一種用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于密環(huán)菌母種保藏技術領域，具體涉及一種用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基及其制備方法。該培養(yǎng)基由以下重量份數(shù)的原料制成：木屑55?65份；麩皮36?44份；玉米粉38?42份；磷酸二氫鉀1.5?2.5份；硫酸鎂0.5?1.5份；蛋白胨1.5?2.5份；維生素B1 0.01?0.02份；水800?1000份。其制備方法包括S1.配液、S2.分裝和S3.滅菌三個步驟，制備方法中使用硅膠塞代替?zhèn)鹘y(tǒng)的棉塞，同時制備方法中對分裝高度、滅菌溫度、滅菌時間等均有明確要求。與現(xiàn)有技術相比，使用本發(fā)明提供的培養(yǎng)基進行蜜環(huán)菌母種的保藏可延長有效保藏時間至兩年，同時蜜環(huán)菌母種的種性不易退化。
【專利說明】
一種用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基及其制備方法
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于密環(huán)菌母種保藏技術領域，具體涉及一種用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng) 基及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 蜜環(huán)菌是人工種植天麻的伴生菌，人工培養(yǎng)與保藏蜜環(huán)菌菌種是種植天麻中重要 內(nèi)容，關系到種植天麻的產(chǎn)量與質量，隨著天麻市場日益擴大，人工保藏蜜環(huán)菌的菌種愈顯 重要。保藏蜜環(huán)菌的菌種大多數(shù)人采用傳統(tǒng)的斜面低溫保藏法，優(yōu)點是操作簡單，使用方 便，不需特殊設備，能隨時檢查所保藏的菌株是否死亡、變異與污染雜菌等，缺點是容易變 異，因培養(yǎng)基的物理、化學特性不是嚴格恒定的，屢次傳代會使微生物的特性改變，而影響 微生物的性狀，污染雜菌的機會亦較多。菌種的保藏時間與培養(yǎng)基配方及制作方法有關， PDA配方制作的斜面菌種采用低溫保藏法的保藏時間是3-4個月，低溫保藏蜜環(huán)菌在加了瓊 脂的培養(yǎng)基上，菌種易褐化及角質化，這是退化的標志，故此法保藏蜜環(huán)菌已被多數(shù)人所淘 汰。改良后的玉米粉l〇〇g、黃豆粉l〇g、麥麩80g、白糖20g、水1000ml作配方制作的菌種保藏 時間半年至一年，對防止菌種退化也有一定的作用。上述二法是蜜環(huán)菌菌種傳統(tǒng)的保藏方 法，保藏時間短、且可能出現(xiàn)退化，故在天麻種植中要頻繁的、定期的從事菌種保藏，費事費 力；如遇菌種退化，還會造成種植天麻的產(chǎn)量與質量下降。改良后的玉米粉l〇〇g、黃豆粉 l〇g、麥麩80g、白糖20g、水1000ml作配方制作的菌種能延長保藏時間能讓我們看到了希望， 受到了啟發(fā)，配方與制作方法的改進，就可能進一步提高菌種的保藏時間，這就是本次研究 的出發(fā)點。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種用于保藏蜜環(huán)菌種的培養(yǎng)基及其制備方 法，其可有效提高菌種的保藏時間且能保證菌種的種性不易退化。
[0004] 本發(fā)明解決上述技術問題的技術方案如下：一種用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基， 由以下重量份數(shù)的原料制成:木肩55-65份;麩皮36-44份;玉米粉38-42份;磷酸二氫鉀1.5-2.5份;硫酸鎂0.5-1.5份;蛋白胨1.5-2.5份;維生素出0.01-0.02份;水800-1000份。
[0005] 在上述技術方案的基礎上，為了使所述培養(yǎng)基在保藏蜜環(huán)菌母種時有更好的表 現(xiàn)，本發(fā)明還可以做如下進一步優(yōu)化。
[0006] 進一步，所述培養(yǎng)基由以重量份數(shù)的原料制成:木肩60份;麩皮40份;玉米粉40份； 磷酸二氫鉀2份;硫酸鎂1份;蛋白胨2份;維生素關.01份;水1000份。
[0007] 進一步，所述木肩由栗木粉碎而成，所述木肩的粒徑為3_5mm。
[0008] 進一步，所述麩皮為大片麩皮，所述麩皮的粒徑為1-1.7mm。
[0009] 進一步，所述磷酸二氫鉀及硫酸鎂為分析純，所述蛋白胨為生物試劑。
[0010] 本發(fā)明還提供上述用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基的制備方法，包括如下步驟：
