本發(fā)明涉及一種飲料，尤其是一種成本低、降血糖效果好且能有效增強成年男性性功能的牡蠣寡糖飲料。
背景技術(shù)：
發(fā)酵飲料是近年流行的保健飲料，大多以蘋果、梨、檸檬、柑橘、橙、草莓、獼猴桃及葡萄等水果為原料，經(jīng)過發(fā)酵制備而成，已在營養(yǎng)保健、臨床醫(yī)學(xué)、美容護(hù)理、減肥瘦身、亞健康調(diào)理等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。
牡蠣具有較高的營養(yǎng)價值和保健作用，其中所含有的牡蠣多糖是重要的活性物質(zhì)，研究表明牡蠣多糖具有降血壓、降血糖、保護(hù)肝損傷等的作用。中國發(fā)明專利號zl200710010460.2的發(fā)明專利公開了“牡蠣多糖和制備方法及其在制備化妝品中的應(yīng)用”，其牡蠣多糖為α-1，4；1，6-葡聚多糖和β-1，6-葡聚多糖，相對分子量為4000-6500da。糖類物質(zhì)的生物活性往往與其分子量大小有關(guān)，寡糖（由2-10個單糖組成）的生物活性往往好于多糖的生物活性。目前，已有許多由多糖制備成寡糖的方法，如酸水解方法、堿水解方法以及酶解方法。其中酸水解方法、堿水解方法分別使用酸、堿，從而產(chǎn)生需要處理的酸堿廢水；酶解的方法需要使用糖苷酶，價格昂貴?？傊?，獲得牡蠣寡糖的方法較為復(fù)雜。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的上述技術(shù)問題，提供一種成本低、降血糖效果好且能有效增強成年男性性功能的牡蠣寡糖飲料。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：一種牡蠣寡糖飲料，其特征在于依次按照如下步驟制備：
a.將蘋果、梨、木瓜、胡蘿卜、山藥、冬瓜、辣椒、大白菜、蘿卜、桔梗、人參洗凈并瀝干，切成1~3cm塊狀；將大棗、藍(lán)莓、山葡萄、木耳、枸杞子、沙棘洗凈并瀝干；各取相同質(zhì)量進(jìn)行混合，得混合物a；
b.將混合物a與食醋、紅糖、牡蠣多糖按質(zhì)量比15：1：0.5：0.5進(jìn)行混合，得混合物b，再將燒酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌加入混合物b中，10~25℃于發(fā)酵罐中發(fā)酵50~60天，得一次發(fā)酵液；所述燒酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌的加入量為混合物b質(zhì)量的0.5~1%、1~2.5%、1~1.5%、1~1.5%，所述所述燒酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌的菌數(shù)為15~26×106個/ml；
c.一次發(fā)酵液體積為發(fā)酵罐容積的2/3，將發(fā)酵罐保持36~38℃恒溫發(fā)酵至少60天，發(fā)酵的同時于發(fā)酵罐底向發(fā)酵罐內(nèi)通入空氣，每立方米發(fā)酵罐空氣通入量為0.5-1l/min，即得牡蠣寡糖發(fā)酵液；
d.將所得牡蠣寡糖發(fā)酵液過濾，濾液放入罐中浸泡竹炭貯藏30~60天，即得牡蠣寡糖發(fā)酵飲料。
本發(fā)明采用牡蠣多糖與多種輔料同時發(fā)酵的方法進(jìn)行制備，利用蘋果、梨、木瓜、胡蘿卜、山藥、冬瓜、辣椒、大白菜、蘿卜、桔梗、人參、大棗、藍(lán)莓、山葡萄、木耳、枸杞子及沙棘在燒酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌發(fā)酵作用下產(chǎn)生的酶，將牡蠣多糖水解成牡蠣寡糖，無需廢水處理及價格昂貴的成品糖苷酶，成本低；牡蠣寡糖與上述發(fā)酵水果共同作用，降血糖效果好且能有效增強成年男性性功能。
附圖說明
圖1是本發(fā)明實施例質(zhì)譜檢測結(jié)果示意圖。
具體實施方式
實施例1：
本發(fā)明的牡蠣寡糖飲料，依次按照如下步驟制備：
