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一種鯊魚魚肉高f值寡肽的用圖

文檔序號:11024986閱讀:812來源:國知局
一種鯊魚魚肉高f值寡肽的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)的應(yīng)用用途,具體涉及一種鯊魚魚肉高F值寡肽的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 高F值寡肽混合物是一個由由3~7個氨基酸殘氨基酸殘基所組成的混合小肽(或 稱寡肽)體系。F值(Fischer ratio)是指支鏈氨基酸(BCAA: Val,lie,Leu)與芳香族氨基酸 (△△六:1'印巧^?1^)含量的摩爾數(shù)比值。正常人的血液中?值為3.0-3.5,而患有肝臟疾病病 人的F值只有1.0或者更低,而高F值寡肽的F值應(yīng)大于20,遠(yuǎn)高于人體中這兩類氨基酸的比 值。由于它具有獨特的氨基酸組成和生理功能,已經(jīng)受到食品和醫(yī)藥界的高度關(guān)注。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種鯊魚魚肉高F值寡肽在抗疲勞方面的用 途。
[0004] 本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題所采取的技術(shù)方案為:一種鯊魚魚肉高F值寡肽的用 途,其特征在于該高F值寡肽安全、無毒副作用、具有顯著的抗疲勞活性,對老年人、體弱多 病者和術(shù)后病人具有良好的保健作用,可用于制備抗疲勞功能食品或保健食品。
[0005] 該鯊魚魚肉高F值寡肽的制備方法為: 1)鯊魚魚肉醇溶蛋白的制備:取鯊魚魚肉按I g: 15 mL~I g:20 mL固液比加入90%~ 95%的乙醇溶液,用高速組織搗碎機(jī)將其制成勻漿,在25~30°C、功率650~700 W超聲提取 150 min~180 min;將提取液的pH值用I mol/L NaOH調(diào)至9.5~10.0,用蒸餾水將乙醇濃 度調(diào)至55%~65%,室溫靜置45 min~60 min,于8000~10000 rpm離心10 min~15 min;取 上清液,并加入NaCl至濃度為5%~8%,靜置8 h~10 h后,于8000~10000 rpm離心10~15 min,收集沉淀,凍干,即得鯊魚魚肉醇溶蛋白。
[0006] 2)鯊魚魚肉醇溶蛋白的酶解:取鯊魚魚肉醇溶蛋白,按固液比I g:5 mL~I g: 10 11^,加入甘氨酸一氫氧化鈉緩沖液(0.05111〇1/14!19.5),用0.1111〇1/1!1(:1或0.1111〇1/1 NaOH調(diào)節(jié)pH到9.0~1.0,得混合液;將混合物溫度調(diào)制55~65°C,按照醇溶蛋白質(zhì)量的0.5 %~1.0%加入堿性蛋白酶(酶活力1.95/10 5),酶解時間3 11~4 11后,酶解液于90~95°(:保 溫10~15min,滅酶活;將酶解液溫度調(diào)至50~60 °C,按照醇溶蛋白質(zhì)量的0.6 %~0.8%加 入木瓜蛋白酶,酶解時間4 h~5 h,酶解液降至室溫,于8000~10000 rpm離心10~15 min, 取上清液。
[0007] 3 )鯊魚魚肉高F值寡肽的酶解:將上述上清液依次經(jīng)超濾、活性碳吸附純化和大孔 樹脂精制,得鯊魚魚肉高F值寡肽。
[0008] 作為優(yōu)選,所述的步驟1)中的藍(lán)魚為灰星藍(lán)(Mustelus griseus)。