[0011] S1.配液:按照各原料的重量份數(shù)將所述木肩、麩皮和玉米粉加入水中并煮沸，再 按各原料的重量份數(shù)加入磷酸二氫鉀、硫酸鎂、蛋白胨及維生素 Bi，攪拌溶解得培養(yǎng)液；
[0012] S2 ·分裝：將S1制備的培養(yǎng)液通過漏斗分裝至規(guī)格為18mm X 180mm或20mm X 200mm 試管中，向試管內(nèi)倒入培養(yǎng)液的時用玻璃棒將其按至試管底部，試管豎直放置，分裝入試管 內(nèi)的培養(yǎng)液的高度為試管高度的50-65%，分裝完成后擦凈試管內(nèi)壁及管口，并用塞子密 封；
[0013] S3.滅菌:將S2中分裝完成并密封的試管置于121-128Γ的溫度下滅菌35-45min， 自然冷卻至室溫，即得用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基。
[0014]在上述技術方案的基礎上，本發(fā)明還可以有如下進一步優(yōu)化。
[0015] 優(yōu)選的，S2中使用的塞子為硅膠塞，S3中的滅菌溫度為126°C，S3中的滅菌時間為 40min。使用硅膠塞的好處為，一是減少制作棉塞過程，二是硅膠塞在保藏中的保水性能好、 不易受潮發(fā)霉，三是用硅膠塞替換棉塞可減少石蠟封棉塞程序。
[0016]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是：
[0017] (1)采用本發(fā)明提供的培養(yǎng)基配方及方法制作的培養(yǎng)基更適宜蜜環(huán)菌生長和保 藏，該培養(yǎng)基為柱狀，使用本發(fā)明提供的培養(yǎng)基進行蜜環(huán)菌保藏，保藏時間可達730天，也即 可達到兩年的有效保藏期，而現(xiàn)有技術中的蜜環(huán)菌的保藏期只有三到四個月或半年到一 年，即本發(fā)明大大地延長了蜜環(huán)菌母種的保藏時間。
[0018] (2)采用本發(fā)明的培養(yǎng)基配方及方法制作的培養(yǎng)基進行蜜環(huán)菌保藏，蜜環(huán)菌母種 的種性不易退化:在兩年的保藏期內(nèi)，菌種試管底部仍呈白色、索狀、分枝多、無褐變、無角 質化，表明此法保藏的菌種基本沒有退化，品種性能在保藏中沒有受到較大地影響。
【具體實施方式】
[0019] 以下結合具體實施例及對比例對本發(fā)明的進行進一步的詳細描述，所舉實例只用 于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0020] 本發(fā)明采用的方法未作特殊說明均為常規(guī)方法，本發(fā)明使用的試劑均為市售產(chǎn) 品。
[0021] 實施例1
[0022] -種用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基，其制備方法包括如下步驟：
[0023] S1配液:將60g木肩、40g麩皮和40g玉米粉加入1000mL水中，加熱煮沸，再加入2g磷 酸二氫鉀、lg硫酸鎂、2g蛋白胨及10mg維生素也，攪拌溶解得培養(yǎng)液，所述木肩由栗木粉碎 而成，所述木肩的粒徑為3_5mm，所述麩皮為大片麩皮，所述麩皮的粒徑為1-1.7mm;
[0024] S2.分裝:將S1制備的培養(yǎng)液通過漏斗分裝至規(guī)格為18mm X 180mm (18是試管口徑， 180為試管長度)試管中，向試管內(nèi)倒入培養(yǎng)液的同時用玻璃棒將其按至試管底部，試管豎 直放置，分裝高度為117mm(為試管高度的65%)，分裝完成后擦凈試管內(nèi)壁及管口，并用硅 膠塞密封；
[0025] S3.滅菌:將S2中分裝完成并密封的試管置于126°C的溫度下滅菌40min，自然冷卻 至室溫，即得用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基。
[0026] 實施例2
[0027] -種用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基，其制備方法包括如下步驟：
[0028] S1.混合:將55g木肩、36g麩皮和38g玉米粉加入800mL水中，加熱煮沸，再加入1.5g 磷酸二氫鉀、〇.5g硫酸鎂、1.5g蛋白胨及l(fā)Omg維生素 m，攪拌溶解得培養(yǎng)液，所述木肩由栗 木粉碎而成，所述木肩的粒徑為3_5mm，所述麩皮為大片麩皮，所述麩皮的粒徑為1-1.7mm;
[0029] S2.分裝:將S1制備的培養(yǎng)液通過漏斗分裝至規(guī)格為18mmX 180mm試管中，向試管 內(nèi)倒入培養(yǎng)液的同時用玻璃棒將其按至試管底部，試管豎直放置，分裝高度為90_(為試管 高度的50 % )，分裝完成后擦凈試管內(nèi)壁及管口，并用硅膠塞密封；
