本發(fā)明涉及保鮮劑領(lǐng)域，尤其是涉及一種蝦類的生物保鮮劑。

技術(shù)背景

蝦是甲殼亞門十足目游泳亞目動物，有近2000個品種，大都生活在江湖中。都有胡須鉤鼻，背弓呈節(jié)狀，尾部有硬鱗腳多善于跳躍，大小從數(shù)米到幾毫米，平均4～8厘米。中國海域?qū)拸V、江河湖泊眾多，盛產(chǎn)海蝦和淡水蝦。海蝦是口味鮮美、營養(yǎng)豐富、可制多種佳肴的海味，有菜中之"甘草"的美稱，海蝦有南極紅蝦、褐蝦、對蝦、明蝦、基圍蝦、琵琶蝦、龍蝦等；淡水蝦有青蝦、河蝦、草蝦等；還有半咸水蝦如白蝦等。蝦營養(yǎng)豐富，且其肉質(zhì)松軟，易消化，對身體虛弱以及病后需要調(diào)養(yǎng)的人是極好的食物。蝦中含有豐富的鎂，鎂對心臟活動具有重要的調(diào)節(jié)作用，能很好的保護心血管系統(tǒng)，它可減少血液中膽固醇含量，防止動脈硬化，同時還能擴張冠狀動脈，有利于預防高血壓及心肌梗死。蝦的通乳作用較強，并且富含磷、鈣、對小兒、孕婦尤有補益功效。不管何種蝦，都含有豐富的蛋白質(zhì)，營養(yǎng)價值很高，其肉質(zhì)和魚一樣松軟，易消化，而且無腥味和骨刺，同時含有豐富的礦物質(zhì)（如鈣、磷、鐵等），海蝦還富含碘質(zhì)，對人類的健康極有裨益。根據(jù)科學的分析，蝦可食部分蛋白質(zhì)占16～20%左右。

蝦類由于水分、蛋白質(zhì)含量高，極易感染微生物而腐爛變質(zhì)，難以保藏。目前，蝦類有低溫、氣調(diào)、輻照、添加保鮮劑等保鮮方法，其中保鮮劑又可分為化學合成保鮮劑和生物保鮮劑。生物保鮮劑是指從動植物、微生物中提取的天然的或利用生物工程技術(shù)改造而獲得的對人體安全的保鮮劑。因化學保鮮劑具有殘留嚴重、潛在危害大等缺點，使得無殘留、可代謝、安全性高等優(yōu)點的生物保鮮劑成為現(xiàn)代食品保鮮的研究熱點。

關(guān)于蝦類的生物保鮮劑技術(shù)有很多方法，現(xiàn)有技術(shù)如授權(quán)公眾號為

cn102389151b的中國發(fā)明專利，公開了一種用于南美白對蝦的生物保鮮劑的制備方法，該方法具有簡單易行、方便控制的優(yōu)點，但是它僅僅對南美白對蝦有保鮮效果，并且其保鮮效果為6-7天，非常有限。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種制作簡易的、保鮮范圍寬廣的蝦類生物保鮮劑及其制備方法。

本發(fā)明針對

背景技術(shù)：
中提到的問題，采取的技術(shù)方案為：蝦類的生物保鮮劑，其組成及其重量份為：茶多酚25-30份、殼聚糖50-60份、ε-聚賴氨酸2.5-3份、乳酸鏈球菌素30-35份、功能性多肽2-3份、無菌蒸餾水900-1000份，該生物保鮮劑具有超強的抑菌性、抗氧化性，還能降低蝦肉中的亞硝酸鹽含量，不影響蝦的色澤和新鮮度，因此是優(yōu)良的生物保鮮劑。