a.將蘋果、梨、木瓜、胡蘿卜、山藥、冬瓜、辣椒、大白菜、蘿卜、桔梗、人參洗凈并瀝干，切成2cm塊狀；將大棗、藍(lán)莓、山葡萄、木耳、枸杞子、沙棘洗凈并瀝干；各取相同質(zhì)量進(jìn)行混合，得混合物a；
b.將混合物a與食醋、紅糖、牡蠣多糖按質(zhì)量比15：1：0.5：0.5進(jìn)行混合，得混合物b，再將燒酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌加入混合物b中，20℃于發(fā)酵罐中發(fā)酵55天，得一次發(fā)酵液；所述燒酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌的加入量為混合物b質(zhì)量的0.75%、1.5%、1.25%、1.25%，所述乳酸菌及醋酸菌的菌數(shù)為15×106個/ml；
c.將一次發(fā)酵液置于另一發(fā)酵罐，一次發(fā)酵液體積為發(fā)酵罐容積的2/3，將發(fā)酵罐保持37℃恒溫發(fā)酵60天，發(fā)酵的同時于發(fā)酵罐底向發(fā)酵罐內(nèi)通入空氣，每立方米發(fā)酵罐空氣通入量為0.75l/min，即得牡蠣寡糖發(fā)酵液；
d.將所得牡蠣寡糖發(fā)酵液過濾，濾液放入罐中浸泡竹炭貯藏50天，即得牡蠣寡糖發(fā)酵飲料。
所有原料均外購所得，牡蠣多糖按中國專利號zl200710010460.2的發(fā)明專利所述方法制備。
實施例2：
本發(fā)明的牡蠣寡糖飲料，依次按照如下步驟制備：
a.將蘋果、梨、木瓜、胡蘿卜、山藥、冬瓜、辣椒、大白菜、蘿卜、桔梗、人參洗凈并瀝干，切成1cm塊狀；將大棗、藍(lán)莓、山葡萄、木耳、枸杞子、沙棘洗凈并瀝干；各取相同質(zhì)量進(jìn)行混合，得混合物a；
b.將混合物a與食醋、紅糖、牡蠣多糖按質(zhì)量比15：1：0.5：0.5進(jìn)行混合，得混合物b，再將燒酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌加入混合物b中，10℃于發(fā)酵罐中發(fā)酵60天，得一次發(fā)酵液；所述燒酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌的加入量為混合物b質(zhì)量的0.5%、2.5%、1%、1.5%，所述所述燒酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌的菌數(shù)為20×106個/ml；
c.將一次發(fā)酵液置于另一發(fā)酵罐，一次發(fā)酵液體積為發(fā)酵罐容積的2/3，將發(fā)酵罐保持36℃恒溫發(fā)酵60天，發(fā)酵的同時于發(fā)酵罐底向發(fā)酵罐內(nèi)通入空氣，每立方米發(fā)酵罐空氣通入量為0.5l/min，即得牡蠣寡糖發(fā)酵液；
d.將所得牡蠣寡糖發(fā)酵液過濾，濾液放入罐中浸泡竹炭貯藏30天，即得牡蠣寡糖發(fā)酵飲料。
原料來源同實施例1。
實施例3：
本發(fā)明的牡蠣寡糖飲料，依次按照如下步驟制備：
a.將蘋果、梨、木瓜、胡蘿卜、山藥、冬瓜、辣椒、大白菜、蘿卜、桔梗、人參洗凈并瀝干，切成3cm塊狀；將大棗、藍(lán)莓、山葡萄、木耳、枸杞子、沙棘洗凈并瀝干；各取相同質(zhì)量進(jìn)行混合，得混合物a；
b.將混合物a與食醋、紅糖、牡蠣多糖按質(zhì)量比15：1：0.5：0.5進(jìn)行混合，得混合物b，再將燒酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌加入混合物b中，25℃于發(fā)酵罐中發(fā)酵50天，得一次發(fā)酵液；所述燒酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌的加入量為混合物b質(zhì)量的1%、1%、1.5%、1%，所述所述燒酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌的菌數(shù)為26×106個/ml；