[0030] S3.滅菌:將S2中分裝完成并密封的試管置于121°C的溫度下滅菌45min，自然冷卻 至室溫，即得用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基。
[0031] 實施例3
[0032] -種用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基，其制備方法包括如下步驟：
[0033] S1.混合：將65g木肩、44g麩皮和42g玉米粉加入lOOOmL水中，加熱煮沸，再加入 2.5g磷酸二氫鉀、1.5g硫酸鎂、2.5g蛋白胨及20mg維生素 m，攪拌溶解得培養(yǎng)液，所述木肩 由栗木粉碎而成，所述木肩的粒徑為3_5mm，所述麩皮為大片麩皮，所述麩皮的粒徑為1-1.7mm；
[0034] S2.分裝:將S1制備的培養(yǎng)液通過漏斗分裝至規(guī)格為18mmX 180mm試管中，向試管 內(nèi)倒入培養(yǎng)液的同時用玻璃棒將其按至試管底部，試管豎直放置，分裝高度為99_(為試管 高度的55 % )，分裝完成后擦凈試管內(nèi)壁及管口，并用硅膠塞密封；
[0035] S3.滅菌:將S2中分裝完成并密封的試管置于128°C的溫度下滅菌35min，自然冷卻 至室溫，即得用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基。
[0036] 實施例4
[0037] -種用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基，其制備方法包括如下步驟：
[0038] S1.混合:將60g木肩、40g麩皮和40g玉米粉加入900mL水中，加熱煮沸，再加入2g磷 酸二氫鉀、lg硫酸鎂、2g蛋白胨及10mg維生素也，攪拌溶解得培養(yǎng)液，所述木肩由栗木粉碎 而成，所述木肩的粒徑為3_5mm，所述麩皮為大片麩皮，所述麩皮的粒徑為1-1.7mm;
[0039] S2.分裝:將S1制備的培養(yǎng)液通過漏斗分裝至規(guī)格為20mmX 200mm試管中，向試管 內(nèi)倒入培養(yǎng)液的同時用玻璃棒將其按至試管底部，試管豎直放置，分裝高度為l〇8mm(為試 管高度的54%)，分裝完成后擦凈試管內(nèi)壁及管口，并用硅膠塞密封；
[0040] S3.滅菌:將S2中分裝完成并密封的試管置于126°C的溫度下滅菌40min，自然冷卻 至室溫，即得用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基。
[0041] 對比例1
[0042]與實施例1相比，不同點僅為木肩、麩皮和玉米粉的用量，在對比例1中其用量為木 肩80g、麩皮20g、玉米粉50g。
[0043] 對比例2
[0044] 與實施例1相比，不同點僅為木肩、麩皮和玉米粉的用量，在對比例1中其用量為木 肩35g、麩皮44g、玉米粉45g。
[0045] 對比例3
[0046] 與實施例1相比，不同點僅為木肩和麩皮的粒徑不同，在對比例3中，木肩的粒徑為 0.9-2.8mm，麩皮粒徑為 0.5-0.8mm。
[0047] 對比例4
[0048] 與實施例1相比，不同點僅為木肩和麩皮的粒徑不同，在對比例4中，木肩的粒徑為 5.5-6mm，麩皮粒徑為 2-2.36mm。
[0049] 對比例5
[0050] 與實施例1相比，不同點僅為滅菌溫度和滅菌時間不同，在對比例5中滅菌溫度為 135°C，滅菌時間為35min。
[0051 ] 對比例6
[0052] 與實施例1相比，不同點僅為滅菌溫度和滅菌時間不同，在對比例6中滅菌溫度為 110°C，滅菌時間為50min。
[0053] 對比例7
[0054]與實施例1相比，不同點為在對比例7中加入木肩、麩皮及玉米粉的同時，還加入 20g白砂糖。
[0055] 對比例8
[0056]與實施例1相比，不同點為在對比例8中加入木肩、麩皮及玉米粉的同時，還加入 20g葡萄糖。
[0057] 對比例9
[0058]與實施例1相比，不同點為在對比例9中加入木肩、麩皮及玉米粉的同時，還加入 20g馬鈴薯粉。
[0059] 對比例10
[0060] 與實施例1相比，不同點為在對比例10中加入的木肩由楊樹經(jīng)粉碎機粉碎而成。
[0061 ] 對比例11
[0062]與實施例1相比，不同點為在對比例11中加入木肩、麩皮及玉米粉的同時，還加入 20g瓊脂。
[0063]由實施例1至4及對比例1至10制備出的用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基在同等條件 下按照標準操作接種蜜環(huán)菌母種，待其充分生長后，移至3_5°C環(huán)境下保藏并每隔一定的時 間觀察菌種保藏情況，菌種的保藏時間和菌種的性狀如下表所示：
