專利名稱：抗氧化劑組合物和陪伴動(dòng)物的方法
游離基是活有機(jī)體的有氧代謝中固有的并且通常隨生理和病理過程產(chǎn)生。它們有時(shí)有意地產(chǎn)生，從而起生物功能作用，例如吞噬細(xì)胞中的殺微生物劑，或者它們可能為化學(xué)變化，之后呈現(xiàn)破壞性行為。無論它們的產(chǎn)生機(jī)理如何，如果游離基的產(chǎn)生和除去得不到控制，那么它們對(duì)有機(jī)體的影響可能為破壞性的。為了對(duì)抗過度且不適宜的破壞，開發(fā)出了一種精細(xì)的抗氧化劑防御系統(tǒng)。
當(dāng)有利于氧化劑的氧化劑與抗氧化劑之間失衡時(shí)，存在氧化應(yīng)力癥狀，它可能導(dǎo)致組織損傷。
本發(fā)明尤其提供了一種克服家庭貓和狗中氧化應(yīng)力問題的方法。
因此，本發(fā)明的第一個(gè)方面提供了一種增加家養(yǎng)貓或狗中血漿維生素E水平的方法，該方法包括步驟向所述貓或狗給予維生素E，其量足以增加血漿維生素E水平。該增加可以是在該動(dòng)物血漿中可以測定的最大/飽和點(diǎn)。該增加可以為該動(dòng)物自身的血漿維生素E水平基線的2-3倍(大約最大生理增加)。當(dāng)與給動(dòng)物喂食對(duì)照飲食時(shí)的血漿維生素E水平比較時(shí)，該增加可以使單個(gè)動(dòng)物的血漿維生素E水平增加高至25％，優(yōu)選25％或以上(優(yōu)選高至50％，或25-50％，或者甚至50-90％)。對(duì)照飲食例如是貓或狗的總維生素E消耗為10 IU/400kcal。
維生素E為幾種具有相同生物活性的生物學(xué)上類似的化合物的共同術(shù)語，包括稱作生育酚類和生育三烯酚類的那些。動(dòng)物組織中生物學(xué)活性最大的維生素E的生物形式(也為活性最大的抗氧化劑)為α-生育酚。維生素E不能在體內(nèi)合成。維生素E防止細(xì)胞膜失去完整性，細(xì)胞膜完整性的喪失有害地改變細(xì)胞和細(xì)胞器功能。
維生素E的單位可以國際單位(IU)表示，其中1 IUα-生育酚等于1mgα-生育酚。其它維生素E化合物具有通過其與α-生育酚比較的生物潛能測定的IU，如McDowell，L.R(1989)Vitamin EIn vitamins in AnimalNutrition，Chapter 4，page 96，Academic Press，UK中所述。
時(shí)至今日，足夠防止家庭狗或貓中呈現(xiàn)維生素E缺乏癥狀的最小維生素E水平之上和之下的維生素E水平還未引起注意。本發(fā)明認(rèn)為，狗或貓中維生素E的水平反映了它們飲食中的水平，并且這些水平提供了動(dòng)物以預(yù)制寵物食品為食時(shí)沒有超過的典型基線水平(參見實(shí)施例)。本發(fā)明顯示了可以通過在動(dòng)物飲食中加入較高水平的維生素E(并且這可以通過提供特定預(yù)制的寵物食品和/或者貓或狗補(bǔ)充物來實(shí)現(xiàn))來增加狗和貓中的維生素E水平。
本發(fā)明的一個(gè)方面提供一種降低家庭貓和狗中氧化應(yīng)力的方法。氧化應(yīng)力的這種降低，特別增強(qiáng)了免疫反應(yīng)，并提供了更健康的動(dòng)物。狗或貓中氧化性損傷的標(biāo)記物尤其包括血漿羰基(蛋白質(zhì)氧化的終產(chǎn)物)、血漿脂質(zhì)過氧化氫(脂質(zhì)氧化的標(biāo)記物)和響應(yīng)LDL氧化產(chǎn)生的抗-LDL抗體。任意這些降低都將顯示氧化性損傷減少。
按照本發(fā)明第一個(gè)方面的維生素E可以為任意形式。它可以為生育酚或生育三烯酚。它可以為α-生育酚(d-α或dl-α)、β-生育酚(d-β或dl-β)、γ-生育酚(d-γ或dl-γ)、δ-生育酚、α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚或δ-生育三烯酚。優(yōu)選α-生育酚。
維生素E的來源沒有限制。優(yōu)選的維生素E源包括醋酸維生素E(例如醋酸生育酚)、醋酸維生素E吸附物或經(jīng)噴霧干燥的醋酸維生素E。盡管可以使用天然的來源，但是優(yōu)選來源為合成的。
維生素E的給予形式?jīng)]有限制?？梢詾轱嬍?、食品或補(bǔ)充物的形式。本文下面的術(shù)語“食品”包括所有食品、飲食和補(bǔ)充物。任意這些形式可以為固體、半固體或液體。
該補(bǔ)充物對(duì)未含足夠高的一種或多種本發(fā)明組分的飲食或食品特別有用。這些組分在補(bǔ)充物中的濃度可以用于“增加至”動(dòng)物飲食或食品中的水平。這可以通過在動(dòng)物飲食中包含大量該補(bǔ)充物或者通過另外向動(dòng)物喂食大量該補(bǔ)充物進(jìn)行。補(bǔ)充物可以形成為具有極高量一種或多種本發(fā)明組分的食品，該組分在喂食動(dòng)物之前需要稀釋。補(bǔ)充物可以為任意形式，包括固體(例如粉末)、半固體(例如食品樣稠度/凝膠)、液體或者，它可以為片劑或膠囊形式。液體可以方便地與食品混合或者直接喂給動(dòng)物，例如經(jīng)過匙或經(jīng)過吸管樣裝置。該補(bǔ)充物可以為高含量的一種或幾種本發(fā)明組分或者可以為至少兩部分的組合包裝，每一部分含有所需量的一種或多種組分。
優(yōu)選將該維生素E加入商品化寵物食品或商品化飲食補(bǔ)充物中。寵物食品可以為干燥、半干燥、潤濕或液體(飲料)產(chǎn)品。潤濕產(chǎn)品包括在錫或箔容器中銷售并具有70-90％水分含量的食品。干燥產(chǎn)品包括具有相似組成的食品，但具有5-15％水分和以餅干樣粗粒出現(xiàn)。優(yōu)選將該飲食、食品或補(bǔ)充物包裝。以這種方式，消費(fèi)者可以從包裝上了解到食品中的組分并考慮它是否適合狗或貓。該包裝可以為金屬(通常為錫或柔性箔)、塑料、紙或卡片。任何產(chǎn)品中的水分含量都有可能影響使用或所需的包裝類型。
本發(fā)明的食品包括狗或貓飲食消費(fèi)的任何產(chǎn)品。因此，本發(fā)明包括標(biāo)準(zhǔn)食品產(chǎn)品，還包括寵物食品小吃(例如小吃棒、餅干和甜食)。食品優(yōu)選煮制產(chǎn)品?？梢约尤肴饣虻米詣?dòng)物的物料(例如牛肉、雞肉、火雞肉、羊肉、血漿、髓骨等，或其兩種或多種)。為了提供蛋白源，該食品或者可以沒有肉(優(yōu)選含有肉代用品如大豆、玉米谷蛋白或大豆產(chǎn)品)。產(chǎn)品可以含有其它蛋白源如大豆蛋白濃縮物、乳蛋白、谷蛋白等。該產(chǎn)品還可以含有如一種或多種谷物的淀粉源(例如小米、玉米、大米、燕麥、大麥等)或者可以沒有淀粉。典型的干燥商品化狗和貓食品含有約30％粗蛋白、約10-20％脂肪，其余為碳水化合物，包括膳食纖維和灰分。典型地的潤濕、或含水產(chǎn)品含有(以干物質(zhì)計(jì))約40％脂肪、50％蛋白質(zhì)且其余為纖維和灰分。本發(fā)明特別涉及貓或狗的食品或補(bǔ)充物，其為固體。
本文中的術(shù)語“家庭”狗和“家庭”貓意指狗和貓，特別是Felisdomesticus和Canis domesticus。
可以容易地測定狗或貓中血漿維生素E的水平。測定血漿維生素E水平的代表性例子描述在實(shí)施例的引言部分。
可以容易地測定產(chǎn)品(固體或液體或任意其它形式)中維生素E的濃度。這也描述在實(shí)施例的引言部分中。
在本發(fā)明的第一個(gè)方面，對(duì)照飲食可以向動(dòng)物提供15 IU/400kcal的總維生素E。
按照本發(fā)明第一個(gè)方面的維生素的給予量優(yōu)選為25 IU/400kcal飲食。在全文中，濃度/kcal是指kcal總代謝的能量攝取。可以使用如下文獻(xiàn)中所述確定卡密度Nutritional Requirements of Dogs(1985)National Research Council(U.S.)National Academy PressWashington DC，ISBN0-309-03496-5或Nutritional Requirements ofCats(1986)National Research Council(U.S.)National AcademyPress Washington DC，ISBN0-30903682-8。貓的優(yōu)選水平為30IU/400kcal、35IU/400kcal、40IU/400koal、45IU/400kcal、50IU/400kcal、55IU/400kcal，到高至約100 IU/400kcal或之上。狗的優(yōu)選水平為30IU/400kcal、40IU/400koal、45IU/400kcal、50IU/400kcal、55IU/400kcal、60IU/400kcal、65IU/400kcal到高達(dá)約100IU/400kcal或更高。
就本發(fā)明的第一個(gè)方面而言，該方法可以包括給予一定量的維生素C(抗壞血酸)。
維生素C是水溶性物質(zhì)。在家庭貓和家庭狗中它都是經(jīng)重新合成的。由于它是在體內(nèi)合成的，以前從未調(diào)查過狗和貓中的維生素C補(bǔ)充物的影響。特別是從未調(diào)查過貓和狗中的維生素C補(bǔ)充物作為潛在抗氧化劑與維生素E補(bǔ)充物組合時(shí)的影響。
本發(fā)明顯示了通過補(bǔ)充可以增加貓和狗中維生素C的水平。這可以通過補(bǔ)充維生素C之后血漿值增加來證實(shí)。維生素C增加可以有利于減少游離基，因此降低了動(dòng)物中的氧化應(yīng)力。
根據(jù)本發(fā)明第一個(gè)方面的維生素C可以為任意形式。它可以為液體、半固體或固體。優(yōu)選它為熱穩(wěn)定形式，例如磷酸鈣形式。