c.將一次發(fā)酵液置于另一發(fā)酵罐，一次發(fā)酵液體積為發(fā)酵罐容積的2/3，將發(fā)酵罐保持38℃恒溫發(fā)酵60天，發(fā)酵的同時于發(fā)酵罐底向發(fā)酵罐內(nèi)通入空氣，每立方米發(fā)酵罐空氣通入量為1l/min，即得牡蠣寡糖發(fā)酵液；
d.將所得牡蠣寡糖發(fā)酵液過濾，濾液放入罐中浸泡竹炭貯藏60天，即得牡蠣寡糖發(fā)酵飲料。
實驗：
將實施例1所得牡蠣寡糖發(fā)酵飲料經(jīng)過醇沉，hplc分離純化，得到牡蠣寡糖，經(jīng)質(zhì)譜檢測，結(jié)果如圖1所示，由小于10個單糖組成。
應(yīng)用例1
以實施例1獲得的牡蠣寡糖飲料飼喂小鼠進(jìn)行降血糖實驗。
實驗材料：
四氧嘧啶、乙酸銨購于sigma公司。鹽酸二甲雙胍購于北京京豐制藥集團(tuán)。尿肌酐測定試劑盒、尿素氮測定試劑盒、糖化血清蛋白測定試劑盒、膽固醇測定試劑盒、甘油三酯測定試劑盒購于南京建成生物工程研究所。
實驗儀器：
三諾安穩(wěn)血糖儀（三諾生物傳感股份有限公司）；hh-2型數(shù)顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）；uv-1750紫外分光光度計（蘇州島津儀器有限公司）；iecmicrocl17r微量臺式小型高速離心機（德國thermo公司）；電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。
實驗分組及用藥：
spf級icr雄性小鼠，體質(zhì)量18～22g，購自大連醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心。取spf級icr雄性小鼠90只，適應(yīng)性飼養(yǎng)3d，隨機挑選10只作為正常對照組，其余動物禁食15h（不禁水），由尾靜脈快速注射新鮮配制的四氧嘧啶生理鹽水溶液（80mg/kg），建立糖尿病動物模型（血糖值≥11.1mmol/l的小鼠，且連續(xù)出現(xiàn)多飲、多食、多尿、體質(zhì)量減輕癥狀者為糖尿病小鼠），正常對照組注射等體積的生理鹽水。96h后（禁食12h）尾靜脈取血測定小鼠空腹血糖水平。
將成模的icr雄性小鼠按體質(zhì)量和血糖水平隨機分高血糖組、鹽酸二甲雙胍組和給藥組（200、400、800mg/kg/day）8個劑量組。鹽酸二甲雙胍組給予200mg/kg/day鹽酸二甲雙胍，給藥組（本發(fā)明實施例1及牡蠣多糖）按不同劑量灌胃給藥。給藥組每天給藥2次，正常對照組、高血糖組每天灌胃蒸餾水2次，間隔6h，連續(xù)21d。第7、14、21d測小鼠空腹血糖，測試前禁食12h。第7d測小鼠體重、飲水量、飲食量。
生化指標(biāo)檢測：
第21d收集尿液，用檢測試劑盒測定尿肌酐、尿素氮。
第21d測定空腹血糖后，摘眼球取血，分離血清，果糖胺法測定其中糖化血清蛋白含量（gsp），酶偶聯(lián)比色法測定甘油三酯（tg）、總膽固醇（tc）含量。
實驗結(jié)果：
一、對四氧嘧啶致icr小鼠糖尿病模型降血糖的影響如表1。
表1牡蠣寡糖飲料對四氧嘧啶致icr小鼠糖尿病模型降血糖的影響
注：（1）同一行數(shù)據(jù)中上標(biāo)字母不同代表存在顯著差異（p<0.05）；
（2）與高血糖組相比，*代表差異顯著（p<0.05）；**代表差異極顯著（p<0.01）
表1結(jié)果表明：給藥7d與給藥0d相比，鹽酸二甲雙胍組（200mg/kg/day）、本發(fā)明實施例1組（200、400、800mg/kg/day）、牡蠣多糖組（400、800mg/kg/day）的空腹血糖值下降顯著（p<0.05），牡蠣多糖組（200mg/kg/day）的空腹血糖值下降不顯著（p>0.05）。與高血糖組相比，鹽酸二甲雙胍組（200mg/kg/day）、本發(fā)明實施例1組（200、400、800mg/kg/day）、牡蠣多糖組（400、800mg/kg/day）的空腹血糖值下降極顯著（p<0.01），牡蠣多糖組（200mg/kg/day）的空腹血糖值下降顯著（p<0.05）。與給藥7d相比，給藥14d、21d的鹽酸二甲雙胍組（200mg/kg/day）、本發(fā)明實施例1組（200、400、800mg/kg/day）、牡蠣多糖組（200、400、800mg/kg/day）的空腹血糖值變化不顯著（p>0.05），表明給藥后血糖值維持穩(wěn)定。