本發(fā)明方法用到的菌種及其所購買企業(yè)為：乳酸鏈球菌，上海夏祥生物科技有限公司。

作為優(yōu)選，蝦類的生物保鮮劑，其制備方法包括：發(fā)酵、粗提純、純化、復合，具體包括以下步驟：

發(fā)酵：稱取蔗糖10-11g、棉籽粉10-12g、八種必須氨基酸各1-2g、五種維生素各2-3g、磷酸氫二鉀13-15g、磷酸氫二鈉13-15g、七水硫酸鎂5-7g、吐溫-802-3g、蒸餾水900-1000ml，以磷酸調(diào)節(jié)恒定ph為5.8-6.5，112-114℃滅菌25-30分鐘即得發(fā)酵培養(yǎng)基；按培養(yǎng)液的2.5-3%接入乳酸鏈球菌，分別在發(fā)酵開始后1/3與2/3時間補充蔗糖10-11g，在30-32℃溫度下無氧培養(yǎng)20-24小時即得發(fā)酵液，通過發(fā)酵制備的乳酸鏈球菌素可以阻礙革蘭氏陽性菌中主要功能性基因的轉(zhuǎn)錄，從而抑制細菌的繁殖，有效的延長蝦類的保存期限；

粗提純：量取體積比為0.8-1.2:0.8-1.2:1的二氯甲烷、乙醇與乳酸鏈球菌發(fā)酵液置于分液漏斗中混合均勻，在3500-3700r/min離心分層，靜止5-8分鐘后取中間層褐色沉淀加入等量無菌蒸餾水混合均勻后留用，二氯甲烷與乙醇的復配溶液能有效的提純?nèi)樗徭溓蚓兀么痔嵋簽檫M一步純化做準備；

純化：選用sephadex-g50（1-30kda）葡萄糖凝膠對粗提液進行凝膠層析，先將葡萄糖凝膠用蒸餾水浸泡45-48小時使其充分溶脹并除去漂浮凝膠顆粒，應用已知分子量的標準品乳酸菌肽（3.354kda）和胰島素（5.778kda）的混合物來獲取洗脫時間與分子量的關(guān)系，將預處理后的粗提液上柱，收集分子量為3-5kda的組分，即得乳酸鏈球菌素溶液，將純化的乳酸鏈球菌素溶液在真空度0.1-0.2kpa，溫度為65-70℃條件下進行真空濃縮干燥，即得乳酸鏈球菌素固體，通過純化，乳酸鏈球菌素的含量大大提高，不僅增強了終產(chǎn)物保鮮劑的保鮮效果，還能節(jié)約成本與工效；

復合：稱取茶多酚25-30份、殼聚糖25-30份、ε-聚賴氨酸2.5-3份、乳酸鏈球菌素30-35份、功能性多肽2-3份、無菌蒸餾水900-1000份，在30-35℃溫度下均勻攪拌混合10-15分鐘即得微生物保鮮劑，功能性多肽通過干擾細胞v膜的正常功能，造成細胞膜的滲透，養(yǎng)分流失和膜電位下降，使細胞自溶從而導致致病菌和腐敗菌細胞的死亡，該功能性多肽的氨基酸序列為：scasrcksrcrarrcrarrcgcrarryvsvfrc。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：1）生物保鮮劑可作用的蝦種類很多，無論是對蝦、褐蝦、龍蝦、明蝦、河蝦、草蝦等都有優(yōu)良的保鮮效果；2）保鮮劑主要物質(zhì)乳酸鏈球菌素與功能性多肽進入人體后在人體的生理ph條件和α-胰凝乳蛋白酶作用下很快水解成氨基酸，無毒副作用；3）保鮮效果強勁，可使蝦類的保存期限由2天延長至50-55天，是一種高效、無毒、安全、無副作用的天然蝦類生物保鮮劑。

具體實施方式

下面通過實施例對本發(fā)明方案作進一步說明：

實施例1：

蝦類的生物保鮮劑，其組成及其重量份為：茶多酚25份、殼聚糖50份、ε-聚賴氨酸2.5份、乳酸鏈球菌素30份、功能性多肽2份、無菌蒸餾水900份，它的制備包括以下步驟：

