專利名稱：改進(jìn)活性成分口服吸收的微粒載體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于在對人體或動物口服給藥之后增加活性成分吸收的微粒載體。
當(dāng)前普遍認(rèn)可的是尚未發(fā)現(xiàn)將要在未來30年中使用的大多數(shù)活性成分。此外，預(yù)期的研究與如下想法相一致衍生自生物工程技術(shù)的大多數(shù)這些未來活性成分會是肽和/或蛋白質(zhì)。采用有效劑量這些新藥物會是非常有活性的，有效劑量大約為微克或更小。少數(shù)藥物(主要是肽)已經(jīng)在北美或歐洲上市(LH/RH類似物、生長激素、鏈激酶、抗體等)。多于一百種肽和蛋白質(zhì)目前處于人體臨床試驗階段。
目前在市場上的肽和蛋白質(zhì)具有一些缺陷從而限制了它們在人體上的用途。
-給藥的唯一途徑是胃腸外途徑(靜脈內(nèi)、皮下或肌內(nèi))和-它們在體內(nèi)消除的半壽期較短，因此必須進(jìn)行多次給藥。
目前不存在用于口服給藥的肽和蛋白質(zhì)藥物劑型，而用于胃腸外途徑的多微粒劑型已經(jīng)在市場上存在數(shù)年(Takeda laboratories的Enantone，和Novartis laboratories的Sandostatine)。
缺少口服途徑的劑型可解釋為肽和蛋白質(zhì)對消化液的敏感性，消化液以和食物蛋白質(zhì)相同的方式降低蛋白質(zhì)基醫(yī)藥產(chǎn)品；此導(dǎo)致由于初始破壞的事實上的總體吸收缺乏。由于口服途徑是最通常和最容易被人體接受的途徑，開發(fā)用于保護(hù)肽和蛋白質(zhì)免受消化液破壞而失效并同時允許胃腸吸收的劑型代表本世紀(jì)初的主要治療進(jìn)展。
正是由于通過胃腸道的蛋白酶的這種失活，已經(jīng)胃腸外給予胰島素—一種51個氨基酸的肽幾乎80年。已經(jīng)進(jìn)行了用于改進(jìn)肽和蛋白質(zhì)口服吸收的某些嘗試。引用了幾個文獻(xiàn)研究，例如，當(dāng)將胰島素引入聚(氰基丙烯酸異丁酯)納米膠囊中時，它的口服吸收增加(Michel C.等人，J.Pharm.Pharmacol.，43，(1991)，1-5；Damge C.等人，Diabetes，37，(1988)，246-251)。這些納米膠囊具有相應(yīng)于被非常薄的聚合物膜包圍的油納米液滴的囊狀結(jié)構(gòu)。然而，已知選擇的聚合物對細(xì)胞的毒性妨礙了所設(shè)想的在幾年內(nèi)重復(fù)給藥。相似地，油在納米膠囊核中的存在提出了長時間對給藥部位帶來毒性的問題，因此妨礙了所設(shè)想的胰島素納米膠囊的市場化。此外，僅在2天后觀察到低血糖效應(yīng)，這可能是由于粒子通過腸粘膜非常有限以及胰島素緩慢釋放。采用相同聚合物(聚氰基丙烯酸烷基酯)制備的和口服給予的胰島素納米粒子沒有顯示任何低血糖活性(Couvreur P.等人，ActaPharm，Technol.26，(1980)，220-222)。
相似地，盡管開發(fā)了微乳液藥物劑型(Neoral，來自Novartislaboratories)，環(huán)孢菌素的口服給藥是不規(guī)律的和非常易變的。環(huán)孢菌納米粒子的開發(fā)目前還不能增加此活性成分的口服生物可利用性，它仍限于小于5％(Ford J.等人，Int.J.Pharm.，183，(1999)，3-6)。
肝素已經(jīng)在血栓栓塞疾病的防止和治療中使用了大約五十年，但特別具有出血性和要求嚴(yán)格生物和臨床監(jiān)測的缺點。除導(dǎo)致凝固性過高狀況的止血的功能異常(抗凝血酶III，輔因子II，蛋白質(zhì)C和S的先天性或獲得性缺乏)以外，已經(jīng)注意到對于血栓栓塞疾病的各種危險因素，其被定義為導(dǎo)致在血管腔中形成纖維蛋白凝塊或血小板栓塞的一種止血紊亂。
