專利名稱：抗人球蛋白交叉配血卡的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種交叉配血卡及其應(yīng)用。更具體的說(shuō)，本發(fā)明涉及一種抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)的組成、制備方法及其應(yīng)用，涉及輸血醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。
(二)
背景技術(shù)：
通過(guò)交叉配血試驗(yàn)可發(fā)現(xiàn)ABO血型鑒定錯(cuò)誤、亞型、血型不合、不規(guī)則抗體等，正確進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)是安全輸血的基礎(chǔ)和保障。交叉配血試驗(yàn)是指受血者(患者)在輸血前必須與供血者(待輸用血)進(jìn)行交叉配血，即必須保證受血者血清中不存在與獻(xiàn)供血者紅細(xì)胞上抗原起反應(yīng)并導(dǎo)致供血者紅細(xì)胞破壞的抗體。還要確保供血者血清中不存在與患者紅細(xì)胞上抗原起反應(yīng)并導(dǎo)致受血者紅細(xì)胞破壞的抗體。目的是確?；颊咻斢昧斯┭叩难汉竽茉诨颊唧w內(nèi)有效的存活，避免因輸注不配合的血液成份所導(dǎo)致的不良溶血性輸血反應(yīng)，來(lái)保障安全、有效輸血治療的目的。 國(guó)家衛(wèi)生部于2000年發(fā)文要求，凡輸注全血、濃縮紅細(xì)胞、紅細(xì)胞懸液、洗滌紅細(xì)
胞、冰凍紅細(xì)胞、濃縮白細(xì)胞、手工分離濃縮血小板等的患者，應(yīng)進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)。 在國(guó)內(nèi)外，已經(jīng)有部分廠家生產(chǎn)交叉配血卡，但其采用的凝膠為葡聚糖凝膠，此凝
膠的顆粒大小為70納米以上，顆粒較大，凝膠之間的縫隙較大，從而使得進(jìn)行交叉配血試
驗(yàn)的靈敏度降低。
(三)

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述不足，提供一種靈敏度高、特異性好且質(zhì)量穩(wěn)定的抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)的制備方法。 本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種抗人球蛋白交叉配血卡的制備方法，所述配血卡具有6個(gè)微柱凝膠管，所述6個(gè)微柱凝膠管皆為含有抗人球蛋白試劑(抗IgG)的凝膠管，所述方法包括以下工藝過(guò)程步驟一、凝膠懸浮介質(zhì)的配制所述凝膠懸浮介質(zhì)配方如下
對(duì)羥基苯甲酸甲酯(5. 5-6. 5) X 10—Vml對(duì)羥基苯甲酸丙酯(1. 0-1. 5) X 10—Vml甘氨酸(1. 6-1. 9) X 10—Vml氯化鈉(1. 7-1. 8) X 10—Vml磷酸二氫鉀(2. 1-2. 4) X 10—Vml磷酸氫二鈉(4. 6—4. 8) X 10—4g/ml牛血清白蛋白《2%，以上試劑用蒸餾水溶解，調(diào)PH值為6. 6-6. 8。
步驟二、凝膠的制備選用聚丙烯酰胺葡聚糖凝膠，顆粒大小為30-60納米。用步驟一配制的凝膠懸浮介質(zhì)浸泡后再用該凝膠懸浮介質(zhì)洗滌3-5次，除去凝膠破損碎片以及聚集的凝膠顆粒，收
集得到顆粒大小均勻的、且完整呈球形的適用的凝膠。 步驟三、抗體的選擇 選擇抗人球蛋白試劑(抗IgG)， 抗IgG靈敏度要求按照體積比1 : 2和體積比1 : 4稀釋的IgG抗人球蛋白血清必須對(duì)照體積比l : 16稀釋的IgG致敏的紅細(xì)胞有肉眼可見(jiàn)凝集。