1）按培養(yǎng)液的2.5%接種乳酸鏈球菌，分別在發(fā)酵開始后6.5小時與13小時各補充蔗糖10g，在30℃溫度下無氧培養(yǎng)20小時即得發(fā)酵液，通過發(fā)酵制備的乳酸鏈球菌素可以阻礙革蘭氏陽性菌主要功能性基因的轉(zhuǎn)錄，從而抑制細菌的繁殖，有效的延長蝦類的保存期限；2）量取體積為80份的二氯甲烷、80份的乙醇與100份乳酸鏈球菌發(fā)酵液置于分液漏斗中混合均勻，在3500r/min離心分層，靜止5分鐘后取中間層褐色沉淀留用，二氯甲烷與乙醇的復配溶液能有效的提純?nèi)樗徭溓蚓?，所得粗提液為進一步純化做準備；3）選用葡萄糖凝膠對粗提液進行凝膠層析，先將葡萄糖凝膠用蒸餾水浸泡45小時使其充分溶脹并除去漂浮凝膠顆粒，應用乳酸菌肽和胰島素來獲取洗脫時間與分子量的關(guān)系，將預處理后的粗提液上柱，收集分子量為3-5kda的組分，即得乳酸鏈球菌素溶液，將純化的乳酸鏈球菌素溶液在真空度0.1kpa，溫度為65℃條件下進行真空濃縮干燥，即得乳酸鏈球菌素固體，通過純化，乳酸鏈球菌素的含量大大提高，不僅增強了終產(chǎn)物保鮮劑的保鮮效果，還能節(jié)約成本與工效；4）稱取茶多酚25份、殼聚糖50份、ε-聚賴氨酸2.5份、乳酸鏈球菌素30份、功能性多肽2份、無菌蒸餾水900份，在30℃溫度下均勻攪拌混合10分鐘即得微生物保鮮劑，功能性多肽通過干擾細胞v膜的正常功能，造成細胞膜的滲透，養(yǎng)分流失和膜電位下降，使細胞自溶從而導致致病菌和腐敗菌細胞的死亡。

實施例2：

蝦類的生物保鮮劑，其組成及其重量份為：茶多酚30份、殼聚糖60份、ε-聚賴氨酸3份、乳酸鏈球菌素35份、功能性多肽3份、無菌蒸餾水1000份，它的制備包括以下步驟：

1）發(fā)酵：按培養(yǎng)液的3%接入乳酸鏈球菌，分別在發(fā)酵開始后8小時與16小時各補充蔗糖11g，在32℃溫度下無氧培養(yǎng)24小時即得發(fā)酵液，通過發(fā)酵制備的乳酸鏈球菌素可以阻礙革蘭氏陽性菌主要功能性基因的轉(zhuǎn)錄，從而抑制細菌的繁殖，有效的延長蝦類的保存期限；

2）粗提純：量取體積為120份的二氯甲烷、120份的乙醇與100份的乳酸鏈球菌發(fā)酵液置于分液漏斗中混合均勻，在3700r/min離心分層，靜止8分鐘后取中間層褐色沉淀留用，二氯甲烷與乙醇的復配溶液能有效的提純?nèi)樗徭溓蚓?，所得粗提液為進一步純化做準備；

3）純化：選用葡萄糖凝膠對粗提液進行凝膠層析，先將葡萄糖凝膠用蒸餾水浸泡48小時使其充分溶脹并除去漂浮凝膠顆粒，應用乳酸菌肽和胰島素的混合物來獲取洗脫時間與分子量的關(guān)系，將預處理后的粗提液上柱，收集分子量為3-5kda的組分，即得乳酸鏈球菌素溶液，將純化的乳酸鏈球菌素溶液在真空度0.2kpa，溫度為70℃條件下進行真空濃縮干燥，即得乳酸鏈球菌素固體，通過純化，乳酸鏈球菌素的含量大大提高，不僅增強了終產(chǎn)物保鮮劑的保鮮效果，還能節(jié)約成本與工效；