維生素C的來源沒有限制。優(yōu)選的維生素C源包括結(jié)晶抗壞血酸(任選純的)、涂布乙基纖維素的抗壞血酸、抗壞血酸的磷酸鈣鹽、抗壞血酸-2-一磷酸鹽或抗壞血?；?2-單磷酸鹽，還有少量二磷酸鹽和痕量三磷酸鹽、磷酸鈣，或者例如鮮肝。
可以容易地測定產(chǎn)品(固體、液體或任意其它形式)中維生素C的水平。這描述在本實(shí)施例的引言部分中。
關(guān)于與維生素C組合使用維生素E的其它有用的觀點(diǎn)為其協(xié)同作用的潛能。這借助于維生素E為脂溶性而維生素C為水溶性的事實(shí)。已知α-生育酚位于脂質(zhì)體膜中?？箟难猁}和α-生育酚例如在細(xì)胞膜或脂蛋白與水之間的界面相互作用。抗壞血酸快速減少膜中的α-生育酚游離基，從而再生α-生育酚。與動(dòng)物喂食對(duì)照飲食時(shí)相比，按照本發(fā)明第一個(gè)方面的維生素C的優(yōu)選濃度為優(yōu)選使動(dòng)物的維生素C水平增加高至約25％(優(yōu)選25％或更多)的水平，這樣(貓或狗)的維生素C消耗的總量為5mg/400kcal飲食。沒有達(dá)到該增加的維生素C水平仍然被本發(fā)明的第一個(gè)方面覆蓋。按照本發(fā)明第一個(gè)方面的維生素C的水平包括從10、12、15、17、20、22、25、27、30、32、38、40、42、48至高達(dá)約50mg/400kcal飲食。貓的優(yōu)選水平為10-48mg/400kcal的上面選項(xiàng)，狗的優(yōu)選水平為12-50mg/400kcal的上面選項(xiàng)。55mg/400kcal以上的水平并未賦予增加的益處，并且通常最好避免。
本發(fā)明的第一個(gè)方面包括給予一定量的牛磺酸。牛磺酸可以為除上述的補(bǔ)充維生素C之外的，或者代替上述的維生素C。
?；撬崾窃诟鞣N動(dòng)物種中發(fā)現(xiàn)的不常見的氨基酸。?；撬釣樨埖谋匦锠I養(yǎng)素，與狗不同，貓不能由前體氨基酸合成?；撬?。人們認(rèn)為牛磺酸保護(hù)細(xì)胞膜免遭包括氧化劑的毒性組分。動(dòng)物飲食中維生素?；撬崴皆黾涌梢杂欣跍p少游離基，因此降低了動(dòng)物中的氧化應(yīng)力，特別是其與本發(fā)明的其它組分組合時(shí)。
按照本發(fā)明第一個(gè)方面的?；撬峥梢詾槿我庑问?。它可以為粉狀、結(jié)晶、半固體或液體。
?；撬岬膩碓礇]有限制。優(yōu)選的?；撬醽碓窗ò被一撬?C2H7NO3S)。這些來源可以為天然或合成的。
通常產(chǎn)品的加工方法(例如產(chǎn)品是否干燥或罐裝)決定了按照本發(fā)明的第一個(gè)方面給予的牛磺酸的適宜濃度。為了將貓中血漿牛磺酸水平保持在正常范圍(＞60μmol/l)，罐裝(濕)飲食每天必需補(bǔ)充至少39mg牛磺酸/kg體重，并且干燥飲食每天補(bǔ)充至少19mg/kg體重。就未經(jīng)過高溫法(例如罐裝)的產(chǎn)品而言，本發(fā)明的第一個(gè)方面提供的優(yōu)選水平為約80mg/400kcal飲食，以mg/400kcal飲食計(jì)的更優(yōu)選約100，漸增更優(yōu)選120、150、180、200、220、250、280、300、320、350、400和以上。在例如通過高溫加工的產(chǎn)品中，按照本發(fā)明的水平優(yōu)選約380mg/400kcal飲食，以mg/400kcal飲食計(jì)的更優(yōu)選約400，漸增更優(yōu)選420、450、480、500、520、550、580、600、620、650、700和以上。
可以容易地測定產(chǎn)品(固體、液體或任意其它形式)的?；撬釢舛?。代表性方法描述在實(shí)施例的引言部分中。通過膳食補(bǔ)充可以強(qiáng)化?；撬嵩谪?bào)w內(nèi)的狀態(tài)。通過血漿水平可以測定膳食?；撬岷康膭┝宽憫?yīng)效果。這也描述在實(shí)施例的引言部分中。
本發(fā)明的第一個(gè)方面還可以包括給予一定量的類胡蘿卜素。該類胡蘿卜素可以為除上面所述的補(bǔ)充維生素C和/或?；撬嶂獾?，或者是代替這兩者。
類胡蘿卜素為一組主要在植物食品，特別是水果和蔬菜，以及以植物為食的動(dòng)物組織中發(fā)現(xiàn)的紅色、橙色和黃色顏料。它們?yōu)橛H脂化合物。一些類胡蘿卜素起維生素A前體的作用，一些則不能。該性能與其抗氧化劑活性無關(guān)。類胡蘿卜素可以起強(qiáng)抗氧化劑的作用。類胡蘿卜素以不同程度被不同動(dòng)物種吸收。類胡蘿卜素可以分成兩大類以胡蘿卜素為基礎(chǔ)的那些和以葉黃素為基礎(chǔ)的那些(包括氧化化合物)。普通的類胡蘿卜素包括β-胡蘿卜素、α-胡蘿卜素、番茄紅素、黃體素、玉米黃質(zhì)和蝦青素。未證實(shí)類胡蘿卜素為貓或狗膳食中的主要營養(yǎng)素。與人和狗不同，貓不能將前體β-胡蘿卜素轉(zhuǎn)化成活性維生素A形式，這是由于在貓的腸粘膜中缺少該轉(zhuǎn)化所需的酶(貓沒有裂解胡蘿卜素分子所需的二氧化酶。
本發(fā)明顯示了類胡蘿卜素可以被家庭貓和狗吸收(從而使血漿濃度增加)并且可有利于降低氧化應(yīng)力。而且，本發(fā)明已證實(shí)，類胡蘿卜素在加入商業(yè)化產(chǎn)品之后可以被吸收。如上所述，本發(fā)明第一個(gè)方面的組分可以協(xié)同作用。維生素E能夠防止β-胡蘿卜素氧化，可以具有保護(hù)β-胡蘿卜素的效果。維生素E被認(rèn)為可防止β-胡蘿卜素的化學(xué)鍵被氧化。
對(duì)類胡蘿卜素的來源沒有限制，可以包括天然和合成源。特別優(yōu)選的來源為天然源并包括金盞菊粗粉和苜蓿粗粉(黃體素源)；番茄粗粉、紅色棕櫚油、番茄粉、番茄渣/漿(β-胡蘿卜素和番茄紅素的來源)。來源包括類胡蘿卜素水平高的油和經(jīng)過純加工的類胡蘿卜素如黃體素、三色堇黃質(zhì)、隱黃質(zhì)、紅木素、玉米黃質(zhì)、阿樸-EE(阿樸-8-胡蘿卜酸乙酯)、雞油菌黃質(zhì)、citranaxanthin，achinenone，番茄紅素和辣椒黃素。類胡蘿卜素的優(yōu)選總量為0.01mg/400kcal、或0.2mg/400kcal或1mg/400kcal或2mg/400kcal。
以下類胡蘿卜素的濃度優(yōu)選β-胡蘿卜素0.01-1.5mg/400kcal，優(yōu)選0.5-1mg/400kcal番茄紅素0.01-1.5mg/400kcal，優(yōu)選0.5-1mg/400kcal黃體素0.05-1.5mg/400kcal，優(yōu)選0.5-1mg/400kcal。
特別地，本發(fā)明在本發(fā)明的第一個(gè)方面提供了類胡蘿卜素的組合。
組合的類胡蘿卜素的優(yōu)選來源包括紅色棕櫚油和金盞菊粗粉番茄粉末、金盞菊粗粉和苜蓿番茄渣和金盞菊粗粉。
如上所述，本發(fā)明包括維生素E和任選其它組分。有用的組分組合(優(yōu)選在罐裝或干燥寵物食品中)包括維生素E、維生素C、?；撬?、紅色棕櫚油和金盞菊粗粉維生素E、維生素C、?；撬?、番茄粉、金盞菊粗粉和苜蓿維生素E、維生素C、?；撬帷⒎逊酆徒鸨K菊粗粉維生素E、維生素C、?；撬?、番茄粉和苜蓿維生素E、?；撬帷⒎逊酆徒鸨K菊粗粉。
本發(fā)明的組合為生產(chǎn)(干燥產(chǎn)品)之后的大約活性組分mg/400kcal維生素C20mg抗壞血酸維生素E 50 IU牛磺酸 200mg(在濕產(chǎn)品中為500mg)黃體素 0.17mg番茄紅素0.03mgβ-胡蘿卜素 0.01mg本發(fā)明的另一有用組合為維生素E 50IU/400kcal維生素C 20mg/400kcal?；撬? 500mg/400kcalβ-胡蘿卜素 0.5-1mg/400kcal番茄紅素1mg/400kcal黃體素 0.5-1mg/400kcal本發(fā)明食品中的其它有用組分包括痕量的礦物質(zhì)(非直接抗氧化劑，單在抗氧化劑金屬酶系統(tǒng)中起輔因子的作用)、硒(抗氧化劑硒合酶、谷胱甘肽氧化酶的必要部分)、銅、鋅和錳(形成整體部分抗氧化劑金屬酶Cu-Zn-超氧化物歧化酶和Mn-超氧化物歧化酶)。
按照本發(fā)明第一個(gè)方面的方法，這些組分可以同時(shí)、單獨(dú)或相繼地給予或消費(fèi)。
按照本發(fā)明第二個(gè)方面，提供了一種狗或貓的食品，其遞送濃度足夠的成分給動(dòng)物以增加動(dòng)物的抗氧化狀態(tài)。
本發(fā)明第一個(gè)方面的所有優(yōu)選特征也可用于第二個(gè)方面。特別是第一個(gè)方面的所有水平和優(yōu)選水平(包括更優(yōu)選和最優(yōu)選水平)在第二個(gè)方面中也具有。
該狗或貓食品優(yōu)選提供大于20mg/l維生素E的抗氧化劑狀態(tài)。
本發(fā)明的第三個(gè)方面提供了狗或貓食品，它提供了濃度為本發(fā)明第一個(gè)方面的水平的維生素E。該濃度可以為提供所述百分比增加或特定(包括優(yōu)選)水平的本發(fā)明第一個(gè)方面中所述的。
該第三個(gè)方面的狗或貓食品還可以提供濃度也為本發(fā)明第一個(gè)方面的維生素C水平的的維生素C。
該第三個(gè)方面的狗或貓食品除維生素C之外或作為替代可以提供濃度也為本發(fā)明第一個(gè)方面中牛磺酸水平的?；撬?。
該第三個(gè)方面的狗或貓食品除維生素C和/或牛磺酸之外或作為替代可以提供濃度也為本發(fā)明第一個(gè)方面中類胡蘿卜素水平的類胡蘿卜素。
該第三個(gè)方面也具有第一和二方面的優(yōu)選特征。
本發(fā)明的第四個(gè)方面是將本發(fā)明第三個(gè)方面的狗或貓食品用于預(yù)防或治療狗或貓的低抗氧化狀態(tài)。
該第四個(gè)方面也具有第一至三個(gè)方面的優(yōu)選特征。