步驟四、凝膠的配制 將步驟二制備的凝膠與步驟三選擇的抗體按照體積比2 : 1 6 : l的比例混合，配制成含有含有抗人球蛋白試劑(抗IgG)的凝膠。
步驟五、分裝 按照每管22 28微升的量，將步驟四配制的凝膠分別加入到一空白卡片的六個(gè)微柱管中，形成具有6個(gè)微柱凝膠管的抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)。
本發(fā)明的有益效果是 本發(fā)明的第一個(gè)方面，提出了一種標(biāo)準(zhǔn)化的凝膠懸浮介質(zhì)體系，用于凝膠的洗滌和懸浮，并可以長(zhǎng)時(shí)間維持抗體以及凝膠的穩(wěn)定，其特點(diǎn)在于 1、設(shè)計(jì)了具有很強(qiáng)緩沖能力的緩沖體系，采用磷酸鉀鹽、鈉鹽以及氨基酸組成的緩沖體系，使體系的PH值維持在6. 6-6. 8。與輸血領(lǐng)域通常采用的單一的枸櫞酸緩沖體系相比，具有緩沖能力更強(qiáng)的特點(diǎn)，有利于保持整個(gè)體系處于要求的緩沖范圍，同時(shí)保證了整個(gè)凝膠懸浮介質(zhì)的離子強(qiáng)度。 2、具有更加有效的低鹽濃度體系，從其組成可以看出，本發(fā)明的凝膠懸浮介質(zhì)采
用氨基酸和氯化鈉作為添加劑，輔助以微量的磷酸鹽來(lái)維持低離子強(qiáng)度環(huán)境，保持凝膠顆
粒呈圓球顆粒并充分溶脹，并維持凝膠顆粒的直徑大小在所要求的范圍內(nèi)。 3、本發(fā)明具有獨(dú)特的潤(rùn)滑體系，采用一定濃度的牛蛋白、對(duì)羥基苯甲酸甲酯及對(duì)
羥基苯甲酸丙酯，使得紅細(xì)胞通過(guò)凝膠間隙時(shí)獲得合適的潤(rùn)滑能力，使無(wú)凝集的紅細(xì)胞具
有完全通過(guò)凝膠顆粒間隙的能力，而凝集的紅細(xì)胞則不能通過(guò)。 4、本發(fā)明具有優(yōu)越的防腐體系，選擇有機(jī)物苯甲酸酯類作為防腐劑，采用對(duì)羥基苯甲酸甲酯及對(duì)羥基苯甲酸丙酯協(xié)同作用(各種對(duì)羥基苯甲酸單酯中的側(cè)面碳鏈長(zhǎng)短的不同，因而其在穿透細(xì)胞膜的能力不同，并且其抑菌的作用位點(diǎn)也就不同，所以各種單酯針對(duì)不同種類微生物的抑制能力就不同。幾種酯的復(fù)合，具有更好的防腐能力。國(guó)內(nèi)外大量的實(shí)際應(yīng)用也證實(shí)了復(fù)合的對(duì)羥基苯甲酸酯比單一的對(duì)羥基苯甲酸酯的抑菌效果好)，有效防止細(xì)菌的繁衍，獲得較長(zhǎng)時(shí)間的保存期，同時(shí)不僅避免使用疊氮鈉化學(xué)防腐劑對(duì)凝膠懸浮介質(zhì)體系的離子強(qiáng)度提升從而對(duì)抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)的靈敏度和特異性產(chǎn)生的不良影響，也避免使用抗生素類在保存過(guò)程中所代謝產(chǎn)生的中間體對(duì)抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)的特異性產(chǎn)生的不良影響。 本發(fā)明的另一方面，為了保證本發(fā)明抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)的質(zhì)量，在制備過(guò)程中還需要對(duì)凝膠進(jìn)行篩選，即，首先要選擇適當(dāng)?shù)哪z，一般應(yīng)該滿足的條件是選擇顆粒直徑為30-60納米，經(jīng)過(guò)丙烯酰化后的葡聚糖凝膠。