4）復合：稱取茶多酚茶多酚30份、殼聚糖60份、ε-聚賴氨酸3份、乳酸鏈球菌素35份、功能性多肽3份、無菌蒸餾水1000份，在35℃溫度下均勻攪拌混合15分鐘即得微生物保鮮劑，功能性多肽通過干擾細胞v膜的正常功能，造成細胞膜的滲透，養(yǎng)分流失和膜電位下降，使細胞自溶從而導致致病菌和腐敗菌細胞的死亡。

實施例3：

蝦類的生物保鮮劑，其組成及其重量份為：茶多酚25份、殼聚糖50份、ε-聚賴氨酸2.5份、乳酸鏈球菌素35份、功能性多肽3份、無菌蒸餾水1000份，它的制備包括以下步驟：

1）發(fā)酵：稱取蔗糖10g、棉籽粉10g、八種必須氨基酸各1g、五種維生素各2g、磷酸氫二鉀13g、磷酸氫二鈉15g、七水硫酸鎂6g、吐溫-803g、蒸餾水900ml，以磷酸調(diào)節(jié)恒定ph為6.0，112℃滅菌25分鐘即得發(fā)酵培養(yǎng)基；按培養(yǎng)液的3%接入乳酸鏈球菌，分別在發(fā)酵開始后8小時與16小時各補充蔗糖10g，在32℃溫度下無氧培養(yǎng)24小時即得發(fā)酵液，通過發(fā)酵制備的乳酸鏈球菌素可以阻礙革蘭氏陽性菌主要功能性基因的轉(zhuǎn)錄，從而抑制細菌的繁殖，有效的延長蝦類的保存期限；

2）粗提純：量取體積為100份的二氯甲烷、100份的乙醇與100份的乳酸鏈球菌發(fā)酵液置于分液漏斗中混合均勻，在3500r/min離心分層，靜止5分鐘后取中間層褐色沉淀留用，二氯甲烷與乙醇的復配溶液能有效的提純?nèi)樗徭溓蚓兀么痔嵋簽檫M一步純化做準備；

3）純化：選用sephadex-g50（1-30kda）葡萄糖凝膠對粗提液進行凝膠層析，先將葡萄糖凝膠用蒸餾水浸泡48小時使其充分溶脹并除去漂浮凝膠顆粒，應用已知分子量的標準品乳酸菌肽（3.354kda）和胰島素（5.778kda）的混合物來獲取洗脫時間與分子量的關(guān)系，將預處理后的粗提液上柱，收集分子量為3-5kda的組分，即得乳酸鏈球菌素溶液，將純化的乳酸鏈球菌素溶液在真空度0.1kpa，溫度為70℃條件下進行真空濃縮干燥，即得乳酸鏈球菌素固體，通過純化，乳酸鏈球菌素的含量大大提高，不僅增強了終產(chǎn)物保鮮劑的保鮮效果，還能節(jié)約成本與工效；

4）復合：稱取茶多酚25份、殼聚糖50份、ε-聚賴氨酸2.5份、乳酸鏈球菌素35份、功能性多肽3份、無菌蒸餾水1000份，在35℃溫度下均勻攪拌混合15分鐘即得微生物保鮮劑，功能性多肽通過干擾細胞v膜的正常功能，造成細胞膜的滲透，養(yǎng)分流失和膜電位下降，使細胞自溶從而導致致病菌和腐敗菌細胞的死亡。

本發(fā)明的操作步驟中的常規(guī)操作為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，在此不進行贅述。

以上所述的實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進行了詳細說明，應理解的是以上所述僅為本發(fā)明的具體實施例，并不用于限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的原則范圍內(nèi)所做的任何修改、補充或類似方式替代等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。

sequencelisting

<110>浦江縣歐立生物技術(shù)有限公司

<120>蝦類的生物保鮮劑

<130>1

<160>1

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>33

<212>prt

<213>人工合成

<400>1

sercysalaserargcyslysserargcysargalaargargcysarg

151015

alaargargcysglycysargalaargargtyrvalservalphearg

202530

cys