這些與患者相關(guān)的危險因素是·年齡疾病在超過40歲的個體中達(dá)到50％以上·性別在小于40的婦女中疾病的高發(fā)病率，并且特別是在妊娠期間·肥胖·避孕藥劑的攝取·吸煙·動脈高血壓·糖尿病·高膽固醇血癥
·促進(jìn)郁滯的臥床·靜脈曲張·心功能不全·外科手術(shù)在手術(shù)后狀態(tài)下疾病的發(fā)病率增加。
肝素是由D-葡糖胺和葡萄糖醛酸或艾杜糖醛酸糖類單元組成的天然硫酸化陰離子粘多糖，它由肥大細(xì)胞合成并且工業(yè)上可從牛肺或豬腸提取。由于葡糖胺和糖醛酸可以被硫酸酯或乙?；〈虼艘呀?jīng)識別了約十種不同的糖類單元。這些各種單元非常一致地分布，確定三個分子內(nèi)區(qū)域，一個區(qū)域是五糖結(jié)構(gòu)，在肝素和抗凝血酶III之間的作用部位。在結(jié)合到抗凝血酶III上時，肝素催化幾種凝血因子、特別是凝血酶和因子Xa的失活。這導(dǎo)致由活化的腦磷脂時間測得的凝血時間的延長。由于肝素包括分子量為2500-40000道爾頓的糖鏈分子的嵌合體，它事實上是高度異種的物質(zhì)?？梢杂筛鞣N方法(色譜或化學(xué)和酶水解)將天然肝素的多糖鏈分級，因此產(chǎn)生區(qū)別于未分級肝素的具有新穎性能的低分子量肝素(LMWHs)。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員，最重要的性能是約兩倍長的半壽期，較少或沒有的抗凝劑效果，更易于皮下給藥，較好的局部耐受性，低出血性能力和更長的藥物動力學(xué)。
肝素通常經(jīng)胃腸外、即靜脈內(nèi)或皮下給予。然而，此給藥類型是限制性的并可帶來患者的依從性問題。此外，一旦靜脈內(nèi)注入，肝素從血液循環(huán)中快速消除，并必須在固定的間隔內(nèi)給予大劑量以獲得有效的抗凝作用，其通常伴隨著異常出血或如血小板減少這樣的并發(fā)癥。
因此，口服給予肝素的可能性事實上會受到心血管領(lǐng)域的許多臨床病例的巨大沖擊。
現(xiàn)在，根據(jù)肝素的結(jié)構(gòu)，將它看成是具有高分子量包括高電荷密度的分子。因此它在口服給藥之后不能容易地越過消化屏障。
因此，口服給予的肝素在胃腸道中不被吸收，并且在酸性介質(zhì)中損失其抗凝劑活性(Mortan等人，Int.J.Pharm.，9，(1981)，321-335，Doutremepuich等人，Seminarsin Thrombosis and Hemostasis，11(3)，(1985)，323-325)。因此使用的戰(zhàn)略在于通過較大量地增加給予的劑量來彌補(bǔ)吸收/抗凝劑活性的缺乏。
因此，先前的研究已經(jīng)證明在溶液中的大量肝素(40000IU，即每兩小時常規(guī)靜脈內(nèi)給藥的10-17倍劑量)對人體口服給藥之后，僅有較少數(shù)量通過消化系統(tǒng)吸收并在血液中分布。此外，通過活化腦磷脂時間(ACT)測得的抗凝劑活性非常低(Baughman等人，Circulation，16，(1998)，1610-1615)。相似地，在人體中，口服給予低分子量肝素(LMWH)之后，在血漿中沒有觀察到活性(Dryjski等人，Br.J.Clin.Pharmcol.2，(1989)，188-192)。
已經(jīng)設(shè)想了對肝素的許多化學(xué)改性和各種制劑的制備以改進(jìn)肝素在口服給藥之后的生物可利用性。
首先，在于研究肝素結(jié)構(gòu)改性的實驗(不同來源的肝素，更多或更少片段的，直到低分子量肝素的出現(xiàn))。
通過采用佐劑如賴氨酸、精胺或甘氨酸復(fù)合肝素而制備溶液，以降低肝素的離子化。在口服給藥之后，這些溶液顯示出對肝素的低吸收(Tidball等人，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.111，(1962)，713-715)。
還通過將肝素與乙二胺四乙酸的鈉鹽或膽鹽結(jié)合而制備肝素的酸鹽溶液(Mortan等人，Int.J.Pharm.，9，(1981)，321-335)。