二．對四氧嘧啶致icr小鼠糖尿病tg、tc、gsp的影響見表2。
表2對四氧嘧啶致icr小鼠糖尿病tg、tc、gsp的影響
注：（1）與正常組相比，*代表差異顯著（p<0.05）；**代表差異極顯著（p<0.01）
（2）與高血糖組相比，#代表差異顯著（p<0.05）；##代表差異極顯著（p<0.01）
表2結(jié)果表明，與高血糖組相比，鹽酸二甲雙胍組（200mg/kg/day）、本發(fā)明實施例1組（200、400、800mg/kg/day）、牡蠣多糖組（200、400mg/kg/day）的tg含量均顯著下降（p<0.05）；鹽酸二甲雙胍組（200mg/kg/day）、發(fā)明實施例1組（200、400mg/kg/day）、牡蠣多糖組（200、400mg/kg/day）tc含量下降極顯著（p<0.01）；鹽酸二甲雙胍組（200mg/kg/day）、發(fā)明實施例1組（200、400、800mg/kg/day）、牡蠣多糖組（200、400、800mg/kg/day）的gsp含量下降極顯著（p<0.01）。
三．對四氧嘧啶致icr小鼠糖尿病的綜合藥效評價
按照綜合藥效評價公式進(jìn)行評價：
綜合藥效評價（%）=體質(zhì)量增加率（%）×0.2+飲水降低率（%）×0.15+攝食降低率（%）×0.15+血糖降低率（%）×0.5
實驗結(jié)果如表3：
表3對糖尿病小鼠的綜合藥效評價
表3結(jié)果表明：給藥后小鼠表現(xiàn)出體重增加，飲水量和攝食量下降。本發(fā)明實施例1組（200、400、800mg/kg/day）的綜合藥效評價高于牡蠣多糖組（200、400、800mg/kg/day），并且本發(fā)明實施例1（800mg/kg/day）的綜合藥效評價值最高。
四．各組小鼠尿肌酐和尿素氮水平
表4各組小鼠尿肌酐和尿素氮水平
注：（1）與正常組相比，*代表差異顯著（p<0.05）；**代表差異極顯著（p<0.01）
（2）與模型組相比，#代表差異顯著（p<0.05）；##代表差異極顯著（p<0.01）
表4結(jié)果表明：與高血糖組相比，鹽酸二甲雙胍組（200mg/kg/day）、本發(fā)明實施例1組（400、800mg/kg/day）及牡蠣多糖組（400、800mg/kg/day）的尿素氮下降極顯著（p<0.01），本發(fā)明實施例1組（200mg/kg/day）和牡蠣多糖組（200mg/kg/day）組的尿素氮下降顯著（p<0.05）。鹽酸二甲雙胍組（200mg/kg/day）、本發(fā)明實施例1組（200、400、800mg/kg/day）及牡蠣多糖組（200、400、800mg/kg/day）的尿肌酐下降極顯著（p<0.01）。本發(fā)明實施例1組腎功能指標(biāo)參數(shù)顯著降低。
結(jié)論：將本發(fā)明的牡蠣寡糖飲料對四氧嘧啶導(dǎo)致的糖尿病icr小鼠的降血糖作用實驗，結(jié)果顯示本發(fā)明的牡蠣寡糖飲料對四氧嘧啶導(dǎo)致的糖尿病icr小鼠的降血糖及綜合藥效顯著好于牡蠣多糖，表現(xiàn)出顯著的增效作用，同時本發(fā)明的牡蠣寡糖飲料明顯改善icr小鼠的腎功能。
應(yīng)用例2：
以20人30~60歲成年男人為研究對象，受試者均了解研究內(nèi)容，并簽署知情同意書。受試者每日餐前飲用30ml牡蠣寡糖飲料，每日3次，連續(xù)30d。研究開始日時與研究結(jié)束日早晨7:30-8:30取靜脈血2ml，分離血清測試睪酮和皮質(zhì)醇。
結(jié)論：飲用牡蠣寡糖飲料30d后，成年男性血睪酮升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）。皮質(zhì)醇降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）。睪酮水平是維持性功能的基礎(chǔ)，而皮質(zhì)醇抑制性功能。因此，本發(fā)明的牡蠣寡糖飲料具有增強成年男性性功能的作用。