本發(fā)明的第五個(gè)方面是將按照本發(fā)明第二、三、四或九個(gè)方面的狗或貓食品用于預(yù)防或治療具有氧化應(yīng)力成分的任意紊亂。該用途分別用于預(yù)防或治療作為“疾病”或“紊亂”組成的氧化應(yīng)力(因此通過減輕氧化應(yīng)力組成(至少至一定程度)可以減輕疾病或紊亂)。這些紊亂包括老化、癌癥、心臟疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、關(guān)節(jié)炎、白內(nèi)障、炎性腸道病、腎疾病、腎衰竭、神經(jīng)變性疾病和免疫性(例如損傷的免疫性)。還包括預(yù)防和治療因動(dòng)物接種(經(jīng)常一年一次)和麻醉劑引起的氧化應(yīng)力，它還可以用于常年治療如牙治療(可能需要常規(guī)麻醉劑)和與紫外光或射線接觸。就免疫功能而言，這同樣可用于因年齡(例如成長的動(dòng)物或衰老的動(dòng)物)以及經(jīng)受免疫攻擊的那些而具有損傷的免疫功能的那些對(duì)象。在臨床上健康的動(dòng)物中保持健康的免疫反應(yīng)(以及使免疫反應(yīng)最佳或提高免疫反應(yīng))也包括在該定義中。
在現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)脊椎動(dòng)物的免疫系統(tǒng)的討論已有很多(例如Roitt、Brostaff和Male的"Immunology"，Gower Medical Publishing，London，New York，1985)。免疫攻擊包括感染、接種和其它外部因素如麻醉(例如在手術(shù)之前)。本發(fā)明的目的是提供一種可用于保持、最佳化或“提高”免疫系統(tǒng)的飲食/食品或補(bǔ)充物(和相關(guān)方面)，以便在免疫攻擊時(shí)賦予提高的免疫反應(yīng)?？梢酝ㄟ^測定響應(yīng)給定抗原產(chǎn)生的抗體來監(jiān)控免疫反應(yīng)。這些知識(shí)和技術(shù)為本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)知識(shí)和技術(shù)。提高的免疫反應(yīng)抗原通過在給定時(shí)間框架內(nèi)循環(huán)抗體的較高水平(滴度)、較快檢測到的抗體反應(yīng)或?qū)⒀h(huán)抗體滴度保持較長時(shí)間來表示。
在免疫攻擊期間，提高的免疫反應(yīng)對(duì)動(dòng)物有幫助，并且抗原特定地用于年輕動(dòng)物，這是由于年輕動(dòng)物不可能具有發(fā)育完全的免疫系統(tǒng)。由于經(jīng)常對(duì)年輕動(dòng)物進(jìn)行預(yù)防接種，因此本發(fā)明提供了一種接種時(shí)可以通過動(dòng)物賦予提高的免疫反應(yīng)的方式。本發(fā)明特別用于在接種瘟熱、細(xì)小病毒和/或腺病毒疫苗抗原之前喂食狗。本發(fā)明特別用于向貓喂食抗貓泛白細(xì)胞減少癥、貓杯狀病毒和/或貓皰疹病毒的疫苗或組合疫苗時(shí)給予。在免疫攻擊之前喂食的適宜時(shí)間長度取決于正在討論的動(dòng)物和該免疫攻擊。可以一致地喂食食品。在免疫攻擊之前的8、6、4、2和1周是適宜的。更長時(shí)間也是適宜的。
本發(fā)明還提供了預(yù)防或治療氧化應(yīng)力部分或具有氧化應(yīng)力部分的紊亂的方法，所述方法包括向所述狗或貓喂食本發(fā)明的食品。這些紊亂如上所述。本發(fā)明還涉及在狗或貓中強(qiáng)化免疫攻擊的免疫反應(yīng)的方法，所述方法包括喂食本發(fā)明的食品。
該第五個(gè)方面也具有1-4方面的優(yōu)選特征。
第六個(gè)方面提供了維生素E在生產(chǎn)用于預(yù)防或治療具有氧化應(yīng)力成分的任意貓或狗紊亂、或者用于預(yù)防或治療氧化應(yīng)力的藥物/臨床或獸醫(yī)飲食中的用途。
該第六個(gè)方面也具有1-5個(gè)方面的優(yōu)選特征。
本發(fā)明的第7個(gè)方面提供了維生素E以25 IU/400kcal或以上的量加入作為狗或貓中體內(nèi)抗氧化劑的食品中的用途。1-6個(gè)方面的所有優(yōu)選特征在第七個(gè)方面也具有。特別是維生素E的量可以與本發(fā)明第一個(gè)方面設(shè)定的維生素E的優(yōu)選量相同。
本發(fā)明的第八個(gè)方面提供了一種制備本發(fā)明第2-5個(gè)方面任意的食品的方法，該方法包括將至少兩種食品組分混合在一起。這些組分之一為所需量的維生素E。食品的優(yōu)選形式為寵物食品產(chǎn)品，因此任意形式的該寵物食品產(chǎn)品的制備方法包括將用于寵物食品的組分混合在一起并加入本發(fā)明的一種或多種組分。這些組分可以在生產(chǎn)/加工食品的任意時(shí)間加入，包括在結(jié)束時(shí)，包裝前的最后步驟。
可以按照本領(lǐng)域已知的任意方法制備該產(chǎn)品，例如在Waltham Book ofDog and Cat Nutrition，ATB Edney編輯，Chapter by A.Rainbird，entitled"A Balanced Diet"，pages 57 to 74，Pergamon Press。
本發(fā)明的第九個(gè)方面提供了一種含有濃度為15mg/400kcal飲食的維生素C的狗或貓食品。該飲食、食品或補(bǔ)充物細(xì)節(jié)與本發(fā)明前面方面中涉及維生素C組分所述的那些相同，它含有濃度為15mg/400kcal飲食的維生素C。正如本文所述，1-8個(gè)方面的特征可以是單獨(dú)的或者任選與本發(fā)明第九個(gè)方面的濃度的維生素C組合在一起。本發(fā)明的第九個(gè)方面提供了一種用于預(yù)防或治療具有氧化應(yīng)力成分的紊亂的食品。這些紊亂也與本發(fā)明前面方面中所述的相同。在狗或貓食品中含有維生素C仍至涉及所述的維生素C濃度是獨(dú)一無二的，并且特別是或所給的用途。
維生素C濃度范圍為15mg/400kcal以上。優(yōu)選含量為如本發(fā)明第一個(gè)方面顯示的維生素C優(yōu)選濃度的在15mg/400kcal以上的那些。由于維生素C在家庭貓和家庭狗中都可以合成，因此從未考慮經(jīng)過貓或狗食品向貓或狗引入補(bǔ)充量的維生素C特別感興趣。然而，本發(fā)明顯示了這種飲食可以特別用于主要生產(chǎn)臨床飲食/獸醫(yī)飲食/藥物。
本發(fā)明還提供了維生素C在狗或貓食品中的用途。該用途可以為生產(chǎn)預(yù)防或治療具有氧化應(yīng)力成分的紊亂或用于預(yù)防或治療氧化應(yīng)力成分的飲食。這些紊亂包括癌癥、老化、心臟病、動(dòng)脈粥樣硬化關(guān)節(jié)炎、白內(nèi)障、炎性腸病、腎病、腎衰竭、神經(jīng)變性病或損傷性免疫力，例如遭受感染的動(dòng)物。本發(fā)明還可用于治療或有助于健康動(dòng)物的免疫攻擊。
本發(fā)明還涉及一種預(yù)防或治療狗或貓中具有氧化應(yīng)力成分的紊亂(或者氧化應(yīng)力成分)的方法，包括向所述貓或狗喂食本發(fā)明第九個(gè)方面的食品。
在實(shí)施例部分中參照了以下附圖

圖1顯示了通過補(bǔ)充50 IU/400kcal和100 IU/400kcal維生素E狗中的維生素E血漿狀態(tài)的增加。
圖2顯示了反映膳食維生素C補(bǔ)充之后的貓中維生素C血漿狀態(tài)。
圖3顯示了補(bǔ)充膳食維生素E之后貓中的維生素E血漿狀態(tài)。
圖4和5顯示了接種之后使用補(bǔ)充和未補(bǔ)充的飲食的抗細(xì)小病毒抗體滴度的水平。
圖6顯示了接種之后使用補(bǔ)充和未補(bǔ)充的飲食的抗瘟熱疫苗反應(yīng)。
圖7顯示了補(bǔ)充抗氧化合劑的狗中抗腺病毒抗體的保持性。
圖8顯示了持續(xù)喂食8周抗氧化劑飲食的狗中的FRAP測定。
圖9顯示了持續(xù)喂食8周抗氧化劑的狗中血漿維生素E水平。
現(xiàn)在參照以下非限制性實(shí)施例描述本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)意識(shí)到，特別是按照本文引證的各種參考文獻(xiàn)的教導(dǎo)，可以對(duì)這些實(shí)施例實(shí)施的本發(fā)明進(jìn)行各種改變，將這些參考文獻(xiàn)的內(nèi)容加入本文作為參考。
實(shí)施例引言部分這段首先描述可以采集血液樣品測定維生素E、維生素C、?；撬岷皖惡}卜素的方法。還描述了血漿中組分的分析方法和食品中組分的測定方法。除了下面所述細(xì)節(jié)之外，關(guān)于分析過程的細(xì)節(jié)可以在McDowell L.R.(1989)Vitamin EIn Vitamins in Animal Nutrition Chapter 4，page96，Academic Press，UK中找到。
血漿和全血?；撬嶂苽錁悠窂念^靜脈或頸靜脈將血樣收集到肝素化瓶中。在滾筒上將樣品混合之后，將這些樣品保持在冰上，直到轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)室中。然后將全血在-20℃下冷凍，直到分析。另外為了測定血漿，通過將血樣離心(在0℃、3500rpm下持續(xù)10分鐘)提取血漿。將血漿在-20℃下冷凍，直到分析。
通過以下分析貓血漿/血液中的?；撬崛〕鰳悠?，通過與磺基水楊酸溶液反應(yīng)離心出蛋白質(zhì)。然后將樣品離心并過濾出上清液。
參照以下測定貓中血漿?；撬酔arle，K.E.和Smith，P.M.(1991)The effect of dietary taurinecontent on the plasma taurine concentration of the cat.BritishJournal of Nutrition 66，227-235.