還設(shè)想了用于增加肝素吸收的甘油單油酸脂鹽的水包油(O/W)乳液或膠束溶液(Taniguchi等人，Int.J.Pharm.，4，(1980)，219-228)。
包含肝素和衍生自芳族氨基酸4-氨基苯基丁酸的N-?；幕衔锏谋既芤涸趯Υ笫蠛秃镒涌诜o藥之后顯示肝素在胃腸吸收和生物可利用度方面的改進(jìn)(Leone-Bay等人，J.ControlledRed.，50，(1998)，41-49)。
盡管大多數(shù)這些各種肝素溶液(Tidball等人，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.111，(1962)，713-715，Mortan等人，Int.J.Pharm.，9，(1981)，321-335，Taniguchi等人，Int.J.Pharm.，4，(1980)，219-228和Leone-Bay等人，J.Controlled Red.，50，(1998)，41-49)已經(jīng)使得有可能改進(jìn)肝素的胃腸吸收，對于非常的更大劑量，所觀察到的抗凝劑效果更小并且具有比在皮下給藥之后獲得的更短的持續(xù)時間。此外，所使用的吸收促進(jìn)劑和賦形劑的毒物藥理學(xué)狀態(tài)累及了這些制劑的成功。
將耐胃肝素凝膠膠囊給予兔子并在第2和第4小時之間觀察到小的血漿抗Xa活性(0.15IU/ml)。然而，在此情況下同樣需要給予非常大劑量的肝素(15000IU抗Xa/kg)(Doutremepuich等人，Therapie，39，(1984)，147-152)。
其它研究在于嘗試優(yōu)化肝素的吸收，作為其結(jié)果，優(yōu)化所需的治療效果。此新穎步驟以給藥系統(tǒng)、如脂質(zhì)體和微粒子的制備為標(biāo)志，它使得可以設(shè)想肝素的包囊。由于它們從聚合物系統(tǒng)的逐漸釋放和該系統(tǒng)賦予它們針對酶降解的保護(hù)，這些用于酶、藥物和激素的包囊技術(shù)允許這些分子比以其自由形式使用時在血液循環(huán)中停留更長的時間(Couvreur等人，Drug Del.Rev.，10，(1993)，141-162)。
還已經(jīng)制備了脂質(zhì)體并給予狗，觀察活性成分的腸吸收，但僅檢測到一周的生物活性，而仍然需要給予非常高的肝素劑量(500000IU)(Ueno等人，Chem.Pharm.Bull.，30(6)，(1982)，2245-2247)。
最后，也已經(jīng)開發(fā)由熱縮合氨基酸組成的微球(Santiago等人，Proceed.Intern.Symp.Control.Rel.Mater.，19，(1992)，514-515和Santiago等人，Proceed.Intern.Symp.Control.Rel.Mater.，20，(1993)，300-301)。在后者情況下，獲得的尺寸為0.5-10μm的粒子稱為類蛋白。它們對大鼠和猴子的口服給藥使得可以確定肝素的腸吸收；然而，這些有希望的結(jié)果突然碰到三個主要障礙。首先，肝素的生物活性僅表現(xiàn)至多90分鐘。此外，在大鼠中是在比人體中胃腸外使用的那些劑量大10倍以上的劑量下獲得了生物活性。最后，非常多的目前常用的口服免疫研究是基于由Peyer斑對尺寸為1-10μm載有抗原的微粒子的吸收現(xiàn)象。在這些條件下，使用的類蛋白可誘導(dǎo)會累及這些粒子重復(fù)給藥的免疫變應(yīng)性現(xiàn)象。
聚合物系統(tǒng)也已經(jīng)成為許多研究的對象。因此，Yang等人(J.Control.Rel.，60，(1999)，269-277)制備了僅基于乳酸和乙醇酸聚合物(PLGA)目的在于抑制在體外研究期間血管平滑肌細(xì)胞的增殖的肝素微粒子(Yang等人，J.Control.Rel.，60，(1999)，269-277)。由噴霧干燥技術(shù)制備的微粒子非常小(3-9μm)。肝素體外的釋放非常緩慢(10-40天)，它與口服給藥不相容，為此運(yùn)送時間為約24-48小時。
