專(zhuān)利名稱(chēng)：使用微生物制備有機(jī)硒提取劑的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明使用微生物食用菌菌株，在培養(yǎng)基中，經(jīng)過(guò)生物固體發(fā)酵培育出子實(shí)體，采摘其富硒鮮品原料，經(jīng)過(guò)粉碎打漿、浸提、離心分離，減壓濃縮、配料等工藝流程，提取有機(jī)硒水(粉)劑。國(guó)際分類(lèi)屬于C12R，涉及的是生物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
在公知技術(shù)中，經(jīng)初步檢索找出24件有關(guān)硒的中國(guó)專(zhuān)利，其中相近似的專(zhuān)利技術(shù)有85107995“富硒麥芽的生產(chǎn)方法”，86100490“利用抗氨固氮菌生產(chǎn)富硒單細(xì)胞蛋白，維生素E和菌肥的方法”，88103347“硒化卡拉膠的制法”，91102488“黑豆硒力汁的制造方法”，91108877“富硒茶的人工栽培方法”，92107669“硒多糖及其制造方法”，92111121“硒力口服液生產(chǎn)工藝”等。
上述對(duì)比文件中的技術(shù)及其產(chǎn)品，一個(gè)共同點(diǎn)就是對(duì)硒這個(gè)微量元素的作用給予了充分肯定，補(bǔ)硒對(duì)人體提高免疫能力和醫(yī)療保健作用，都有明確的認(rèn)識(shí)，技術(shù)方案及其制造方法都是可行的，并且取到了一定的積極效果。但是，它們?nèi)匀淮嬖谥S多不足之處它們大都未使用微生物食用菌菌株，培育鮮品原料，提取高含量的純天然的有機(jī)硒制品，甚至有一部分是有機(jī)硒和無(wú)機(jī)硒的混合體。
通過(guò)葉面噴灑或根部吸收無(wú)機(jī)硒，而欲達(dá)到轉(zhuǎn)化有機(jī)硒的目的，這種方法有機(jī)硒轉(zhuǎn)化率低，所得到的葉子硒成份為有機(jī)硒和無(wú)機(jī)硒的結(jié)合體，且葉面含部分殘留未吸收利用的無(wú)機(jī)硒，硒含量無(wú)法控制。
由于不是真正的純天然有機(jī)硒制品，且不具增強(qiáng)免疫、防癌、治癌特性的蕈菌多糖，它的補(bǔ)硒作用及醫(yī)療保健效果相對(duì)較弱。
所以，對(duì)硒的研究還有深入一步。硒已被世界衛(wèi)生組織確定為維持人和動(dòng)物機(jī)體正常生命活動(dòng)的必需微量雹素之一。硒缺乏還是心血管病、各種癌癥、肝病等發(fā)生誘因或病因，由此，應(yīng)該有更新的技術(shù)，更好的產(chǎn)品出現(xiàn)，來(lái)滿(mǎn)足社會(huì)的需要。
本發(fā)明的目的，就是提供一種使用微生物食用菌菌株，經(jīng)過(guò)生物固體發(fā)酵轉(zhuǎn)化成鮮品原料，再經(jīng)過(guò)特定的工藝流程，提取出高含硒和蕈菌多糖純天然的，有機(jī)硒轉(zhuǎn)化率高而且含硒量能人為有效控制和標(biāo)碼的，最終提取物幾乎不含無(wú)機(jī)態(tài)硒因而無(wú)毒無(wú)付作用的，補(bǔ)硒作用及醫(yī)療保健效果比較顯著的天然有機(jī)硒提取劑的制備方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明主要采取以下措施來(lái)達(dá)到使用聚硒能力強(qiáng)的側(cè)耳科側(cè)耳屬食用菌菌株(pleurotus.sp)，在以植物殼體為主，經(jīng)科學(xué)配制的培養(yǎng)基中接種，通過(guò)生物固體發(fā)酵轉(zhuǎn)化，生成子實(shí)體，即高含量有機(jī)硒鮮品原料，再通過(guò)特定的工藝流程，接種→培育鮮品原料→粉碎打漿→浸提→離心分離→減壓濃縮→沉淀離心→配料→滅菌→成品。離心分離流程中離心機(jī)內(nèi)的固形沉淀物直接進(jìn)入配料流程。提取出天然有機(jī)硒(水和粉)劑。