血漿維生素C制備樣品
從頭靜脈或頸靜脈將血樣收集到肝素化防光(箔包裹的)瓶中。在滾筒上將樣品混合之后，將這些樣品保持在冰上，直到轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)室中。通過將血樣離心(在0℃、3500rpm下持續(xù)10分鐘)提取血漿。將血漿在-20℃下冷凍，直到第二天分析。一直在照明受到抑制下制備樣品。
1ml血漿用5ml提取劑(15g偏磷酸+0.475g EDTA+20ml冰醋酸于500ml水中)提取-然后該步驟與用于產(chǎn)品的相同。
實(shí)現(xiàn)貓中血漿增加的維生素C的優(yōu)選最小劑量為20mg/400kcal。實(shí)現(xiàn)狗中血漿增加所測定的維生素C的優(yōu)選最小劑量為27mg/400kcal。
血漿維生素E制備樣品從頭靜脈或頸靜脈將血樣收集到肝素化瓶中。在滾筒上將樣品混合之后，將這些樣品保持在冰上，直到轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)室中。通過將血樣離心(在0℃、3500rpm下持續(xù)10分鐘)提取血漿。將血漿在-20℃下冷凍，直到分析。
樣品大?。?50μl。將樣品提取到己烷中，之后加入醋酸生育酚作為內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)。將己烷蒸發(fā)，殘余物溶于甲醇中并注射到HPLC上。使用逆相柱用甲醇作為洗脫劑進(jìn)行分離，在285nm下進(jìn)行紫外線測定。
達(dá)到貓中血漿增加的維生素E的優(yōu)選最小劑量為34IU/400kcal。達(dá)到狗中血漿增加所測定的維生素E的優(yōu)選最小劑量為50IU/400kcal。
血漿中類胡蘿卜素的測定從頭靜脈或頸靜脈將血樣收集到肝素化防光(箔包裹的)瓶中。在滾筒上將樣品混合之后，將這些樣品保持在冰上，直到轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)室中。通過將血樣離心(在0℃、3500rpm下持續(xù)10分鐘)提取血漿。將血漿在-80℃下冷凍，直到分析。一直在照明受到抑制下制備樣品。
以下兩種方法可用于測定血漿中的類胡蘿卜素濃度。
方法1第一種方法是測定感興趣的主要類胡蘿卜素，除用該方法不能分離的黃體素和玉米黃質(zhì)之外。
用于檢測類胡蘿卜素的該方法是Craft，N.E.and Wise，S.A.，Journal of Chromatography，589，171-176，(1992)的一種變體。
從血漿中提取類胡蘿卜素是使用Thurnham等人的Clinical Chemistry，34，377-381，1988的一種變體進(jìn)行的。
方法2第二種方法是分離黃體素和玉米黃質(zhì)，并分離這些類胡蘿卜素的不同亞型。
用于檢測這些類胡蘿卜素的方法是Yeum，Kyung-Jin.等人的Am.J.Clin.Nutr，64，594-602，1996的一種變體。
從血漿中提取類胡蘿卜素是使用Thurnham等人的Clinical Chemistry，34，377-381，1988的一種變體進(jìn)行的。
所有提取都是在照明得到抑制的情況下進(jìn)行的，并且所有類胡蘿卜素原液都貯藏在氬氣下。
維生素C-食品產(chǎn)品抗壞血酸是經(jīng)酶氧化成脫氫抗壞血酸，它與鄰亞苯二胺縮合成熒光喹噁啉衍生物。通過逆相HPLC將后者與干擾化合物分離，并用熒光計(jì)檢測。
維生素A和E食品產(chǎn)品將樣品用乙醇?xì)溲趸浫芤核馇揖S生素萃取到石油醚中。蒸發(fā)除去石油醚，殘余物溶于丙-2-醇中。通過逆相液相色譜法測定維生素A和E在丙-2-醇提取液中的濃度。
自由?；撬?食品產(chǎn)品自由牛磺酸是指在產(chǎn)品中營養(yǎng)性得到的?；撬?。
通過如下分析自由?；撬崛〕鰳悠罚尤胂←}酸。然后將其浸軟并轉(zhuǎn)移到定容燒瓶中。然后取出少量并加入磺基水楊酸，將蛋白質(zhì)沉淀。然后將樣品離心并將上清液過濾出。所得溶液與丹磺酰氯反應(yīng)并使用熒光檢測通過HPLC分析。
類胡蘿卜素-食品產(chǎn)品取出20-25g樣品用于分析。在90℃、氮?dú)庖约坝眠B苯三酚作為抗氧化劑下，樣品用28％乙醇?xì)溲趸浽砘?0分鐘。冷卻之后，將皂化的提取物用2×250ml混合醚(石油醚/乙醚1∶1)提取，將有機(jī)相用水沖洗直至中性。在真空下用BHT作為抗氧化劑在35℃將醚提取物蒸發(fā)，殘余物再溶于HPLC移動(dòng)相中。使用逆相HPLC在450nm下使用紫外線檢測測定這些類胡蘿卜素。
除了給出的這些試驗(yàn)工作之外，本發(fā)明通過給貓喂食該抗氧化合劑之后減少貓紅細(xì)胞的滲透性脆性從而成為改善健康的指示劑。
測定紅細(xì)胞經(jīng)受滲透應(yīng)力的能力。
該方法涉及將洗過的紅細(xì)胞再懸浮于具有不同NaCl濃度的溶液中；它們經(jīng)培養(yǎng)，然后分離。根據(jù)其滲透性脆性血紅蛋白從這些細(xì)胞中釋放。結(jié)果顯示，喂食本發(fā)明抗氧化合劑的貓的紅細(xì)胞顯示了更大的滲透應(yīng)力耐性，同時(shí)需要顯著低濃度的NaCl誘導(dǎo)相同水平的溶血作用。紅細(xì)胞耐受滲透應(yīng)力情況的能力為生理狀態(tài)提高的指示劑。
實(shí)施例1維生素E將一組8只狗供養(yǎng)營養(yǎng)上完全的飲食(見對(duì)照段的代表性飲食)持續(xù)6周，然后接受兩種補(bǔ)充水平的維生素E(下面的α-生育酚醋酸酯(表1))之一。
表1補(bǔ)充之前試驗(yàn)飲食中的維生素E含量
在50IU/400kcal和100IU/400 kcal水平下補(bǔ)充僅1周之后，血漿水平都顯著(p＜0.05)增加。
在補(bǔ)充1周后出現(xiàn)血漿飽和。在停止補(bǔ)充2周后血漿水平降低至基線水平。
由此研究可以推斷，膳食補(bǔ)充維生素E使得狗的血漿狀態(tài)顯著增加60-66％(圖1)。
實(shí)施例2貓的抗氧化劑補(bǔ)充維生素C將4組8或9只貓口服補(bǔ)充4種不同水平的維生素C，同時(shí)供養(yǎng)營養(yǎng)上完全的飲食(見對(duì)照飲食段)。
基線血漿維生素C水平證實(shí)，在補(bǔ)充之前4組之間沒有顯著差異。
正如在圖2中可以看到的，7天內(nèi)所有4組的血漿維生素C水平明顯增加至補(bǔ)充之前的基線之上。
盡管更高維生素C補(bǔ)充導(dǎo)致更大的血漿值，但是在4組之間的這種增加沒有明顯差異。
補(bǔ)充結(jié)束之后，血漿維生素C水平回到基線。
這些數(shù)據(jù)證實(shí)，貓的抗氧化劑狀態(tài)可以通過相對(duì)低水平的飲食維生素C補(bǔ)充增加。
實(shí)施例3維生素E已評(píng)價(jià)了典型膳食維生素E水平對(duì)貓的維生素E狀態(tài)的影響以及膳食補(bǔ)充的影響。
測定供給具有不同膳食維生素E水平的2種商業(yè)化營養(yǎng)完全的貓飲食(參見對(duì)照飲食段)的2組12只貓的血漿維生素E濃度。表2中所示的血漿水平(2周間隔，一式兩份測定)證實(shí)，供給4周較高維生素E水平的飲食的貓具有相對(duì)增加的維生素E狀態(tài)。
表2反映維生素E攝取的貓中的維生素E血漿狀態(tài)
為了測定補(bǔ)充的效果，將口服維生素E補(bǔ)充物(α-生育酚醋酸酯)給予一組12只貓，同時(shí)供給營養(yǎng)完全的飲食。
補(bǔ)充的效果可以見圖3。補(bǔ)充之后血漿維生素E水平顯著增加，在補(bǔ)充約4-6周之后達(dá)到飽和。
因此，膳食維生素E補(bǔ)充可以強(qiáng)化貓的抗氧化劑狀態(tài)。
實(shí)施例4貓中總血漿抗氧化劑；正常范圍和年齡的影響。
家庭貓中的總抗氧化劑狀態(tài)以前從未報(bào)道過。該研究的目的是驗(yàn)證一種測定貓中總抗氧化劑狀態(tài)的方法、測定健康成年貓中的正?？偪寡趸瘎┑姆秶⒀芯磕挲g對(duì)總血漿抗氧化劑狀態(tài)的影響。
用Randox Laboratories Limited生產(chǎn)的比色測定試劑盒(NX2332)驗(yàn)證貓中總抗氧化劑狀態(tài)的測定。通過貓血漿樣品的重復(fù)分析和商業(yè)化質(zhì)量控制(QC)材料(PAR 721013和PAR 721014；Bio-stat Diagnostics)的重復(fù)分析確定測定精度，內(nèi)和中間變異系數(shù)證實(shí)血漿樣品的分光光度測定的可接受的變異CV＜10％且QC CV＜5％。貓血漿的稀釋在測定中產(chǎn)生線性反應(yīng)。
評(píng)價(jià)年齡對(duì)血漿抗氧化劑水平的影響。供給營養(yǎng)完全貓食品(參見飲食對(duì)照段)的134只貓參與該研究。在來自69只雄性和65只雌性年齡在6個(gè)月至14歲之間的家庭短毛貓的單個(gè)血漿樣品中評(píng)價(jià)所有抗氧化劑狀態(tài)。所有方式都引入±標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)。
結(jié)果顯示，在約6歲齡時(shí)存在抗氧化劑狀態(tài)的過渡期。Newman-Keuls多樣范圍試驗(yàn)顯示，6歲齡貓的總血漿抗氧化劑狀態(tài)顯著(p＜0.01)高于6.5歲齡的(參見表3)。不清楚該年齡的抗氧化劑狀態(tài)衰退是否標(biāo)志著對(duì)疾病的更大易感性，或者該年齡的抗氧化劑狀態(tài)是否影響貓的壽命。
表3根據(jù)年齡分類的貓的平均總血漿抗氧化劑濃度
上標(biāo)表示同種組。
實(shí)施例5狗中總血漿抗氧化劑和超氧化物歧化酶有關(guān)家庭狗中抗氧化劑狀態(tài)的了解很少。本研究的目的是驗(yàn)證一種狗中總血漿抗氧化劑(TPAO)和紅細(xì)胞SOD(超氧化物歧化酶)活性的正常范圍的測定方法。
