專利名稱：吳茱萸堿在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及吳茱萸堿在制藥領(lǐng)域中的用途，尤其涉及在制備抗腫瘤藥中的新用途。
背景技術(shù)：
吳茱萸堿(Evodiamine)已公開的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為 吳茱萸堿可由蕓香科植物吳茱萸中提取制得。已知該化合物具有散寒止痛、降逆止嘔、助陽止瀉之功能?？梢杂米髫赎庮^痛、寒疝腹痛、寒濕腳氣、經(jīng)行腹痛、脘腹脹痛、嘔吐吞酸、五更泄瀉，外治口瘡、高血壓癥。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供吳茱萸堿的新的藥物中的用途。
本發(fā)明涉及吳茱萸堿在制備抗腫瘤藥中的應(yīng)用。
本發(fā)明是通過如下方式實現(xiàn)的。首先是通過化學(xué)方法提取獲得吳茱萸總堿，然后將其干粉分裝膠囊或配以丙二醇聚乙二醇混合溶液制成針劑。具體技術(shù)方案是采用天然植物吳茱萸為原料，用乙醇回流提取得醇提部分(即浸膏狀物)，用鹽酸溶液提取醇浸膏，酸性水提取液加濃氨水沉淀，除去上清液，濾取沉淀物，將沉淀物用氨水制成勻漿狀，加入氨水制成漿狀，再加入氯仿提取，靜置、分離。氯仿提取液，用無水硫酸鈉脫水、過濾，以常壓水浴回收氯仿，經(jīng)干燥后得吳茱萸總堿。
吳茱萸堿再經(jīng)硅膠干柱層析分離，以石油醚加乙酸乙酯、水進(jìn)行洗脫，再以薄板層析檢查不同流份，合并以吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品Rf值一致部分，濃縮，氯仿、甲醇重結(jié)晶，即得到吳茱萸堿。
經(jīng)實驗證明吳茱萸總堿和美吳茱萸堿均具有明顯的抑瘤作用，而且吳茱萸堿為吳茱萸總堿的主要抗腫瘤有效成份。所以在制藥過程中，從簡化提取工藝出發(fā)，往往直接采用吳茱萸總堿制成抗腫瘤藥物。
取吳茱萸總堿為原料，用乙醇噴灑制成軟材，過篩，制成顆粒，再進(jìn)行干燥，過篩，即可裝入膠囊，成為吳茱萸總堿膠囊劑。
將吳茱萸總堿溶入丙二醇，聚乙二醇混合液中，進(jìn)行充分?jǐn)嚢杓舆m量注射用水，濾至澄明，即可制得吳茱萸總堿注射劑。
為了更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，下面將用吳茱萸總堿，吳茱萸堿，吳茱萸次堿和吳茱萸內(nèi)脂的抗腫瘤試驗及結(jié)果來說明其吳茱萸總堿及吳茱萸堿的抗腫瘤作用，從而說明其在制備抗腫瘤藥中的新用途。
方法采用4種小鼠移植性腫瘤，即肉瘤-180(S-180)、小鼠宮頸癌-14(U14)、肝癌腹水型(HepA)和艾氏腹水癌(EAC)。實驗小鼠隨機(jī)分為對照組，SC生理鹽水10ml·kg-1，環(huán)磷酰胺(ip15mg·kg-1)，總堿(sc96、48和24mg·kg-1)，吳茱萸堿(sc40、20和10mg·kg-1)吳茱萸次堿(sc50、25mg.kg-1)及吳茱萸內(nèi)酯(sc56、28mg.kg-1)；各實驗藥物sc體積為10ml.kg-1。選取移植腫瘤生長良好，腹部膨隆明顯小的小鼠，腹部皮膚消毒，用一次性無菌采血器經(jīng)腹壁刺入腹腔，抽取腹水，放入無菌燒杯中以生理鹽水稀釋成1∶3的癌細(xì)胞混懸液，于每只實驗小鼠右腋下接種0.2ml，各組動物于接種腫瘤次日開始給藥，每日1次，連續(xù)給藥10天。給藥結(jié)束次日，將動物稱重后脫臼處死，剝離出皮下腫塊稱重，比較各組腫瘤生長情況，各組瘤重與對照組差異顯著性用“t”檢驗測定。
各組動物體重、腫瘤重量及抑瘤率統(tǒng)計結(jié)果見表1-12。
表1總堿(sc)對小鼠S180瘤重的影響(X±S)劑量動物數(shù) 動物體重(g) 瘤重 抑瘤率組 別mg.kg-1(n) 給藥前 給藥后(g)(％)對照組 - 1020.3±1.25 27.2±3.29 1.32±0.32環(huán)磷酰胺15 1019.7±1.42 25.2±1.14 0.75±0.32***51.5總堿高 96 1019.6±1.43 26.3±2.45 0.78±0.42***43.2總堿中 48 1019.7±1.25 26.9±2.51 0.78±0.42**40.9總堿低 24 1019.3±0.95 27.3±3.47 0.94±0.43*28.8注與對照組比較，*p＜0.05**p＜0.01；***p＜0.001