對(duì)篩選獲得的凝膠原料需要進(jìn)行溶脹、洗滌、懸浮，目的是讓凝膠顆粒充分溶脹，洗滌去除破損的凝膠顆粒、聚集的凝膠顆粒、內(nèi)徑在30-60納米以外的超大或超小凝膠顆粒以及凝膠以外的其它雜質(zhì)成分。洗滌完成后用凝膠懸浮介質(zhì)來(lái)懸浮凝膠。 本發(fā)明的再一方面，為了保證本發(fā)明抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)的質(zhì)量，在 制備過(guò)程中還需要對(duì)與凝膠混合的抗體原料進(jìn)行篩選，其中抗人球蛋白試劑(抗IgG)為
最適稀釋度，即抗人球蛋白試劑(抗igG)經(jīng)i : 2和i : 4稀釋后對(duì)i : ie稀釋的igG
性質(zhì)抗D致敏的紅細(xì)胞有肉眼可見(jiàn)凝集。 綜上所述，本發(fā)明的抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)之所以可以具有優(yōu)良的特異 性、靈敏度以及長(zhǎng)達(dá)1年的保存期，是在于整個(gè)體系各種成分的協(xié)同作用，緩沖體系可以維 持分型卡反應(yīng)體系需要的PH ;低鹽濃度體系可以保證凝膠顆粒得到充分溶脹且凝膠顆粒 直徑在所需要的范圍內(nèi)。潤(rùn)滑體系可以保證凝膠顆粒之間適當(dāng)?shù)臐?rùn)滑能力。酯類防腐劑可 以防止凝膠或抗體因?yàn)榧?xì)菌繁殖而失效。丙烯?；哪z可以保證凝膠顆粒之間的合適的 間隙。標(biāo)準(zhǔn)化的抗體可以保障抗原的有效檢出。 用此抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)檢測(cè)抗D、抗Jkb、抗Fya效價(jià)，測(cè)得效價(jià)均不 低于試管間接抗人球蛋白法。 一般在18-25t:條件下保存有效期不低于12個(gè)月。
總之，本發(fā)明的實(shí)施提供了標(biāo)準(zhǔn)化的抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)產(chǎn)品，各 醫(yī)院和采供血機(jī)構(gòu)可以直接從生產(chǎn)供應(yīng)商處得到標(biāo)準(zhǔn)一致的抗人球蛋白交叉配血卡(抗 IgG)，為準(zhǔn)確進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)、保證安全輸血?jiǎng)?chuàng)造了條件。
具體實(shí)施例方式
以下通過(guò)具體實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施和所具有的有益效果，旨在幫助閱讀 者更好的理解本發(fā)明的精神和實(shí)質(zhì)，并不能對(duì)本發(fā)明的實(shí)施范圍構(gòu)成任何限定。實(shí)施例1 :步驟一、凝膠懸浮介質(zhì)的配制所述凝膠懸浮介質(zhì)配方如下
對(duì)羥基苯甲酸甲酯(5. 5-6. 5) X 10—Vml對(duì)羥基苯甲酸丙酯(1. 0-1. 5) X 10—Vml甘氨酸(1. 6-1. 9) X 10—Vml氯化鈉(1. 7-1. 8) X 10—Vml磷酸二氫鉀(2. 1-2. 4) X 10—Vml磷酸氫二鈉(4. 6—4. 8) X 10—4g/ml牛血清白蛋白《2%，以上試劑用蒸餾水溶解，調(diào)PH值為6. 6-6. 8。
步驟二、凝膠的制備選用聚丙烯酰胺葡聚糖凝膠，顆粒大小為30-60納米。用步驟一配制的凝膠懸浮介質(zhì)浸泡后再用該凝膠懸浮介質(zhì)洗滌3-5次，除去凝膠破損碎片以及聚集的凝膠顆粒，收
集得到顆粒大小均勻的、且完整呈球形的適用的凝膠。 步驟三、抗體的選擇 抗人球蛋白試劑(抗IgG)為最適稀釋度，即