[0009] 作為優(yōu)選,所述步驟3)的超濾、活性碳吸附純化和大孔樹脂精制的具體過程為: 超濾:將上述酶解上清液于0.1~0.15 MPa的工作壓力和20~30°C的工作溫度下采用 采用3 kDa超濾膜進(jìn)行超濾處理,收集分子量小于3 kDa部分,得超濾酶解液; 活性碳吸附純化制:將超濾酶解液調(diào)pH值至2.5~3.5,按照物料與活性炭顆粒比為10~ 15:1將超濾酶解液以0.3~0.5mL/min流速緩慢加入到活性炭顆粒裝載于玻璃柱中,上樣 完成后,采用2~3柱體積的1:1比例的lmol/L氨水和無水乙醇混合溶液洗脫色譜柱,收集洗 脫液,干燥,得活性肽精制多肽 大孔樹脂精制:將活性碳精制多肽配成10~20 mg/mL的溶液,調(diào)pH值至6.5~7.5,緩慢 加入到物料與AB-8大孔樹脂比為10~15:1的玻璃柱中,用2~3倍柱體積的雙蒸水洗脫除去 雜質(zhì),再用2~3柱體積的95%乙醇洗脫,收集95%乙醇洗脫物,噴霧干燥,即為鯊魚魚肉高F 值寡肽。
[0010] 經(jīng)測定,所得鯊魚魚肉高F值寡肽的蛋白含量為95.1~96.4%,氨基酸總量為83.7 ~85.4%,支鏈氨基酸的含量為16.8~17.1%,芳香族氨基酸的含量為0.43~0.48%,F(xiàn)值為 35.2~39.6,分子量為630~720 Da,支鏈氨基酸中Val: Ile:Leu為1:1~1.5:3~4,芳香族 氨基酸中 Trp: Tyr: Phe 為 1:1 ~1.2:1 ~1.5。
[0011] 與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明提供的一種鯊魚魚肉高F值寡肽的優(yōu)點在于:本發(fā)明工藝 科學(xué)合理,操作簡單,選用堿性蛋白酶和木瓜蛋白酶作為酶解用酶,酶解過程易監(jiān)控;利用 的超濾分級、活性炭吸附純化和大孔樹脂精制方法簡單,易于產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用;同時,本發(fā)明所 制備的鯊魚魚肉高F值寡肽是鯊魚魚肉經(jīng)酶水解制得,安全、無毒副作用,并且抗疲勞顯著, 對老年人、體弱多病者和術(shù)后病人具有良好的保健作用,鯊魚魚肉高F值寡肽可以作為抗疲 勞功能食品進(jìn)行開發(fā)。
【具體實施方式】
[0012] 以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0013] 實施例: 一種鯊魚魚肉高F值寡肽及其制備方法和用途,制備工藝流程如下:鯊魚魚肉-超聲提 取醇溶蛋白-堿性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解-超濾-活性肽吸附純化-大孔樹脂精制- 鯊魚魚肉高F值寡肽。
[0014] 1)鯊魚魚肉醇溶蛋白的制備:取灰星鯊鯊魚魚肉按I g:18 mL固液比加入95%的乙 醇溶液,用高速組織搗碎機(jī)將其制成勻漿,在30 °C、功率680 W超聲提取150 min;將提取液 的pH值用I mol/L NaOH調(diào)至9.5,用蒸餾水將乙醇濃度調(diào)至60%,室溫靜置50 min,于9000 rpm離心12 min;取上清液,并加入NaCl至濃度為6%,靜置9 h后,于9000 rpm離心15 min,收 集沉淀,凍干,即得鯊魚魚肉醇溶蛋白。
[0015] 2)鯊魚魚肉醇溶蛋白的酶解:取鯊魚魚肉醇溶蛋白,按固液比I g:8 mL,加入甘氨 酸一氫氧化鈉緩沖液(〇.〇5mol/L,pH 9.5),用0.1 mol/L HCl或0.1 mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH到 9.5,得混合液;將混合物溫度調(diào)制60°C,按照醇溶蛋白質(zhì)量的0.6 %加入堿性蛋白酶(酶活 力1.95 X IO5),酶解時間3h后,酶解液于95°C保溫15min,滅酶活;將酶解液溫度調(diào)至55 °C, 按照醇溶蛋白質(zhì)量的0.8%加入木瓜蛋白酶,酶解時間4 h,酶解液降至室溫,于9000 rpm離 心12 min,取上清液。