表2總堿(sc)對小鼠U14瘤重的影響(X±S)劑量動物數(shù) 動物體重(g) 瘤重 抑瘤率組 別mg.kg-1(n) 給藥前給藥后 (g) (％)對 照 組 - 10 19.8±1.48 27.0±3.80 1.54±0.57環(huán)磷酰胺 15 10 20.1±1.45 25.0±1.56 0.69±0.27***55.2總堿高96 10 19.2±1.14 26.2±3.05 0.74±0.48**51.9總堿中48 10 20.0±1.56 27.2±3.12 0.84±0.38**45.5總堿低24 10 20.3±0.95 27.9±3.54 1.03±0.47*33.1注與對照組比較，*p＜0.05；**p＜0.01***p＜0.001表3總堿(sc)對小鼠HepA瘤重的影響(X±S)劑量動物數(shù) 動物體重(g) 瘤重 抑瘤率組 別mg.kg-1(n) 給藥前 給藥后 (g) (％)對 照 組 - 10 20.2±1.48 27.8±4.05 1.98±0.94環(huán)磷酰胺15 10 19.8±1.32 25.6±1.08 0.71±0.21***64.1總堿高 96 10 19.5±1.35 26.9±2.13 0.79±0.41**60.1總堿中 48 10 19.6±1.35 27.9±3.73 1.10±0.51*44.4總堿低 24 10 19.2±1.32 27.1±4.01 1.21±0.67*38.9注與對照組比較，*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001表4總堿(sc)對小鼠EAC瘤重的影響(X±S)劑量動物數(shù) 動物體重(g) 瘤重 抑瘤率組 別mg.kg-1(n) 給藥前 給藥后 (g) (％)對 照 組- 10 19.5±1.35 27.6±3.57 1.56±0.52環(huán)磷酰胺15 10 19.4±1.27 24.9±1.20 0.57±0.20***63.5總堿高 96 10 19.9±1.60 25.8±1.32 0.69±0.28***55.8總堿中 48 10 19.4±1.58 27.0±2.79 0.91±0.46**41.7總堿低 24 10 19.5±1.35 26.6±2.84 1.04±0.45*33.3注與對照組比較，*p＜0.05；**p＜0.0 1；***p＜0.001
表5吳茱萸堿(sc)對小鼠S180瘤重的影響(X±S)劑量動物數(shù)動物體重(g) 瘤重 抑瘤率組 別mg.kg-1(n) 給藥前 給藥后 (g)(％)對 照 組 - 1020.5±1.08 28.2±3.33 1.79±0.7環(huán)磷酰胺 15 1020.3±1.42 24.8±1.40 0.67±0.16***62.6吳茱萸堿 40 1020.0±1.33 25.7±1.64 0.71±0.19***60.3吳茱萸堿 20 1019.9±1.60 25.5±3.03 0.92±0.37**48.6吳茱萸堿 10 1019.9±1.45 26.7±1.89 1.16±0.49*35.2注與對照組比較，*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001表6吳茱萸堿(sc)對小鼠U14瘤重的影響(X±S)劑量動物數(shù)動物體重(g) 瘤重 抑瘤率組 別mg.kg-1(n) 給藥前 給藥后 (g)(％)對 照 組 - 1019.9±1.37 27.6±3.89 1.58±0.54環(huán)磷酰胺 15 1020.1±1.60 25.2±1.32 0.53±0.09***66.5吳茱萸堿 40 1019.8±1.14 25.0±1.81 0.68±0.36***57.0吳茱萸堿 20 1019.8±1.40 26.0±2.06 0.85±0.46**46.2吳茱萸堿 10 1020.0±1.49 26.2±2.78 