選擇抗人球蛋白試劑(抗IgG)， 抗IgG靈敏度要求按照體積比1 : 2和體積比1 : 4稀釋的IgG抗人球蛋白血
5清必須對(duì)照體積比i : 16稀釋的igG致敏的紅細(xì)胞有肉眼可見(jiàn)凝集。 步驟四、凝膠的配制 將步驟二制備的凝膠與步驟三選擇的抗體按照體積比2 : 1 6 : l的比例混合， 配制成含有抗人球蛋白試劑(抗IgG)的凝膠。
步驟五、分裝 按照每管22 28微升的量，將步驟四配制的凝膠加入到一空白卡片的六個(gè)微柱 管中，形成具有6個(gè)微柱凝膠管的抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)。
步驟六、半成品測(cè)定 要求微柱凝膠管中加入抗體后，與具有抗體相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)，即 紅細(xì)胞集中在凝膠上層表面或凝膠中。而與不含有抗體對(duì)應(yīng)抗原的紅細(xì)胞產(chǎn)生陰性反應(yīng)， 即紅細(xì)胞可以全部通過(guò)凝膠到達(dá)微管底部，沉積在微管底部。
步驟七、封口 用鋁箔紙通過(guò)壓膜方式將微柱管上口密封。貼標(biāo)簽標(biāo)記后于18-25t:保存。
步驟八、保存試驗(yàn) 上述抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)保存了 1年以上，在此保存期間，該抗人球 蛋白交叉配血卡(抗IgG)具有以下檢測(cè)結(jié)果
(1)外觀 微管內(nèi)的抗人球蛋白凝膠應(yīng)呈均勻綠色，膠面上端有1 2mm清澈透明的液體，凝
膠顆粒之間不應(yīng)有氣泡和異物。
(2)靈敏度 用上述抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)檢測(cè)抗D、抗JP、抗Fya效價(jià)，測(cè)得效價(jià)均
不低于試管間接抗人球蛋白法。
(3)特異性 要求微柱凝膠管中加入抗體后，與具有抗體相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)，即 紅細(xì)胞集中在凝膠上層表面或凝膠中。而與不含有抗體對(duì)應(yīng)抗原的紅細(xì)胞產(chǎn)生陰性反應(yīng)， 即紅細(xì)胞可以全部通過(guò)凝膠到達(dá)微管底部，沉積在微管底部。
實(shí)施例2: 1、在抗人球蛋白交叉配血卡(抗IgG)上對(duì)于每位供血者標(biāo)記2管，分別為主側(cè)和 次側(cè)管。 2、向主側(cè)管中加入來(lái)自供血者的懸浮在LISS溶液中的0. 8 1 %體積百分比的紅 細(xì)胞50iU，后加入25iU受血者的血清或血漿，混合均勻。 3、向次側(cè)管中加入受血者的懸浮在LISS溶液中的0. 8 1 %體積百分比的紅細(xì)胞 50 iU，后加入25 iU來(lái)自供血者的血清或血漿，混合均勻。
4、37t:孵育15分鐘。 5、于微柱凝膠卡專用離心機(jī)離心5分鐘，900rpm 2分鐘，1500rpm3分鐘，取出后肉
眼判定結(jié)果，記錄。 6、結(jié)果判定 6. 1如果主側(cè)管中的紅細(xì)胞浮在凝膠表面或膠中，為陽(yáng)性反應(yīng)，即受血者血清/血 漿中的抗體與獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞上的抗原為陽(yáng)性反應(yīng)，說(shuō)明交叉配血主側(cè)不相合。獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞不能輸用。 6. 