然而，所有這些試驗使用遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于在人體中常規(guī)治療使用的肝素劑量。因此，仍然需要為患者提供給藥系統(tǒng)，該給藥系統(tǒng)能增加在口服給藥之后活性成分、特別是肝素的吸收并允許該活性成分在更低濃度下給予，因此降低有害的副作用。
現(xiàn)在，就大分子經(jīng)過胃腸屏障的滲透而言，發(fā)明人令人驚奇地和出乎意料地顯示包括聚合物基質(zhì)的微粒載體允許活性成分，特別是肝素的口服給藥量，該量接近于通常胃腸外使用的那些劑量，所述聚合物基質(zhì)基于非腸可生物降解聚合物和非腸聚陽離子聚合物的混合物。
因此，本發(fā)明的一個目的是一種由聚合物基質(zhì)形成的改進(jìn)活性成分口服吸收的微粒載體，所述聚合物基質(zhì)包括與至少一種聚陽離子聚合物結(jié)合的至少一種可生物降解聚合物。
為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，可生物降解聚合物和聚陽離子聚合物可以是或可以不是耐胃的(腸的)。
在本發(fā)明的另一個特定實施方案中，聚合物基質(zhì)是這樣的相對于可生物降解聚合物，聚陽離子聚合物的百分比為1％-99％。
在本發(fā)明的另一個特定實施方案中，可生物降解聚合物和聚陽離子聚合物以等量存在。
有利地，非腸可生物降解聚合物選自聚酯，特別是乳酸聚合物、乳酸和乙醇酸的共聚物(PLGA)、聚ε-己內(nèi)酯(PCL)、聚酸酐、聚(酰胺)、聚(尿烷)、聚(碳酸酯)、聚(縮醛)、聚(原酸酯)和天然聚合物(膠原、多糖等)。
有利地，聚陽離子聚合物選自纖維素衍生物、由Rhom GmbH公司以名稱Eudragit銷售的丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的共聚物，并且更特別地是甲基丙烯酸聚酯與少部分三甲基銨乙基甲基丙烯酸酯氯化物的共聚物(EudragitRS)或與大部分三甲基銨乙基甲基丙烯酸酯氯化物的共聚物(EudragitRL)、脫乙酰殼多糖及其衍生物以及聚賴氨酸。
在本發(fā)明的一個特別有利的方式中，可生物降解聚合物是PCL或PLGA，該聚合物的分子量為2000-100000。
在根據(jù)本發(fā)明的另一個特定實施方案中，微粒載體的形式是直徑為50-1000nm和優(yōu)選200-400nm的納米粒子，或直徑為1-1000μm和優(yōu)選50-200μm的微粒子。
根據(jù)本發(fā)明，聚合物基質(zhì)也可包括一種或多種選自腸聚合物、表面活性劑和水溶性或脂溶性物質(zhì)的物質(zhì)。
在本發(fā)明的一個特定實施方案中，活性成分選自肝素和相關(guān)產(chǎn)品、低分子量肝素(LMWHs)和相關(guān)產(chǎn)品、肽和蛋白質(zhì)、特別是胰島素、環(huán)孢菌素、反義寡核苷酸、DNA和生長激素。
在本發(fā)明的另一個特定實施方案中，用于注射在2000IU-20000IU/天劑量下的標(biāo)準(zhǔn)肝素或在600IU-4200IU/天[sic]劑量下的LMWH的微粒載體。
本發(fā)明的目的也是包含與任何藥用賦形劑結(jié)合的上述微粒載體的藥物組合物。
組合物可以適于口服給藥的任何形式、特別是以凝膠膠囊、片劑、顆粒、香囊或凍干物的形式一天使用一次或多次。
本發(fā)明組合物允許將要給的活性成分的劑量相當(dāng)于胃腸外使用時的1-10倍。這樣的載體有可能消除胃腸外途徑的缺點(藥物的消毒，注射點的疼痛，患者的焦慮，感染的危險，注射點的有限數(shù)目)。由于在等于靜脈內(nèi)常規(guī)使用的劑量或略高于(至多10倍和優(yōu)選1-3倍)該劑量下使用活性成分，它們也避免了大劑量給予活性成分，正如在經(jīng)口服途徑給藥時的情況。