1.01±0.46*36.1注與對照組比較，*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001表7吳茱萸堿(sc)對小鼠HepA瘤重的影響(X±S)劑量動物數(shù) 動物體重(g) 瘤重 抑瘤率組 別mg.kg-1(n) 給藥前 給藥后 (g)(％)對 照 組 - 1020.5±1.35 27.5±3.17 1.69±0.60環(huán)磷酰胺 15 1019.5±1.18 24.8±1.23 0.60±0.18***64.5吳茱萸堿 40 1019.8±1.23 26.4±1.96 0.81±0.52**52.1吳茱萸堿 20 1019.8±1.14 25.9±2.92 0.99±0.45**41.4吳茱萸堿 10 1019.9±1.52 26.8±3.68 1.12±0.57*33.7注與對照組比較，*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001
表8吳茱萸堿(sc)對小鼠EAC瘤重的影響(X±S)劑量動物數(shù)動物體重(g)瘤重抑瘤率組 別mg.kg-1(n) 給藥前 給藥后 (g) (％)對 照 組- 1019.8±1.22 27.3±2.31 1.54±0.40環(huán)磷酰胺15 1019.9±1.37 25.5±1.08 0.67±0.26***65.5吳茱萸堿40 1019.9±1.52 27.3±3.40 0.84±0.35***45.6吳茱萸堿20 1019.6±1.43 26.0±1.89 0.93±0.52**39.6吳茱萸堿10 1020.0±1.49 26.4±3.63 1.04±0.45*32.5注與對照組比較，*p＜0.05；**p＜0.0 1；***p＜0.001表9吳茱萸次堿、內(nèi)酯(sc)對小鼠S180瘤重的影響(X±S)劑量 動物數(shù) 動物體重(g)瘤重抑瘤率組 別mg.kg-1(n) 給藥前 給藥后 (g)(％)對 照 組- 1019.9±1.45 28.1±3.60 1.44±0.60環(huán)磷酰胺15 1020.0±1.49 25.4±1.35 0.59±0.15***59.0吳茱萸次堿 50 1019.9±1.45 27.0±1.94 1.08±0.37*31.9吳茱萸次堿 25 1020.1±1.37 25.9±1.73 1.04±0.24#27.8吳茱萸內(nèi)酯 56 1019.5±1.35 25.6±1.17 1.14±0.21#28.5吳茱萸內(nèi)酯 28 1019.6±1.08 26.5±1.43 1.09±0.29#24.3注與對照組比較，#p＞0.05*p＜0.05***p＜0.001表10吳茱萸次堿、內(nèi)酯(sc)對小鼠U14瘤重的影響(X±S)劑量 動物數(shù) 動物體重(g)瘤重抑瘤率組 別mg.kg-1(n) 給藥前 給藥后 (g)(％)對 照 組- 1019.9±1.45 26.7±2.41 1.51±0.48環(huán)磷酰胺15 1020.0±1.65 25.5±1.65 0.77±0.26**49.0吳茱萸次堿 50 1019.6±0.21 25.8±1.99 1.06±0.28*29.8吳茱萸次堿 25 1020.0±1.99 26.4±1.90 1.16±0.30#23.2吳茱萸內(nèi)酯 56 1019.8±1.32 26.1±2.08 1.08±0.39*28.5吳茱萸內(nèi)酯 28 1019.5±1.65 26.8±2.97 1.22±0.#19.2注與對照組比較，#p＞0.05*p＜0.05；**p＜0.01
表11吳茱萸次堿、內(nèi)酯(sc)對小鼠HepA瘤重的影響(X±S)劑量 動物數(shù)動物體重(g) 瘤重 抑瘤率組 別mg.kg-1(n)給藥前給藥后 (g) (％)對照組- 10 19.5±1.35 26.3±1.95 1.38±0.56環(huán)磷酰胺 1510 20.0±1.49 24.8±1.23 0.63±0.13***56.5吳茱萸次堿5010 19.6±1.43 26.2±2.20 1.08±0.19#21.7吳茱萸次堿2510 20.1±1.37 26.9±2.73 1.12±0.36#18.8吳茱萸內(nèi)酯5610 