本發(fā)明還可以通過(guò)其他措施來(lái)達(dá)到1、菌株接種用的培養(yǎng)基的配方
植物殼體 80—98％麩皮 5％石膏 1％復(fù)合添加劑I 0.1—2％(維生素B、糖等)復(fù)合添加劑II 0.01—1％(硒、鈉、鉀、鎂、磷、硫)玉米粉2％加水混合。
2、菌絲及實(shí)體培養(yǎng)條件菌絲培養(yǎng)溫度20—28℃子實(shí)體培養(yǎng)溫度10—25℃菌絲培養(yǎng)濕度60—75％子實(shí)體培養(yǎng)濕度75—95％菌絲培養(yǎng)時(shí)間15—20天子實(shí)體培養(yǎng)時(shí)間30—60天光照要求不需光。光照要求 散射光。
3、培育出的有機(jī)硒鮮品原料，包括平菇、香菇、金針菇靈芝、猴頭等，按1份鮮品原料(含水量88—92％)3份水的比例混合，另加入含0.6％的檸檬酸水溶液，然后用打漿機(jī)粉碎得到的漿液，將該液在20—30℃的恒溫條件下浸提0.5—1hr。
4、將恒溫條件下浸提后的混合液，用300目篩網(wǎng)，在2000—4000rpm的離心機(jī)中離心分離，分別得到上清液和固形沉淀物，上清液進(jìn)入減壓濃縮流程，固形沉淀物在80℃烤箱中烤干，粉碎進(jìn)入配料流程。該粉劑中有機(jī)硒含量達(dá)150—250ppm，蕈菌多糖為14—18g/100g干品。
5、上清液是在660mmHg汞柱的真空度50—70℃的條件下，于減壓濃縮缸中，濃縮60％。
6、在所得到的濃縮液中，加入濃度為30—50ppm，并事先溶解在醋酸溶液中的甲殼素，然后加熱至100℃，保溫沉淀1’，靜止0.5hr。再用200—300目的尼龍篩網(wǎng)，2000—4000rpm的離心機(jī)，進(jìn)行離心沉淀。
7、經(jīng)離心沉淀后的上清液，按其總重量加入0.01—0.05％的黃原酸，山犁酸鉀等，攪拌均勻。所得的水劑中有機(jī)硒含量為50—100ppm，蕈菌多糖含量4—8g/100ml。
本發(fā)明具有如下的特點(diǎn)本發(fā)明使用的菌株(Pleurotus.sp)是經(jīng)過(guò)認(rèn)真篩選培育的，菌絲潔白，致密、好氧、無(wú)毒可食；使用該食用菌菌株轉(zhuǎn)化的鮮品原料，工藝簡(jiǎn)單、制造方便，而且是純天然原料，食用菌鮮品因非菌表面直接噴施無(wú)機(jī)硒，故鮮品表面不含無(wú)機(jī)硒，總硒中有機(jī)硒比例在99％以上，明顯優(yōu)于其它技術(shù)高于其他富硒產(chǎn)品；提取劑中還含有豐富的蕈菌多糖，維生素A、B、C、D、E，可協(xié)同有機(jī)硒起抗氧化能力，請(qǐng)除氧自由基，延緩衰老，防治各種癌癥；生產(chǎn)成本低，適合于規(guī)模生產(chǎn)；由于本發(fā)明的提取物為濃縮劑型的水劑和粉劑，易于包裝運(yùn)輸，便于配料制成飲料，口服液，食品糖丸、膠囊，沖劑等各種形式的富硒補(bǔ)硒制品。
本發(fā)明附圖
即工藝流程方框圖的圖面說(shuō)明1、食用菌菌株，2、生物固體發(fā)酵，3、有機(jī)硒鮮品原料，4、粉碎打漿，5、浸提，6、離心分離，7、固形物處理，8、減壓濃縮，9、沉淀離心，10、配料，11、滅菌，12、成品。