2如果次側(cè)管中的紅細(xì)胞浮在凝膠表面或膠中，為陽(yáng)性反應(yīng)，即獻(xiàn)血者血清/血 漿中的抗體與受血者的紅細(xì)胞上的抗原為陽(yáng)性反應(yīng)，說(shuō)明交叉配血次側(cè)不相合。獻(xiàn)血者的 血漿不能輸用。 6. 3如果主側(cè)管的紅細(xì)胞沉于微柱凝膠的底部，呈陰性反應(yīng)，表明獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞 可以輸用。如果次側(cè)管的紅細(xì)胞沉降于微柱凝膠的底部，表明獻(xiàn)血者的血漿可以輸用。如 果主、次側(cè)管均陰性，表明獻(xiàn)血者的全血可以輸用。
權(quán)利要求
一種抗人球蛋白交叉配血卡的制備方法，所述配血卡具有6個(gè)微柱凝膠管，所述6個(gè)微柱凝膠管皆為含有抗人球蛋白試劑的凝膠管，所述方法包括以下工藝過(guò)程步驟一、凝膠懸浮介質(zhì)的配制所述凝膠懸浮介質(zhì)配方如下對(duì)羥基苯甲酸甲酯(5.5-6.5)×10-4g/ml對(duì)羥基苯甲酸丙酯(1.0-1.5)×10-4g/ml甘氨酸 (1.6-1.9)×10-2g/ml氯化鈉 (1.7-1.8)×10-3g/ml磷酸二氫鉀 (2.1-2.4)×10-4g/ml磷酸氫二鈉 (4.6-4.8)×10-4g/ml牛血清白蛋白≤2％，以上試劑用蒸餾水溶解，調(diào)pH值為6.6-6.8；步驟二、凝膠的制備選用聚丙烯酰胺葡聚糖凝膠，顆粒大小為30-60納米，用步驟一配制的凝膠懸浮介質(zhì)浸泡后再用該凝膠懸浮介質(zhì)洗滌3-5次，除去凝膠破損碎片以及聚集的凝膠顆粒，收集得到顆粒大小均勻的、且完整呈球形的凝膠；步驟三、抗體的選擇選擇抗人球蛋白試劑，抗IgG靈敏度要求按照體積比1∶2和體積比1∶4稀釋的IgG抗人球蛋白血清對(duì)照體積比1∶16稀釋的IgG致敏的紅細(xì)胞有肉眼可見(jiàn)凝集；步驟四、凝膠的配制將步驟二制備的凝膠與步驟三選擇的抗體按照體積比2∶1～6∶1的比例混合，配制成含有含有抗人球蛋白試劑的凝膠。步驟五、分裝按照每管22～28微升的量，將步驟四配制的凝膠分別加入到一空白卡片的六個(gè)微柱管中，形成具有6個(gè)微柱凝膠管的抗人球蛋白交叉配血卡。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抗人球蛋白交叉配血卡的制備方法，所述配血卡具有6個(gè)微柱凝膠管，所述6個(gè)微柱凝膠管皆為含有抗人球蛋白試劑的凝膠管，所述方法包括以下工藝過(guò)程凝膠懸浮介質(zhì)的配制、凝膠的制備、抗體的選擇、凝膠的配制和分裝。所述凝膠懸浮介質(zhì)配方如下對(duì)羥基苯甲酸甲酯(5.5-6.5)×10-4g/ml，對(duì)羥基苯甲酸丙酯1.0-1.5)×10-4g/ml，甘氨酸(1.6-1.9)×10-2g/ml，氯化鈉(1.7-1.8)×10-3g/ml，磷酸二氫鉀(2.1-2.4)×10-4g/ml，磷酸氫二鈉(4.6-4.8)×10-4g/ml，牛血清白蛋白≤2％，以上試劑用蒸餾水溶解，調(diào)pH值為6.6-6.8。本發(fā)明方法制備的抗人球蛋白交叉配血卡靈敏度高，特異性好且質(zhì)量穩(wěn)定。
文檔編號(hào)G01N33/80GK101718786SQ20091023461
公開(kāi)日2010年6月2日 申請(qǐng)日期2009年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月25日
發(fā)明者朱慶平, 錢國(guó)強(qiáng), 陳玉平 申請(qǐng)人:江陰力博醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司