此外，被認(rèn)為是可生物相容性(可生物降解和/或非可生物降解)的聚合物的使用是所述粒子不存在毒性的保證。
根據(jù)本發(fā)明的微粒載體也不可預(yù)料地使獲得比在溶液中經(jīng)靜脈內(nèi)給予相似劑量的給藥更長的作用時間成為可能，而由于活性成分在胃腸道(胃的酸性pH、酶、各種分泌物，肝臟的首過效應(yīng)等)中停留導(dǎo)致的損失，已知口服給予的劑量通常必須遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于靜脈內(nèi)給予的劑量才能夠發(fā)揮它們的活性。
根據(jù)本發(fā)明，可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法制備微粒載體。可以提及的例子包括如由Alex等人描述的通過乳化和溶劑蒸發(fā)的制備方法(J.Microencapsulation，7(3)，(1990)，347-355)。也可以預(yù)見其它方法，特別是噴霧干燥、包衣和擠出。
以下的實施例和


本發(fā)明，而不限制本發(fā)明。
圖1說明在肝素微粒子的口服給藥之后，通過活化的腦磷脂時間確定的肝素的生物活性，所述的肝素微粒子由聚合物混合物EudragitRS/PLGA以(1/1)的比例根據(jù)實施例1的方法制備并根據(jù)實施例9的方法給藥。
圖2說明在肝素納米粒子口服給藥之后的肝素血，所述肝素納米粒子由聚合物混合物EudragitRL/PCL以(1/1)的比例根據(jù)實施例1的方法制備并根據(jù)實施例9的方法給藥。
圖3說明在根據(jù)實施例10的方法制備的胰島素納米粒子口服給予4小時之后，采用2g葡萄糖口服給藥誘導(dǎo)的糖血的動力學(xué)(對照物＝未處理的大鼠，ins＝采用根據(jù)本發(fā)明的納米粒子處理的大鼠)。
圖4說明在根據(jù)實施例10的方法制備的胰島素納米粒子口服給予8小時之后，采用2g葡萄糖口服給藥誘導(dǎo)的糖血的動力學(xué)(對照物＝未處理的大鼠，ins＝采用根據(jù)本發(fā)明的納米粒子處理的大鼠)。
實施例1包含肝素的微粒載體(微粒子)的制備將含有聚合物或聚合物混合物(250mg)的標(biāo)準(zhǔn)或低分子量肝素(1ml，5000IU)的二氯甲烷(10ml)溶液采用磁力攪拌3分鐘(500rpm)進(jìn)行乳化。然后將此第一乳液(水/油)傾入包含表面活性劑、聚乙烯醇(0.1％水解程度88％)的水(1500ml)中，它通過機(jī)械攪拌(2000rpm)得到第二水/油/水乳液。在攪拌2小時之后，在蒸除溶劑之后獲得分散液滴的沉淀。然后通過過濾分離這樣獲得的聚合物微粒子。粒子的平均尺寸為150μm。
實施例2包含肝素和明膠A的微粒載體(微粒子)的制備根據(jù)實施例1，并向肝素溶液中加入明膠A(0.5％)進(jìn)行操作。
實施例3包含肝素和氯化鈉的微粒載體(微粒子)的制備根據(jù)實施例1，并向肝素溶液中加入氯化鈉(0.2％)進(jìn)行操作。
實施例4包含肝素的微粒載體(納米粒子)的制備將含有聚合物或聚合物混合物(250mg)的標(biāo)準(zhǔn)或低分子量肝素(1ml，5000IU)的二氯甲烷(10ml)溶液將使用超聲探針乳化3分鐘。然后將此第一乳液(水/油)傾入包含表面活性劑、聚乙烯醇(0.1％)的水(200ml)中，通過在壓力下的均化(兩階段均化器)得到第二水/油/水乳液。在剪切3分鐘之后，停止攪拌并在蒸發(fā)器中在減壓下，從膠體懸浮液中蒸發(fā)溶劑，導(dǎo)致水懸浮液中的聚合物納米粒子的形成。將納米粒子通過離心(25000g)洗滌3次。此懸浮液可以所獲得的那樣或以冷凍干燥的那樣使用。粒子的平均尺寸為250nm。
實施例5包含肝素和明膠A的微粒載體(納米粒子)的制備根據(jù)實施例4，并向肝素溶液中加入明膠A(0.5％)進(jìn)行操作。
實施例6包含肝素和氯化鈉的微粒載體(納米粒子)的制備根據(jù)實施例4，并向肝素溶液中加入NaCl(0.2％)進(jìn)行操作。
