專利名稱：胸腺細(xì)胞無性細(xì)胞系的建立及培養(yǎng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種細(xì)胞融合方法，利用骨髓瘤與胸腺細(xì)胞的融合，屬于無性細(xì)胞的建立與培養(yǎng)方法。
近年來醫(yī)學(xué)研究證明，胸腺所分泌的胸腺肽實(shí)際是多種活性肽的混合體，包含了40多種成份，胸腺肽象其它細(xì)胞活性因子(如前列腺素、尿激酶原，膽紅素等)一樣大都由動(dòng)物組織(或血液、尿液等)直接提取，在一定程度上受到組織來源，純化工藝或產(chǎn)量上的多種限制。
本發(fā)明的目的在于提供一種胸腺細(xì)胞無性細(xì)胞的培養(yǎng)方法，將骨髓瘤細(xì)胞系與動(dòng)物胸腺細(xì)胞融合，培養(yǎng)出可分泌無種屬特性的胸腺肽的無性細(xì)胞系。
本發(fā)明的特征是利用骨髓瘤為無性細(xì)胞系，加入動(dòng)物胸腺細(xì)胞，通過融合劑使其進(jìn)行細(xì)胞融合處理，將于處理后的細(xì)胞置于HAT選擇培養(yǎng)液中，出現(xiàn)克隆細(xì)胞生長(zhǎng)后按有限稀釋法進(jìn)行單克隆化，獲得胸腺肽細(xì)胞無性細(xì)胞系。
下面結(jié)合操作過程詳細(xì)敘述本發(fā)明本發(fā)明的材料為小鼠骨髓瘤細(xì)胞系(NS-1)，常規(guī)生長(zhǎng)培養(yǎng)液及選擇培養(yǎng)液(RPMI-1640及HAT)，融合劑為50%PEC(MW4000)，細(xì)胞凍存液為10%DMSO。各種胸腺細(xì)胞無性細(xì)胞系的基本特征是可分泌胸腺肽等細(xì)胞活性因子。
在細(xì)胞融合過程中，首先將純系幼鼠胸腺在室溫下輕輕磨碎，制成單細(xì)胞懸液，然后將108動(dòng)物胸腺細(xì)胞與4×107個(gè)NS-1細(xì)胞懸液充分混合，滴加0.5ml50%PEG(二甲基亞砜)進(jìn)行細(xì)胞融合處理，然后將處理后的細(xì)胞懸浮在HAT選擇培養(yǎng)液中，繼而移入含飼養(yǎng)細(xì)胞的40孔微量培養(yǎng)板中，每孔0.1ml，最后放入含5%CO2濕度飽和的37℃溫箱中培養(yǎng)，隔日換液，融合后7-10天出現(xiàn)克隆細(xì)胞生長(zhǎng)，將融合細(xì)胞克隆按有限稀釋法進(jìn)行單克隆化，待單克隆細(xì)胞布滿3/5孔，過夜培養(yǎng)測(cè)定上清活性。最后構(gòu)建成胸腺細(xì)胞的無性細(xì)胞系。細(xì)胞系的凍存是以1/10DMSO凍存液懸浮10胸腺無性細(xì)胞/ML，每瓶加入1ml，熔封口，置-20℃水箱過夜，次日移入液氮保存。
本發(fā)明的特點(diǎn)為利用細(xì)胞融合技術(shù)，將骨髓瘤與胸腺融合，免去了常規(guī)從動(dòng)物組織直接提取法在組織來源，純化工藝或產(chǎn)量和活性上的多種限制，為這類細(xì)胞活性因子的開發(fā)開辟了一種新途徑。
權(quán)利要求
1.一種胸腺細(xì)胞無性細(xì)胞系的建立及培養(yǎng)方法，其特征在于將骨髓瘤細(xì)胞系與動(dòng)物胸腺細(xì)胞混合，在融合劑作用下進(jìn)行細(xì)胞融合，以HAT選擇培養(yǎng)，按有限稀釋法單克隆化，構(gòu)建成一種胸腺細(xì)胞無性細(xì)胞系。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所術(shù)的培養(yǎng)方法，其特征在于各種胸腺細(xì)胞無性細(xì)胞系的基本特征是可分泌胸腺肽等細(xì)胞活性因子。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于建立該細(xì)胞系的骨髓瘤細(xì)胞為小鼠骨髓瘤細(xì)胞，動(dòng)物胸腺為純系幼鼠胸腺細(xì)胞，融合劑為PEC(二甲基亞砜)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種胸腺細(xì)胞無性細(xì)胞系的構(gòu)建及培養(yǎng)方法，是利用細(xì)胞融合技術(shù)，在融合劑PEG的作用下，將骨髓瘤細(xì)胞與動(dòng)物胸腺細(xì)胞融合，處理后的細(xì)胞置于HAT選擇培養(yǎng)液中，出現(xiàn)克隆細(xì)胞生長(zhǎng)后按有限稀釋法進(jìn)行單克隆化，獲得胸腺細(xì)胞系。該培養(yǎng)方法利用細(xì)胞工程技術(shù)成功地建立了分泌胸腺肽等細(xì)胞因子的無性細(xì)胞系，為這類細(xì)胞活性因子的開發(fā)開辟了一種新途徑。
文檔編號(hào)C12P21/08GK1074483SQ9211151
公開日1993年7月21日 申請(qǐng)日期1992年10月15日 優(yōu)先權(quán)日1992年10月15日
發(fā)明者馮書章 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍獸醫(yī)大學(xué)軍事獸醫(yī)研究所