以下結(jié)合工藝流程方框圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作比較詳細(xì)的說(shuō)明本發(fā)明所使用的食用菌菌株為真菌門(mén)，擔(dān)子菌、傘菌目、側(cè)耳科、側(cè)耳屬、其拉丁名稱(chēng)為Plurotus.sp。該菌株是中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院食品工業(yè)研究所經(jīng)多年研究，篩選和培育出的富硒食用菌，稱(chēng)之為“中植營(yíng)養(yǎng)素8號(hào)”，它無(wú)毒可食，菌絲潔白、致密、好氧。培養(yǎng)條件為PH3—11，C/N比為20—25∶1。菌株一般在4℃情況下可保存0.5—1年。中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院食品工業(yè)研究所可以提供該菌株20年以上。
現(xiàn)于一九九四年九月六日委托“北京中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心”保藏，保藏號(hào)為CGMCC 0217號(hào)。
本發(fā)明的實(shí)施例是這樣的使用上述高富硒食用菌菌株(Pleurotus.sp)在以棉仔殼為主料的培養(yǎng)基中接種，培養(yǎng)基配料配方棉仔殼體 80—98％麩皮 5％石膏 1％復(fù)合添加劑I 0.1—2％(維生素B和糖等)復(fù)合添加劑II 0.01—1％(硒、鈉、鉀、鎂、磷、硫)玉米粉2％加水混合。
按照下列條件培養(yǎng)菌絲及子實(shí)體菌絲培養(yǎng)溫度20—28℃子實(shí)體培養(yǎng)溫度10—25℃菌絲培養(yǎng)濕度60—75％子實(shí)體培養(yǎng)濕度75—95％
菌絲培養(yǎng)時(shí)間15—20天子實(shí)體培養(yǎng)時(shí)間30—60天光照要求不需光。光照要求 散射光。
本實(shí)施例接種培育的平菇，其它如香菇、金針菇、靈芝，猴頭等都可作為富硒菌株和鮮品原料。有機(jī)硒鮮品原料，是一種富含有機(jī)硒的蕈菌產(chǎn)品，主要以硒蛋白、硒多糖，形式存在外，還含有大量的蕈菌蛋白、蕈菌多糖(包括平菇多糖、香菇多糖、金絲菇糖、靈芝多糖、猴頭多糖)以及維生素A、B、C、D、E和豐富的礦質(zhì)與微量元素等。其中具有抗癌和免疫活性的蕈菌多糖是由以分子量為10萬(wàn)—200萬(wàn)三鏈右旋螺旋狀結(jié)構(gòu)存在的β—(1→3)—D—葡聚糖、并具有—β—(1→6)—單葡糖基的支鏈組成。硒蛋白主要以硒——半胱氨酸、硒蛋氨酸的形式結(jié)合。硒蛋白在蕈菌體內(nèi)的具體合成途徑，大致用下式表達(dá) 鮮品原料的打漿浸提流程將有機(jī)硒鮮品原料按1份原料3分水的比例加入打漿機(jī)中，隨即加入0.6％的檸檬酸水溶液，混合均勻，用打漿機(jī)粉碎，再將此漿液在20—30℃的恒溫條件下浸提0.5—1hr。
浸提液的離心分離流程將打漿浸提后的混合液，用300目尼龍篩網(wǎng)，在2000—4000rpm的離心機(jī)內(nèi)離心分離。分別得到上清液和固形沉淀物。其中上清液的主要成份包括有機(jī)硒蛋白、多糖和氨基酸、結(jié)合蛋白、樹(shù)脂、纖維素、礦質(zhì)元素、有機(jī)酸等。固形沉淀物包括纖維素，糖纖維素、木質(zhì)素、游離蛋白結(jié)合態(tài)硒等。所得上清液轉(zhuǎn)入減壓濃縮流程，所得固形沉淀物在80℃的烤箱中烤干粉碎直接進(jìn)入配料流程。