實施例7粒子的物理化學(xué)表征根據(jù)實施例1-6的方法制備微粒子和納米粒子并包含總計0.25g的聚合物或聚合物混合物。
微粒子的特性見表1，以3次測試的平均值(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)表示。
納米粒子的特性見表2，以4次測試的平均值(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)表示。
在未分級標(biāo)準(zhǔn)肝素的情況下通過采用天青(Azure)II溶液驗證的比色法以及在LMWH(低分子量肝素)的情況下通過比濁法，測量活性成分在該粒子中和/或在該粒子上的含量(表達(dá)為百分比和IU肝素/克聚合物)。
通過對本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的光散射/擴(kuò)散的標(biāo)準(zhǔn)措施獲得微粒子和納米粒子的直徑。通過激光電泳測量納米粒子的表面電勢。
結(jié)果顯示此制備技術(shù)是可以再現(xiàn)的。
對于僅采用可生物降解聚合物制備的微粒子和納米粒子，肝素的引入水平較低，即使假定吸收的話它將需要過大的和不相容量的粒子(在單一給藥中達(dá)到幾克的數(shù)量級)。
相反地，根據(jù)本發(fā)明的微粒子具有足以允許相容量粒子給藥的引入水平。
表1
a對比實施例b根據(jù)本發(fā)明的實施例表2
a對比實施例b根據(jù)本發(fā)明的實施例實施例8體外釋放的肝素量通過根據(jù)制造商指示的計時法(ACT，活化的腦磷脂時間，C.K.Prest試劑盒，Diagnostica Stago)和顯色方法(抗Xa活性，Stachrom肝素試劑盒，Diagnostica Stago)測定包封在根據(jù)實施例1-6制備的粒子并然后從該粒子釋放的肝素的生物活性。
獲得的結(jié)果顯示通過兩種方法獲得的肝素釋放量的數(shù)值相同，其證實肝素在包封之后保存了它的生物活性。
實施例9在對兔子口服給藥之后的體內(nèi)研究結(jié)果見附圖1和2。
向禁食12小時的兔子以單一劑量給予就標(biāo)準(zhǔn)肝素為2000IU或就LMWH為600IU的凝膠膠囊，該膠囊包含根據(jù)實施例1-6從250mg聚合物或聚合物混合物制備的肝素聚合物粒子。在時間T0和規(guī)定時間下從耳朵的外靜脈取血液樣品(500μl)。每個樣品在7000g下離心8分鐘之后，如在實施例8中所示測定活化的腦磷脂時間或抗Xa活性。
出乎意料地，作為單一口服給藥，并采用比現(xiàn)有技術(shù)中使用的那些低20-250倍的活性成分濃度[2000IU肝素，然而公開的其它研究陳述為每8小時從40000、60000到90000的劑量連續(xù)5天(Baugham，Proceed.Intern.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.，26，(1999)，4)直到500000IU(Ueno等人，Chem.Pharm.，30(6)，(1982)，2245-2247)]，根據(jù)本發(fā)明制備的肝素粒子的凝血時間顯著并持續(xù)增加。
相反地，在僅從可生物降解聚合物(PLGA，PCL等)制備的微粒子或納米粒子的口服給藥之后，沒有觀察到標(biāo)準(zhǔn)肝素的吸收。在僅從非可生物降解聚合物(EudragitRL，EudragitRS)制備的微粒子或納米粒子的口服給藥之后，沒有觀察到標(biāo)準(zhǔn)肝素的吸收。
因此，本發(fā)明的肝素微粒載體允許事實上等于目前在人體中經(jīng)靜脈內(nèi)和皮下給予的那些劑量的口服給藥，并同時保證活性成分的持續(xù)效率。
實施例10包含胰島素的微粒載體(納米粒子)的制備將包含聚合物混合物(250mg)的胰島素的二氯甲烷溶液使用超聲探針進(jìn)行乳化30秒。