[0064]
[0065] 由上表中實施例1至4的相應保藏結果可知，以本發(fā)明提供配方及方法制作的培養(yǎng) 基適用于保藏蜜環(huán)菌母種，有效保藏時間可達到兩年;從表中對比例1至11的相應保藏結果 可知，當木肩、麩皮及玉米粉的用量不在本發(fā)明要求的用量范圍內(nèi)時，由于營養(yǎng)成份比例的 變化，最終使得有效保藏時間明顯縮短，不足一年；當木肩、麩皮及玉米粉的粒徑不在本發(fā) 明要求的范圍內(nèi)時，無論粒徑過小或過大，最終的有效保藏時間均為受到影響，縮短至一年 半;滅菌溫度過高或滅菌時間過長，會使培養(yǎng)基內(nèi)的玉米粉老化，特別是滅菌溫度過低，造 成滅菌不徹底，培養(yǎng)中先期污染，導致培養(yǎng)失敗;培養(yǎng)基內(nèi)若直接加白砂糖、葡萄糖或瓊脂 等，也會明顯縮短有效保藏時間；栗木換為楊木，有效保藏時間也會縮短，其可能原因為楊 木生長快，其木質營養(yǎng)成份少。
[0066] 以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和 原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權項】
1. 一種用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基，其特征在于，由以下重量份數(shù)的原料制成:木肩 55-65份;麩皮36-44份;玉米粉38-42份;磷酸二氫鉀1.5-2.5份;硫酸鎂0.5-1.5份;蛋白胨 1 · 5-2 · 5份;維生素 Βι 0 · 01-0 · 02份;水800-1000份。2. 根據(jù)權利要求1所述的一種用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基，其特征在于，由以重量份 數(shù)的原料制成:木肩60份;麩皮40份;玉米粉40份;磷酸二氫鉀2份;硫酸鎂1份;蛋白胨2份； 維生素0.01份;水1000份。3. 根據(jù)權利要求1或2所述的一種用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基，其特征在于，所述木 肩由栗木粉碎而成，所述木肩的粒徑為3-5_。4. 根據(jù)權利要求1或2所述的一種用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基，其特征在于，所述麩 皮為大片麩皮，所述麩皮的粒徑為1-1.7mm。5. 根據(jù)權利要求1或2所述的一種用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基，其特征在于，所述磷 酸二氫鉀及硫酸鎂為分析純試劑，所述蛋白胨為生物試劑。6. -種如權利要求1至5任一項所述的用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基的制備方法，其特 征在于，包括如下步驟：51. 配液:按照各原料的重量份數(shù)將所述木肩、麩皮和玉米粉加入水中并煮沸，再按重 各原料的重份數(shù)加入磷酸二氫鉀、硫酸鎂、蛋白胨及維生素也，攪拌溶解得培養(yǎng)液；52. 分裝:將S1制備的培養(yǎng)液通過漏斗分裝至規(guī)格為18mmX 180mm或20mmX 200mm試管 中，向試管內(nèi)倒入培養(yǎng)液的同時用玻璃棒將其按至試管底部，試管豎直放置，分裝入試管內(nèi) 的培養(yǎng)液高度為試管高度的50-65%，分裝完成后擦凈試管內(nèi)壁及管口，并用塞子密封；53. 滅菌:將S2中分裝完成并密封的試管置于121-128Γ的溫度下滅菌35-45min，自然 冷卻至室溫，即得用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基。7. 根據(jù)權利要求6所述的一種用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于， S2中使用的塞子為硅膠塞。8. 根據(jù)權利要求6或7所述的一種用于保藏蜜環(huán)菌母種的培養(yǎng)基的制備方法，其特征在 于，S3中的滅菌溫度為126°C，S3中的滅菌時間為40min。
【文檔編號】C12N1/14GK106085870SQ201610440586
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月17日
【發(fā)明人】楊輝德, 姜莉莉, 周桃英
【申請人】黃岡職業(yè)技術學院