[0016] 3)鯊魚魚肉高F值寡肽的酶解:將上述上清液依次經(jīng)超濾、活性碳吸附純化和大孔 樹脂精制,得鯊魚魚肉高F值寡肽。具體過程為: ①超濾:將上述酶解上清液于0.2 MPa的工作壓力和25°C的工作溫度下采用采用3 kDa 超濾膜進(jìn)行超濾處理,收集分子量小于3 kDa部分,得超濾酶解液; ② 活性碳吸附純化制:將超濾酶解液調(diào)PH值至2.8,按照物料與活性炭顆粒比為12:1將 超濾酶解液以0.4 mL/min流速緩慢加入到活性炭顆粒裝載于玻璃柱中,上樣完成后,采用 3柱體積的1:1比例的lmol/L氨水和無水乙醇混合溶液洗脫色譜柱,收集洗脫液,干燥,得活 性肽精制多肽 ③ 大孔樹脂精制:將活性碳精制多肽配成15 mg/mL的溶液,調(diào)pH值至7.0,緩慢加入到 物料與AB-8大孔樹脂比為15:1的玻璃柱中,用2倍柱體積的雙蒸水洗脫除去雜質(zhì),再用3柱 體積的95%乙醇洗脫,收集95%乙醇洗脫物,噴霧干燥,即為鯊魚魚肉高F值寡肽。
[0017]經(jīng)測定,所得鯊魚魚肉高F值寡肽的蛋白含量為96.0%,氨基酸總量為85.1%,支鏈 氨基酸的含量為17.0%,芳香族氨基酸的含量為0.45%,F(xiàn)值為37.7,分子量為657 Da,支鏈 氨基酸中 Val: 11e: Leu為1:1.2:3.3,芳香族氨基酸中 Trp: Tyr: Phe為1: 1. 1:1 ~1.3。
[0018] 將制得的鯊魚魚肉高F值寡肽做小鼠的抗疲勞活性研究(對小白鼠游泳時間及血 乳酸、肝糖原、血尿素氮等指標(biāo)的影響),評價其的抗疲勞活性。
[0019] 實驗結(jié)果表明:制得的鯊魚魚肉高F值寡肽能夠顯著增加小鼠力竭游泳時間,提高 運動耐力,提高小鼠體內(nèi)的肝糖原含量,降低血乳酸及血尿素氮產(chǎn)生量。。
[0020] 衷1鯊魚魚肉高F倌寡肽對小鼠游泳時間的影響(η = 15,平詢倌土SD)

注:灌胃體積0.25mL/天,空白對照組每天灌胃同體積的生理鹽水。
[0021] 表2鯊魚魚肉高F值寡肽對小鼠血乳酸、肝糖原、血尿素氮含量的影響(η = 15,平 均值土 SD)

注:灌胃體積0.25mL/天,空白對照組每天灌胃同體積的生理鹽水。
[0022]最后,還需要注意的是,以上列舉的僅是本發(fā)明的一個具體實施例。顯然,本發(fā)明 不限于以上實施例,還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直 接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形,均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種鯊魚魚肉高F值寡肽的用途,其特征在于:該高F值寡肽安全、無毒副作用、具有 顯著的抗疲勞活性,對老年人、體弱多病者和術(shù)后病人具有良好的保健作用,可用于制備抗 疲勞功能食品或保健食品。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鯊魚魚肉F值寡肽的用途,其特征在于:該高F值寡肽的蛋 白含量為95.1~96.4%,氨基酸總量為83.7~85.4%,支鏈氨基酸的含量為16.8~17.1%,芳 香族氨基酸的含量為0.43~0.48%,F(xiàn)值為35.2~39.6,分子量為630~720 Da,支鏈氨基酸 中Val: lie:Leu為1:1 ~1 ·5:3~4,芳香族氨基酸中Trp:Tyr:Phe為1:1 ~1.2:1 ~1.5〇
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鯊魚魚肉高F值寡肽的用途。本發(fā)明以鯊魚魚肉為原料,通過超聲提取鯊魚魚肉醇溶蛋白、堿性蛋白酶和木瓜蛋白酶雙酶酶解,利用的超濾分級、活性炭吸附純化和大孔樹脂精制得鯊魚魚肉高F值寡肽,該F值為35.2~39.6,分子量為630~720 Da;該高F值寡肽具有顯著的抗疲勞效果,可以作為抗疲勞功能食品或保健食品進(jìn)行開發(fā)。
【IPC分類】A23J3/34, A23L33/18
【公開號】CN105707905
【申請?zhí)枴緾N201610098094
【發(fā)明人】王斌, 趙玉勤, 孫坤來
【申請人】浙江海洋學(xué)院
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