上清液的減壓濃縮流程將上述離心分離所得到的上清液，在660mmHg汞柱的真空度，溫度為50—70℃的條件下，于減壓濃縮缸中，濃縮至所加入上清液重量的60％時(shí)，可停止?jié)饪s。
沉淀離心流程在所得到的濃縮液中，加入濃度為30—50ppm的而且事先溶解在醋酸溶液中的甲殼素，然后加熱至100℃，保溫沉淀1’，靜止0.5hr，用200—300目尼龍篩網(wǎng)，在2000—4000rpm的離心機(jī)內(nèi)，進(jìn)行離心分離。去掉部分水份后的濃縮液，主要成分包括有有機(jī)硒蛋白、多糖和氨基酸、結(jié)合蛋白、有機(jī)酸、礦質(zhì)元素、維生素等，而一些纖維素、半纖維素、樹(shù)脂素物質(zhì)、部分蛋白，被甲殼素聚合沉淀于固形物中。
配料流程將上述沉淀分離所得上清液，按總重量加入0.01—0.05％的黃原膠，山犁酸鉀等，于配料缸中攪拌混勻，制作成濃縮劑，主要成分包括有機(jī)硒蛋白、多糖、氨基酸、硒蛋氨酸、硒胱氨酸、有機(jī)酸、礦質(zhì)元素、維生素及非含硒蛋白、多糖等物質(zhì)。濃縮劑包括水劑和粉劑兩種。
將所提取的濃縮劑，可以與各種可食物配制成口服液，沖劑、膠囊、糖丸、飲料、食品等各種形式的富硒補(bǔ)硒制品。
滅菌及成品流程所得到的水劑灌裝入瓶，在高壓滅菌鍋內(nèi)，于121—125℃，1.0—1.2蒸氣壓下消毒滅菌10—15分鐘，取出后又在20—25℃條件下保溫培養(yǎng)72hr，檢查各項(xiàng)微生物指標(biāo)及其它各項(xiàng)指標(biāo)，合格則包裝為成品。所得粉劑根據(jù)需要進(jìn)行配料，產(chǎn)品真空充氮包裝保存。
本發(fā)明使用微生物食用菌菌株制備的有機(jī)硒(水、粉)提取劑，經(jīng)北京市衛(wèi)生局藥檢所進(jìn)行的小白鼠毒性試驗(yàn)。分別為1、有機(jī)硒濃縮液水劑急性毒性試驗(yàn)取健康的昆明種小白鼠17—19g的20只，雌雄和半，每次口服灌胃0.8ml，(原提取劑稀釋10倍)一日二次，總計(jì)1.6ml/日/只，相當(dāng)于人用劑量的133倍，觀察7天，結(jié)果表明7天內(nèi)小白鼠全部健康存活，體重增加且正常生長(zhǎng)，未見(jiàn)異常反應(yīng)。
2、有機(jī)硒粉劑的急性毒性試驗(yàn)采用昆明小白鼠18g的20只，雌雄各半，每次口服灌胃0.0625g/只，相當(dāng)于人用劑量的104倍，觀察7天，小白鼠全部存活，體重增加且正常生長(zhǎng)，未見(jiàn)異常反應(yīng)。
權(quán)利要求
1.一種使用微生物制備有機(jī)硒提取劑的方法，是利用生物化學(xué)方法，從培育的含硒原料中，提取有機(jī)硒制劑，其特征在于使用聚硒能力強(qiáng)的側(cè)耳科側(cè)耳屬食用菌菌株(pleurotus.sp)，在以植物殼體為主，經(jīng)科學(xué)配制的培養(yǎng)基中接種，通過(guò)生物固體發(fā)酵轉(zhuǎn)化，生成子實(shí)體，即高含量有機(jī)硒鮮品原料，再通過(guò)特定的工藝流程，接種→培育鮮品原料→粉碎打漿→浸提→離心分離→減壓濃縮→沉淀離心→配料→滅菌→成品，即可提取出天然有機(jī)硒水劑和粉劑。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于菌株接種用培養(yǎng)基配料為植物殼體 80—98％麩皮 5％石膏 1％復(fù)合添加劑I0.1—2％(維生素B、糖等)復(fù)合添加劑II 0.01—1％(硒、鈉、鉀、鎂、磷、硫)玉米粉 2％加水混合。