將Randox laboratories Limited生產(chǎn)的比色測定試劑盒用于確定狗中TPAO狀態(tài)(試劑盒號(hào)NX2332)和SOD狀態(tài)(試劑盒號(hào)SD 125)。就TPAO而言，通過一式兩份分析狗血漿樣品和商業(yè)化質(zhì)量控制(QC)材料(PAR721013和PAR 721014biostat Diagnostics)確定測定精度。內(nèi)和中間分析變異系數(shù)(CV)證實(shí)分光光度測定的可接受的變異，血漿樣品CV＜10％和QC＜5％。通過一式兩份分析狗紅細(xì)胞樣品確定SOD狀態(tài)測定精度。內(nèi)和中間分析變異系數(shù)(CV)是指紅細(xì)胞樣品的分光光度測定的可接受的變異CV＜10％。
在9個(gè)月至16歲之間年齡段的30條雄性和20條雌性狗中評(píng)價(jià)TPAO和紅細(xì)胞SOD狀態(tài)。代表了10個(gè)品種。所有狗臨床上都正常，并已長期供給各種營養(yǎng)完全的飲食。年齡與TPAO或SOD活性之間沒有明顯關(guān)系。狗不等價(jià)代表橫跨年齡組(數(shù)據(jù)未顯示)，進(jìn)一步的工作以評(píng)價(jià)觀察是否得到更大樣品和更好年齡擴(kuò)散的支持。在性別之間平均TPAO狀態(tài)(雄性0.719±0.135，雌性0.786±0.101)或SOD活性(雄性1275.41±264.46，雌性1267.61±166.34U/g Hb)沒有看到顯著差異。然而，Bartletts測定顯示了雄性(6994.0)和雌性(27670.3)狗中SOD活性方差之間的顯著差異(p＜0.05)。
對(duì)具有5或更多代表性的這些品種分析顯示，在與性別無關(guān)的品種之間對(duì)SOD活性和TPAO狀態(tài)存在顯著差異(p＜0.01)。Newman-Keuls多樣范圍測定顯示，Beagles比Labradors和Yorkshire Terriers具有明顯低的平均SOD活性(p＜0.05)和平均TPAO狀態(tài)(p＜0.01)，表4。
表4三個(gè)品種的狗的超氧化物歧化酶和總血漿抗氧化劑活性
上標(biāo)表示欄內(nèi)的同種組(Newman-Keuls多樣范圍測定)
n＝動(dòng)物數(shù)量這些數(shù)據(jù)顯示，它不足以假定狗中正常SOD和TPAO范圍的單個(gè)值。在這種需要兩個(gè)值的情況下，一個(gè)為Beagles的，一個(gè)為兩個(gè)品種之一的。Beagles中TPAO狀態(tài)和紅細(xì)胞SOD活性的平均范圍的95％可靠間隔分別為0.569±0.067mmol/1和1084.9±97.27U/g Hb；并且兩個(gè)品種中另一個(gè)為0.822±0.047 mmol/1和1316.2±88.03U/g Hb。
實(shí)施例6使用全自動(dòng)比色測定評(píng)價(jià)貓和狗中的總抗氧化劑狀態(tài)該研究的目的是驗(yàn)證用Randox Laboratories Ltd生產(chǎn)的比色測定試劑盒測定貓和狗中總抗氧化劑狀態(tài)。其次，該驗(yàn)證測定用于評(píng)價(jià)貓和狗中總抗氧化劑狀態(tài)隨年齡的變化并以其它生物化學(xué)和血液參數(shù)比較這些變化。該測定將2，2’-連氮基-二-(3-乙基芐噻唑啉氨基磺酸鹽)(ABTS)與過氧化物和H2O2反應(yīng)產(chǎn)生殘基陽離子ABTS+，它可以在600nm下測定。樣品中存在的抗氧化劑使得該顏色的產(chǎn)生抑制到與其濃度成比例的程度。使用Randox Laboratories提供的方案在Cobas Mira分析器(RocheDiagnostics)上進(jìn)行該測定。測定精度通過對(duì)貓和狗血漿樣品和商業(yè)化質(zhì)量控制(QC)材料的一式兩份分析來確定。內(nèi)分析和中間分析CV都低于QC材料的5％，并且對(duì)貓和狗血漿樣品都低于10％。貓和狗血漿的稀釋在測定中產(chǎn)生線性反應(yīng)。對(duì)不同年齡的家庭短毛貓和幾個(gè)血統(tǒng)品種的狗進(jìn)行包括總抗氧化劑狀態(tài)的常規(guī)血液學(xué)和生物化學(xué)圖譜。貓中抗氧化劑狀態(tài)增加高至2月齡，然后顯示接下來的衰退。性別差異不明顯。小于1歲的雌性狗顯示抗氧化劑狀態(tài)輕微降低，否則隨年齡沒有明顯變化。多重回歸分析證實(shí)，貓中抗氧化劑狀態(tài)、白蛋白、天冬氨酸鹽氨基轉(zhuǎn)移酶和鈣之間的關(guān)系，狗中抗氧化劑狀態(tài)、磷酸鹽和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶之間的關(guān)系。確認(rèn)結(jié)果是可以接受的，并且該測定適合確定貓和狗中總抗氧化劑狀態(tài)。
實(shí)施例7
維生素C補(bǔ)充物對(duì)健康成年貓中血漿狀態(tài)的影響維生素C為體內(nèi)主要水溶性抗氧化劑，它可以延遲或抑制氧化，特別是在細(xì)胞外液中很重要。然而，以前從未研究過貓(Felis domesticus)對(duì)不同維生素C膳食水平的反應(yīng)。本研究的目的是確定在健康成年貓中補(bǔ)充維生素C對(duì)血漿狀態(tài)的影響。
通過逆相高效液相色譜法測定33只貓的血漿維生素C濃度。接著通過分層隨機(jī)抽樣將這些貓分成4組，確信這4組的基線血漿維生素C水平之間沒有顯著差異(ANOVA p＞0.05)。將日維生素C補(bǔ)充物(結(jié)晶L-抗壞血酸，ICN藥劑，UK，為明膠膠囊，Analytical Supplies Limited，UK)連續(xù)21天口服給這些貓。給予這4組貓3.5、7.0、10.5或者21.0mg維生素C/天。在補(bǔ)充的第7、14和21天以及補(bǔ)充后第21天測定血漿維生素C水平。所有貓保持營養(yǎng)完全的罐裝飲食，其中維生素C含量為11.6mg/1.6MJ。
在日補(bǔ)充之后的第7天在所給的所有4個(gè)膳食水平下這些貓的血漿維生素C水平都增加(成對(duì)t-test p＜0.05)，并且補(bǔ)充期間保持這些水平，表5。盡管當(dāng)與較低膳食水平的那些比較時(shí)，維生素C的膳食補(bǔ)充水平越高，血漿值達(dá)到越大，但在膳食組之間的血漿增加沒有顯著差異(使用常規(guī)線性模型重復(fù)測定多個(gè)因素ANOVA p＜0.05)。在補(bǔ)充之后第21天，所有貓的血漿水平回到基線水平。
表5血漿維生素C濃度(ug/ml±SD)
各行中異種上標(biāo)顯示了隨時(shí)間的顯著差異(ANOVA p＜0.05)這些數(shù)據(jù)證實(shí)，以每天基礎(chǔ)給予低水平的維生素C膳食補(bǔ)充，貓的血漿狀態(tài)可以明顯提高。為了保持該提高的血漿狀態(tài)，需要連續(xù)補(bǔ)充。
實(shí)施例8貓和狗中血漿血漿銅藍(lán)蛋白濃度的確定和正常范圍。
該銅合酶，血漿銅藍(lán)蛋白對(duì)身體具有許多功能作用。作為貯藏銅的蛋白質(zhì)，血漿銅藍(lán)蛋白幫助游離銅離子抗催化能力。游離銅可以通過單電子(基團(tuán))轉(zhuǎn)移加速自動(dòng)氧化反應(yīng)，還與過氧化氫反應(yīng)形成高反應(yīng)性的氫氧根，它可以引起細(xì)胞分裂。當(dāng)外傷時(shí)，血漿銅藍(lán)蛋白還促進(jìn)鐵從其預(yù)氧化劑亞鐵形式轉(zhuǎn)化成三價(jià)鐵離子。作為急性相蛋白質(zhì)，血漿銅藍(lán)蛋白可以指示發(fā)炎或感染，并因此用于與血清鐵蛋白結(jié)合測定鐵貯藏。
基于對(duì)苯二胺為底物的Sunderman F.W.和Nomoto，S.(1990)Clin.Chem 16，903方法驗(yàn)證了一種測定貓和狗中血漿銅藍(lán)蛋白氧化酶活性的比色法。在單一運(yùn)轉(zhuǎn)下將兩只狗和兩只貓的血清樣品分析10次。測定狗樣品的內(nèi)分析變異系數(shù)為1.94％和2.95％，貓樣品的內(nèi)分析變異系數(shù)為1.81％和3.94％。對(duì)10個(gè)單獨(dú)天的相同樣品，測定狗樣品的中間分析的變異系數(shù)為8.21％和7.01％，貓樣品的中間分析的變異系數(shù)為6.88％和9.35％。因此獲得可接受水平的內(nèi)和中間分析的變異性。之后，評(píng)價(jià)血清和血漿樣品中血漿銅藍(lán)蛋白濃度的差異。在每一種中測定血漿和血清樣品之間差異不顯著。因此為了降低所需樣品的總體積，收集血漿樣品。
為了確定正常范圍，從102只健康狗(混合種、年齡和性別)和54只健康家庭短毛貓(混合年齡和性別)獲得血漿樣品。測定狗和貓的平均血漿銅藍(lán)蛋白濃度分別為9.28IU/L(SD 3.03IU/L)和10.90IU/L(SD 3.34IU/L)。使用這些值，確定狗的正常范圍(平均±2SD)為3.22IU/L-15.35IU/L，貓的為4.22IU/L-17.58IU/L。確定的狗的正常范圍與前面報(bào)道的(Solter P.F等人(1991)Am J Vet Res 52，1738，1991)一致。以前從未確定過貓的正常范圍，然而它的與狗的相似，這暗示在這兩個(gè)種之間血漿銅藍(lán)蛋白循環(huán)水平有很少的差異。在本研究期間確定的正常范圍可用于評(píng)價(jià)貓和狗的健康狀況。
實(shí)施例9犬鐵蛋白分析驗(yàn)證和血清的正常范圍鐵蛋白在身體的抗氧化劑防御系統(tǒng)中起著重要作用。作為鐵的高親和力貯藏蛋白，鐵蛋白使鐵保持安全結(jié)合形式，它防止了反應(yīng)性亞鐵離子參與Fenton反應(yīng)，該反應(yīng)可以導(dǎo)致氧化損傷。在正常健康鐵蛋白中，種特異性蛋白質(zhì)，如果在血液中發(fā)現(xiàn)其濃度，反映身體鐵貯藏的濃度并與其它參數(shù)結(jié)合可用于評(píng)價(jià)體內(nèi)鐵狀況。為了確定狗中循環(huán)鐵蛋白水平，開發(fā)了一種酶鏈免疫測定(ELISA)，并采用使用單克隆抗體的Weeks，B.R.等人(1988)Am J Vet Res 49，1193)(1988)方法。該測定驗(yàn)證之后，確定狗的正常范圍。
在0-40ng/ml的范圍內(nèi)，鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)為線性(最小平方回歸分析，r＝0.997)并加入到犬血清的純化鐵蛋白的回收率為97.7％。由測定兩個(gè)血清樣品的鐵蛋白濃度12次獲得的內(nèi)分析變異系數(shù)為8.2％和6.6％。在單獨(dú)天兩個(gè)血清樣品測定10次的中間分析變異系數(shù)為16.6％和16.2％。