然后將此第一乳液(水/油)傾入包含表面活性劑、聚乙烯醇(0.1％)的水(40ml)中并使用超聲探針乳化1分鐘，因此得到第二水/油/水乳液。
使用蒸發(fā)器在減壓下蒸除將有機(jī)溶劑，導(dǎo)致納米粒子的形成。將膠體懸浮液離心30分鐘(42000g)，將上層清液除去并將納米粒子再懸浮于水中并可如獲得的那樣使用。粒子的平均尺寸為350nm。
實施例11在對糖尿病大鼠口服給予胰島素納米粒子之后的體內(nèi)研究結(jié)果由附圖3和4表示。
向禁食12小時、通過鏈脲酶素給藥而形成糖尿病的大鼠以單一劑量(100IU/kg)口服給予根據(jù)實施例10制備的胰島素納米粒子的懸浮液。在納米粒子的口服給藥之后4和8小時進(jìn)行誘導(dǎo)高血糖癥的測試(口服給予的2g葡萄糖)。在時間T0和規(guī)定時間下從尾靜脈取血液樣品。對于每個血液樣品測定糖血和胰島素血。
出乎意料地，在單一口服給藥之后，根據(jù)本發(fā)明制備的胰島素粒子可顯著降低糖血。
相應(yīng)地，觀察到胰島素血的增加。
權(quán)利要求
1.改進(jìn)活性成分口服吸收的微粒載體，其特征在于它由聚合物基質(zhì)形成，所述聚合物基質(zhì)包括與至少一種聚陽離子聚合物結(jié)合的至少一種可生物降解的聚合物。
2.權(quán)利要求1的微粒載體，其特征在于相對于非腸可生物降解聚合物而言，聚陽離子聚合物的百分比為1％-99％。
3.權(quán)利要求2的微粒載體，其特征在于可生物降解聚合物和聚陽離子聚合物以同等量存在。
4.權(quán)利要求1-3任意一項的微粒載體，其特征在于非腸可生物降解聚合物選自聚酯，特別是乳酸聚合物、乳酸和乙醇酸的共聚物(PLGA)、聚ε-己內(nèi)酯(PCL)、聚酸酐、聚(酰胺)、聚(尿烷)、聚(碳酸酯)、聚(縮醛)、聚(原酸酯)和天然聚合物。
5.權(quán)利要求1-4任意一項的微粒載體，其特征在于聚陽離子聚合物選自纖維素衍生物、由Rhom GmbH公司以名稱Eudragit銷售的丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的共聚物并且更特別地是甲基丙烯酸聚酯與少部分三甲基銨乙基甲基丙烯酸酯氯化物的共聚物(EudragitRS)或與大部分三甲基銨乙基甲基丙烯酸酯氯化物的共聚物(EudragitRL)、脫乙酰殼多糖及其衍生物以及聚賴氨酸。
6.權(quán)利要求1-5任意一項的微粒載體，其特征在于它是納米粒子或微粒子的形式。
7.權(quán)利要求1-6任意一項的微粒載體，其特征在于它還包括一種或多種選自腸聚合物和水溶性或脂溶性物質(zhì)的物質(zhì)。
8.權(quán)利要求1-7任意一項的微粒載體，其特征在于活性成分選自肝素和相關(guān)產(chǎn)品以及低分子量肝素和相關(guān)產(chǎn)品。
9.權(quán)利要求1-7任意一項的微粒載體，其特征在于活性成分是胰島素。
10.藥物組合物，其特征在于它包含與任何藥用賦形劑結(jié)合的至少一種權(quán)利要求1-9任意一項的微粒載體。
11.權(quán)利要求10的藥物組合物，其特征在于它允許標(biāo)準(zhǔn)肝素在2000IU-20000IU/天的劑量下或LMWH在600IU-4200IU/天的劑量下的口服給藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及設(shè)計用于改進(jìn)活性成分口服吸收的微粒載體，其特征在于它們由聚合物基質(zhì)組成，所述聚合物基質(zhì)包括與至少一種聚陽離子聚合物結(jié)合的至少一種可生物降解聚合物。
文檔編號A61K47/34GK1440277SQ01812448
公開日2003年9月3日 申請日期2001年7月5日 優(yōu)先權(quán)日2000年7月7日
發(fā)明者菲利普·曼森特, 納塔勒·烏博里奇, 克勞德·維尼龍 申請人:菲利普·曼森特, 納塔勒·烏博里奇, 克勞德·維尼龍