3.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于菌絲及子實(shí)體培養(yǎng)條件分別為菌絲培養(yǎng)溫度20—28℃子實(shí)體培養(yǎng)溫度10—25℃菌絲培養(yǎng)濕度60—75％子實(shí)體培養(yǎng)濕度75—95％菌絲培養(yǎng)時(shí)間15—20天子實(shí)體培養(yǎng)時(shí)間30—60天光照要求不需光。光照要求 散射光。
4.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于經(jīng)培育出有機(jī)硒鮮品原料，包括平菇、金針菇、靈芝、猴頭等，按1份鮮品原料3份水的比例混合，另加入含0.6％的檸檬酸水溶液，然后用打漿機(jī)粉碎得到打漿液，將該液在20—30℃的恒溫條件下浸提0.5—1hr。
5.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于將恒溫條件下浸提后的混合液，用300目篩網(wǎng)，在2000—4000rpm的離心機(jī)內(nèi)離心分離，分別得到上清液和固形沉淀物，上清液轉(zhuǎn)入下一流程，固形沉淀物在80℃烤箱烤干粉碎進(jìn)入配料流程，粉劑有機(jī)硒含量150—250ppm，蕈菌多糖含量14—18g/100g干品。
6.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于上清液是在660mmHg汞柱的真空度，50—70℃的條件下，于減壓濃縮缸中濃縮60％。
7.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于在濃縮液中加入濃度為30—50ppm，并事先溶解在醋酸溶液中的甲殼素，然后加熱至100℃，保溫沉淀1分鐘，靜止0.5hr.再用200—300目的尼龍篩網(wǎng)，于2000—4000rpm的離心機(jī)內(nèi)進(jìn)行離心沉淀。
8.按照權(quán)利要求1所述的方法.其特征在于經(jīng)離心沉淀后的上清液，按其總重量加入0.01—0.05％的黃原膠，山犁酸鉀等攪拌均勻，水劑有機(jī)硒含量50—100ppm，蕈菌多糖含量4—8g/100ml，即可與各種食物配制口服液，膠囊、沖劑、糖丸、飲料、食品等各種形式的富硒補(bǔ)硒營(yíng)養(yǎng)保健制品。
全文摘要
一種使用微生物食用菌菌株，接種后經(jīng)過(guò)生物固體發(fā)酵轉(zhuǎn)化，培育出高含量有機(jī)硒鮮品原料，經(jīng)過(guò)粉碎打漿、浸提、離心分離、減壓濃縮、沉淀離心、配料滅菌等工藝流程，制備出有機(jī)硒提取劑的水劑和粉劑。根據(jù)需要可以與各種食物、藥物配合，制成口服液、膠囊、沖劑、糖丸、飲料、食品等各種形式的富硒補(bǔ)硒營(yíng)養(yǎng)保健制品。本發(fā)明具有工藝簡(jiǎn)單、制作方便、總硒中有機(jī)硒比例在99％以上，高蛋白和氨基酸、低脂肪、低能量、富含蕈菌多糖、多種維生素(A、B、C、D、E)及礦質(zhì)和微量元素。屬純天然制品，補(bǔ)硒效果及醫(yī)療保健作用比較明顯，適合于規(guī)模生產(chǎn)等特點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12N1/14GK1121531SQ94115520
公開(kāi)日1996年5月1日 申請(qǐng)日期1994年9月10日 優(yōu)先權(quán)日1994年9月10日
發(fā)明者蘇琪, 駱尚驊, 周宗俊, 劉強(qiáng), 段文瑛 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院, 珠海市中植生物高科技公司