為了確定正常范圍，血清樣品從96個(gè)測定鐵蛋白用的混合性別和5個(gè)不同種的健康狗獲得。每種樣品分析三次或四次，將這些值的平均值用作樣品的鐵蛋白濃度。血清鐵蛋白濃度的范圍為67.20-621.07，平均值為371.62ng/ml(SD 102.85ng/ml)。這些數(shù)據(jù)正常分布。這些結(jié)果證實(shí)，可以良好重復(fù)性和再現(xiàn)性地測定狗的血清鐵蛋白。獲得的值將用作未來研究的正常范圍，并且可以提供一種測定狗中鐵貯藏水平的有用方法。
實(shí)施例10補(bǔ)充膳食生育酚將使正常范圍之外的犬血漿值增加維生素E是8種自然存在的分子—4種生育酚和4種生育三烯酚的共同名稱。不同形式的生物活性大致與其抗氧化活性有關(guān)，相對(duì)過氧化清除反應(yīng)性的次序?yàn)棣粒睛拢睛茫睛?生育酚。通常提供過量需求的營養(yǎng)物不會(huì)帶來任何測量益處。成年狗中維生素E的最小需求已確定為2.5IUα-生育酚/400kcal飲食(Nutrient Requirements of Dogs(1985)NationalResearch Council(U.S.)National Academy Press Washington DCISBN；0-309-03496-5)。制備的寵物食品典型地含有高達(dá)10倍的該量，但通過寵物食品中的維生素E的正常范圍，血漿濃度趨于恒定。在評(píng)價(jià)補(bǔ)充的維生素E對(duì)血漿反應(yīng)的影響時(shí)，將6只成年給予營養(yǎng)完全(見飲食對(duì)照段)罐裝狗食品(維生素E含量為8.2mg/400kcal(8.2IU/400kcal)的狗，提供6周的補(bǔ)充物，其相當(dāng)于100IU維生素E/天。對(duì)照組6只狗保持在相同條件下，但是未接受補(bǔ)充膳食。在補(bǔ)充期間或補(bǔ)充之后的4周內(nèi)監(jiān)控血漿α-生育酚。
血漿α-生育酚濃度示于表6中。處理組的平均基線α-生育酚水平與對(duì)照組的沒有明顯差異(p＝0.43)。補(bǔ)充2周后，與對(duì)照(p＝0.002)和其基線(p＜0.001)相比，處理組的平均值明顯增加。在第56和70天(補(bǔ)充后第14和28天)進(jìn)行測定，顯示其水平明顯高于基線。這些結(jié)果清楚地說明，典型地在制備的寵物食品中發(fā)現(xiàn)的水平之上的膳食維生素E可以使狗中血漿狀態(tài)上升，補(bǔ)充之后這可以維持幾周。為了使血漿飽和，很顯然需要喂食比目前在制備的寵物食品中發(fā)現(xiàn)的那些更高的濃度。只要維生素E的抗氧化能力有效，可以審慎地增加狗中維生素E狀態(tài)，以便最大化地防止自由基損傷和相關(guān)退化病的機(jī)會(huì)。
表6健康狗中對(duì)α生育酚補(bǔ)充的血漿反應(yīng)
*代表相同組中的均勻性(p＞0.05)◆代表2組之間的均勻性(p＞0.05)實(shí)施例11健康狗中典型血漿維生素E范圍維生素E是8種具有相同生物活性的不同生育酚和生育三烯酚的共同名稱。這8種中，α-生育酚為生物和化學(xué)上活性最大形式的維生素E，1mgα-生育酚相當(dāng)于1IU維生素E。維生素E為體內(nèi)的有效的抗氧化劑，它主要留在生物膜中，在其中它防止膜磷脂免受過氧化破壞。維生素E還抑制維生素A氧化，因此還防止維生素A缺乏。已確定成年狗中對(duì)維生素E的最小需求為2.5IU α-生育酚/400kcal飲食(NutrientRequirements of Dogs(1985)National Research Council(U.S.)National Academy Press Washington DC ISBN；0-309-03496-5)。然而，關(guān)于健康成年狗和幼犬中的正常維生素E血漿值只有少量信息。為了確定健康成年和幼犬中典型基線血漿α-生育酚水平，在喂食一定罐裝和干燥營養(yǎng)完全制備的寵物食品的狗中進(jìn)行了一系列研究(參見飲食對(duì)照段)，表7。根據(jù)體重喂食飲食(110 kcal/kg0.75)。單個(gè)血漿α-生育酚水平的范圍為9-39.2mg/l，平均值為21.1mg/l。供養(yǎng)不同飲食的狗的組的平均基線α-生育酚水平之間沒有顯著差異(p＝0.24)。這些數(shù)據(jù)說明，在幼犬和成年狗中典型α-生育酚水平相似，并且在制備的寵物食品中發(fā)現(xiàn)的常規(guī)維生素E水平內(nèi)，血漿生育酚水平呈現(xiàn)相似范圍。
表7用相應(yīng)平均血漿α-生育酚水平(mg/l±SD)顯示飲食α-生育酚水平(IU/400kcal)
實(shí)施例12健康成年狗鍛練使血漿TBARS-氧化應(yīng)力指示劑增加通過預(yù)柱衍生化的HPLC測定的血漿TBARS(硫代巴比妥酸反應(yīng)性物質(zhì))為體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的公知標(biāo)記物。本研究的目的是調(diào)查狗(Canisfamiliaris)鍛練一次對(duì)氧化應(yīng)力指數(shù)的影響。
在該試驗(yàn)之前3個(gè)月和整個(gè)該試驗(yàn)過程中將一組14只混合種和年齡的狗給予營養(yǎng)完全的商業(yè)化干飲食。在急性20分鐘一次圍場鍛練之后立即通過測定形成的丙醛(MDA)作為TBARS定量脂質(zhì)過氧化程度。該分析是按照如下所述方法測定的Bird，R.P.和Draper，H.H.(1984)，Methods inEnzymology.105299-305(1984)。這些結(jié)果證實(shí)鍛練之后血漿TBARS(Paired TTest p＜0.05)顯著增加(22％)(鍛練前0.74μM±0.2，鍛練后0.92μM±0.2)。為了檢查鍛練后存在的增加是濃縮血液體積的直接結(jié)果，測定PCV(包裹的細(xì)胞體積)和血漿白蛋白。結(jié)果證實(shí)鍛練前和鍛練后沒有明顯差異(p＞0.05)，因此從該研究的觀察暗示，體內(nèi)增加的脂質(zhì)過氧化以鍛練誘導(dǎo)的氧化應(yīng)力的直接結(jié)果存在?，F(xiàn)有文獻(xiàn)提出，氧化損傷的特定位置為細(xì)胞膜，由此在高氧化應(yīng)力條件下過氧化殘基(RO2)增多。這種觀察推斷在健康成年狗中膳食脂質(zhì)相抗氧化介入的潛在作用。
下面描述動(dòng)物抗氧化狀態(tài)的其它例子和本發(fā)明抗氧化合劑對(duì)動(dòng)物的影響。
實(shí)施例13家庭貓中膳食類胡蘿卜素吸收現(xiàn)發(fā)現(xiàn)，將抗氧化劑如β-胡蘿卜素和番茄紅素加入商業(yè)化貓食中將明顯增加貓對(duì)類胡蘿卜素的吸收，盡管它們的代謝適應(yīng)食肉。在該研究中，使用具有相同基本配方的相同批次的原料生產(chǎn)三種罐裝貓食。對(duì)照飲食，飲食A，具有3.39MJ/kg的可代謝能量(ME)含量，且β-胡蘿卜素和番茄紅素含量＞0.1mg/1.67MJME。飲食B補(bǔ)充有紅色棕櫚油(3.70MJME/kg)，β-胡蘿卜素含量為0.36mg/1.67MJME并且番茄紅素含量＞0.1MG/1.67MJME；飲食C補(bǔ)充有番茄浮石(3.54MJME/kg)，且β-胡蘿卜素含量＞0.1MG/1.67MJME，番茄紅素含量為0.9MG/1.67MJME。
該研究選擇了2組各5只健康貓。組1中的貓的平均年齡為8.72歲(SD2.1歲)，包括3個(gè)雄性和2個(gè)雌性。組2中的貓的平均年齡為7.4歲(SD1.7歲)，包括2個(gè)雄性和3個(gè)雌性。該研究的所有貓以前都給予各種市購營養(yǎng)完全且制備好的貓食，然后給予幾天的飲食A，使其喜歡該飲食。在本研究的第8天，測定基線血漿類胡蘿卜素水平。接著，將組1貓喂食飲食B，組2貓喂食飲食C，持續(xù)5天。在本研究的第13天，以相同方式重復(fù)抽取血漿作為基線樣品。通過高效液相色譜法進(jìn)行分析。
給予飲食B的組1貓中β-胡蘿卜素濃度明顯增加(平均17.62ng/mL，SD2.50ng/mL)至基線值(平均6.35ng/mL，SD 3.23ng/mL)之上。在該組中，血漿番茄紅素濃度保持在檢測的限度之下。在給予飲食C的組2貓中，基線水平(平均5.30ng/mL，SD5.78ng/mL)和喂食后水平(平均6.61ng/mL，SD2.83ng/mL)的血漿β-胡蘿卜素濃度沒有明顯改變。然而，組2中貓顯示，血漿番茄紅素濃度從基線水平的0ng/mL至喂食后水平的平均14.6ng/mL，SD7.25ng/mL明顯增加。
因此，本研究證實(shí)了，抗氧化劑的天然來源如β-胡蘿卜素和番茄紅素加入到市購貓食之后將使得貓對(duì)類胡蘿卜素的吸收明顯增加，盡管其代謝適應(yīng)食肉性。循環(huán)抗氧化劑時(shí)的這種增加將賦予貓抗氧化劑狀態(tài)的有益效果。類胡蘿卜素以低膳食濃度在貓中的這種增加的吸收至今還從未看到過。
實(shí)施例14母乳可能不足以使發(fā)育中的小貓的抗氧化劑狀態(tài)最大化。
就免疫功能而言，抗氧化劑的效果同樣可以適用于因年齡具有受損免疫功能的動(dòng)物如成長動(dòng)物以及接受免疫攻擊的那些動(dòng)物。以下研究的結(jié)果顯示，母乳可能不足以使發(fā)育中的小貓的抗氧化劑狀態(tài)最大化，反而可能使小貓對(duì)氧化應(yīng)力的易感性增加。因此，可以發(fā)現(xiàn)，以膳食給小貓補(bǔ)充抗氧化合劑同樣顯示出與接受抗氧化合劑補(bǔ)充物的幼犬中發(fā)現(xiàn)的抗體反應(yīng)時(shí)間的提高。
哺乳動(dòng)物抵抗氧化損害的能力既取決于其內(nèi)部抗氧化劑防御系統(tǒng)又取決于飲食提供的整個(gè)抗氧化劑狀態(tài)。測定動(dòng)物抗氧化劑狀態(tài)的一種方式是評(píng)價(jià)其總血漿抗氧化能力(TPAO)。已將Randox Laboratories Ltd.生產(chǎn)的比色測定試劑盒用于貓中測定TPAO的正常范圍。在與其血液濃度成比例的試驗(yàn)中血樣中存在的抗氧化劑將使色彩產(chǎn)生受到抑制。
