個氟取代或被一個苯基取代。
8.根據(jù)權利要求1～7中任意一項的化合物，其中R2是萘基、2，3，4，5，6-五氟苯基或聯(lián)苯基。
9.根據(jù)權利要求1～8中任意一項的化合物，其中R3是氫或烷基。
10.根據(jù)權利要求1～9中任意一項的化合物，其中R3是氫。
11.根據(jù)權利要求1～10中任意一項的化合物，其中R4是氫、芳烷基、烷基、芳基磺?；㈦s芳基磺?；?、環(huán)烷基烷基或羧烷基。
12.根據(jù)權利要求1～11中任意一項的化合物，其中R4是氫、烷基、芳烷基、環(huán)烷基、芳基磺?；螋韧榛?br> 13.根據(jù)權利要求1～12中任意一項的化合物，其中R4是氫、烷基、環(huán)烷基、羧烷基或芳烷基。
14.根據(jù)權利要求1～13中任意一項的化合物，其中R4是氫、烷基或芳基烷基。
15.根據(jù)權利要求1～14中任意一項的化合物，其中R4是氫、2，4，5-三氟芐基、2，4-二氟芐基、芐基、甲基、乙基、異丙基、異丁基、芐基或HO2C-CH2-、或環(huán)烷基丙基甲基。
16.根據(jù)權利要求1～15中任意一項的化合物，其中R5是氫、烷基羰基、烷氧羰基、烷基磺?；?、芳基、芳烷基、芳基羰基、(單-和二烷基氨基)烷基羰基、(單-和二烷基)氨基磺?；?、芳基烷氧羰基、芳基氨基羰基、芳基磺?；㈦s芳基羰基、雜芳基烷基羰基、雜芳基磺?；?、芳基氨基羰基、雜芳基或雜環(huán)基。
17.根據(jù)權利要求1～16中任意一項的化合物，其中R5是芳基、芳烷基、芳基羰基、芳基烷氧基、芳基氨基羰基、芳基磺?；?、雜芳基羰基、雜芳基烷基羰基、雜芳基磺?；?、芳基氨基羰基、雜芳基或雜環(huán)基。
18.根據(jù)權利要求1～17中任意一項的化合物，其中R5是芳基磺?；⒎纪榛?、雜芳基烷基羰基、雜芳基磺?；?。
19.根據(jù)權利要求1～18中任意一項的化合物，其中R5是4-甲基-苯磺?；?、芐基、4-甲氧基苯磺酰基、(1H-吲哚-3-基)乙?；?、噻吩-2-基、或3，5-二甲基-異噁唑-4-磺?；?。
20.根據(jù)權利要求1～19中任意一項的化合物，其中X是-SO2-、-C(O)-。
21.根據(jù)權利要求1～20中任意一項的化合物，其中X是-SO2-。
22.根據(jù)權利要求1～21中任意一項的化合物，其化學式為
23.根據(jù)權利要求1～22中任意一項的化合物，其中R1是氫；R2是萘基或苯基，其中苯基任選地被一個或多個氟取代或被一個苯基取代；R3是氫或烷基；R4是氫、烷基或芳基烷基；R5是芳基磺酰基、芳烷基、雜芳基烷基羰基、雜芳基磺酰基；及X是-SO2-。
24.根據(jù)權利要求1～23中任意一項的化合物，選自a)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；b)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；c)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-酰肼；d)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；e)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-甲基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；f)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-苯磺酰基-酰肼；g)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲氧基-苯磺?；?-酰肼；h)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-[(1H-吲哚-3-基)-乙?；鵠-酰肼；i)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-噻吩-2-磺?；?酰肼；j)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(3，5-二甲基異噁唑4-磺?；?-酰肼；k)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-環(huán)丙基甲基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；l)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲基-苯磺?；?-N’-(2，4，5-三氟-芐基)-酰肼；m)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟-芐基)-N’-(4-甲基-苯磺酰基)-酰肼；n)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-異丙基-N’-(4-甲基-苯磺酰基)-酰肼；o)(2S，4R)-[N’-[4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-N-(4-甲基-苯磺酰基)-肼基]-乙酸；p)(2S，4R)-1-(聯(lián)苯基-4-磺?；?-4-巰基-吡咯烷-2-羧酸N’-甲基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；q)(2S，4R)-4-巰基-1-(2，3，4，5，6-五氟-苯磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲基-苯磺酰基)-酰肼；r)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N’-(4-甲氧基-苯磺?；?-酰肼；s)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；及t)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-芐基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼。
25.一種藥物組合物，它含有根據(jù)權利要求1～24中任意一項的化合物及一種或多種藥用賦形劑。
26.權利要求1～24的化合物作為活性成分在制造藥物中的用途，這些藥物用于預防和治療由內(nèi)皮素-轉變酶(ECE)活性引起的一些疾病，尤其是心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動脈硬化癥、伯格氏病，高安氏動脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、與抑制細胞生長有關的疾病、眼科和大腦保護性適應癥及器官保護的用途。
27.根據(jù)權利要求1～24中任意一項的化合物的用途，用于治療或預防與心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調、內(nèi)毒素休克和敗血病關聯(lián)的疾病，以及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、與抑制細胞生長關聯(lián)的疾病、眼科及大腦保護性適應癥和器官保護。
28.根據(jù)權利要求1～24中任意一項的化合物用作治療的活性物質，特別在與鋅水解酶活性關聯(lián)的疾病的范圍，這些疾病如心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動脈硬化癥、伯格氏病，高安氏動脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、與抑制細胞生長關聯(lián)的疾病、眼科和大腦保護性適應癥及器官保護。
29.一種治療和/或預防處理心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調、內(nèi)毒素休克和敗血病的方法，和用于創(chuàng)傷治療及控制月經(jīng)、青光眼、與抑制細胞生長關聯(lián)的疾病、眼科和大腦保護性適應癥及器官保護的方法，該方法包括將根據(jù)權利要求1～24中任意一項的化合物給予人類或動物服用。
30.一種制備權利要求1～24中任意一項定義的化合物的方法，該方法包括將化學式III的化合物 其中R1、R2和X的定義如上文，及A是HS-保護基團，a)與HNR3NR4R5反應以引入酰肼；或b)HNR3NR4R5中R5為保護基團，接著轉換或引入R3和R4；可任選地接著轉換R5和/或R2-X基團為不同的R5和/或R2-X基團、和/或脫保護基及或者釋放硫醇，及其中R3、R4和R5的定義與權利要求1～21中任意一項所定義的相同。
31.根據(jù)權利要求30的方法制備的化合物。
32.上文定義的發(fā)明。
全文摘要
本發(fā)明涉及化學式(I)的化合物及其藥用的酯和/或鹽，化學式(I)中R
文檔編號A61P15/00GK1443163SQ01813048
公開日2003年9月17日 申請日期2001年7月11日 優(yōu)先權日2000年7月19日
發(fā)明者約翰內(nèi)斯·埃比, 亨麗埃塔·德姆洛, 埃里克·阿爾吉里斯·基塔斯 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司