19.4±1.35 26.3±2.58 1.15±0.30#16.7吳茱萸內(nèi)酯2810 20.2±1.48 25.7±1.34 1.23±0.29#10.9注與對照組比較，#p＞0.05；***p＜0.001表12吳茱萸次堿、內(nèi)酯(sc)對小鼠EAC瘤重的影響(X±S)劑量動物數(shù) 動物體重(g) 瘤重 抑瘤率組 別mg.kg-1(n)給藥前給藥后 (g) (％)對 照 組 - 10 19.5±1.35 26.8±2.20 1.37±0.59環(huán)磷酰胺15 10 19.8±1.55 25.1±1.79 0.66±0.19***51.8吳茱萸次堿 50 10 20.5±1.18 25.8±1.48 1.05±0.24#23.4吳茱萸次堿 25 10 20.1±1.45 26.8±2.82 1.12±0.38#18.2吳茱萸內(nèi)酯 56 10 19.7±1.42 26.0±2.00 1.15±0.23#16.2吳茱萸內(nèi)酯 28 10 20.0±1.16 25.1±1.37 1.17±0.29#14.6注與對照組比較，#p＞0.05；***p＜0.001
上述實驗研究結(jié)論表明總堿和吳茱萸堿具有明顯的抗腫瘤作用，用總堿和吳茱萸堿制成抗腫瘤藥物，將對各種腫瘤病癥起到顯著的抑制、治療作用。
上述結(jié)果表明，本發(fā)明的優(yōu)點在于對已知的化合物吳茱萸堿發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，開拓了一個新的應(yīng)用領(lǐng)域，以吳茱萸堿作為有效成份的總堿制成抗腫瘤藥物具有較強(qiáng)的抑瘤功能和抗腫瘤作用，而將吳茱萸堿制備成抗腫瘤藥物時，其制藥工藝簡單，便于操作，其藥物劑型也可多樣，即可做成注射劑，也可做成口服片劑、膠囊劑型等，用藥方便。
具體實施例首先提取吳茱萸總堿為制劑的原料。取吳茱萸原料藥，用7倍量濃度為80％的乙醇回流提取兩次，將乙醇回收，得醇提部分(浸膏狀物)，再以2％的HCL溶液提取醇浸膏兩次，用氨水堿化提取液靜置、過濾、沉淀，除去上清液，將沉淀物加入10％的氨水制成勻漿狀，以氯仿提取，利用自動攪拌機(jī)攪拌30分鐘后靜止。合并氯仿液，分離出漿狀物，將氯仿提取液用無水硫酸鈉脫水，過濾，除去硫酸鈉，留下氯仿液，通過常壓水浴方式回收氯仿，回收的氯仿留做再用，留下余物干燥后，即為吳茱萸總堿。若擬以吳茱萸堿為原料，則需再進(jìn)行以下步驟。
吳茱萸總堿加入200倍量的硅膠裝干柱，用石油醚、乙酸乙酯和水(其比例為10∶5∶1)進(jìn)行洗脫，再以TLC檢查不同流份，合并與吳茱萸堿標(biāo)準(zhǔn)品Rf值一致部分，濃縮，氯仿甲醇重結(jié)晶最后提取得吳茱萸堿。
吳茱萸總堿膠囊劑的制備處方吳茱萸總堿210g，制成膠囊1000粒制法取吳茱萸總堿原料藥210g，用適量95％乙醇噴灑制成軟材，過篩，制成顆粒，80℃以下條件干燥，過篩，裝入零號膠囊中，分裝即得。
吳茱萸總堿注射劑的制備處方吳茱萸總堿50g，丙二醇250g，聚乙二醇250g，加注射用水4000ml，制成2000支。
制法精密稱取50.0g吳茱萸總堿，丙二醇和聚乙二醇各250g，先將丙二醇和聚乙二醇混合均勻，在水溶上加熱至80℃，將50g吳茱萸總堿加入丙二醇，聚乙二醇混合液中，充分?jǐn)嚢?，使藥液完全溶解，再將預(yù)熱好的注射用水(80℃)緩慢地加到藥液中，用起聲波處理5分鐘，放置到室溫。用G4漏斗抽濾。灌封到2ml安瓶中。滅菌。分裝、打字即可完成吳茱萸總堿注射劑的制備。
權(quán)利要求
吳茱萸堿在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及吳茱萸堿在制藥領(lǐng)域中的新用途。特別是在制備抗腫瘤藥中的新用途。上述物質(zhì)具有明顯的抗腫瘤作用，對肉瘤S
文檔編號A61P35/00GK1426783SQ0113886
公開日2003年7月2日 申請日期2001年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2001年12月18日
發(fā)明者王本祥, 趙全成, 王麗娟, 楊冬華, 陳聲武, 王巖 申請人:吉林天藥科技股份有限公司