進(jìn)行本研究，以確定健康小貓中TPAO的正常范圍并確定年齡與TPAO之間是否存在任意關(guān)系。適用上述方法分析樣品，適用ANOVA比較這些結(jié)果。結(jié)果示于下表7中。
表7
從這些結(jié)果可以看出，乳貓的TPAO狀態(tài)為正常成年范圍的底端，僅達(dá)到35-60天的成年水平。在出生后的14天，小貓完全受母乳的支配提供其營養(yǎng)需求。在35天齡時(shí)，小貓非常小地受母乳依賴，并從銷售的食品中獲得大部分營養(yǎng)攝取，而在60天時(shí)，它們完全斷奶。這些結(jié)果暗示，母乳不足以使發(fā)育中的小貓的抗氧化劑狀態(tài)最大化，反而有利于使小貓對(duì)氧化應(yīng)力的易感性增加。
實(shí)施例15抗氧化劑強(qiáng)化的飲食使貓的抗氧化能力增加。
根據(jù)年齡和性別，將一組46只健康家庭短毛貓隨機(jī)地分成2組各23只貓。組A給予對(duì)照基礎(chǔ)飲食(按照對(duì)照區(qū)的完全濕的飲食)，組B給予補(bǔ)充有抗氧化混合劑的飲食，時(shí)間為30周。
混合劑為維生素E50ICT/400kcal飲食維生素C20mg/400kcal飲食β-胡蘿卜素0.5-1mg/400kcal飲食黃體素 0.5mg/400kcal飲食?；撬?200mg/400kcal飲食番茄紅素 1mg/400mgkcal飲食從所有貓中獲得禁食樣品并使用鐵還原性抗氧化劑粉末(FRAP)和鐵還原性抗氧化劑粉末和抗壞血酸濃度(FRASC)試驗(yàn)評(píng)價(jià)抗氧化能力。
就FRAP和FRASCT而言，與組A相比，組B中的抗氧化能力顯著增加(p＜0.05)組平均FRAP±SD 平均FRASC±SDA 260.45±55.59 28.05±7.93B 297.63±57.18 36.33±10.69因此，喂食抗氧化劑強(qiáng)化飲食的貓中的抗氧化能力增加，這使得減輕與氧化損傷有關(guān)的有害影響的能力增加。
實(shí)施例16補(bǔ)充抗氧化劑的飲食對(duì)貓免疫狀態(tài)的影響試驗(yàn)設(shè)計(jì)
測定基線之后對(duì)48只正常健康的貓喂食對(duì)照飲食(每個(gè)對(duì)照段的完全飲食)持續(xù)6周。然后將這些貓分成對(duì)照或處理年齡相配的組，并喂食實(shí)施例15中所述的補(bǔ)充飲食。在第8周時(shí)對(duì)動(dòng)物抽樣，以便測定血清免疫球蛋白濃度。在第12周時(shí)測定免疫參數(shù)并對(duì)這些貓免疫(使用抗貓泛白細(xì)胞減少癥、貓杯狀病毒和貓皰疹病毒的標(biāo)準(zhǔn)組合疫苗)。在第18周時(shí)進(jìn)行免疫后的最終測定。
所用方法通過促細(xì)胞分裂劑誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化測定(MILT)評(píng)價(jià)外周血液單核細(xì)胞(PBMC)增殖反應(yīng)在Histopaque 1077(Sigma)上通過密度梯度離心將周圍血液單核細(xì)胞從肝素化血液中分離。這些細(xì)胞用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)沖洗2次，用補(bǔ)充有10％熱失活的胎牛血清、1％青霉素/鏈霉素和2％丙酮酸鈉的RPMI-1640(Dutch modification)沖洗1次。通過臺(tái)盼藍(lán)排除試驗(yàn)(Sigma)評(píng)價(jià)細(xì)胞生存能力。
將細(xì)胞一式三份以1×105/井在96孔平底微量滴定平皿中在37℃下用植物凝集素(PHA)(5g/ml)(Murex)、刀豆球蛋白A(Con A)(7.5μg/ml)和美洲商陸促細(xì)胞分裂劑(PWM)(1μg/ml)(Sigma)培養(yǎng)96小時(shí)。在培養(yǎng)的最后18小時(shí)內(nèi)以每分鐘加入的[3H]-胸腺嘧啶核苷的數(shù)量(CPM)(0.5μCi/井)測定增殖。
通過流式細(xì)胞計(jì)分析淋巴細(xì)胞子集CD4和CD8陽性細(xì)胞為貓免疫學(xué)中最公知特征的淋巴細(xì)胞子集，適宜全部的這些細(xì)胞說明了健康免疫系統(tǒng)。既使用提純的淋巴細(xì)胞又使用全血并選擇各種單克隆抗體(Mabs)進(jìn)行該測定。
結(jié)果通過促細(xì)胞分裂劑誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化測定(MILT)評(píng)價(jià)PBMC增殖反應(yīng)表8顯示了免疫攻擊之前和之后PBMC對(duì)促細(xì)胞分裂劑PHA、Con A和PWM的反應(yīng)。促細(xì)胞分裂劑誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞之后測定(MILT)數(shù)據(jù)未顯示出對(duì)照或者處理組的增殖反應(yīng)的變化。當(dāng)進(jìn)行刺激指數(shù)分析時(shí)，從免疫前到免疫后在處理組中PHA刺激指數(shù)(SI)(p＜0.05)和Con A指數(shù)(p＜0.001)都明顯降低。對(duì)照組的SI沒有明顯差異。在兩個(gè)組中從基線到免疫前Pokeweed SI都明顯增加(p＜0.05)，免疫后處理組中明顯降低(p＜0.01)。
表8在免疫攻擊之前和之后PBMC對(duì)促細(xì)胞分裂劑PHA、Con A和PWM的反應(yīng)[3H]胸腺嘧啶核苷加入量(數(shù)/分鐘)CPM×10-3平均±SEM刺激指數(shù)(S.I.)平均±SET基線 免疫前免疫后標(biāo)準(zhǔn)alara plusb標(biāo)準(zhǔn) lara plus 標(biāo)準(zhǔn) lara plus(n＝22) (n＝23)(n＝22)(n＝23)(n＝22)(n＝23)未刺激20±4 21.6±427.2±3.6 18.2±330.9±3.9 25±2.6PHA 38.8±441.5±633.7±3.9 28.5±3.2 38.8±433.3±3S.I. 2.01±0.2 2.69±0.5 1.38±0.1 2.2±0.25 1.8±0.58 1.49±0.14*Con A 29±3 32.4±4.5 31.4±3.5 38±5.937.9±433±3.6S.I. 1.55±0.1 1.85±0.2 1.38±0.1 2.3±0.1 1.81±0.5 1.46±0.15***PWM 21.5±2.5 22±4 37±4.229.7±337.8±429.7±3.3S.I. 1.1±0.1 1.25±0.15 1.5±0.2* 2.52±0.4* 2.03±0.7 1.26±0.1**a對(duì)照組，標(biāo)準(zhǔn)飲食 *P＜0.05；**P＜0.01；b處理組，測定飲食 ***P＜0.001通過流式細(xì)胞計(jì)分析淋巴細(xì)胞子集表9顯示了免疫前和免疫后T-細(xì)胞相對(duì)子集數(shù)和CD4+∶CD8+比。當(dāng)分析CD4和CD8 T-細(xì)胞子集時(shí)，在兩個(gè)組中CD4陽性細(xì)胞(p＜0.05)的百分?jǐn)?shù)都明顯增加，并且在免疫之后對(duì)照組(p＜0.05)和測定組(p＜0.001)的CD8陽性細(xì)胞都明顯增加。
當(dāng)測定淋巴細(xì)胞的CD4+∶CD8+比時(shí)，發(fā)現(xiàn)免疫攻擊之后對(duì)照組(p＜0.001)中明顯降低，而處理組中保持恒定。當(dāng)測定年齡關(guān)系時(shí)，在免疫之前對(duì)照組中隨年齡增加CD4+∶CD8+比趨于降低(r＝-0.483，p＜0.05)。表9免疫前和免疫后T-細(xì)胞相對(duì)子集數(shù)和CD4+∶CD8+比，MEAN±SEM免疫前 免疫后標(biāo)準(zhǔn)alara plusb標(biāo)準(zhǔn)lara plus(n＝21) (n＝23) (n＝21) (n＝23)CD4陽性百分?jǐn)?shù)22.6±1.120.9±0.725.1±1.6*24.5±1.3*CD8陽性百分?jǐn)?shù)17.2±0.115.4±1.322.3±1.2*19.6±1.6**CD4∶CD8比1.42±0.1 1.57±0.11.17±0.1** 1.43±0.1a對(duì)照組，標(biāo)準(zhǔn)飲食 *P＜0.05；**P＜0.001b處理組，測定飲食從給予補(bǔ)充飲食的貓中觀察到PWM刺激細(xì)胞的SI的差異(表8)暗示，CD2-T-細(xì)胞的激活標(biāo)記物有益地上調(diào)。
表9的結(jié)果清楚地顯示了補(bǔ)充飲食對(duì)接種后貓的CD4∶CD8比的有益效果。與對(duì)照組相比，在補(bǔ)充過的貓中保持CD4∶CD8比。這種維持主要是因?yàn)镃D4增加。
這些事實(shí)顯示了補(bǔ)充物對(duì)貓免疫反應(yīng)的有益效果。
實(shí)施例17抗氧化混合劑對(duì)幼犬的特異性抗體反應(yīng)的影響●將幾個(gè)Labrador幼犬和Greyhound幼犬分成兩個(gè)年齡和性別搭配的組。
●一組每個(gè)品種補(bǔ)充有混合劑(詳細(xì)如下)的標(biāo)準(zhǔn)飲食(完全，與每個(gè)對(duì)照段相同)，另外兩組(每個(gè)品種一個(gè))給予未補(bǔ)充的飲食。抗氧化混合劑-α-生育酚50mg/400kcal抗壞血酸鹽 20mg/400kcal干(如果是濕的話為40mg)β-胡蘿卜素 0.5mg/400kcal黃體素 0.5mg/400kcal?；撬? 200mg/400kcal干(如果是濕的話為500mg)●在接種之前補(bǔ)充物使用高達(dá)最大4周。
●所用幼犬按照常規(guī)接種步驟進(jìn)行接種(疫苗包括細(xì)小病毒和瘟熱)。
●對(duì)所用幼犬測定疫苗抗原的抗體水平。
●這些結(jié)果一些示于圖4、5和6中。
●這些結(jié)果清楚地說明，接受抗氧化混合劑補(bǔ)充物的幼犬將對(duì)例如通過疫苗引入的或者可能通過與感染性試劑接觸引入的特異性抗原更快地作出反應(yīng)。
●這些結(jié)果顯示，抗氧化合劑對(duì)幼小動(dòng)物的免疫反應(yīng)具有高度有益效果。
實(shí)施例18在成年和年長狗中抗氧化混合劑對(duì)保持疫苗反應(yīng)的有益效果●2組狗的年齡、性別和品種搭配。
●2組還都按照它們以前接種的時(shí)間搭配(在開始本研究之前)。
●1組喂食補(bǔ)充有抗氧化混合劑(詳細(xì)如下)的飲食，另一組給予未補(bǔ)充的對(duì)照。
表10
●喂食6個(gè)月補(bǔ)充飲食之后，測定這些狗的循環(huán)抗腺病毒抗體滴度。結(jié)果示于圖7。
●這些結(jié)果顯示，給予含有抗氧化混合劑的飲食的動(dòng)物比未補(bǔ)充的狗能夠長時(shí)間地較好保持疫苗誘導(dǎo)的抗體。
實(shí)施例19給予含有抗氧化混合劑的干燥狗飲食8周后狗中抗氧化劑狀態(tài)和氧化損傷簡述●該報(bào)告含有來自喂食含有抗氧化混合劑的干燥狗飲食8周的狗的結(jié)果(抗氧化劑狀態(tài)和氧化損傷)。一些結(jié)果受飲食和年齡影響。
●給予抗氧化劑的組中血漿FRAP和維生素E水平明顯高于喂食對(duì)照的組中的。
●給予抗氧化劑飲食的年輕成年和年長狗中血漿維生素E水平都明顯高于其相應(yīng)對(duì)照組中的。
材料和方法動(dòng)物1)動(dòng)物類型該研究包括了40只年輕成年(0.8-3.3歲)和年長(6.5-12.5歲)、純種(Labradors、Beagles、West Highland white terrier、Newfoundland和Golden Retriver)、以及性別混合的狗(無傷、閹割/切除卵巢)。
2)居住處將狗成對(duì)分組并且都可以從其柵欄到外面環(huán)境。在白天和晚上所有狗都可以進(jìn)入戶內(nèi)。來自相同處理組的狗住在一起，防止因食糞癖(糞便消耗性疾病)交叉污染。溫度控制在22℃，具有自然光循環(huán)。允許狗保持其日常定期鍛練程序。
3)喂養(yǎng)方案在開始本研究之前所有狗都給予1周完全且平衡的干燥狗飲食。適應(yīng)1周之后，2/3的狗作為對(duì)照組喂養(yǎng)基本飲食，而剩余1/3轉(zhuǎn)為測定飲食。喂食每只狗的食品量根據(jù)保持體重進(jìn)行調(diào)節(jié)。在所有時(shí)間所有狗都可以使用新鮮水。
測定物質(zhì)測定飲食含有以下組分，而它們不加入對(duì)照飲食中。
試驗(yàn)設(shè)計(jì)本研究為縱向試驗(yàn)設(shè)計(jì)。所有狗以品種、性別、年齡、體重和健康狀況為基礎(chǔ)隨機(jī)分配。
狗與上表中相同，但是它們按照年齡分開。
血液和唾液生物標(biāo)記物從每只狗收集血液，測定處理8周后的以下參數(shù)。
統(tǒng)計(jì)學(xué)通過p＜0.05下處理之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性的unequal n’s Tukey’s posthoc test分析所有狗的所有參數(shù)。數(shù)據(jù)以組的平均數(shù)±SD表示。
圖8測定血漿中三價(jià)鐵的還原能力(FRAP)，它是連續(xù)8周測定給予含有抗氧化混合劑的干燥狗飲食的狗中的“抗氧化能力”。(對(duì)照，n＝26；測定，n＝14)。*代表與對(duì)照組差異顯著，p＜0.05。
●處理8周之后在測定組中測定的血漿“抗氧化能力”明顯高于對(duì)照組中的。
圖9連續(xù)8周測定給予含有抗氧化混合劑的干燥狗飲食的狗中的血漿維生素E水平。(對(duì)照，n＝26；測定，n＝14)。*代表與對(duì)照組差異顯著，p＜0.05。
●處理8周之后在測定組中的血漿維生素E水平明顯高于對(duì)照組中的。
對(duì)照飲食段營養(yǎng)完全的飲食食用的完全飲食，特別是營養(yǎng)完全的寵物食品(或飲食)為滿足單個(gè)動(dòng)物生活方式和生命的所有營養(yǎng)需求的一種飲食。
該飲食或食品可以按照本領(lǐng)域已知的任意方法制備，例如Waltham Bookof Dog and Cat Nutrition，Ed.ATB Edney，Chapter by A.Rainsbird，entitled"A Balanced Diet"in pages 57 to 74，Pergoren Press Oxford。
以下顯示了一種按照這些實(shí)施例的完全平衡的飲食組成。組分 包含大米 24.9％完整玉米 18.8％完整顆粒小麥 12.2％副產(chǎn)品雞肉18.7％玉米面筋粉9.5％啤酒酵母 1.7％干雞蛋0.8％非碘化鹽0.7％維生素預(yù)混物3.4％向日葵油0.5％牛油4.9％家禽腸 4.4％分析圖譜-水分8.2％，蛋白質(zhì)26.4％，脂肪10.4％，灰分7.1％，纖維2.2％(其余物由無氮提取物(主要為碳水化合物)構(gòu)成)。
權(quán)利要求
1.一種增加貓或狗中血漿維生素E水平的方法，該方法包括步驟向所述貓或狗給予足夠增加血漿維生素E水平量的維生素E。
2.如權(quán)利要求1的方法，還包括向所述貓或狗給予一定量的維生素C。
3.如權(quán)利要求1或2的方法，還包括向所述貓或狗給鄧一定量的?；撬?。
4.如權(quán)利要求1或2的方法，還包括向所述貓或所述狗給予一定量的維生素C和一定量的?；撬?。
5.如權(quán)利要求1-5任一的方法，還包括向所述貓或狗給予一定量的類胡蘿卜素。
6.如權(quán)利要求2-6任一的方法，其中組分同時(shí)、分別或相繼給藥。
7.一種狗或貓食品，它向所述動(dòng)物傳遞的成分濃度足夠增加動(dòng)物抗氧化劑狀態(tài)。
8.一種狗或貓食品，它提供了濃度水平為25IU/400kcal飲食或之上的維生素E。
9.如權(quán)利要求10的狗或貓食品，提供了濃度水平為10mg/400kcal或之上的維生素C。
10.如權(quán)利要求10的狗或貓食品，提供了濃度水平為80mg/400kcal或之上的?；撬?。
11.如權(quán)利要求10的狗或貓食品，提供了濃度水平為10mg/400kcal或之上的維生素C并提供了濃度水平為80mg/400kcal或之上的?；撬?。
12.如權(quán)利要求7-11任一的狗或貓食品，提供了一定濃度的類胡蘿卜素。
13.如權(quán)利要求7-12任一的狗或貓食品，用于預(yù)防或治療狗或貓中的低抗氧化劑狀態(tài)。
14.如權(quán)利要求7-12任一的狗或貓食品，用于預(yù)防或治療具有應(yīng)力成分的任意紊亂。
15.如權(quán)利要求14的狗或貓食品，其中這些紊亂為以下任意一種或多種癌癥、老化、心臟病、動(dòng)脈粥樣硬化、關(guān)節(jié)炎、白內(nèi)障、炎癥性腸病、腎病、腎衰竭、神經(jīng)變性病或受損性免疫。
16.如權(quán)利要求7-14任一的狗或貓食品，用于治療或幫助貓或狗響應(yīng)免疫攻擊。
17.如權(quán)利要求16的狗或貓食品，其中免疫攻擊為接種。
18.一種預(yù)防或治療狗或貓?jiān)馐芫哂醒趸瘧?yīng)力成分的紊亂的方法，包括向所述狗或貓喂食權(quán)利要求7-12任一的食品。
19.一種使動(dòng)物中對(duì)免疫攻擊的免疫反應(yīng)保持最佳化或使之提高的方法，包括向所述動(dòng)物給予權(quán)利要求7-12任一的食品。
20.維生素E在生產(chǎn)預(yù)防或治療狗或貓中低抗氧化劑狀態(tài)的藥物中的用途。
21.維生素E在生產(chǎn)預(yù)防或治療具有氧化應(yīng)力成分的任意紊亂的臨床飲食中的用途。
22.如權(quán)利要求21的維生素E的用途，用于在貓或狗中使響應(yīng)免疫攻擊的免疫反應(yīng)保持、最佳化或提高。
23.維生素E加入食品內(nèi)作為狗或貓的體內(nèi)抗氧化劑的用途。
24.一種制備權(quán)利要求7-14或21中任一的食品的方法，該方法包括將至少兩種食品組分混合在一起。
25.一種狗或貓食品，含有濃度為15mg/400kcal或之上的維生素C。
26.維生素C在生產(chǎn)用于預(yù)防或治療具有應(yīng)力成分的紊亂的狗或貓食品中的用途。
27.如權(quán)利要求26的維生素C的用途，其中這些紊亂為以下任意一種或多種癌癥、老化、心臟病、動(dòng)脈粥樣硬化、關(guān)節(jié)炎、白內(nèi)障、炎癥性腸病、腎病、腎衰竭、神經(jīng)變性病或受損性免疫。
28.如權(quán)利要求26的維生素C的用途，用于治療或幫助響應(yīng)免疫攻擊。
29.一種預(yù)防或治療貓或狗中具有氧化應(yīng)力成分的紊亂的方法，包括向所述貓或狗給予如權(quán)利要求25的食品。
30.如權(quán)利要求7的狗或貓食品，包括α-生育酚抗壞血酸鹽β-胡蘿卜素黃體素和牛磺酸。
31.如權(quán)利要求30的狗或貓食品，還包括番茄紅素。
32.如權(quán)利要求30的狗或貓食品，其中這些組分以以下量存在α-生育酚 25mg/400kcal抗壞血酸鹽5mg/400kcalβ-胡蘿卜素 0.01mg/400kcal黃體素0.05mg/400kcal?；撬?0mg/400kcal
33.如權(quán)利要求32的狗或貓食品，還包括濃度為0.01mg/400kcal的番茄紅素。
全文摘要
本發(fā)明尤其提供了一種克服家庭貓和狗中氧化應(yīng)力問題的方式。提供了一種增加貓或狗中血漿維生素E水平的方法,該方法包括步驟:向所述貓或狗給予足夠增加血漿維生素E水平量的維生素E。還提供了維生素C在生產(chǎn)用于預(yù)防或治療具有應(yīng)力成分的紊亂的狗或貓食品中的用途。本發(fā)明利用抗氧化混合劑克服貓或狗中氧化應(yīng)力問題。這種合劑可用于預(yù)防或治療具有氧化應(yīng)力成分的紊亂或保持、最佳化或提高免疫反應(yīng)。
文檔編號(hào)A61K31/047GK1342073SQ0080437
公開日2002年3月27日 申請(qǐng)日期2000年1月31日 優(yōu)先權(quán)日1999年1月29日
發(fā)明者E·J·哈珀 申請(qǐng)人:馬斯英國有限公司